Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Ripening is the phase which determines the aroma and flavour of a mature cheese, and it demands special care. One of these cares is the prevention of fungi development on its surface. The objective of this study was to control the development of fungi during maturation of Minas standard cheese, through the use of two anti-fungi in aqueous solution, after the salt process. The treatments included the control, natamicine at 0,05% and 0,1% concentrations, and the sorbate of potassium at 25% and at 30%. Physical - chemical and microbiological analysis were realized. The experiment was submitted to sensorial analysis by a non-trained panel. The results have shown that the natamicine, as well as, the potassium sorbate have retarded the microbic development, and did not affect, significantly, the sensorial quality of the cheese. However, it was concluded that the most effective treatment to prevent fungi development in Minas standard cheese was the potassium sorbate at 30%, because in the three analysis period was observes the least mould and yeast development than other treatments. / A maturação é a fase que determina o aroma e sabor de um queijo maturado, e exige cuidados especiais. Um destes cuidados é a prevenção do crescimento de fungos na sua superfície. O presente trabalho teve como objetivo controlar o crescimento de fungos durante a maturação do queijo Minas padrão, através do uso de dois antifúngicos em solução aquosa, após a salga. Os tratamentos constaram do controle, da natamicina nas concentrações de 0,05 % e 0,1 % e o sorbato de potássio a 25 % e a 30 %. Realizou-se análises físico-químicas e microbiológicas. O experimento foi submetido à análise sensorial por um painel não treinado. Os resultados demonstraram que tanto a natamicina como o sorbato de potássio retardaram o crescimento microbiano e não afetaram, de forma significativa, a qualidade sensorial dos queijos. Entretanto, conclui-se que o tratamento mais eficiente para prevenção do desenvolvimento de fungos em queijo Minas padrão foi o sorbato de potássio a 30 %, pois nos três períodos de análise observou-se a menor contagem de bolores e leveduras comparando com os outros tratamentos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to characterize the Grb10 and Grb14 mRNA and protein expression in COCs derived from follicles of different stages of development (1-3, 4-6, 6-8 and >8mm in diameter) and determinate the involvement of the estradiol in the Grb10 and/or Grb14 mRNA expression. Firstly, a pool of the 80 COCs from follicles at 3 to 8mm was used to demonstrate Grb14 and Grb10 mRNA expression in denuded oocytes and respective cumulus cells. The expression was detected in oocyte and cumulus cells. To characterize the experimental model, oocytes from different follicle size were submitted to nuclear maturation assessment and evaluated for competence to reach metaphase II. Maturation competence began in oocytes from follicles larger than 2mm in diameter (P<0,01) and increased throughout follicular development, since, oocytes from follicles of 1-3mm and 4-6mm had lower maturation rate than those from follicles of 6-8 and >8mm (P<0,05). In the first experiment, Grb10 and Grb14 mRNA expression was assessed by qRT-PCR in COCs from different follicle size. The expression of Grb10 mRNA in oocytes from 1-3 and 4-6mm follicles was higher (P<0,05) than those from 6-8 and >8mm follicles. However the Grb14 mRNA relative expression was higher in oocytes of group 1-3mm decreasing (P<0,05) as the follicle size increase. In addition, we performed the localization of the Grb10 protein by immunofluorescence analysis. Positive fluorescence signal for Grb10 was detected in all analyzed samples. To evaluate an hormonal influence on the Grb10 and Grb14 mRNA expression, oocytes from follicles at 3-8mm were cultured in the presence of follicular cells in medium supplemented with 17β-estradiol and/or fulvestrant (an estradiol antagonist). The mRNA expression did not show statistical difference between treatments groups (P>0,05). Based on this results, we conclude that Grb10 and Grb14 mRNA and Grb10 protein are expressed COCs in cattle. In addition, the differential expression observed in COCs from different follicle size suggest an involvement of the Grb10 and Grb14 genes in the bovine oocyte competence. / O objetivo do presente trabalho foi caracterizar as proteínas Grb10 e Grb14 em complexos cumulus-oócito (CCOs) de bovinos oriundos de folículos em diferentes fases de desenvolvimento e mostrar o envolvimento do estradiol na regulação da expressão de RNAm. Primeiramente, foram obtidos pool de CCOs de folículos de 3-8mm para verificar a expressão de RNAm para Grb10 e Grb14 no oócito desnudo e nas células do cumulus. Tanto o oócito quanto as células do cumulus expressaram RNAm para as proteínas em estudo. Com o intuito de caracterizar o modelo experimental utilizado, foi verificado que a competência à progressão meiótica se da em oócitos oriundos de folículos com diâmetro >2mm (P<0,01) e aumenta ao longo do desenvolvimento folicular, já que, oócitos oriundos de folículos de 1-3 e 4-6mm apresentam taxas de maturação inferiores aos oócitos oriundos de folículos de 6-8 e >8mm (P<0,05). O primeiro experimento foi delineado com o intuito de demonstrar uma expressão diferencial de mRNA para as proteínas Grb10 e Grb14 ao longo do desenvolvimento folicular. Para isso os grupos de CCOs (1-3, 4-6, 6-8 e >8mm) foram submetidos a extração RNA e transcrição reversa. A expressão relativa dos genes foi realizada por PCR em tempo real. Nesse experimento foi verificado que a expressão do gene Grb10 em CCOs esteve elevada nos grupos 1-3 e 4-6mm, diminuindo nos grupos 6-8 e >8mm (P<0,05). Já a expressão de mRNA de Grb14 esteve alta no grupo 1-3, diminuindo (P<0,05) conforme o aumento do tamanho folicular. Além disso, foi realizada a localização da proteína Grb10 pela técnica de imunofluorescência. A proteína Grb10 foi localizada tanto no oócito como no cumulus dos grupos de CCOs (1-3, 4-6, 6-8 e >8mm) porém a localização foi mais evidente em CCOs oriundos de folículos com diâmetro <6mm. Com o intuito de identificar uma influência hormonal na regulação da expressão de Grb10 e Grb14, foi realizado um terceiro experimento no qual CCOs oriundos de folículos de 3-8mm foram co-cultivados com metades foliculares em meio suplementado com estradiol-17β e/ou fulvestrant (antagonista do estradiol) durante 6h. A expressão de RNAm não apresentou diferença significativa entre os tratamentos (P>0,05). Com base nesses resultados pode-se concluir que há expressão de RNAm para Grb10 e Grb14 bem como localização da proteína Grb10 em CCOs de bovinos, e que a expressão diferencial de RNAm sugere um envolvimento desses genes na aquisição de competência oocitária ao longo do desenvolvimento folicular. Portanto novos estudos precisam ser feitos para entender um mecanismo de regulação na expressão de RNAm.

Orientadores: Adriane Elisabete Antunes de Moraes, Izildinha Moreno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas / Made available in DSpace on 2018-08-24T08:36:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_NataliaChinellatodeAzambuja_M.pdf: 4159232 bytes, checksum: 2e7450f8e5d25cd46199b110960d9b48 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A utilização de culturas adjuntas é uma das novas alternativas tecnológicas que vem sendo estudada por pesquisadores de diversos países visando a melhoria da qualidade geral de produtos alimentícios, em especial produtos lácteos como queijos, leites fermentados, iogurte e outros. Outra vantagem é a obtenção de novas variedades de produtos que passam a apresentar sabor, aroma e outras características diferenciadas. O presente trabalho teve como objetivo a avaliação do papel da cultura de L. helveticus (LH-B02 / CHR-Hansen) na acidificação, proteólise, redução do amargor, determinação do perfil de aminoácidos das amostras de queijo Prato e possível liberação de peptídeos bioativos. No estudo os queijos foram fabricados com cultura CHN-22 (cultura mesofílica aromática / CHR-Hansen) com e sem adição da cultura adjunta L. helveticus (LH) de modo a verificar se a presença da cultura adjunta influencia na qualidade da maturação do queijo Prato e se esta cultura é possível produtora de peptídeo bioativo inibidores da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA). Para obtenção dos queijos Prato foram realizados três processamentos em planta piloto, com dois tratamentos diferentes, com e sem adição da cultura adjunta de L. helveticus. Dentro do período de maturação, ou tempo de estocagem, dos queijos, foram realizadas as análises microbiológicas, físico-químicas, eletroforéticas, cromatográficas e análise sensorial. Os queijos elaborados apresentaram composição típica de queijo Prato e atenderam aos padrões microbiológicos exigidos para o consumo do produto. Em relação ao perfil eletroforético observou-se aumento no desdobramento da fração ?s1-caseína pela ação do coalho, com surgimento de uma banda de maior intensidade, correspondente à ?s1-I-caseína, mais evidente no queijo com a adição da cultura de L. helveticus. Essa cultura também intensificou a degradação da ?-caseína com aparecimento das bandas de ?3-, ?1- e ?2-, já visíveis com 10 dias de maturação. A amostra de queijo adicionado da cultura adjunta foi mais bem aceita sensorialmente do que a amostra controle (apenas adicionado de CHN-22) e queijo comercial diferindo estatisticamente (p?0,05) destes em alguns parâmetros, tais como aceitação global, aroma, sabor e intenção de compra. Os índices de extensão de proteólise (IEP) e profundidade da proteólise (IPP) dos queijos Prato com e sem adição de cultura adjunta, praticamente não diferiram entre si, embora em todos os casos tenham sido observados aumento dos índices ao longo do tempo de maturação. Através da análise de aminoácidos livres, as amostras de queijo adicionadas de L. helveticus apresentaram teores maiores de aminoácidos comparadas com as amostras sem adição desta cultura. Pelo teste estatístico apenas os aminoácidos histidina, cistina e triptofano não diferiram quantitativamente entre os tratamentos (p?0,05). Na eletroforese capilar (CE) foi encontrado apenas para a amostra adicionada da cultura adjunta aos 31 dias de maturação um pico com tempo de retenção na faixa de 9 a 12 minutos, indicando a possível presença dos tripeptídeos de interesse na amostra / Abstract: The use of adjunct cultures is a new alternative technology that have been studied by researchers from several countries in order to improve the overall quality of food products , especially dairy products such as cheese , fermented milk , yogurt and others. Another advantage is to obtain new varieties of products with new flavours and texture. This study aimed to evaluate the role of culture L. helveticus (LH-B02 / CHR- Hansen) acidification, proteolysis, reducing bitterness, determination of the amino acid profile of Prato cheese and possible release of bioactive peptides. In the present study the cheeses were manufactured with culture CHN-22 (mesophilic aromatic culture / CHR-Hansen) with and without adjunct culture of L. helveticus (LH) in order to verify if the presence of the adjunct culture influences the quality of the cheese ripening and if this culture can produce bioactive peptide that may couse the inhibition of Angiotensin Converting Enzyme (ACE). To obtain the Prato cheese three processins in pilot plant were done, with two different treatments, with and without addition of adjunct culture of L. helveticus. Within the period of maturation, and storage time it was conducted microbiological, physicochemical, electrophoretic, chromatographic and sensory analysis. The cheeses produced presented composition typical of Prato cheese and attended the microbiological standards required for the consumption of the product. Regarding the electrophoretic profile it was observed an increase in a break on the fraction ?s1-casein by the action of rennet, with the appearance of a band of greater intensity, corresponding to ?s1-I-casein, most evident in the cheese with the addition of the culture of L. helveticus. This culture also intensified the degradation of ?-casein with the appearance of bands ?3, ?1 and ?2-casein, already visible at 10 days of ripening. The sample of the cheese added adjunct culture was more acceptable sensory than the control sample (just added CHN-22) and was statistically different (p?0.05) of commercial cheese in some of these parameters, such as overall aceptability, aroma, taste and purchase intent. The extension rates of proteolysis (IEP) and depth of proteolysis (IPP) of the Prato cheese with and without addition of adjunct culture were different. In all cases it was observed increased rates over time for maturation. By analyzing the free amino acid, samples of cheese added L. helveticus presented higher levels of amino acids compared with the samples without the addition of this culture. By the statistical test only the amino acid histidine, cysteine and tryptophan did not differ between treatments (p?0.05). In capillary electrophoresis (CE) a peak with retention time in the range of 9 to 12 minutes, indicating the possible presence of tripeptides of interest was found in the sample added by the adjunct culture after 31 days of ripening / Mestrado / Nutrição / Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

Made available in DSpace on 2017-06-01T18:08:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 raquel_carvalho_queiroz.pdf: 803013 bytes, checksum: c364f4d8c3ab66e929f3eef6a8d135e8 (MD5) Previous issue date: 2014-04-30 / In the current context of the treatment of psychosis, there is an emphasis in favor of use, almost exclusively, of psychotropic drugs. In this way, we have pointed out the importance of considering the impact of this abusive use in the ripening process of this subject. For both, the present research used the bibliographic data bases of the Scielo, NCBI, Fiocruz, Anvisa and WHO; in addition to online libraries of universities and psychoanalytic´s institutions. For the searches, we used descriptors such as: treatment of psychosis, ripening process of Winnicott and excessive use of psychotropic drugs. We depart from the constitution and evolution of psychiatric knowledge and psychoanalytic about insanity. Then, based on the theory of the maturation process of the subject of Winnicott, is presented the panorama of this theory, in order to substantiate that form the medication´s can interfere in this process. Finally, are discussed the proposals of psychoanalytic and psychiatric treatment of psychosis, highlighting the consequences of improper use of medicines. In this regard, the present study points to the importance for an ethical practice of professionals who works with this clinical specificity. In addition, we emphasize the fundamental aspect of cautious use of psychotropic drugs for which he may assist the subject in the resumption of the process. / No contexto atual do tratamento da psicose, há uma ênfase em prol da utilização, quase exclusiva, de psicofármacos. Desse modo, apontamos para a importância de se considerar as repercussões desse uso de forma abusiva no processo de amadurecimento desse sujeito. Para tanto, a presente pesquisa bibliográfica utilizou as bases de dados do Scielo, NCBI, Fiocruz, Anvisa e OMS; além de bibliotecas online de universidades e de instituições psicanalíticas. Para as buscas, utilizamos descritores como: tratamento da psicose, processo de amadurecimento de Winnicott e uso excessivo de psicofármacos. Partimos da constituição e evolução do saber psiquiátrico e psicanalítico acerca da loucura. Em seguida, baseada na teoria do processo de amadurecimento do sujeito de Winnicott, é apresentado o panorama dessa teoria, de modo a fundamentar de que forma a medicação pode interferir nesse processo. Por fim, são discutidas as propostas de tratamento psicanalítico e psiquiátrico da psicose, dando destaque às consequências do uso abusivo dos medicamentos. Nesse sentido, o presente estudo aponta para a importância para uma prática ética dos profissionais que atuam com essa especificidade clínica. Além disso, ressaltamos o aspecto fundamental do uso comedido do psicofármaco para que ele possa auxiliar o sujeito na retomada desse processo.

O estágio maturação biológica é um fator importante que influencia o processo de seleção e promoção de talentos esportivos. Vários autores têm demonstrado que diferentes aspectos morfofuncionais, como por exemplo, o tamanho corporal, a velocidade e a força, possuem um ritmo de desenvolvimento individual durante o período da puberdade, sendo altamente dependente do estágio de maturação biológica. Diante dessa influência da maturação biológica sobre o processo de seleção de jovens atletas, outro fenômeno vem sendo observado durante esse processo, o Efeito da Idade Relativa (EIR). O EIR refere-se à influência que os meses de nascimento (idade cronológica) podem provocar na aprendizagem e no desempenho de jovens em uma determinada tarefa e/ou processo ensino-aprendizagem. Portanto, seguindo o pressuposto do EIR, os sujeitos nascidos nos primeiros trimestres do ano poderiam apresentar vantagens biológicas (ex. hormônios), físicas (ex. estatura, peso, força, etc.), cognitivas, psicológicas e de aprendizagem sobre sujeitos de mesma idade cronológica nascidos nos últimos meses do ano. Essas variações poderiam afetar o desempenho, provocando a superestimação dos resultados observados no momento da avaliação. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi analisar a maturação biológica e o EIR entre os jovens atletas selecionados para programas de treinamento em longo prazo no futebol. Para tanto, em um primeiro momento foram avaliados jovens atletas de futebol, participantes do processo de seleção de talentos para ingresso na categoria sub-14 de um clube de futebol com destaque nacional e internacional. No segundo momento foram coletadas as mesmas variáveis apenas no grupo de jovens selecionados para compor a equipe sub-14 do referido clube. Os parâmetros avaliados foram: mês de nascimento, nível de maturação sexual, concentração de testosterona, composição corporal e força geral (preensão palmar). De maneira geral, os resultados permitiram concluir que há uma forte presença do EIR na amostra investigada de jogadores de futebol apresentando diferentes datas de nascimento entre iniciantes/titulares e excluídos, com maior participação de jogadores nascidos no primeiro trimestre no grupo de iniciantes/titulares (75%) quando comparados ao grupo selecionado (50%). Também foi detectada uma concentração de testosterona mais elevada para os jogadores selecionados (172,0 ± 43,1 nmol.L-1) em comparação com os jogadores excluídos (130,3 ± 28,3 nmol.L-1). Portanto, os achados atuais sugerem uma forte influência do EIR e da maturação biológica no processo de seleção de jovens jogadores de futebol / The biological maturation status is an important factor that influences the talent identification process and development of sports talent. Several authors have shown that different morphological and functional aspects, such as body size, speed and strength have an individual rate of development during puberty, being highly dependent on the stage of sexual maturation. Given this influence of biological maturation on the talent identification process of young athletes, another phenomenon has been observed during this process, the Relative Age Effect (RAE). The RAE refers to the influence that the months of birth (chronological age) can result in learning and performance of a given task in young people. Therefore, following the assumption of the RAE, subjects born in the first quarters of the year could provide biological advantages (eg. hormones), physical (eg. height, weight, strength, etc.), cognitive, psychological and learning about the same subject chronological age born in the last months of the year. These variations could affect performance, causing overestimation of the results observed during the talent identification process. Thus, the objective of this study is to analyze the biological maturation and RAE between young athletes selected for training programs in football long term. Therefore, in the first instance will be assessed youth soccer players participating in the talent selection process for entry into the under-14 category of a football club, with national and international prominence. In the second phase will be collected the same variables in the group of young people selected to make the under-14 team of the club. The parameters are: month of birth, level of sexual maturity, testosterone, body composition, and overall strength (grip hand). In general, the results allowed to conclude that there is a strong presence of EIR in the sample investigated of soccer players showing a different birth date distribution was observed between starters and dismissed players with a greater participation of players born in the first trimester in the starters group (75%) when compared to the selected group (50%). Also a higher testosterone concentration was detected for starters players (172.0 + 43.1 nmol.L-1) as compared to dismissed players (130.3 + 28.3 nmol.L-1). Therefore, current findings suggest a strong influence of EIR and biological maturation on the selection process of young soccer players

O óxido nítrico (NO) é um mensageiro químico gerado pela atividade da enzima óxido nítrico sintase (NOS) a qual foi detectada em vários órgãos incluído o sistema reprodutor. O sistema NOS/NO parece desempenhar papel importante na maturação oocitária entre outras funções. No entanto, apesar das evidências, há poucos estudos sobre o papel desse sistema em oócitos da espécie bovina. Sabe-se que o NO atua pela via da guanilato ciclase (GC) estimulando a produção do nucleotídeo GMPc, que por sua vez é capaz de influenciar os níveis de outro nucleotídeo, o AMPc, que é um importante elemento da via de sinalização das gonadotrofinas nos oócitos e no controle da maturação oocitária. O objetivo do presente estudo foi de investigar o envolvimento da via do GMPc na ação do sistema NOS/NO na maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos e seu efeito sobre a via do AMPc. Com a maior concentração estudada do doador de NO (10-7M de SNAP), apenas 36% dos oócitos conseguiram alcançar o estágio de RVG (P< 0,05), após 9 horas de maturação. Esse atraso também foi observado com diferentes concentrações do estimulador de GC (5, 10 ou 50&mu;M de Proptoporfirina IX) e pelo análogo de GMPc (1, 2 e 4mM de 8-Br-GMPc ), que apresentaram uma taxa média de RVG de 50% para os tratamentos e 70% para os grupos controles sem as drogas (P<0,05). No início da maturação (0h), os níveis de GMPc foram de 5,29 pmol/oócito sofrendo uma queda logo na primeira hora de cultivo para 2,97 pmol nos oócitos do grupo controle e 1,54 pmol nos cultivados com associação de 10-7M de SNAP (doador de NO) e 100&mu;M de OQD (inibidor de GC (P<0,05). No grupo de oócitos cultivados apenas com SNAP, os níveis de GMPc se mantiveram em 4,51 pmol/oócito, semelhante ao grupo imaturo (0h de cultivo, P>0,05). O doador de NO manteve estável o nível de GMPc somente na primeira hora de maturação. Após 3 e 6 h de MIV, os níveis de GMPc permaneceram baixos e similares (0,07 a 2,46 pmol/oócito, P>0,05) nos grupos controle (sem drogas), tratado com doador de NO (10-7M de SNAP) associado ou não ao inibidor de guanilato ciclase (100&mu;M de OQD). Também foi observada uma queda nos níveis de AMPc em relação ao grupo imaturo (32,42 fmol de AMPc/oócito) para os demais grupos (P<0,05), que apresentaram aproximadamente, 12,0 a 16,0 fmol de AMPc/oócito durante a primeira hora, 3,3 a 8,0 fmol/oócito durante a terceira hora e 7,4 a 18,3 durante a sexta hora de maturação (P>0,05). O NO afetou os níveis de GMPc no início da maturação, mas não os níveis de AMPc. O NO e o GMPc podem atuar no controle da expressão gênica de uma série de proteínas envolvidas no controles dos níveis de AMPc e GMPc ou suas funções. Esse controle pode ser efeito direto do NO (PKG2, PDE3A, PDE4D e PDE8A), do GMPc (ADCY6) ou do NO via GMPc (PKA1) e varia com o compartimento considerado (oócito ou células do cumulus). Esses resultados demonstraram a inter-relação das vias NO/GMPc/AMPc e toda a sua complexidade dependendo do tipo celular e da fase da maturação de oócitos bovinos. / The NOS/NO system seems to play an important role in oocyte maturation besides other functions. However, despite the evidence, there are few studies on the possible role of this system in bovine oocytes. It is known that NO acts via guanylate cyclase (GC) by stimulating the production of the nucleotide cGMP, which in turn can influence the levels of another nucleotide, cAMP, which is an important element of the signaling pathway of gonadotropins in oocytes and in the control of oocyte maturation. The aim of the present study was to investigate the involvement of the cGMP pathway in the action of the NOS/NO system on the in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes and its effect on the cAMP pathway. The highest studied concentration of the NO donor (10-7M SNAP), only 36% of oocytes were able to undergo GVBD (P<0.05) after 9 hours of maturation. This delay was also observed with different concentrations of the GC stimulator (5, 10 or 50&mu;M Proptoporfirin IX) and the cGMP analogue (1, 2 and 4 mM 8-Br-cGMP), which had an average of 50% GVBD for treatment groups and 70% for control groups without drugs (P<0.05). At the beginning of maturation (0 h) cGMP levels were 5.29 pmol/oocyte and decreased within the first hour of culture to 2.97 pmol and 1.54 pmol in the control group and in oocytes cultured in 10-7M SNAP (NO donor) associated with 100&mu;M OQD (GC inhibitor; P<0.05). In the group of oocytes cultured only with SNAP, cGMP levels remained at 4.51 pmol/oocyte similar to the immature group (0 h culture, P> 0.05). The increase of NO maintained cGMP levels stable only during the first hours of maturation. After 3 and 6 h IVM, cGMP levels remained low and similar (0.01 to 2.5 pmol/ ocyte, P>0.05) in control (without drugs), treated with NO donor (SNAP 10-7M) with or without the guanylate cyclase inhibitor (100&mu;M OQD). A decrease in cAMP levels was also observed when compared with the immature group (32.42 fmol cAMP/oocyte) for the other groups (P <0.05), which showed 12.0 to 16.0 fmol cAMP/oocyte after the first hour, 3.3 to 8.0 fmol/oocyte after the third hour and 7.4 to 18.3 after the sixth hour of IVM (P>0.05). NO and cGMP may act to control gene expression in a series of proteins involved in control of the levels of cAMP and cGMP or their functions. The control may be a direct effect of NO (PKG2, PDE3, PDE4D and PDE8A), cGMP (ADCY6) or NO via cGMP (PKA1) and varies with the compartment considered (oocyte or cumulus cells). The results showed the interrelationship of the NO/cGMP/cAMP pathway and all its complexity depending on the cell type and the stage of maturation in bovine oocytes.

O pH final (pHf) no músculo post mortem é amplamente utilizado como um indicador potencial de maciez e é um fator importante associado à qualidade de carne. O Brasil é líder mundial nas exportações de carne bovina, porém não são conhecidos os valores de pHf do músculo pós-abate e seu impacto na qualidade da carne de animais machos inteiros Bos taurus indicus. Baseado no exposto, objetivou-se com este trabalho identificar o atual \"status\" dos valores de pHf 24 h post mortem apresentados no frigorífico comercial, e a influência do pHf na proteólise muscular e parâmetros de qualidade como perda por gotejamento, cor e maciez de machos inteiros avaliados aos 0, 7, 14, 21 e 28 dias de maturação. Foi realizado um estudo preliminar, com 399 carcaças em abatedouro comercial, para conhecer a ocôrrencia pHf de animais machos inteiros abatidos no Brasil, podendo-se identificar três faixas de pHf: pHf 5,5 até 5,8 (baixo-normal); pHf 5,81 até 6,3 (intermediário); pHf > 6,3. Músculos Longissimus dorsi (n=12) foram porcionados em bifes, embalados a vácuo, classificados nos três diferentes grupos de pHf e maturados a 2°C por 0 (48h), 7, 14, 21 e 28 dias. Foram avaliadas características de perda por gotejamento, cor, força de cisalhamento, índice de fragmentação miofibrilar, colágeno total e solúvel, assim como proteólise miofibrilar. Carnes pertencentes ao grupo de pHf alto, apresentaram maior maciez (P<0,05) desde o início do experimento, quando comparado aos outros grupos do estudo. Bifes de pHf intermediário apresentaram os valores de força de cisalhamento mais elevados (P<0,05), o que indica um processo de maciez mais lento quando comparado com os outros grupos de pHf. Perdas por gotejamento, diminuem com o aumento nos valores de pHf (P< 0,05). Valores de L*, a*, b*, não apresentam diferenças entre os grupos de pH. O índice de fragmentação miofibrilar (MFI) foi maior em carne de pHf alto, seguido pelo grupo de pHf baixo-normal, e os menores valores pertenceram ao grupo de pHf intermediário (P<0,05) através do tempo de maturação. A degradação das proteínas como desmina e troponina-T foi maior e mais visível no pHf alto e baixo-normal desde as 48 h post mortem em comparação com o pHf intermediário, onde foram observadas as bandas de sua degradação quase ao final do período experimental. Proteínas chave como filamina e nebulina apresentaram maior degradação desde as 48 horas post mortem no pHf alto e mais lenta no pHf intermediário. Não foram observadas diferenças (P> 0,05) nos valores de colágeno total e solúvel nos diferentes grupos de pHf e nem através do tempo de maturação. Em geral, o grupo de pHf intermediário (5,8-6,3) apresentou maior inconsistência quanto às características de maciez e fragmentacão miofibrilar, consequência de uma proteólise tardia. / The ultimate pH (pHu) of the postmortem muscle is broadly use as a potential meat tenderness indicator and is an important factor related to meat quality. Brazil is the bovine meat exporter world leader; nevertheless the values of the postmortem pHu of the muscle and its impact on the meat quality of Bos indicus taurus bulls, are unknown. Therefore, the objective of this research was to establish the values of pHu after 48 hours postmortem and its impact over the meat quality through the characterization of the biochemical processes that occurs in the muscle Longissimus dorsi of Bos taurus indicus bulls. In order to know the actual pHu of the Brazilian bulls, a preliminary study were made, using 399 carcasses of a commercial slaughter house and resulting three levels of pHu: pHu 5,5 to 5,8 (low-normal); pHu 5,81 to 6,3 (intermediate); pHu > 6,3 (high). Twelve muscles Longissimus dorsi were cut into steaks, classified into the three groups of pHu, vacuum packed up and matured at 2°C for 0 (48h), 7, 14, 21 and 28 days. Drip loss, color, shear force, myofibril fragmentation index, total and soluble collagen and miofibrillar proteolysis were evaluated. The high pHu meat presented more tenderness from the beginning of the experiment (P<0,05) when compared with the other groups. The medium pHu steaks presented the highest shear force values (P<0,05), indicating a slower tenderization process in relation to the other pHu groups. The drip loss values diminished as the value of pHu rised (P< 0,05). The values of L*, a*, b* did not show significant differences within the groups of pHu. The highest miofibrillar fragmentation index (MFI) through the maturation time, was found in the high pHu meat, followed by the low pHu group and then by the intermediate pHu group (P<0,05). At 48 hours postmortem, degradation of proteins, like desmin and troponin-T, was higher and more evident in the high and low-normal pHu when compared to the intermediate pHu, where the bands and its degradation were only observed by the end of the experiment. Key proteins like filamin and nebulin, showed higher degradation rate from the 48 h postmortem in the high pHu group, and a slower degradation in the intermediate pHu group. No differences were observed through the pHu groups, nor through the maturation time (P<0,05), for total and soluble collagen values. Then, it is possible to say that the meat quality of Bos taurus indicus bulls, especially the tenderness, is related to the pHu, and can be affected by the proteolytic systems activity. In general, the tenderness and the MFI were more inconsistent in the medium pHu group (5,8-6,3) than in the two other pHu groups, as a consequence of a late proteolysis.

A resposta da produção in vitro de embriões (PIVE) é reduzida quando comparada à in vivo. O aprimoramento do conhecimento dos mecanismos de maturação de oócitos bovinos permite fornecer embasamento para incrementar os sistemas in vitro, aproximando-os do ideal fisiológico. O presente estudo visou investigar os efeitos da suplementação dos meios de maturação com FGF16 (10 ng/ml), BMP15 (100 ng/ml) e a interação de ambos sobre parâmetros relevantes ao desenvolvimento do complexo cumulus oócito (COC), tais como: expansão as células do cumulus (CC), fragmentação de DNA em CC e oócito, maturação nuclear oocitária, metabolismo energético e produção de progesterona. Os COC foram maturados em meios de tratamento (controle, FGF16, BMP15 e FGF16+BMP15) e avaliados em diferentes momentos da MIV (0 e 22 horas). A análise da expansão das CC demonstrou efeito positivo (p=0,0071) da BMP15 (11,34&plusmn;1,09 unidade arbitrária/UA) e da combinação FGF16&#43;BMP15 (11,34&plusmn;0,61 UA) em relação ao grupo controle (8,73&plusmn;0,44 UA) e ao suplementado com FGF16 (9,42&plusmn;0,65 UA). A presença de fragmentação de DNA em CC (p=0,0015) e oócitos (p=0,036) foi significativamente menor em COC tratados com BMP15 (11,73&plusmn;1,24 % e 3,81&plusmn;2,76 %, respectivamente) em comparação ao grupo FGF16 (22,54&plusmn;2,80 % e 31,13&plusmn;7,81 %, respectivamente). Ainda, o FGF16 causou aumento na incidência de fragmentação de DNA em CC, quando relacionado ao controle (16,04&plusmn;1,45 %). A taxa de maturação nuclear oocitária foi superior (p=0,014) no grupo suplementado com BMP15 (93,60&plusmn;4,03 %) em comparação aos grupos controle (80,80&plusmn;2,49 %) e FGF16 (76,75&plusmn;2,28 %), aproximando-se da totalidade. De forma inédita, descrevemos ação da BMP15 (10,79&plusmn;0,72 ng/ml) no incremento da produção de progesterona, sendo maior (p=0,0113) do que a produzida nos grupos controle (8,38&plusmn;0,39 ng/ml) e FGF16 (8,84&plusmn;0,45 ng/ml). Não foi evidenciado efeito dos tratamentos sobre o consumo de glicose e a produção de lactato. O presente estudo reforça o envolvimento da BMP15 na foliculogênese e na diferenciação do COC. Deste modo, a adição da BMP15 (100ng/ml) aos convencionais protocolos de PIVE pode ser de grande valia para elevar a efetividade desta biotecnologia. A suplementação de FGF16 (10ng/ml) se mostrou indiferente ao processo de maturação, permitindo inferir que o FGF16 não tenha envolvimento nas etapas da maturação compreendidas pelo presente estudo in vitro. Não foi observada ação sinérgica entre o FGF16 e a BMP15. / In vitro embryo production (IVEP) efficiency is reduced when compared to in vivo. Gaining knowledge of bovine oocyte maturation mechanisms will provide bases to improve in vitro systems. The present study assessed the in vitro effects of fibroblast growth factor 16 (FGF16), bone morphogenetic protein 15 (BMP15) and their interaction on relevant parameters to cumulus oocyte complex (COC) development, such as: cumulus cells (CC) expansion, oocyte and CC DNA fragmentation, nuclear maturation, energetic metabolism and progesterone production. COCs were matured in control or supplemented media containing, FGF16 (10ng/ml), BMP15 (100ng/ml), FGF16&plusmn;BMP15 and analyzed at different times of IVM (0 and 22 hours). CC expansion evaluation demonstrated a positive effect (p=0.0071) of BMP15 (11.34&plusmn;1.09 arbitrary unit/AU) and FGF16+BMP15 (11.34&plusmn;0,61 AU) when compared to control (8.73&plusmn;0.44 AU) and FGF16 groups (9.42&plusmn;0.65 UA). The presence of DNA fragmentation in CC (p=0.0015) and oocytes (p=0.036) were lower in COCs treated in media supplemented with BMP15 (11.73&plusmn;1.24 % and 3.81&plusmn2.76 %, respectively) in comparison to FGF16 group (22.54&plusmn;2.80 % and 31.13&plusmn;7.81 %, respectively). Moreover, FGF16 caused an increase in CC DNA fragmentation, when related to control (16.04&plusmn;1.45 %). Oocyte nuclear maturation rate was higher (p=0.014) in groups supplemented with BMP15 (93.60&plusmn;4.03 %) compared to control (80.80&plusmn;2.49 %) and FGF16 treatments (76.75&plusmn;2.28 %), almost reaching the totality of COCs. In an unprecedented way, we described the BMP15 increasing action on progesterone production (10.79&plusmn;0,72 ng/ml; p=0.0113) when compared to control (8.38&plusmn;0.39 ng/ml) and FGF16 groups (8.84&plusmn;0.45 ng/ml). There were no differences in glucose consumption and lactate production. The present study reinforces BMP15 involvement in folliculogenesis and COC differentiation. FGF16 (10 ng/ml) media supplementation did not improve any of the outcomes measured, suggesting that FGF16 is not involved in the maturation steps analyzed in the present in vitro study. Thus, the inclusion of BMP15 (100 ng/ml) to conventional IVEP protocols can be valuable to increase the effectiveness of this biotechnology. Synergistic action between FGF16 and BMP15 was not observed.

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Flávia Lombardi Lopes / Coorientador: Naiara Zoccal Saraiva / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Felipe Perecin / Resumo: O excessivo acúmulo lipídico que acontece ao longo da produção in vitro de embriões (PIVE) tem sido apontado como prejudicial à criopreservação. Como o soro fetal bovino (SFB) é um dos fatores que provoca maior impacto neste acúmulo, e pelo mesmo ser de composição indefinida, procura-se substituí-lo nos meios de cultivo. Entre os possíveis substitutos, está o composto semi-definido, livre de ácidos graxos, a albumina sérica bovina (BSA). O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da BSA e/ou SFB na MIV sobre o acúmulo lipídico nos oócitos e embriões bovinos, e para isso, cinco experimentos foram realizados. No primeiro experimento, demostrou-se que o meio contendo SFB possui dezoito vezes mais lipídeos que o meio contendo apenas BSA como fonte proteica. No segundo experimento, confirmou-se que, ao contrário da maturação in vivo, a maturação in vitro (MIV) provoca acúmulo lipídico, sendo este acúmulo mais acentuado no grupo suplementado exclusivamente com SFB, comparado ao grupo suplementado com BSA, sem observar-se diferença nos tamanhos das gotas oocitárias entre os grupos. Oócitos maturados na presença do SFB apresentaram melhores taxas de maturação nuclear e citoplasmática, porém, mostraram diferenças com relação à quantidade e migração de lipídeos e mitocôndrias em comparação àqueles obtidos após maturação in vivo. Nos experimentos III e IV, observou-se que, além de não levar a uma esperada diminuição da quantidade de lipídeos nos blastocistos produzidos, a BSA na MIV levou a menores taxas de desenvolvimento embrionário. Sobre o tamanho das gotas embrionárias, constatou-se que a MIV suplementada com SFB provoca maior porcentagem de gotas entre 2 a 6 μm de diâmetro comparada a MIV suplementada por ambas as substancias. Além do mais, percebeu-se um aumento do tamanho das gotas ao longo da PIVE independente da suplementação ... / Abstract: The excessive lipid accumulation that occurs during in vitro production of embryos (IVPE) has been described as harmful to cryopreservation. Because fetal bovine serum (FBS) is one of the factors that cause the greatest impact in this accumulation, and because it is an undefined medium supplement, current research is aimed at replacing this supplement in culture media. Among the possible substitutes, there is a semi defined compound, fatty acid free bovine serum albumin (BSA). The present study aimed to evaluate the influence of BSA and/or FBS during IVM on lipid accumulation in oocytes and embryos, and for that, five experiments were performed. The first experiment demonstrated that the medium containing FBS has eighteen times more lipids than the medium containing only BSA as a protein source. In the second experiment, it was confirmed that, unlike in vivo maturation, in vitro maturation (IVM) causes a lipid accumulation, which is more pronounced in the group supplemented only with FBS, compared with BSA group, without showing difference in oocytes droplets sizes between groups. Oocytes matured in the presence of FBS showed better rates of nuclear and cytoplasmic maturation, however, they also showed differences relative to the amount and migration of lipids and mitochondrias in comparison to those obtained after in vivo maturation. In the experiments III and IV, it was observed that the expected decrease in the amount of lipids produced in blastocysts, supplemented solely with BSA, did not take place, and the use of BSA alone in IVM led to lower rates of embryo development. Furthermore, for embryos lipid droplets sizes, a higher percentage of droplets between 2-6μm was observed in IVM supplemented with FBS compared to supplemented with both substances.The last experiment determined the expression of genes involved in lipid synthesis, DGAT2 and PLIN2. Increased expression of PLIN2 and ... / Mestre

Orientador: Carlos Alexandre Costa Crusciol / Resumo: O Brasil é o maior produtor mundial de cana-de-açúcar, sendo esta uma das principais culturas agrícolas cultivadas no país e de extrema importância para o cenário econômico nacional. Entretanto, ao longo das últimas safras, observou-se uma estagnação na produtividade média brasileira, consolidando-se muito abaixo do potencial genético produtivo das variedades aqui cultivadas. Diante disso, houve a necessidade de se desenvolver novas técnicas de manejo, visando aumentar os patamares de produtividade. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da nutrição via foliar no final do ciclo vegetativo, precedendo o estádio de maturação da cana-de-açúcar, bem como os efeitos dessa aplicação associada com reguladores vegetais visando aumento do teor de sacarose por tonelada de cana no início de safra. Para tanto, dois estudos foram conduzidos: i) aplicação de nutrientes associados ou não ao maturador no final do ciclo vegetativo e em pré-maturação; ii) associação entre hormônios vegetais, nutrientes e maturador aplicados em fase antecedente à maturação da cana-de-açúcar. Os experimentos foram instalados em quatro locais diferentes, situados nos municípios de Indiaporã, Luis Antônio, Pontal e Santa Maria da Serra, todos localizados no estado de São Paulo, no período de fevereiro a maio de 2017, sendo repetidos nas mesmas localidades e época no ano de 2018. Foram avaliadas as variáveis biométricas, tecnológicas e teor nutricional foliar. O delineamento experimental utilizado ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre