Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-06T18:13:45Z No. of bitstreams: 1 JordanBarrosdaSilvaDissertacao2017.pdf: 2923625 bytes, checksum: f4397cfc3ec64b731e5825c3fd8ad2cb (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-06T18:15:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JordanBarrosdaSilvaDissertacao2017.pdf: 2923625 bytes, checksum: f4397cfc3ec64b731e5825c3fd8ad2cb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T18:15:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JordanBarrosdaSilvaDissertacao2017.pdf: 2923625 bytes, checksum: f4397cfc3ec64b731e5825c3fd8ad2cb (MD5) Previous issue date: 2017-03-14 / UCB / Myelofibrosis (MF) is a rare disease that has an annual incidence of 1 in every 100,000 inhabitants in world, with an average survival of 69 months after diagnosis. Patients with MF have a delicate prognosis and common findings are increased platelet and erythrocyte counts, extramedullary hematopoiesis, hepatomegaly and splenomegaly, and medullary fibrosis. In recent years, several mutations have been reported in the literature, such as JAK2V617F, CalR and MPL, however, the only commercialized therapy so far (Ruxolitinib) has no curative potential. Extracellular vesicles (EVs) comprise a group of vesicles with a size of approximately 30 to 1000 nm and can carry molecules such as lipids, proteins and RNAs inside them. Due to these characteristics, several recent studies have demonstrated a relationship between the EVs and several types of clonal diseases, where patients with malignancies presented high levels of EV in the serum. Among the RNAs found the interior of the EVs, miRNAs are differentially expressed, since it is known that the small molecules are involved in several cellular processes. The present study has as a characteristic the trace of an EV profiles in patients with Myelofibrosis accompanied at the Hematology and Hemotherapy Unit of the Federal District Base Hospital, as well as a differential expression of the microRNAs miR-29a-3p, miR-155 -5p and miR-223-3p and correlate with the clinical features of the disease. The data show that miR-29a and miR-155 are differentially expressed in MF patients, both of which are downregulated. The miR-223 did not present significant differences. Knowing that the low expression of miR29a is related to an aberrant self-renewal of hematopoietic progenitor cells, the data presented here indicate that the EV may contribute to the pathophysiology of the disease. / A Mielofibrose (MF) ?? uma doen??a rara que possui incid??ncia anual de 1 em cada 100.000 habitantes no mundo, com m??dia de sobrevida de 69 meses ap??s o diagn??stico. Os pacientes com MF geralmente apresentam progn??stico delicado e os achados comuns s??o aumento na contagem plaquet??ria e eritrocit??ria, hematopoiese extramedular, hepatomegalia e esplenomegalia e fibrose medular. Nos ??ltimos anos, v??rias muta????es foram relatadas na literatura, como a JAK2V617F, a CalR e MPL, no entanto, a ??nica terapia comercializada at?? o momento (Ruxolitinib) n??o possui potencial curativo. Ves??culas Extracelulares (VEs) compreendem um grupo de ves??culas com tamanho aproximado de 30 a 1000 nm e podem transportar em seu interior mol??culas como lip??dios, prote??nas citos??licas e RNAs. Devido a essas caracter??sticas, v??rios estudos recentes v??m demonstrando a rela????o entre as VEs e diversos tipos de doen??as clonais, onde os pacientes portadores dessas malignidades apresentaram n??veis elevados de VEs no soro. Dentre os RNAs encontrados no interior das VEs, destacam-se os miRNAs diferencialmente expressos, pois sabe-se que essas pequenas mol??culas est??o envolvidas em diversos processos celulares. O presente estudo se prop??s a caracterizar e tra??ar um perfil das VEs em pacientes portadores de Mielofibrose acompanhados na Unidade de Hematologia e Hemoterapia do Hospital de Base do Distrito Federal, bem como avaliar a express??o diferencial dos microRNAs miR-29a-3p, miR-155-5p e miR-223-3p e correlacionar com as caracter??sticas cl??nicas da doen??a. Os dados encontrados mostram que o miR-29a e o miR-155 se apresentam diferencialmente expresso nos pacientes com MF, sendo ambos pouco expressos. O miR-223 n??o apresentou diferen??as significativas. Sabendo que a baixa express??o do miR29a est?? relacionada a uma auto renova????o aberrante de c??lulas progenitoras hematopoi??ticas, os dados aqui apresentados indicam que as VEs podem contribuir com fisiopatologia da doen??a.

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-10-19T16:20:52Z No. of bitstreams: 1 TES_GABRIELE_GOULART_ZANIRATI_PARCIAL.pdf: 3026560 bytes, checksum: 6f276f0eab68a1100bcdcb5009780036 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-10-19T16:21:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TES_GABRIELE_GOULART_ZANIRATI_PARCIAL.pdf: 3026560 bytes, checksum: 6f276f0eab68a1100bcdcb5009780036 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-19T16:21:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_GABRIELE_GOULART_ZANIRATI_PARCIAL.pdf: 3026560 bytes, checksum: 6f276f0eab68a1100bcdcb5009780036 (MD5) Previous issue date: 2017-03-16 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / (Artigo : Efeito do transplante de c?lulas mononucleares da medula ?ssea sobre o metabolismo cerebral da glicose in vivo e o comportamento depressivo no modelo experimental de epilepsia cr?nica induzido por pilocarpina) Temporal lobe epilepsy (TLE) is one of the most common kind of epilepsy syndromes in the world population. Depression is an important comorbidity of epilepsy. It has been reported in patients with TLE and different experimental models of epilepsy. However, there is no established consensus about which brain regions are associated with the manifestation of depression in epilepsy. BMMC transplantation has been used for treatment of epilepsy and has showed a large number of benefit effects in this neuropathology. 18FFDG has been widely used to investigate the cerebral metabolism in patients with TLE or depression disorders, and recently in animal models using microPET imaging. We investigate longitudinally the alterations in cerebral glucose metabolism in rats submitted to the pilocarpine model and observe the effect of BMMC transplantation in cerebral FDG uptake to correlate it to depressive behavior during the chronic phase of epilepsy. Our results demonstrated that pilocarpine-treated rats showed depression-like behavior and reduced 18F-FDG uptake in several brain regions related to the pathophysiology of both epilepsy and depression during chronic phase. Besides, BMMC treatment reduced cognitive dysfunction and depressive-like behavior showed by chronically epileptic rats. However, the BMMC transplantation did not affect the brain glucose metabolism in those animals. Additionally, we found a hypersynchrony metabolic network in the chronically epileptic animals, and reduced connectivity in BMMC-treated animals, similar to Control rats. This study suggests further evidence of depressive behavior as a comorbidity in the pilocarpineinduced epilepsy model, and an important alteration of glucose metabolism and metabolic network among brain regions of interest for both pathologies. Additionally, this study suggested a potential effect of BMMC transplantation for reduction of seizure frequency, cognitive deficits and depressive-like behavior, as well as contribute to normalize the connectivity in the metabolic network in chronically epileptic animals. / (Artigo : Efeito do transplante de c?lulas mononucleares da medula ?ssea sobre o metabolismo cerebral da glicose in vivo e o comportamento depressivo no modelo experimental de epilepsia cr?nica induzido por pilocarpina) Multiple epileptogenic changes and incessant inflammation ensue after status epilepticus (SE) induced brain injury, which in due course result in chronic temporal lobe epilepsy typified by spontaneous recurrent seizures (SRS) and impairments in cognition, memory and mood. We tested whether early intervention after SE with grafting of hiPSC-derived neural stem cells (hNSCs) into hippocampi is efficacious for curbing SRS and thwarting cognitive, memory and mood dysfunction. Young male F344 rats first underwent kainic acid induced SE for two hours and then received grafts of hNSCs into hippocampi at 7 days post-SE (3 grafts/side, ~100,000 cells/graft). Other cohorts of rats underwent similar SE but received either sham-grafting surgery or maintained as epilepsy-only controls. Sixty-four hour observations in the 3rd month after SE revealed diminished SRS in grafted animals, in comparison to animals in sham-grafted or epilepsy only groups. Seven days of continuous video-EEG recordings in the 4th month after SE corroborated these findings. Furthermore, grafted animals displayed competence for discerning minor changes in the environment (pattern separation function), ability for forming recognition and location memories in novel object recognition, object location and object in place tests, and no anhedonia-like behavior in sucrose preference test. Contrastingly, epileptic rats in both sham-grafted and epilepsy-only groups showed pattern separation, recognition and location memory impairments and anhedonia. Histological analyses performed 4 months after grafting revealed robust yield and mostly (~87%) neuronal differentiation of hNSC graft-derived cells. Some GABA-ergic neurons (~12%), astrocytes (11-16%) and Ki-67+ proliferating cells (~1%) were also seen among graft-derived cells. Yet, grafts did not contain Oct-4+ PSCs. In addition, hNSC grafting maintained normal levels of hippocampal neurogenesis with reduced aberrant migration of newly born neurons, modulated the hypertrophy of astrocytes and activation of microglia and rescued host neuropeptide Y and parvalbumin positive interneurons. Thus, hiPSC-derived NSC grafting into the hippocampus early after SE considerably mitigates SE-induced chronic epilepsy and preserves cognitive, memory and mood function. / (Artigo : Efeito do transplante de c?lulas mononucleares da medula ?ssea sobre o metabolismo cerebral da glicose in vivo e o comportamento depressivo no modelo experimental de epilepsia cr?nica induzido por pilocarpina) V?rias altera??es epileptog?nicas e inflama??o cont?nua acontece ap?s induc??o de status epilepticus (SE), que pode resultar no desenvolvimento de epilepsia do lobo temporal (ELT) caracterizada por crises espont?neas e recorrentes (CERs) e preju?zos na cogni??o, mem?ria e humor. N?s testamos se a interven??o precoce ap?s SE com o transplante intrahipocampal de c?lulas-tronco neurais (NSC) derivadas de c?lulas-tronco pluripotentes induzidas humanas (hiPSC) ? eficaz para reduzir a frequ?ncia de CERs e a disfun??o cognitiva e comportamento depressivo. Ratos F344 machos foram utilizados para indu??o de SE por ?cido ca?nico (KA) durante duas horas. Ap?s 7 dias da indu??o de SE os animais receberam o transplante intrahipocampal de hNSCs (3 inje??es/bilateral, ~ 100.000 c?lulas). Animais do grupo Sham receberam transplante intrahipocampal de meio celular ao inv?s de hNSC, e animais do grupo SE receberam apenas a inje??o de KA, sem procedimentos cir?rgicos. A monitora??o das CERs de sessenta e quatro horas no 3? m?s ap?s o SE revelaram diminui??o das CERs nos animais transplantados, em compara??o com animais dos grupos Sham ou SE. Sete dias de grava??es cont?nuas de v?deo-EEG no quarto m?s ap?s SE corroboraram com esses achados. Al?m disso, os animais transplantados mostraram habilidade para discernir pequenas mudan?as no ambiente (fun??o de separa??o de padr?es), habilidade para formar mem?rias de reconhecimento e localiza??o de objetos, bem como redu??o da disfun??o humoral e depressiva no teste de prefer?ncia de sacarose e teste de alimenta??o relacionado ? depress?o. Em contraste, os ratos epil?pticos tanto do grupo Sham quanto do grupo SE mostraram disfun??o de separa??o de padr?es, dist?rbios de reconhecimento e mem?ria de localiza??o, bem como comportamento depressivo. As an?lises histol?gicas realizadas 4 meses ap?s o transplante revelaram excelente sobreviv?ncia das c?lulas transplantadas nos hipocampos e se diferenciaram na maior parte em neur?nios NeuN+ (~ 87%). Tamb?m foi encontrado nos hipocampos dos animais transplantados alguns neur?nios GABA-?rgicos (~ 12%), astr?citos (11-16%) e Ki-67+ c?lulas em prolifera??o (~1%). Contudo, as c?lulas diferenciadas a partir das hNSC transplantadas n?o apresentaram a presen?a de Oct-4+. Al?m disso, o transplante de hNSC aumentou a neurog?nese no hipocampo com migra??o aberrante reduzida dos novos neur?nios, modulou a hipertrofia dos astr?citos e a ativa??o da microglia e preservou interneur?nios positivos ao neuropept?deo Y e ? parvalbumina. Assim, o transplante precoce de NSC derivadas de hiPSC no hipocampo ap?s SE atenua consideravelmente a epilepsia cr?nica induzida e preserva a fun??o cognitiva e melhora o comportamento depressivo. / (Artigo : Efeito do transplante de c?lulas mononucleares da medula ?ssea sobre o metabolismo cerebral da glicose in vivo e o comportamento depressivo no modelo experimental de epilepsia cr?nica induzido por pilocarpina) A epilepsia do lobo temporal (ELT) ? um dos tipos mais comuns de epilepsia na popula??o mundial, e muitas vezes, consequentemente, ? acompanhada por comorbidades como a depress?o. A depress?o tem sido considerada uma importante comorbidade da epilepsia, sendo relatada tanto em pacientes com ELT quanto em modelos experimentais de epilepsia. No entanto, n?o h? um consenso estabelecido sobre quais regi?es cerebrais est?o associadas com a manifesta??o da depress?o na epilepsia. Com a alta refratariedade da ELT, novas alternativas terap?uticas t?m sido avaliadas como, por exemplo, a terapia celular. O transplante de c?lulas mononucleares da medula ?ssea (CMMO) vem sendo utilizado para o tratamento da epilepsia e tem mostrado um grande n?mero de efeitos ben?ficos nesta neuropatologia. A epilepsia afeta o consumo de glicose cerebral, bem como a rede metab?lica e a conectividade entre regi?es cerebrais. Por outro lado, o PET com 18F-FDG tem sido amplamente utilizado para investigar o metabolismo cerebral em pacientes com ELT ou dist?rbios depressivos e na investiga??o experimental em animais de pequeno porte avaliados por imagens obtidas no microPET. N?s investigamos longitudinalmente as altera??es no metabolismo cerebral da glicose no modelo de epilepsia induzido por pilocarpina e observamos o efeito do transplante das CMMO no comportamento depressivo e no metabolismo cerebral de FDG durante a fase cr?nica da epilepsia. Nossos resultados evidenciaram que os ratos tratados com pilocarpina apresentaram comportamento semelhante ?queles observados na depress?o associado a menor metabolismo de 18F-FDG em v?rias regi?es cerebrais relacionadas ? fisiopatologia da epilepsia e da depress?o durante a fase cr?nica. O tratamento com CMMO reduziu a disfun??o cognitiva e o comportamento depressivo mostrado pelos animais cronicamente epil?ticos. No entanto, o transplante CMMO parece n?o afetar o metabolismo cerebral da glicose nesses animais. Adicionalmente, encontramos uma rede metab?lica hipersincr?nica nos animais cronicamente epil?pticos e uma rede metab?lica reduzida em animais tratados com as CMMO, semelhante aos animais controles. Este estudo corrobora com evid?ncias adicionais de comportamento depressivo como comorbidade no modelo de epilepsia induzida pela pilocarpina associado a significativa altera??o do metabolismo da glicose e da rede metab?lica entre as regi?es cerebrais envolvidas em ambas as patologias. Al?m disso, este estudo sugeriu um potencial efeito do transplante de CMMO para redu??o da frequ?ncia de crises, d?ficit cognitivo e comportamento depressivo, bem como contribuiu para normaliza??o da rede metab?lica em animais cronicamente epil?ticos.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-07-07T11:50:31Z No. of bitstreams: 1 471698 - Texto Completo.pdf: 12586817 bytes, checksum: 8890b725a884decc5581071eb597ca42 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-07T11:50:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 471698 - Texto Completo.pdf: 12586817 bytes, checksum: 8890b725a884decc5581071eb597ca42 (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Parkinson?s disease is characterized by the progressive loss of dopaminergic neurons from the substantia nigra, a process that leads to a dopamine deficiency in the striatum. This deficiency is responsible for the development of motor symptoms, including resting tremor, bradykinesia, rigidity and postural instability. New alternatives to Parkinson?s disease treatment have been studied, including cell-based therapies. The present study aimed to assess the therapeutic potential of intravenous and intrastriatal transplant of bone marrow mononuclear cells in a mouse model of Parkinson?s disease. Animals underwent stereotaxic surgery and 1?l of 6-hidroxidopamine (6-OHDA) was injected into their medial forebrain bundle. Two weeks later, mice were evaluated in the apomorphine rotation test to confirm the model induction. In the next week, animals? pre-transplant motor function was assessed by Rotarod test. Then, BMMC or saline injection was carried out through the tail vein or directly into animals? striatum. Motor function was also assessed using the Rotarod and apomorphineinduced rotation tests, 10 and 30 days post-transplant.Our results showed that intravenous BMMC did not restore the motor function in PD mice. In addition, transplanted cells were found only 24h after transplant in the brain tissue. On the other hand, the BMMC intracerebral transplant prevented the dopaminergic deficit progress, induced by 6-OHDA injection, effect seen in apomorphine-induced rotation test, only 10 days post-transplant. This potential was not seen on Rotarod test, showing dissociation between dopaminergic response and motor function. In addition, it was carried out a BMMC double transplant into parkinsonian mice?s striatum. It was shown, however, an increase in the apomorphineinduced rotations number, 30 days after the first transplant, even after a second injection of BMMC at 20 days. It was also shown, that, BMMC can be detected for at least 30 days after the intrastriatal transplant. Further experiments are needed to elucidate the mechanisms involved in these effects. / A doen?a de Parkinson (DP) ? caracterizada pela perda progressiva dos neur?nios dopamin?rgicos da substancia negra, a qual leva a uma defici?ncia de dopamina no estriado. Essa defici?ncia ? respons?vel pelo desenvolvimento de sintomas motores como tremor em repouso, bradicinesia, rigidez e instabilidade postural. Novas alternativas para o tratamento da DP t?m sido estudadas e uma possibilidade promissora ? o transplante de c?lulas-tronco. O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial terap?utico do transplante intravenoso e intracerebral de c?lulas mononucleares de medula ?ssea (CMMO) em um modelo lesional da DP. Os animais foram submetidos ? estereotaxia e 1?l de 6-hidroxidopamina (6-OHDA) foi injetado no feixe prosencef?lico medial. Duas semanas ap?s, os camundongos foram avaliados no teste de rota??o induzida por apomorfina para confirma??o da indu??o do modelo. Na semana seguinte, os animais foram submetidos ? avalia??o da fun??o motora, pr?transplante, pelo teste de Rotarod. Em seguida, a inje??o de CMMO ou salina foi realizada atrav?s da veia da cauda ou diretamente no estriado dos animais. A fun??o motora p?stransplante foi avaliada atrav?s do teste de Rotarod e do teste de rota??o induzida por apomorfina, 10 e 30 dias ap?s o transplante.Nosso estudo demonstrou que as CMMO, transplantadas atrav?s da veia da cauda em camundongos parkinsonianos, n?o foram capazes de melhorar a fun??o motora desses animais. Al?m disso, essa c?lulas foram encontradas no tecido encef?lico, apenas 24h ap?s o transplante. Por outro lado, o transplante intracerebral das CMMO impediu a progress?o do d?ficit dopamin?rgico induzido pela 6-OHDA, efeito observado atrav?s do teste de rota??o induzida por apomorfina, apenas 10 dias ap?s. Esse efeito n?o refletiu, entretanto, na melhora do desempenho dos animais no teste de Rotarod, demonstrando uma dissocia??o da resposta dopamin?rgica e da fun??o motora. Al?m disso, foi realizado tamb?m um transplante duplo de CMMO no estriado de camundongos parkinsoniano. Foi observado, por?m, um aumento no n?mero de rota??es induzidas por apomorfina, 30 dias ap?s o primeiro transplante, mesmo ap?s uma segunda inje??o de CMMO aos 20 dias. Foi demonstrado, tamb?m, que as CMMO podem ser detectadas por pelo menos 30 dias ap?s o transplante intraestriatal. Estudos adicionais s?o necess?rios para elucidar os mecanismos envolvidos no efeito das CMMO observados no modelo animal da DP.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 417772.pdf: 8647052 bytes, checksum: ff0995a277ba9d1db6d58798d55822b1 (MD5) Previous issue date: 2009-08-13 / As c?lulas tronco mesenquimais origin?rias do estroma da medula ?ssea humana possuem grande capacidade de diferencia??o em diversos tecidos, inclusive osso. Culturas de c?lulas tronco mesenquimais in vitro podem sofrer osteoindu??o e produzir c?lulas dos diferentes est?gios da linhagem osteobl?stica. A busca de um arcabou?o adequado quanto a sua capacidade osteocondutora e osteoindutora vem sendo um dos grandes desafios da engenharia tecidual ?ssea. Neste estudo verificou-se o papel de um arcabou?o al?geno fresco congelado e do meio de cultura (DAG) sobre a osteog?nese de c?lulas tronco adultas. Os aspectos morfol?gicos das c?lulas osteog?nicas e do arcabou?o, al?m da express?o das prote?nas osteopontina, osteocalcina e fosfatase alcalina ?sseas foram analisadas em sete, quatorze e vinte e um dias de cultura, sem e com meio osteog?nico (DAG). Os resultados obtidos do s?timo dia at? o vig?simo primeiro dia da pesquisa demonstraram a presen?a de aumento na ades?o, migra??o, crescimento e diferencia??o celular ?ssea. O meio DAG foi um acelerador da osteog?nese, verificado principalmente, nas primeiras duas semanas. O arcabou?o de osso al?geno, in vitro, apresentou a capacidade de suportar a ostegen?se at? a mineraliza??o em todas as culturas. Assim, concluiu-se que as c?lulas derivadas da medula ?ssea humana podem: aderir, migrar, crescer, proliferar e se diferenciar sobre um arcabou?o de osso al?geno fresco congelado. O meio osteog?nico acelera a ades?o, migra??o, crescimento, prolifera??o e diferencia??o das c?lulas tronco adultas em osteoblastos principalmente nos primeiros quatorze dias de cultura. Os osteoblastos foram obtidos a partir de c?lulas de medula ?ssea humana sobre um arcabou?o de osso al?geno fresco congelado, mesmo sem adi??o de fatores osteoindutores. Finalmente, o arcabou?o de osso al?geno fresco congelado ? osteocondutor e osteoindutor quando associado com c?lulas tronco adultas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 417773.pdf: 1138982 bytes, checksum: 03423e2cddaa5a43349be69c0853e615 (MD5) Previous issue date: 2009-08-31 / Os implantes osseointegrados, em sua maioria, possuem algum tipo de condicionamento da sua superf?cie que visa melhorar a osseointegra??o. O mecanismo de diferencia??o celular in vitro de c?lulas mesenquimais em osteoblastos j? ? bastante conhecido e serve para avalia??o das propriedades de osteoindu??o e osteocondu??o de biomateriais. O presente estudo tem por objetivo avaliar a ades?o, prolifera??o e diferencia??o das c?lulas da medula ?ssea humana em superf?cies de implantes de tit?nio com e sem deposi??o discreta de fosfato de c?lcio. As c?lulas foram obtidas a partir da medula ?ssea de um doador humano. Foram selecionados 12 discos de tit?nio do tipo Bonelike? (Biomet 3I, Brasil) com superf?cie tratada por duplo ataque ?cido; Osseotite (Biomet 3I, USA) com superf?cie tratada por duplo ataque ?cido e Nanotite (Biomet 3I, USA). Ap?s 14 e 21 dias de cultura foi realizado PCR em tempo real para avalia??o da diferencia??o celular e microscopia eletr?nica de varredura para avalia??o da prolifera??o e ades?o celular aos discos de tit?nio. Os resultados indicaram que a rugosidade da superf?cie dos discos de tit?nio possibilita a ades?o, diferencia??o e prolifera??o celular, que a s?ntese de ALP ? maior na superf?cie Bonelike e que as part?culas de fosfato de c?lcio demonstraram maior grau de s?ntese de BGLAP e prolifera??o celular.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 388585.pdf: 2402252 bytes, checksum: 61c5f710d7d456a08638eac157bdc111 (MD5) Previous issue date: 2007-01-16 / O estroma da medula ?ssea, al?m de conter uma popula??o heterog?nea de c?lulas conjuntivas, nervosas e hematopoi?ticas, mant?m uma quantidade de c?lulas com caracter?sticas de c?lulas tronco (c?lulas mesenquimais indiferenciadas). Estas possuem capacidade de se diferenciarem em qualquer c?lula de natureza conjuntiva quando estimuladas pelo organismo. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar a ades?o, a prolifera??o e a diferencia??o de c?lulas mesenquimais da medula ?ssea cultivadas sobre membrana de col?geno bovino e sobre arcabou?o de ?cido poliglic?lico polil?tico (PLGA) com a adi??o do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) e/ ou da prote?na morfogen?tica ?ssea recombinante humana (rhBMP-4). As c?lulas foram coletadas da medula ?ssea da crista do osso il?aco humana e separadas por t?cnica espec?fica. As c?lulas foram cultivadas em dois suportes: membrana de col?geno e arcabou?o de PLGA, e receberam 4 tratamentos distintos: (1) com rhBMP-4, (2) com rhBMP-4 e PRP, (3) com PRP e (4) controle (somente meio de cultura). Os subgrupos foram avaliados em 6, 9, 14 e 21 dias. Foram realizadas an?lises microsc?picas das membranas e arcabou?os com as colora??es de Iodeto de Prop?dio e de Hematoxilina e Eosina. Foi feito PCR em tempo real a fim de se avaliar a express?o de osteopontina e osteocalcina e PCR convencional para osteopontina. Os resultados mostraram ades?o celular tanto na membrana de col?geno como no arcabou?o de PLGA. Sugere-se haver uma maior prolifera??o e diferencia??o celular nos grupos que foram adicionados PRP, e rhBMP-4 e PRP juntos. Nos grupos com rhBMP-4 parece haver uma maior diferencia??o celular que o grupo controle. Os dados obtidos indicam que o PRP e/ ou a presen?a de rhBMP-4 induzem ades?o, prolifera??o e diferencia??o de c?lulas da medula ?ssea em c?lulas de linhagem osteog?nica

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422803.pdf: 2994221 bytes, checksum: 7c29345e7e01926a972683bfed251f7d (MD5) Previous issue date: 2010-03-12 / O objetivo deste trabalho ? avaliar o potencial do transplante de c?lulas mononucleares da medula ?ssea (CMMO) de camundongos reverter o d?ficit motor em um modelo de ataxia em ratos. Para isto, utilizou-se a cirurgia estereot?xica a fim de infundir ?cido ibot?nico bilateralmente no n?cleo fastigial do cerebelo de ratos Wistar. Nos animais controle, infundiu-se salina ao inv?s de ?cido ibot?nico (sham) ou submeteu-se alguns animais aos mesmos procedimentos sem nenhuma infus?o (naive). Tr?s dias ap?s a cirurgia, realizou-se o teste de marcha em cilindro girat?rio (rotarod, em uma vers?o com velocidade fixa e outra com acelera??o progressiva) e o teste de suspens?o em fio. Verificou-se que os animais que recebem ?cido ibot?nico apresentam menor lat?ncia de queda no teste do rotarod executado com ambos os protocolos, e menor fase de queda no protocolo acelerado, quando comparado aos controles. No quarto dia, os animais lesionados foram designados para um dos seguintes tratamentos, todos pela via venosa: salina, CMMO ou CMMO inativadas. Os animais controle receberam transplante de salina. Realizou-se nova avalia??o do comprometimento motor 7 e 14 dias ap?s a cirurgia estereot?xica. Verificou-se que o transplante de CMMO ou CMMO inativadas aumentou a lat?ncia e a fase de queda no teste do rotarod executado com o protocolo acelerado, bem como a lat?ncia de queda no teste executado com o protocolo fixo quando executados 14 dias ap?s a cirurgia, havendo desempenho semelhante aos controles. O grupo com les?o que recebeu transplante de salina n?o apresentou melhora em nenhum par?metro e momento dos testes. N?o houve diferen?a no teste de suspens?o em fio, em fun??o da les?o ou do transplante. Ao final do experimento, em an?lise histol?gica, n?o se observou diferen?a no aspecto das les?es entre os grupos que tiveram o n?cleo fastigial lesionado. Assim, demonstramos que um xenotransplante de CMMO de camundongos em ratos pode melhorar o desempenho motor em um modelo de ataxia induzido pela les?o excitot?xica bilateral do n?cleo fastigial, sem ser poss?vel, entretanto, identificar se tal efeito deve-se ? repopula??o neuronal e a??o tr?fica das c?lulas tronco ou envolve outros mecanismos relacionados com a resposta imunol?gica do hospedeiro.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 430802.pdf: 1429367 bytes, checksum: 77ed867ce8aa5efa441843cd19c7752d (MD5) Previous issue date: 2011-03-16 / A doen?a de Parkinson (DP) ? caracterizada pela perda progressiva dos neur?nios dopamin?rgicos da substancia negra, a qual leva a uma defici?ncia de dopamina no estriado. Essa defici?ncia ? respons?vel pelo desenvolvimento de sintomas motores como tremor em repouso, bradicinesia, rigidez e instabilidade postural. Novas alternativas para o tratamento da DP t?m sido estudadas e uma possibilidade promissora ? o transplante de c?lulas-tronco. O presente estudo visa avaliar o potencial terap?utico do transplante de c?lulas mononucleares de medula ?ssea (CMMO) em um modelo lesional da DP. Os animais foram submetidos ? estereotaxia e 1μl de 6-hidroxidopamina foi injetado no feixe prosencef?lico medial. Tr?s semanas ap?s, os camundongos foram transplantados com CMMO, fibroblasto ou salina, atrav?s da veia da cauda. A fun??o motora foi avaliada atrav?s do teste de Rotarod e do teste de rota??o induzida por apomorfina. Nosso estudo demonstrou que as CMMO, transplantadas atrav?s da veia da cauda em camundongos parkinsonianos, s?o capazes de atravessar a barreira hematoencef?lica e migrar em dire??o ao tecido encef?lico, al?m de sobreviverem por uma semana ap?s o transplante. Essas c?lulas, por?m, n?o foram capazes de restabelecer a fun??o motora desses animais, em at? 30 dias p?s-transplante. Se as CMMO conseguiram restaurar os neur?nios dopamin?rgicos nigroestriatais apenas a n?vel histol?gico, n?o podendo essa restaura??o ser detectada pelos testes motores realizados, ainda precisa ser esclarecido.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 447914.pdf: 1273209 bytes, checksum: bc6f4a88f17be9566f98a33586d6f9a5 (MD5) Previous issue date: 2013-03-22 / Epilepsy affects 1% of the world population and 30% of these patients are refractory to available medication. Stem cells host hope in the treatment of epilepsy. Given their ability to proliferate, differentiate and production of factors which may activate endogenous mechanisms to restore the injured brain. Knowing that the administration of bone marrow mononuclear cells (BMMC) in animals have therapeutic potential in an experimental model of epilepsy, the aim of this study is to investigate the mechanisms by which administered cells exert their beneficial. In order to better understand the mechanisms of action of transplanted cells, a comparative study was done to detect the expression of trophic factors as brain-derived neurotrophic factor (BDNF), glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF), nerve growth factor (NGF), transforming growth factor beta (TGF-R) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in hippocampi of each experimental groups by ELISA. Experimental model of epilepsy was induced by pilocarpine injection (320 mg/kg; ip). Seizures were scored by Racine s scale. The duration of SE was controlled with diazepan (10mg/kg; ip; 90 minutes after SE onset). Twenty-two days after SE, rats were randomly assigned into groups: Control, Pilo, Pilo+BMMC evaluated in periods 3, 7 and 14 days after transplant. BMMC groups received cell transplantation (obtained from EGFP C57BL/6 mice) via tail vein (1x107 cells, 100L). While control animals received saline instead of pilocarpine. Pilocarpine-treated animals were monitored for the presence of spontaneous seizures for 22 days (7 days prior to cell transplant). Our results showed that there was a change in the protein expression of BDNF, GDNF, NGF, TGF-R and VEGF in the hippocampus of epileptic animals treated with BMMC compared to untreated epileptic animals and control, with variations in the expression of each factor at different times after transplantation. The expression of BDNF, GDNF, NGF and VEGF was high and TGF-R1 reduced after transplantation of BMMC compared to untreated epileptic animals. However, there was no difference in the expression of these factors in untreated epileptic animals compared to control animals, except TGF-R1, which proved to be high in the group of untreated epileptic animals compared to control animals. The results of this study provide additional data on the potential benefit of BMMC as well as provide insight into the mechanism by which BMMC promote functional recovery in epileptic rats. / A epilepsia atinge cerca de 1% da popula??o mundial, sendo que aproximadamente 30% desses pacientes n?o respondem ao tratamento medicamentoso. Por sua vez, as c?lulas-tronco t?m sido consideradas uma esperan?a de tratamento da epilepsia, visto que t?m grande capacidade de prolifera??o, diferencia??o e produ??o de fatores, podendo ativar mecanismos de restaura??o end?gena no c?rebro lesado. Sabendo-se que a administra??o de c?lulas mononucleares da medula ?ssea (CMMO) apresenta potencial terap?utico em um modelo experimental de epilepsia, o objetivo deste estudo ? investigar se o transplante das CMMO em ratos com epilepsia cr?nica modula a express?o de fatores tr?ficos. Com o intuito de melhor compreender os mecanismos de a??o das c?lulas transplantas foi realizada a detec??o da express?o de fatores tr?ficos como o fator neurotr?fico derivado do c?rebro (BDNF), fator neurotr?fico derivado da glia (GDNF), fator de crescimento neural (NGF), fator de crescimento transformador R1 (TGF-R1) e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) em diferentes per?odos ap?s transplante das CMMO nos hipocampos dos grupos experimentais atrav?s da t?cnica de ELISA. A pilocarpina (PILO) foi administrada nos animais (320 mg/kg i.p.,) para indu??o do modelo de epilepsia cr?nica. As crises comportamentais foram classificadas de acordo com a escala de Racine e a dura??o do SE foi controlada com diazepam (10 mg/kg, i.p., 90 minutos). Ap?s 22 dias, o total dos animais foi dividido em grupos: Controle, Pilo e Pilo+CMMO avaliados nos tempos de 3, 7 e 14 dias ap?s o transplante. Os grupos CMMO receberam transplante de c?lulas da camada mononuclear da medula ?ssea, obtidas de camundongos EGFP C57BL/6, via veia caudal (1x107 c?lulas, 100L). Os animais controle receberam solu??o salina nas mesmas condi??es do grupo transplantado. Os animais tratados com pilocarpina foram v?deo-monitorados durante sete dias pr?-transplante para observa??o de crises espont?neas recorrentes (CERs). Nossos resultados mostraram que houve altera??o da express?o proteica de BDNF, GDNF, NGF, TGF-R1 e VEGF nos hipocampos dos animais epil?pticos tratados com as CMMO em rela??o aos animais epil?pticos n?o tratados e controle, havendo varia??es da express?o de cada fator em diferentes tempos ap?s o transplante. A express?o dos fatores BDNF, GDNF, NGF e VEGF mostrou-se elevada e do TGF-R1 reduzida ap?s o transplante das CMMO em rela??o aos animais epil?pticos n?o tratados. Por?m, n?o houve diferen?a na express?o destes fatores nos animais epil?pticos n?o tratados em rela??o aos animais controle, exceto o TGF-R1, o qual se mostrou elevado no grupo de animais epil?pticos n?o tratados em rela??o aos animais controle. Os resultados deste estudo fornecem dados adicionais sobre o benef?cio do potencial das CMMO, bem como fornecer uma vis?o sobre o mecanismo pelo qual as CMMO favorecem a recupera??o funcional em ratos epil?pticos.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 450246.pdf: 1514408 bytes, checksum: 6ceddb0f6677e9485ec44236c23b7b0b (MD5) Previous issue date: 2013-03-25 / The spinal cord injury (SCI) is a condition that dramatically affects the quality of life of affected patients, has a high incidence and causes a high cost to the government and society. Existing treatments for SCI are only palliative nature, not being able to reverse the neurological damage caused by trauma. As a result, it is necessary to investigate new therapies that seek more effective solutions for these cases. The studies with bone marrow mononuclear cells (BMMC) have shown encouraging results, but still not definitive for clinical application, so the expansion of preclinical studies is essential. In this study we aimed to compare treatment outcomes between groups with 3 and 5 applications BMMC applications, analyzing motor function, and inflammation at the lesion site after treatment with BMMC by subarachnoid through via lumbar puncture. The experimental groups were divided into two groups, with different times of transplantation. A group of 3 applications of BMMC, the first application 48 hours, 9 days and 16 days after SCI and a second group with 5 BMMC applications, application in the first 48 hours, 9, 16, 23 and 30 days after by spinal cord injury. The BMMC of male wistar rats was applied via subarachnoid. The entire group received vehicle (saline). The animals were evaluated for motor function through the BBB scale, for the presence of BMMC in the lesion by PCR for the presence of Y chromossome of the cells, and the inflammatory process at the site of injury, analyzing IL-1β and TNF-α, by immunohistochemistry. Our results show an improvement in motor function in the groups treated with BMMC transplants. The immunohistochemical evaluation revealed no difference in the expression of inflammatory cytokines Il-1β and TNF-α at the site of injury in the groups treated with BMMC. The PCR analysis for the presence of chromossome of the cells was negative at the 37th day of the last application of BMMCs / O trauma-raquimedular (TRM) ? uma patologia que afeta drasticamente a qualidade de vida dos pacientes acometidos, apresenta alta incid?ncia e ocasiona um alto custo para o governo e a sociedade. Os tratamentos existentes para o TRM s?o apenas de cunho paliativo, n?o sendo capazes de reverter o dano neurol?gico ocasionado pelo trauma. Em fun??o disso, ? necess?rio investigar novas terapias que busquem solu??es mais efetivas para esses pacientes. Os estudos com c?lulas-tronco de medula ?ssea (CMMO) t?m demonstrado resultados animadores, mas ainda n?o definitivos para aplica??o cl?nica; assim, a amplia??o dos estudos pr?-cl?nicos ? indispens?vel. Neste estudo tivemos o objetivo de comparar os resultados do tratamento de CMMO pela via subaracnoidea (VS) atrav?s de pun??o lombar (PL), entre grupos com 3 aplica??es e 5 aplica??es de CMMO, analisando a fun??o motora e o processo inflamat?rio no local da les?o. Nossos grupos experimentais de estudo foram divididos em 2 grupos pela via de administra??o subaracn?idea, com tempos de transplante diferentes. Um grupo com 3 aplica?oes de CMMO, sendo a primeira aplica??o em 48h, 9 dias e 16 dias ap?s a les?o medular (LM) e um segundo grupo com 5 aplica??es de CMMO, primeira aplica??o em 48 h, 9, 16, 23 e 30 dias ap?s a Les?o Medular (LM) pela VS e cada grupo com seu controle de ve?culo, solu??o salina (SS). Os animais doadores eram machos e os receptores eram f?meas. As ratas foram avaliadas quanto ? fun??o motora, atrav?s da escala de Basso, Beattie and Bresnahan (BBB), quanto ? presen?a de CMMO na les?o, por meio da Rea??o em Cadeia da Polimerase (PCR) para a detec??o do cromossomo Y dos animais doadores, e quanto ao processo inflamat?rio no local da les?o, analisando a interleucina 1 beta (IL-1β) e o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), atrav?s de imuno-histoquimica. Nossos resultados demonstraram uma melhora da fun??o motora nos grupos tratados com transplantes de CMMO, sendo mais r?pida nos animais que receberam 7 cinco aplica??es. A avalia??o imuno-histoqu?mica revelou que n?o houve diferen?a na express?o das citocinas inflamat?rias IL-1β e TNF-α no local da les?o nos grupos tratados com CMMO. A an?lise de PCR n?o demonstrou c?lulas no local da les?o, quando analisadas no 37? dia