Introdução: as doenças linfoproliferativas de células B maduras correspondem a cerca de 80% das neoplasias linfoides, são caracterizadas pela proliferação clonal de uma célula B precursora em diferentes estágios de diferenciação. A semelhança imunofenotípica a um dado estágio maturativo é relevante para o diagnóstico diferencial através da imunofenotipagem por citometria de fluxo, embora a sobreposição de expressões possa dificultar a identificação correta de cada linfoproliferação. Alguns marcadores são pouco conhecidos nas diferentes linfoproliferações B e há pouca literatura analisando os dados quantitativamente, sendo grande parte qualitativa. Objetivos: este trabalho avalia a expressão quantitativa em intensidade de fluorescência média (IFM) dos anticorpos CD200, CD43, CD52 e CD123 no diagnóstico diferencial das doenças linfoproliferativas B crônicas. Métodos: estudo transversal, com 124 amostras de pacientes em investigação diagnóstica de doenças linfoproliferativas que realizaram imunofenotipagem em um centro de referência em neoplasias hematológicas no período de outubro de 2014 a junho de 2015. Foram analisadas as IFMs de cada marcador nas onze diferentes doenças diagnosticadas. Resultados: as neoplasias dos 124 pacientes analisados foram: 81 leucemias linfocíticas crônicas (LLC), 17 linfomas de zona marginal (LZM), 9 linfomas linfoplasmocíticos (LLPL), 6 linfomas do manto (LM), 2 tricoleucemias (TRL), 2 tricoleucemias variantes (TRLv), 5 linfomas foliculares (LF), 1 linfoma de Burkitt e 1 linfoma difuso de grandes células B (LDGCB). A expressão mediana do CD200 foi de 46,8 (intervalo: 1,5-334). A expressão mediana de CD200 foi maior na TRL (incluindo a TRLv) e na LLC (85 e 61,2, respectivamente). A expressão de IFM do CD200 na TRLv diferiu quando comparado à TRL na sua forma clássica (mediana: 36,1 versus 220,3). A mesma diferença foi observada na expressão do CD123 quando comparada a TRL à TRLv. Verificamos, que casos de LZM demonstraram IFM medianas de CD43 de 7,1 (intervalo: 1,1-106), em comparação a casos de LM e LLC, nos quais as medianas de IFM do CD43 foram 90 e 176, respectivamente. A comparação da intensidade de CD52 entre amostras demostrou diferença estatisticamente significativa entre LLC e LZM com medianas de IFM de 775,5 versus 1297,0 (P=0,04). Conclusões: nossos resultados sugerem que a citometria de fluxo quantitativa desses marcadores pode ser uma ferramenta adicional útil na identificação de alguns tipos de DLPCBs. / Background: lymphoproliferative disorders of mature B cells account for about 80% of the lymphoid malignancies. They are characterized by the clonal proliferation of a B cell precursor at different stages of differentiation. The similarity of a given phenotypical maturation stage is relevant for the differential diagnosis by immunophenotyping, however overlap in cell morphology and immunologic features may difficult the correct identification of each pathology. Some markers are not well known in different B lymphoproliferative neoplasms and there is little literature analyzing the data quantitatively. Objectives: this study evaluated the expression of CD200, CD43, CD52 and CD123 by flow cytometry on B-cell chronic lymphoproliferative disorders (BCLDs) differential diagnosis. Methods: cross-sectional study, of 124 samples from patients for diagnostic investigation of lymphoproliferative disorders who underwent immunophenotyping in a referral center for hematologic malignancies from October 2014 to June 2015. MFIs were analyzed for each marker in eleven different diagnosed pathologies. Results: the diseases of the 124 patients investigated comprised: 81 chronic lymphocytic leukemia (CLL), 17 marginal zone lymphoma (MZL), 9 lymphoplasmacytic lymphoma (LPL), 6 mantle cell lymphoma (MCL), 2 hairy cell leukemia (HCL), 2 hairy cell leukemia variant (HCLv), 5 folicular lymphoma (FL), 1 Burkitt lymphoma (BL) e 1 diffuse large B cell lymphoma (DLBCL). The CD200 median MFI expression was 46,8 (range: 1,5-334). CD200 was higher in HCL (including HCLv) and CLL cells (85 and 61,2 respectively). HCLv difference in CD200 MFI, when compared to classical HCL (median 36,1 versus 220,3). The same difference in CD123 expression was observed when comparing HCL versus HCLv. We found that cases of MZL exhibited CD43 median MFI of 7,1 (range: 1,1-106), in contrast to cases of MCL and CLL, which had median MFIs for CD43 of 90 and 176, respectively. The comparison of CD52 intensity between CLL and MZL samples showed statistically significant difference with a median MFI of 777,5 versus 1297,0 (P=0,04). Conclusion: our results suggest that quantitative flow cytometry of these markers may be a useful additional tool to better identify some types of BCLDs.

O objetivo desse estudo foi avaliar os aspectos clínicos e imuno-histoquímicos, bem como a ocorrência de síndromes paraneoplásicas e alterações laboratoriais, e correlacionar com os tempos de sobrevida e de remissão, em cães com linfoma. Além disso, visou monitorar a função cardíaca dos pacientes que receberam quimioterapia com protococolo que incluía doxorrubicina. Trinta cães com linfoma foram atendidos no período de maio de 2010 a maio de 2012 no Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul e foram avaliados através de exame clínico, hemograma e análises bioquímicas, concentração sérica de troponina cardíaca I, eletrocardiograma e ecocardiograma, no momento do diagnóstico e mensalmente por mais quatro meses até o término do protocolo quimioterápico CHOP (prednisona, vincristina, ciclofosfamida e doxorrubicina). Posteriormente, os cães foram avaliados a cada dois meses até completar um ano após o diagnóstico. A maior parte dos cães diagnosticados neste estudo eram machos (60%), com média de 9 anos de idade e sem raça definida (23%). A forma multicêntrica foi a mais comumente observada (87%), principalmente associada ao imunofenótipo B (62%) e os cães apresentaram-se comumente nos estádios clínicos IV e V (64%) e subestádio “b” (83%). Alterações laboratoriais e síndromes paraneoplásicas foram frequentemente observadas no momento do diagnóstico, e incluiam anemia (57%), hipoalbuminemia (53%), leucocitose (40%), trombocitopenia (33%), hiperglobulinemia (20%), hiperproteinemia (17%) e hipercalcemia (13%). Os cães que apresentaram alterações na contagem de plaquetas, basicamente trombocitopenia, e alterações na concentração sérica da fração β2 das globulinas, bem como aqueles nos estádios clínicos IV-V e em condição corporal 1-2 no momento do diagnóstico, tiveram menor tempo de sobrevida. Os cães com hipercalcemia, trombocitopenia e elevação no volume corpuscular médio mostraram um menor tempo de remissão com maior chance de recidiva. Dos 30 cães com linfoma, 23 receberam o protocolo quimioterápico contendo doxorrubicina; não foram observadas alterações significativas nos exames cardiológicos realizados durante e após a quimioterapia. Este estudo demonstrou que os aspectos clínicos de cães com linfoma em Porto Alegre são similares aos observados em outras regiões do mundo, e alguns exames simples e de rotina se mostraram úteis para avaliar os tempos de sobrevida e remissão no momento do diagnóstico. Além disso, a doxorrubicina se mostrou uma droga segura para utilizar em cães com linfoma, desde que sejam adequadamente monitorados. / The present study aimed to evaluate the clinical and immunohistochemical features of dogs with lymphoma, as well as the occurrence of paraneoplastic syndromes and laboratory abnormalities, and their correlation with survival and remission times in those patients. Furthermore, we monitored the cardiac function of the patients receiving doxorubicin. Thirty animals with lymphoma were treated between May 2010 and May 2012 in the Veterinary Hospital of the Federal University of Rio Grande do Sul and were evaluated by clinical examination, complete blood count and biochemical analysis, serum cardiac troponin I measurement, electrocardiogram and echocardiogram at diagnosis, and monthly for four months until the end of the chemotherapy protocol, which contained prednisone, vincristine, cyclophosphamide and doxorubicin. The animals were evaluated every two months until one year after diagnosis. Most animals diagnosed in this study were males (60%) with a mean age of 9 years and mixed-breed (23%). The multicentric form was the most commonly observed with predominance of the B cell phenotype (62%) and the animals were frequently in clinical stages IV and V (64%) and sub-stage "b" (83%). Paraneoplastic syndromes and laboratory abnormalities were frequently observed at diagnosis, corresponding to anemia (57%), hypoalbuminemia (53%), leukocytosis (40%), thrombocytopenia (33%), hyperglobulinemia (20%) and hypercalcaemia (13%). The animals that showed alterations in platelet count, especially thrombocytopenia, and β2 serum globulin fraction as well as the ones in clinical stages IV-V and with body condition scores between 1-2 at diagnosis had lower survival times. The animals with hypercalcaemia, thrombocytopenia and elevated mean corpuscular volume showed a shorter remission time with a higher incidence of relapse. Twenty three dogs received doxorubicin in the chemotherapy protocol, and there were no significant changes in the cardiac evaluations performed during and after chemotherapy. This study demonstrated that the clinical aspects of dogs with lymphoma in Porto Alegre are similar to those observed in other studies worldwide, and some simple and routine tests proved useful in the prediction of survival and remission rates at the time of diagnosis. In addition, doxorubicin proved to be a safe drug when administered in dogs with lymphoma if properly monitored.

Introdução linfoma de Hodgkin (LH) é uma neoplasia que atinge tipicamente crianças e adultos jovens, com uma taxa de cura superior a 80%. Consequentemente, estes pacientes podem viver por décadas com efeitos tardios (ET) persistentes e emergentes da doença e do seu tratamento. Estes sobreviventes possuem risco aumentado para vários tipos de doenças, dentre elas, segunda neoplasia, doença cardíaca, pulmonar, disfunção endócrina e infertilidade. Objetivos Analisar epidemiologicamente os pacientes com diagnóstico de LH tratados com esquemas terapêuticos de primeira linha no Serviço de Oncologia Pediatria do Hospital de Clinicas de Porto Alegre (HCPA), visando os ET do tratamento empregado. Métodos e análise estatística estudo de coorte retrospectivo, realizado através da revisão dos prontuários médicos dos pacientes pediátricos com diagnóstico de LH tratados com esquemas de primeira linha no Serviço de Oncologia Pediátrica do HCPA, no período de 1995 a 2012. Características dos pacientes, resposta ao tratamento e efeitos tardios foram avaliados através de análise descritiva. As variáveis contínuas foram descritas por média e desvio padrão ou mediana e amplitude interquartílica. As variáveis categóricas foram descritas por frequências absolutas e relativas. O método de Kaplan-Meier foi utilizado para estimar a sobrevida global e a sobrevida livre de eventos. A comparação entre as curvas de sobrevida foi realizada pelo teste de log-rank. Para avaliar a associação entre as variáveis categóricas, os testes qui-quadrado de Pearson ou exato de Fisher foram aplicados. Para comparar as médias das doses dos esquemas quimioterápicos conforme efeitos tardios, o teste t-student foi aplicado. Resultados total de 51 pacientes, o tempo de seguimento foi de 6,9 anos (mediana), a idade ao diagnóstico variou entre 3 a 17 anos (media 9,53 anos DP=3,85); 41(80,3%) eram do sexo masculino. O tipo histológico predominante foi esclerose nodular (56,5%). A sobrevida global foi de 91,8% em 5 anos e 82,7% em 10 anos e a Sobrevida livre de eventos (SLE) em 5 e 10 anos foram 76,4% e 76,4%, respectivamente. Dezoito (35,3%) apresentaram ao menos um ET, sendo 1 (2%) alteração musculoesquelético, 1 (2%) segunda neoplasia, 6 (11,8%) infertilidade, 8 (15,7%) alteração pulmonar, 9 (17,6%) alteração da tireóide. Trinta (58,8%) dos pacientes receberam radioterapia e 13 (43,3%) apresentaram ET, sendo 9 (17,6%) alteração da tireoide, 8 (15,7%) alteração pulmonar, 6 (11,8%) infertilidade 1 (2%) alteração musculo-esquelética, 1 (2%) segunda neoplasia e nenhuma alteração cardíaca. Dezoito (36,7%) pacientes receberam radioterapia cervical e 12 (66,7%) desses apresentaram ET contra 6/31 (19,4%) dos que não fizeram (P= 0,003); 23 (46%) receberam radioterapia do mediastino e 13 (56,5%) desses pacientes desenvolveram ET e apenas 5/27 (18,5%) dos que não receberam desenvolveram ET (P=0,013). Dentre os esquemas terapêuticos mais utilizados nesta coorte, 26 (53,1%) receberam ciclofosfamida, vincristina, procarbazina, prednisona, doxorrubicina, bleomicina e vimblastina (COPP/ABV) e 10 (38,5 %) dos que receberam este esquema apresentaram ET em comparação com 6/23 (26,1%) dos que não utilizaram (P=0,537); 14 (28,6%) dos pacientes receberam bleomicina, etoposide, doxorrubicina, ciclofosfamida, vincristina, procarbazina e prednisona (BEACOPP) e 3/14 (21,4%) desses apresentaram ET ao passo que 13/35 (37,1%) dos que não utilizaram esse esquema apresentaram ET (P=0,336); 7 (14,3%) receberam bleomicina, vimblastina, doxorrubicina, dacarbazina (ABVD) e apenas 1 (14,3%) apresentou ET em comparação com 15/42 (35,7%) que não receberam (P=0,402); 4 (8,2%) dos pacientes receberam bleomicina, vimblastina, doxorrubicina, dacarbazina (ABVPC) e 1 (25%) contra 15/45 (33,3%) dos que não receberam este esquema apresentaram ET (P=1). Conclusão devido ao risco de ET e aos bons índices de sobrevida, a atenção especial para criação de regimes de tratamento com cada vez menor toxicidade tardia, assistência médica para pacientes pós-tratamento e preparação dos médicos e sistemas de saúde são de suma importância para assegurar a qualidade de vida desses sobreviventes. / Introduction Hodgkin linfoma (HL) is a malignancy which typically affects children and adolescents, with a cure rate higher than 80%. Consequently, these patients may live for decades with treatment-related late effects (LE), which are persistent and emergent. These survivors possess increased risk for various diseases, including second malignancies, cardiac and pulmonary disease, endocrine dysfunction and infertility. Objectives Perform an epidemiological analysis of patients diagnosed with, and treated for, HL with first line chemotherapeutic regimens at the Pediatric Oncology Unit of the Federal University Hospital of Porto Alegre (HCPA), focusing on each treatment’s late effects. Methods and statistical analysis This is a retrospective cohort study, performed by revising medical charts of patients diagnosed with HL and treated with first line chemotherapeutic regimens at the Pediatric Oncology Unit of the HCPA, from 1995 to 2012. Patient characteristics, response to therapy and late effects are reported via descriptive analysis. Continuous variables are reported via mean and standard deviation or median and interquartile ranges. Categorical variables are described by absolute and relative frequencies. The Kaplan-Meier method was used to estimate overall and event-free survival. The comparison between survival curves were performed with the log-rank test. To explore the association between categorical variables, the Pearson Chi-square test or Fisher’s exact test were employed. The relationship between late effects and mean chemotherapeutic dose was evaluated with the student’s T test. Results a total of 51 patients, of which 41 (80.3%) were males. Median follow-up time was of 6.9 years. Age at diagnosis varied between 3 and 17 years (mean 9.53; SD 3.85). The most common histological subtype was nodular sclerosis (56,5%). Overall survival (OS) was of 91.8% in 5 years and 82.7% in 10 years, and event-free survival (EFS) was 76.4% and 76.4% for 5 and 10 years, respectively. Eighteen (35.3%) patients presented at least one LE, being 1 (2%) musculoskeletal alterations, 1 (2%) second malignancy, 6 (11.8%) infertility, 8 (15.7%) pulmonary alterations, 9 (17.6%) thyroid alterations and none presented cardiac alterations. Thirty (58.8%) patients received radiotherapy and of these 13 (43.3%) presented LE, being 9 (17.6%) thyroid alterations, 8 (15.7%) pulmonary alterations, 6 (11.8%) infertility, 1 (2%) musculoskeletal alterations, 1 (2%) second malignancy, and none presented cardiac alterations. Eighteen (36.7%) patients received cervical radiotherapy, and of these 12 (66.7%) presented LE, against 6 (19.4%) of 31 patients who were not submitted to cervical radiotherapy and developed a LE (P=0.003). Twenty-three (46%) patients received mediastinal radiotherapy, and of these 13 (56.5%) presented LE, against 5 (18.5%) of 27 patients who did not receive this treatment and developed a LE (P=0,013). With regards to treatment, 26 (53.1%) patients received COPPABV and 10 (38.5%) of these presented LE, against 6 (26.1%) of 23 patients who did not receive COPPABV and presented LE (P=0.537). Fourteen (28.6%) patients received BEACOPP, and of these 3 (21.4%) presented LE, against 13 (37.1%) of the 35 patients who did not receive BEACOPP and presented LE (P=0.336). Seven (14.3%) patients received ABVD and only one (14.3%) presented LE in comparison to 15 (35.7%) of 42 patients who did not receive ABVD and presented LE (P=0.402); four (8.2%) patients received ABVPC and 1 (25%) presented LE, against 15 (33.3%) of 45 patients who did not receive ABVPC and presented LE (P=1). Conclusion Because of the high overall survival rates in children and adolescents diagnosed with, and treated for LH, special attention should be given to treatment regimens with reduced late effects burden. In order to guarantee the quality of life of LH survivors, adequate medical attention to patients should be provided post-treatment. Physicians and other health care professionals would also benefit from training sessions which focus on these issues.

Orientador: Prof. Dr. Marcelo Zanchetta do Nascimento / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Engenharia da Informação, 2015. / Linfoma é um tipo de tumor que afeta o sistema linfático humano, em que se estima mais de 60 subtipos de canceres distintos, derivados de 2 grandes grupos: Hodgkins e os não Hodgkins (NHL). De difícil classificação e diagnóstico, para a maioria dos casos a biópsia é a única maneira de saber se um nódulo é realmente linfoma. Atualmente a maioria dos sistemas de classificação deste tipo de linfoma é baseada unicamente na avaliação de um especialista através do auxilio de microscópio. Este trabalho tem como objetivo apresentar um método automático para classificar imagens histológicas dos três tipos de linfomas NHL mais recorrentes. Linfoma de celulas do manto (LCM), Linfoma Folicular (LF) e Leucemia Linfoide Cronica (LCM). O método baseia-se na transformada wavelet estacionária (TWE) como extrator de características, a técnica TWD como seletor de atributos e redução de dimensionalidade e a classificação através do classificador SVM com o kernel RBF. Foi utilizado, no trabalho, um banco de 30 lâminas histológicas de linfonodos, proveniente de estudos realizados por pesquisadores do Instituto Nacional do Câncer (National Cancer Institute) e Instituto Nacional do Envelhecimento (National Institute on Aging), nos Estados Unidos. Os experimentos foram realizados com 240 imagens, sendo 70 de cada classe, nos canais de cores do modelo RGB (do Inglês Red, Green and Blue) e níveis de cinza. Foi comparado o desempenho não só entre as subbandas geradas pelas transformada TWE e a transformada wevelet discreta (TWD), mas também entre os canais de cores e os grupos de imagens em classificação binária. Foram utilizadas as métricas de acurácia, sensibilidade e especificidade. Resultados relevantes foram obtidos, entre eles: Acurácia de 97,1%, Sensibilidade de 93% e Especificidade de 94%. / Lymphoma is a type of tumor that affects the human lymphatic system, which is estimated more than 60 different subtypes of cancers, derivatives of 2 large groups: Hodgkins and non-Hodgkins Lymphoma (NHL). Due to difficult classification and diagnosis, for most cases, the biopsy is the only way to tell if a lump is really lymphoma. Currently most of classifications methods for this type of lymphoma are based solely on the evaluation of an expert through the microscope help. This work aims to present an automatic method to classification of histological images of the three types of Lympoma NHL most recurrent Cell Lymphoma Mantle (LCM), Lymphoma Follicular (LF) and Chronic Lymphoid Leukemia (CLL). The method is based on the Transform Wavelet Stationary (TWE) as extracting features, the ANOVA technique as selector attributes and dimensionality reduction and classification by the classifier SVM with RBF kernel. The study used a bank of 30 histological slides of lymph nodes, from studies conducted by researchers from the National Cancer Institute and National Institute on Aging in the United States. The experiments were performed with 240 images (70 of each class), on the channels of the model color RGB and gray levels. Comparing the performance not only between the subbands generated by the SWT and Discrete Wavelet Transform (DWT) but also between the color channels and the classification of binary groups of images. The accuracy, sensitivity and specificity metrics were used. Relevant results as accuracy of 97%, 93% of Sensitivity and 94% of Specificity were obtained.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:23Z : No. of bitstreams: 1 000849906.pdf: 1765122 bytes, checksum: 8c6d553d9c85a8d8f90b29da0d564f24 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os linfomas não Hodgkin (LNHs) são as neoplasias hematopoiéticas mais comuns nos cães, sendo o Linfoma Difuso de Grandes Células B (DLBCL) o subtipo mais frequente. Os DLBCLs são neoplasias formadas por células linfoides B com padrão de crescimento difuso e podem apresentar pelo menos cinco variantes. O presente trabalho teve como objetivos traçar o perfil imunoistoquímico dos DLBCLs dos cães, classificá-los de acordo com os critérios estabelecidos pela WHO (2008), WHO veterinária (2002) e Classificação de Kiel e efetuar a avaliação dos anticorpos utilizados pelo método de microarranjo de tecido (TMA), comparando-o com o corte convencional. Foi avaliada a expressão imunoistoquímica de marcadores pan B (CD79a, CD20 e PAX-5); a determinação dos índices proliferativo (Ki-67) e apoptótico (caspase-3) e também da expressão de p53 mutante. Foram observados 24 linfomas centroblásticos monomórficos, 4 imunoblásticos B e 1 centroblástico polimórfico de acordo com a classificação de Kiel. Este perfil é de 25 Linfomas de Grandes Células B Difusos/ DLBCL, NOS variante centroblástica e 4 Imunoblásticos de Grandes Células /DLBCL, NOS variante imunoblástica, pela WHO de 2002 e 2008, respectivamente. Houve marcação em 100%, 75,8% e 58,6% dos casos para o CD79a, CD20 e PAX-5, respectivamente. A mediana de porcentagem de marcação para o Ki-67 e para a caspase-3 foi de 45,9% e 10%, respectivamente. Já a expressão da proteína p53 mutante foi verificada em 16 tumores (55,1%). A análise destes marcadores utilizando-se o TMA resultou em perfil imunofenotípico idêntico e medianas de caspase-3, Ki67 e p53 significativamente semelhantes quando comparadas com o corte convencional. Concluiu-se que em nossas amostras não houve diferença estatística entre os diferentes subtipos histológicos em relação aos índices proliferativo e apoptótico e expressão da p53. Ainda, o TMA é uma técnica adequada para avaliação do... / Non Hodgkin lymphomas (LNHs) are the most common hematopoietic tumors of dogs, among which Diffuse Large B Cell Lymphoma (DLBCL) is the most frequent subtype. DLBCLs are tumors composed of lymphoid B cell with a diffuse growth pattern and may present at least five variants. The present work intended to delineate the immunohistochemical profile of canine DLBCL, classify them according to the criteria proposed by WHO (2008); veterinary WHO (2002) and Updated Kiel Classification and also perform the evaluation of the used antibodies on tissue microarray (TMA) method in comparison to conventional histological sections. The immunohistochemical expression of pan B markers (anti CD79a, anti CD20 and PAX-5) was assessed; as well as the determination of proliferation index (Ki-67) and apoptosis (caspase 3) and also the expression of the mutant p53. There were 24 monomorphic centroblastic lymphomas, 4 imunoblastic B and 1 polimorphic centroblastic according to Kiel. That profile is 25 Diffuse Large B Cell Lymphoma/ DLBCL, NOS centroblastic variant and 4 Large Cell Imunoblastic/ DLBCL, NOS imunoblastic variant according to WHO 2002 and 2008 respectively. Immunolabeling was seen in 100%, 75.8% and 58.6% of the cases for CD79a, CD20 and PAX-5 respectively. The immunolabeling median percentage of Ki67 was 45.9% and for caspase-3 it was 10%. The expression of mutant p53 was observed in 16 tumors (55.1%). The analysis of those markers using TMA resulted in identical imunophenotype and significantly similar medians of caspase-3, Ki67 e p53 when compared to conventional sections. In conclusion there was no statistical difference among the histological subtypes regarding proliferation and apoptotic indexes and p53 expression in our samples. Also, TMA is an adequate technique for evaluating imunophenotype, proliferation and apoptotic indexes as well as presence of mutant p53

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:27Z : No. of bitstreams: 1 000849806.pdf: 849500 bytes, checksum: fbe135630fc95ef07e7c2a3ad5436dca (MD5) / O Linfoma de Hodgkin (LH) é uma neoplasia hematopoiética que acomete caracteristicamente adultos jovens e apresenta, quando não tratado, curso clínico fatal. O diagnóstico precoce e preciso desse linfoma, associado à terapia moderna, por outro lado, tem proporcionado diminuição dramática das taxas de letalidade. Ainda assim, cerca de 15-20% dos pacientes evoluem de maneira insatisfatória com resistência a terapia primária ou recaída precoce pós-tratamento. Nesse sentido, há estudos variados na tentativa de buscar perfis prognósticos capazes de selecionar pacientes candidatos a terapias particulares. O IMP3 (insulin-like growth factor mRNA binding protein 3) tem sido descrito como biomarcador relacionado a pior prognóstico em diversas neoplasias, especialmente carcinomas, mas ainda pouco estudado em neoplasias hematopoiéticas. Para avaliar seu potencial papel prognóstico no LH, foi estudada a expressão do IMP3 em 61 casos, incluindo estratificação da imunocoloração em intensidades (0, 1+, 2+ e 3+) e relação com sobrevida, dados clínicos, aspectos morfológicos e imuno-histoquímicos. A expressão forte (intensidade 3+) para IMP3 foi observada em 61% (34/56) dos LH e apresentou forte indicio de associação com melhor sobrevida livre de doença. Nossos achados mostram o IMP3 como potencial biomarcador de melhor prognóstico em LH / Hodgkin lymphoma (HL) is a hematopoietic neoplasm that characteristically affects young adults and, if untreated, presents a fatal clinical course. Early and accurate diagnosis of this lymphoma associated with modern therapeutic management, on the other hand, has promoted a dramatic decrease in mortality rates. Despite this, around 15-20% of patients show unsatisfactory progression, with resistance to primary therapy or early relapse following treatment. The literature comprises numerous studies attempting to determine prognostic profiles that are capable of selecting candidate patients for specific therapies. Insulin-like growth factor mRNA binding protein 3 (IMP3) has been described as a biomarker that indicates worse prognosis in several malignancies, particularly carcinomas; however, studies of IMP3 in hematopoietic malignancies are rare. To assess their potential prognostic role in HL, IMP3 expression was studied in 61 cases and included stratification of immunostaining intensities (0, +, ++ and +++) and their relation to status of life, clinical data and morphological and immunohistochemical features. Intense IMP3 expression (+++) was observed in 61% (34/56) cases and showed a strong indication of association with better disease-free survival. Our findings show that IMP3 is a potential biomarker of better prognosis in HL

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-07. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:39Z : No. of bitstreams: 1 000855321.pdf: 1398004 bytes, checksum: 326dbbb4b555143ff52169d63ce0621f (MD5) / Introdução: Linfomas Double-Hit (LDH) são neoplasias de alto grau raras, caracterizadas pela translocação do gene MYC concomitante a translocação envolvendo os genes BCL2 e/ou BCL6, cujo diagnóstico depende da realização de exame citogenético, técnica de baixa disponibilidade e elevado custo. Diante disso, tem-se valorizado a identificação de fatores morfológicos e/ou imunofenotípicos que tenham associação com a detecção de tais translocações diagnósticas. Objetivos: Identificar pacientes portadores de LDH em casuística de linfomas Não-Hodgkin de alto grau e avaliar as associações entre os resultados citogenéticos imunoistoquímicos (IHQ) relativos aos marcadores MYC, BCL2 e BCL6. Material e Métodos: Procedeu-se revisão clínico-morfológica de 120 pacientes com diagnóstico de linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) e linfoma de Burkitt (LB), com confecção de plataforma de tissue microarray (TMA) para realização IHQ (CD20, CD79a, PAX5, CD10, BCL6, BCL2, MUM1, TDT e c-MYC) e hibridação por fluorescência in situ (FISH) para detecção de translocações dos genes c-MYC, BCL6 e BCL2. Resultados: Detectaram-se três pacientes portadores de LDH: dois com translocações de MYC e BCL2 e um com translocações de MYC e BCL6, todos evoluindo para óbito em menos de seis meses. Entre 90 amostras com citogenética avaliável, houve associação entre IHQ e FISH para MYC (p=0,036) e BCL2 (p=0,001), com concordância regular indicada por valores de Kappa de 0,23 [0,0;0,49] e de 0,35 [0,13;0,56], respectivamente. No grupo de LDGCB (n=72), as translocações envolvendo individualmente os genes MYC, BCL6 e BCL2 representaram 4,1%, 12,5% e 15,2%, respectivamente, sendo a morfologia de céu estrelado fortemente associada à detecção de translocações do gene MYC (p=0,01). Conclusão: A detecção de apenas três pacientes portadores de LDH na casuística estudada, todos com evolução para óbito, corrobora... / Background: Double-Hit Lymphomas (DHL) are rare high-grade neoplasms characterized by the translocation of gene MYC to other translocations involving genes BCL2 and/or BCL6, whose diagnosis depends on the cytogenetic examination, a technique with low availability and high cost. Therefore, it has been valued the identification of morphologic and/or immunophenotypic factors that have association with the detection of those translocations. Objectives: To identify DHL patients in group of high grade non-Hodgkin lymphoma (NHL-B) and evaluate the associations between the cytogenetic and immunohistochemical (IHC) results for the MYC, BCL2 and BCL6 markers. Design: Clinical and morphological review of 120 patients diagnosed with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and Burkitt lymphoma (BL) was proceeded, with production of a tissue microarray platform (TMA) to perform IHC (CD20, CD79a, PAX5, CD10, BCL6, BCL2, MUM1, TDT and c-MYC) and fluorescence in situ hybridization (FISH) for detection of c-MYC, BCL2 and BCL6 gene translocations. Results: Three patients with DHL were detected: two with translocations of MYC and BCL2 and one with translocations of MYC and BCL6, all leading to death in less than six months. Among 90 cytogenetically evaluable samples, associations were determined between IHC and FISH for MYC (p=0.036) and BCL2 (p=0.001), though with regular compliance testing, indicated by Kappa value of 0.23 [0.0;0.49] and 0.35 [0.13;0.56], respectively. In the DLBCL group (n=72), MYC, BCL6 and BCL2 translocations were present in 4.1%, 12.5% and 15.2%, respectively. Starry sky morphology was strongly associated with MYC positivity (p=0.01). Conclusion: The detection of only three DHL patients in this series, all evolving to death, confirms the rarity and aggressiveness of this neoplasm. The morphological pattern starry sky and the expression by IHC of MYC and BCL2 can represent possible selection factors for the ...

Submitted by osirra@hotmail.com (osirra@hotmail.com) on 2016-04-08T05:35:02Z No. of bitstreams: 1 Sierra_Matiz_Oscar_Ro.pdf: 1664098 bytes, checksum: 33fb78fcc1b1c34c59c528918880411a (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-04-08T14:59:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sierramatiz_or_me_jabo.pdf: 1664098 bytes, checksum: 33fb78fcc1b1c34c59c528918880411a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-08T14:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sierramatiz_or_me_jabo.pdf: 1664098 bytes, checksum: 33fb78fcc1b1c34c59c528918880411a (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) é o tipo de linfoma mais comum em cães e humanos, caracterizado por seu comportamento agressivo e por promover tempos de sobrevida variáveis, mesmo quando se utiliza a mesma abordagem terapêutica. Atualmente, poucos fatores prognósticos tem sido associados especificamente com LDGCB canino. A imunoexpressão de C-MYC e Bcl2 é reconhecida em humanos como fator prognóstico, devido a relação desses oncogenes com proliferação celular e evasão da apoptose nessa doença. O objetivo desse estudo foi avaliar a imunomarcação dos anticorpos C-MYC, Bcl2, e marcadores de proliferação celular Ki67 e índice mitótico (IM) em cães com LDGCB tratados com protocolo CHOP 19 semanas e correlacioná-la com o tempo de sobrevida e estadiamento clínico visando defini-los como possíveis fatores prognósticos. Trinta amostras de linfonodos de cães diagnosticados com LDGCB foram avaliadas. Para determinar a marcação de C-MYC, Bcl2 e Ki67 foi realizada a técnica de imuno-histoquímica utilizando-se os anticorpos C-MYC, Bcl2 (Santa Cruz Biotechnology) e MIB-1 (Dako), respetivamente. O IM foi calculado como descrito para outras neoplasias. A interpretação dos resultados da imuno-histoquímica para C-MYC e Bcl2, foi calculada no porcentagem de área do número de células marcadas, enquanto a contagem de Ki67 foi realizada com auxílio de uma gratícula, contando-se células positivas por área de 1 cm². Foram estabelecidos pontos de corte, calculando-se a média para todos os marcadores, e posteriormente os valores do C-MYC, Bcl2, Ki67 e a IM foram classificados e definidos como “baixo” ou “alto”. Amostras classificadas como alto C-MYC e alto Bcl2, concomitantemente, foram definidas como alvo duplo MYC/Bcl2. A média de C-MYC foi de 21 (intervalo: 2,5-53,5), de Bcl2 foi de 32,5 (intervalo: 16,9 – 76,8), de Ki67 foi de 107 (intervalo: 1 – 446) e de IM foi de 21 (intervalo: 0-73). Quando comparados os tempos de sobrevida para cada marcador, observou-se que o Ki67 apresentou diferença significativa entre as médias dos grupos baixo (281 dias) e alto (91 dias) (p<0,05). Não houve relação do alvo duplo MYC/Bcl2 com tempos de sobrevida (p>0,05), assim como não houve associação entre a imunomarcação dos anticorpos com o estadiamento clínico. Porém, houve correlação positiva entre C-MYC e Bcl2 (p<0,05) e entre Ki67 e IM (p<0,0001). A expressão imuno-histoquímica dos anticorpos C-MYC e Bcl2, individualmente ou em alvo duplo, não parece constituir um fator prognóstico em cães com LDGCB. Porém, valores acima de 107 células positivas de Ki67 podem estar associados com tempos de sobrevida mais curtos em cães com LDGCB tratados com protocolo CHOP 19 semanas. / Diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) is the most common type of lymphoma in dogs and humans, being characterized by its aggressive behavior with variable survival times, even when same therapeutic approach is used. Currently, few prognostic factors are described in the literature regarding canine DLBCL. Immunoexpression of C-MYC and Bcl2 is recognized in humans as a prognostic factor in DLBCL, product of the relationship between these oncogenes with cellular proliferation and apoptosis escape. The objective of this study is to evaluate the immunolabeling of C-MYC, Bcl2, and markers of cellular proliferation Ki67 and mitotic index (MI) in dogs with DLBCL treated with 19 weeks CHOP protocol and correlate them to survival times and clinical stage in order to identify new prognostic factors. Thirty lymphnode samples of dogs diagnosed with DLBCL were evaluated. For immunoexpression of C-MYC, Bcl2 and Ki67, we perform immunohistochemistry using the antibodies C-MYC, Bcl2 (Santa Cruz Biotechnology) and MIB-1 (Dako), respectively. MI was calculated as previously discussed in other tumors. The interpretation of the immunohistochemistry results for C-MYC and Bcl2 was based on the expression level of the area of positive cells, whereas a grid reticle was used for counting Ki67 positive cells in a total area of 1 cm². Cutoff values for all markers were established calculating the mean value and then the C-MYC Bcl2, Ki67 and MI values were classified and defined as “low” and “high”. Cases classified as high C-MYC and high Bcl2, were defined as double target MYC/Bcl2. Mean values were 21 (range: 2,5-53,5) for C-MYC, 32,5 (range: 16,9-76,8) for Bcl2, 107 (range: 1-446) for Ki67 and 21 (range: 0-73) for MI. Only Ki67 immunoexpression was found to be statistical different when survival times were compared between groups low and high (281 days vs 91 days). When double target MYC/Bcl2 was analyzed, no relationship was identified with survival times (p>0,05). Additionally, an association between the antibodies immunoexpression and clinical staging was not identified. However, a positive correlation between C-MYC and Bcl2 (p<0,05) and, Ki67 and MI (P<0,0001) was established. The immunohistochemistry expression of the antibodies C-MYC and Bcl2, individually or in double target, does not appear to constitute a prognostic factor in dogs with DLBCL, whereas a value of Ki67>107 positive cells can be used in dogs with DLBCL to foresee shorter survival times when treated with 19 weeks CHOP protocol.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:41:09Z : No. of bitstreams: 1 capua_mlb_dr_jabo.pdf: 641370 bytes, checksum: 71b19a28f172b3515a32ed7c27977d96 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dezoito cães com diagnóstico citopatológico e/ou histopatológico de linfoma foram avaliados quanto às alterações clínicas e clinico-patológicas. Os animais foram submetidos ao protocolo quimioterápico de Madison-Wisconsin e avaliados clinicamente a cada sessão de quimioterapia quanto à sua resposta ao tratamento. Cinqüenta por cento dos cães apresentaram a forma multicêntrica da doença e 33% a forma cutânea. A manifestação clínica mais comum foi a linfadenomegalia superficial, acompanhada dos sinais sistêmicos de hiporexia, apatia e perda de peso. As principais alterações hematólogicas foram anemia normocítica normocrômica, trombocitopenia e leucocitose, associadas às síndromes paraneoplásicas. Elevações nas atividades séricas de lactato desidrogenase foram observadas em 58% dos cães e a hiperproteinemia ocorreu em 38% dos animais, sendo atribuída principalmente ao aumento de globulinas séricas. Vinte e sete por cento dos animais atingiram remissão completa da doença e 33% atingiram sobrevida de seis meses. Houve correlação positiva entre o valor do hematócrito e o tempo de sobrevida para os cães que morreram, entretanto, o mesmo não foi observado para o valor de lactato desidrogenase. Sugere-se a ocorrência da síndrome da lise tumoral aguda para sete animais dado o intervalo de tempo observado entre a quimioterapia e o óbito e o avançado estágio da doença. A ausência de resposta às tentativas de reindução da remissão, observada em quatro cães, pode estar relacionada com o fenômeno de resistência tumoral aos agentes quimioterápicos. / Clinical and laboratorial evaluation were performed in eighteen dogs with cytopathological and/or histopathological lymphoma diagnosis. Animals underwent the Madison-Wisconsin chemotherapy protocol and were evaluated clinically at each session performed weekly. The multicentric and cutaneous forms of the disease were observed in 50% and 33% of the dogs, respectively. The most common clinical sign was superficial lymphadenomegaly, combined to systemic signs of hyporexia, apathy and weight loss. The main hematological changes were anemia, thrombocytopenia and leukocytosis, associated with paraneoplastic syndromes. Elevated serum activity of lactate dehydrogenase was observed in 58% of the dogs and hyperproteinemia in 38%, attributed to serum globulin increase. Complete remission was achieved in 27% of the animals and the six-month survival rate was 33%. There was a positive correlation between the hematocrit and survival time in dogs that died, however, there was no correlation between lactate dehydrogenase and survival time. The time interval between chemotherapy and death and the advanced stage of the disease in seven animals suggest the occurrence of acute tumor lysis syndrome. The absence of response to attempts of remission reinduction in four animals may be related to the drug tumoral resistance effect.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2014-06-13T20:44:53Z : No. of bitstreams: 1 vieira_mc_dr_jabo_parcial.pdf: 230581 bytes, checksum: 370cbb0fd08855627320be1ca3cf4cf1 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-08-22T14:57:12Z: vieira_mc_dr_jabo_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-08-22T15:02:12Z : No. of bitstreams: 1 000722350.pdf: 831666 bytes, checksum: 908bc0e88d23bbb61b91491924d7841a (MD5) / O linfoma é o tumor de tecido hemolinfopoiético mais comum nos cães e um dos tumores malignos de maior ocorrência na referida espécie. Um importante complemento ao seu diagnóstico é a investigação imunofenotípica da subpopulação de linfócitos envolvida e caracterização do subestádio do tumor, estabelecida pela Organização Mundial de Saúde (OMS). Adicionalmente a avaliação das proteínas séricas em cães com neoplasias, poderia auxiliar o diagnóstico, prognóstico e monitoramento da doença. Inflamações, infecções, doenças imunológicas e neoplasias, podem estimular a resposta de fase aguda (RFA), que inclui alterações nas concentrações de determinadas proteínas, chamadas proteínas de fase aguda (PFA). A avaliação das PFA em cães com linfoma poderia auxiliar o diagnóstico, prognóstico e monitoramento da doença. Este ensaio foi concebido para avaliar as proteínas séricas totais e suas frações, através da técnica de SDS-PAGE, correlacionando-as aos fatores prognósticos do linfoma canino, tais como imunofenotipagem dos linfócitos, resposta ao tratamento e estadiamento clínico da doença. Para tanto, foram avaliados 30 cães, machos ou fêmeas, sendo 10 hígidos e 20 acometidos por linfoma multicêntrico, atendidos junto ao Hospital Veterinário “Governador Laudo Natel” da FCAV/UNESP, Campus de Jaboticabal/SP. Os animais foram distribuídos em três grupos, sendo um grupo controle (GC) constituído de cães hígidos (n=10), um grupo de cães acometidos por linfoma B (GLB) (n=12) e um grupo de cães acometidos por linfoma T (GLT) (n=8). Os animais foram avaliados em três diferentes momentos: M0 (diagnóstico), M5 (5ª semana de quimioterapia) e MR (recidiva da doença). As proteínas séricas totais e suas frações não apresentaram correlação com a imunofenotipagem, nem com a resposta ao tratamento, nos... / Lymphoma is the tumor of hematolymphopoietic tissue most common in dogs and one of the most frequent malignant tumors in that specie. An important adjunct in diagnosis is to investigate the subpopulation involved and the immunophenotypic characterization of the tumor subtype stated by the World Health Organization (WHO). In addition, the valuation of serum proteins in dogs with cancer, could aid in the diagnosis, prognosis and monitoring of disease. Inflammations, infections, autoimmune diseases and cancers, can stimulate acute phase response, including abnormal levels of certain proteins called acute phase proteins (APP). This trial was designed to evaluate the serum total protein and its fractions by SDS-PAGE technique, and relate if to prognostic factors in canine lymphoma, such as immunophenotyping of lymphocyte, clinical stage of disease and response to treatment. Therefore, we evaluated 30 dogs, males or females, being 10 healthy and 20 affected by multicentric lymphoma, treated with the Veterinary Hospital Governor Laudo Natel, FCAV / UNESP, Jaboticabal / SP. The animals were divided into three groups, one control group (GC) formed by healthy dogs (n = 10), a group of dogs with B lymphoma (GLB) (n = 12) and a group of dogs with T lymphoma (GLT) (n = 8). The animals were evaluated at three different moments: M0 (at diagnosis), M5 (5th week of chemotherapy) and MR (disease recurrence). Serum total proteins and its fractions did not correlate with immunophenotype, or the response to treatment in dogs with lymphoma. Albumin correlated with staging and clinical substaging lymphoma. Some APP were more elevated in the GLB and others in the GLT, therefore these proteins showed significant... (Complete abstract click electronic access below)