Made available in DSpace on 2015-06-20T02:07:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000470792-Texto+Completo-0.pdf: 1695613 bytes, checksum: bfea5d57cf26d524d5b14d7d3ac84cdc (MD5) Previous issue date: 2014 / Melanoma is one of the most aggressive malignant tumors, and its incidence has been increasing steadily in recent years. Usually in the early stages, treatment for melanoma is local surgery with reasonable efficiency. However, treatments such as chemotherapies for advanced melanoma have limited benefits, prolonging the patient's life in a few months. Thus the search for more effective therapies for melanoma is necessary. More recent studies suggest that tumor immune response conducted by subtypes of CD4+ T helper cells subsets have an important role in cancer control. According to tumor infiltrating Th17 and Treg cellsand the cytokines they secrete the tumor microenvironment profile may be suggested anti or pro-tumor activities or exerted by these cells. In this study, we investigated the transcriptional markers of CD4+Foxp3+ T cells and CD4+RORγt+ T cells in draining lymph nodes of animals throughout the melanoma tumor growth and evaluate whether the combined action of cisplatin (cis-diamino-dichloro-platin, CDDP) and TLR2 (peptidoglycan) or TLR3 (acid-Polyribosilic Polyribocytidilic) or TLR4 (lipopolysaccharide) agonists, can change these parameters. The animals were injected with melanoma cell line B16F10 and according tumor progression the tumor draining lymph node (TDLN) were excised for analysis of Treg and Th17 cells by flow cytometry. Furthermore, we analyzed the survival of animals treated with combined therapies. We found an increase in the percentage and absolute number of Th17 and Treg cells in TDLN according tumor progression, which was consistent with previous studies. Our results indicate that treatment with cisplatin promotes tumor growth by increasing Treg and Th17 cells. Treatment with CDDP plus TLR2 agonist significantly decreases the percentage of Th17 cells in TDLN. We demonstrated here, that combinated CDDP and TLR3 or TLR4 agonist therapy impairs tumor growth and modulate the frequency of these cells by decreasing the percentage of CD4+Foxp3+ T cells. In addition, this combination also showed a modest increase insurvivalof the melanoma bearing mice. These results showed that TLRs agonists may be used in combination with cisplatin as a potential adjuvant capable impair tumor growth in melanoma bearing mice. / Melanoma é um dos tumores malignos mais agressivos, e sua incidência vem aumentando continuamente nos últimos anos. Geralmente em estágios iniciais, o tratamento para melanoma é local, por cirurgia, com razoável eficácia. Contudo, os tratamentos para melanoma em estágios avançados por quimioterapia têm benefícios limitados, prolongando a vida do paciente em poucos meses. Assim se faz necessária a busca por terapias mais efetivas para melanomas. Estudos mais recentes sugerem que a resposta imunológica tumoral realizada pelos subtipos de células T CD4+ auxiliares possuem papel importante no controle do câncer. Conforme o infiltrado tumoral de células Th17 e Treg e o perfil de citocinas que elas secretam no microambiente tumoral, pode-se sugerir atividades anti ou pró-tumorais exercidas por essas células. Neste estudo, nós investigamos os marcadores transcricionais de células T CD4+Foxp3+ e células T CD4+RORγt+ em linfonodos drenantes de animais com melanoma ao longo do crescimento tumoral e avaliamos se a ação combinada de cisplatina (cis-diamino-dichloro-platin, CDDP) com agonistas de TLR2 (Peptidoglicano) ou TLR3 (ácido Polyribosilic-Polyribocytidilic) ou TLR4 (Lipopolissacarídeo) podem alterar esses parâmetros. Os animais foram injetados com células de melanoma linhagem B16F10 e conforme a progressão tumoral os linfonodos drenantes tumorais (TDLN) foram excisados para análise de células Th17 e Treg por citometria de fluxo. Além disso, analisamos a sobrevida dos animais com a ação combinadas das terapias. Encontramos um aumento na porcentagem e número absoluto de células Th17 e Treg no TDLN conforme a progressão tumoral o qual foi condizente com estudos anteriores. Nossos resultados indicam que o tratamento apenas com cisplatina, promove o crescimento tumoral através do aumento de células Th17 e Treg. O tratamento de cisplatina com agonista de TLR2 diminui consideravelmente a porcentagem de células Th17 no TDLN. Demonstramos aqui que a combinação de terapias utilizando CDDP juntamente com agonistas de TLR3 ou TLR4, prejudica o crescimento tumoral e pode modular a frequência dessas células através da diminuição na porcentagem de células TCD4+Foxp3+. Adicionalmente, essa combinação também mostrou um modesto aumento na sobrevivência dos animais. Esses resultados mostram que agonistas de TLRs podem ser utilizados em combinação com cisplatina como potencial adjuvante capaz de induzir inibir o crescimento tumoral em modelo de melanoma murino.

Orientadores: Henrique Benedito Brenelli, Cesar Cabello dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T21:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alvarenga_CesarAugusto_M.pdf: 773173 bytes, checksum: a343c1251f2ecdbbe7d3411e6c54e101 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: INTRODUÇÃO: A dissecação completa dos linfonodos axilares (DCLA) em câncer de mama é o tratamento-padrão para os casos de linfonodo sentinela (LS) positivo. Todavia, estudos relatam que 38 a 67% das pacientes com LS positivos não têm comprometimento dos demais linfonodos axilares. OBJETIVO: O objetivo deste estudo é explorar as características morfológicas do tumor primário da mama e das metástases no LS para tentar definir subgrupos de pacientes que se beneficiarão de uma DCLA. MATERIAL E MÉTODOS: Foram selecionadas mulheres com carcinoma invasivo da mama com LS positivo, submetidas a DCLA no período de julho de 2002 a março de 2007 (dados coletados no Instituto de Patologia de Campinas). Foram avaliados a localização da metástase no LS, tal como: cápsula, seio subcapsular, sinusóides e/ou parênquima, o tamanho da metástase, o número de focos metastáticos, o número de LS comprometidos e presença ou ausência de extensão extranodal. Foram estudados: tamanho do tumor, tipo histológico, grau histológico e nuclear das neoplasias e invasão vascular peritumoral. Análises univariadas usando o teste do qui-quadrado e o teste exato de Fisher foram utilizadas para determinar a associação entre a morfologia do tumor mamário e as metástases do LS com o estado dos LNS. Análise multivariada com regressão logística foi realizada para avaliar a associação entre as variáveis estatisticamente significativas nas análises univariadas com o estado axilar. RESULTADOS: Foram examinados linfonodos sentinelas de 546 mulheres com carcinoma invasivo da mama. Cento e quarenta e um pacientes tiveram LS positivo (26%), das quais 21 mulheres não foram submetidas a DCLA. Das 120 pacientes estudadas com LS positivo e DCLA, 51 delas tiveram axila positiva (43%). Na análise univariada, tamanho do tumor na mama, tipo histológico, grau nuclear, número de LS positivos e número de focos metastáticos no LS não tiveram associação com metástase na axila, enquanto que grau III histológico da neoplasia, invasão vascular peritumoral, tamanho da metástase no LS, metástase localizada no parênquima e extensão extranodal tiveram associação com axila positiva. CONCLUSÕES: Estes fatores associaram-se a maior probabilidade de desenvolver metástases nos LNS / Abstract: INTRODUCTION: The complete axillary lymph node dissection is the standard treatment for patients with positive sentinel lymph node (SLN) in breast cancer. However, several studies report that 38 to 67% of patients with positive SLN do not have involvement of the non-sentinel lymph nodes (NSLN). OBJECTIVE: The purpose of this study is to explore the orphological characteristics of the primary breast tumor and the SLN metastases to define subsets of patients that will have receive greater benefit from complete axillary lymph node dissection (CALD). METHODS: We studied 546 women with invasive breast carcinoma that were submitted to sentinel lymph node biopsy from July 2002 to March 2007 (data from Instituto de Patologia de Campinas). One hundred and forty one patients (26%) had positive sentinel lymph node and 21 women refused to be submitted to CALD. Univariate analyses were performed using the chi-square test and Fisher exact test for individual variables to determine the association between the morphology of the mammary tumor and the SLN metastasis with the status of the NSLN. Multivariate analyses with logistic regression were done to evaluate the association between the statistically significant variables in univariate analyses with the axillary status. RESULTS: SLN from 546 patients with invasive breast cancer were studied. One hundred and forty one patients had SLN positive (26%) and 21 women refused to be submitted to CALD. Of the remaining 120 patients studied, 51 of them developed additional metastases in the NSLN (43%). Upon univariate analyses, tumor size, histologic type, nuclear grade, number of positive SLN and number of metastatic foci in the SLN were not associated with disease in the NSLN, while histologic grade III, peritumoral vascular invasion, size of the metastasis in SLN, disease localized in the lymph node parenchyma and extranodal extension were associated with additional metastases in NSLN. CONCLUSION: These risk factors were associated with greater probability to develop metastases in the NSLN / Mestrado / Ciencias Medicas / Mestre em Tocoginecologia

Orientador: Emilio Francisco Marussi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T02:39:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jales_RodrigoMenezes_M.pdf: 1089775 bytes, checksum: f88eb720b9e6032407ba3a3d6c84e5df (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Introdução: a avaliação clínica tem baixo desempenho na previsão do envolvimento linfonodal em mulheres com câncer da mama. Assim, a dissecção axilar é necessária para o estadiamento patológico. A ultra-sonografia tem sensibilidade superior à mamografia e ao exame físico na avaliação linfonodal axilar. Objetivos: Avaliar o desempenho de diversas características ultra-sonográficas morfológicas (12) e Doppler (7) na detecção de metástases linfonodais em mulheres com câncer de mama. Métodos: Foram incluídas 181 axilas, de 179 mulheres, entre janeiro e dezembro de 2004. Os exames ultra-sonográficos foram realizados com transdutor linear em tempo real (TOSHIBA- Power Vision-6000 - modelo SSA-370A). Para o estudo de parâmetros morfológicos foram utilizadas freqüências entre 7,5 e 12 megahertz (Mhz). Para os parâmetros Doppler foi utilizada a freqüência de 5Mhz. Subseqüentemente, as pacientes foram submetidas à axilectomia dos níveis I, II e III (158) ou à técnica do linfonodo sentinela (23). Para a análise dos dados utilizaram-se estatística descritiva e árvore de decisão. Resultados: Ao exame ultra-sonográfico foi identificado pelo menos um linfonodo axilar em 173 (96%) exames. O exame histológico detectou metástase linfonodal em 87 mulheres (48%). As melhores sensibilidades dos critérios morfológicos foram encontradas com o volume do linfonodo (62%), diâmetro antero-posterior (62%) e local do centro ecogênico (56%). Embora a especificidade da invasão da gordura adjacente (100%), regularidade das margens (92%) e da ecotextura do parênquima (99%) tenham sido elevadas, a sensibilidade destes parâmetros foi muito baixa. Nenhum critério do Doppler alcançou 50% de sensibilidade. A árvore de decisão selecionou a localização do centro ecogênico, ecotextura do parênquima e regularidade das margens como melhor associação de parâmetros. Conclusão: O desempenho da ultra-sonografia na detecção de metástases nos linfonodos axilares foi desapontador na detecção de metástases linfonodais axilares em mulheres com câncer de mama / Abstract: Introduction: The clinical evaluation is not accurate to predict the lymph node involvement in woman with breast cancer. Therefore, the axillary dissection is necessary to the pathological stagement. The ultrasonography is more sensitive than palpation and mammography in the detection of metastatic lymph nodes. Objective: To evaluate the role of ultrasonographic features, morphologic (12) and Doppler (7), in the detection of lymph node metastases in breast cancer patients. Methods: 181 axillas from 179 women were included. The ultrasonographic examinations were performed with real-time linear probe (TOSHIBA- Power Vision-6000 - model SSA-370A). Morphologic parameters were studied with a frequency of 7.5-12 Mega-hertz (Mhz). To Doppler parameters, a frequency of 5Mhz was used. Subsequently, the women were submitted to axillary dissection of levels I, II and III (158) or to the sentinel lymph node technique (23). Descriptive statistics and tecision tree were used to analyze the data. Results: At least one lymph node was detected in 173 (96%) by ultasonographic exams. Histologic examination detected lymph node metastases in 87 women (48%). The best sensitivity among the morphologic features were found with the volume (62%), the antero-posterior diameter (62%) and fatty hilum placement (56%). Beside the specificity of the extra capsular invasion (100%), border regularity (92%) and cortex echogenicity (99%) were high, the sensitivity of these features were to low. None of the Doppler features reached 50% of sensitivity. The decision tree test selected the ultrasonographic features: fatty hilum placement, border regularity and cortex echogenicity as the best parameters association. Conclusion: The role of axillary ultrasonography in the detection of axillary lymph node metastases in woman with breast cancer was disappointing / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Aproximadamente 40% dos casos de Linfoma não Hodgkin (LNH) se originam fora dos linfonodos, sendo então denominados linfomas extralinfonodais. No trato gastrointestinal (TGI), o estômago é o local mais freqüentemente envolvido, representado pelo linfoma MALT e pelo linfoma difuso de grandes células B (LDGCB). No Brasil, apesar da sua freqüência e importância, existem poucos dados epidemiológicos em relação aos linfomas, especialmente no que se refere aos linfomas de origem extralinfonodal. Para avaliar as características dos linfomas primários gástricos em uma população brasileira, 60 casos foram avaliados retrospectivamente. Trinta e oito (63,3%) foram classificados como LDGCB e 22 (36,6%) como MALT. Entre os dois grupos, não houve diferenças significativas em termos de sexo, idade, sintomas dispépticos, sintomas B, presença de massa Bulky, infiltração de medula óssea, estádio, infecção por H. pylori, achados laboratoriais e endoscópicos. Foram adotados diferentes protocolos de tratamento. A taxa de remissão completa foi de 73,1% no LDGCB e de 95% no linfoma MALT. A taxa de sobrevida livre de doença em 7 anos foi de 84,8% no LDGCB e de 94,1% no linfoma MALT. A taxa de sobrevida global em 7 anos foi de 65,7% no LDGCB e de 92,9% em 5 anos no linfoma MALT. Como não conseguimos demonstrar diferenças entre os dois tipos histológicos, concluímos que o diagnóstico histológico correto é essencial para a terapêutica mais adequada. / Approximately 40% of the non-Hodgkins Lymphoma arises outside lymph node tissue, being then termed extranodal lymphoma. In the gastrointestinal tract, gastric is the commonest localization represented by MALT and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL). In Brazil, despite its importance and frequency there are very few epidemiological data concerning lymphomas, specially the extranodal ones. In order to study the primary gastric lymphoma features in a Brazilian population, 60 patients were retrospectively evaluated. Thirty eight cases (63.3%) were classified as DLBCL and 22 (36.6%) as MALT lymphoma. There were no significant differences between the 2 groups in terms of sex, age, gastric symptoms, B symptoms, Bulky disease, bone marrow infiltration, stage, H. pylori infection, laboratory and endoscopic findings. Different treatment methods were adopted. The complete remission rate was 73.1% for DLBCL and 95% for MALT lymphoma. The disease free survival in 7 years was 84.8 for DLBCL and 94.1% for MALT lymphoma. The 7 year overall survival (OS) rate for DLBCL was 65.7% and 5 year OS for MALT was 92.9%. Because we could not demonstrate differences between the two histological groups, we conclude that the correct histological diagnosis is essential for choosing the best therapeutic approach.

A identificação e biópsia do primeiro linfonodo a receber a linfa de uma formação neoplásica, ou seja, do linfonodo sentinela, fornecem informações essenciais para o tratamento e prognóstico de pacientes humanos acometidos por neoplasia. Entretanto, em Medicina Veterinária existem poucos estudos sobre a drenagem linfática dos órgãos e o conceito de linfonodo sentinela ainda não é amplamente aplicado ao tratamento oncológico dos animais. Desta forma, nosso objetivo no presente estudo foi estabelecer um protocolo de aquisição cintilográfica linfática, ou linfocintilográfica, capaz de fornecer informações funcionais e topológicas da drenagem linfática mamária, pois, em cadelas, as glândulas mamárias ainda são uns dos principais órgãos acometidos por neoplasias. Neste estudo, a linfocintilografia foi utilizada para caracterização topológica e funcional in vivo da drenagem linfática de glândulas mamárias sadias de 30 fêmeas da espécie canina (Canis familiares), sem raça definida e peso aproximado de 10 Kg. O radiofármaco [99mTc]-dextran70 foi administrado por via intraparenquimatosa mamária em quatro pontos ao redor da papila (0,1 ml cada), na dose de 18,5 MBq. As imagens foram obtidas em duas seqüências de projeções laterais e ventrais, sendo uma logo após a administração do [99m</SUP Tc]-dextran70 e a outra após uma hora. O radiofármaco administrado nas glândulas mamárias torácicas craniais foi drenado pelos linfocentros torácico ventral e axilar, sendo que em duas destas 5 glândulas (40%) o radiofármaco também foi para o linfocentro cervical superficial. Este resultado foi semelhante para as glândulas torácicas caudais, entretanto, em nenhuma das linfocintilografias destas glândulas o linfocentro cervical superficial foi identificado. A drenagem das glândulas abdominais craniais foi realizada exclusivamente pelo linfocentro axilar. Os linfocentros inguinais superficial e profundo drenaram as glândulas abdominais caudais e inguinais, porém, uma das glândulas abdominais caudais foi drenada também pelo linfocentro cervical superficial e outra pelo linfocentro mediastínico. A técnica linfocintilográfica utilizada possibilitou a identificação de comunicações linfáticas entre os linfonodos axilares próprio e acessório, entre o axilar próprio e o cervical superficial e entre os linfonodos inguinais superficial e profundo. O número de linfocentros e linfonodos, a taxa de drenagem dos linfocentros e seu funcionamento variaram entre as glândulas mamárias e entre os animais. Em conclusão, o protocolo de aquisição linfocintilográfica adotado foi simples, rápido e eficaz para a caracterização da drenagem linfática mamária. As informações topológicas e funcionais obtidas neste estudo poderão ser aplicadas nos procedimentos investigativos como a ultra-sonografia e a biópsia dos linfonodos mamários em pacientes acometidos por neoplasias mamárias, uma vez que os vasos linfáticos representam vias de disseminação para células neoplásicas. / The knowledge of lymphatic drainage has prognostic and surgical value for oncological treatment. Once you know the lymph nodes that drain the organ, you can predict the possible neoplasic cell route and avoid or predict metastasis. The lymphoscintigraphy is not common in Veterinary Nuclear Centers, however this technique has high applicability in oncological studies. During this study, the lymphoscintigraphie was used to characterize topological and functional aspects of lymphatic health mammary drainage in 30 adult mongrel female dogs, 10Kg in weigh. Lymphoscintigraphies were performed immediately after 4 intramammary peripapilare injections (0, 1 ml each) of 18,5 MBq of [99mTc]-dextran70 and one hour later. Animals were imaged by lateral and ventral projections. Cranial thoracic glands were drained by ventral thoracic and axillary lymph centers, but we observed the simultaneous participation of superficial cervical lymph center in 40% of these (2 animals). This result was similar for caudal thoracic mammary glands, but not for cervical lymph center drainage, that was not observed in caudal thoracic glands lymphoscintigraphies. Cranial abdominal glands were drained exclusively by the axillary lymph center. Superficial and deep inguinal lymph centers drained caudal abdominal and inguinal mammary glands, but we observed one superficial cervical lymph center participation in a caudal abdominal mammary gland drainage. Our lymphoscintigraphic technique provided image of lymphatic communication between axillary lymph nodes and between superficial and deep inguinal lymph nodes. The number of lymph centers and lymph nodes, the lymph center drainage rate and functional behavior of each lymph nodes were variable. In conclusion, the lymphoscintigraphic protocol performed was simple, quickly and provided the lymphatic drainage characterization. Technique, topologic and functional information provided by the present study can be applied to understand neoplasic mammary cells dissemination routes, which has prognostic and treatment value for patients. Veterinary centers that have no Nuclear Medicine facilities can use these topologic and functional information of the present study in other diagnostic procedures such as the abdominal ultra-sound and lymph node biopsy of patients with mammary neoplasia.

Linfonodos de 146 bovinos com lesões macroscópicas identificadas como sugestivas de tuberculose pelos Serviços de Inspeção Federal e Estadual de abatedouros do Estado de São Paulo, Brasil, no período de Maio de 2002 à Janeiro de 2004, conservadas em solução de borato de sódio em temperatura ambiente por no máximo 60 dias, negativos nos cultivos de micobactérias nos meios de Lowëstein-Jensen e Stonebrink com descontaminação por Petroff e HPC e conservadas por congelamento, foram submetidos a novos cultivos em Agar Sangue, Agar MacConkey e Agar Saboraud bem como ao exame histopatológico pelas colorações de Hematoxilina-Eosina e Ziëlh-Neelsen. Nos cultivos houve isolamentos de E. faecium, E. faecalis, E. solitarius, S. arlettae e S. epidermidis. Não houve correlação entre as bactérias isoladas e a localização dos respectivos linfonodos. Os exames histopatológicos classificaram 49 animais isentos de qualquer lesão microscópica, 4 positivos para micobactérias sp, 18 fortemente sugestivos para micobactérias sp e 45 como processos atribuídos a outros agentes que não micobactérias. Não houve correlação entre o aspecto histológico dos linfonodos e o tipo de microrganismo isolado. Os microrganismos isolados foram considerados como contaminantes que tiveram acesso aos materiais durante os procedimentos de abate. / Lymph nodes of 146 bovines presenting lesions identified macroscopically as suggestive of tuberculosis by the Federal and State Inspection Services of abbatoirs at the State of São Paulo, Brazil, from May, 2002 to January, 2004, that were preserved in sodium borate solution at room temperature for no longer than 60 days, negative to mycobacteria culturing on Lowenstein-Jensen and Stonebrink media, decontaminated by Petroff and HPC methods and kept frozen, were subjected to new cultivations on blood, MacConkey and Sabouraud agars as well as to histopathological examination by Hematoxilin-Eosin and Ziëlh-Neelsen coloration techniques. E. faecium, E. faecalis, E. solitarius, S. arlettaeand S. epidermidis were isolated by culturing. No correlation between the isolated bacteria and the respective lymph nodes localization was found. The histopathological classification of the animals was: 49 presented microscopically no lesion, 4 were Mycobacterium sp. positive, 18 were strongly suggestive of Mycobacterium sp. and 45 were attributed to agents other than mycobacteria. There was no correlation between the histological aspect of the lymphnodes and the microorganisms isolated. The isolated microorganisms were considered as contaminants that had access to these materials during the slaughter procedures.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-06-19T11:36:44Z No. of bitstreams: 1 470792 - Texto Completo.pdf: 1695613 bytes, checksum: bfea5d57cf26d524d5b14d7d3ac84cdc (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-19T11:36:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 470792 - Texto Completo.pdf: 1695613 bytes, checksum: bfea5d57cf26d524d5b14d7d3ac84cdc (MD5) Previous issue date: 2014-03-12 / Melanoma is one of the most aggressive malignant tumors, and its incidence has been increasing steadily in recent years. Usually in the early stages, treatment for melanoma is local surgery with reasonable efficiency. However, treatments such as chemotherapies for advanced melanoma have limited benefits, prolonging the patient's life in a few months. Thus the search for more effective therapies for melanoma is necessary. More recent studies suggest that tumor immune response conducted by subtypes of CD4+ T helper cells subsets have an important role in cancer control. According to tumor infiltrating Th17 and Treg cellsand the cytokines they secrete the tumor microenvironment profile may be suggested anti or pro-tumor activities or exerted by these cells. In this study, we investigated the transcriptional markers of CD4+Foxp3+ T cells and CD4+ROR?t+ T cells in draining lymph nodes of animals throughout the melanoma tumor growth and evaluate whether the combined action of cisplatin (cis-diamino-dichloro-platin, CDDP) and TLR2 (peptidoglycan) or TLR3 (acid-Polyribosilic Polyribocytidilic) or TLR4 (lipopolysaccharide) agonists, can change these parameters. The animals were injected with melanoma cell line B16F10 and according tumor progression the tumor draining lymph node (TDLN) were excised for analysis of Treg and Th17 cells by flow cytometry. Furthermore, we analyzed the survival of animals treated with combined therapies. We found an increase in the percentage and absolute number of Th17 and Treg cells in TDLN according tumor progression, which was consistent with previous studies. Our results indicate that treatment with cisplatin promotes tumor growth by increasing Treg and Th17 cells. Treatment with CDDP plus TLR2 agonist significantly decreases the percentage of Th17 cells in TDLN. We demonstrated here, that combinated CDDP and TLR3 or TLR4 agonist therapy impairs tumor growth and modulate the frequency of these cells by decreasing the percentage of CD4+Foxp3+ T cells. In addition, this combination also showed a modest increase insurvivalof the melanoma bearing mice. These results showed that TLRs agonists may be used in combination with cisplatin as a potential adjuvant capable impair tumor growth in melanoma bearing mice. / Melanoma ? um dos tumores malignos mais agressivos, e sua incid?ncia vem aumentando continuamente nos ?ltimos anos. Geralmente em est?gios iniciais, o tratamento para melanoma ? local, por cirurgia, com razo?vel efic?cia. Contudo, os tratamentos para melanoma em est?gios avan?ados por quimioterapia t?m benef?cios limitados, prolongando a vida do paciente em poucos meses. Assim se faz necess?ria a busca por terapias mais efetivas para melanomas. Estudos mais recentes sugerem que a resposta imunol?gica tumoral realizada pelos subtipos de c?lulas T CD4+ auxiliares possuem papel importante no controle do c?ncer. Conforme o infiltrado tumoral de c?lulas Th17 e Treg e o perfil de citocinas que elas secretam no microambiente tumoral, pode-se sugerir atividades anti ou pr?-tumorais exercidas por essas c?lulas. Neste estudo, n?s investigamos os marcadores transcricionais de c?lulas T CD4+Foxp3+ e c?lulas T CD4+ROR?t+ em linfonodos drenantes de animais com melanoma ao longo do crescimento tumoral e avaliamos se a a??o combinada de cisplatina (cis-diamino-dichloro-platin, CDDP) com agonistas de TLR2 (Peptidoglicano) ou TLR3 (?cido Polyribosilic-Polyribocytidilic) ou TLR4 (Lipopolissacar?deo) podem alterar esses par?metros. Os animais foram injetados com c?lulas de melanoma linhagem B16F10 e conforme a progress?o tumoral os linfonodos drenantes tumorais (TDLN) foram excisados para an?lise de c?lulas Th17 e Treg por citometria de fluxo. Al?m disso, analisamos a sobrevida dos animais com a a??o combinadas das terapias. Encontramos um aumento na porcentagem e n?mero absoluto de c?lulas Th17 e Treg no TDLN conforme a progress?o tumoral o qual foi condizente com estudos anteriores. Nossos resultados indicam que o tratamento apenas com cisplatina, promove o crescimento tumoral atrav?s do aumento de c?lulas Th17 e Treg. O tratamento de cisplatina com agonista de TLR2 diminui consideravelmente a porcentagem de c?lulas Th17 no TDLN. Demonstramos aqui que a combina??o de terapias utilizando CDDP juntamente com agonistas de TLR3 ou TLR4, prejudica o crescimento tumoral e pode modular a frequ?ncia dessas c?lulas atrav?s da diminui??o na porcentagem de c?lulas TCD4+Foxp3+. Adicionalmente, essa combina??o tamb?m mostrou um modesto aumento na sobreviv?ncia dos animais. Esses resultados mostram que agonistas de TLRs podem ser utilizados em combina??o com cisplatina como potencial adjuvante capaz de induzir inibir o crescimento tumoral em modelo de melanoma murino.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 423613.pdf: 493712 bytes, checksum: f0aaf16c071b57eefd3ee2352c888ec8 (MD5) Previous issue date: 2009-03-17 / O melanoma maligno cut?neo se encontra entre as neoplasias que mais aumentam em incid?ncia anual no mundo. V?rios fatores v?m sendo estudados na determina??o de progn?stico, entre eles, a espessura de Breslow, os n?veis de Clark, a presen?a de ulcera??o e a taxa de prolifera??o celular. Esta ?ltima vem ganhando import?ncia nas ?ltimas publica??es, como um fator capaz de determinar a positividade de linfonodo sentinela, al?m do progn?stico. Pouco tem sido estudado, no entanto, seu papel enquanto vari?vel isolada. Este trabalho tem por objetivo estudar a exist?ncia de rela??o preditora entre a Taxa de Prolifera??o Celular (TPC) e a Positividade do Linfonodo Sentinela ( PLS). Foi realizado, para tanto,estudo transversal envolvendo a avalia??o dos exames anatomopatol?gicos de 109 pacientes atendidos pelo Programa Melanoma do HSL-PUCRS no per?odo de Outubro de 2006 at? Outubro de 2008. Foi realizado teste de Chi-Quadrado e Regress?o Log?stica Bin?ria visando identifica??o de vari?vel com capacidade preditora de desfecho, ou seja, Positividade ou Negatividade de Linfonodo Sentinela. As vari?veis que demonstraram valor independente em rela??o ao desfecho foram a Espessura de Breslow ( p = 0,001) e N?veis de Clark ( p = 0,047). A Taxa de prolifera??o celular apresentou rela??o inferior a 5%, com o valor de p mais pr?ximo do desejado ( p = 0,07) em pacientes com Breslow 1-2 mm e idade inferior a 40 anos. Em conclus?o, o taxa de prolifera??o celular dos melanomas malignos cut?neos n?o mostrou rela??o com o desfecho pretendido enquanto vari?vel independente. Este fen?meno estat?stico nos leva a crer que a TPC ? o que chamamos de vari?vel de grupo, ou seja, contribui junto com um grupo de vari?veis para um determinado desfecho. ? poss?vel que, em um grupo selecionado de pacientes com espessura intermedi?ria ( 1-2mm ) e idade jovem ( abaixo de 40 anos), se possa predizer a positividade ou n?o de um g?nglio previamente a realiza??o de pesquisa de linfonodo sentinela.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 433622.pdf: 643872 bytes, checksum: 21a222dc14b2e23cb481fc34a34b6bfc (MD5) Previous issue date: 2005-08-09 / Racional: A apropriada indica??o de terapia adjuvante no c?ncer de mama est? atualmente embasada em fatores progn?sticos cl?nico-patol?gicos. A busca de fatores mais precisos e confi?veis para a identifica??o de pacientes em que a indica??o de tratamento complementar ? imprescind?vel, ? de grande import?ncia nos dias atuais. A mamaglobina (hMAM) e o ant?geno carcinoembri?nico (CEA) t?m sido alvos de estudos como marcadores de micromet?stases de c?ncer de mama. O objetivo principal deste estudo foi avaliar a capacidade de detec??o de micromet?stases de c?ncer de mama pelo m?todo de RT-PCR para hMAM e CEA.M?todos: Quarenta e nove pacientes com c?ncer de mama EC I a III, foram avaliadas no momento da cirurgia de mama com coleta de amostras de tecido mam?rio normal, tumor, linfonodo, sangue e medula ?ssea. Realizou-se RT-PCR para CEA e hMAM nos respectivos tecidos.Resultados: A maioria dos tumores expressaram CEA (37/ 44 casos) e hMAM (40/44 casos). Seis pacientes (27.3%) com histologia negativa nos linfonodos axilares expressaram CEA nos mesmos e 2 (8,7%) pacientes com esta situa??o expressaram hMAM nos linfonodos.Duas (5,7%) pacientes expressaram CEA no sangue e cinco (13,9%) expressaram hMAM. A medula ?ssea teve express?o de CEA em 3 (14,3%) pacientes e de hMAM em 5 (23,8%).Conclus?o: A t?cnica de RT-PCR ? capaz de detectar transcritos de CEA e hMAM em pacientes com c?ncer de mama. O significado cl?nico deste achado ainda deve ser esclarecido. A detec??o em linfonodos para estes marcadores parece estar mais fortemente associada ao progn?stico que a detec??o em sangue e medula ?ssea.

O linfonodo é um órgão linfoide secundário que apresenta uma arquitetura altamente organizada com diferentes compartimentos para tipos celulares específicos. Dentre as células estruturais que compõem este órgão, as células estromais como células fibroblásticas reticulares (FRCs) e células duplo negativas (DNCs) parecem ter papel importante na modulação da resposta imunológica e na tolerância periférica. As FRCs são caracterizadas pela expressão de podoplanina (gp38, PDPN) e localizam-se principalmente na zona de células T, enquanto as DNCs (gp38-) apresentam fenótipo, localização e função pouco descritos. Embora estas células tenham sido muito estudadas em modelos murinos os estudos sobre FRCs e DNCs humanas são escassos e, portanto nosso estudo deve contribuir para a compreensão da biologia e a função dessas células, podendo favorecer o conhecimento sobre a eficiência e as disfunções da resposta imune no linfonodo. Com esse intuito, isolamos e caracterizamos fenotípica e funcionalmente as FRCs e DNCs de linfonodos de pacientes com câncer, diverticulite e doadores de fígado. Nossos resultados mostraram a integridade e a distribuição celular no linfonodo. As células aderentes derivadas dos linfonodos estudados preecheram todos os critérios internacionais de caracterização de estroma, e, portanto, foram consideradas células estromais. Através da expressão de gp38 identificamos duas subpopulações de celulas estromais: FRCs (gp38+ e CD31-) e DNCs (gp38- e CD31-) e verificamos que as frequências destas células variam entre as amostras, sugerindo que a doença pode interferir na composição celular estromal dos linfonodos. As duas populações celulares foram estimuladas com citocinas inflamatórias como IFN-y ou TNF-alfa + IL-1beta por 24 e 48 horas e avaliadas quanto à expressão gênica e proteica. Em condições homeostáticas, genes relacionados com a indução e controle da proliferação foram diferencialmente expressos nas FRCs e DNCs, este dado foi confirmado in vitro, uma vez que as FRCs apresentaram maior potencial proliferativo em relação às DNCs. O estímulo com IFN-y induziu aumento de expressão nas DNCs e FRCs para citocinas, quimiocinas, moléculas de histocompatibilidade e moléculas envolvidas na regulação da resposta imunológica. Em resposta ao estímulo com TNF-alfa +IL-1beta, observamos aumento na expressão de moléculas comuns ao estímulo com IFN-?, entretanto, também observamos expressão de moléculas de citocinas, quimiocinas inflamatórias e moléculas de histocmpatibilidade especificamente relacionados a este sinal em ambas as populações. Em conjunto, nossos dados sugerem que DNCs e FRCs apresentam diferenças no perfil de resposta segundo os estímulos inflamatórios aos quais estão expostas, aumentando a expressão diferencial de moléculas envolvidas na regulação positiva e negativa da resposta imune / The lymph node is a secondary lymphoid organ that has a highly organized architecture with different compartments for specific cell types. Among the structural cells that comprise this organ, stromal fibroblastic reticular cells (FRCs) and double negative cells (DNCs) seems to play an important role in modulating the immune response and peripheral tolerance. FRCs are characterized by podoplanin (gp38, PDPN) expression and are located mainly in the T cell zone, while DNCs (gp38-) present phenotype, location and function not well described. Although these cells have been studied in murine models, studies on human FRCs and DNCs are limited and therefore our study should contribute to the understanding of biology and function of these cells and should promote knowledge of efficiency and disorders in the lymph node immune response. For this purpose, we have isolated and characterized phenotypic and functionally lymph nodes derived FRCs and DNCs from patients with cancer, diverticulitis and liver donors. Our results showed lymph node integrity and its cellular distribution. Adherent cells lymph nodes-derived fullfill the international criteria for stroma characterization, and therefore, they have been considered stromal cells. Using gp38 expression we were able to identify two stromal cells subpopulations: FRCs (gp38 + and CD31-) and DNCs (gp38- and CD31-) and found that this cells frequency varies among samples, suggesting that the disease may interfere with lymph nodes stromal cell composition. These two cells populations were stimulated with inflammatory cytokines such as IFN-y or TNF-alfa + IL-1beta for 24 and 48 hours and evaluated for gene and protein expression. In homeostatic conditions, genes involved in the induction and control of proliferation were differentially expressed by FRCs and DNCs, this data has been confirmed in vitro, since the FRCs showed higher proliferative potential compared to DNCs. IFN-y stimulation induced increase DNCs and FRCs expression for cytokines, chemokines, histocompatibility molecules and molecules involved in regulating the immune response.In response to TNF-alfa + IL-1beta stimulation, we observed common molecules expressed by the IFN-? stimulation, however, we also observed expression of cytokines, chemokines and histocompatibility molecules specifically related to this signal in both cells populations. Together, our data suggest that DNCs and FRCs differ in the response profile according to inflammatory stimuli to which they are exposed, increasing the differential expression of molecules involved in the positive and negative regulation of immune response