Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:41:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_CristianoPedrozo_M.pdf: 2180870 bytes, checksum: 84839495dd54341c9219c9aca477f0aa (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Os tendões podem ser acometidos por lesões, infecções e inflamações, seguidas ou não de ruptura, podendo ser decorrentes de atividades desportivas, como exercícios e alongamentos, ou de atividades diárias de muitos trabalhadores. Em situações patológicas a matriz extracelular (MEC) do tendão passa por um processo de reorganização de seus componentes, visando à regeneração e homeostasia do tecido. A inflamação pode ser desencadeada por diferentes fatores, entre os principais causadores desse processo estão injúrias mecânicas e químicas, agentes infecciosos, queimadura, radiação e supressão de oxigênio. Pouco é conhecido na literatura sobre as possíveis alterações que a inflamação instalada em tecidos próximos pode ocasionar em tendões. Desse modo, o presente estudo teve por objetivo analisar as alterações bioquímicas e morfológicas do tendão flexor digital profundo (TFDP) após indução da inflamação aguda em pata. Os períodos de análises foram 4 horas, período em que ocorre o pico da inflamação, 12 e 24 horas. Ratos Wistar (140-160g) foram separados em três grupos experimentais: os que receberam aplicação da carragenina (1%), os que receberam NaCl (0,9%), e os que não receberam nada, sendo utilizados como controle. O TFDP foi dividido conforme suas diferentes regiões (distal, intermediária, proximal). Para análises bioquímicas, os tendões foram processados e analisados de acordo com as seguintes técnicas: SDS-PAGE, para observação do perfil de proteínas, eletroforese em gel de agarose para análise de glicosaminoglicanos sulfatados; zimografia para detecção de metaloproteínase (MMP) 2 e 9; e dosagem de proteínas não colagênicas e hidroxiprolina. Para análises morfológicas, os cortes foram corados com hematoxilina-eosina, azul de toluidina e ponceau SS. De acordo com nossos resultados, no pico da inflamação aguda foi observada menor quantidade de proteínas e glicosaminoglicanos nas três regiões do TFDP dos animais tratados com carragenina. A concentração de hidroxiprolina foi maior nas duas regiões de tensão do tendão do grupo inflamado. A presença da MMP-9 foi detectada na região distal e foi evidenciado o epitendão mais espesso com células inflamatórias nas três regiões do TFDP no grupo com carragenina. Uma melhor organização dos feixes de colágeno foi observada nas duas regiões de tensão desse mesmo grupo. Após o período de pico da inflamação foi evidenciado a presença da isoforma latente e ativa da MMP-9 em 12 horas após a indução da inflamação. Houve maior quantidade de hidroxiprolina na região intermediária e proximal no grupo de 12 horas e, na região distal no grupo de 24 horas no grupo tratado com carragenina. A concentração de proteínas foi menor na região distal do grupo tratado com carragenina em 12 horas e maior em 24 horas nessa mesma região e grupo. A presença de um epitendão mais espesso com infiltrado de células foi observado nas regiões do TFDP dos animais com carragenina em 24 horas e, a organização dos feixes de colágeno foi menor na região proximal em 12 e 24 horas foram mostradas nos animais que receberam o veículo e a carragenina. Nenhuma diferença foi encontrada durante 4, 12 e 24 horas nos géis de SDS-PAGE. Nossos resultados mostram que embora o tendão não esteja inflamado, durante o pico do processo inflamatório agudo na pata de rato, alterações marcantes são evidenciadas. Contudo, podem ser ressaltados que o período posterior ao pico da inflamação também desencadeia alterações nos elementos estruturais e bioquímicos da MEC do TFDP / Abstract: The tendons are often affected by injuries, infections and inflammations, followed or not by rupture, which may occur during sport activities such as exercise and stretching, or during other daily activities. In pathological situations the extracellular matrix of tendons undergoes a reorganization process of their components, aimed at the improvement, regeneration and tissue homeostasis. Inflammation can be triggered by different factors, among the main causes of this process are mechanical and chemical injuries, infectious agents, burns, radiation and suppression of oxygen. Little is known in the literature on possible changes that the inflammation may trigger in near tissues where it is installed. This study aims to examine biochemically and morphologically the deep digital flexor tendon (DDFT) after induction of acute inflammation in rat paw (140-160g). The analysis was performed in the peak of inflammation (4 hours) and after that period (12 and 24 hours). Rats Wistar were divided into three groups: those who received application of (1%) carrageenan, those receiving 0.9% NaCl, and those who received nothing and were used as control. The DDFT was analyzed according to their regions (distal, intermediate and proximal). The DDFT was analyzed according to its different regions (distal, intermediate, proximal). For biochemical analysis, the tendons were processed and analyzed in accordance with the following techniques: SDS-PAGE, to observe the profile of proteins, agarose gel electrophoresis to analysis of sulfated glycosaminoglycans; zymography for detection of metalloproteinases 2 and 9, and dosage of non collagenous proteins and hydroxyproline. For morphological analysis, sections were stained with hematoxylin-eosin, toluidine blue and Ponceau SS. At the peak of acute inflammation was observed lower amount of proteins and glycosaminoglycans in the three regions of animals tendons with carrageenan. The hydroxyproline concentration was higher in the two tension regions of tendon of inflamed group. The presence of MMP-9 was detected in the distal region and was shown a thicker epitendon with inflammatory cells in the three regions of the DDFT in the group with carrageenan. Better organization of collagen bundles were observed within two regions of tension in the mentioned group. After the peak of inflammation was evidenced the presence of the latent and active isoform of the MMP-9 in 12 hours after induction of inflammation. A higher amount of hydroxyproline was detected in the intermediate and proximal region in the 12 hours and in the distal region in 24 hours in group treated with carrageenan. The protein concentration was lower in the distal region of the inflamed group at 12 hours and higher in 24 hours on the same region in the group treated with carrageenan. The presence of a thicker epitendon with cell infiltration was observed in the animals with DDFT of carrageenan animals as well as, a smaller organization of collagen bundles in the proximal region in 12 and 24 hours were shown in rats treated with vehicle and carrageenan. No difference was found for 4, 12 and 24 hours in SDS-PAGE gels. Our results show that although the tendon is not inflamed, during the peak of acute inflammation in rat paw, the most marked changes are evident. However, it can be emphasized that the period after the inflammation also triggers changes in the structural and biochemical components of the extracellular matrix of the deep digital flexor tendon / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:40:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_MarcosdosSantosde_M.pdf: 1553509 bytes, checksum: 83b5ab6bad050eff3b5f36b0524643b3 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A eletroacupuntura (EA) tem sido utilizada amplamente para o tratamento de uma variedade de doenças inflamatórias e para o alivio da dor. No entanto, não há relatos na literatura sobre o efeito da EA na composição e organização da matriz extracelular (MEC) de tendões em processo de cicatrização. Objetivo: Investigar através de análises bioquímicas e morfológicas, o efeito da EA durante o pico de síntese dos componentes da MEC, 15 dias após transecção parcial do tendão calcâneo de ratos. Materiais e Métodos: Ratos Wistar machos com 60 dias de idade foram divididos em 3 grupos: Não tenotomizados (G1), tenotomizados (G2) e tenotomizados e submetidos a EA (G3). Agulhas de acupuntura (AC) foram inseridas nos pontos E-36 e B-57 e uma corrente elétrica com onda farádica bipolar assimétrica na freqüência de 2 Hz e intensidade de 2-4 Volts foi aplicada nas agulhas por 20 minutos, 3 vezes por semana em dias alternados, em um total de 6 sessões. Análises bioquímicas foram feitas através da SDS-PAGE, dosagem de proteínas não colagênicas (PNCs), glicosaminoglicanos (GAGs) e hidroxiprolina. Análise da metaloproteinase-2 (MMP-2) foi realizada por zimografia. Para análise morfológica em microscopia de luz comum, os cortes foram corados com hematoxilina-eosina (HE) e azul de toluidina (AT). Para análise em microscopia de polarização os cortes foram corados com Ponceau SS e a birrefringência foi avaliada em termos de valor de média de cinza em pixels utilizando um analisador de imagem. Resultados: EA nos pontos utilizados não alterou a concentração de PNCs, GAGs ou a atividade enzimática da MMP-2 nos tendões transeccionados. Já a concentração de hidroxiprolina foi significativamente aumentada nestes tendões quando tratados com EA. Na análise morfológica nos cortes corados com HE e AT, aparentemente não houve alterações na composição nem na organização da MEC. No entanto, na análise da birrefringência houve uma maior reorganização das fibras de colágeno no grupo tratado com EA. Conclusão: Nossos resultados indicam que a EA pode oferecer benefícios terapêuticos para o tratamento de lesões tendíneas através do aumento do conteúdo do colágeno e da reorganização molecular de suas fibras / Abstract: Electroacupuncture (EA) has been used to treat a variety of inflammatory diseases and pain relief. Therefore, there are no reports in the literature about the effect of EA on the composition and organization of the extracellular matrix (ECM) of tendons in the healing process. Objective: To investigate by morphological and biochemical analysis, the effect of EA during the peak of synthesis of ECM components, 15 days after partial transection of the Achilles tendon of rats. Methods: Male Wistar rats with 60 days old were divided into three groups: no tenotomized (G1), tenotomized (G2) and tenotomized and submitted to EA (G3). Acupuncture (AC) needles were inserted in the E-36 and B-57 points and an electrical current with asymmetrical bipolar faradic wave at frequency of 2 Hz and intensity of 2-4 Volts was applied to the needles for 20 minutes, 3 times per week on alternate days, for a total of 6 sessions. Biochemical analyses were done by SDS-PAGE, dosage of non collagenous proteins (NCPs), glycosaminoglycans (GAGs) and hydroxyproline. Analysis of metalloproteinase-2 (MMP-2) was carried out by zymography. For morphological analyses, the sections were stained with hematoxilin-eosin (HE) and toluidine blue. For polarization microscopy analysis the sections were stained with Ponceau SS and birefringence was evaluated in terms of gray average values in pixels using an image analyzer. Results: EA at points used did not alter the concentration of NCPs, GAGs or the enzymatic activity of MMP-2 in transected tendons. However, the concentration of hydroxyproline was significantly increased when these tendons were treated with EA. In the morphological analysis, apparently there were no changes in the composition and organization of the ECM. However, analysis of the birefringence showed higher reorganization of collagen fibers in the group treated with EA. Conclusion: Our results indicate that EA may offer therapeutic benefits for treatment of tendon injuries by increasing the content of collagen and the molecular reorganization of its fibers / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:52:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto_TaizeMachado_D.pdf: 4110210 bytes, checksum: d70ae2c92435700f28fff9ee3cae63ac (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A próstata é uma glândula do aparelho reprodutor importante na reprodução, sendo foco de várias afecções, dentre elas o carcinoma prostático. Ela é altamente dependente de testosterona e modulada por estrógenos, que desempenham papel fundamental no seu crescimento. Altas doses de estrógeno aplicadas em ratos no período neonatal causam efeitos irreversíveis na próstata quando na idade adulta, sendo o mais marcante o comprometimento do seu desenvolvimento e crescimento. A este efeito foi dado o nome de imprinting estrogênico. O estrógeno interfere no eixo hipotalâmico-hipofisário-gonadal bloqueando a produção de gonadotrofinas e inibindo a secreção da testosterona, mas também age localmente via receptores de estrógeno presentes na próstata. A castração cirúrgica (pela retirada dos testículos) ou farmacológica acarreta involução da glândula prostática, efeito este que pode ser revertido pela reposição da testosterona. Durante este processo de regressão ocorre uma remodelação tecidual que em parte é dada pela morte das células epiteliais e pela reorganização da ECM subadjacente. Sabe-se da existência de vários fatores que atuam coordenadamente na reorganização da ECM, como enzimas proteolíticas, as MMPs, e a HPSE-1 (endo-ß--glicuronidase, que degrada cadeias de HS). Este trabalho foi dividido em dois grandes grupos de experimentos: no primeiro grupo, buscou-se investigar os efeitos globais do imprint estrogênico sobre o funcionamento prostático, a expressão da HPSE-1 na próstata ventral de ratos; no segundo grupo foi enfatizada a análise da contribuição da HPSE-1 na remodelação tecidual prostática que ocorre após a castração cirúrgica. Para a identificação e avaliação do efeito do imprinting estrogênico sobre o metabolismo prostático e sobre a expressão da HPSE-1, foram realizados experimentos em ratos Wistar neonatos e posteriores avaliações das análises morfológicas, bioquímicas e moleculares de suas próstatas na idade adulta. Neste trabalho pudemos demonstrar que a HPSE-1 desempenha papel relevante na segunda onda de morte das células epiteliais da próstata em regressão após a castração, com sua expressão aumentada 24 horas antes do segundo pico apoptótico da próstata em regressão. Pudemos evidenciar ainda que a exposição a altas doses de estrógeno na idade neonatal regula negativamente o estado metabólico prostático na idade adulta e está associado à diminuição da expressão gênica global como: maior compactação da cromatina, reduzida atividade nucleolar, e inibição da síntese protéica nas células epiteliais prostáticas. Este imprinting estrogênico resultante também refletiu no bloqueio da expressão da HPSE-1, o que foi confirmado tanto em nível de proteína como no de RNA mensageiro, particularmente nas células epiteliais. Estes resultados sugeriram um bloqueio em nível transcricional, por metilação do DNA / Abstract: The prostate gland is part of the male reproductive system and it is important for reproduction, and site of several diseases, including prostate cancer. It is highly dependent on testosterone and is modulated by estrogen, which play key roles in its growth. High doses of estrogen administrated in neoborn rats cause irreversible effects in adult prostate, the most markedly the impairment of its development and growth. This effect is named estrogen imprinting. Estrogen interferes with the hypothalamic-pituitary- gonadal axis blocking the production of gonadotropins and thereby inhibiting testosterone secretion, besides acting locally via estrogen receptors found in the prostate. Surgical (removal of the testis) or pharmacological castration, leads to the involution of the prostate gland, an effect that can be reversed by testosterone replacement. During this process, the tissue remodeling is partly given by epithelial cell death and reorganization of subadjacent ECM. Several factors act in coordination for the reorganization of the ECM, such as proteolytic enzymes, the MMPs, and HPSE-1 (endo-ß-glucuronidase that degrades HS). This work was divided into two main groups of experiments: in the first group, we sought to investigate the global effects of estrogen imprint on the functioning prostate, and included analysis of the expression of HPSE-1 in rat ventral prostate, and in the second group we emphasized the analysis of contribution of HPSE-1 in prostatic tissue remodeling that occurs after surgical castration. For the identification and evaluation of the effect of estrogen imprinting on metabolism of the prostate and on the expression of HPSE-1, experiments were performed in rats and subsequent evaluations of newborns (morphological, biochemical and molecular features) were made in their adult prostates. In this work we demonstrated that HPSE-1 plays a key role in the second wave of prostate epithelial cell death after castration, with its expression increased 24 hours before the second peak of apoptosis in prostate remodeling. We observed that chronic high doses of estrogen in the neonatal life regulates negatively the metabolic state of the prostate in adulthood and it is associated with the global gene expression decrease as: higher chromatin condensation, reduced nucleolar activity and inhibition of protein synthesis in the prostate epithelial cells. This estrogenic imprinting also reflected in blocking the HPSE-1 expression, which was confirmed at protein and mRNA synthesis blocking, particularly in epithelial cells. These findings suggested this blocking in a transcriptional level by DNA methylation / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Agricio Nubiato Crespo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:38:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_EduardoGeorgeBaptistade_M.pdf: 6583260 bytes, checksum: c2467f978ca8069f79000308c237d538 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A correção de alterações da lâmina própria nas pregas vocais, como sulcos, cicatrizes e degenerações senis, ainda é um desafio à fonocirurgia. Materiais implantáveis e métodos de implantação são continuamente investigados. Este trabalho avaliou a utilização de enxerto de fragmento da faseia lata na lâmina própria da prega vocal de cães, estudando as alterações histológicas conseqüentes, quanto à reação inflamatória aguda e crônica, à fibrose e ã neovascularização. Doze cães adultos foram submetidos à enxertia de um fragmento de 0,3 X 0,3 cm da faseia lata na lâmina própria da prega vocal direita. Na prega vocal esquerda, o mesmo acesso cirúrgico foi reproduzido, sem colocação do enxerto. Após dois e seis meses, os animais foram sacrificados e suas pregas vocais estudadas histologicamente. A faseia não induziu resposta inflamatória, aguda ou crônica, em qualquer animal, nem desencadeou fibrose além da conseqüente ao procedimento cirúrgico, como observado no lado controle. Em todos os casos, identificou-se o tecido enxertado sem evidências de reabsorção e com aumento da neovascularização, demontrando que a faseia lata apresenta integração tecidual boa na camada superficial da lâmina própria de prega vocal de cão / Abstract: Satisfactory corrective treatment for sulcus, scar and senile alterations in the lamina propria of vocal folds is still under development. This study assessed the utilization of a fascia lata graft in the vocal fold lamina propria of dogs by analyzing the histological alterations induced by acute and chronic inflammatory reactions as well as the fibrosis triggered by graft procedure and persistence. A fragment measuring 0.3 X 0.3 cm of the fascia lata was grafted in the right vocal old lamina propria of 12 adult dogs. Identical surgical access in the left vocal fold was reproduced without introducing the graft. After periods of two and six months, the animals were sacrificed and a histological study of their vocal cords was performed. Besides the reactions resulting from the surgical procedure in the control side, the fascia did not induce an acute or chronic inflammatory reaction or trigger fibrosis in any of the animals. In all the cases, the grafted tissue did not show evidence of resorption, demonstrating that the superficial layer of the lamina propria in dogs presents good tolerance to fascia lata grafting / Mestrado / Otorrinolaringologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T17:20:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_FernandaMartinsde_M.pdf: 1290451 bytes, checksum: c386eaff7996cd60bd0cc59338f8718f (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Os tendões servem para realizar a transferência de força dos músculos para os ossos, sendo capazes de suportar altas forças de tensão. Muitos trabalhos descreveram alterações nas propriedades estruturais, bioquímicas e biomecânicas dos tendões de animais que foram submetidos a exercícios prolongados, porém pouco se sabe sobre o que ocorre no tendão que passa por um processo de alongamento, um procedimento bastante comum em academias e clínicas de Fisioterapia. Assim, nosso trabalho teve como objetivo avaliar os aspectos morfológicos e bioquímicos dos tendões de ratos submetidos ao alongamento três e cinco vezes por semana. Os ratos tiveram seus músculos alongados por um período de 30 segundos intercalados com 30 segundos de relaxamento, com 10 repetições, 3 e 5 vezes por semana durante 21 dias. Os tendões foram removidos e utilizados para os procedimentos de morfologia e de bioquímica. Os tendões também foram submetidos ao ensaio mecânico sob tração a fim de avaliar suas propriedades biomecânicas. Nos cortes corados com AT, na entese dos tendões dos grupos alongados, observou-se um aumento na quantidade de células com morfologia arredondada. Já na região próxima à entese pode ser observado metacromasia mais intensa nos grupos alongados. Observações feitas nos cortes corados com HE, nas regiões de tensão, mostraram que as células apresentaram-se mais alinhadas. Nos grupos alongados, em ambas regiões ocorreu aumento na quantidade de células. Nos cortes que foram submetidos à Reação de Von Kossa, observou-se uma região calcificada em todos os grupos, porém esta apresentou uma MEC mais densa nos tendões dos grupos alongados três e cinco vezes. Análise do gel de SDS-PAGE revelou uma maior quantidade de colágeno nos grupos alongados e a presença do componente de 65 kDa nas regiões de tensão e compressão em todos os grupos. A quantidade de proteínas, de glicosaminoglicanos e de hidroxiprolina também foi superior nos animais alongados. O gel de agarose revelou a presença de dermatam sulfato nas regiões de tensão e de compressão e de condroitim sulfato somente nesta última. Durante o ensaio mecânico, os tendões dos grupos alongados suportaram valores de tensão máxima superiores, com deslocamentos semelhantes, sugerindo que estes tendões são mais resistentes à ruptura. Esses resultados mostraram que o estímulo do alongamento acarretou modificações nas características estruturais, bioquímicas e biomecânicas, confirmando o caráter adaptativo do tendão em resposta à aplicação dos procedimentos de alongamento / Abstract: The tendons are structures that transmit forces from the muscles to the bone, and are capable of supporting high tensile strenghts. Many studies have shown alterations in tendons of animals submitted to strenuous exercises, however, just a little is known about what happens in tendons when they are under a stretching program, a common procedure in academies and phisiotherapy institutes. So our objective was to evaluate the morphological, biochemical and biomechanical aspects of tendons submitted to stretching exercises. Rats had their muscles stretched for a period of 30 seconds with 30 seconds of resting, with 10 repetitions, three and five times a week during 21 days. The tendons were used for morphological and biochemical procedures. They were also submitted to mechanical tensile strain test and their mechanical properties were evaluated. Analysis of AT stained sections of enthesis from stretched tendons, showed a high amount of rounded cells. In the region next to enthesis, which passes close to the calcaneous, the metachromasy was more intense in stretched groups. In the tension region, in the HE stained sections, it was found a larger alignment of the cells in the stretched group. In both regions occurred an increase on the amount of cells. In the sections submitted to Von Kossa reaction, was observed, a calcified region in all groups, but the extracellular matrix were denser in stretched ones. Analysis of SDS-Page showed a high amount of collagen and the presence of a polidisperse component of 65 kDa in the tension and compression regions in all groups. The amount of proteins, glycosaminoglycans and hydroxiproline was higher in the tendons of three and five times stretched groups. The agarose gel revealed the presence of dermatan sulfate in the tension and compression regions and chondroitin sulfate only in this last one. During the mechanical tensile strain test, the stretched tendon supported high values of maximum stress with the same strain, when compared to the control group, suggesting that the stretched tendons were more resistant to the failure. These results show that the stimulus of stretching leads to alterations in the structural, biochemical and biomechanical characteristics, confirming the adaptative character of tendons, in response to the application of stretching exercises / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Benedicto Campos Vidal / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T22:37:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vilela_AntonellaSachsidaBraga_D.pdf: 2767480 bytes, checksum: 9a51cd19ed225ec83edcd8d932e07114 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Tecido pericardial tem sido utilizado na confecção de biopróteses empregadas na reparação de diferentes lesões. Entretanto, calcificações e falência mecânica têm sido as principais causas de durabilidade limitada de biopróteses cardíacas fabricadas com pericárdio bovino. Nesse trabalho foi realizado um estudo do pericárdio fibroso porcino em sua estrutura microscópica e sua natureza bioquímica. A morfologia geral e a arquitetura das fibras colágenas e elásticas foram estudadas em tecido seccionado e também em montagens totais, corados por diferentes métodos histoquímicos e analisados em microscopia de luz convencional, de polarização, de fluorescência e confocal. O estudo bioquímico da matriz pericardial foram realizados de acordo com procedimentos bioquímicos pertinentes. O pericárdio mostrou-se um tecido altamente celularizado com características de tecido jovem. Os feixes colagênicos apresentaram-se arranjados em camadas multidirecionalmente orientadas, formando uma rede de trama fechada, com um número maior de fibras orientando-se obliquamente, partindo da região central inferior em direção súpero-lateral esquerda em relação ao coração. Uma discreta predominância de fibras colágenas no sentido base-ápice foi verificada na região anterior direita do pericárdio. A matriz extracelular apresentou-se pouco metacromática. Observaram-se finas fibrilas elásticas intimamente associadas às fibras colágenas, entrelaçadas em direções diversas ou paralelas entre si. Extração comparativa de componentes da matriz não revelou diferenças entre proteínas extraídas das regiões direita e esquerda e também entre material fresco e congelado. A análise em SDS-PAGE revelou dezesseis proteínas com valores de massa molecular aparente entre 11 e 109 kDa. Análises realizadas sugerem que o GAG encontrado possivelmente é o dermatam sulfato. Os dados obtidos podem subsidiar novos procedimentos direcionados à obtenção de biomembranas melhor preparadas e funcionalmente mais adequadas à construção de biopróteses. / Abstract: Pericardial tissue has been used to construct bioprostheses employed in the repair different kinds of injuries. However, calcification and mechanical failure have been the main causes of limited durability of cardiac bioprostheses constructed with bovine pericardium. In the course of this work a study has been conducted on the porcine fibrous pericardium and its microscopic structure and its biochemical nature. The general morphology and the architecture of the collagen and elastic fibers have been studied in sectioned tissue and also total assemblies, stained by diverse histochemical methods and analyzed by conventional light, polarizing light, fluorescence and confocal microscopy. Biochemical study of the pericardial matrix was conducted according to pertinent procedures. The pericardium was shown as a highly cellularized tissue with a vascular tree very ramified and collagen fibers arranged in multidirectionally oriented layers. A predominant direction was verified, with a larger number of fibers obliquely oriented, starting at the lower central region towards high-lateral-left relatively to the heart. A discreet predominance of collagen fibers is the base-apex direction was verified in the right-front region of the pericardium. Extracellular matrix with little metachromasy was observed, indicating small quantities of acid glycosaminoglycans. Fine elastic fibrils were observed, intimately associated to collagen fibers, interlaced in various directions or parallel to themselves. No differences were found between proteins extracted from the right or left regions and between fresh or frozen material. The quantities of extracted GAGs were too small to be detected by the method used. The SDS-PAGE showed proteins with values of apparent molecular mass between 11 and 109 kDa included two polydisperse bands around 71 and 85kDa. The ectrophoretic analysis showed that the found GAG is possibly dermatan sulfate. / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sergio Luis Felisbino / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T07:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delella_FlaviaKarina_M.pdf: 11309280 bytes, checksum: ef8a102f72cd9b9373b2ad5df1fdea29 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As células do câncer prostático são geralmente dependentes, para o seu crescimento e sobrevivência, do estímulo androgênico mediado pelos receptores de andrógeno (RA). Conseqüentemente, a manipulação hormonal, como a castração e/ou o uso de antagonistas de RA, resulta na regressão do câncer. Entretanto, esses tratamentos raramente levam à cura da doença em estágios mais avançados e o câncer, conseqüentemente, torna-se independente de andrógeno. Importantes evidências sustentam a hipótese de que as metaloproteinases de matriz (MMPs) têm papel fundamental nos múltiplos passos da progressão tumoral, incluindo a promoção tumoral, angiogênese, invasão e metástase. As MMPs constituem uma ampla família de endopeptidases dependentes de zinco e cálcio e atuam na degradação da matrix extracelular e da membrana basal. Dois importantes membros da família das MMPs, MMP-2 e MMP-9, pertencentes à subfamília das gelatinases, são conhecidas por degradarem especificamente o colágeno do tipo IV, principal componente das membranas basais. Recentemente, o PCPT (Prostate Cancer Prevention Trial) mostrou que a finasterida, um inibidor da enzima 5_-redutase amplamente usado no tratamento da hiperplasia prostática benigna, diminuiu significativamente a incidência do câncer prostático quando comparado ao grupo que recebeu apenas placebo. Porém, tumores com gradação de Gleason entre 7 e 10 foram significativamente mais comuns no grupo tratado com finasterida que no grupo placebo. Nesse sentido, o papel da finasterida na quimioprevenção do câncer prostático necessita de mais investigação. Assim, este trabalho examinou se as alterações induzidas pela finasterida na morfologia e na fisiologia prostáticas têm impacto na expressão e atividade das MMPs 2 e 9. Ratos machos Wistar (90 dias de idade) foram tratados diariamente com injeções subcutâneas de finasterida (25mg/Kg) durante 3, 7, 30 e 90 dias. Um grupo de animais controle recebeu diariamente injeções subcutâneas do veículo farmacológico (óleo de milho). Os lobos ventrais (PVs), dorsolaterais (PDLs) e anteriores (PAs) foram dissecados, pesados e processados para as análises citoquímicas, imunocitoquímicas, morfométrico-estereológicas e de zimografias. A finasterida promoveu involução progressiva no compartimento epitelial e luminal, redução na altura e na proliferação das células epiteliais e aumentou o índice apoptótico e a área estromal dos três lobos prostáticos. A análise das zimografias mostrou que o tratamento com finasterida altera de modo lobo específico o padrão gelatinolítico da próstata do rato, com o aumento da pró- MMP-9 no dia 30 e da forma ativa da MMP-9 nos dias 30 e 90 na PV, aumento da pró- MMP-9 na PDL nos dias 7 e 30 e o aumento da forma intermediária da MMP-2 na PA no dia 7. Porém, a atrofia induzida pela finasterida não promoveu um aumento significativo na atividade das MMPs, em contraste com o que é encontrado na ablação hormonal pela castração. Isso se deve, provavelmente, ao fato das alterações promovidas pela finasterida na próstata constituírem um processo mais lento em comparação com a castração. Assim, os nossos resultados sugerem que a finasterida é eficaz no tratamento das afecções prostáticas sem promover um ambiente favorável para o crescimento de tumores invasivos e metástase / Abstract: Prostate cancer cells are generally dependent on androgen stimulation mediated by the androgen receptor (AR) for growth and survival. Therefore, hormonal manipulation, such as castration and/or the use of AR antagonists, results in a regression of the cancer. However, these treatments very rarely lead to the ''cure¿¿ of advanced disease and cancer eventually become androgen-independent. A substantial amount of evidence supports the hypothesis that Matrix Metalloproteinases (MMPs) play a key role in multiple steps of tumor progression, including tumor promotion, angiogenesis, invasion, and metastasis. MMPs constitute a broad family of zinc-binding endopeptidases that play a key role in degradation of the extracellular matrix and basement membrane. Two important members of the MMP family, MMP-2 and MMP-9, belonging to the gelatinase subfamily, are known to specifically cleave type IV collagen, the major component of basement membranes. Recently, The Prostate Cancer Prevention Trial (PCPT) showed that finasteride, a 5 alphareductase inhibitor widely employed in the treatment of benign prostatic hyperplasia, significantly decreased the incidence of prostate cancer versus placebo. However, Gleason score 7-10 tumors were significantly more common in the finasteride versus the placebo group. In this sense, the role of finasteride for prostate cancer chemoprevention needs further examination. Thus, this study examined whether the finasteride-induced changes on prostate morphology and phisiology has an impact on MMP-2 and MMP-9 expression and activity. Male Wistar rats (90 days of age) were treated daily with finasteride subcutaneously injected (25mg/Kg) during 3, 7, 30 and 90 days. A control group of animals received daily doses of vehicle (corn oil). The ventral (VPs), dorsolaterals (DLPs) and anterior (APs) lobes had been dissected, weighed and processed for citochemistry, immunocitochemistry, morphometric-stereological, and zymography analyses. Finasteride promoted a progressive involution in the epithelium and lumen compartments, reduced of the epithelial cell heights and proliferation and increased apoptosis and the stromal area in the three prostatic lobes. Gelatin zymography analysis showed that finasteride treatment changed the gelatinolitic profile in the prostatic lobes, with an increase in the pro-MMP-9 at day 30 and in the active-MMP-9 at days 30 and 90 in VP, increase in the pro-MMP-9 inDLP at days 7 and 30 and an increase in the intermediate-MMP-2 in PA at day 7. However, finasteride induced-atrophy did not cause a significant increase in MMPs activity, in contrast with is found in androgen ablation by castration. This is probably due to the fact that finasteride changes in prostate are a slow process in comparison with castration. Take together, our results suggest that finasteride is effective in treating prostate diseases without creating a most favorable environment for tumor growth invasion and metastasis / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Liana Verinaud, Wilson Savino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T05:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gameiro_Jacy_D.pdf: 7674475 bytes, checksum: 85104c8f2befe30630bf49436c0fb352 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O timo é o órgão linfóide primário responsável pelo amadurecimento dos linfócitos T. O processo de maturação é dependente da integridade do microambiente e da migração coordenada por elementos de matriz e quimiocinas dos precursores hematopoiéticos nos distintos nichos tímicos. Entretanto, a literatura mostra que profundas alterações no microambiente tímico, e conseqüentemente no desenvolvimento e amadurecimento dos linfócitos T, podem ocorrer como resultado de algumas patologias. No presente trabalho, analisamos a indução de atrofia e as alterações no microambiente tímico frente a três diferentes agentes indutores de atrofia, sendo dois agentes patogênicos, P.brasiliensis e P.berghei e uma doença metabólica, a diabetes induzida por aloxana. Nos três modelos estudados foi observada a atrofia do órgão com diferente intensidade nas alterações de componentes do microambiente tímico. Importantes moléculas associadas com a migração intratímica mostraram-se alteradas com modificações significativas nos elementos de matriz e nas quimiocinas bem como na expressão dos seus respectivos receptores. Ainda, a migração ex vivo também se mostrou alterada na atrofia induzida pelos agentes patogênicos, mas não no modelo de atrofia induzido por aloxana, sugerindo que as alterações desencadeadas são específicas de cada condição patológica analisada. As modificações nos elementos estudados sugerem alterações no padrão de migração intratímica e na exportação de timócitos, com comprometimento da função tímica, levando a maturação desequilibrada dos timócitos, com conseqüências para a resposta imune periférica. / Abstract: Thymus is the primary lymphoid organ responsible for differentiation of Tlymphocytes. This process is dependent of thymic microenvironment integrity and coordinated migration of hematopoietic precursors by chemokines and extracellular matrix elements. However, the literature shows that deep alterations in thymus microenvironment with modifications in thymocyte development may occur such as result of some pathological disorders. In this study we analyzed the atrophy induction and alterations in thymic microenvironment in three different models of thymus atrophy. We studied two models of infectious diseases, P.brasiliensis and P.berghei, and a metabolic disorder, alloxan induced diabetes. We have observed thymus atrophy in all models with different alterations levels in thymus microenvironment elements. Important molecules associated with intrathymic migration were been altered with significant modifications in extracellular matrix elements, chemokines and their specific receptors. Besides, ex vivo migration was altered in thymus atrophy induced by pathogenic agents, but no alterations were observed in diabetic mice suggesting that different pathological conditions studied, leads to singular alterations in thymus compartment. The modifications in thymic molecules observed in our models, suggest impaired thymus functionality and alterations in thymocyte migration patterns These alterations can lead T cell maturation imbalance with consequences in Tlymphocyte immune response. / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:41:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosa_RenataGiardini_M.pdf: 17497902 bytes, checksum: 703ffbe86316dbd66437c0d105646fed (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Durante a prenhez de alguns roedores ocorre um acentuado processo de remodelação da sínfise púbica (SP). No camundongo, esta articulação fibrocartilaginosa é gradativamente formada por um tecido conjuntivo fibroso, resultando no ligamento interpúbico (LI) entre os coxins de cartlagem na etapa final da prenhez. Logo após o parto, este ligamento é rapidamenteremodelado e o espaço entre os ossos púbicos se fecha por volta do quinto dia pós-parto. Sabe-se que o hormônio relaxina facilita o crescimento e remodelação dos órgãos do trato reprodutor feminino, alterando a regulação dos processos bioquímicos envolvidos na remodelação da matriz extracelular (MEC) do útero gravídico e da cérvice. Porém pouco se conhece sobre a sínfise em relação ao envolvimento de metaloproteinases (MMPs) nessa remodelação. Assim como, da participação de células inflamatórias, que poderiam estar envolvidas no processo de remodelaçãoda sínfise púbica do camundongodurantea prenhez. Neste estudo, foram utilizadas sínfises de camundongos virgens e ligamento interpúbico de animais prenhes para a detecção de MMPsin vivo e in vitro (explante de 24 horas). As MMPs da família das gelatinases (MMP-2 e MMP-9) foram caracterizadas pela zimografia e por meio de ensaios imunohistoquímicos,assim como a MMP-8 (colagenase2) associada,quase que exclusivamente, com o processo inflamatório. Também foram utilizadas microscopia eletrônica de transmissão e microspia de luz associada às colorações seletivas para evidenciar os tipos celulares que poderiam estar participandodo processo de remodelaçãoda sínfise púbica. A zimografia demonstrou a presença das gelatinases MMP-2 e MMP-9, ambas como pré e pró-enzimas, na SP e no LI. Imunohistoquímicadetectou a reação positivade gelatinasese também de MMP-8em células seme~hantesaos fibroblastos. A caracterização morfológica evidenciou que as células semelhantesa fibroblastos na sínfise de animais virgens estão próximasa matriz pericelular, ao passo que durante a prenhez, há um aumento deste subcompartimento, entre célula e matriz. As análises qualitativas e quantitativas, mostramum reduzido númerode granulócitosna sínfise de animaisvirgens e no ligamento intepúbico durante a prenhez. Dados obtidos neste trabalho suportam a hipótese de que as gelatinases estão envolvidas na remodelação da sínfise por processos intrínsecos, evidenciando que tanto as modificaçõesdo fenótipo de células semelhantes a fibroblastos, como as modificaçõesquímicas da MEC, são fundamentais para o rearranjo desta articulação durante a prenhez, parto e pós-parto no camundongo. A extensão da remodelação da MEC sugere o papel dos hormônios da prenhez na modulação da interação célula-matriz independentemente de uma reação do tipo inflamatória descrita em outros órgãos durante a prenhez / Abstract: During pregnancy of some rodents a deep remodeling occurs in the pubic symphysis (PS). In the mouse, these fibrocartilagenousarticulation are gradually replaced by a dense connective tissue, forming the interpubic ligament (IL) at the end of pregnancy. Right after birth, this ligament is rapidly remodeled and the space between the two bones is quickly closed, five days after birth. It is well known that hormones such as relaxin, facilitates the growth and remodeling of organs in female reproductive tract, changing the regulation of biochemical processes that are involved in the remodeling of the extracellular matrix (ECM) of the uterus and cervix during pregnancy. However, little are known about pubic symphysis in when the subject is the involvement of metalloproteinases (MMPs) in this remodeling, as well as the participation of inflammatorycells that could be involved in the remodeling process of the mouse pubic symphysisduring pregnancy. In this study were used pubic symphysis of virgin mice and interpubic ligament in pregnant animais for the detection of MMPs in vivo and at in vitro (24h explants). MMPs from the gelatinase family (MMP-2 and MMP-9) were characterized by zymography and by immunohistochemistryessays, also MMP-8 (collagenase 2) that is believed to be associated almost exclusively with an inflammatory processoTransmission electron microscopy and light microscopy was also used associated with selectively staining, to evidence type of cells that could be involved in the pubic symphysis remodeling. Zymographydemonstratedthe presenceof gelatinases MMP-2 and MMP- 9 both in inactive and active forms, at the PS and IL. Immunohistochemistry,at the pubic symphysis and interpubic ligament, detected the expression of gelatinases and also MMP-8 in cells that were similar to fibroblasts. Morphological characterization evidenciated that cells that are similar to fibroblasts in the pubic symphysis of virgin animais are closely related to the pericellular region, being that during pregnancy,these spaces suffers an increase in this sub-compartment between cell and matrix. Qualitative and quantitative , analysis demonstratedlittle granulocytes in the pubic symphysis of virgin animais and in the interpubic ligament during pregnancy. Results that were obtained from this work support the hypothesis that the gelatinases could be involved in pubic symphysis remodeling through intrinsic processes, being evident that, both cellular phenotype modifications and also chemical modifications of the ECM, are fundamental to the rearrange of this articulation during mouse pregnancy, birth and pos-partum. The extensive remodeling of the ECM suggests hormonal role of the pregnancy in the modulation of the interaction between cell-matrix independently of an inflammatoryreaction in other organs during pregnancy / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T19:16:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aro_AndreaAparecidade_M.pdf: 2216863 bytes, checksum: ab5348a9628ee1b1c771905a93337915 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Músculos, tendões e ligamentos constituem a maioria das estruturas afetadas durante a realização de atividades desportivas, assim um melhor conhecimento sobre essas estruturas é de grande interesse para profissionais que tratam da reabilitação. Pouco se sabe sobre os efeitos do alongamento sobre aspectos bioquímicos e estruturais de tendões, quando usado como modalidade terapêutica após longo período de imobilização. No presente estudo, com o objetivo de avaliar a resposta do tecido frente a procedimentos de alongamento após imobilização, ratos wistar foram divididos em cinco grupos experimentais: controle do grupo Imobilizado (ratos não imobilizados), grupo Imobilizado (ratos imobilizados por 4 semanas), controle do grupo Imobilizado Alongado e Imobilizado Livre (ratos sem imobilização e alongamento), grupo Imobilizado e Alongado (imobilizados por 4 semanas e alongados durante 3 semanas) e grupo Imobilizado e Livre (imobilizados por 4 semanas e livres na gaiola por 3 semanas). Os tendões foram retirados e separados em regiões proximal (tensão) e distal (compressão) para serem analisados. Para as análises bioquímicas as regiões distal e proximal foram extraídas com cloreto de guanidina e os extratos analisados por SDS-PAGE, dosagem de proteínas não colagênicas e glicosaminoglicanos (GAGs) sulfatados. Para quantificação de hidroxiprolina os tendões foram hidrolisados em HCl. Para as análises morfológicas os cortes de tendões foram corados com Hematoxilina-eosina (HE), Azul de Toluidina (AT) e Ponceau SS (PSS). A análise em SDS-PAGE não mostrou diferenças marcantes entre os grupos, mas uma banda de colágeno mais proeminente foi observada no grupo IL em relação ao IA e ao grupo controle na região de compressão. A dosagem de hidroxiprolina mostrou maior concentração no grupo I na região de compressão. Nenhuma diferença foi observada na região de tensão. Com relação à concentração de proteínas não colagênicas, foram detectadas diferenças apenas na região de tensão, com maiores concentrações no grupo I. Quando comparados os grupos IA e IL, valores mais altos foram encontrados no grupo IA. Foi observado presença abundante de GAGs sulfatados, especialmente de condroitim sulfato, na região de compressão do grupo IA. A presença de dermatam sulfato foi marcante nas regiões de compressão e tensão dos grupos I e IL. A análise em microscopia de polarização de cortes corados com PSS indicou maior desorganização dos feixes de colágeno no grupo I, com parcial recuperação após alongamento ou apenas remobilização. Uma revisão no procedimento de alongamento deveria ser considerada em experimentos futuros, considerando a duração e periodicidade das sessões, visando melhorar sua eficiência em casos de tendões previamente imobilizados / Abstract: Muscles, tendons and ligaments are present in most of structures that may be injured during sportive activities, so a better knowledge on these structures is very important for professionals who work with rehabilitation. Little is known about the stretching effects on the biochemical and morphological features of the tendons, specially when tendons are submitted to a long period of immobilization. In the present work our purpose was evaluate the response of the tissue to the procedures of stretching followed of immobilization, rats wistar were divided into five experimental groups: control Immobilized (rats not immobilized), Immobilized (immobilized for 4 weeks), control Immobilized and Stretched / Immobilized and Free (rats without immobilization and stretching), Immobilized and Stretched (immobilized for 4 weeks and stretched during 3 weeks) and Immobilized and Free (immobilized for 4 weeks and free in the cages for 3 weeks). The tendons were removed and the proximal (tension) and distal (compression) regions were separated to be analyzed. For biochemical analysis the proximal and distal regions were extracted with guanidinium chloride and the extract analyzed for SDS-PAGE, non-collagenous proteins, and sulfated glycosaminoglycan (GAGs sulfated). For quantitation of hydroxyproline the tendons were hydrolysed in HCl. For morphological analysis the sections of the tendons were stained with Haematoxylin-eosin (HE), Toluidine Blue (AT) and Ponceau SS (PSS). Observations were with polarization microscopy. Analysis in SDS-PAGE showed no remarkable differences amongst the groups, but a more prominent band of collagen was observed in the IF in relation to IA and control groups in the compression region. Analysis of the quantity of hydroxyproline showed more concentration in the I group in the compression region. No differences were observed in tension region. With respect to the concentration of non-collagenous proteins, differences were detected only in the tension region, where larger concentrations were found in the I Group. When IS and IF were compared, highest values were found in the IS group. A more abundant presence of sulfated GAGs, especially chondroitin sulfate, was found in the compression region of the IS group. The presence of dermatan sulfate was remarkable in the compression and tension regions of I and IF groups. Analysis of sections stained with Ponceau SS, under polarization microscopy, indicated that the I group exhibits a larger disorganization of the collagen bundles, partially recovered after stretching or with only remobilization. A revision in the stretching procedure should be considered in future experiments, in terms of duration and periodicity of the sessions to try improving the efficiency of the stretching in cases of previous immobilization of tendons / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural