Listeria monocytogenes is a foodborne pathogen with a high mortality rate in susceptible populations and is of great public health concern with regard to food safety. The ability to grow at refrigeration temperatures during storage and at low pH levels during food processing has enabled the species to establish and sustain growth on processed food. Some food products particularly at risk of contamination by L. monocytogenes are deli or processed meat products, seafood, processed vegetables, dairy products and other food that do not require heating or reheating before consumption. The aims of this study are therefore to investigate firstly the prevalence rates of the species in high risk food products and a food processing plant in Brisbane. Secondly, to determine whether food isolates are better than environmental isolates at surviving the stress factors in food processing environments, or if their lineage groupings are a better indicator of their survival. Thirdly, to compare the survival of food and environmental isolates under temperature stress in co-cultures. A survey of more than 100 high-risk food products at supermarkets was carried out to investigate the prevalence of L. monocytogenes and other Listeria species in food. Isolates were also obtained from a food processing plant during routine tests. This study has found a low prevalence rate (under 10%) of L. monocytogenes in the processed vegetables and meat products tested. Other products tested included processed and raw seafood and processed fresh fruit. More L. monocytogenes isolates were isolated from the food processing plant (101) than from the food survey (25). Listeria grayi (73 isolates), a non-pathogenic species, was more frequently isolated from the food survey. The characterisation of those isolates has revealed their lineage groupings and REP-PCR profiles, which did not appear to be related to their sources. A selected group of 25 isolates were also serotyped for further identification. A larger number of lineage II isolates (70) were found compared to lineage I isolates (25), and were more common in food than the environments; while some (7) produced inconclusive results in the lineage PCR. The REP-PCR did not separate isolates of different sources, lineages or serotypes. In order to investigate the survival fitness of L. monocytogenes isolates whilst under environmental stress relevant to food safety, ten isolates from the food survey and food processing plant were chosen. Five isolates each from lineages I and II were subjected to temperatures ranging from 4ºC to 30ºC and pH levels from 4.0 to 6.0 for two weeks continuously, with their growth monitored by either optical density or plate counts. It was found that the isolates were most susceptible at the combination of pH 4.0 and 4ºC, where the growth of the isolates was completely inhibited. Again no relationship was observed between the lineage or the sources and the survival fitness of the chosen isolates. Due to the frequency of L. monocytogenes being co-isolated with other Listeria species as well as other food-borne pathogens, the relative competitive fitness of four of the isolates from the survival fitness experiment were compared in co-cultures at 4ºC and 30ºC at pH 7.4 in a small-scale preliminary study. The four isolates from food and environments were grown in broth cultures in pairs with the plate counts performed on antibiotic-supplemented selective TSA agar. The isolates were distinguished on agar supplemented with tetracycline which the isolates had acquired resistance to for this purpose. No significant difference (P>0.05) was observed between the lineages or the sources and the competitive fitness of the isolates in this study. The isolates always produced slightly more colonies in the antibioticresistant form compared to the wildtype form but did not seem to relate to the competitive fitness of the isolates. It would seemed that within the scope of this study, neither the lineage, serotype nor source of the isolates indicated any isolate with a better ability of survival while at low temperatures and low pH levels in pure and mixed cultures. However, other classifying groups such as serotypes, RAPD profiles may reveal possible co-relations, as well as a wider isolate pool. Furthermore, different stress factors could be included as part of an investigation on the survival of L. monocytogenes, as this study focused on food safety during processing.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-10Bitstream added on 2014-06-13T20:04:46Z : No. of bitstreams: 1 sigarini_co_dr_botfmvz.pdf: 424397 bytes, checksum: dc378b5bab7232e9336dc1e3596d48c9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O Brasil é um dos principais países produtores/exportadores e consumidores de carne de frango no mundo. A maioria das aves é criada tradicionalmente, porém uma parte já é produzida pelo método alternativo que preconiza o bem- estar das aves sem o uso de antibióticos, coccidiostásticos, promotores de crescimento e ração de origem animal. No entanto, devido à ausência de inibidores exógenos, bactérias patogênicas podem se disseminar sem restrição na granja, sendo levadas ao abatedouro, contaminando não só o ambiente de abate, mas também o produto destinado ao consumidor final. Uma destas bactérias, Listeria monocytogenes é um microrganismo ubíquo que provoca a listeriose, doença zoonótica grave que leva a aborto/natimortos, neuropatias, gastroenterites, principalmente em crianças e idosos. É portanto, de fundamental importância que conheçamos a prevalência desta bactéria da recepção das aves no abatedouro até o acondicionamento do produto final, para que possamos orientar com precisão os principais focos de contaminação. Assim, foram colhidas 230 amostras sendo estas, obtidas em ambientes, equipamentos, utensílios e em carcaças de frango em diferentes etapas de abate e processamento de frangos alternativos. As amostras foram analisadas pela técnica convencional de isolamento de L. monocytogenes e posterior confirmação por técnica molecular. De um total de 230 amostras analisadas, 12 foram confirmadas como L. monocytogenes, representando 5,21% do total de amostras colhidas em diferentes pontos do fluxograma de abate. Assim, do total de amostras positivas (12), apenas duas (3,33%) destas foram identificadas no produto final (cortes embalados). / Brazil is one of the major producers/exporters and consumers of chicken meat in the world. Chicken production has been mainly based on confinement systems, although many animals have been raised in alternative systems, which focuses animal welfare, antibiotic-free animal production, with no coccidiostatic drugs or growth promoters or food of animal origin. However the absence of exogenous inhibitors could potentially spread pathogenic bacteria to the farm and then to the slaughterhouse, contaminating not only the environment of slaughter, but also the final product. One of these bacteria, Listeria monocytogenes, is an ubiquitous pathogen which causes listeriosis, a severe zoonotic disease that leads to abortion/ stillbirth, neuropathy, gastroenteritis, mainly in children and elderly people.Therefore, the identification of sources of this bacterium in poultry slaughterhouses and in the final product is very important. A total of 230 samples were collected from the slaughterhouse environment, equipment, utensils and carcasses in different stages of slaughtering and chicken processing. Samples were analyzed using the conventional technique for isolation of L. monocytogenes. Confirmation was achieved using molecular technique. Only 12 out of 230 samples were positive for L. monocytogenes which represent 5.21% of the samples from this slaughterhouse. Only two samples (3.33%) from the final product were positive for this pathogen.

A bactéria Listeria monocytogenes é reconhecida como um importante patógeno humano estando amplamente distribuída no ambiente e é responsável pela contaminação de alimentos crus e processados. O mecanismo de patogenicidade é determinado pela presença de genes no cromossomo da bactéria e entre eles estão os genes iap e hly que são essenciais para o mecanismo de invasão e atividade hemolítica do microorganismo, respectivamente. O obejtivo do presente estudo foi confirmar as cepas de L. monocytogenes usando a ténica de PCR para o gene hly e análise da variação nucleotídica do domínio central do gene iap, que é caracterizado pela presença de seqüências repetidas dos aminoácidos treonina e asparagina. Vinte e seis cepas de L. mnocytogenes, previamente isoladas de produtos lácteos e identificdas por métodos clássicos, se mostraram positivas para a PCR espécie-específico e então submetidas à determinação da seqüência nucleotídica. Os resultados mostraram variações na seqüência nucleotídica contendo substituições, inserções, deleções e um número de seqüências similares entre as cepas isoladas e a cepa controle EGD-e. Vinte e três cepas exibiram a mesma deleção que compreende 24 pares de bases dentro da seqüência de repetição e alterações similares na proteína traduzida. Apenas três cepas mostraram tamanhos diferentes de deleções e diferentes alterações na proteína. De acordo com estes resultados, a maioria das cepas apresentou uma característica molecular comum, diferentes da cepa padrão e este perfil predominante pode ser considerado como a característica das L. monocytogenes isoladas de produtos lácteos no Sul do Brasil. / The bacterium Listeria monocytogenes is recognized as an important human pathogen being omnipresent in the environment and is responsible for contamination in raw and processed foods. The mechanism of pathogenicity is established by presence of some genes on chromosome of bacteria between them, iap and hly genes that are essential to the invasion mechanism and hemolytic activity of microorganism, respectively. The aim of present study was confirm the strain L. monocytogenes using PCR to hly gene and analysis the nucleotide variability of central domain of iap gene characterized by the presence of similar sequences of threonine and asparagine amino acids. Twenty-six strains previously isolated from dairy products and classified by classic methods to L. monocytogenes were positive to specie-specific PCR and than submitted to nucleotide sequence determination. The results showed a sequence variation containing nucleotide substitutions, insertions, deletions and a number of repeated sequences among the isolates and control strain EGD-e. Twenty-three strains exhibited the same gap that includes a deletion of 24 base pairs inside of the repeated sequence and similar alterations in the translated protein. Just three strains showed different sizes of gaps and different protein alterations. According to these results, the majority strains displayed a common molecular characteristic different from the strain pattern and this predominant profile can be considerate as characteristic to L. monocytogenes isolated from dairy products in South Brazil.

GOMES, Hordênia Chagas Azevedo. Avaliação da atividade antimicrobiana da quitosana em sorvete inoculado com Listeria innocua. 2013. 56 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Tecnologia de Alimentos, Fortaleza-CE, 2013 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-06-10T12:48:41Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_hcagomes.pdf: 4558992 bytes, checksum: 755fdd658997a782a0af54b9cfdf0fbb (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-06-10T12:48:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_hcagomes.pdf: 4558992 bytes, checksum: 755fdd658997a782a0af54b9cfdf0fbb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-10T12:48:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_hcagomes.pdf: 4558992 bytes, checksum: 755fdd658997a782a0af54b9cfdf0fbb (MD5) Previous issue date: 2013 / O consumo de sorvete no Brasil vem crescendo nos últimos anos e paralelo a isso às exigências por parte dos consumidores por alimentos mais seguros e com menos aditivos artificiais também tem aumentado. O sorvete é um alimento nutricionalmente rico, pois tem o leite como um dos seus ingredientes. Porém, esse elevado valor nutricional faz com que o produto seja um meio extremamente favorável ao crescimento de micro-organismos sendo necessária a tomada de medidas de controle visando minimizar possíveis riscos microbiológicos que possam ocorrer por uma contaminação pós-pasteurização. Listeria monocytogenes está entre os micro-organismos patogênicos que podem estar presentes em sorvete. Trata-se de uma bactéria amplamente presente na natureza, podendo contaminar o sorvete devido a falhas de higiene ambiental, de manipulador ou através de ingredientes adicionados após pasteurização. Uma das alternativas para controlar o crescimento de micro-organismo em alimentos tem sido o uso da quitosana como antimicrobiano. A presente pesquisa visa avaliar a efetividade da quitosana como antimicrobiano sobre Listeria innocua ATCC 3309, em substituição à patógena Listeria monocytogenes, através de testes com meio de cultura pela determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Bactericida Mínima (CBM) e adicionada a uma matriz alimentar (sorvete). Para isso, quitosana de alto peso molecular, foi dissolvida em solução de ácido cítrico na proporção 1:1,5. No teste com meio de cultura foram avaliadas as seguintes concentrações: 50, 100, 200, 400 e 800µg/mL; no teste com sorvete, as concentrações avaliadas foram 800, 1200 e 1600µg/mL. A inoculação de L. innocua na calda básica para sorvete foi feita na etapa de maturação da calda e o seu crescimento no sorvete foi acompanhado por um período de 60 dias, sendo realizada a contagem desse micro-organismo na calda básica para sorvete logo após a inoculação e decorrido 24 horas de maturação à 5ºC. No sorvete, a contagem foi realizada nos tempos 0, 1, 5, 10, 15, 30, 45 e 60 dias. A Concentração Bactericida Mínima (CBM) de quitosana sobre L. innocua ATCC 330990 foi 800µg/mL. Adicionada ao sorvete, nenhuma das concentrações de quitosana testadas (800, 1200 e 1600g/mL) reduziram a concentração de L. innocua a níveis necessários para considerá-la uma substância antimicrobiana sobre o micro-organismo em questão em um produto com a seguinte composição centesimal: 23,29 à 27,30% de carboidrato, 2,50 à 3,57% de proteína e 4,91 à 6,50% de lipídios. / The ice cream consumption in Brazil has grown in recent years and, in parallel to the demands by consumers for safer and less artificial additives food has also increased. The ice cream is a nutritionally enriched food, since the milk has as one of its ingredients. However, this high nutritional value makes the product is very favorable to the growth of micro-organisms being necessary means taking control measures to minimize potential microbiological hazards that may occur by a post-pasteurization contamination. Listeria monocytogenes is among pathogenic microorganisms that may be present in ice cream. It is a widely present in nature bacteria and contaminate the ice cream because of environmental hygiene, manipulator or through failures ingredients added after pasteurisation. An alternative to controlling the growth of micro-organism in foods has been the use of chitosan as an antimicrobial. This research aims to evaluate the effectiveness of chitosan as an antimicrobial agent against L. innocua ATCC 3309, replacing the pathogen Listeria monocytogenes, by testing medium by determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) and added a food matrix (ice cream). To this end, high molecular weight chitosan was dissolved in a solution of citric acid in the ratio 1:1.5. In the test culture medium with the following concentrations were tested: 50, 100, 200, 400 and 800μg/mL; the test with ice cream, evaluated concentrations were 800, 1200 and 1600μg/mL. The inoculation of L. innocua the basic syrup to ice cream was made in the stage of maturation of syrup and ice cream in their growth was followed for a period of 60 days, this microorganism counting was performed in basic syrup to ice cream immediately after inoculation and 24 hours of aging at 5 ° C. elapsed On ice, the count was conducted at 0, 1, 5, 10, 15, 30, 45 and 60 days. The Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of L. innocua ATCC chitosan on 330990 was 800μg/mL. Added to ice cream, none of the tested concentrations of chitosan (800, 1200 and 1600 g / ml) reduced the concentration of L. innocua at levels necessary to consider it an antimicrobial substance on the micro-organism in question in a product with following chemical composition: 23.29 to 27.30% carbohydrate, 2.50 to 3.57% protein and 4.91 to 6.50% lipids.

O presunto cozido é um dos embutidos cárneos mais consumidos no Brasil, sendo também um dos mais sensíveis à deterioração por bactérias ácido láticas (BAL) e a contaminação por Listeria monocytogenes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana da nisina (Nisaplin®) aplicada em presunto cozido, a fim de controlar L. monocytogenes e BAL. Para tanto, presuntos cozidos foram preparados e fatiados individualmente pelas empresas DuPont e Marsul. No ensaio 1, o presunto foi injetado com salmoura contendo 12,5 mg de nisina por kg (dosagem aprovada no Brasil para queijos fundidos). O potencial bioconservante da nisina foi avaliado contaminando artificialmente as fatias do presunto com um pool composto por 5 cepas de L. monocytogenes. Os resultados do ensaio 1 demonstraram que o tratamento com nisina não teve efeito significativo sobre a população de L. monocytogenes. Já as BAL foram inibidas por 2 dias. No ensaio 2, a adição da nisina na mesma dosagem foi feita no tambleamento, inibindo a população de L. monocytogenes por 6 dias e BAL por 10 dias Em vista dos resultados obtidos nos 2 primeiros ensaios foi determinada a concentração mínima bactericida (CMB) do pool e dos isolados de L. monocytogenes, a fim de verificar a sensibilidade das cepas individualmente e em conjunto e o efeito da nisina sem a matriz cárnea. Além disso, também foi avaliado o efeito sinérgico ou antagônico da salmoura sobre a ação bactericida da nisina. Pôde-se constatar que as diferentes cepas de L. monocytogenes demonstraram perfis de sensibilidade diferentes e que o pool de cepas foi menos sensível ao efeito da nisina. Os resultados obtidos conduziram a avaliação de dosagem maior de nisina no presunto cozido. No ensaio 3, 32 mg/kg de nisina foram adicionadas a salmoura do presunto cozido e testados contra o pool de L. monocytogenes e a cepa ATCC 7644, separadamente. Os resultados demonstraram que a nova dosagem de nisina inibiu significativamente a multiplicação do pool de L. monocytogenes e da cepa ATCC 7644, durante 10 dias, sugerindo ser uma barreira efetiva no controle de L. monocytogenes em presunto cozido. / Precooked ham is one of the most consumed meats in Brazil. It is also one of the most sensitive to spoilage by lactic acid bacteria (LAB) and contamination by Listeria monocytogenes. The objective of this study is to evaluate the antimicrobial activity of Nisin (Nisaplin®) when applied to precooked ham, in order to control the growth of L. monocytogenes and LAB. For the purposes of this study, the precooked ham prepared and sliced individually by the DuPont and Marsul company was used. For trial 1, brine containing 12.5 mg of nisin was injected per kg of ham (dosage approved in Brazil for processed cheese). The biopreservative potential of nisin was evaluated by artificially contaminating slices of control and test ham with a pool of 5 different strains of L. monocytogenes. The results of this first trial showed that treatment with this amount of nisin had no significant effect on the growth of the L. monocytogenes population. However, the LAB population was indeed inhibited by 2 days. In trial number 2, the addition of nisin to the same amount of precooked ham by tumbling inhibited the growth of the L. monocytogenes population by 6 days and of the LAB population by 10 days. In light of the results obtained in these first 2 trials, the minimum bactericidal concentration (MBC) pool and L. monocytogenes isolates were determined in order to verify the sensitivity of the strains individually and together as well as the effects of nisin without the meat matrix Additionally, the synergistic or antagonistic effects of brine on the antimicrobial properties of nisin were also evaluated. Results suggest that different strains of L. monocytogenes have different sensitivity profiles and that the pool of strains was less sensitive to the effects of the nisin. These results prompted an increase in the dosage of nisin added to the precooked ham in trial number 3. In this trial, 32mg/kg of nisin was added to the brine of the precooked ham and tested against the L. monocytogenes pool and ATCC 7644 strain, separately. Results demonstrated that this increase in amount of nisin significantly reduced the growth of the L. monocytogenes pool and of the ATCC strain for 10 days. This suggests that nisin can be an effective barrier against the growth of L. monocytogenes in precooked ham.

A bactéria Listeria monocytogenes é reconhecida como um importante patógeno humano estando amplamente distribuída no ambiente e é responsável pela contaminação de alimentos crus e processados. O mecanismo de patogenicidade é determinado pela presença de genes no cromossomo da bactéria e entre eles estão os genes iap e hly que são essenciais para o mecanismo de invasão e atividade hemolítica do microorganismo, respectivamente. O obejtivo do presente estudo foi confirmar as cepas de L. monocytogenes usando a ténica de PCR para o gene hly e análise da variação nucleotídica do domínio central do gene iap, que é caracterizado pela presença de seqüências repetidas dos aminoácidos treonina e asparagina. Vinte e seis cepas de L. mnocytogenes, previamente isoladas de produtos lácteos e identificdas por métodos clássicos, se mostraram positivas para a PCR espécie-específico e então submetidas à determinação da seqüência nucleotídica. Os resultados mostraram variações na seqüência nucleotídica contendo substituições, inserções, deleções e um número de seqüências similares entre as cepas isoladas e a cepa controle EGD-e. Vinte e três cepas exibiram a mesma deleção que compreende 24 pares de bases dentro da seqüência de repetição e alterações similares na proteína traduzida. Apenas três cepas mostraram tamanhos diferentes de deleções e diferentes alterações na proteína. De acordo com estes resultados, a maioria das cepas apresentou uma característica molecular comum, diferentes da cepa padrão e este perfil predominante pode ser considerado como a característica das L. monocytogenes isoladas de produtos lácteos no Sul do Brasil. / The bacterium Listeria monocytogenes is recognized as an important human pathogen being omnipresent in the environment and is responsible for contamination in raw and processed foods. The mechanism of pathogenicity is established by presence of some genes on chromosome of bacteria between them, iap and hly genes that are essential to the invasion mechanism and hemolytic activity of microorganism, respectively. The aim of present study was confirm the strain L. monocytogenes using PCR to hly gene and analysis the nucleotide variability of central domain of iap gene characterized by the presence of similar sequences of threonine and asparagine amino acids. Twenty-six strains previously isolated from dairy products and classified by classic methods to L. monocytogenes were positive to specie-specific PCR and than submitted to nucleotide sequence determination. The results showed a sequence variation containing nucleotide substitutions, insertions, deletions and a number of repeated sequences among the isolates and control strain EGD-e. Twenty-three strains exhibited the same gap that includes a deletion of 24 base pairs inside of the repeated sequence and similar alterations in the translated protein. Just three strains showed different sizes of gaps and different protein alterations. According to these results, the majority strains displayed a common molecular characteristic different from the strain pattern and this predominant profile can be considerate as characteristic to L. monocytogenes isolated from dairy products in South Brazil.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 232957 bytes, checksum: b5394236581294b7ec888a9f272da8f7 (MD5) Previous issue date: 2003-12-19 / It was objective of this work the analysis of the Listeria monocytogenes as microbiologic hazard in some points of slaughtering process in inspected swines, seeking to determine your importance for the system APPCC. It was also evaluated not establishments inspected, where the objective was the identification of a better place for sample obtaining (carcass or tonsil) and the comparison of exam conventional microbiologic with the technique of PCR, with regard to larger efficiency and smaller cost with reagents and culture means; in those establishments the moment of collection of carcass and tonsil samples limited to the final stage of slaughtering process. The carcass samples, in the inspected establishment, they were obtained of swabs in four points of the fluxogram of the inspected slaughtering process: after the depilation (A), before (B) and after the evisceration sawing (C) and after the refrigeration (D), the swabs were analyzed by conventional technique of isolation and identification. There was not significant difference, with level of significância of 5%, for the occurrence of L. monocytogenes among the points of the fluxogram (p = 0,288), nor for Listeria sp (p = 0,565), but the microorganism was isolated in the points C and D, deserving monitoring during these points. In the establishment not inspected the comparison between swabs samples and tonsil it didn't present significant difference for L. monocytogenes (p = 0,47), nor for Listeria sp, when it took place conventional research, with confirmation of this result using PCR (p = 0,196) for L. monocytogenes. PCR was shown a more efficient technique for research of the microorganism in the swabs (p = 0,00001) and in the tonsil (p = 0,00005). L. monocytogenes is a danger that demands a monitoring in the evisceration stages and sawing of the carcasses and in the refrigeration in the establishment inspected investigated, the determination of your presence can be accomplished starting from swab of the carcass as well as of tonsil fragments. PCR is a technique fast, efficient, and of smaller cost with regents and culture means in the research of L. monocytogenes. In the slaughtering establishments investigated the bacteria it can be a hazard and your control lack in these places it offers risk to the consumer's health. / Foi objetivo deste trabalho a análise da Listeria monocytogenes como perigo microbiológico em alguns pontos do processo de abate de suínos, visando determinar sua importância para o sistema APPCC. Também avaliou-se estabelecimentos não inspecionados, onde o objetivo foi a identificação de um melhor local para obtenção de amostra (carcaça ou tonsila) e a comparação de exame microbiológico convencional com a técnica de PCR, com respeito a maior eficiência e menor custo com reagentes e meios de cultura; nesses estabelecimentos o momento de coleta de amostra de carcaça e tonsila restringiu-se à etapa final de abate. As amostras de carcaça, no estabelecimento inspecionado, foram obtidas de esfregaços superficiais ( swabs ) em quatro pontos do fluxograma do abate inspecionado: após a depilação (A), antes (B) e após a evisceração-serragem (C) e após o resfriamento (D), os swabs foram analisados por técnica convencional de isolamento e identificação. Não houve diferença significativa, com nível de significância de 5%, para a ocorrência de L. monocytogenes entre os pontos do fluxograma (p = 0,288), nem para Listeria sp (p = 0,565), mas o microrganismo foi isolado nos pontos C e D, merecendo monitoramento durante estas fases. No estabelecimento não inspecionado a comparação entre amostras de swabs e tonsila não apresentou diferença significativa para L. monocytogenes (p = 0,47), nem para Listeria sp, quando se realizou pesquisa convencional, com confirmação deste resultado usando-se pesquisa por PCR (p = 0,196) para L. monocytogenes. A PCR mostrou-se uma técnica mais eficiente para pesquisa do microrganismo no swabs (p = 0,00001) e na tonsila (p = 0,00005). L. monocytogenes é um perigo que demanda um monitoramento nas etapas de evisceração e serragem das carcaças e na refrigeração no estabelecimento inspecionado investigado, a determinação de sua presença pode ser realizada a partir de esfregaço da carcaça assim como de fragmentos de tonsila. A técnica de PCR é rápida, eficiente, e de menor custo com regentes e meios de cultura na pesquisa de L. monocytogenes. Nos estabelecimentos de abate investigados a bactéria pode ser um perigo e sua falta de controle nestes locais oferece risco à saúde do consumidor.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 537740 bytes, checksum: d3b38c2f699b649bb58cfb43a1c86f40 (MD5) Previous issue date: 2009-01-16 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The objectives of this research had been to compare the conventional method of detention of Salmonella sp., Listeria monocytogenes and Listeria sp. with fast methods for analysis of artisanal Minas cheese and to verify the survival of Listeria innocua to the maturation. Moreover, it was objectified to evaluate the product in relation to the counting of lactic bacteria, the contamination by bacterias from the coliform group and to determine physical and physical-chemistries characteristics. Forty eight sample units of artisanal Minas cheese had been collected of the region of Serro-MG, amongst these: 12 proceeding ones from six producers whose properties were registered in Instituto Mineiro de Agropecuária-IMA, that had been matured under refrigeration in the original packing to the vacuum and evaluated with 37 and 69 days; 20 proceeding from two properties not registered in IMA and 16 proceeding ones from a registered property, that had been matured at ambient temperature and analyzed before and after 60 days. Raw milk artificially contaminated with L. innocua, in the concentration of 10 UFC/mL, was used for the manufacture of 15 sample units of artisanal Minas cheese. The survival of this bacteria during the maturation for 5, 15, 30, 45 and 60 days was verified. The sample units artificially contaminated or not (n = 63) had been analyzed by the conventional method, immunoanalytical VIDAS®-SLM and molecular PCR-BAX® in relation to the presence of Salmonella sp. Sample units not contaminated (n = 48) had been evaluated by the conventional method and immunoanalytical VIDAS®-LMO in relation to the presence of L. monocytogenes, while sample units artificially contaminated (n = 15) had been analyzed by the conventional method and immunoanalytical Lateral Flow SystemTM in relation to the presence of Listeria sp. The performance of the fast methods was determined based on the Kappa agreement index and in the values of sensitivity, specificity, accuracy, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV). The results of lactic microbiota, total and thermotolerant coliform population and physical and physical-chemistries analyses of the 63 sample units had been submitted to the analysis of variance or linear regression with 5 % of significance. It was not evidenced Salmonella sp. by the conventional method and the method of PCR-BAX®, but it was verified in 3,17 % of the sample units evaluated by VIDAS®-SLM. The Kappa agreement index zero and the sensitivity were not determined, the specificity and accuracy of 96,83 %, the PPV of 0 % and NPV equal 100 % when comparing VIDAS®-SLM method with the conventional method. The presence of L. monocytogenes was not detected by the evaluated methods. L. innocua was detected in 13 of the 15 sample units analyzed in the evaluated times of maturation. The Lateral Flow SystemTM method presented Kappa of 0,30, sensitivity of 61,54 %, specificity of 100 %, accuracy of 66,67 %, PPV of 100 % and NPV of 28.57 % compared with the conventional method. Reduction of the population of total and thermotolerant coliforms was observed at acceptable values for the legislation and average reduction of 2 cycles log in the counting of lactic bacteria to the end of 60 days of maturation under ambient temperature. The physical and physical-chemistries characteristics of matured cheeses in vacuum packages and under refrigeration, in general, had been kept what it was not observed in the matured cheeses out of the packages and to the ambient temperature. The PCR-BAX® method for the research of Salmonella sp. e VIDAS®-LMO for the research of L. monocytogenes had presented similar results to the presented ones for the conventional methodology. Salmonella sp. e L. monocytogenes had not been recovered in the sample units evaluated. The minimum period of maturation of 60 days for the artisanal Minas cheese, demanded for State Law 14,185, was not enough to guarantee microbiological security when cheeses had been produced with raw milk artificially contaminated with L. innocua. / Os objetivos desta pesquisa foram comparar o método convencional de detecção de Salmonella sp., Listeria monocytogenes e Listeria sp. com métodos rápidos para análise de queijo Minas artesanal e verificar a sobrevivência de Listeria innocua à maturação. Além disso, objetivou-se avaliar o produto quanto à contagem de bactérias láticas, a contaminação por bactérias do grupo coliformes e determinar características físicas e físico-químicas. Foram coletadas 48 unidades amostrais de queijo Minas artesanal da região do Serro-M.G., dentre estas: 12 provenientes de seis produtores cujas propriedades eram cadastradas no Instituto Mineiro de Agropecuária - IMA, que foram maturadas sob refrigeração na embalagem original à vácuo e avaliadas com 37 dias e 69 dias; 20 provenientes de duas propriedades não cadastradas no IMA e 16 provenientes de uma propriedade cadastrada, que foram maturadas à temperatura ambiente e analisadas antes e após 60 dias. Leite cru artificialmente contaminado com L. innocua, na concentração de 10 UFC/mL, foi utilizado para a fabricação de 15 unidades amostrais de queijo Minas artesanal. A sobrevivência dessa bactéria durante a maturação por 5, 15, 30, 45 e 60 dias foi verificada. As unidades amostrais artificialmente contaminadas ou não (n = 63) foram analisadas pelo método convencional, imunoanalítico VIDAS®-SLM e molecular PCR-BAX® quanto à presença de Salmonella sp. Unidades amostrais não contaminadas (n = 48) foram avaliadas pelo método convencional e imunoanalítico VIDAS®-LMO quanto à presença de L. monocytogenes, enquanto unidades amostrais artificialmente contaminadas (n = 15) foram analisadas pelo método convencional e imunoanalítco Lateral Flow SystemTM quanto à presença de Listeria sp. O desempenho dos métodos rápidos foi determinado com base no índice de concordância kappa e nos valores de sensibilidade, especificidade, acurácia, valor preditivo positivo (VPP) e valor preditivo negativo (VPN). Os resultados da microbiota lática, população de coliformes totais e termotolerantes e análises físicas e físico-químicas das 63 unidades amostrais foram submetidos à análise de variância ou regressão linear com 5 % de significância. Salmonella sp. não foi constatada pelo método convencional e pelo método de PCRBAX ®, mas foi verificada em 3,17 % das unidades amostrais avaliadas pelo VIDAS®- SLM. O coeficiente de concordância kappa e a sensibilidade não foram determinados, a especificidade e acurácia de 96,83 %, o VPP de 0 % e o VPN igual a 100 % ao comparar o método VIDAS®-SLM com o método convencional. A presença de L. monocytogenes não foi detectada pelos métodos avaliados. L. innocua foi detectada em 13 das 15 unidades amostrais analisadas nos tempos de maturação avaliados. O método Lateral Flow SystemTM apresentou kappa de 0,30, sensibilidade de 61,54 %, especificidade de 100 %, acurácia de 66,67 %, VPP de 100 % e VPN igual a 28,57 % comparado ao método convencional. Observou-se redução da população de coliformes totais e termotolerantes a valores aceitáveis pela legislação e redução média de 2 ciclos log na contagem de bactérias láticas ao final de 60 dias de maturação sob temperatura ambiente. As características físicas e físico- químicas de queijos maturados em embalagens à vácuo e sob refrigeração, em geral, foram mantidas o que não foi observado nos queijos maturados fora da embalagem e à temperatura ambiente. O método de PCR-BAX® para a pesquisa de Salmonella sp. e VIDAS®-LMO para a pesquisa de L. monocytogenes apresentaram resultados semelhantes aos apresentados pela metodologia convencional. Salmonella sp. e L. monocytogenes não foram recuperados nas unidades amostrais avaliadas. O período de maturação mínimo de 60 dias para maturação do queijo Minas artesanal, exigido pela Lei Estadual 14.185, não foi suficiente para garantir segurança microbiológica quando queijos foram produzidos com leite cru artificialmente contaminado com L. innocua.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA13MA107.pdf: 451741 bytes, checksum: 5cfe26b4db31a7dc3232b729192870a5 (MD5) Previous issue date: 2013-02-24 / The Brazilian swine production goes through a historic moment attempting to develop new markets, including the member states of the European Union, United States and Japan. Requirements of national and international law, about the hygiene of products of animal origin signal the need for direct actions to all segments of the supply chain of pork for protecting health of the population. The objective of this study is to determine and quantify the presence of Listeria monocytogenes in pig carcasses before and after the cool chamber. Material sampling was carried out at one processing plant located in the State of Santa Catarina. 226 samples were collected from carcasses. Sampling was performed by means of sponge and the smear sampling area which covered a defined area of 100 cm2 per sampling, totaling an area of 400 cm2. The points were in the ham, loin, belly and jowl. At the laboratory, samples were added to 100 ml of pre-enrichment broth UVM (University of Vermont) and homogenized in the broth. The broth was incubated at 30° C/24h and subsequently peaked 0.1 ml of culture to Fraser broth and incubated at 36° C/24h. The samples presumptively positive were peaked for ALOA Agar for isolation (incubation at 36° C/24h). The suspected colonies were identified by biochemical tests and test-CAMP. For quantification we used the technique of Most Probable Number. From the samples analyzed within the establishments A, 0.44% (1) samples were positive for Listeria monocytogene. An increase of positive results for Listeria sp. was found on the pig carcases after passing the cold chamber. In this sense, it could be considered a contamination point. However, the results did not show an increase on the number of Listeria sp. on the carcases after passing the cold chamber / A suinocultura brasileira passa por um momento histórico com a tentativa de expanção de novos mercados, incluindo os estados-membros da União Europeia, Estados Unidos da América e Japão. Requisitos da legislação nacional e internacional, a respeito da higiene dos produtos de origem animal sinalizam a necessidade de direcionar ações a todos os segmentos da cadeia produtiva da carne suína, visando a proteção da saúde da população. O objetivo deste trabalho foi determinar e quantificar a presença de Listeria monocytogenes em carcaças suínas antes e após a câmara fria. As coletas de materiais foram realizadas em dois frigoríficos localizados no Estado de Santa Catarina. No estabelecimento A foram coletadas 226 amostras de carcaças. As coletas para análise foram por meio de swab (esponja) e a área de amostragem do esfregaço abrangeu uma área delimitada de 100 cm2 por ponto de amostragem, totalizando uma área de 400 cm2. Os pontos de coleta foram no pernil, lombo, barriga e papada. No laboratório, as amostras foram acrescidas de 100 ml de caldo de pré-enriquecimento UVM (Universidade de Vermont) e homogeneizadas no caldo. O caldo foi incubado a 30°C/24h e posteriormente repicado 0,1 ml da cultura para o caldo Fraser, e incubado a 36ºC/24h. As amostras presuntivamente positivas foram repicadas para Ágar ALOA para isolamento (incubação a 36°C/24h). As colônias suspeitas foram identificadas por meio de provas bioquímicas e CAMP-teste. Para a quantificação foi utilizada a técnica de Número Mais Provável. Das amostras analisadas nos estabelecimentos A, 0,44% (1) foram positivas para L. monocytogenes para antes e após a câmara fria. Houve aumento de carcaças suínas positivas para Listeria sp. após a câmara fria, podendo esta ser considerada como um ponto de contaminação. Porém, não foi possível comprovar se houve aumento do número de Listeria sp. na carcaça suína após a câmara fria

O presunto cozido é um dos embutidos cárneos mais consumidos no Brasil, sendo também um dos mais sensíveis à deterioração por bactérias ácido láticas (BAL) e a contaminação por Listeria monocytogenes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana da nisina (Nisaplin®) aplicada em presunto cozido, a fim de controlar L. monocytogenes e BAL. Para tanto, presuntos cozidos foram preparados e fatiados individualmente pelas empresas DuPont e Marsul. No ensaio 1, o presunto foi injetado com salmoura contendo 12,5 mg de nisina por kg (dosagem aprovada no Brasil para queijos fundidos). O potencial bioconservante da nisina foi avaliado contaminando artificialmente as fatias do presunto com um pool composto por 5 cepas de L. monocytogenes. Os resultados do ensaio 1 demonstraram que o tratamento com nisina não teve efeito significativo sobre a população de L. monocytogenes. Já as BAL foram inibidas por 2 dias. No ensaio 2, a adição da nisina na mesma dosagem foi feita no tambleamento, inibindo a população de L. monocytogenes por 6 dias e BAL por 10 dias Em vista dos resultados obtidos nos 2 primeiros ensaios foi determinada a concentração mínima bactericida (CMB) do pool e dos isolados de L. monocytogenes, a fim de verificar a sensibilidade das cepas individualmente e em conjunto e o efeito da nisina sem a matriz cárnea. Além disso, também foi avaliado o efeito sinérgico ou antagônico da salmoura sobre a ação bactericida da nisina. Pôde-se constatar que as diferentes cepas de L. monocytogenes demonstraram perfis de sensibilidade diferentes e que o pool de cepas foi menos sensível ao efeito da nisina. Os resultados obtidos conduziram a avaliação de dosagem maior de nisina no presunto cozido. No ensaio 3, 32 mg/kg de nisina foram adicionadas a salmoura do presunto cozido e testados contra o pool de L. monocytogenes e a cepa ATCC 7644, separadamente. Os resultados demonstraram que a nova dosagem de nisina inibiu significativamente a multiplicação do pool de L. monocytogenes e da cepa ATCC 7644, durante 10 dias, sugerindo ser uma barreira efetiva no controle de L. monocytogenes em presunto cozido. / Precooked ham is one of the most consumed meats in Brazil. It is also one of the most sensitive to spoilage by lactic acid bacteria (LAB) and contamination by Listeria monocytogenes. The objective of this study is to evaluate the antimicrobial activity of Nisin (Nisaplin®) when applied to precooked ham, in order to control the growth of L. monocytogenes and LAB. For the purposes of this study, the precooked ham prepared and sliced individually by the DuPont and Marsul company was used. For trial 1, brine containing 12.5 mg of nisin was injected per kg of ham (dosage approved in Brazil for processed cheese). The biopreservative potential of nisin was evaluated by artificially contaminating slices of control and test ham with a pool of 5 different strains of L. monocytogenes. The results of this first trial showed that treatment with this amount of nisin had no significant effect on the growth of the L. monocytogenes population. However, the LAB population was indeed inhibited by 2 days. In trial number 2, the addition of nisin to the same amount of precooked ham by tumbling inhibited the growth of the L. monocytogenes population by 6 days and of the LAB population by 10 days. In light of the results obtained in these first 2 trials, the minimum bactericidal concentration (MBC) pool and L. monocytogenes isolates were determined in order to verify the sensitivity of the strains individually and together as well as the effects of nisin without the meat matrix Additionally, the synergistic or antagonistic effects of brine on the antimicrobial properties of nisin were also evaluated. Results suggest that different strains of L. monocytogenes have different sensitivity profiles and that the pool of strains was less sensitive to the effects of the nisin. These results prompted an increase in the dosage of nisin added to the precooked ham in trial number 3. In this trial, 32mg/kg of nisin was added to the brine of the precooked ham and tested against the L. monocytogenes pool and ATCC 7644 strain, separately. Results demonstrated that this increase in amount of nisin significantly reduced the growth of the L. monocytogenes pool and of the ATCC strain for 10 days. This suggests that nisin can be an effective barrier against the growth of L. monocytogenes in precooked ham.