Orientador: José Jurandir Fagliari / Coorientador: Ana Maria Centola Vidal Martins / Banca: Luiz Paulo Martins Filho / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Luiz Francisco Zafalon / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Resumo: Proteínas de fase aguda (PFA) são indicadores sensíveis e precoces de focos inflamatórios. No entanto, as informações disponíveis na literatura em relação à espécie caprina são escassas. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar o leucograma e o perfil bioquímico sérico, em especial de PFA, de cabras com mastite induzida por Staphylococcus aureus (Grupo I) e Streptococcus agalactiae (Grupo II), a fim de verificar sua importância como biomarcadores precoces da infecção mamária nesta espécie. O GI foi composto por cinco cabras da raça Saanen, inoculadas por via intramamária com cerca de 9,5 x 109 unidades formadoras de colônia (UFC) de S. aureus e o GII composto por cinco cabras da raça Alpina Francesa inoculadas com aproximadamente 4,4 x 1011 UFC de S. agalactiae. O momento experimental imediatamente anterior à inoculação foi denominado M0 e os seguintes identificados como M1, M2, M3, M4, M5, M6 e M7, nos quais eram realizadas colheitas de sangue e leite. Com as amostras de sangue foram obtidos o leucograma, mensuração da concentração plasmática de fibrinogênio, determinação do teor sérico de aspartato aminotransferase, fosfatase alcalina, gamaglutamiltransferase e creatina quinase, além das concentrações séricas de proteína total, albumina, ureia, creatinina, cálcio total, fósforo, magnésio e ferro, utilizando-se kits comerciais. As concentrações séricas de transferrina, ceruloplasmina, haptoglobina e α1-glicoproteína ácida foram obtidas por meio da técnica de eletroforese SDS-Page. Com as amostras de leite foi realizado acompanhamento da evolução da mastite por meio dos testes da caneca de fundo escuro, California Mastitis Test (CMT) e análises microbiológicas. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias ao teste de Dunnet, considerando-se 95% de significância (p<0,05). Notou-se que o modelo de infecção experimental desenvolvido para a indução de mastite ... / Abstract: Acute phase proteins (APP) are sensitive and early indicators of inflammation. However, information regarding goats APP are scarce in the literature. So the aim of this study was to determine the leukocyte count and serum biochemical profile, in particular APP, in goats with induced Staphylococcus aureus (Group I) and Streptococcus agalactiae (Group II) mastitis in order to verify its importance as early biomarkers of mammary infection in these species. GI was composed of five Saanen goats inoculated through the teat canal with about 9.5 x 109 colony forming units (CFU) of S. aureus and GII consisted of five French Alpine goats inoculated with approximately 4.4 x 1011 CFU of S. agalactiae. The experimental moment immediately prior to inoculation was designated M0 and the following identified as M1, M2, M3, M4, M5, M6 and M7 when blood and milk samples were obtained. Leucocyte count and measurement of plasma fibrinogen concentration, serum levels of aspartate aminotransferase, alkaline phosphatase, gamma glutamyl transferase, creatine kinase, total protein, albumin, urea, creatinine, total calcium, phosphorus, magnesium and iron, were determined with blood samples, using commercial kits. Serum transferrin, ceruloplasmin, haptoglobin and α1-acid glycoprotein were obtained by the SDS-Page Electrophoresis technique. Milk samples were used to monitor the development of clinical mastitis through the strip cup test, California Mastitis Test (CMT) and microbiological analyzes. Data were subjected to analysis of variance and the means to Dunnet test, considering a 95% significance level (p < 0.05). It was noted that the experimental infection model developed for the induction of clinical mastitis in goats was effective in both groups. Leucocyte count and serum biochemical profile, with the exception of APP, were unreliable laboratory tests to aid in the diagnosis or monitoring of experimental mastitis in goats, whether induced by S. aureus or ... / Doutor

Orientador: Ana Maria Centola Vidal Martins / Coorientador: Karina Paes Bürger / Banca: Arlindo Saran Netto / Banca: Angela Cleusa de Fátima Banzatto de Carvalho / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi de avaliar 10 propriedades, produtoras de leite cru refrigerado, localizadas no Sudeste do Estado de São Paulo, quanto ás condições higiênico-sanitárias do rebanho bem como o manejo; e correlacionar á qualidade do leite produzido por cada uma delas com o estabelecido pela IN62 de 2011. Foi aplicado um checklist, foi avaliado o índice de mastite clínica e subclínica e identificados os micro-organismos envolvidos e seu perfil de sensibilidade á antimicrobianos, assim como analisados os parâmetros físicoquímicos, de Contagem de Células Somáticas (CCS) e microbiológicos estabelecidos pela legislação vigente. Após a aplicação do checklist era realizado o teste da caneca de fundo escuro e o California Mastits Tests (CMT), e colhidas amostras dos quartos positivos em tubos estéreis para isolamento microbiológico. As amostras de leite colhidas dos tanques de expansão eram submetidas à CCS, Contagem Bacteriana Total (CBT) e a análise de composição. Dos 1280 quartos mamários avaliados, 43,67% foram positivos ao CMT, caracterizando mastite subclínica e 2,89% dos quartos positivos ao teste da caneca de fundo escuro caracterizando mastite clínica. O Staphylococcus aureus foi o micro-organismo mais isolado, sendo que nos casos de mastite clínica ele representou 64,86%, seguido de S. epidermidis com 18,91% e 2,70% de S. intermedius. Nos casos de mastite subclínica o S. aureus foi isolado de 73,60% dos quartos analisados, seguido de S. epidermidis com 16,57%, Corynebacterium sp. com 3,66%, S. dysgalactiae com 3,08%, S. intermedius com 1,93%, Bacillus sp. com 0,58% e Enterococcus sp. com 0,59%. No teste de sensibilidade antimicrobiana, in vitro, o Florfenicol foi o antimicrobiano, do qual os micro-organismos isolados nos casos de mastite clínica apresentaram maior sensibilidade. Das 10 propriedades produtoras de leite sete apresentaram valores superiores ao de 500 mil céls./mL para ... / Abstract: The objective this study was to assay 10 dairy farms that produce refrigerated raw milk, located in the southeastern of São Paulo State, on the hygenicsanitary conditions and management of the herd and, if possible, to correlate the quality of the milk produced with the standards recommended by IN62. For this, a checklist was applied together with the assessment of the rate of clinical and subclinical mastitis, identification of the microorganisms involved and their sensitivity to antimicrobials. The microbiological, physical-chemical and SCC parameters were also analyzed according to the established by law. Following application of the checklist,test of the black deep mugand CMT were performed and samples from the positive mammary quarters were collected in sterile tubes for microbiological isolation. Bulk tank milk samples were submitted to SCC, TBC and composition analysis. From 1280 mammary quarters evaluated, 43.67% were positive for the CMT, characterizing subclinical mastitis; and 2.89%, in the test of the black deep mug, characterizing clinical mastitis. Staphylococcus aureus was the most frequently isolated microorganism, and in cases of clinical mastitis, represented 64.86% of all positive samples, followed by S. epidermidis 18.91% and S. intermedius 2.70%. In cases of subclinical mastitis, S. aureus was isolated from 73.60% of the quarters examined, followed by S. epidermidis 16.57%, Corynebacterium sp. 3.66%, S. dysgalactiae 3.08%, S. intermedius 1.93%, Enterococcus sp. 0.59% and Bacillus sp. 0.58%. Regarding the in vitro antimicrobial susceptibility test, florfenicol was the antibiotic to which the microorganisms isolated in clinical mastitis cases showed higher sensitivity. Of the 10 farms milk producers seven had values higher than the 500,000 cels. / mL for SCC in relation to that established by IN62, but for TBC and protein, all attended the set of at least 300,000 CFU / mL and 2.9 g / 100g, respectively, but for ... / Mestre

Orientador: Hélio Langoni / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Banca: Nilson Benites / Banca: Acácia Orieth Elias / Resumo: Foram estudados 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina de diferentes propriedades do estado de São Paulo: 150 Staphylococcus coagulase positiva (SCP) e 150 Staphylococcus coagulase negativa (SCN). A presença de genes para produção de enterotoxinas foi detectada pela Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) e a expressão gênica pela PCR transcriptase reversa (RT-PCR). Os isolados foram submetidos ao perfil de sensibilidade correlacionada com a detecção dos genes mecA e vanA, pela técnica de PCR. Os 150 SCN isolados foram identificados como sendo: 48 (32%) S. warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2,7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auriculares, 1(0,7%) S. saprophyticus subsp. bovis e 1(0,7%) S. capitis. Entre os SCP foram isolados: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%), S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. A concordância entre a identificação fenotípica e genotípica do total de linhagens de SCN e SCP foi de 96,7% e 98,7%, respectivamente. Foram detectados genes codificadores para enterotoxinas clássicas (sea, seb, sec, sed) e outras enterotoxinas (see, seg, seh, sei, sej, sek, sel, sem, sen, seo, sep, seq) em 175 (58%) dos 300 Staphylococcus spp. pesquisados. Estes genes foram detectados em 109 (73%) dos SCN isolados, resultado significantemente maior que entre SCP 66 (44%), P<0,0001. Entre os 109 SCN foram detectados genes codificadores de enterotoxinas nas seguintes espécies: 37(33,9%) S. warneri, 17(15,6%) S. epidermidis, 16(14,7%) S. hyicus, 5(4,6%) S. xylosus, 5(4,6%) S. haemolyticus, 4(3,7%) S. simulans, 4(3,7%) S. schleiferi subsp schleiferi, 4(3,7%) S. homini, 4(3,7%) S. pasteuri, 3(2,7%) S. saprophyticus... / Abstract: A total of 300 isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied, respectively: 150 CPS and 150 CNS strains. The isolates were analyzed to enterotoxins codifying genes by Polymerase Chain Reaction (PCR). Gene expression was evaluated by reverse transcription PCR (RT-PCR). The isolates were subjected to sensitivity profile correlated with the detection of mecA and vanA gene by PCR. Among the CNS the following species were identified: 48 (32%) S. warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auriculares, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis and 1(0.7%) S. capitis. Among the 150 CPS: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%), S. intermedius and 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. The identification by phenotypic and genotypic tests showed a concordance of 96.7% in the CNS isolates, and 98.7% in the CPS. The codifying genes to enterotoxins production were detected to classical and enterotoxin-like in 175 (58%) out of 300 staphylococci isolates. These genes were detected significantly higher among the CNS (73%) in relation to CPS (44%), P<0.0001. In 109 CNS codifying genes to enterotoxins were detected in the following species: 37(33.9%) S. warneri, 17(15.6%) S. epidermidis, 16(14.7%) S. hyicus, 5(4.6%) S. xylosus, 5(4.6%) S. haemolyticus, 4(3.7%) S. simulans, 4(3.7%) S. schleiferi subsp schleiferi, 4(3.7%) S. homini, 4(3.7%) S. pasteuri, 3(2.7%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3(2.7%) S. cohnii, 3(2.7%) S. chromogenes, 2(1.8%) S. sciuri, 1(0.9%) S. lugdunensis and 1(0.9%) S. capitis. Among the 66 CPS, the enterotoxin genes were observed in the following species: 48(73 %) S. aureus, 10(15%) S. hyicus, ... / Doutor

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Banca: Leane Oliveira / Resumo: Os objetivos destes estudos foram (1) determinar a sensibilidade (Se.) e especificidade (Sp.) de diferentes limiares de CCS para identificar mastite subclínica; (2) verificar o impacto do isolamento de bactérias causadoras de mastite e da CCS durante protocolo de transferência de embriões em tempo fixo (TETF) na P/TE de vacas em lactação. No Exp.1, 2.516 vacas Holandesas e Girolando (8 fazendas), foram submetidas a coleta de duas amostras de leite para análise de CCS e cultura microbiológica para determinar o crescimento bacteriano. No Exp.2, 1.397 vacas Girolando em lactação foram submetidas a um protocolo de TETF. Amostras de leite foram coletadas dois dias antes da TETF para cultura microbiológica e análise de CCS. O diagnóstico de gestação foi realizado nos dias 31 e 66. Os animais foram divididos de acordo com o isolamento apresentado, em 5 grupos experimentais segundo recomendações do "national mastitis council" (NMC): Gram-positivas ambientais (AB+; Bacillus spp., Enterococcus spp., Streptococcus spp, Micrococcus spp.,), Gram-negativas ambientais (AB-; Citrobacter freundii, Coliformes, Enterobacter spp., Klebsiella spp., Proteus spp., Pseudomonas spp.), Gram-positivas contagiosas (C+; Corynebacterium bovis, Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae), SCN (Estafilococos coagulase negativa) e ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objectives of these studies were (1) determine the sensitivity (Se) and specificity (Sp) of different SCC thresholds to identify subclinical mastitis, (2) assess the impact of microorganism causative of mastitis and SCC during fixed-time embryo transfer (FTET) protocol in P/ET in dairy cows. In study 1, 2516 Holstein and Girolando cows (8 farms) were enrolled. Two composite milk samples were collect from each cow, one for SCC analysis and other for bacteriological analysis. In study 2, 1397 Girolando lactating cows were subjected to a FTET. Milk samples were collected two days before the ET for bacteriological analysis and SCC. Pregnancy diagnosis was performed on days 31 and 66. The animals were split according to the bacterial growth in 5 experimental groups according to the recommendations of the "National Mastitis Council" (NMC): Gram-positive environmental (AB +; Bacillus spp., Enterococcus spp., Streptococcus spp, Micrococcus spp.), Gram-negative environmental (AB-, Citrobacter freundii, Coliforms, Enterobacter spp., Klebsiella spp., Proteus spp., Pseudomonas spp.), Gram-positive contagious (C+; Corynebacterium bovis, Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae), CNS (coagulase-negative staphylococci) and control (no bacteria growth). In experiment 1, three SCC thresholds (100,000, 200,000 and 400,000 cells/ml) were used to determine the Se. and Sp. in detect intramammary infection (IMI). The CNS were grouped with the control group for the analysis of study 2 because the growth of these agents is not usually associated with mammary gland disease. The cows were also classified into three groups according to the SCC: less than 200,000 cells/ml, between 200,000 and 400,000 cells/ml, and greater than 400,000 cells/ml. SAS PROC GLIMMIX was used for statistical analysis. For analysis P <0.05 was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O leite da égua é o principal alimento do potro nos primeiros meses de vida. Além disso, em países europeus o leite equino é muito utilizado na nutrição e medicina humana para tratamento de diversas doenças, e também como substituto do leite da mulher para crianças, devido a sua semelhança ao leite humano. A raça Crioula é muito importante no sul do Brasil América, sendo que não existe nenhum trabalho avaliando a qualidade do leite das éguas Crioulas. O objetivo deste estudo foi avaliar os principais componentes do leite das éguas da raça Crioula: gordura, proteína, lactose e sólidos totais; bem como a qualidade sanitária do leite e saúde da glândula mamária através da contagem de células somáticas e contagem bacteriana total, respectivamente, além de cultura bacteriana. Foram utilizadas 12 éguas da raça Crioula, as quais foram ordenhadas quinzenalmente até 180 dias de lactação. Foi verificado que o leite das éguas Crioulas é pobre em gordura (0,57%), rico em lactose (6,71%) e possui uma baixa concentração de proteína (1,95%). A maioria das amostras de leite não apresentou crescimento bacteriano. Também foi observada a média de 6,80 x 10³ céls/ml para CCS não havendo diferença quando se comparou as éguas que se apresentaram positivas e negativas ao crescimento bacteriano e média de CBT 29,66 x 10³ UFC/ml, sendo que éguas que apresentaram crescimento bacteriano apresentaram também maior número na CBT. / The mare´s milk is the main food in the first months of the foal´s life. Also, in European countries equine milk is widely used in human medicine for nutrition and treatment of various diseases, as well as women´s milk substitute for young children, because of its similarity to human milk. The Criollo breed is very important in South America and Brazil, where there is no study evaluating the quality of this milk. The aim of this study was to evaluate the main compounds of Criollo mare´s milk: fat, protein, lactose and total solids, the sanitary quality of milk and mammary gland health through somatic cell count and total bacterial count, respectively and bacterial culture. A total of 12 Criollo mares which were milked every two weeks up to 180 days of lactation were used. It was observed that the Criollo mare´s milk is low in fat (0,57%), high in lactose (6,71%) and has a low protein concentration (1,95%). It was also observed an average of 6,80 x 10³ cells/ml for SCC (with no difference regarding positive and negative bacterial growth) and an average of 29,66 TBC x 10³ CFU/ml. Mares that showed bacterial growth also showed the greatest TBC number.

A mastite um dos grandes problemas relacionados com criação de ovinos de leite devido às perdas econômicas decorrentes da redução na produção, gastos com medicamento e perdas de animais. A Contagem de Células Somáticas (CCS) e o isolamento bacteriano são ferramentas diagnósticas indicativas da saúde da glândula mamária que pode ser determinada através de método automatizado e por método manual, através de contagem celular em microscópio, sobre o qual existem discussões quanto à coloração adequada ao leite de ovelhas devido a celularidade diferenciada nesta espécie. Esta tese compreende três estudos que visam realizar o diagnóstico de mastite subclínica em ovelhas leiteiras do Estado Rio Grande do Sul – Brasil em um total de 315 amostras de leite oriundos de casos desta enfermidade em ovelhas de leite. [Capítulo 2] Foram utilizadas 116 amostras com o objetivo de identificar e validar uma metodologia de CCS microscópica adequada à espécie ovina. Assim foram confeccionadas lâminas de esfregaços de 10 μL de leite em 1 cm2, onde foram testados os fixadores de xilol e solução de Carnoy e as colorações de May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wrigth (W) e Panótico (P). Elegeu-se a solução de Carnoy, pois esta permitiu uma melhor fixação do filme lácteo às lâminas de microscopia, e o corante BP, pois permitiu uma boa coloração e visualização das células, bem como a diferenciação dos corpúsculos citoplasmáticos. Os valores de CCS variaram de 2,6x104 a 4,4x106 células.mL-1 e de 1,9x104 a 8,1x106 células.mL-1, respectivamente, pelos métodos automático e microscópico. [Capítulo 3] O objetivo do presente capítulo foi determinar a ocorrência de mastite subclínica em rebanho ovino leiteiro, através do isolamento bacteriano e da CCS. Determinou-se, ainda, a composição (gordura, lactose, proteína e sólidos totais) do leite e a relação entre estes parâmetros e a presença de mastite. Para tanto, coletaram-se 315 amostras de leite, individualizadas por teto, das quais 85 (27%) foram identificadas como mastite subclínica, sendo Staphylococcus coagulase negativos o agente prevalente (64,7%), seguido por Staphylococcus coagulase positivas (19,1%). A CCS variou de 2,5x103 a 9,3x106. Verificou-se CCS significativamente maior (p<0,0001) nas amostras com isolamento bacteriano. Entretanto, o mesmo não foi observado entre os parâmetros de composição. Não foi determinada correlação entre os parâmetros de composição e a CCS. [Capítulo 4] Este capítulo teve como objetivos identificar as espécies de SCN em 32 isolados de casos de mastite subclínica em ovinos, através da técnica de PCR-RFLP e sequenciamento do gene gap, e determinar a suscetibilidade dos isolados frente a nove agentes antimicrobianos, pela técnica de disco difusão em ágar. Foram obtidos quatro perfis no sequenciamento, sendo observada a presença de três espécies de SCN: Staphylococcus epidermidis (59,4%), Staphylococcus chromogenes (34,4%) e Staphylococcus devriesei (6,2%), pela primeira vez descrita na região Sul do país em casos de mastite ovina. Todos os isolados foram suscetíveis a cefalotina, ceftiofur e penicilina+novobiocina. Vinte e um isolados (65,6%) apresentaram resistência a pelo menos um agente antimicrobiano e onze isolados (34,4%) mostraram-se suscetíveis a todos os agentes testados. Quatro isolados (12,5%) apresentaram multirresistência e, entre estes, um isolado da espécie S. epidermidis apresentou resistência à oxacilina, confirmada através da amplificação do gene mecA por PCR. Os estudos permitem concluir que os SCN são os agentes etiológicos mais prevalentes relacionados com mastite subclínica em ovelhas leiteiras e sua presença tem correlação com CCS elevada. A determinação da CCS através de método manual demonstra que esta é uma ferramenta aplicável à espécie ovina. Além de se constituir em problema de sanidade animal, a mastite ovina, tem como consequência perdas econômicas ao produtor, SCN possuem potencial zoonótico, destacando a importância destes micro-organismos na saúde pública, tornando primordial a identificação destes agentes, através de ferramentas genotípicas seguras e confiáveis. / The mastitis is one of the major problems related to breeding of milk sheep due to the economic losses arising from the reduction in production, expenditure on medication and loss of animals. The Somatic Cell Count (SCC) and bacterial isolation are diagnostic tools indicative of mammary gland’s health that can be determined by automated method and manual method, through the counting of cell under a microscope, whereupon there are discussions concerning the appropriated staining to the ewe’s milk due to different cellularity in this species. This thesis comprises three studies that aim to make the diagnosis of subclinical mastitis in dairy sheep in Rio Grande do Sul - Brazil in a total of 315 milk samples originated from cases of this disease in dairy sheep. [Chapter 2] It were used 116 samples to identify and validate a method for microscopic SCC suitable for ovine specie. Therefore, were made glass slides for smear of 10 μL of milk in 1 cm2, where were tested xylol fixers and Carnoy solution and May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wright (W) and Panotic (P) dyes. Carnoy solution was elected, because this one allowed a better fixation of the milk film to the microscope slides, and BP staining as it allowed a good staining and visualization of cells and the differentiation of cytoplasmic corpuscles. The SCC values ranged from 2,6x104 to 4,4x106 cells.mL-1 and 1,9x104 to 8,1x106 cells.mL-1, respectively by automatic and microscopic methods. [Chapter 3] The purpose of this chapter was to determine the occurrence of subclinical mastitis in dairy sheep flock, by bacterial isolation and SCC. It was determined also the composition (fat, lactose, protein and total solids) of milk and the relationship between these parameters and the presence of mastitis. In order to do that, were collected 315 milk samples, individualized by teat, of which 85 (27%) were identified as subclinical mastitis and Staphylococcus coagulase negative (SCN) was the prevalent agent (64.7%), followed by Staphylococcus coagulase positive (SCP) (19. 1%). The SCC ranged from 2,5x103 to 9,3x106. There was significant higher SCC (p <0.0001) in samples with bacterial isolation. However, the same was not observed between the composition parameters. There was no correlation between the composition parameters and SCC. [Chapter 4] This chapter aims to identify the species of CNS in 32 isolated from cases of subclinical mastitis in sheep by PCR-RFLP and sequencing of the gap gene and determine the susceptibility of isolates face to nine antimicrobials, by disk agar diffusion technique. Four profiles were obtained in sequencing, revealing the presence of three species of SCN: Staphylococcus epidermidis (59.4%), Staphylococcus chromogenes (34.4%) and Staphylococcus devriesei (6.2%), first described in the south region of the country in cases of sheep mastitis. All isolates were susceptible to cephalothin, ceftiofur and penicillin + novobiocin. Twenty-one isolates (65.6%) showed resistance to at least one antimicrobial agent and eleven isolates (34.4%) were susceptible to all tested agents. Four isolates (12.5%) had multidrug resistance and, among these, an isolated of S. epidermidis was resistant to oxacillin, confirmed by amplifying the mecA gene by PCR. The studies support the conclusion that the SCN are the most prevalent etiologic agents related to subclinical mastitis in dairy sheep and their presence correlates with high SCC. The determination of SCC through manual method demonstrates that this tool is applicable to the ovine species. Besides being an animal health problem, the sheep mastitis results in a economic losses to producers, SCN have zoonotic potential, highlighting the importance of these microorganisms in public health, making it crucial to identify these agents through secure and reliable genotypic tools.

Objetivou-se verificar a relação entre a contagem de células somáticas do leite bovino ordenhado separadamente de quartos mamários com a qualidade físico-química do leite, em especial com o leite instável não ácido (LINA). Foram utilizadas 21 vacas das raças Holandês e Jersey, sendo selecionados a partir do teste do CMT os animais que apresentaram pelo menos um quarto mamário normal e os demais quartos com mastite subclínica. Realizou-se análise microbiológica, identificação dos agentes e, durante quatro dias consecutivos, as vacas foram ordenhadas com uma ordenhadeira especial de quartos individuais avaliando a produção, composição química, contagem de células somáticas (CCS) e análise física do leite. O principal agente isolado no leite foi o Corynebacterium sp. (27,38%). Ocorreu diminuição de 21,65% na produção de leite dos quartos com CCS acima de 750.000cél/mL. A instabilidade do leite não apresentou variação significativa dos quartos saudáveis em comparação com os quartos mastíticos. Dentre os componentes químicos do leite, o teor de lactose diminuiu à medida que ocorreu o aumento da CCS e não houve variação significativa nos teores de gordura, proteína bruta, sólidos totais e sólidos desengordurados. Houve variação significativa dos componentes do leite nas diferentes raças. Não houve relação entre a mastite subclínica e o LINA. / This study assessed the relationship between milk somatic cell count from different mammary quarters of cows with subclinical mastitis with physical and chemical milk quality, especially unestable non acid milk (UNAM). Twenty-one Holstein and Jersey cows were used which had at least one healthy quarter and the others with subclinical mastitis. Microbiological analysis was performed and the agents were identified. Cows were milked with a special milking machine which separate milk from each quarter for four consecutive days. Milk samples were collected to evaluate production, chemical composition, somatic cell count (SCC) and physical characteristics. The main agent identified in the milk was Corynebacterium sp. (27,38%). There was a decrease of 21,65% in quarter milk production of cows with SCC above 750.000cél/mL. Milk instability did not vary significantly from healthy quarters compared with mastitis. Among milk chemical components, lactose decreased as the SCC increased and there were no significant variation in levels of fat, protein, total solids and non-fat solids. There were significant variations in the components of milk in different breeds. There was no relationship between subclinical mastitis and UNAM.

A mastite lactacional é um processo inflamatório da mama que pode, ou não ser acompanhada de infecção, causa manifestações clínicas desconfortáveis, contribuindo para o desmame precoce, onerando os custos no cuidado, tornando-se um problema de saúde pública. Este estudo teve como objetivo propor uma nova ficha de registro para mulheres que internam por mastite lactacional no município de Ribeirão Preto, com base na prática assistencial e evidências científicas. Foi desenvolvido em três fases, a primeira buscou informações para o tratamento de mulheres que necessitaram de internação na rede pública hospitalar do município de Ribeirão Preto em registros do projeto \"Floresce uma vida\", vinculado ao Programa de Aleitamento Materno de Ribeirão Preto e em prontuários médicos, a segunda visou a buscar evidências científicas para o tratamento de mastite lactacional através de revisão integrativa de literatura e a terceira fase constou de uma nova proposta de ficha para registro de mulheres que necessitam de internação no município de Ribeirão Preto. A fase I mostrou o perfil de 114 mulheres internadas para tratamento de mastite lactacional na rede pública de referência entre os anos de 2009 a 2013. As características dos dados sociodemográficos não coincidem com o que vem sendo descrito na literatura atual. Em relação aos dados obstétricos o estudo mostrou que as mais acometidas são as primíparas e que a maioria teve alguma intercorrência frente à amamentação antes da necessidade de internação, 62 (54,4%) mulheres tiveram abscesso mamário, 27 (51,9%) tiveram resultado de Staphylococcus aureus e 21(18,4%) desmamaram em consequência do abscesso. A terapêutica para mastite lactacional uniu medicação tópica, sistêmica e terapêutica complementar. A fase II selecionou nove artigos que respondiam à questão do estudo entre 2000-2013, as terapêuticas encontradas para mastite lactacional foram alternativas com probióticos, convencional e para abscessos. A fase III validou a nova \"Ficha de registro da assistência à mulher na amamentação durante a internação por intercorrências mamárias\" com a concordância de especialistas entre 80% e 100%. Este estudo uniu a prática assistencial e evidências científicas como base na formulação de um instrumento com o objetivo de identificar práticas não aceitáveis para mastite lactacional, proporcionando aos profissionais de saúde melhores informações no desenvolvimento de sua prática clínica / Lactational Mastitis is an inflammation of the breast that may or may not be accompanied by infection, cause uncomfortable clinical manifestations, contributing to early weaning, burdening the cost in care, making it a public health problem. This study aimed to propose a new record form to women hospitalized for lactational mastitis in Ribeirão Preto, based on care practice and scientific evidence. Was developed in three phases, the first information sought for the treatment of women who required hospitalization in the public health hospitals in Ribeirão Preto in the \"Bloom a Life\" project, linked to the Breastfeeding Program of Ribeirão Preto, and hospital records, the second aimed sought scientific evidence for the treatment of lactational mastitis through integrative literature review and the third phase included a new proposal of a record form for women who require hospitalization in Ribeirão Preto. Phase I showed the profile of 114 women hospitalized for treatment of lactation mastitis in public reference hospitals between the years 2009 and 2013. A Sociodemographics characteristic of the data does not coincide with what has been described in the literature. Regarding obstetric data the study showed that the most affected are the primiparous women and the majority had some complication towards breastfeeding before hospitalization, 62 (54.4%) women had breast abscess, 27 (51.9%) of the breast milk was colonized by Staphylococcus aureus and 21 (18.4%) weaned as a result of the abscess. The treatment for lactational mastitis attached topical, systemic therapy and complementary medicine. Phase II selected nine articles that answered the question of the study between 2000-2013, the therapeutic lactational mastitis were with three categories: alternate with probiotics, conventional and abscesses. Phase III validated the new \"Registration Card assisting women with breastfeeding during hospitalization for breast complications\" with the agreement of experts from 80% to 100%. This study joined the healthcare practice and scientific evidence as a basis in formulating an instrument in order to identify unacceptable practices for lactational mastitis, providing healthcare professionals information on the development of best clinical practice

As mamites ou mastites, processos inflamatórios da glândula mamária, foram consideradas responsáveis por grandes prejuízos na pecuária leiteira; para a instalação das mamites considerou-se ser necessária a interação de dois fatores etiológicos fundamentais. Os fatores etiológicos predisponentes a instalação de um processo inflamatório da glândula mamária podem ser divididos em: condições ligadas à fisiologia dessa glândula (descida do leite, aumento do volume de leite residual e velocidade de ordenha); condições relacionada à estrutura anatômica do úbere e favorecendo a ocorrência de traumatismos (alterações morfológicas da mama, incluindo os tetos, edema e congestão mamária) e associação a condições predisponentes ligados a enfermidades sistêmicas ou da própria mama (afecções, infestações e infecções). A perfeita descida do leite permite uma adequada ordenha da vaca, restando nestas circunstâncias apenas um pequeno volume de secreção láctea nas cisternas da glândula e no sistema de ductos galactóforos, favorecendo a higidez do órgão. A retenção de maior volume de leite nos ductos e ácinos glandulares foram consideradas por si só indutora de inflamação do tecido epitelial de revestimento interno da mama, sendo por isso considerado significativo fator predisponente à colonização e desenvolvimento de infecções bacterianas intramamárias. Objetivou-se avaliar a influência da retenção láctea nos constituintes físico-químicos, bioquímicos, celulares e microbiológicos da secreção da glândula mamária de bovinos. As vacas utilizadas nesta pesquisa foram selecionadas em um rebanho criado e mantido no Estado de São Paulo (Natividade da Serra), produtor de leite e cujo manejo leiteiro utiliza o sistema manual de ordenha, com duas ordenhas diárias. As vacas selecionadas permitiram a formação de três grupos experimentais seguir: Grupo Experimental - G1, vacas submetidas a 10% de retenção de leite; Grupo Experimental - G2, vacas submetidas a 15% de retenção de leite e Grupo Experimental - G3, vacas submetidas a 20% de retenção de leite. Os parâmetros lácteos estudados foram as determinações físico-químicas (pH, eletrocondutividade, concentração de cloretos e calculo do índice cloreto/lactose); dosagens bioquímicas do leite (teores de gordura, proteína, lactose e sólidos totais); caracterização das células somáticas (avaliação indireta do número de células e contagem eletrônica dessas células) e; avaliação microbiológica das amostras de leite. A análise dos resultados obtidos permitiu concluir que: a retenção láctea determinou variações significativas na constituição físico-químicas, bioquímicas e microbiológica do leite; os valores da eletrocondutividade, das concentrações lácteas de cloreto, do índice cloreto/lactose e a freqüência de isolamentos bacteriológicos positivos aumentaram significativamente com o aumento do período de retenção; em contraposição os teores lácteos de lactose diminuíram; os valores dos teores de cloreto e índice cloreto/lactose aumentaram de forma diretamente proporcional ao aumento do volume da retenção láctea, os demais parâmetros foram influenciados pela retenção, independentemente do volume de leite retido; o número de células somáticas do leite não sofreu variações que pudessem ser atribuídas à retenção láctea; porém a avaliação qualitativa da celularidade determinada pelo CMT demonstrou que a retenção láctea determinava o aparecimento de escores de maior magnitude, retornando aos escores iniciais negativos após a supressão da retenção; a retenção láctea, independentemente do seu volume, determinou aumento marcante da freqüência de isolamentos bacteriológicos positivos, e em muitos casos, o isolamento ocorria, também, após a supressão da retenção láctea; comprovou-se a existência de correlação positiva e significante entre as seguintes variáveis estudadas: teor de cloreto e eletrocondutividade; índice cloreto/lactose e teor de cloreto; índice cloreto/lactose e eletrocondutividade e; concentração de sólidos totais e de gordura. A correlação foi negativa e significante entre: teor de lactose e eletrocondutividade e concentração de lactose e cloreto; as manifestações clínicas da retenção láctea, detectadas pela determinação de alterações dos elementos constituintes do leite e a freqüência de isolamentos, caracterizou um processo inflamatório incipiente, representando um fator etiológico predisponente à ocorrência de mamites; pelo desempenho das provas utilizadas para a avaliação dos efeitos da retenção láctea na secreção da glândula mamária, recomendou-se para complementação do exame físico da mama a realização dos seguintes exames subsidiando o diagnóstico clínico: prova do CMT, determinações da eletrocondutividade, dos teores de cloreto e lactose, com cálculo do índice cloreto/lactose e isolamento microbiológico com identificação das cepas bacterianas isoladas. / Mastitis, the inflammatory process of the mammary gland is responsible for great losses in dairy production. Factors that predispose the mammary gland to mastitis may be divided into: conditions connected to the physiology of milk (milk release, increase in the volume of residual milk and speed of milking); conditions related to the anatomy of the udder, favoring the occurrence of injuries (morphological changes of the udder and teats, mammary edema and congestion); association with predisposing conditions of systemic or mammary diseases (illnesses, infestation and infections). The perfect release of milk enables adequate milking of the cow. In this kind of circumstance, little residual milk is present in the cistern of the gland and in galactophorous ducts, leading to a healthy udder. Retention of greater volume in ducts and glandular acini have been considered, per se, as capable of inducing inflammation of internal epithelial tissue of the mammary gland, and because of this, retention milk is considered as a significant predisposing factor to the colonization and development of intramammary bacterial infections. The objective of the present trial was to evaluate the influence of milk retention on physical-chemical, biochemical, cellular and microbiological characteristics of bovine milk. Animals used in the present study were selected from a herd bred and kept in the state of Sao Paulo, in the city of Natividade da Serra. Cows were milked manually twice a day. Three experimental groups were formed: G1, with 10% of milk retention; G2, with 15% of milk retention and G3, with 20% of milk retention. The following physical-chemical parameters were studied (pH, electroconductivity, chloride concentration and chloride / lactose rate); biochemical analyses were: fat, protein, lactose and total solid contents; somatic cell characterization (indirect evaluation of the number of cells and electronic cell count) and microbiological evaluation of the samples. The analysis of the results enabled the following conclusions: milk retention determined significant variations in the physical-chemical, biochemical and microbiological characteristics of the milk. Electroconductivity, chloride content, chloride / lactose rate and frequency of samples positive in bacterial isolation significantly increased with greater milk retention periods. On the other hand, increase in milk retention volume led to decreased lactose content and increased chloride content and chloride / lactose rate. The rest of the parameters were influenced by retention, no matter the volume of milk retained. The number of somatic cells in milk was not affected in a way that changes could be attributed to milk retention. However, the qualitative evaluation of cells as determined by CMT demonstrated that milk retention determined greater scores, and initial negative scores were obtained with the suppression of retention. Milk retention, no matter the volume, determined a marked increased in the frequency of positive bacterial isolation, and in many cases, isolation also occurred after retention was suppressed. There was a positive and significant correlation between the following variables: chloride content and electroconductivity; chloride / lactose rate and chloride content; chloride / lactose rate and electroconductivity; total solid and fat content. Negative significant correlations were observed between lactose content and electroconductivity; and lactose and chloride contents. Clinical signs of milk retention as detected by changes in milk constituents and frequency of isolation demonstrated an incipient inflammatory process, and milk retention was then considered to be a predisposing etiological factor to the occurrence of mastitis. Due to the performance of the tests used in the evaluation of the effects of milk retention in the mammary gland, it is recommended that in order to aid clinical diagnosis, physical examination of the udders should be performed together with CMT, electroconductivity, chloride and lactose contents, calculation of chloride / lactose rate and microbiological examination with identification of strains isolated.

O presente trabalho teve como objetivo a análise microbiológica das amostras de leite de fêmeas bubalinas, a avaliação da quantidade de UFC/mL dos microrganismos isolados e a contagem de células somáticas/mL. Os quartos mamários foram submetidos ao teste de tamis e CMT e foram colhidas 262 amostras de leite de fêmeas bubalinas primíparas e pluríparas; para análise microbiológica, quantificação das UFC/mL e contagem de células somáticas/mL. A contagem das células somáticas foi realizada através da leitura em microscopia ótica dos esfregaços de leite. A leitura foi realizada utilizando-se a totalidade dos campos existentes no esfregaço de 1cm2. No teste do tamis, 99,6% das amostras apresentaram resultado negativo. No CMT, observamos resultado negativo em 88,2% das amostras; traços (8%), positivo 1+ (1,5%); positivo 2+ (1,15%); positivo 3+ (1,15%). A análise microbiológica apresentou amostras sem crescimento de microrganismos (75,6%); isolamento de Staphylococcus spp. (11,8%); Corynebacterium spp. (7,3%); Streptococcus spp, (3,1%) e crescimento de microrganismos associados (1,2%). A contagem total de células somáticas das amostras avaliadas apresentou mediana de 2300 células/mL de leite; a mediana da contagem de PMN e MN foi, respectivamente, 700 células/mL e 1500 células/ml de leite, com diferença estatisticamente significante (P<0,0001). As quantidades totais de células somáticas/mL e as quantidades de células polimorfonucleares e mononucleares nas amostras negativas ao exame microbiológico foram estatisticamente menores do que nas amostras que apresentaram isolamento de microrganismos. A mediana relativa às quantidade de UFC/mL foi de 550 UFC/mL para as amostras com isolamento de Corynebacterium spp.; 500 UFC/mL para as amostras com isolamento de Staphylococcus spp e 1100 UFC/mL para Streptococcus spp. ,sendo que não houve diferença estatisticamente significativa entre eles. Concluiu-se que a espécie bubalina, apresenta baixos índices de mastite; nas amostras com isolamento de microrganismos, o número de UFC/mL é pequeno.Existe um número de animais que apresenta resultado positivo no exame microbiológico do leite, sem contudo apresentar sinais de processo inflamatório. / The aim of the present study was the microbiological analysis of milk samples from female buffaloes, the amount evaluation of CFU/mL of the isolated microorganisms and the somatic cells counting/mL. The mammary quarters were submitted to strip cup test and CMT and 262 milk samples were colletected from buffalo cows to microbiological analysis, CFU/mL quantification and somatic cells counting. The somatic cells countings were obtained through optical microscopy reading of the milk smears, where all fields of the 1 cm2 smears area were considered. In the strip cup test, 99,6% of the samples had negative results. In the CMT, the negative results were observed in 88,2% of the samples; traces (8%), 1+ positive (1,5%), 2+ positive (1,15%) and 3+ positive (1,15%). The microbiological analysis resulted in samples with no microorganism growth (75,6%); Staphylococcus spp (11,8%); Corynebacterium spp (7,3%) and Streptococcus spp (3,1%) and associated microorganisms growth (1,15%). The total counting of somatic cells in the evaluated milk samples showed median of 2300 cells/mL; while PMN and MN counting median were 700 cells/mL and 1500 cells/mL respectivelly, with a significant statisticall difference (P< 0,0001). The total somatic cells counting/mL and the amount of PMN and MN cells in the microbiological negative samples were statistically smaller than the findings in the samples that showed microorganism isolation. Concerning the amount of CFU/mL, the median obtained for samples with Corynebacterium spp was 550CFU/mL; 500 CFU/mL for Staphylococcus spp samples and 1100 CFU/mL for Streptococcus spp results, with no statiscally significant difference between them. It follows that he buffalo species has a low rate of mastitis; the number of CFU/mL is small in the microbiological positive samples. There are a number of animals that despite presenting milk microbiological exam with positive results, showed no signs of inflamatory process.