A mastite bovina é considerada a doença que causa os maiores prejuízos à produção leiteira, reduzindo em quantidade e qualidade o leite e os derivados lácteos. Especialmente na mastite clínica, ocorre aumento no risco de resíduos de antimicrobianos no leite, portanto além do prejuízo diretamente relacionado ao processo inflamatório, acrescenta-se o custo com medicamentos, aumento do labor da mão-de-obra e tempo de descarte do leite após tratamento, até a total eliminação os resíduos de antibióticos utilizados. A expansão dos sistemas de produção pecuária orgânica aumenta a necessidade de utilizar métodos diferentes daqueles conhecidos convencionalmente.A homeopatia é uma terapêutica que tem sido cada vez mais utilizada em animais de produção com resultados bastante satisfatórios. No Brasil a produção orgânica é regulamentada pela Lei No10.831 de 23 de dezembro de 2003 e lá há orientação para o uso de medicamentos homeopáticos, assim como fitoterapia e acupuntura na terapêutica animal, em lugar dos medicamentos convencionais, que têm seu uso muito restrito e em certos casos proibido. Para realização deste trabalho foi feita uma inoculação intramamária experimental com estirpes de Staphylococcus aureus em 36 quartos mamários de 18 vacas mestiças de Holandesas e Gir pertencentes ao Campo Experimental de Coronel Pacheco/MG da Embrapa/CNPGL, com o objetivo de comparar o tratamento de animais acometidos com a utilização de medicamentos homeopáticos (Phytolacca decandra 6CH, Calcarea carbonica 6CH e Silicea terra 6CH) e com antibiótico (Cefoperazone Sódico), usando como parâmetros para este estudo: os sinais clínicos, a prova de CMT, as contagens de células somáticas , tanto eletrônicas quanto ópticas e culturas microbiológicas, além da avaliação do custo dos dois tratamentos. No presente estudo não houve diferença estatisticamente significante quanto à intensidade do processo inflamatório avaliados pelo CMT e contagens de células somáticas, quanto ao número de unidades formadoras de colônias isoladas do leite das glândulas mamárias inoculadas e entre período de convalescença dos dois tratamentos. O custo de aquisição dos medicamentos para o tratamento de mastite aguda utilizando homeopatia foi muito inferior ao mesmo tratamento realizado com antibiótico intramamário / The bovine mastitis is considered the illness that causes most losses in milk production, reducing the quantity and quality of milk and dairy products. Especially in clinical mastitis there is an increase on the risk of antimicrobials in milk. Therefore, beyond the losses directly related with the inflammatory process, there is also the expense with drugs, an increase in the animal handling and a discard of milk after the antibiotics treatment, up until the totally elimination of the drug residues. The expansion of organic animal production systems increases the necessity of using different methods of those already conventionally known. Homeopathy is a therapeutically method that has been more used in livestock with satisfactory results. In Brazil, organic production is regulated by the law number 10.831 of December 23rd of 2003, where there is an orientation for using homeopathic medicines as well as phytotherapy and acupuncture in animal health instead of conventional medicines which are restricted in many cases and sometimes even forbidden. In order to develop this research it was done an experimentally intramammary inoculation with a strain of Staphylococcus aureus in 36 mammary gland quarters of 18 cows cross-bred with Holstein and Gir from the Experimental Fields of Coronel Pacheco/MG of Embrapa/CNPGL. The purpose was to compare the treatment of the inoculated animals with homeopathy (Phytolacca decandra 6CH, Calcarea carbonica 6CH and Silicea terra 6CH) and antibiotic (Sodic Cefoperazone). The parameter used for this study were clinical signs, CMT, counting of somatic cells electronically in as much as using the optical method and microbiological cultures. It was also estimated the costs of both treatments. At the present study there was no statistical difference in intensity of the inflammatory process evaluated by the CMT and somatic cell counts, by the number of CFU isolated from milk of the inoculated mammary glands and between the times of convalescence in both treatments. The cost of acquisition of medicines for the treatment of acute mastitis using homeopathy was very lower when compared with the same treatment done with intramammary antibiotics

A mastite bovina é considerada a enfermidade de maior impacto na pecuária leiteira mundial. Apesar da adoção de práticas de manejo para minimizar a ocorrência desta, os resultados não são satisfatórios para o controle de Staphylococcus aureus, o principal agente causador. Além da importância veterinária, possui implicações na saúde humana devido ao uso extensivo de antibióticos no tratamento e controle da doença e devido ao potencial de disseminação zoonótica de S. aureus. A principal preocupação em relação à resistência aos antimicrobianos é referente à meticilina, mediada pelo gene mecA. Estudos moleculares são importantes para o conhecimento da diversidade genética dos agentes causadores de mastite. A tipagem por sequenciamento de um único locus, do gene da região X da proteína A de S. aureus (spa Typing), tem sido utilizada com sucesso para investigar estrutura populacional, sendo adequada para estudos epidemiológicos. O presente projeto teve como objetivo pesquisar o perfil de resistência aos antimicrobianos e a presença de genes de resistência à meticilina e de S. aureus isolados de mastite bovina, além de compreender a diversidade genética, identificar possíveis novos perfis e conhecer a distribuição destes isolados. Os resultados encontrados foram a ausência de resistência à meticilina no antibiograma, confirmada pela ausência do gene mecA, e a baixa prevalência de multirresistência aos antimicrobianos testados. Apesar de mais de 58,74% dos isolados (242/412) serem resistentes a pelo menos um antibiótico, 53,64% (221/412) correspondem a resistência à ampicilina. Foram determinados 44 spa tipos diferentes, sendo os três mais frequentes t605 (57,45%), t002 (8,4%) e t127 (8,13%). Não houve associação entre a distribuição dos spa tipos e as variáveis analisadas de ano, estado, município e fazenda, e perfil de resitência aos antibicrobianos. Este é o primeiro estudo que utiliza o spa typing para avaliar uma coleção temporalmente diversa e, portanto, representativa da região estudada ao longo de 22 anos. Logo, espera-se que a descrição dos tipos de S. aureus obtidos contribua para a compreensão dos aspectos epidemiológicos envolvidos na transmissão do patógeno e do papel dos hospedeiros como reservatórios para linhagens resistentes. Tal compreensão é imprescindível para a prevenção, controle e tratamento da mastite bovina. / Bovine mastitis is considered the disease of greatest impact in global dairy industry. Despite the adoption of management practices to minimize its occurrence, the results are not satisfactory for the control of Staphylococcus aureus, the major causative agent. Besides veterinary importance, there are also implications for human health due to the extensive use of antibiotics in treatment and control of the disease and due to the potential for zoonotic spread of S. aureus. The main concern regarding antimicrobial resistance is methicillin resistance mediated by the mecA gene. Molecular epidemiology studies are important for the understanding of the genetic diversity of the causative agents of mastitis. Typing by sequencing of a single locus of the X region gene of the S. aureus protein A (spa Typing) has been successfully used to investigate population structure. This project aims to investigate the antimicrobial susceptibility profile and the presence of methicillin resistance genes in S. aureus isolated from bovine mastitis, in addition to understanding the genetic diversity, identifying possible new profiles and knowing the distribution of these isolates. The results obtained to the present were the absence of methicillin resistance in the antibiogram, confirmed by the absence of mecA gene, and the low prevalence of multidrug resistance to antimicrobials. Even though resistance to at least one antibiotic was present in more than 58,74% of the isolates (242/412), ampicillin resistance corresponds to 53.64% (221/412). Different spa types were determined, the three most frequent being t605 (57.45%), t002 (8.4%) and t127 (8.13%). There was no association between the spa type distribution and the variables of year, state, municipality, farm, and antibiotic resistance profile analyzed. This is the first study that uses spa Typing to evaluate a collection as temporarily diverse and representative of the region studied in 22 years. Therefore, it is expected that the results of this study, by allowing comparison of the profile of S. aureus from different sources (animals and property), will contribute to the understanding of the epidemiological aspects involved in the transmission of the pathogen and the role of hosts as reservoirs for pathogenic strains. Such understanding is essential for the prevention, control and treatment of bovine mastitis

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2017-07-26T14:34:03Z No. of bitstreams: 1 2012 - Elaine Concei??o Liporage de Mendon?a.pdf: 3515906 bytes, checksum: ebf489151f2cd6961ddeeb292cd910a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-26T14:34:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Elaine Concei??o Liporage de Mendon?a.pdf: 3515906 bytes, checksum: ebf489151f2cd6961ddeeb292cd910a7 (MD5) Previous issue date: 2012-03-16 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The use of antibiotic in the control of intramammary infections and in the elimination of its possible sources in dairy farms is an important control measure. However, the inappropriate use of antibiotics can result in the appearance of resistant strains and compromise the efficiency of the treatment. Besides Staphylococcus spp. are among the main pathogens of bovine mastitis, they are often resistant to antibiotics, especially beta-lactamics, mainly by two distinct mechanisms: the production of extracellular enzyme beta-lactamase, encoded by the blaZ gene, and production of PBP2a or PBP2 ' a penicillin-binding protein with low affinity, encoded by the mecA gene. The expression of mecA gene is constitutive or induced by beta-lactamic antibiotics, such as oxacillin and cefoxitin. The mecA gene is inserted into the chromosome through a staphylococcal mobile genetic element, called staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec). The present study evaluated the phenogenotypical resistance profile to betalactam antibiotics of 250 Staphylococcus spp. isolates, using oxacillin and cefoxitin as markers in order to produce data to the knowledge of resistance in dairy farms located in the South-Fluminense and the Metropolitan regions of the State of Rio de Janeiro to support the implementation of measures to control this disease. The assessment of resistance was made through 8 different phenotypic tests and yielded 54 profiles. Disk diffusion and agar screen with oxacillin were used as "gold standard" for the calculation of sensitivity, specificity and prediction once they are recommended by the CLSI veterinarian as standardized tests. Disk diffusion with cefoxitin achieved the best performance in the prediction of oxacillin resistance. Genotypic detection of mecA do not provided any positive isolate, otherwise mecI and mecRI genes were also detected in 11.6% (29/250) of the studied Staphylococcus spp. Four cassette mec types were detected (I, II, III and IV), being type I the most disseminated one. Gene blaZ was detected in 5.2% (13/250) isolates. From these 13 blaZ positive isolates, the whole system comprising blaR1-blaI-blaZ was detected in 23.1% (3/13) isolates / MENDON?A, Elaine Concei??o Liporage. Caracteriza??o fenogenot?pica da resist?ncia antimicrobiana em Staphylococcus spp. isolados de mastites cl?nicas e subcl?nicas em unidades leiteiras de munic?pios do Rio de Janeiro como subs?dio para implementa??o de medidas de controle. 89 p. Disserta??o (Mestrado em Ci?ncias Veterin?rias). Instituto de Veterin?ria, Departamento de Parasitologia Animal, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Serop?dica, RJ, 2012. A utiliza??o de antibi?ticos no controle das infec??es intramam?rias e na elimina??o de prov?veis fontes de infec??o nas fazendas leiteiras se constitui em importante medida de controle. No entanto, o uso inadequado de antibi?ticos no tratamento da doen?a pode gerar o aparecimento de cepas resistentes e comprometer a efici?ncia do tratamento. Bact?rias do g?nero Staphylococcus spp. est?o entre os principais agentes etiol?gicos da mastite bovina e s?o freq?entemente resistentes aos antimicrobianos, em especial aos beta-lact?micos, principalmente por dois mecanismos distintos: a produ??o da enzima extracelular beta-lactamase, codificada pelo gene blaZ, e a produ??o de PBP2a ou PBP2?, uma prote?na ligante de penicilina de baixa afinidade, codificada pelo gene mecA. A express?o do gene mecA ? constitutiva ou induzida por antibi?ticos betalact?micos, como a oxacilina e cefoxitina. O gene mecA est? inserido no cromossomo estafiloc?cico atrav?s de um elemento gen?tico m?vel, denominado cassete estafiloc?cico cromoss?mico mec (SCCmec). O presente estudo avaliou o perfil fenogenot?pico de resist?ncia aos beta-lact?micos em 250 isolados de Staphylococcus spp, utilizando os marcadores oxacilina e cefoxitina, de modo a produzir dados que possam contribuir para o conhecimento da resist?ncia antimicrobiana em algumas propriedades leiteiras das regi?es Sul-Fluminense e Metropolitana do Estado do Rio de Janeiro com o objetivo de subsidiar a implementa??o de medidas de controle dessa enfermidade. A avalia??o da resist?ncia foi feita a partir de 8 diferentes testes fenot?picos, sendo obtidos 54 perfis. Os testes de difus?o em disco simples e ?gar screen com oxacilina foram utilizados como ?padr?o ouro? para os c?lculos dos valores de sensibilidade, especificidade e predi??o por serem preconizados pelo CLSI veterin?rio. O teste de difus?o em disco simples com cefoxitina foi o de melhor desempenho na predi??o da resist?ncia a oxacilina. Na avalia??o genot?pica, n?o foi detectado qualquer isolado positivo para o gene mecA, j? os genes mecI e mecRI foram detectados igualmente em 11,6% (29/250) dos Staphylococcus spp avaliados. Foram detectados os quatro tipos de cassete mec analisados (I, II, III e IV), sendo o tipo I o que teve mais ampla distribui??o entre as regi?es estudadas. Gene blaZ foi detectado em 5,2% (13/250) dos isolados, sendo que nestes, todo o sistema blaZ-blaI- blaR1 foi detectado em 23,1% (3/13) dos isolados.

O presente estudo objetivou-se avaliar o perfil das citocinas como indicador prognóstico em diferentes protocolos de tratamento da mamite bovina. De um total de 130 vacas em lactação da raça holandesa foram selecionadas cinco vacas sem alteração ao exame do leite (C-), cinco vacas sem grumos no leite, mas com CMT positivo e 30 vacas com mamite clínica. Os animais com mamite clínica foram alocados em três grupos. O grupo G1 (n=10) recebeu tratamento com antibiótico sistêmico (enrofloxacina), enquanto o grupo G2 (n=10) recebeu somente antibiótico intramamário (sulfato de cefquinoma) e o grupo G3 (n=10) foi tratado com os dois princípios (enrofloxacina sistêmico e sulfato de cefquinoma intramamário). Os grupos controle foram formados respectivamente por animais negativos para as duas provas (C1; n=5), e negativos para a prova de fundo escuro e positivos para CMT (C2; n=5). Amostras de leite e sangue foram colhidas antes do tratamento (M0) e no segundo (M1), quinto (M2) e décimo segundo dia (M3) após o término do tratamento para serem submetidas a exame bacteriológico do leite, antibiograma do leite, dosagem de citocinas no leite e no sangue (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α INF-γ) e dosagem de imunoglobulinas no leite e no sangue (IgG1, IgG2, IgM e IgA). Foi verificada a normalidade da distribuição dos resultados, utilizando-se teste de Anderson-Darling. Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, foram realizados os testes de análise de variância ANOVA One-way (Unstacked) (para dados com distribuição normal) e Mann-Whitney (para dados que não apresentaram distribuição normal), sendo as análises consideradas significativas as que apresentaram P≤0,05. Todos os animais do G3 apresentaram cura clínica e 80% cura bacteriológica nos momentos subsequentes ao tratamento (M1a M3). Ao se avaliar a resposta imunológica desse grupo, notou-se primeiramente o aumento de IL-6 sérico no M1 acompanhado de IgG1 e IgG2, os quais juntamente com o aumento de IL-4 e TNF-α perpetuaram a inflamação até o M2, enquanto que na glândula mamária já se iniciava a resolução da inflamação com o aumento de IL-10. Por outro lado, os animais do grupo G2 apresentaram cura clínica e bacteriológica no M1, porém esta não se manteve. Imunologicamente, após o tratamento, o perfil predominante desse grupo foi o Th2 com aumento de IgG1 e IL-4. Ao final do experimento, alguns animais do grupo G2 voltaram a manifestar a doença clinicamente, e tal fato foi acompanhado da diminuição das concentrações de IL-4, IgG1 e de IL-6 no leite. Nos animais do grupo G1 houve cura clínica não absoluta e 40% de cura bacteriológica no M3. Imunologicamente, observou-se altos níveis de IL-6 e IL-8 no leite durante todo o período de tratamento e diminuição de IgG2 sérico no M3 correlacionado negativamente com a IgG2 láctea, caracterizando uma resposta local tardia. Os resultados permitem inferir que o acompanhamento por mais de duas semanas da dinâmica da resposta imunológica depende da eficiência do protocolo antimicrobiana para se estabelecer um prognóstico. Além disso, a definição precoce da resposta imune pode ser dificultada pelo mais intenso tratamento antimicrobiano observado nos animais do tratamento combinado (G3) sendo insuficiente para debelar precocemente a infecção quando usado um tratamento antimicrobiano ineficiente. / The present study aimed to evaluate the cytokine profile as a prognostic in different treatment of bovine mastitis indicator. A total of 130 lactating cows of Holstein cows five without change to the examination of milk (C -), five cows in milk without lumps , but with positive CMT and 30 cows with clinical mastitis were selected . Animals with clinical mastitis were divided into three groups. The G1 (n = 10) received treatment with systemic antibiotics (enrofloxacin), while the G2 (n = 10) received only antibiotic intramammary (Cefquinome sulfate) and G3 (n = 10) group was treated with the two principles (systemic enrofloxacin and intramammary cefquinome sulfate). Control groups were formed respectively by the two negative tests (C1, n = 5) animals, and negative for evidence of dark and positive background for CMT (C2, n = 5). Milk and blood samples were collected before treatment (M0) and second (M1) , fifth (M2) and the twelfth day (M3) after completion of treatment to undergo bacteriological examination of milk , milk antibiogram, dosage cytokines in milk and blood (IL-1 , IL-2 , IL-4 , IL-6 , IL-8 , IL-10 , TNF- α IFN- γ ) and serum immunoglobulin in milk and blood (IgG1 , IgG2 , IgM and IgA) . Normal distribution of the results was verified using the Anderson- Darling test. For the evaluation of differences between the means of the results obtained , tests of ANOVA One -way (unstacked) (for data with normal distribution) and Mann - Whitney test ( for data that were not normally distributed) were performed and the analyzes considered significant if P ≤ 0.05 showed that . All G3 animals showed clinical cure and bacteriological cure in 80 % subsequent to treatment time (M1a M3). In evaluating the immune response of this group was noted primarily increased serum IL-6 in M1 together with IgG1 and IgG2, which together with the increased IL -4 and TNF- α to perpetuate inflammation M2 while mammary gland that has already started the resolution of inflammation with increased IL-10. On the other hand, the G2 group showed clinical and bacteriological cure in M1, but this was not maintained. Immunologically, after treatment, the predominant profile of this group was to increase the Th2 IgG1 and IL-4. At the end of the experiment, some animals from G2 again manifesting the disease clinically, and this fact was accompanied by decreased concentrations of IL - 4 , IgG1 and IL - 6 in milk. In animals of G1 there was no absolute clinical cure and bacteriological cure 40 % of the M3. Immunologically , it was observed high levels of IL-6 and IL-8 in the milk during the treatment period and a decrease in serum IgG2 M3 negatively correlated with milk IgG2 , featuring a late local response . The results may imply that monitoring for more than two weeks of the dynamics of the immune response depends on the efficiency of the antimicrobial protocol to establish a prognosis. In addition, the early definition of the immune response may be complicated by better antimicrobial treatment of animals observed in combined treatment (G3) being insufficient to overcome the infection early inefficient when used antimicrobials.

Foram submetidas a prova do \"California Mastitis Test\"(CMT), 468 vacas leiteiras pertencentes a seis propiedades rurais produtoras de leite tipo B, localizadas na região do Município de Barretos, SP. Das 56 (12,0 por cento ) fêmeas reagentes a esta prova, 48 (1O,3 por cento ) foram confirmadas através do isolamento e identificação do agente etiológico. A elevada concordância (85,71 por cento ) verificada entre, a prova do CMT e o exame bacteriológico, confirma a eficiência desta prova na detecção de transtôrnos da glândula mamária não perceptíveis clínicamente, uma vez que nenhuma das fêmeas analisadas apresentou sinais da enfermidade. A contagem leucocitária e a pesquisa do teor de cloretos efetuadas nas 56 fêmeas reagentes a prova do CMT, apresentaram concordâncias de 87,5 por cento e 50,0 por cento , respectivamente, em relação ao exame bacteriológico. O Staphylococcus aureus foi o agente etiológico mais frequente (52,08 por cento ) nos casos de mastite bovina. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 56 amostras reagentes a prova do CMT, revelou que 30 (53,57 por cento ) amostras apresentaram tempo de redução não condizente com o número de microrganismos determinado, isto é, tempo de redução menor que 3 l/2 horas e contagem total de microrganismos inferior a 500.000 microrg/ml. Observou-se, ainda, que destas 30 amostras, 26 (86,67 por cento ) apreesentaram contagens leucocitárias superiores a 2.500.000 leucócitos/ml., sugerindo deste modo, uma provável interferência dos leucócitos quando em número elevado, na prova da redução do azul de metileno. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 30 amostras negativas a prova do CMT, revelou que 27 (90,0 por cento ) amostras apresentaram o tempo de redução condizente com o número de microrganismos determinado, o que confirma a importância de sua utilização na rotina do Serviço de Inspeção. A provãvel interferência dos leucócitos não compromete a eficiência desta prova, pois as variações observadas ocorrem no sentido de abreviar o tempo de redução, sendo muito pequena a probabilidade de aceitação de um produto com o número de microrganismos superior ao permitido pelo Ministério da Agricultura. Dentre as provas utilizadas pelo Serviço de Inspeção na detecção da mastite bovina a nível de Estabelecimentos Industriais a prova de Whiteside foi a que apresentou maior sensibilidade e especificidade, capaz de revelar a presença de leite anormal em rebanhos cuja prevalência desta doença foi igual ou superior a 7,0 por cento das fêmeas ou 1,4 por cento dos quartos analisados. A pesquisa do teor de cloretos apresentou menor sensibilidade e especificidade, incapaz de revelar a presença de leite anormal em todos os rebanhos analisados. Entretanto, este fato não invalida a utilidade de sua aplicação, pois esta prova pode ser de fundamental importância na detecção de fraudes no leite. A prevalência da mastite bovina em até 20,0 por cento das fêmeas leiteiras ou em ate 5,0 por cento dos quartos examinados, não foi suficiente para colocar os quesitos analisados nas amostras de leite, fora dos padrões normais. Acredita-se que estes padrões devam ser objeto de estudos posteriores. / Four-hundred and sixty-eigth milk cows, belonging to six type B milk producing dayry farms, located in the region of Barretos, SP, Brazil were submitted to \"California Mastitis Test\", of the fifty-six (12,0 per cent ) cows positive to the mentioned test, forty eigth (10,31) had the diagnosis confirmed throght isolation and identification of the etiologic agent. High agreement (85,7 per cent ) was obtained between CMT and bacteriologic examination, which confirms the efficiency of CMT in the detection of diseases of the mammary glands, not perceptible by clinical examination, as none the animals examined presented signs of disease. Leucocyte count and determination of chloride level performed on the fifty-six reactors presented agreement of 87,5 per cent and 50,0 per cent , respectively, with bacteriological examination. Staphylococcus aureus was the most frequently isolated bacterium (52,08 per cent of cases). Comparison between total plate count and reductase test, performed on thirty samples negative to CMT, showed that twenty-seven samples (90,0 per cent ) presented a reduction time compatible with the number of microorganisms present, confirming the importance of reductase test regarding inspection. The theoretical interference of leucocytes was not important in practice, as variations observed were abreviation of reduction time, rendering the propability of accepting a product with a number of microorganisms over legal limits very small. Considering tests used by the Inspection Service for detection of bovine mastitis, the Whiteside test presented highest sensivity and specificity, as it was capable of reveling abnormal milk when prevalence was 7,0 per cent and over, considering animals and 1,1 per cent considering quarters. Chloride level presented lower sensitivity and specificity as it was unable to detect abnormal milk in all dairy farms. However it is very important in the detection of frauds. Prevalence of mastitis of up to 20,0 per cent of animals or of 5,0 per cent of quarters was not sufficient to bring the total milk produced below standards.

The general objectives of the present thesis were to evaluate: (i) the effects of subclinical mastitis (SM) caused by major pathogens on SCC, milk leukocyte differentials (MLD) and milk yield; (ii) milk yield losses caused by SM at the cow and quarter level; and (iii) the economic impact of SM caused by major pathogens. The thesis was structured in four studies. In study 1, quarter milk samples (n = 302) from 78 cows with SCC gt;200,000 cells/mL were analyzed by milk leukocyte differential (MLD) methodology and by microbiological culture (MC). Quarters with positive-culture results were obtained from 102/156 (65.4%) of MLD-positive milk samples, while 28/135 (20.7%) of MLD-negative milk samples were MC-positive. When MC was considered the gold standard for mastitis diagnosis, the sensitivity (Se) of the MLD was 65.4% (IC95% = 57.4 to 72.8%) and the specificity (Sp) was 79.3% (IC95% = 71.4% to 85.7%). In conclusion, the use of the MLD on cows with monthly composite SCC > 200×103 cells/mL for screening at quarter level identified quarters more likely to be culture-positive. In study 2, the effect of different pathogens was evaluated by comparison of contralateral (healthy and infected) mammary quarters of 146 lactating cows. The impact of SM on economic return (quarter milk yield × milk price) was determined by applying milk payment estimates on milk collected from healthy versus infected glands. The milk losses ranged from 0.07 Kg/quarter.milking to 2.9 Kg/quarter.milking, and varied according to the pathogen causing SM. Economic losses were higher for SM caused by Enterococcus spp. (US$0.43/quarter.milking), Strep. Dysgalactiae (US$ 0.74/quarter.milking) and E. coli (US$0.98/quarter.milking). Additionally, there was a trend for Staph. aureus and Citrobacter spp. To induce economic losses of US$ 0.26 and 0.29/quarter.milking, respectively. In general, the economic return was lower in quarters with SM caused by environmental and contagious pathogens (US$ 0.18 and 0.22/quarter.milking, respectively) when compared to their healthy contralateral quarters. In study 3, a total of 146 out of 650 lactating cows were selected from seven dairy herds for having composite milk SCC > 200,000 cells/mL in combination with the isolation of a major mastitis pathogen. From these selected cows, 1,436 quarter milk samples were collected during three successive sampling occasions at intervals of 15-20 days. Quarter milk yield was measured by milking the mammary quarters individually using three successive milk samplings over time. Bacterial isolates were identified by microbiological culture, MALDI-TOF MS and partial sequencing of the 16S rRNA gene. Milk losses and economic returns varied according to the type of mastitis-causing pathogen: 0.24 to -0.87 kg/quarter.milking for environmental streptococci, and -1.57 to -1.69 kg/quarter.milking for Staph. aureus. Overall, mammary quarters that were cured from SM caused by Staph. aureus and environmental streptococci exhibited an increase in economic return of approximately 0.47 and 0.69 US$/quarter.milking, respectively. In study 4, test day records (n = 1,200,002) were obtained from the Paraná State Holstein Association, which included data from 92,560 lactating cows, from 781 herds, from January 2010 to December 2015. A segmented regression was fitted to estimate the cut-off point of Log10SCC scale where milk yield started to be affected by mastitis: 0.90 (~7,963 cells/mL). In conclusion, first lactation cows have a reduction of 1.37 to 2.28 kg/cow/d of milk yield for each increase of one unit of Log10SCC over the cutoff point, whereas second and later lactation cows are expected to have milk yield losses of 2.36 to 4.20 kg/cow/d for each unit increase of Log10SCC over the cutoff point. Overall, the results of this thesis indicated that milk losses depend on the type of pathogen causing SM. Major pathogens have showed greater effects on milk quality than when it was observed using the approach of culture results of negative or positive. The methodology for evaluation of subclinical mastitis effect on milk yield interferes in the estimation of milk losses, and should include factors such as DIM and number of parity. / Os objetivos gerais da tese foram avaliar: (i) os efeitos da mastite subclínica (MS) causada por patógenos primários sobre a CCS, contagem diferencial de células e produção de leite; (ii) perdas de produção de leite ocasionadas pela MS, em nível de vacas e quartos mamários; e (iii) o impacto econômico da MS causado por patógenos primários. A tese foi estruturada em quatro estudos. No estudo 1, amostras de leite de quartos mamários (n = 302) foram submetidas a cultura microbiológica (CM) e contagem diferencial de leucócitos (MLD). Quartos com resultados cultura-positiva apresentaram 102/156 (65,4%) amostras de leite MLD-positivas, e 28/135 (20,7%) das amostras de leite MLD-negativas tiveram CM-positivas. Quando a CM foi considerada o padrão-ouro para o diagnóstico da mastite, o diagnóstico por meio da MLD apresentou sensibilidade (Se) de 65,4% (IC95% = 57,4 a 72,8%) e especificidade (Sp) de 79,3% (IC95% = 71,4% a 85,7%). Em conclusão, o uso da MLD em vacas com CCS mensal > 200,000 células/mL para triagem de quartos identificou os mais prováveis de ser cultura-positivos. No estudo 2, o efeito de diferentes tipos de patógenos foi estudado avaliando pares de quartos mamários contralaterais (sadios e infectados) de 146 vacas em lactação. O impacto da MS sobre o retorno econômico (produção de leite × preço do leite) foi determinado pela aplicação de estimativas de pagamento do leite de quartos sadios e infectados. As perdas de leite variaram de 0,07 Kg/quarto.ordenha a 2,9 Kg/quarto.ordenha de acordo com o patógeno causador de MS. As perdas econômicas foram maiores em casos de MS causados por Enterococcus spp. (US$ 0,43/quarto.ordenha), Strep. dysgalactiae (US$ 0,74/quarto.ordenha) e E. coli (US$ 0,98/quarto.ordenha). Além disso, houve uma tendência de Staph. aureus e Citrobacter spp. ocasionar perdas de US$ 0,26 e 0,29/quarto.ordenha, respectivamente. Em geral, o retorno econômico foi menor em quartos com MS causada por patógenos ambientais e contagiosos (US$ 0,18 e 0,22/quarto.ordenha, respectivamente) quando comparados com os quartos contralaterais sadios. No estudo 3, um total de 146 das 650 vacas em lactação foram selecionadas de sete rebanhos por apresentar amostras compostas de leite com alta CCS (> 200.000 células/mL) e isolamento de patógeno primário causador de MS. Destas vacas selecionadas, 1.436 amostras de leite de quartos foram coletadas durante três amostragens sucessivas com intervalos de 15-20 dias. A produção de leite em nível de quartos mamários foi mensurada por meio de ordenha completa e individual. Os isolados bacterianos foram identificados por CM, MALDI-TOF MS e sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. As perdas de leite e os retornos econômicos variaram de acordo com o tipo de patógeno causador da mastite: - 0,24 a -0,87 kg/quarto.ordenha (Streptococcus ambientais) e -1,57 a -1,69 kg/quarto.ordenha (Staph. aureus). Em geral, os quartos mamários que apresentaram cura da MS causada por Staph. aureus e Streptococcus ambientais apresentaram aumento no retorno econômico de aproximadamente 0,47 e 0,69 US$/quarto.ordenha, respectivamente. No estudo 4, registros do controle leiteiro (n = 1.200.002) foram obtidos da associação Paranaense do gado Holandês, os quais incluíram dados de 92.560 vacas Holandesas em lactação de 781 rebanhos, de janeiro de 2010 a dezembro de 2015. Uma regressão segmentada foi ajustada para estimar o ponto de corte na escala Log10CCS em que a produção de leite começou a ser afetada pela MS: 0.90 (~ 7.963 células/mL). Como conclusão, vacas de primeira cria apresentaram redução de 1,37 a 2,28 kg/vaca/dia na produção de leite para cada aumento de uma unidade Log10CCS acima do ponto de corte, enquanto vacas com duas ou mais crias apresentaram perdas de 2,36 a 4,20 kg/vaca/dia. Em geral, os resultados desta tese indicaram que as perdas de leite dependem do tipo de patógeno que causa SM. Os patógenos primários mostraram maiores efeitos sobre a qualidade do leite do que quando foram observados pela abordagem com base nos resultados de cultura negativa ou positivos. A metodologia de avaliação do efeito da mastite subclínica sobre a produção de leite interfere na estimativa das perdas de leite e deve incluir fatores como DIM e número de paridade.

Este estudo objetivou avaliar a: a) eficiência da antibioticoterapia associada à vacinação, de infecções intramamárias (IIM) causadas por Staphylococcus aureus (S. aureus) durante a lactação e secagem; b) variabilidade genética de S. aureus de acordo com a resposta ao tratamento, antibiograma e técnica de Polimorfismo do Comprimento de Fragmentos Amplificados (AFLP). Para a avaliação da eficiência da terapia durante a lactação, foram selecionadas 117 vacas com mastite subclínica causada por S. aureus, a partir de 5 rebanhos leiteiros, as quais foram distribuídas aleatoriamente em três tratamentos: a) controle (sem tratamento), b) antibioticoterapia intramamária + injetável, c) antibioticoterapia intramamária + injetável + vacinação contra S. aureus. Para avaliar a eficiência da antibioticoterapia associada à vacinação contra S. aureus na secagem, foram selecionadas 136 vacas com mastite subclínica causada por S. aureus, as quais foram distribuídas aleatoriamnte em quatro tratamentos: a) antibioticoterapia intramamária, b) antibioticoterapia intramamária + injetável, c) antibioticoterapia intramamária + vacina, d) antibioticoterapia intramamária + injetável + vacina. Para os protocolos de tratamento (lactação e secagem), foi utilizada a vacina antimastítica TopVac (Hipra, Espanha). O antibiótico injetável foi a enrofloxacina (Kinetomax®, Bayer, Brasil), dose única (7,5 mg/kg). A antibioticoterapia intramamária durante a lactação foi realizada com ampicilina 75 mg + cloxacilina 250 mg (Bovigam L, Bayer, Irlanda do Norte), e na secagem, com ampicilina 200 mg + cloxacilina 500 mg (Bovigam ®VS, Bayer, Irlanda do Norte). Um total de 117 isolados de S. aureus foram submetidos à técnica de AFLP. A taxa de cura dos quartos tratados com antibioticoterapia, durante a lactação e na secagem, foi de 80,5% (n = 82) e 91,5% (n = 106), respectivamente. A vacinação contra S. aureus não aumentou a taxa de cura do tratamento durante a lactação, porém reduziu a CCS das vacas vacinada em comparação com as vacas do tratamento controle. No tratamento durante a lactação, primíparas e vacas com apenas um quarto infectado apresentaram maior taxa de cura (79 e 70%, respectivamente) do que pluríparas e vacas com dois ou mais quartos infectados (11 e 17%, respectivamente), respectivamente. A resistência à penicilina não afetou a taxa de cura dos isolados de S. aureus. A probabilidade de um isolado não adaptado à glândula mamária ser multirresistente e resistente à oxacilina foi maior do que a de um isolado adaptado, porém a taxa de cura dos isolados não adaptados foi maior do que a de isolados adaptados. Em conclusão, a antibioticoterapia foi eficiente para tratamento de mastite subclínica causada por S. aureus durante a lactação e secagem, e o resultado de antibiograma foi associado à classificação dos isolados em adaptados e não adaptados, porém não foi associado à resposta a antibioticoterapia / The objectives of this study were to evaluate: a) treatment effectiveness, using antibiotics and vaccination, in cows with intramammary infections caused by S. aureus during lactation and dry period; b) the genetic variability of S. aureus strains according to treatment responses, antibiogram and the AFLP technique. To evaluate the effectiveness of the lactation therapy, 117 icows with S. aureus subclinical mastitis, from 5 herds, were randomly distributed into 3 treatments: a) control; b) Intramammary + Injectable; c) Intramammary + injectable + Vaccine. To evaluate the effectiveness of the dry off therapy, 136 cows with S. aureus subclinical mastitis were randomly distributed into 4 treatments: a) Intramammary; b) Intramammary + Injectable (INT + INJ); c) Intramammary + Vaccine (INT + VAC); d) Intramammary + Injectable + Vaccine (INT + INJ + VAC). For both therapies (lactation and dry off), the antimastitis vaccine was the TopVac (Hipra, Spain). The injetable antibiotic was enrofloxacin (Kinetomax®, Bayer S. A., Brasil) single dose (7,5 mg/kg). The intramammary therapy was, during lactation, with ampicillin 75 mg + cloxacilin 200 mg (Bovigam L, Bayer, North Ireland) and at dry off with ampicillin 250 mg + cloxacilin 500 mg (Bovigam ®VS, Bayer, North Ireland). S. aureus isolates (117) were submitted to the AFLP technique. The cure rate of quarters treated with antibiotics during lactation and dry period was 80,5% (n = 82) e 91,5% (n = 106), respectively. Vaccination against S. aureus didn't raise the cure rate during lactation, but lowered the SCC of vaccinated cows compared to control cows. In the lactation therapy, primiparous and cows with one infected quarter had higher cure rates (79 and 70%, respectively) than pluriparous and cows with more than one infected quarter (11 and 17%, respectively), respectively. Resistence to penicillin did not affect S. aureus isolates cure rate. The probability of a non adapted S. aureus isolate to be multiresistant and resistant to oxacilin was higher than an adapted isolate, but cure rates of non adapted isolates was higher than adapted isolates. In conclusion, antibiotic therapy was efficient to treat S. aureus subclinical mastitis during lactation and dry period, and the antibiogram result was associated with the isolates classification in adapted and non adapted, but was not associated with the response to therapy

O controle de mastite consiste em um conjunto de medidas de manejo e prevenção da doença em um rebanho, pois estudos realizados em todo estado de São Paulo estimaram um prejuízo de 17% da produção por propriedade devido à mastite considerando perdas como os gastos com tratamentos; descarte de leite; queda na produção; além de perdas por resíduos de antibióticos. O trabalho mostra que a população microbiana da mucosa dos tetos não varia conforme a sua posição no úbere do animal e a identificação dos microorganismos predominantes foram como sendo de Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Klebsiella pneumoniae e Acinetobacter junii. O objetivo deste trabalho foi determinar a eficácia do muco de escargot nos tetos de vacas leiteiras utilizando-o como \"pré e pós dipping\" e o comparado com a aplicação de solução de iodo, visando à prevenção ou a redução da incidência de infecções intramamárias. O muco de escargot possui uma propriedade antibacteriana bastante efetiva, conhecida como Achacin. Sua ação bactericida ocorre principalmente na fase de crescimento da bactéria agindo como agente quimioterápico. O muco de escargot mostrou ser igualmente eficiente no controle da população de microorganismo presente na superfície dos tetos, quando comparados ao uso da solução de iodo, além de que o seu efeito sobre a pele e mucosa dos tetos foi de deixá-los mais hidratados e com melhor elasticidade evitando rachaduras e focos de infecção, quando comparado ao agente mineral, podendo ser até mesmo um produto alternativo no controle e prevenção de mastite em vacas leiteiras. / The control of mastitis is a set of measures for management and prevention of disease in a herd, because studies from every state of Sao Paulo have estimated a loss of 17% in a property considering losses due to mastitis as spending on treatments; discarded milk, drop in production, and losses due to antibiotic residues. The study shows that the microbial population of the mucosa of the teats doesnt vary according to their position in the animal\'s udder and identification of microorganisms were predominant as Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Klebsiella pneumoniae and Acinetobacter junii. The objective of this study was to determine the effectiveness of snail mucus teats of dairy cows using it as a \"pre and post dipping\" and compared with the application of iodine solution, aiming at preventing or reducing the incidence of mammary infections. The mucus of snail has a very effective antibacterial property, known as Achacin. Its bactericidal action occurs mainly in the growth of bacteria by acting as a chemotherapeutic agent. The mucus of snail proved to be equally effective in controlling the population of microorganisms present on the surface of the teats, compared to the use of iodine solution, and that its effect on the skin and mucous membrane of the teats was leaving them more hydrated and with improved elasticity avoiding cracks and foci of infection, when compared to mineral agent, which may even be an alternative product in the control and prevention of mastitis in dairy cows.

O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de espectrometria de massas por ionização/dessorção a laser assistida por matriz tempo-de-vôo (MALDI-TOF) para a identificação direta em amostras de leite (sem cultivo microbiológico) de bactérias causadoras de mastite. Para tanto foram realizados dois experimentos (1 e 2). No experimento 1, o objetivo foi determinar a sensibilidade diagnóstica da técnica MALDI-TOF MS para a identificação direta em amostras de leite de Staphylococcus aureus, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae e Escherichia coli. Foram realizadas contaminações experimentais de S. aureus, S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae e E. coli em amostras de leite, para a obtenção de contagens de 103 a 109 ufc/mL. As amostras de leite contaminadas foram processadas com o uso do kit Maldi Sepsityper® (Bruker Daltonics) e submetidas ao protocolo de lise bacteriana para posterior análise por MALDI-TOF MS. Espectros de massas foram coletados na faixa de massas de 2.000-20.000 m/z e foram analisados pelo programa MALDI Biotyper 3.0 (Bruker Daltonics) com as configurações padrão para obtenção da identificação bacteriana. A identificação direta de patógenos causadores de mastite a partir de amostras de leite foi possível em contagem ≥106 ufc/mL para S. aureus, ≥107 ufc/mL para E. coli, e ≥108 ufc/mL para S. agalactiae, S. dysgalactiae e S. uberis. No experimento 2, o objetivo foi avaliar o efeito da pré-incubação de amostras de leite de quartos mamários com mastite subclínica sobre a eficácia da identificação sem cultivo de patógenos causadores de mastite por MALDI-TOF MS. Foram selecionados 2 rebanhos leiteiros para coletas de leite de quartos mamários de todas as vacas em lactação. As amostras de leite foram submetidas às análises de: a) cultura microbiológica; b) pré-incubação seguida de identificação por espectrometria de massas diretamente do leite; c) contagem bacteriana total (CBT). Para a realização da CBT, as amostras de leite foram submetidas à citometria de fluxo; e para a identificação direta de patógenos causadores de mastite a partir do leite, as amostras foram submetidas ao desnate por centrifugação (10.000 Xg por 10 minutos), e pré-incubação a 37ºC por 12 horas. Posteriormente, as amostras foram processadas com o uso do kit Maldi Sepsityper® (Bruker Daltonics) e submetidas ao protocolo de lise bacteriana para posterior análise por MALDI-TOF MS. Do total de 810 amostras de leite analisadas por cultura microbiológica (método referência), 347 apresentaram crescimento bacteriano, sendo 305 identificadas como agentes de interesse na identificação direta pelo método MALDI-TOF MS: Staphylococcus coagulase negativa (n=191), S. aureus (n=31), S. agalactiae (n=42), S. uberis (n=37), S. dysgalactiae (n= 4). Sendo assim, 305 amostras foram analisadas pelo método de idenfificação direta MALDI-TOF MS, a qual apresentou baixa sensibilidade quando comparado com a cultura microbiológica (método referência): Staphylococcus coagulase negativa (14,08%), S. agalactiae (15,25%), S. uberis (1,69%) S. aureus (6,12%) e S. dysgalactiae (0%). A pré-incubação de amostras de leite não aumentou a sensibilidade de identificação direta de microrganismos causadores de mastite pelo método MALDI-TOF MS. / The purpose of the present study was to evaluate the technique of mass spectrometry by desorption / ionization assisted laser array time-of-flight (MALDI-TOF MS) for the direct identification in milk samples (no microbiological culture) of mastitis causing bacteria. Therefore, we carried out two experiments (1 and 2). In experiment 1, we determined the diagnostic sensitivity of MALDI-TOF MS technique for the direct identification in milk samples of Staphylococcus aureus, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae and Escherichia coli. Experimental contamination of S. aureus, S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae and E. coli in samples of milk to a concentration of 103-109 cfu/mL were performed. The contaminated milk samples were processed using kit Maldi Sepsityper® (Bruker Daltonics) and subjected to bacterial lysis protocol for analysis by MALDI-TOF MS. Mass spectra were collected in the mass range of 2000-20000 m/z and were analyzed by MALDI Biotyper 3.0 software (Bruker Daltonics) with default settings to obtain bacterial identification. Direct identification of mastitis causing pathogens from milk samples was possible at ≥106 cfu/mL for S. aureus, ≥107 cfu/mL for E. coli and ≥108 cfu/mL for S. agalactiae, S. dysgalactiae and S. uberis. In experiment 2, the objective was to evaluate the effect of pre-incubation of milk samples from mammary quarters with subclinical mastitis on the effectiveness of identification without cultivation, of mastitis-causing pathogens by MALDI-TOF MS. We selected mammary quarter milk samples from all lactating cows on two dairy herds. The milk samples were subjected to analyzes of: a) microbiological culture; b) pre-incubation followed by identification by mass spectrometry directly from milk; c) total bacterial count (TBC). Flow cytometry was used to determine TBC and; to directly identify the mastitis-causing pathogens from milk, fat was separated by centrifugation (10,000 Xg for 10 minutes) and; samples were pre-incubated at 37°C for 12 hours. Subsequently, the skim milk samples were submitted to kit Maldi Sepsityper® (Bruker Daltonics) and to the bacterial lysis protocol for analysis by MALDI-TOF MS. A total of 810 milk samples were analyzed by microbiological culture (reference method), of which 347 showed bacterial growth. Considering all culture positive samples 305 were identified as agents of interest in the direct identification by MALDI-TOF MS method: coagulase negative staphylococci (n = 191), S. aureus (n = 31), S. agalactiae (n = 42), S. uberis (n = 37) and S. dysgalactiae (n = 4). Therefore, 305 samples were directly identified by MALDI-TOF MS, which presented low sensitivity when compared to microbiological culture (Reference method): coagulase-negative staphylococci (14.08%), S. agalactiae (15.25 %), S. uberis (1.69%), S. aureus (6.12%) and S. dysgalactiae (0%). Pre-incubation of milk samples did not increase the sensitivity of the MALDI-TOF MS method directly identify mastitis-causing microorganisms.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-08-23T19:32:17Z No. of bitstreams: 1 naiaraaparecidarodriguesdeoliveira.pdf: 913286 bytes, checksum: a8b96b3b7d78237e6a66fbd73d141644 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-08-28T12:27:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 naiaraaparecidarodriguesdeoliveira.pdf: 913286 bytes, checksum: a8b96b3b7d78237e6a66fbd73d141644 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-28T12:27:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 naiaraaparecidarodriguesdeoliveira.pdf: 913286 bytes, checksum: a8b96b3b7d78237e6a66fbd73d141644 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / A mastite está entre as doenças do gado leiteiro que mais causam prejuízos em todo mundo. Entre os agentes causadores estão os patógenos de origem contagiosa Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae que mais contribuem para o aumento da Contagem de Células Somáticas (CCS) em rebanhos infectados.Desde a implantação da Instrução Normativa 51 ( IN 51/2002) do Ministério da Agriculutura Pecuária e Abastecimento(MAPA) em 2005, pouco se avançou em melhorias no parâmetro CCS dos rebanhos brasileiros, fazendo-se necessário o levantamento da situação das regiões a fim de traçar estratégias específicas para o controle da mastite e atendimento aos requisitos da legislação. O objetivo do presente estudo foi estabelecer uma classificação baseada em risco (dados probabilísticos) (risco) para presença de S. aureus e S. agalactiae em rebanhos bovinos leiteiros localizados Zona da Mata do Estado de Minas Gerais e vinculados a uma cooperativa. O trabalho foi realizado utilizando a população de bovinos leiteiros vinculados à Cooperativa dos Produtores de Leite de Leopoldina de Responsabilidade Ltda (LAC). A avaliação da dependência espacial entre as coordenadas geográficas dos rebanhos e a média geométrica anual da contagem de células somáticas foi realizada por meio de semivariogramas e os mapas de isolinhas por meio do método de Krigagem. Amostras para análise de CCS foram coletadas mensalmente.Para o estudo de prevalência foram selecionados aleatoriamente 43 rebanhos dos quais foram coletadas 3 amostras consecutivas de cada rebanho para análises microbiológicas durante o período de junho de 2016 a novembro de 2017. A análise espacial apresentou grau de dependência espacial e coeficiente de determinação fracos (GD<0,25; r2<0,13). A distribuição de frequência da CCS mostrou que apenas 23,3% dos rebanhos atendem ao limite de 400.000 células/mL . A prevalência de S. aureus foi de 93% a de S. agalactiae de 81,4% não diferindo estatisticamente entre si. Dos 43 rebanhos analisados, em tres (7%) não houve isolamento de S.aureus e de S. agalactiae, cinco (11,6%) apresentaram isolamento somente de S. aureus e 35 (81%) apresentaram isolamento de ambos patógenos. Não houve rebanhos com isolamento somente de S. agalactiae. Dos rebanhos sem isolamento destes agentes, a média de CCS foi de 224.000 células/mL, com isolamento somente de S. aureus a média de CCS foi de 447.000 células/mL, e para rebanhos com isolamento dos dois patógenos, S. aureus e S. agalactiae, 794.000 células/mL. Os rebanhos sem isolamento ou somente com isolamento de S. aureus estão associados a CCS inferior a 400.000 células/mL e rebanhos com isolamento de ambos os patógenos estão associados a CCS superior a 400.000 células/mL. A utilização da curva ROC para dados de CCS de rebanhos associados ao estudo de prevalência de S. aureus e de S. agalactiae permitiu classificar rebanhos em tres níveis de risco: baixo, médio e alto. A prevalência de S. aureus e de S. agalactiae entre rebanhos foi considerada alta para ambos patógenos, indicando que as medidas de controle para estes patógenos não estão sendo realizadas de maneira eficiente. Não foi observada diferença entre as prevalências de S. aureus e de S. agalactiae entre os rebanhos. Foi observada uma associação entre a CCS dos rebanhos e a presença de ambos os patógenos, permitindo desta forma uma classificação dos rebanhos. / Mastitis is among the most damaging diseases in dairy cattle worldwide. Among the causative agents are the pathogens of contagious origin Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae that contribute most to the increase of Somatic Cell Count (SCC) in infected herds. Since the implantation of IN 51 in 2005, little progress was made in improving the SCC in the Brazilian dairy herds, therefore it is necessary to survey the mastitis situation of the regions in order to devise specific control strategies for mastitis control and compliance with the legislation requirements . The objective of the present study was to establish a risk - based classification (risk) for the presence of S. aureus and S. agalactiae in dairy herds located in the Zona da Mata of the State of Minas Gerais associated to a cooperative. The work was carried out using the population of dairy herds of Cooperativa dos Produtores de Leite de Leopoldina de Responsabilidade Ltda. (LAC).The evaluation of the spatial dependence between the geographical coordinates of the herds and the annual geometric mean of the somatic cell count was performed using semi-variograms and isoline maps using the Kriging method. Milk samples for SCC analyses were collected monthly. For the prevalence study, 43 herds were randomly selected and three milk samples from each herd were collected for microbiological analyzes during the period of June 2016 to November 2017. The spatial analysis presented degree of spatial dependence and weak determination coefficient (GD <0.25; r2 <0.13) The frequency distribution of CCS showed that only 23.3% of the herds met the limit of 400,000 cells / mL. The prevalence of S. aureus (93%) and of S. agalactiae (81.4%) did not differ statistically from one another. Of the 43 herds analyzed, three (7%) was no isolation of S. aureus and S. agalactiae, five (11.6%) had isolation only of S. aureus and 35 (81%) presented isolation of both pathogens. There were no herds with isolation of S. agalactiae. The mean SCC was 224,000 cels / mL, for the herds with absence of S. aureus and S. agalactiae, and 794.000 cels/ mL when the this two pathogens were present. The mean SCC for the herds with isolation only of S. aureus was 447,000 cells / mL,. The abcense or isolation only S. aureus herds are associated with CCS less than 400,000 cells / mL and herds with isolation of both pathogens associated with CCS greater than 400,000 cells / mL. The use of the ROC curve for herd CCS data associated to the study of S. aureus and S. agalactiae prevalence allowed the classification of the herds at three levels of risk: low, medium and high. The prevalence of S. aureus and S. agalactiae among herds was considered high for both pathogens, indicating that the control measures for these pathogens are not being carried out efficiently. There was no difference between the prevalences of S. aureus and S. agalactiae among the herds. An association was observed between the SCC of the herds and the presence of both pathogens, thus allowing a classification of the herds.