Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2017-12-18T18:47:09Z No. of bitstreams: 2 Caroline_Covatti2016.pdf: 1272706 bytes, checksum: 2b328da4ea5385205d047b1e31662783 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T18:47:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Caroline_Covatti2016.pdf: 1272706 bytes, checksum: 2b328da4ea5385205d047b1e31662783 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-06-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cerebral palsy (CP) is characterized by movement and postural disorders that limit the individual‘s activity, and is attributed to the occurrence of non-progressive disturbances during the development of the fetal or infant brain. Animal models have been used in an attempt to reproduce the lesions and characteristics of CP. However, there is still no intervention capable of reproducing the characteristics of this pathology in the experimental area. Thus, the objective of this study was to verify the effects of a CP model that combines prenatal exposure to lipopolysaccharide (LPS), perinatal anoxia and sensorimotor restriction on the muscle fibers and neuromuscular junctions (NMJs) of the extensor digitorum longus (EDL) of rats. Male Wistar pups were separated into two groups: Control group (CTL - n = 10) - pups of mothers injected with saline during pregnancy and Cerebral Palsy Group (CP - n = 10) - pups of mothers injected with LPS during pregnancy. submitted to perinatal anoxia and sensorimotor restriction. On the day of birth, the offspring of the CP group were placed in a closed chamber with nitrogen flow (100%) to perform the perinatal anoxia. Additionally, from the first postnatal day (P1) to P30, those pups were also submitted to sensorimotor restriction by immobilizing the hind limbs. Motor performance was assessed in both groups during open field tests on P29 and P45. After euthanasia, EDL muscle samples were processed for morphological and morphometric analysis of the muscle fibers and NMJs. Regarding motor performance, the time of locomotion and the number of rearings were significantly lower in the CP group compared to CTL group at 29 days of age (p <0.001 and p <0.01, respectively). At 45 days of age, the time of locomotion of the animals in the CP group was also lower in relation to the CTL group (p <0.05). The total body weight, weight and length of the EDL muscle were 18%, 17% and 15% lower, respectively, in the CP group in relation to the CTL. The animals in the CP group presented hypertrophy of the type IIB fibers. However, regarding the other fibers there was no difference between groups. There were no differences between groups in the number of muscle fiber types I, IIA and IIB. The nuclei/fiber ratio, and the capillary/fiber ratio, were significantly higher in the CP group (21% and 18%, respectively). Regarding the intrafusal fibers, the animals from the CP group presented atrophy in 26% of the cross-sectional area and a reduction of 26% in the muscle spindle area. Intramuscular collagen increased by 34% in the animals from the CP group. The ultrastructural study of the EDL muscle in the CP group showed myofibrillar disruption and Z-line disorganization and dissolution. The NMJs in the CP group presented an increase of 22% in area and 11% in diameter when compared to the CTL group. In conclusion, the CP animal model that uses injections of LPS, perinatal anoxia and sensorimotor restraint produces motor deficits that are also observed in children with CP. / A paralisia cerebral (PC) caracteriza-se por desordens do movimento e da postura, por isso causam limitação na atividade do indivíduo, as quais são atribuídas por distúrbios não progressivos que ocorreram no desenvolvimento cerebral fetal ou infantil. Modelos animais têm sido utilizados na tentativa de reproduzir as lesões e características da PC. Porém, ainda não existe uma intervenção capaz de reproduzir as características desta patologia no âmbito experimental. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos de um modelo de PC que associa exposição pré-natal ao lipopolissacarídeo (LPS), anóxia perinatal e restrição sensório-motora sobre as fibras musculares e junções neuromusculares (JNMs) do músculo extensor longo dos dedos (EDL) de ratos. Filhotes Wistar machos foram separados em dois grupos: Grupo controle (CTL - n = 10) - filhotes de mães injetadas com solução salina durante a gestação e Grupo Paralisia Cerebral (PC - n = 10) - filhotes de mães injetadas com LPS durante a gestação, submetidos à anóxia perinatal e à restrição sensório-motora. No dia do nascimento, os filhotes do grupo PC foram colocados em câmara fechada com fluxo de nitrogênio (100%) para a realização da anóxia perinatal. A partir do primeiro dia pós-natal (P1) até o P30, esses filhotes também foram submetidos à restrição sensório-motora por imobilização das patas pélvicas. Avaliações do desempenho motor foram realizadas em um campo aberto no P29 e P45 para os dois grupos. Após a eutanásia, amostras do músculo EDL foram processadas para análise morfológica e morfométrica das fibras musculares e JNMs. Quanto à performance motora, o tempo de locomoção e o número de erguidas (rearing) foi significativamente menor no grupo PC em comparação ao CTL aos 29 dias de idade (p< 0,001 e p< 0,01, respectivamente). Aos 45 dias de idade, o tempo de locomoção dos animais do grupo PC também foi menor em relação ao grupo CTL (p < 0,05). O peso corporal, peso e comprimento do músculo EDL foram 18%, 17% e 15% menores, respectivamente, no grupo PC em relação ao CTL. Os animais do grupo PC apresentaram hipertrofia das fibras do tipo IIB, todavia, não houve diferença entre os grupos nas demais fibras. Não teve diferenças entre os grupos estudados quanto ao número de fibras musculares dos tipos I, IIA e IIB. A relação núcleo/fibra, e a relação capilar/fibra, foi significativamente maior no grupo PC (21% e 18%, respectivamente). Quanto às fibras intrafusais, os animais do grupo PC apresentaram atrofia de 26% na área de secção transversal e redução de 26% na área do fuso muscular. O colágeno intramuscular aumentou 34% nos animais do grupo PC. O estudo ultraestrutural do músculo EDL do grupo PC mostrou desarranjo miofibrilar, desorganização e dissolução da linha Z. As JNMs do grupo PC apresentaram aumento de 22% na área e de 11% no diâmetro maior quando comparado ao grupo CTL. Em conclusão, o modelo animal de PC que utiliza injeções de LPS, anóxia perinatal e restrição sensório-motora produz déficits motores que também são observados em crianças com PC.

As vacinas pertussis celulares apresentam certa reatogenicidade e as acelulares, menos reatogênicas, têm seu uso restrito, devido a seu alto custo. O Instituto Butantan desenvolveu uma vacina pertussis celular (Plow), com baixo teor de lipopolissacarídeo e outra acelular (Pa), por metodologia simples e econômica. Essas preparações, combinadas aos toxóides diftérico e tetânico (DTPlow e DTPa, respectivamente), foram comparadas à DTP tradicional, com diferentes adjuvantes: vitamina A, surfactante pulmonar, BCG, monofosforil lipídeo A (MPL) e Al(OH)3. A resposta humoral em camundongos foi semelhante para as diferentes formulações e independente do adjuvante utilizado. As vacinas induziram níveis equilibrados de IgG1/IgG2a anti-pertussis e a DTPlow mostrou-se menos reatogênica, induzindo níveis significativamente menores de IL-6 sérica. A adição de MPL sugeriu tendência de proteção contra a colonização nasotraqueal no grupo imunizado com DTPa e levou à indução de IFN-g nos grupos imunizados com DTP e DTPa, sugerindo possível atividade imunomodulatória para Th1. / The whole cell pertussis vaccines present some reactogenicity and the acellular, less reactogenic, have prohibitive use due to its high cost. Instituto Butantan developed a less reactogenic whole cell pertussis vaccine (Plow), with low lipopolysaccharide content and an acellular vaccine (Pa), by simple and economic methodology. These preparations, combined to diphtheria and tetanus toxoids (DTPlow and DTPa, respectively), were compared with the traditional DTP, with different adjuvants: vitamin A, pulmonary surfactant, BCG, monophosphoryl lipid A (MPL) and Al(OH)3. The humoral immune response induced in mice by the different vaccine formulations, was similar and independent of the adjuvant used. The vaccines induced balanced levels of IgG1/IgG2a anti-pertussis and DTPlow showed to be less rectogenic, inducing lower levels of serum IL-6. The use of MPL suggested to induce higher protection against nasotracheal colonization in DTPa group and induced IFN-g in the DTP and DTPa groups, suggesting a possible immunemodulatory activity for Th1.

Lesão pulmonar aguda é caracterizada por infiltrado de neutrófilos no pulmão, edema, lesão alveolar difusa e alteração da reatividade das vias aéreas. Evidências clínicas e experimentais sugerem que os hormônios sexuais femininos (HSF) modulam a inflamação. Nesse estudo camundongos fêmeas C57BL/6 foram ovariectomizados (OVx) ou falsamente operados, com ovários mantidos (Sham). Após 7 dias foi realizada instilação nasal de LPS (ou salina como controle). Após 4 ou 24 h os experimentos foram conduzidos. Os resultados obtidos 24 h após o LPS mostram aumento de neutrófilos, IL-1b e de óxido nítrico (NO) e redução de IL-10 no pulmão dos animais OVx em relação aos Sham. Também foi observada redução da reatividade traqueal e da resistência e elastância pulmonar dos animais OVx. O tratamento dos animais OVx com 17b-estradiol ou progesterona antes do LPS reverteram esses efeitos. Os dados mostram que 4 h após o LPS a OVx não altera a inflamação e a reatividade das vias aéreas. Pode-se concluir nesse modelo experimental que os HSF exerçam papel de proteção ao organismo. / Acute lung injury is characterized by lung neutrophil infiltration, edema, diffuse alveolar damage and changes in airway reactivity. Clinical and experimental evidences suggest that the female sex hormones (FSH) modulate the inflammation. In this study, female mice C57BL/6 were ovariectomized (OVx) or not (Sham). After 7 days, LPS or saline (as control) were intranasally instillated. After 4 or 24 h the experiments were carried. We observed, 24 h after LPS, increase in neutrophil, IL-1b and nitric oxide (NO) and reduction of IL-10 in the lungs of OVx compared to Sham. We also noted reduced tracheal reactivity and lung resistance and elastance in OVx animals. Treatment of OVx with 17b-estradiol or progesterone before LPS reversed these effects. The data show that 4 h after LPS, the OVx does not promote inflammation and airway reactivity. We can conclude that in our experimental model, FSH exert protective role.

O comportamento maternal (CM) em mamíferos tem características específicas. O período logo após o parto é particularmente sensível a alterações fisiológicas que podem modular a expressão deste comportamento importante. Mudanças comportamentais observadas em animais doentes são consideradas comportamento doentio (CD). A exposição ao LPS, uma endotoxina derivada da parede de uma bactéria gran negativa, durante a gravidez pode causar doenças mentais. A fim de investigar, uma possível relação entre CM e CD, os animais foram tratados com LPS. Para o estudo do CM e agressivo, quarenta ratas foram divididos em quatro grupos, dois controles e dois grupos experimentais, com dez animais cada. O grupo experimental recebeu 100&micro;g/kg de LPS por via i.p, e grupo controle o veículo de endotoxina, após quarenta e oito horas de administração de LPS, ou seja, no quinto dia de lactação, as observações começaram. Para escolha deste dia, ratas virgens e ratas lactantes foram divididas em quatro grupos, dois controles e dois experimentais, com dez fêmeas cada. O peso corporal, consumo de água, ração, e a temperatura corporal foram medidas para cento e vinte horas. As fêmeas do grupo controle foram observadas da mesma forma, mas foram tratados com o veículo do LPS. Observamos que: 1) Em ratas virgens e lactantes o tratamento com LPS modificou a temperatura e peso corporal, consumo de água e ração; 2) No período de lactação houve redução da latência para busca do primeiro filhote. Na prole verificou-se que: 3) Houve alteração no padrão de vocalização dos filhotes cujas mães foram expostas ao LPS no terceiro dia de lactação; 4) houve alteração no burst e fagocitose de enutrofilos no vigésimo primeiro dia de lactação após desafio com a endotoxina indicativo de maior resposta ao LPS. Concluiu-se que a exposição de ratos ao LPS facilita o comportamento maternal, mas promove alterações na sua prole relacionadas à interação entre mãe-filhote e aumento na resposta a um desafio imunológico. / Maternal behavior (MB) in mammals has specific characteristics. The time period just after parturition is particularly sensitive to physiological changes that can modulate the expression of this important behavior. Behavioral changes observed in sick animals, are considered as sick behavior (SB). Exposure to LPS, an endotoxin derived from the wall of a gran negative bacteria, during pregnancy might cause mental diseases. In order to investigate, a possible relationship between MB and SB, animals were treated with LPS. For the study of MB and maternal aggressive behavior, 40 rats were divided in 4 groups, 2 control and 2 experimental groups. The experimental group received 100&micro;g/kg LPS by ip, and control group the vehicle of endotoxin, after 48 hours of LPS administration the observations of SB began. For choice these days, 20 virgin and 20 lactating rats were divided in 4 groups, 2 control and 2 experimental. They received ip 100&micro;g/kg. Body weight, water and feed consumption, and body temperature were measured for 120h. Control females were observed in the same way, but they were treated with vehicle of LPS. The results showed that: 1) In 48 hours after the LPS treatment, virgin and lactating rats showed increased body temperature, loss of body weight, increased water consumption and decreased food consumption, 2) In 48 hours after the treatment with LPS, lactating rats showed reduced latency to retrieve the first pup to the nest. In the offspring of mothers treated with LPS it was found that: 3) Pups form mothers treated with LPS on the 5th day of lactation showed changes in the vocalization pattern; 4) Those pups showed changes in oxidative burst and phagocytosis on 21th day of lactation. It is concluded that exposure of rats to LPS promoted changes in the in the interaction between mother and pups.

A administração do componente bacteriano lipopolissacarídeo (LPS) durante o início de vida é um modelo animal comumente utilizado de infecção precoce. Os efeitos desse tratamento sobre o comportamento exploratório têm sido geralmente observados em ratos adultos. Contudo, sabe-se pouco sobre esses efeitos em etapas importantes do desenvolvimento como a adolescência. O presente trabalho analisou o efeito da inoculação repetida de LPS em ratos recém-nascidos, sobre o comportamento exploratório. No primeiro experimento, filhotes machos de ratos Wistar foram distribuídos em três grupos (N = 12) e receberam injeções intraperitoneais de solução veículo (PBS) ou de LPS (E. coli; 0,05 mg/kg), ou foram mantidos sem tratamento, nos dias 3 e 5 de vida. Na adolescência, entre os dias 40 e 46 de vida, os animais foram expostos aos seguintes testes comportamentais: labirinto em cruz elevado, campo aberto, reconhecimento de objeto novo, tábua de buracos, gradiente de aversão elevado e nado forçado. Os resultados mostraram que ratos adolescentes expostos a esse paradigma de inoculação exibiram um perfil de comportamento impulsivo caracterizado pelo aumento de locomoção, exploração de áreas abertas e baixa neofobia, quando comparados com os animais dos grupos controle. Esses animais exibiram também um estilo ativo de lidar com o estresse na primeira sessão do nado forçado. Semelhante ao procedimento utilizado no primeiro experimento, um segundo experimento foi realizado para determinar se uma inoculação diária mais prolongada de LPS (dias 2 a 7 de vida) poderia alterar o comportamento exploratório na adolescência. Os resultados mostraram que uma inoculação intensa alterou o estilo de enfrentamento do estresse em ratos adolescentes. Durante a primeira sessão do nado forçado, os ratos tratados com LPS escalaram durante menos tempo e permaneceram mais tempo na postura imóvel, quando comparados com animais dos grupos controle. No conjunto, os resultados dos dois experimentos mostraram que manipulações repetidas no início de vida podem aumentar a atividade exploratória e que a inoculação precoce de LPS resulta em aumento do número de levantadas. Discute-se o papel das citocinas no início de vida sobre o desenvolvimento de componentes relacionados à resposta de estresse, bem como a importância da experiência precoce com organismos infecciosos na elaboração de respostas adaptativas à novidade na adolescência. / The administration of the bacterial component lipopolysaccharide (LPS) during early life is a commonly used animal model of early infection. The effects of this treatment on exploratory behavior have generally been observed in adult rats. However, little is known about these effects on important stages of development such as adolescence. The present study analyzed the effect of repeated inoculation of LPS in newborn rats on the exploratory behavior. In the first experiment, male Wistar rat pups were divided into three groups (N = 12) and received intraperitoneal injections of either vehicle solution (PBS) or LPS (E. coli; 0.05 mg/kg) or were left undisturbed at 3 and 5 days of age. In adolescence, between 40 and 46 days of age, the animals were exposed to the following behavioral tests: elevated plus-maze, open-field, novel-object exploration task, hole-board, elevated aversion gradient and the forced swim test. The results showed that adolescent rats exposed to this paradigm of early inoculation exhibited a profile of impulsive behavior characterized by increased locomotion, high exploration of open areas and low neophobia when compared with control group animals. These animals also exhibited an active style of coping with stress in the first session of the forced swim test. Similar to the procedure used in the first experiment, a second experiment was conducted to determine whether prolonged daily inoculation of LPS (2 to 7 days of age) could alter the exploratory behavior during adolescence. The results showed that prolonged inoculation altered the stress coping style in adolescent rats. During the first session of the forced swim, rats treated with LPS spent less time climbing and spent more time in immobile posture, as compared with the control group animals. As a whole, the results of both experiments showed that repeated manipulations in early life may increase exploratory activity and early LPS inoculation leads to increased number of rearings. The role of cytokines in early life on the development of components related to stress response is discussed together with the importance of early experiences with infectious organisms in the development of adaptive responses to novelty during adolescence.

Tendo em vista a importância fisiológica e comportamental da relação entre ovelha e cordeiro, este trabalho teve por objetivo confirmar o perfil de alterações fisiológicas do lipopolissacarídeo (LPS) em ovelhas no terço final da gestação e se mães estressadas durante a gestação apresentam maior disponibilidade e estabilidade quanto aos cuidados maternos com seus filhos, intencionando minimizar prejuízos ao longo da vida como compensação das adversidades sofridas durante a gestação, além de analisar a influencia deste estresse na gestação sobre os parâmetros reprodutivos dos cordeiros. Foram utilizadas 39 ovelhas prenhes, mestiças da raça Santa Inês, nulíparas, com idade média de 12 meses e média de 45 kg de peso vivo (PV), dando origem aos 17 cordeiros machos que também fizeram parte do experimento. As ovelhas gestantes foram divididas em dois tratamentos, TF e TC, devido à indução ou não de LPS no final da gestação. Foram avaliadas alterações fisiológicas e a relação materna destes animais até a idade da desmama dos cordeiros, assim como análises do desenvolvimento reprodutivo destes animais até completarem um ano de idade. Os dados comportamentais foram analisados pela teoria de modelos lineares generalizados proposta por Nelder e Wenderburn (1972), as medidas fisiológicas e os parâmetros reprodutivos, após análise de variância foram comparadas pelo teste F e t de stundent ao nível de 5% de significância, utilizando-se o procedimento GLIMMIX do software SAS para todas as análises. Houve diferenças em relação ao cortisol sanguíneo e a temperatura retal (P&lt;0,05) devido à ação do LPS durante a gestação. Cordeiros desafiados pelo LPS durante a gestação apresentaram maiores dificuldades de aprendizado e memória aos 30 dias de vida durante um teste cognitivo em um labirinto (P&lt;0,05). Sendo encontrados também diferentes perfis (P&lt;0,05), entre os tratamentos, no que diz respeito aos cuidados maternos medidos segundo a interação comportamental entre ovelha e cordeiro, do momento do parto até a idade da desmama destes animais. Os índices de mamada e o início do consumo de alimentos sólidos pelos cordeiros apresentaram-se como uma boa prática de observação para se mensurar a capacidade de independência dos cordeiros. Para os dados reprodutivos houve efeito de tempo, em relação à idade da puberdade fisiológica ao início da maturidade sexual dos animais, para a maioria das variáveis analisadas (P&lt;0,05), havendo efeito também de tratamento para a qualidade espermática dos cordeiros neste mesmo período (P&lt;0,01). O LPS provoca alterações fisiológicas em ovelhas no final da gestação, influencia nos cuidados maternos e na capacidade cognitiva dos cordeiros, assim como altera a qualidade espermáticas de machos do durante a puberdade fisiológica até o início da maturidade sexual. / Considering the physiological and behavioral importance of the relationship between sheep and lamb, this study aimed to confirm the profile of LPS physiological changes in sheep in the final third of gestation, and if mothers who are stressed during pregnancy present greater availability and stability regarding care maternal with their children, intending to minimize losses during the life as compensation of the adversities suffered during the gestation, besides analyzing the influence of this stress in the gestation on the reproductive parameters of the lambs. Thirty - nine pregnant ewes of Santa Inês breed, nulliparous, with a mean age of 12 months and an average of 45 kg of live weight were used, giving birth to the 17 male lambs that were also part of the experiment. Pregnant ewes were divided into two treatments, FT and CT, due to the induction or not of LPS at the end of gestation. Physiological and physiological values were evaluated in relation to the animals up to the weaned age of the lambs, as well as the responses to the reproductive development of the animals until one year of age. The behavioral data were analyzed by the theory of generalized linear models proposed by Nelder and Wenderburn (1972), the physiological measures and the reproductive parameters, after analysis of variance were compared by the test F et de stundent at the 5% level of significance, the SAS software GLIMMIX procedure is used for all analyzes. There were differences in blood cortisol and rectal temperature (P&lt;0.05) due to the action of LPS during pregnancy. Lambs challenged by LPS during gestation presented greater learning difficulties and memory at 30 days of life during a cognitive test in a labyrinth (P&lt;0.05). Different profiles (P&lt;0.05) were also found among the treatments, in relation to the maternal care measured according to the behavioral interaction between sheep and lamb, from the moment of delivery until the weaning age of these animals. Feeding rates and the onset of solid food intake by lambs were a good observational practice in order to measure lambs\' independence. For the reproductive data, there was a time effect, in relation to the age of physiological puberty at the beginning of the sexual maturity of the animals, for most of the analyzed variables (P&lt;0.05), also having an effect on the sperm quality of the lambs in this same period (P&lt;0.01). LPS causes physiological changes in sheep at the end of gestation, influences maternal care and cognitive ability of lambs, as well as alter the sperm quality of males during physiological puberty until the onset of sexual maturity.

Em estudo anterior, observamos que o Met-RANTES, antagonista de receptores CCR1 e CCR5 para quimiocinas, injetado pela via endovenosa (i.v.) reduziu a resposta febril induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, demonstrando o envolvimento da quimiocina RANTES (Regulada sob ativação, expressa e secretada por células T normais) nesta resposta. Além disso, a injeção intrahipotalâmica (i.h.) da RANTES dose-dependentemente aumentou a temperatura corporal de ratos, o qual foi caracterizado como febre, pois foi acompanhada de redução da temperatura da cauda, uma resposta termorregulatória para retenção de calor. Observamos também, que a RANTES aumenta a concentração de prostaglandinas no fluido cerebroespinhal (CSF) e que a febre por ela induzida é sensível aos inibidores não-seletivos para as ciclooxigenases e seletivo para COX-2 (Machado et al., 2007). No presente estudo, aprofundamos a investigação sobre os mediadores, incluindo as prostaglandinas, envolvidos na resposta febril induzida pela RANTES. Verificamos que o paracetamol reduziu, enquanto o diclofenaco de sódio aboliu a resposta febril induzida pela RANTES. Ainda, a injeção i.h. da RANTES promoveu significativa expressão do RNAm para COX-2 no hipotálamo, confirmando ser a COX-2 a enzima responsável pela síntese de prostaglandinas envolvidas no efeito pirogênico desta quimiocina. Através da administração de corante in situ e de cortes histológicos, pode-se averiguar o trajeto da cânula bem como a profundidade alcançada pela agulha durante a injeção na área pré-óptica hipotalâmica anterior (AH/POA). Padronizamos a dose do Met-RANTES (i.h.) que não seria capaz de alterar a temperatura retal dos animais. Posteriormente, avaliou-se o efeito de diferentes doses do Met-RANTES, administrado via intrahipotalâmica, na resposta febril induzida pelo LPS ou pela RANTES. Entretanto, nas doses administradas o pré-tratamento com o antagonista não foi capaz de reduzir a febre induzida por ambos os estímulos. Contudo, o Met-RANTES (i.v.) reduziu a febre induzida pelo TNF-alfa (i.h.), reproduzindo resultados anteriores. O pré-tratamento com Met-RANTES (i.v.) não modificou a febre induzida pela injeção central de interleucina (IL)-6, fator liberador de corticotropina (CRF) e bradicinina (BK). Adicionalmente, a injeção de LPS (i.v.) ou TNF-alfa (i.h.) elevou a concentração da RANTES no tecido hipotalâmico. Antalarmina (antagonista de receptores CRF1) e alfa-helical CRF9-41 (antagonista de receptores CRF1 e CRF2) que reduziram a febre induzida pelo CRF, não alteraram a febre induzida pela administração i.h. da RANTES. O antagonista de receptores B1 (DALBK) que reduziu a segunda fase da resposta febril induzida pela BK, não foi capaz de modificar a febre induzida pela RANTES. Da mesma forma, o antagonista de receptores B2 (Hoe-140) que reduziu a resposta febril induzida pela BK durante todo o período de experimentação, não modificou a febre promovida pela RANTES. Por outro lado, verificamos que o anticorpo anti-IL-6 administrado i.h. reduziu a febre induzida pela IL-6 e pela RANTES. Ainda, a injeção de LPS (i.v.) ou RANTES (i.h.) elevou a concentração de IL-6 no CSF, mas não de IL-1 e TNF-. A RANTES promoveu ativação do fator nuclear-kB (NF-kB) e aumentou a expressão do RNAm para as citocinas IL-1beta, TNF-alfa e IL-6 no hipotálamo dos animais. O pré-tratamento com Met-RANTES reduziu, na 2,5 e 6 h, a neutrofilia induzida pelo LPS. Em síntese, nossos resultados demonstram que durante a resposta febril induzida pelo LPS, este induz a síntese de TNF-alfa o qual promove a síntese da quimiocina RANTES que, ativando os receptores CCR1 e CCR5 promove a transmigração do NF-kB do citoplasma para o núcleo e a subseqüente síntese de IL-6 e de COX-2, esta última, a responsável pela síntese de prostaglandina E2 (PGE2), um dos mediadores finais da resposta febril induzida pelo LPS. Além disso, a RANTES parece ser um mediador da resposta de fase aguda, uma vez que, promove dois sinais importantes desta resposta, febre e neutrofilia. / We showed before that Met-RANTES, CCR1 and CCR5 receptor antagonist, intravenously injected (i.v.) reduced fever induced by lipopolysaccharide (LPS, E. coli), demonstrating the involvement of RANTES (Regulated on activation, normal T cells expressed and secreted) in this response. Also, intrahypothalamic (i.h.) injection of RANTES dose-dependently increased body temperature of rats, this increase was characterized as fever, because it was accompanied of a reduction in the tail skin temperature, a thermoregulatory response for heat retention. We also verified that RANTES increased the concentration of prostaglandin (PG)E2 in the cerebrospinal fluid (CSF), which was sensible to non-selective and selective blockers to cyclooxygenase (COX)-2 (Machado et al., 2007). In the present study, it was investigated which others mediators, including prostaglandins, are involved in the RANTES-induced fever. The effect of paracetamol and sodium diclofenac on fever induced by RANTES was also investigated. Paracetamol reduced, while sodium diclofenac abolished the RANTES-induced fever. The intrahypothalamic (i.h.) RANTES injection promoted a significant COX-2 mRNA expression in the hypothalamus, confirming the role of the COX-2 enzyme in the synthesis of prostaglandin involved in the pyrogenic effect of this chemokine. Through administration of dye in situ and histological analyses, we confirmed that the injection in the preoptic area of the anterior hypothalamus (AH/POA) was correct. Subsequently, we evaluated the effect of different doses of Met-RANTES (i.h.) in the fever induced by both LPS and RANTES. Centrally injected, Met-RANTES did not modify the fever induced by LPS or RANTES. On the other hand, Met-RANTES (i.v.) reduced TNF-alpha-induced fever, but did not modify the fever induced by interleukin (IL)-6, corticotrophin releasing factor (CRF) and bradykinin (BK). Additionally, the injection of LPS (i.v.) or TNF-alpha (i.h.) increased RANTES concentration in the hypothalamus. Antalarmin (a CRF receptor 1 antagonist) and alpha-helical CRF9-41 (CRF 1 and 2 receptor antagonist) that reduced CRF-induced fever did not modify the fever induced by RANTES (i.h.). DALBK (bradykinin B1 receptor antagonist) that reduced the second phase of BK-induced fever did not modify RANTES-induced fever. In the same way, Hoe-140 (bradykinin B2 receptor antagonist) that reduced the fever induced by BK during the whole period of observation, did not modify RANTES-induced fever. On the other hand, we verified that anti-rat IL-6 antibody (i.h.) reduced the fever induced by both IL-6 and RANTES. In addition, the administration of LPS (i.v.) or RANTES (i.h.) increased the CSF IL-6 concentration, but not of IL-1 and TNF-. RANTES promoted nuclear factor-kB (NF-kB) activation and increased IL-1beta, TNF-alpha and IL-6 mRNA expression in the hypothalamus. Pretreatment of the animals with Met-RANTES reduced the LPS-induced neutrophilia. In synthesis, our results suggest that in the fever induced by LPS, RANTES induces TNF- synthesis, which promotes the synthesis of RANTES that, activating CCR1/CCR5 receptors, promotes NF-kB transmigration of cytoplasm to the nucleus and subsequent synthesis of IL-6 and COX-2. The latter, in turn, is responsible by (PGE2) synthesis, one of the final mediators of the febrile response induced by LPS. Moreover, RANTES seem to be a mediator of the acute phase response since it promoted two important signs of this response, fever and neutrophilia.

A administração do componente bacteriano lipopolissacarídeo (LPS) durante o início de vida é um modelo animal comumente utilizado de infecção precoce. Os efeitos desse tratamento sobre o comportamento exploratório têm sido geralmente observados em ratos adultos. Contudo, sabe-se pouco sobre esses efeitos em etapas importantes do desenvolvimento como a adolescência. O presente trabalho analisou o efeito da inoculação repetida de LPS em ratos recém-nascidos, sobre o comportamento exploratório. No primeiro experimento, filhotes machos de ratos Wistar foram distribuídos em três grupos (N = 12) e receberam injeções intraperitoneais de solução veículo (PBS) ou de LPS (E. coli; 0,05 mg/kg), ou foram mantidos sem tratamento, nos dias 3 e 5 de vida. Na adolescência, entre os dias 40 e 46 de vida, os animais foram expostos aos seguintes testes comportamentais: labirinto em cruz elevado, campo aberto, reconhecimento de objeto novo, tábua de buracos, gradiente de aversão elevado e nado forçado. Os resultados mostraram que ratos adolescentes expostos a esse paradigma de inoculação exibiram um perfil de comportamento impulsivo caracterizado pelo aumento de locomoção, exploração de áreas abertas e baixa neofobia, quando comparados com os animais dos grupos controle. Esses animais exibiram também um estilo ativo de lidar com o estresse na primeira sessão do nado forçado. Semelhante ao procedimento utilizado no primeiro experimento, um segundo experimento foi realizado para determinar se uma inoculação diária mais prolongada de LPS (dias 2 a 7 de vida) poderia alterar o comportamento exploratório na adolescência. Os resultados mostraram que uma inoculação intensa alterou o estilo de enfrentamento do estresse em ratos adolescentes. Durante a primeira sessão do nado forçado, os ratos tratados com LPS escalaram durante menos tempo e permaneceram mais tempo na postura imóvel, quando comparados com animais dos grupos controle. No conjunto, os resultados dos dois experimentos mostraram que manipulações repetidas no início de vida podem aumentar a atividade exploratória e que a inoculação precoce de LPS resulta em aumento do número de levantadas. Discute-se o papel das citocinas no início de vida sobre o desenvolvimento de componentes relacionados à resposta de estresse, bem como a importância da experiência precoce com organismos infecciosos na elaboração de respostas adaptativas à novidade na adolescência. / The administration of the bacterial component lipopolysaccharide (LPS) during early life is a commonly used animal model of early infection. The effects of this treatment on exploratory behavior have generally been observed in adult rats. However, little is known about these effects on important stages of development such as adolescence. The present study analyzed the effect of repeated inoculation of LPS in newborn rats on the exploratory behavior. In the first experiment, male Wistar rat pups were divided into three groups (N = 12) and received intraperitoneal injections of either vehicle solution (PBS) or LPS (E. coli; 0.05 mg/kg) or were left undisturbed at 3 and 5 days of age. In adolescence, between 40 and 46 days of age, the animals were exposed to the following behavioral tests: elevated plus-maze, open-field, novel-object exploration task, hole-board, elevated aversion gradient and the forced swim test. The results showed that adolescent rats exposed to this paradigm of early inoculation exhibited a profile of impulsive behavior characterized by increased locomotion, high exploration of open areas and low neophobia when compared with control group animals. These animals also exhibited an active style of coping with stress in the first session of the forced swim test. Similar to the procedure used in the first experiment, a second experiment was conducted to determine whether prolonged daily inoculation of LPS (2 to 7 days of age) could alter the exploratory behavior during adolescence. The results showed that prolonged inoculation altered the stress coping style in adolescent rats. During the first session of the forced swim, rats treated with LPS spent less time climbing and spent more time in immobile posture, as compared with the control group animals. As a whole, the results of both experiments showed that repeated manipulations in early life may increase exploratory activity and early LPS inoculation leads to increased number of rearings. The role of cytokines in early life on the development of components related to stress response is discussed together with the importance of early experiences with infectious organisms in the development of adaptive responses to novelty during adolescence.

O fator de transcrição nuclear kappa B (NFKB), central na resposta inflamatória, é constitutivamente expresso em glândulas pineais de rato. A inibição da translocação nuclear deste fator em pineais de rato por corticosterona potencia, enquanto que a inibição pela citocina fator de necrose tumoral (TNF) inibe a síntese de melatonina por inibição da transcrição da Aa-nat. Esta redução da produção noturna de melatonina está implicada em favorecer a montagem da resposta inflamatória. Embora dados da literatura sugerirem redução da produção de melatonina durante processos infecciosos, não há evidências diretas da habilidade da glândula pineal em reconhecer o lipopolissacarídeo (LPS), a endotoxina da membrana de bactérias gram-negativas. Esta dissertação investigou se a glândula pineal de ratos expressa receptores para o reconhecimento do LPS e estabeleceu possíveis mecanismos de ação desta endotoxina na glândula pineal de ratos. Nossos resultados demonstram que a glândula pineal expressa de maneira constitutiva os receptores CD14 e o TLR4. LPS induz a translocação nuclear dos dímeros p50/p50 e p50/RelA e a síntese de TNF em glândulas cultivadas. A máxima produção de TNF no meio de cultura é coincidente com a máxima expressão do receptor TNFR1 em pinealócitos. Além disso, LPS inibe a síntese de N-acetilserotonina e melatonina. Em conclusão, neste estudo, demonstramos que a pineal é alvo para o componente de bactérias gram-negativas LPS, reforçando a proposta de que esta glândula reconhece e gera respostas a moléculas que sinalizam a montagem da resposta inflamatória. / Nuclear factor-kappa B (NFKB), a pivotal player in inflammatory responses, is constitutively expressed in the pineal gland. Corticosterone inhibits pineal NFKB leading to an enhancement of melatonin production, while tumor necrosis factor (TNF) leads to inhibition of Aa-nat transcription and the production of N-acetylserotonin (NAS) in cultured glands. The reduction of nocturnal melatonin surge favors the mounting of the inflammatory response. Despite these data, there is no clear evidence of the ability of the pineal gland to recognize molecules that signal infection. This study investigated whether the rat pineal gland expresses receptors for lipopolysaccharide (LPS), the endotoxin from the membranes of gram-negative bacteria, and to establish the mechanism of action of LPS. Here we show that pineal glands possesses both CD14 and toll-like receptor 4 (TLR4), membrane proteins that bind LPS and trigger the NFKB pathway. LPS induced the nuclear translocation of p50/p50 and p50/RELA dimers and the synthesis of TNF. The maximal expression of TNF in cultured glands coincides with an increase in the expression of TNF receptor 1 (TNFR1) in isolated pinealocytes. In addition, LPS inhibited the synthesis of N-acetylserotonin and melatonin. Therefore, the pineal gland transduces gram-negative endotoxin stimulation by producing TNF and inhibiting melatonin synthesis. Here we provide evidence to reinforce the idea of an immune-pineal axis, showing that the pineal gland is a constitutive player in the innate immune response.

A própolis é uma substância resinosa, cujas atividades antibacteriana, antiinflamatória, antiviral, fungicida, imuno estimulante, cicatrizante e de anestésico local tem sido valorizadas no uso clínico. O lipopolissacarídeo (LPS) é reconhecidamente uma endotoxina e pode induzir processos inflamatórios. Os objetivos deste trabalho foram: a) analisar in vitro as seguintes propriedades do extrato de própolis verde: 1) perfil físico químico 2) Concentração Inibitória Mínima (CIM) frente à endotoxina da bactéria gram negativa Escherichia coli; e 3) sua atividade imunorregulatória sobre leucócitos de baço de ratos; b) analisar &Prime;in vivo&Prime; a ação do Extrato Etanólico de Própolis (EEP) 10% e 90% e do Extrato de Própolis Puro (EPP), em alvéolos dentais contaminados ou não com lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano. Para o estudo in vivo 35 ratos foram submetidos às exodontias dos primeiros molares superiores direito e esquerdo, os quais, imediatamente tiveram o alvéolo dental direito contaminado com 0,1µL de lipopolissacarídeo (LPS) (100µg/kg) e o esquerdo sem tal contaminação. Os grupos com (n=7) para cada tratamento, após 2 semanas: GI- Controle Negativo (CN) - sem tratamento; GII- Tratados com Extrato de Própolis puro (EPP) GIII- Tratados com pasta de própolis a 90% (P90); GIV- Tratados com pasta de própolis a 10% (P10); e, GV- Tratado com veículo das pastas (SB) foram analisados. Os alvéolos foram removidos, desmineralizados, processados pela técnica histológica de rotina, submetidos a secções sistematizadas a 6 µm de espessura e corados em H.E. O volume de osso formado, foi avaliado por contagem de pontos, usando um Sistema Teste sobreposto as imagens capturadas com auxílio de uma câmera acoplada a um microscópio. Observada a normalidade dos dados, procedeu-se o teste ANOVA fatorial e Tukey-Kramer test (p<0,05). In vitro determinou-se a propriedade da própolis, sua CIM e atividade imunorregulatória. In vivo os alvéolos dentais contaminados com lipopolissacarídeo bacteriano e tratados com a própolis verde apresentou maior área de osso neoformado, quando comparado aos demais grupos experimentais. O alvéolo não contaminado e tratado com própolis pura mostrou maior área de fibras colágenas. / Propolis is a resinous substance, whose antibacterial, antiinflammatory, antiviral, antifungal, immune stimulant, and local anesthetic wound healing properties has been considered for clinical practice. The lipopolysaccharide (LPS) is recognized as an endotoxin and can induce inflammatory processes. Our objectives were: a) to analyze in vitro the following properties of green propolis extract: 1) physicochemical profile of green propolis sample, 2) Minimum Inhibitory Concentration (MIC) against endotoxin from gram negative Escherichia coli and 3) its immunoregulatory activity using leukocytes from the spleen of mice,. b) analyze in vivo, the action of propolis ethanol extract (EEP) 10% and 90% and Pure Propolis Extract (EPP) in dental alveoli or not contaminated with lipopolysaccharide (LPS) bacterial. For in vivo study, 35 rats were subjected to extractions of maxillary first molars, right and left, which immediately had the right dental socket contaminated with 0.1 µL of lipopolysaccharide (LPS) (100µg/kg) and left without such contamination. They were divided into groups (n = 7) for each sample after 2 weeks, according to the treatment in the right and left alveoli: GI-Negative Control (NC) - no treatment, GII-Treated Pure Propolis Extract (EPP) GIII-Treated folder with propolis 90% (P90), GIV-Treated folder with propolis 10% (P10) and GV-Treated folder with vehicle (SB). The alveoli were removed, demineralized, processed by routine histologic technique, submitted to systematic sections (6 microns) of thick and stained with HE for histological analysis to assess the new bone tissue volume by point counting method, using a Test system on images captured with the aid of a digital camera attached to a microscope. Observed data normality, we proceeded to ANOVA and Tukey-Kramer tests (p <0.05). In vitro, it was determined the propolis properties, CIM and immunoregulatory activity. In vivo, the alveoli contamined with bacterian lipopolysaccharide and treated with green propolis induced higher bone formation when compared to other groups. The non contamined alveoli and treated with pure propolis showed more quantity of collagen fibers.