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Pré-condicionamento nutracêutico com arginina e mistura de óleos sobre mediadores inflamatórios em pacientes submetidos à prostatectomia radical / Preconditioning with arginine and nutraceutical oils mixture on inflammatory mediators in patients undergoing radical prostatectomy submetidos à prostatectomia radicaTavares, Lilian de Lima January 2013 (has links)
TAVARES, Lilian de Lima. Pré-condicionamento nutracêutico com arginina e mistura de óleos sobre mediadores inflamatórios em pacientes submetidos à prostatectomia radical. 2013. 82 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T12:01:41Z
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Previous issue date: 2013 / The host’s protective mechanisms are mediated by the ability of immunonutrients in defense mechanisms, such as the inflammatory response. Among the most investigated are arginine and polyunsaturated fatty acids derived from fish oil, anti-inflammatory agents which act on the synthesis of eicosanoids and regulate the immune response. This study is randomized, double-blind, paired, whose aim was to identify whether there is pre-conditioning effect in nutraceutical supplement containing arginine and oil mix with ω3 fatty acids (EPA, DHA and ALA) on the inflammatory mediators in surgical trauma. The supplement was administered in two doses of 200ml/day during the preoperative period (5 days before surgery) in patients undergoing radical prostatectomy (PTR). Laboratory evaluations were performed preoperatively (PRE), before administration of the supplement (5 days before surgery), before the anesthetic induction (IND) and in the 2nd postoperative day (POS). The sample (26 patients) was divided into 3 groups: G1 - skim milk (0% fat), G2 – Arginine group: Supplement with ω6: ω3 ratio of 8:1 and Arginine (10g/day) and G3 – Arginine + Oil group: Supplement with high ω9:ω6 ratio, of 3,2:1, and low ω6:ω3 ratio (of 1,4:1) and Arginine (10g/day). Inflammatory (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 and TNF-α) and preconditioning (HSP-27) parameters were analyzed. There were no significant differences between groups and times. Therefore, supplementation using arginine and oil mix, with high ω9: ω6 ratio and low ω6: ω3 ratio, has no effect as a nutraceutical pre-conditioner on the inflammatory mediators in surgical trauma patients undergoing radical prostatectomy (PTR). / Os mecanismos de proteção do hospedeiro são mediados pela capacidade dos imunonutrientes modularem mecanismos de defesa, como a resposta inflamatória. Dentre os mais investigados estão a arginina e os ácidos graxos poliinsaturados derivados do óleo de peixe, agentes anti-inflamatórios que atuam na síntese de eicosanóides e regulam a resposta imune. O presente estudo é clínico randomizado, duplo-cego e emparelhado, cujo objetivo foi identificar se existe algum efeito decorrente do pré-condicionamento nutracêutico em um suplemento contendo arginina e mistura de óleos contendo ácidos graxos ω3 (EPA, ALA e DHA) sobre mediadores inflamatórios no trauma cirúrgico. O suplemento foi administrado em duas doses de 200ml/dia, durante o período pré-operatório (5 dias antes da cirurgia), em pacientes a serem submetidos à prostatectomia radical (PTR). As avaliações laboratoriais foram realizadas no pré-cirúrgico (PRE), antes da administração do suplemento (5 dias antes da cirurgia), antes da indução anestésica (IND) e no 2º pós-operatório (POS). A amostra (26 pacientes) foi distribuída em 3 grupos: G1 - leite desnatado (0% de gordura), G2 - suplemento com relação ω6:ω3 de 8:1 e Arginina (10g) e G3 - suplemento com elevada relação ω9:ω6:, de 3,2:1 e baixa relação ω6:ω3, de 1,4:1 e Arginina (10g). Foram analisados parâmentros inflamatórios (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α) e de Pré-condicionamento (HSP-27). Não foi evidenciada diferença estatisticamente significante entre os grupos e momentos. Portanto, a suplementação nutricional oral utilizando arginina e mistura de óleos, com elevada relação ω9:ω6 e baixa relação ω6:ω3, contendo os ácidos ω3 (ALA, EPA e DHA), não possui efeito pré-condicionante nutracêutico sobre os mediadores inflamatórios no trauma cirúrgico, numa amostra de pacientes submetidos à prostatectomia radical (PTR).
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Estudo dos mediadores inflamatórios e de coagulação na epidemia 2013 pelo DENV-4Solorzano, Victor Edgar Fiestas January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue se tornou a arbovirose mais difundida no mundo, atingindo mais de 100 países. O sorotipo DENV-4 foi reintroduzido no Brasil em 2010, se espalhou para as diferentes regiões brasileiras sendo responsável por uma das maiores epidemias de dengue relatadas no país em 2013. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil clínico-laboratorial, citocinas/quimiocinas inflamatórias e mediadores da coagulação em pacientes infectados pelo DENV durante esta epidemia. Para isto, foram avaliados 265 casos confirmados de dengue atendidos nos centros de saúde dos estados do RJ e MS no ano de 2013. Os pacientes foram classificados de acordo com a nova classificação da OMS, 2009 nos grupos: 158 (70,2%) dengue sem sinais de alarme (DSSA), 65 (28,9%) dengue com sinais de alarme (DCSA) e 2 (0,9%) dengue grave. Os sinais de alarme mais frequentes foram dor abdominal persistente (61,5%) e sangramento de mucosas (32,3%). O DENV-4 foi o sorotipo de maior incidência e 85,2% dos pacientes apresentaram infecção secundária. Pacientes DCSA/DG apresentaram baixa contagem de leucócitos totais, de plaquetas e altos níveis séricos de AST/TGO e ALT/TGP quando comparados aos pacientes DSSA e aqueles ODF (outras doenças febris). A quantificação dos mediadores inflamatórios por ensaios imunoenzimáticos indicou: (i) níveis aumentados de citocinas (TNF-\03B1, IL- 6 e IL-10) e quimiocinas (IL-8/CXCL8, IP-10/CXCL10 e MCP-1/CCL2) nos pacientes DSSA e DCSA/DG quando comparados com o grupo controle; (ii) níveis aumentados de IL-10 e IL-6 nos pacientes DCSA/DG enquanto que IL-8/CXCL8 foi maior nos pacientes DSSA
Em relação aos parâmetros de coagulação: (iii) Os pacientes DSSA e DCSA/DG apresentaram menores níveis do fator tecidual (TF) e maiores níveis do inibidor fisiológico da via do TF (TFPI) quando comparados com o grupo controle; (iv) Baixos níveis de fibrinogênio foram encontrados nos pacientes DCSA/DG e níveis elevados de trombomodulina foram encontrados nos pacientes entre 4-7 dias de doença. As análises de correlação demonstraram correlação inversa entre os níveis circulantes de IP-10/CXCL10 e IL-10 com a contagem de plaquetas e leucócitos totais e correlação positiva com níveis séricos de AST/TGO. Além disso, IL-10 foi associada diretamente com relação albumina/globulina. As análises de correlação demonstraram que os níveis de TF estavam diretamente correlacionados com os níveis do TFPI, que por sua vez foi associado inversamente com a contagem de plaquetas. Estes resultados sugerem mecanismos de regulação da cascata da coagulação durante a infecção pelo DENV. Apesar dos altos níveis circulantes de IL-10 encontrados nos pacientes DCSA/DG, a análise da curva sob a área ROC não encontrou bom valor preditivo na discriminação entre DSSA e DCSA/DG e, portanto a IL-10 não se mostrou adequada para o uso como um biomarcador nesta população / Dengue has become the most widespread arbovirus in the world, reaching more th
an
100 countries. The DENV
-
4 serotype was reintroduced in Brazil in 2010,
and
spread
to the different Brazilian regions being responsible for one of the largest epidemics of
dengue reported in the country in 2013
.
The objective of this study was to evaluat
e
the clinical and laboratory profile, and inflammatory cytokines
/chemokines
and
coagulation mediators in patients infected with DENV during this epidemic. For this,
were evaluated 265 confirmed cases of dengue attended at health centers in the
states of
R
J
and MS in the year 2013.
P
atients were classified according to the new
WHO classification, 2009 in groups: 158 (70.2%) de
ngue without warning signs
(DwoWS
), 65 (28.9%) dengu
e with warning signs (DwWS
) and 2 (0.9%) severe
dengue
(SD)
.
The most
frequent
w
a
rning signals were persistent abdominal pain
(61.5%) and mucosa
l
bleeding (32.3%). The DENV
-
4
was the most prevalent
serotype and 85,2%
of
dengue patients showed secondary infection
.
DwWS/SD
patients
showed low
er
white blood cell
and
platele
t
count
s
,
and h
igher AST
and ALT
serum levels compared to
DwoWS
and
other febrile illnesses
patients.
Quantification
of inflammatory mediators by immunoassays
indicated
: (i)
i
ncreased levels of
cytokines (
TNF
-
α
,
IL
-
6 and
IL
-
10
) and chemokines (
IL
-
8/CXCL8, IP
-
10/CXCL10 an
d
MCP
-
1/CCL2
)
in
DwoWS and DwWS patients
compared
with healthy
individuals
; (
ii)
increased levels of
IL
-
10 and IL
-
6
in
DwWS/SD
patients
while
IL
-
8/CXCL8
was
increased
in DSSA
patients;
In respect to
coagulation parameters:
(iii
) DwoWS
and
DwWS/SD
patients
showed
lower levels of sTF and higher of TFPI compared with
the control group; (
i
v) Low
er
levels of fibrinogen
were found
in
DwWS/SD
patients
and high
er
levels of thrombomodulin in patie
nts between 4
-
7 days of illness;
Correlation analysis
showed
an invers
e correlation between circulating levels of
IP
-
10/CXCL10
and IL
-
10 with the total amount of platelets and leukocytes and positive
correlat
ion
with
serum
levels of
AST
.
Furthermore,
IL
-
10
was
directly
a
ssociated with
albumin/
globulin ratio. Corre
lation anal
ysis showed that
TF levels
were directly
correlated with
TFPI
l
evels,
which in turn
was inversely related
with
platelets
counts
.
These results suggest mechanisms
involving
regulation of the coagulation cascade
during DENV infection. Despite high
er
circulat
ing levels of
IL
-
10 found in
DwWS/SD
patients, analysis of
the area under the
ROC
curve,
did not
showed
a good
predictive
value in discriminating
those who were likely to develop
DwWS/SD
and therefore IL
-
10 was not suitable for use as a biomarker in this p
opulation.
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Efeito potencializador do antineoplásico paclitaxel (taxol®) na hiperalgesia inflamatória experimental induzida por zymosan / Potential effect of the antineoplasic Paclitaxel (Taxol®) in the experimental inflammatory hyperalgisia induced by zymosanCardoso, Mirlane Guimarães de Melo January 2003 (has links)
CARDOSO, Mirlane Guimarães de Melo. Efeito potencializador do antineoplásico paclitaxel (TAXOL) na hiperalgesia inflamatória experimental induzida por zymosan. 2003. 127 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2003. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-07T13:49:25Z
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Previous issue date: 2003 / Paclitaxel (Taxol®) was the first effective antineoplastic in the management of refractory neoplasias to the conventional chemotherapy. It induces clinically to myelosuppression and sensory peripheral neuropathy boundary and cumulative dose, well documented at literature already. Less often the patients exhibited myalgias and arthralgias. As to concern to the inflammatory pain, there is nothing described do date, aiming to correlate the involvement from pro-inflammatory cytokines with the hyperalgesia genesis associated to PCX since the drug induces the alpha-TNF expression gene. It has already been demonstrated, experimentally by several authors, the essential role of alpha-TNF triggering a set of cytokines which active two components of the inflammatory pain (eicosanoid and sympathetic). Findings of our group showed that zymosan (ZY) administrated intraperitoneal (ip) in mice, induces the release of these cytokines by resident macrophages at the wriggling abdominal model (CA) and that their injection intra-articular rat knees produces a feature periarthritis as a sign of hyperalgesia at articular incapacitation model (IA). Based on these findings, the aim of the present work was to evaluate PCX effect at the modulation of nociceptive response induced by zymosan in two animal models of the inflammatory pain. Then, was injected via ip PCX (8mg/kg/an) before two hours of ZY (1mg/cav;ip) in mice on the CA test. Rats were treated with ip PCX (4,8 mg/kg/an) after one hour ZY intra-articular (250mcg/animal;i-art) for IA test. Both tests, the animals were pre-treated subcutaneous via with COX-1 and COX-2 inhibitors, sympathetic blockade and citokines inhibitors. It was demonstrated that PCX (8mg/kg/an) dose potentiates the inflammatory hyperalgesia at CA model, increasing in 183%, being statistical significant at the level p< 0.001, versus experimental group. Such effect was inhibited at level of significance, p< 0.001 and dependent-dose by indomethacin (ED50 0.05mg/kg), celoxib (ED5013.68mg/kg), atenolol(ED50 0.13mg/kg), talidomide (ED50 23.36mg/kg), penthoxyphylin (ED50 8.40mg/kg) and dexamethasone (ED50 0,71mg/kg). This potential effect of at the IA test was justified at IA model in dose 4mg/kg (p< 0,001) by significant increase of time of suspension the paws through arthritis at third and fourth hours versus experimental group. By same way there was significant inhibition at the level p< 0.001 of this magnification of the pre-treated rats. Latter, PCX (Taxol®) magnified significantly the inflammatory hyperalgesia induced by ZY at CA and IA models, justifying one sided myalgias and artralgias of the patients by using PCX, suggesting the involvement of the hyperalgesic citokines - alpha-TNF, prostanoids and sympathetic mediators of the genesis of this hyper-nociceptive effect. / Paclitaxel(Taxol®), foi o 1º antineoplásico efetivo no tratamento de cânceres refratários a quimioterapia convencional. Clinicamente, induz mielossupressão e neuropatia periférica sensorial dose-limitante e cumulativa, já bem documentada na literatura. Menos freqüentemente os pacientes tratados apresentam mialgias e artralgias. No que diz respeito à dor inflamatória, nada foi descrito até o momento, visando correlacionar o envolvimento das citocinas pró-inflamatórias, com a gênese da hiperalgesia associada ao PCX, já que a droga induz a expressão do gene TNF-alpha. Experimentalmente já foi demonstrado por vários autores, o papel fundamental do TNF-alpha desencadeando uma cascata de citocinas que ativam os dois componentes da dor inflamatória (eicosanóide e simpático). Dados do nosso laboratório registram que o zymosan (ZY) administrado ip em camundongos, induz a liberação dessas citocinas por macrófagos residentes no modelo de contorção abdominal (CA), e que sua injeção intra-articular em joelhos de ratos produz uma periartrite característica tida como sinal de hiperalgesia no modelo de incapacitação articular (IA). Com base nestes achados, constituiu-se objetivo do presente trabalho, avaliar o efeito do PCX na modulação da resposta nociceptiva induzida pelo ZY em dois modelos animais de dor inflamatória. Para tanto, injetou-se via ip PCX (8mg/kg/an) 2h antes do ZY (1mg/cav;ip) em camundongos no teste CA. Ratos foram tratados ip com PCX 4 e 8mg/kg/an) 1 h após da administração intra-articular ZY (250mcg/an) no teste IA. Em ambos os testes os animais foram pré-tratados via Sc com inibidores de COX-1 e COX-2, bloqueador simpático e inibidores de citocinas. Ficou demonstrado que PCX na dose de 8mg/kg potencializa a hiperalgesia inflamatória no modelo de CA, aumentando de maneira significativa (p< 0.001) o n° de CA em 183%, em relação ao controle. Tal efeito foi inibido de maneira significativa (p<0.001) e dose-dependente pela indometacina (ED50 0,05mg/kg), celecoxib (ED50 13,68mg/kg), atenolol (ED50 0,13mg/kg), talidomida (ED50 23,36mg/kg), pentoxifilina (ED50 8,40mg/kg) e dexametasona (ED50 0,71mg/kg). No teste de IA, esse efeito potencializador foi ratificado pelo aumento significativo do tempo de suspensão da pata (p< 0.001) na 3ª e 4ªh de artrite em relação ao controle, na dose 4mg/kg de PCX. Da mesma forma houve inibição significativa (p< 0.001) dessa amplificação nos ratos pré-tratados. Por fim, o PCX (Taxol®) amplifica significativamente a hiperalgesia inflamatória induzida pelo ZY no modelo de CA e IA, o que justifica em parte as mialgias e artralgias dos pacientes em uso de PCX e indiretamente sugere a participação de citocinas hiperalgésicas (TNF-alpha), prostanóides e mediadores simpáticos na gênese deste efeito hipernociceptivo.
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Estudo da atividade antiinflamatória e antinociceptiva da lectina isolada de sementes de Lonchocarpus sericeus (Poir.) Kunth / Study of antiinflammatory and antinonociceptive activities of lectin from lonchocarpus sericeus seeds (poir.) kunthMota, Mário Rogério Lima January 2008 (has links)
MOTA, Mario Rogério Lima. Estudo da atividade antiinflamatória e antinociceptiva da lectina isolada de sementes de Lonchocarpus sericeus (Poir) Kunth. 2008. 152 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-04T16:12:17Z
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Previous issue date: 2008 / Lectins are non-immune (glyco)proteins that can recognize and reversibly bind to carbohydrates or other substances derived from sugars. Lonchocarpus sericeus seeds (LSL) shows a molecular mass of 23555 ± 15 Da and a a-metyl glucopyranoside and N-acetyl-glucosamine binding specificity. The aim of this work was to evaluate the antinoceptive and antiinflammatory activity of lectin from Lonchocarpus sericeus seeds (LSL). To do so, we used swiss mice (25-35g). In the antiinflammatory activity studying, LSL (10 or 100 mg/kg; i.v.; 15 minutes) inhibited the migration (neutrophil rolling and adhesion) to the peritoneal cavities of animals stimulated with carrageenan (Cg), and the effect seems to be related to the cytokines (TNF-a and IL-1b) and chemokines (MIP-1a [CCL3], KC [CXCL1]) level reduction induced by this lectin. The LSL inhibitory effect on the neutrophil migration seems to be also related to the nitric oxide (NO) systemic levels increasing. LSL was effective on the NO increasing on animals’ serum. The pretreatment of mice using aminoguanidin (nitric oxide reduced synthase inhibitor) reversed the antiinflammatory effect of lectin on the neutrophil migration. Still referring to the anti-inflammatory activity, LSL was effective on inhibiting the neutrophil migration to the peritoneal cavities of animals immunized and stimulated with ovalbumin (OVA), but the lectin was unable to inhibit an in vitro neutrophil migration induced by MIP-2, showing an indirect action of LSL (cytokines and chemokines) on the migration inhibition. In the antinoceptive study, LSL (3 or 10 mg/kg; i.v.; 30 minutes) reduced abdominal contortion induced by acetic acid and only decreased the second phase of formalin test, showing an activity on the inflammatory pain. In the hot plate test LSL didn’t show any effects. To evaluate the anti-inflammatory pain, we did a study based on the anthihypernociceptive activity. Thus, LSL (10 or 100 mg/kg; i.v.; 15 minutes) inhibited the mechanical hypernociception induced by carrageenan and ovalbumin (immunized animals) intraplantarly administration, but not induced by prostaglandin E2. (PGE2). This effect was correlated to the block of neutrophil influx, suggested by the reduction of myeloperoxidase (MPO) levels on animal’s paws pretreated with LSL (3 or 10 mg/kg; i.v.; 15 minutes) and stimulated with carregeenan. This antihyperalgesic effect seems to be highly dependent of the cytokines (TNF-a and IL-1b) and chemokines (MIP-1a [CCL3], KC [CXCL1]) level decreasing, since LSL (10 or 100 mg/kg; i.v.; 15 minutes) reduced these mediators’ levels on animal’s paws pretreated with Cg (intraplantar). Corresponding to the possible central activity, LSL (10 mg/kg; i.v.) did not alter the motor activity and not provoked depression on animals. LSL acute toxicity was evaluated by treating the rats with LSL (10 mg/kg; i.v.) during seven days analyzing several parameters of the animals: kidney functions (wet weight, urea dosage), liver functions (wet weight, kinetic evaluation of aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase), heart (wet weight) stomach (wet weight and visual evaluation of possible lesions), variation in body weight of treated animals and leukogram. The obtained results didn’t show any alteration on the evaluated parameters suggesting that LSL doesn’t show any toxicity on animals. In conclusion, the antinoceptive and antihyperalgesic activity of LSL are associated to the inhibition of the neutrophil migration; it is probably a reflection of an inhibition on cytokines and chemokines free flowing and for the increasing of NO free flow. Additionally, this lectin doesn’t show acute toxicity and central effects. / Lectinas são (glico)proteínas de origem não imune e que podem reconhecer e se ligar reversivelmente a carboidratos ou a outras substâncias derivadas de açúcares. A lectina de sementes de Lonchocarpus sericeus (LSL) apresenta massa molecular aparente de 23555 ± 15 Da e especificidade de ligação a N-acetil-glicosamina e α -metil-glicopiranosídeo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiinflamatória e antinociceptiva da Lectina de sementes de Lonchocarpus sericeus (LSL). Para tal, utilizamos camundongos Swiss albinos (25-35g). No estudo da atividade antiinflamatória, LSL (3 ou 10 mg/kg; e.v.; 15 minutos) inibiu a migração (rolamento e adesão de neutrófilos) para a cavidade abdominal de animais estimulados com carragenina (Cg), e este efeito parece estar relacionado com a redução dos níveis de citocinas (TNF-α and IL-1β) e quimiocinas (MIP-1α [CCL3], KC [CXCL1]) por esta lectina. O efeito inibitório da LSL sobre a migração de neutrófilos, parece também envolver o aumento nos níveis sistêmicos de óxido nítrico (NO), pois LSL (10 mg/kg; e.v.) foi capaz de aumentar os níveis de NO no soro de animais, e o pré-tratamento de camundongos com aminoguanidina (inibidor da óxido nítrico sintase induzida) foi capaz de reverter o efeito aniinflamatório desta lectina sobre a migração de neutrófilos. Ainda em relação à atividade antiinflamatória, LSL foi capaz de inibir a migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal de animais imunizados e estimulados com ovoalbumina (OVA), porém, esta mesma lectina foi ineficaz em inibir a migração de neutrófilos in vitro estimulada por MIP-2, demonstrando então um papel indireto da LSL (redução de citocinas e quimiocinas) na inibição da migração. No estudo da atividade antinociceptiva, LSL (10 ou 100 mg/kg; e.v.; 15 minutos) reduziu as contorções abdominais induzidas por ácido acético e diminuiu somente a segunda fase do teste da formalina, demostrando uma atividade sobre a dor inflamatória. No teste da placa quente, LSL não apresentou efeito. Para avaliar a dor inflamatória realizaram-se estudos de atividade antihipernociceptiva. Assim, LSL (3 ou 10 mg/kg; e.v.; 15 minutos) inibiu a hipernocicepção mecânica induzida por administração intraplantar de carragenina e ovalbumina (animais imunizados) mas não a induzida por prostaglandina E2 (PGE2). Este efeito foi correlacionado ao bloqueio do influxo de neutrófilos, sugerido pela redução dos níveis de mieloperoxidase (MPO) nas patas de animais pré-tratados com LSL (3 ou 10 mg/kg; e.v.; 15 minutos) e estimulados com carragenina. Este efeito antihiperalgésico parece também depender da redução dos níveis de citocinas (TNF-α and IL-1β) e quimiocinas (MIP-1α [CCL3], KC [CXCL1]), uma vez que LSL (3 ou 10 mg/kg; e.v.; 15 minutos) reduziu os níveis destes mediadores no tecido da pata de animais estimulados com Cg (intraplantar). Em relação a uma possível atividade central, LSL (10 mg/kg; e.v.) não alterou a atividade motora e nem provocou depressão nos animais. A toxicidade aguda foi avaliada pelo tratamento de camundongos com LSL (10 mg/kg; e.v.), durante sete dias consecutivos, através de vários parâmetros: funções do rim (peso úmido, dosagem de uréia) e do fígado (peso úmido, avaliação da cinética da aspartato amino transaminase e alanina amino transaminase), coração (peso úmido), estômago (peso úmido e avaliação visual de possíveis lesões), variação de massa corporal dos animais tratados e leucograma. Os resultados obtidos não mostraram qualquer alteração dos parâmetros avaliados, demonstrando que a LSL não apresenta nenhuma toxicidade nos animais. Em conclusão, a atividade antiinflamatória e antinociceptiva da LSL está associada com a inibição da migração de neutrófilos, que provavelmete é reflexo da inibição da liberação de citocinas e quimiocinas e do aumento na liberação de NO. Adicionalmente, esta lectina não apresenta efeitos centrais nem toxicidade aguda.
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Estudo morfofuncional e dos mediadores inflamatórios envolvidos na patogênese da mucosite intestinal induzida por irinotecano (CPT-11) em camundongos : papel da caspase-1, interleucina-18 e óxido nitríco / Morphofunctional study and the inflammatory mediators involved on the pathogenesis of irinotecan (CPT-11)-induced intestinal mucositis in mice : role of caspase-1, interleukin-18 and nitric oxideLima Júnior, Roberto César Pereira January 2008 (has links)
LIMA JUNIOR, Roberto César Pereira. Estudo morfofuncional e dos mediadores inflamatórios envolvidos na patogênese da mucosite intestinal induzida por irinotecano (CPT-11) em camundongos : papel da caspase-1, interleucina-18 e óxido nitríco. 200 f. Tese (Doutorado em Farmacalologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-10-01T16:25:31Z
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Previous issue date: 2008 / Severe Intestinal Mucositis (IM) and diarrhea are frequent and dose-limiting side-effects of colon cancer chemotherapy with irinotecan (CPT-11). At present, much of IM pathophysiology remains unknown. Aims: To study the mechanisms and inflammatory mediators involved in CPT-11-induced intestinal mucositis, verifying the role of the protease caspase-1, cytokines interleukin-1 (IL-1), interleukin-18 (IL-18) and interleukin-33 (IL-33), nitric oxide, 5-lipoxygenase and PAF as well as the sequence of activation of these mediators in the inflammatory response and morphofunctional contexts. Methods: Swiss, C57BL/6 (BL), BALB/c (BC) male mice or caspases-1(Casp-1-/-), IL-18 (IL-18-/-), inducible nitric oxide synthase (iNOS-/-), 5-Lipoxygenase (5-LOX-/-), PAF receptor (PAFr-/-) knockout mice, 22g, were divided into groups (n=4-5) and treated for 4 days with saline (5 mL/kg, i.p.) or CPT-11 (60 mg/kg, i.p.) or were given IL-18bp (IL-18 binding protein, 200 µg/animal/4 days, i.p.), aminoguanidine (AG, 50 mg/kg, s.c, 2x/day/4 days), IL-33 (1 µg/animal/4 days, i.v, 1h previously CPT-11) or loperamide ([4x3 mg/kg and 4x30 mg/kg]/animal, s.c.) co-administered with CPT-11. On day 5, diarrhea and leukocyte counts were assessed, and following sacrifice duodenal portions of the animal were collected to assess myeloperoxidase (MPO, neutrophils/mg tissue) and nitric oxide synthase (iNOS pM citruline /h/mg protein) activity, morphometric analysis, and in vitro contractility (%contraction in relation to KCl 60 mM). ANOVA/Newman Keuls or Kruskal Wallis/Dunn were used as statistical tests. P<0.05 was accepted. Results: IM was morphofunctionally similar in both BL and Swiss. CPT-11 induced leukopenia in all animal lineages despite the treatment given. Additionally, CPT-11 induced MPO, increased in vitro contractility and diarrheic events, and villi/crypt ratio reduction in BL and BC mice in comparison with saline treated mice (p<0.05). Despite the injection of CPT-11, Casp-1-/-, IL-18-/- or IL-18bp treated BC mice presented reduced MPO and iNOS activities and also increased villi/crypt ratio, reduced duodenal in vitro contractility and mild diarrhea similar to saline-treated mice (P>0.05), similar to the patterns seen in IL-33 treated mice. The reduced iNOS activity found in the earlier mice led us to investigate the CPT-11 effect on iNOS /- and aminoguanidine-treated mice. Lower IL-1beta and KC cytokine levels, as well as reduced MPO activity were found. Also, preserved villi/crypt ratio and muscle layer thickness, normal duodenal contractility and diarrheic events were seen similarly to saline-treated mice (p>0.05). However, CPT-11-treated PAFr-/- presented morphofunctional alterations and increased intestinal MPO activity. 5-LOX-/- or loperamide treated mice (positive control), both injected with CPT-11, exhibited increased MPO activity and morphometric alterations, but no exacerbation on in vitro contractility was observable. Conclusion: Taken together, these results suggest the role of caspase-1/Interleukin-18/nitric oxide cascade on pathogenesis of CPT-11-induced morphofunctional alteration and inflammatory response (IM). IL-33 seems to be a compensatory protective factor on this inflammatory cascade. 5-LOX and PAFr show a likely secondary role on IM pathophysiology. / A Mucosite Intestinal (MI) e a diarréia severas são efeitos colaterais freqüentes (15-25%) e limitantes da quimioterapia do câncer de cólon com Irinotecano (CPT-11). Até o presente momento, pouco se conhece sobre a fisiopatologia da MI. Objetivo: Estudar os mecanismos e mediadores envolvidos na mucosite intestinal induzida por CPT-11, verificando a participação da protease caspase-1, das citocinas interleucina-1 (IL-1), interleucina-18 (IL-18) e interleucina-33 (IL-33), do óxido nítrico, de mediadores 5-lipoxigenase e do PAF, assim como a seqüência de interação entre esses mediadores sob aspectos da resposta inflamatória e morfofuncionais. Métodos: Camundongos Swiss, C57BL/6 (BL), BALB/c (BC) ou knockout para Caspase-1 (Casp-/-), IL-18 (IL-18-/-), óxido nítrico sintase induzida (iNOS-/-), 5-Lipoxigenase (5-LOX-/-), receptor para PAF (PAFr-/-) machos, 22 g, foram divididos em grupos (n=4-5) e tratados por 4 dias com salina (5 mL/kg, i.p) ou CPT-11 (60 mg/kg, i.p) ou foram pré-tratados com IL-18bp (proteína ligante de IL18, 200 µg/animal/4 dias, i.p.), aminoguanidina (AG, 50 mg/kg, s.c, 2x/dia/4 dias), IL-33 (1 µg/animal/4 dias, i.v, 1h antes do CPT-11) ou loperamida ([4x3 mg/kg e 4x30 mg/kg]/animal, s.c.) em associação com CPT-11. No 5º dia, avaliou-se a diarréia por escores, o leucograma e, após sacrifício, coletou-se o duodeno para dosagem da atividade de mieloperoxidase (MPO, neutrófilos/mg tecido) e de óxido nítrico sintase induzida (iNOS pM citrulina/h/mg proteína), morfometria (razão vilo/cripta) e contratilidade in vitro à Acetilcolina (%contração em relação ao KCl60 mM). Para análise estatística utilizou-se ANOVA/Newman-Keuls ou Kruskal Wallis/Dunn. P<0,05 foi aceito. Resultados: Camundongos BL apresentaram um padrão de mucosite intestinal similar ao observado no camundongo Swiss sob aspectos morfofuncionais. O CPT-11 induziu leucopenia em todos os animais independentemente do tratamento aplicado. Adicionalmente, o CPT-11 induziu em animais BL e BC, não tratados, aumento de MPO intestinal, redução da relação vilo/cripta, amento da contratilidade in vitro e dos eventos de diarréia comparados com animais injetados somente com salina (p<0,05). A despeito da administração de CPT-11, animais Caspase-1-/-, IL-18-/- ou BC tratados com IL-18bp apresentaram atividade de MPO e de iNOS reduzidas, bem como aumento na relação vilo/cripta, menor contratilidade duodenal in vitro e eventos de diarréia atenuados em comparação aos respectivos controles tratados com salina (p>0,05). Dados idênticos também foram observados em camundongos injetados com IL-33 e que receberam CPT-11. A redução na atividade de iNOS naqueles animais motivou o estudo do efeito do CPT-11 em animais iNOS-/- ou tratados com aminoguanidina. Observaram-se menores níveis de citocinas IL-1beta e KC, bem como uma atividade de MPO reduzida no duodeno desses animais. Além disso, verificou-se preservação da relação vilo/cripta e da espessura da camada muscular, menor contratilidade duodenal in vitro e eventos de diarréia atenuados similar ao observado nos respectivos controles que receberam apenas salina (p>0,05). Porém, a administração de CPT-11 a animais PAFr-/- foi capaz de induzir alterações morfofuncionais e o aumento da atividade de MPO intestinal. Em camundongos 5-LOX /- ou tratados com loperamida (controle positivo), ambos os grupos injetados com CPT-11, observaram-se aumento da atividade de MPO e alterações morfométricas. Contudo, sobre aspectos funcionais de contratilidade in vitro, visualizou-se proteção. Conclusões: Esses resultados sugerem que a via caspase-1-IL-18 óxido nítrico contribui para o desenvolvimento da resposta inflamatória e alterações morfofuncionais na mucosite intestinal induzida por CPT-11. A IL-33 parece ser um fator protetor compensatório nessa cascata inflamatória. A 5-LOX e o PAFr parecem ter papel secundário na patogênese da mucosite intestinal por CPT-11.
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Estudo do efeito anti-inflamatório da Ageratum conyzoides L., suas frações e compostos isoladosVigil, Silvana Virginia Gagliotti January 2016 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-06-27T04:07:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2016 / Ageratum conyzoides L. é utilizada na medicina popular brasileira como agente anti-inflamatório. Os objetivos deste estudo foram: I) Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto (EB), das frações: etanol (EtOH-F), hexano (HEX-F), acetato de etila (AcOEt-F) e diclorometano (DCM-F) e dos compostos isolados 5'-metoxi nobiletina (MeONOB), 1,2-benzopirona (BP) e eupalestina (EP) da A. conyzoides L.; II) Elaborar uma revisão sistemática sobre o efeito anti-inflamatório das cumarinas (in vitro e in vivo). Neste estudo, foi utilizado o modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos. Os parâmetros analisados foram: leucócitos, concentrações de: proteínas do exsudato, mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), metabólitos do óxido nítrico (NOx) e citocinas (IL-10, IL-17A, IL-6, TNF-a, IFN-y, MCP-1) e fosforilação de p65 NF-kB (p-p65 NF-kB), p38 MAPK (p38 e p-p38 MAPK) e ERK (p-ERK). Para revisão sistemática, foi realizada a pesquisa de literatura publicada entre 01/01/2005 e 31/12/2015, nas bases de dados PUBMED, MEDLINE, Web of Science e Scopus, utilizando os termos 'anti-inflammatory' e 'coumarin' e 'in vivo' ou 'in vitro'. EB, frações e compostos isolados inibiram leucócitos, as concentrações de proteínas do exsudato de MPO, ADA e NOx (p<0,05). EB, EtOH-F e os compostos isolados inibiram as concentrações de IL-17A, IL-6, TNF-a e IFN-y (p<0,05). EB, EtOH-F, MeONOB e BP reduziram as concentrações de MCP-1 (p<0,01). EB, EtOH-F e BP aumentaram as concentrações de IL-10 (p<0,05). Os compostos isolados inibiram p-p65 NF-kB e p-p38 MAPK (p<0,01). Em relação à revisão sistemática, a maioria dos estudos utilizou ensaios in vitro. Os estudos avaliaram principalmente citocinas, edema, estresse oxidativo, células inflamatórias, NOx, NF-kB, MAPK, MPO e COX-2. A. conyzoides L. possui importante atividade anti-inflamatória e seu mecanismo de ação parece estar associado à inibição da fosforilação de p65 NF-kB e p38 MAPK. Os compostos isolados MeONOB, BP e EP e as cumarinas podem ser considerados importantes candidatos para o desenvolvimento de novos fármacos anti-inflamatórios.<br> / Abstract : Ageratum conyzoides L. is used in Brazilian folk medicine as an anti-inflammatory agent. The aims of this study were: I) Evaluate the anti-inflammatory effect of the crude extract (CE), of the fractions: ethanol (EtOH-F), hexane (HEX-F), ethyl acetate (EtOAc-F) and dichloromethane (DCM-F) and of the isolated compounds 5'-methoxy nobiletin (MeONOB), 1,2-benzopyrone (BP) and eupalestin (EP) from A. conyzoides L.; II) Make a systematic review about the anti-inflammatory properties of coumarins (in vitro and in vivo). In this study, the model of pleurisy induced by carrageenan was used, in mice. The parameters analysed were: leukocytes, concentrations of the exudate protein, of myeloperoxidase (MPO), of adenosine deaminase (ADA) and of nitric oxide metabolites (NOx), cytokines levels (IL-10, IL-17A, IL-6, TNF-a, IFN-y, MCP-1), and phosphorylation of p65 NF-kB (p-NF-kB p65), p38 MAPK (p38 and p-p38 MAPK) and ERK (p-ERK). For the systematic review, it was carried out the research of literature published between January 1, 2005 and December 31, 2015, in PUBMED, MEDLINE, Web of Science and Scopus using the keywords: 'anti- inflammatory' and 'coumarin' and 'in vivo' or 'in vitro'. CE, fractions and isolated compounds inhibited leukocyte, protein concentrations of the exudate, MPO, ADA and NOx concentrations (p<0.05). CE, EtOH-F and isolated compounds significantly reduced IL-17A, IL-6, TNF-a and IFN-y levels (p<0.05). CE, EtOH-F, MeONOB and BP significantly reduced MCP-1 levels (p<0.01). CE, EtOH-F and BP increased IL-10 levels (p<0.05). The isolated compounds reduced p-p65 NF-kB and p-p38 MAPK (p<0.01). In relation to the systematic review, most of the studies used in vitro assays. The studies focused mainly in cytokines, oedema, oxidative stress, inflammatory cells, NOx, NF-kB, MAPK, MPO, and COX-2. A. conyzoides L. has important anti-inflammatory activity and its mechanism of action seems to be associated with the inhibition of phosphorylation of p65 NF-kB and p-p38 MAPK. The isolated compounds MeONOB, BP and EP and coumarins may be considered important candidates for the development of new anti-inflammatory drugs.
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Participação dos receptores dos terminais aferentes primários no efeito antinociceptivo da acupuntura na dor inflamatória aguda e neuropáticaDOMINGUES, Jádina Santos Vieira 21 June 2016 (has links)
A dor caracteriza-se por uma resposta resultante da integração central de impulsos nervosos periféricos, ativados por estímulos locais. A nocicepção é a transdução de estímulos mecânicos, térmicos e químicos em impulsos elétricos por meio de nociceptores. Sua estimulação faz com que as informações sejam conduzidas através de fibras aferentes primárias, C e A-δ, que detectam estímulos nocivos e expressam o receptor TRPV1. Como tratamento da dor, a acupuntura é um método eficaz que traz benefícios terapêuticos como a analgesia. Para isso, o presente trabalho tem o objetivo de investigar o papel dos diferentes receptores das fibras aferentes nociceptivas A-δ e C, na condução dos estímulos produzidos pela acupuntura no controle do processo da hiperalgesia inflamatória aguda e neuropática, mediante ação de histamina, bradicinina, substância P, glutamato, serotonina e acetilcolina. Camundongos foram avaliados pelo teste de vonFrey digital. Após indução da hiperalgesia inflamatória por administração de CFA i.pl ou hiperalgesia neuropática (CCI- Constrição Crônica do nervo isquiático), foi administrado 20μL de glutamato ou histamina ou bradicinina ou serotonina ou substância P ou acetilcolina na pata direita traseira no acuponto E36. Após a aplicação de CFA i.pl, a dose 0,03μg foi eficaz para ACh. Para bradicinina e histamina, a dose de 30μg obteve efeito. Para o glutamato e serotonina, 3μg, 0,3μg e 0,03μg foram eficazes e para a substância P, 0,03μg foi eficaz. Após a CCI 0,3μg e 3μg de acetilcolina alteraram o efeito hiperalgésico, e para o glutamato, bradicinina, histamina, serotonina e substância P, todas as doses foram eficazes de acordo com seus respectivos tempos. De acordo com os resultados obtidos, sustenta-se a hipótese que esses mediadores estão envolvidos no efeito da acupuntura manual nos modelos de dor inflamatória e neuropática. / Pain is characterized by a resultant response from the central integration of peripheral nerve impulses triggered by local stimuli. The nociception is the transductional of mechanical thermal and chemical stimuli into electrical impulses via nociceptors. Such impulses are conducted through primary afferents, C-δ and A, which detect noxious stimuli and express the TRPV1 receptor. Acupuncture is an effective pain treatment that brings therapeutic benefits as analgesia. Because of this, the present study aims to investigate the role of different receptors of nociceptive afferent A-δ and C fibers, in the conduction of stimuli produced by acupuncture in control of the process of acute and neuropathic inflammatory hyperalgesia by action of histamine, bradykinin, substance P, glutamate, serotonin, and acetylcholine. Mice were evaluated by digital vonFrey test. After induction of inflammatory hyperalgesia by i.pl CFA administration or neuropathic hyperalgesia (CCI Chronic Constriction of the sciatic nerve), it was administered 20μL of either glutamate or histamine or bradykinin or serotonin or substance P or acetylcholine in the right hind leg at acupoint E36. After application of the CFA i.pl, the dose of 0,03μg dose was effective to ACh. For bradykinin and histamine, the dose of 30 μg was obtained. For serotonin and glutamate, 3μg, 0,3μg and 0,03μg were effective and substance P, 0,03μg was effective. After the CCI 0,3μg and 3μg acetylcholine altered the hyperalgesic effect, and glutamate, bradykinin, histamine, serotonin and substance P. In addition, all doses were effective in accordance with their respective times. The results supports the hypothesis that these mediators are involved in the effect of acupuncture in manual models of inflammatory and neuropathic pain. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
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Mediadores inflamatórios no transtorno bipolarBrietzke, Elisa Macedo January 2010 (has links)
Objetivos: Comparar os níveis séricos de citocinas entre voluntários saudáveis e em pacientes bipolares tipo 1 em mania, depressão e eutimia. Comparar os níveis séricos de quimiocinas entre voluntários saudáveis e pacientes bipolares tipo 1 em eutimia. Metodologia: Sessenta e um pacientes bipolares foram recrutados para a avaliação dos níveis séricos de citocinas. Desses, 24 estavam eutímicos, e 23 e 24 estavam em mania e depressão, respectivamente. Este grupo foi comparado a outro, composto por 25 voluntários saudáveis. As seguintes citocinas foram exainadas através de citometria de fluxo: TNF-alfa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e comparadas entre os grupos. Além dessa análise, 30 pacientes bipolares tipo 1 foram comparados a igual número de voluntários saudáveis para estudar os níveis séricos das seguintes quimiocinas: CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11 e CCL24, dosadas através de ELISA sandwich. Resultados: Duarnte a mania, as citocinas pró-inflamatórias IL-2, IL-4 e IL-6 estavam elevadas nos pacientes com TB em comparação com o grupo de voluntários saudáveis. Já os pacientes em episódio depressivo, apresentavam somente elevação da IL-6. Não houve modificação dos níveis de citocinas nos pacientes eutímicos, exceto pelo aumento da IL-4. Quanto as quimiocinas, enquanto os níveis séricos de CXCL10 estavam elevados nos pacientes bipolares, os níveis de CCL24 estavam diminuídos. / Objectives: Compare serum levels of cytokines between healthy volunteers and patients with bipolar disorder type 1 in mania, depression and euthymia. Compare serum levels of chemokines between healthy volunteers and bipolar patients in euthymia. Methods: Sixty-one bipolar patients were recruited for assessment of serum cytokine levels. Of these, 14 were in euthymic state, 23 and 24 were in manic and depressive episodes, respectively. A healthy comparison group included 25 healthy volunteers. Cytokines involved in Th1/Th2 balance, such as TNF- , IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN- , were examined by flow cytometry. In addition, serum chemokine levels of 30 euthymic patients with BD type I and 30 healthy volunteers were investigated and compared. The chemokines assessed were CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11, and CCL24. Results: During mania, proinflammatory cytokines, IL-2, IL-4 and IL-6, were increased in comparison with healthy subjects. Patients in depressive episode showed only increased IL-6 levels. There were no significant differences in cytokine levels between patients in remission and healthy subjects, except for IL-4. Regarding chemokines, patients with BD showed significant differences in chemokine levels when compared with healthy subjects. While serum levels of CXCL10 were increased, CCL24 levels were lower in bipolar patients when compared with controls. There was no statistical difference in the serum levels of CCL2, CCL3, CCL24, CXCL9, and CXCL11 between patients and controls.
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Mediadores inflamatórios no transtorno bipolarBrietzke, Elisa Macedo January 2010 (has links)
Objetivos: Comparar os níveis séricos de citocinas entre voluntários saudáveis e em pacientes bipolares tipo 1 em mania, depressão e eutimia. Comparar os níveis séricos de quimiocinas entre voluntários saudáveis e pacientes bipolares tipo 1 em eutimia. Metodologia: Sessenta e um pacientes bipolares foram recrutados para a avaliação dos níveis séricos de citocinas. Desses, 24 estavam eutímicos, e 23 e 24 estavam em mania e depressão, respectivamente. Este grupo foi comparado a outro, composto por 25 voluntários saudáveis. As seguintes citocinas foram exainadas através de citometria de fluxo: TNF-alfa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e comparadas entre os grupos. Além dessa análise, 30 pacientes bipolares tipo 1 foram comparados a igual número de voluntários saudáveis para estudar os níveis séricos das seguintes quimiocinas: CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11 e CCL24, dosadas através de ELISA sandwich. Resultados: Duarnte a mania, as citocinas pró-inflamatórias IL-2, IL-4 e IL-6 estavam elevadas nos pacientes com TB em comparação com o grupo de voluntários saudáveis. Já os pacientes em episódio depressivo, apresentavam somente elevação da IL-6. Não houve modificação dos níveis de citocinas nos pacientes eutímicos, exceto pelo aumento da IL-4. Quanto as quimiocinas, enquanto os níveis séricos de CXCL10 estavam elevados nos pacientes bipolares, os níveis de CCL24 estavam diminuídos. / Objectives: Compare serum levels of cytokines between healthy volunteers and patients with bipolar disorder type 1 in mania, depression and euthymia. Compare serum levels of chemokines between healthy volunteers and bipolar patients in euthymia. Methods: Sixty-one bipolar patients were recruited for assessment of serum cytokine levels. Of these, 14 were in euthymic state, 23 and 24 were in manic and depressive episodes, respectively. A healthy comparison group included 25 healthy volunteers. Cytokines involved in Th1/Th2 balance, such as TNF- , IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN- , were examined by flow cytometry. In addition, serum chemokine levels of 30 euthymic patients with BD type I and 30 healthy volunteers were investigated and compared. The chemokines assessed were CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11, and CCL24. Results: During mania, proinflammatory cytokines, IL-2, IL-4 and IL-6, were increased in comparison with healthy subjects. Patients in depressive episode showed only increased IL-6 levels. There were no significant differences in cytokine levels between patients in remission and healthy subjects, except for IL-4. Regarding chemokines, patients with BD showed significant differences in chemokine levels when compared with healthy subjects. While serum levels of CXCL10 were increased, CCL24 levels were lower in bipolar patients when compared with controls. There was no statistical difference in the serum levels of CCL2, CCL3, CCL24, CXCL9, and CXCL11 between patients and controls.
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Gasto energético e sua relação com leptina, insulina e mediadores inflamatórios em pacientes em diálise peritonealMartins, Cristina January 2004 (has links)
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