Orientadora: Luciana Pinato / Coorientadora: Leila M. G. Campos / Banca: Maria Angélica Spadella / Banca: Natália Freitas Rossi / Resumo: Introdução: Áreas encefálicas como hipocampo, hipotálamo, cerebelo e o córtex pré-frontal participam do controle de habilidades sociais fundamentais para a saúde e o bem-estar. Alterações bioquímicas nestas áreas podem alterar a expressão do comportamento social em quadros patológicos como depressão, esquizofrenia, distúrbios bipolares e em transtornos do neurodesenvolvimento. Esclarecer os mecanismos envolvidos nessas alterações é essencial para o desenvolvimento de ações terapêuticas nestes quadros. Estudos recentes mostraram que a melatonina e seu agonista agomelatina podem estar envolvidos na modulação do comportamento social principalmente por meio dos receptores MT1 e MT2. Porém, pouco se sabe sobre variações no conteúdo de melatonina e na expressão destes receptores em diferentes áreas encefálicas, em quadros que apresentam alterações no comportamento social. Objetivos: Avaliar a concentração plasmática de melatonina, a expressão gênica dos receptores de melatonina MT1 e MT2 em diferentes áreas encefálicas, e a localização e quantificação das células imunorreativas para MT1 e MT2 no córtex pré-frontal de modelo animal com aumento na interação social. Métodos: Amostras de sangue e de tecido encefálico foram obtidas de ratos com aumento na interação social (grupo mais social) e ratos com interação social considerada normal para a espécie (grupo controle). Com o intuito de confirmar as diferenças no comportamento de interação social entre os dois grupos, todos os animais ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Encephalic areas such as the hippocampus, hypothalamus, cerebellum, and prefrontal cortex participate in the control of social skills fundamental to health and well-being. Biochemical changes in these areas may alter the expression of social behavior in pathological conditions such as depression, schizophrenia, bipolar disorders and neurodevelopmental disorders. Clarifying the mechanisms involved in these changes is essential for the development of therapeutic actions in these frameworks. Recent studies have shown that melatonin and its agonist agonist may be involved in the modulation of social behavior mainly through the MT1 and MT2 receptors. However, little is known about variations in the content of melatonin and the expression of these receptors in different brain areas, in pictures that present changes in social behavior. Objectives: To evaluate the plasma concentration of melatonin, the gene expression of MT1 and MT2 melatonin receptors in different brain areas, and the localization and quantification of MT1 and MT2 immunoreactive cells in the animal model prefrontal cortex with increased social interaction. Methods: Blood and brain tissue samples were obtained from rats with increased social interaction (more social group) and rats with social interaction considered normal for the species (control group). In order to confirm the differences in behavior of social interaction between the two groups, all animals underwent behavioral evaluation. Plasma mela... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

El objetivo de este trabajo es estudiar la influencia de distintos niveles de actividad pineal sobre la inducción y el crecimiento de tumores mamarios hormonodependientes. El aumento de la actividad pineal obtenido por asociación de ceguera con bulbectomía olfatoria, subnutrición o exposición a bajas temperaturas produjo: a) descenso de la incidencia tumoral y aumento del tiempo de latencia de aparición de los tumores; b) descenso en el número de tumores y en la superficie tumoral; c) descenso de la concentración de receptores estrogénicos tumorales y de los niveles circulantes de estradiol; d) inhibición del crecimiento de tumores previamente inducidos. Los efectos antitumorales de la actividad pineal pueden ser explicados por acciones antiestrogénicas directas a nivel del tumor, dado que manteniendo constantes los niveles de estradiol, mediante ovariectomía y administración de estrógenos, la hiperactividad pineal indujo una marcada regresión tumoral acompañada de un descenso de la concentración de receptores estrogénicos en el tejido tumoral. / The aim of this work was to study the influence of different levels of pineal activity on the genesis and growth of hormonodependent mammary tumors. The enhancement of pineal actions by experimental manipulations like blindness+anosmia, blindness+underfeeding or blindness+cold exposure, in relation with pinealectomized animals, produced the following effects: a) a decrease in tumor incidence and an increase in the latency in the appearance of tumors; b) a decrease in tumor number and tumor size; c) a decrease in tumor estrogen receptor concentration and serum estradiol; d) an inhibition of tumors previously induced.. A pineal-induced decrease in serum estradiol levels as well as in the concentration of estrogenic receptors in tumoral tissue could be in part responsible for these pineal antitumoral actions.

En el felino doméstico, la estacionalidad ovulatoria y estral de la hembra ocurre durante los días que presentan más de 12 h luz. Sin embargo, la estacionalidad reproductiva del gato ha sido definida recientemente. El objetivo de esta tesis fue estudiar el efecto del fotoperiodo natural, el manejo lumínico artificial y la administración de melatonina sobre la producción espermática en el gato doméstico. En el primer estudio se evaluó el efecto del fotoperiodo natural sobre la morfología testicular y la calidad espermática epididimal. Se observó que la producción espermática se mantiene constante a través del año, evidenciándose una mayor cantidad de túbulos seminíferos con estadíos avanzados de maduración y una mayor cantidad de células de Leydig y Sértoli en correspondencia con una mejor calidad espermática epididimal, durante AL, sin embargo estas variaciones fotoperiodicas no se encuentran reflejadas en la concentración de T sérica. En el segundo experimento se estudió el efecto del manejo lumínico artificial sobre la producción espermática, observándose que el gato doméstico presenta un efecto de fotorefractariedad al fotoperiodo largo, el cual produce una disminución en todos los parámetros seminales evaluados, efecto que puede revertirse sometiendo a los gatos a fotoperiodo corto, para luego cambiarlos a fotoperiodo largo y recuperar la calidad seminal observada antes de la refractariedad. En el tercer experimento se evaluó la eficacia farmacológica de implantes de melatonina en gatos para suprimir la espermatogénesis. Un implante de melatonina de 18mg, logra disminuir la calidad seminal durante 90-100d, llegando a valores semejantes a los hallados en d de fotoperiodo corto, sin que se manifiesten efectos colaterales adversos. La calidad seminal se recupera aproximadamente 250d después de colocado el implante. En conclusión, nuestros resultados demostraron que el gato posee una producción espermática estacional en relación al fotoperiodo, la cual se ve afectada por la concentración de melatonina sérica y el fenómeno de fotorefractariedad.

Os esteróides gonadais exercem importantes influências no direcionamento da resposta imune do hospedeiro frente à infecção. Alterações decorrentes de sua ausência ou reposição podem significar em uma evolução distinta de determinada parasitose. Existe também uma relação entre a produção de melatonina e o ritmo de atividade do sistema imune. A resposta imune depende de uma interação entre inúmeros hormônios que irão agir sinergicamente com distintas células imunes. O objetivo desse trabalho foi investigar o efeito dos hormônios sexuais masculinos, através da orquiectomia, e da administração oral de melatonina sobre a resposta imune de ratos Wistar machos infectados com a cepa Y de Trypanosoma cruzi, durante a fase aguda da doença de Chagas experimental. Inúmeros parâmetros foram avaliados, entre eles: parasitemia, histologia cardíaca, peso dos animais e órgãos, linfoproliferação de timócitos e esplenócitos, quantificação de macrófagos, dosagem de óxido nítrico, citometria de fluxo para avaliação das populações de CD3+CD4+ e CD3+CD8+; e ensaios imunológicos como IFN-gama, IL-2, IL-6, IL-12, IL-10. Observou-se em todos os parâmetros analisados a ação sinérgica da melatonina e da orquiectomia sobre o sistema imune, favorecendo uma resposta positiva contra o parasita na fase aguda da infecção. Dessa forma, concluiu-se que a melatonina e a redução dos hormônios sexuais masculinos exerceram um papel imunoestimulador importante, que se refletiu em uma resposta mais efetiva do hospedeiro durante a infecção experimental. / Gonadal steroids exert important influence in the host immune response during infection. Changes resulting from the absence or replacement of these hormones may represent a distinct evolution of a particular parasite. There is also a relationship between melatonin production and the rhythmic activity of the immune system. The immune response depends on the interaction of many hormones that will act synergistically with other immune cells. The objective of this research was to evaluate the effect of male sex hormones through orchiectomy, and oral administration of melatonin on the immune response of male Wistar rats infected with the Y strain of Trypanosoma cruzi, during the acute phase of experimental Chagasdisease. Several parameters were evaluated among them: quantification of blood parasites, heart histology, body weight of animals and organs, lymphoproliferation of thymocytes and splenocytes, quantification of peritoneal macrophages, nitric oxide concentration, alterations in CD3+CD4+ and CD3+CD8+ lymphocyte populations by flow cytometry and immunological assays, as IFN-gama, IL-2, IL-6, IL-12, IL-10. It was observed in all parameters examined the synergistic action of melatonin and orchiectomy on the immune system, promoting a positive response against the parasite in the acute phase of infection. Thus, it was concluded that melatonin and the absence of male sex hormones exerted an important immunostimulating role, which reflected a more effective hosts response during the experimental infection.

O sistema imune do hospedeiro acometido pela doença de Chagas tem sido alvo de importantes pesquisas que podem favorecer avanços no entendimento dos mecanismos patogênicos relacionados à doença. No presente estudo, investigamos possíveis ações benéficas provenientes de efeitos anti-inflamatórios e antioxidantes da associação terapêutica (melatonina/meloxicam) sobre a cardiomiopatia chagásica crônica. Foram analisadas citocinas e outros mediadores envolvidos no processo inflamatório característico da infecção. Além disso, níveis plasmáticos de Creatina Fosfoquinase MB (CK-MB), número de focos inflamatórios no tecido cardíaco e análise do peso relativo do coração foram avaliados como fatores preditivos da redução dos danos no miocárdio após os diferentes tratamentos. Como modelo experimental, foram utilizados ratos wistar infectados pela cepa Y de T. cruzi e tratados ou não com melatonina, meloxicam, ou associação de ambos. As células inflamatórias e o parasitismo tecidual cardíaco foram avaliados por meio de técnica histológica. A técnica ELISA foi utilizada para detecção e quantificação de citocinas pró-inflamatórias e modulatórias no miocárdio e nos soros dos animais experimentais. Também foram investigados os níveis de nitrito produzidos por macrófagos e por células cardíacas dos grupos experimentais pela reação de Griess. Os parâmetros foram investigados durante a fase: crônica (90, 120 e 180) dias após a infecção. O estudo poderá contribuir para um melhor entendimento das respostas imunológicas anti-T. cruzi, bem como da patogenia da disfunção cardíaca chagásica crônica. / The host immune system affected by Chagas disease has been the subject of important research that can promote advances in the understanding the pathogenic mechanisms related to the disease. In the present study, it was investigated the possible beneficial actions of the anti-inflammatory and antioxidant combination therapy (melatonin / meloxicam) on chronic Chagas cardiomyopathy. Some cytokines and other mediators involved in the inflammatory process characteristic of infection were analyzed. In addition, plasma levels of creatine phosphokinase MB (CK-MB), number of inflammatory foci in the cardiac tissue and analysis of the relative weight of the heart were evaluated as predictors of damage reduction in the myocardium after different treatments. As experimental model, we used Wistar rats infected with the Y strain of T. cruzi. Some groups were untreated and others treated with melatonin, meloxicam, or combination of both. Inflammatory cells and heart tissue parasitism were evaluated by histological technique. Some pro-inflammatory and modulatory cytokines were quantified by ELISA technique in the myocardium and serum from experimental animals. The production of nitrite by macrophages and cardiac cells of the experimental groups was also investigated through Griess reaction. The parameters were observed during the chronic stage: (90, 120, and 180) days after infection. The study may contribute to a better understanding of the anti-T. cruzi immunological responses, as well as the pathogenesis of chronic Chagas heart dysfunction.

Submitted by GABRIELA MELLONI ZUCULO null (gabriela.zuculo@gmail.com) on 2016-05-11T20:23:14Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO DEFESA GABRIELA ZUCULO PRONTO.pdf: 2423369 bytes, checksum: 1518ae3189c9a9ce35d3608fa0a5a980 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-13T16:28:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 zuculo_gm_me_mar.pdf: 2423369 bytes, checksum: 1518ae3189c9a9ce35d3608fa0a5a980 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-13T16:28:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 zuculo_gm_me_mar.pdf: 2423369 bytes, checksum: 1518ae3189c9a9ce35d3608fa0a5a980 (MD5) Previous issue date: 2016-04-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As características comuns ao quadro do Transtorno do Espectro do Autismo (TEA) destacadas pelo DSM-5 são: déficit de comunicação, dificuldade em fazer amizades ou se relacionar, dependência de rotina, resistência a mudanças e obsessão por itens inapropriados. Tais comportamentos podem ser observados desde a infância, porém com variações em cada indivíduo, o que levou o TEA a ser considerado um “continuum” que varia de menos comprometido (leve) a muito comprometido (grave). Dentre a complexa sintomatologia do TEA nos diferentes graus destaca-se a alta prevalência de distúrbios de sono, com influência negativa nas alterações comportamentais, instabilidade de humor, déficits nas funções neurocognitivas, incluindo memória, atenção, criatividade verbal, flexibilidade cognitiva e raciocínio abstrato. Como possível causa dos distúrbios de sono nessa população, está o déficit na produção de melatonina, hormônio que tem dentre suas funções a modulação da qualidade do sono. Com o intuito de fornecer dados para futuros tratamentos visando à melhora da qualidade de vida de indivíduos com TEA, esse estudo teve como objetivo investigar parâmetros de ritmo sono-vigília, aspectos comportamentais e de fluência verbal, antes e após o uso de melatonina exógena em indivíduos com TEA leve. Indivíduos com TEA leve de ambos os gêneros, de 7 a 18 anos, foram avaliados por meio da Escala de sono para crianças (EDSC), actigrafia, Child Behavior Checklist (CBCL) e Teste de fluência verbal fonêmica antes e após o uso oral de melatonina (3mg). A análise estatística descritiva foi feita a partir da média e erro padrão da média ou do percentual nos diferentes parâmetros e a análise estatística inferencial foi feita a partir do teste Anova com o teste de Tukey (pós-teste) e o teste de correlação de Spearman. Os resultados mostraram que 55,5% dos participantes com TEA leve apresentam indicativo de ao menos um distúrbio de sono, sendo os maiores percentuais encontrados em distúrbios de hiperidrose de sono, distúrbios respiratórios de sono e distúrbios de início e manutenção de sono. O grupo que recebeu melatonina apresentou os menores percentuais de distúrbios de sono com exceção do distúrbio de hiperidrose do sono. A análise da actigrafia mostrou que: o grupo TEA leve melatonina apresentou maior tempo total de sono em comparação aos outros grupos. Houve divergência sobre o ritmo atividade-repouso entre os parâmetros de fragmentação e amplitude do ritmo, sendo encontrado que o grupo TEA leve melatonina apresentou: ritmo menos fragmentado segundo o Aczcm e o IVm; e maior amplitude de ritmo segundo RAd e menor amplitude de ritmo segundo Sumpim. Os resultados do inventário de comportamento indicaram que as crianças com TEA leve apresentam os maiores escores classificados como clínico em problemas de pensamento, ansiedade, retraimento, comportamentos internalizantes e comportamentos externalizantes. O grupo que recebeu melatonina apresentou menores percentuais de escores classificados como clínico pelo inventário CBCL. A média de acertos no teste de fluência verbal fonêmica no grupo TEA leve foi de 13,9 ± 1,6. Quando separado por letras, o resultado foi P= 5,4 ± 0,7, T= 4,3 ± 0,5, L= 4,6 ± 0,6. Houve correlação entre os distúrbios totais de sono e os problemas somáticos de comportamento apresentados pelo grupo TEA leve. Estes dados mostram que crianças com TEA leve apresentam alta incidência de distúrbios de sono assim como no TEA sem especificação de grau, porém em menor escala. Estes distúrbios afetam aspectos comportamentais destas crianças e o tratamento com melatonina pode levar a melhora deste quadro. A fluência verbal de crianças com TEA grau leve é similar a de crianças com desenvolvimento típico. / The features common to the ASD highlighted by the DSM-5 are: communication deficit, difficulty making friends or relating, routine dependence, resistance to change, inappropriate items obsession. Such behavior can be verified since childhood, but with individual variations, which led the ASD to be considered as a "continuum" ranging from less committed (mild) to very committed (serious). Among the complex symptoms of ASD there is the high prevalence of sleep disorders, with a negative influence on behavioral changes, mood instability, deficits in neurocognitive functions including memory, attention, verbal creativity, cognitive flexibility and abstract reasoning. As a possible cause of sleep disorders in this population is the deficit of the melatonin production, hormone that modulates the sleep quality. In order to collaborate with future treatments that improving the life quality of ASD individuals, this study aimed to investigate parameters of sleep wake rhythm, behavior and verbal fluency before and after exogenous melatonin use in mild ASD individuals. For this, mild ASD individuals of both genders, 7-18 years were assessed by Sleep Disturbance Scale for Children (SDSC), actigraphy, Child Behavior Checklist (CBCL) and phonemic verbal fluency test before and after oral melatonin (3 mg). Descriptive statistical analysis was analyzed by mean and standard error or by percentage of the different parameters and inferential statistical analysis was performed by ANOVA with Tukey test (post-test) and Spearman correlation test. The results showed that 55,5% of mild ASD participants showed at least one sleep disorder, with the highest percentages found in sleep hyperhidrosis, sleep-breathing disorders and disorders of initiating and maintaining sleep. The group receiving melatonin had the lowest percentage of sleep disorders with the exception of sleep hyperhidrosis disorder. The actigraphy showed that: the mild ASD melatonin group showed higher total time of sleep than other groups. There was disagreement about between fragmentation parameters and amplitude of the activity-rest rhythm, since was found that the group of mild ASD melatonin showed: less fragmented rhythm according to Aczcm and IVm; and greater amplitude following Rad and lower amplitude rhythm following Sumpim. The results of behavior indicated that children with mild ASD have the high scores classified as clinical problems in thinking, anxiety, withdrawal, internalizing behaviors and externalizing behaviors. The group receiving melatonin had lower percentages of scores classified as clinical CBCL inventory. The mean score on the verbal fluency test in the group of mild ASD was 13,9 ± 1,6. When separated by letter, the result was P= 5,4 ± 0,7, T= 4,3 ± 0,5, L= 4,6 ± 0,6. There was a correlation between total sleep disorders and somatic behavior problems presented by mild ASD group. These data show that children with mild ASD have a high incidence of sleep disorders as well as in the ASD level without specification, but to a lesser extent. These disorders affect behavioral aspects of these children and the treatment with melatonin can improve of the clinical condition. Verbal fluency of children with ASD mild is similar to typically developing children.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-12-04T20:41:48Z No. of bitstreams: 1 KayoDiogenesDeAzevedoSilva_DISSERT.pdf: 2312119 bytes, checksum: 0a5f0d4a0645de7bdb4ab990bbb4f59d (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-12-07T20:45:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KayoDiogenesDeAzevedoSilva_DISSERT.pdf: 2312119 bytes, checksum: 0a5f0d4a0645de7bdb4ab990bbb4f59d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-07T20:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KayoDiogenesDeAzevedoSilva_DISSERT.pdf: 2312119 bytes, checksum: 0a5f0d4a0645de7bdb4ab990bbb4f59d (MD5) Previous issue date: 2017-07-31 / A doen?a de Parkinson (DP) ? uma patologia neurodegenerativa que acomete principalmente indiv?duos do sexo masculino com o avan?ar da idade. A DP se caracteriza por diversos sintomas motores como tremores, bradicinesia, rigidez e altera??es posturais. Al?m destes, sintomas cognitivos como d?ficits de aten??o e mem?ria, dem?ncia e altera??es de humor tamb?m est?o presentes. ? poss?vel perceber marcada mudan?a na arquitetura do sono de pacientes com DP. O horm?nio melatonina sintetizado principalmente pela gl?ndula pineal localizada no Epit?lamo ? considerado um dos horm?nios que induzem a fase de sono dos organismos. Sua a??o ocorre ap?s se ligar a receptores espec?ficos, MT1 e MT2. No presente estudo foram utilizados 15 ratos machos de meia idade (10 meses) da esp?cie Wistar, divididos em dois grupos denominados de Controle (CTR) e Reserpina (RES). Esses animais foram submetidos a um protocolo cr?nico de 20 inje??es de reserpina, com o intuito de criar sintomatologias semelhantes a DP. Durante o protocolo experimental os animais foram avaliados atrav?s de teste de catalepsia. Com o fim do tratamento os animais foram sacrificados e submetidos a procedimento imunistoquimico para identifica??o dos receptores MT1 e MT2 em 5 ?reas do sistema nervoso central relacionadas diretamente com o ciclo do sono e com sintomas mais evidentes da DP, sendo elas, NE, NSQ, VLPO, SN e ZSPV. Nossos resultados mostraram que durante o per?odo de tratamento os animais do grupo reserpina apresentaram consider?vel e progressivo d?ficits motores que se acentuaram nos dias sete, oito, nove e dez de inje??es. Nossas analises imunoistoqu?micas mostraram que ocorre significativa redu??o da express?o de receptores de melatonina nos animais reserpina em todos os n?cleos avaliados, entretanto, novos estudos s?o necess?rios para uma melhor compreens?o do real motivo dessa diminui??o de express?o de receptores e se esta diminui??o tem efeito significativo nas altera??es do sono verificadas nos pacientes com DP. / Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disorder that mainly affects males with advancing age. PD is characterized by several motor symptoms such as tremors, bradykinesia, stiffness and postural changes. In addition to these, cognitive symptoms such as attention and memory deficits, dementia and mood changes are also present. It is also possible to notice a marked change in the sleep architecture of patients with PD. The hormone melatonin synthesized mainly by the pineal gland located in the thalamus is considered one of the hormones that induce the sleep phase of the organisms. Its action occurs after binding to specific receptors, MT1 and MT2. In the present study, 15 male Wistar rats (10 months) were divided into two groups called Control (CTR) and Reserpine (RES). These animals were submitted to a chronic protocol of 20 injections of reserpine, in order to create symptoms similar to PD. During the experimental protocol the animals were evaluated by catalepsy test. At the end of the treatment the animals were sacrificed and submitted to an immunohistochemical procedure to identify the MT1 and MT2 receptors in 5 areas of the central nervous system related directly to the sleep cycle and with more evident symptoms of PD, VLPO, SN and ZSPV. Our results showed that during the period of treatment the animals of the reserpine group presented a considerable and progressive motor deficit that were accentuated on days seven, eight, nine and ten of injections. Our immunohistochemical analyzes have shown that there is a significant reduction in the expression of melatonin receptors in the reserpine animals in all evaluated nuclei, however, new studies are necessary to better understand the real reason for this decrease in receptor expression and whether this decrease has a significant effect on Observed in patients with PD.

Orientador: Debora Ap. Pires de Campos Zuccari / Co-orientador: Alicia Viloria-Petit / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Ana Paula Girol / Resumo: O desenvolvimento da carcinogênese mamária envolve a neovascularização, desregulação da diferenciação e apoptose nas células neoplásicas e no microambiente que estão inseridas. Está estabelecido que tais efeitos podem ser controlados pela melatonina, um hormônio produzido pela glândula pineal, que tem ação oncostática em células tumorais e modula a expressão de interleucinas (ILs). A IL-25, também conhecida como IL-17E, é uma citocina ativa em processos inflamatórios, capaz de induzir a apoptose em células tumorais devido à expressão diferencial do seu receptor (IL-17RB). Sabe-se que a IL-17B compete com a IL-25 pela ligação ao receptor IL-17RB em células tumorais, promovendo a tumorigênese. O objetivo deste estudo foi verificar a ação da melatonina e da sinalização IL-25/IL-17B no processo de apoptose e angiogênese em células tumorais mamárias. Linhagens tumorais mamárias humanas, metastática (MDA-MB-231) e não-metastática (MCF-7) e caninas, metastática (CF-41) e não-metastática (CMT-U229), e a linhagem epitelial mamária humana não tumorigênica (MCF-10A) foram cultivadas em monocamada e em estruturas tridimensionais em matriz extracelular ricas em laminina e tratadas por 48 horas com melatonina, IL-25, siIL-17B e os três tratamentos combinados. A viabilidade celular foi mensurada pelo ensaio de MTT, a expressão gênica e proteica por qRT-PCR e imunofluorescência, respectivamente. Além disso, uma análise quantitativa de proteínas presentes na via apoptótica foi realizada após o tratamento com melatonina nas células MDA-MB-231 e CF-41. Os tratamentos com 1 mM de melatonina e 1 ng/mL de IL-25 reduziram significativamente a viabilidade das linhagens tumorais humanas (p < 0,05) e não alteraram a viabilidade celular da linhagem MCF-10A (p > 0,05). Nas linhagens caninas, apenas 1 mM de melatonina reduziu significativamente a viabilidade celular (p < 0,05). Todos os três tratamentos independentes... / Abstract: The development of mammary carcinogenesis involves neovascularization, deregulation of differentiation and apoptosis in tumor cells and the microenvironment. It is established that such effects may be controlled by melatonin, a hormone produced by the pineal gland that has oncostatic action on tumor cells and modulates interleukins (ILs) expression. IL-25, also known as IL-17E, is an active cytokine in inflammatory processes, capable of inducing apoptosis in tumor cells because of differential expression of its receptor (IL- 17RB). It is known that IL-17B competes with IL-25 for binding to receptor IL- 17RB on tumor cells, promoting tumorigenesis. The aim of this study was to investigate the action of melatonin and IL-25/IL-17B signaling in apoptosis and angiogenesis in breast tumor cells. Metastatic (MDA-MB-231 and CF-41), nonmetastatic (MCF-7 and CMT-U229) human and canine mammary tumor cell lines and human non-tumorigenic mammary epithelial cells (MCF-10A) were cultured in monolayer and three-dimensional structures on extracellular matrix rich in laminin (ECM) and treated for 48 hours with melatonin, IL-25, siIL-17B and the three combination therapies. Cell viability was measured by MTT assay, gene and protein expression by qRT-PCR and immunofluorescence, respectively. Also, a quantitative analysis of proteins present in the apoptotic pathway was performed after treatment with melatonin in the MDA-MB-231 and CF-41 cells. The treatment with 1 mM melatonin and 1 ng/mL of IL-25 significantly reduced the viability of human tumor cell lines (p < 0.05) and did not alter the cell viability of MCF-10A cells (p > 0.05). In canine cell lines, only 1 mM melatonin significantly reduced cell viability (p < 0.05). All three independent and combined treatments were able to significantly increase the protein expression of cleaved caspase-3 in all the tumor cells in monolayer and 3D structures (p < 0.05), which confirms the pro-apoptotic potential of ... / Doutor

Submitted by Fernando Marani (ef_marani@hotmail.com) on 2018-07-05T13:49:37Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado_Fernando Marani versão final.pdf: 2309540 bytes, checksum: 52b048c82d6c31c4bcd9d2d5decb2623 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-07-06T12:19:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marani_f_me_araca_int.pdf: 2309540 bytes, checksum: 52b048c82d6c31c4bcd9d2d5decb2623 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-06T12:19:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marani_f_me_araca_int.pdf: 2309540 bytes, checksum: 52b048c82d6c31c4bcd9d2d5decb2623 (MD5) Previous issue date: 2018-06-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Pesquisas têm sido realizadas para investigar a relação entre inflamações crônicas na cavidade oral e efeitos deletérios em diversos sistemas do organismo. A doença periodontal (DP) caracterizada como uma infecção e inflamação oral está associada à produção de citocinas inflamatórias, tais como fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α) e interleucina-6 (IL-6), as quais aumentam a expressão dos osteoclastos, levando a um aumento da reabsorção óssea alveolar. Além da influência destas citocinas na perda óssea alveolar, evidências científicas apontam que a falta do hormônio melatonina também pode contribuir para uma maior reabsorção óssea. A melatonina é um poderoso regulador da homeostase de diversos tecidos. Assim, este hormônio pode ter um importante papel na proteção de tecidos lesionados, podendo ser visto, como um possível coadjuvante no tratamento de doenças da cavidade oral devido principalmente sua ação antioxidante e imunomoduladora. Portanto, o objetivo deste estudo foi verificar o efeito da suplementação da melatonina na reabsorção óssea alveolar em ratos com doença periodontal e pinealectomizados (PNX), avaliando: 1) concentrações plasmáticas de TNF-α e IL-6 pelo método de ELISA; 2) marcadores ósseos como a fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e Osteocalcina (OCN) por meio de técnica imunoistoquímica; 3) histomorfometria da região comprometida pela DP pelo escaneamento no microtomógrafo em 3D (Micro-CT) (modelo 1172 SkyScan®). Para tanto, oitenta (80) ratos Wistar machos com 40 dias de idade foram distribuídos aleatoriamente em 8 grupos (n=10): controle (CN), doença periodontal (DP), pinealectomizados (PNX), pinealectomizados com doença periodontal (PNXDP), controle com melatonina (CNMEL), doença periodontal com melatonina (DPMEL), pinealectomizados com melatonina (PNXMEL) e pinealectomizados com doença periodontal e com melatonina (PNXDPMEL). A DP foi induzida após 20 dias da pinealectomia por ligadura com fio de seda ao redor dos primeiros molares mandibulares. Após 28 dias da indução da DP, os experimentos foram realizados. A análise estatística foi realizada por análise de variância Three-way (ANOVA), seguida pelo teste de Tukey e para as análises de imunoistoquímicas pelo teste estatístico não paramétrico de Kruskal Wallis. O nível de significância adotado foi de 5% (alfa=5%). Os resultados evidenciaram um aumento de mediador pró-inflamatório TNF-α tanto nos animais com DP como PNX. Apenas os grupos com DP (DP e PNXDP) apresentaram maior reabsorção óssea alveolar devido uma maior atividade dos osteoclastos comparado a dos osteoblastos evidenciado pelo aumento do marcador de reabsorção, fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP), e diminuição do marcador de formação, osteocalcina (OCN) como também pelos resultados histomorfométricos. Por outro lado, os animais tratados com melatonina não apresentaram alteração na concentração plasmática de TNF-α e perda óssea alveolar. Com base nos resultados do presente estudo, verificou-se que os animais pinealectomizados e com DP apresentaram elevada concentração de TNF-α, mas a perda óssea alveolar ocorreu apenas nos animais com DP. A pinealectomia não promoveu alteração óssea como também não agravou esse parâmetro em animais com DP. A suplementação com melatonina promoveu diminuição de TNF-α nos animais pinealectomizados e com DP. Em todos os grupos com DP a melatonina protegeu-os da reabsorção óssea alveolar. Portanto, estes resultados demonstram que a melatonina é eficiente no controle tanto da reabsorção óssea alveolar como da concentração plasmática de TNF-α em ratos com DP e PNX, demonstrando sua importância local e sistêmica. / ABSTRACT Researches has been conducted to investigate the relationship between chronic inflammation in the oral cavity and deleterious effects on various systems of the body. Periodontal disease (PD) characterized as an infection and oral inflammation is associated with the production of inflammatory cytokines, such as tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6), which increase the expression of osteoclasts, leading to an increase in alveolar bone resorption. In addition to the influence of these cytokines on alveolar bone loss, scientific evidence indicates that the lack of the hormone melatonin may also contribute to a greater bone resorption. Melatonin is a powerful regulator of homeostasis of various tissues. Thus, this hormone may have an important role in the protection of injured tissues, and can be seen as a possible adjuvant in the treatment of diseases of the oral cavity mainly due to its antioxidant and immunomodulatory action. Therefore, the objective of this study was to verify the effect of melatonin supplementation on alveolar bone resorption in rats with periodontal disease and pinealectomized (PNX), evaluating: 1) plasma concentrations of TNF-α and IL-6 by the ELISA method; 2) bone markers such as tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) and Osteocalcin (OCN) by immunohistochemical technique; 3) histomorphometry of the region compromised by PD by scanning in the microtomograph in 3D (Micro-CT) (model 1172 SkyScan®). Therefore, eighty (80) Wistar male rats of 40 days old were randomly distributed into 8 groups (n= 10): control (CN), periodontal disease (PD), pinealectomized (PNX) pinealectomized with periodontal disease (PNXPD), control with melatonin (CNMEL), periodontal disease with melatonin (PDMEL) pinealectomized with melatonin (PNXMEL) and pinealectomized with periodontal disease and melatonin (PNXPDMEL). PD was induced after 20 days of pinealectomy by ligation with silk thread around the first mandibular molars. After 28 days of induction of DP, the experiments were performed. Statistical analysis was performed by Three-way analysis of variance (ANOVA), followed by the Tukey's test and for the immunohistochemical analyzes by the non-parametric statistical test of Kruskal Wallis. The level of significance was 5% (alpha = 5%). The results evidenced an increase of proinflammatory mediator TNF-α in both PD and PNX animals. Only the groups with PD (PD and PNXPD) presented greater alveolar bone resorption due to a higer activity of the osteoclasts compared to the osteoblasts evidenced by the increase of the resorption marker, tartrate resistant acid phosphatase (TRAP), and decrease of the formation marker osteocalcin (OCN) as well as histomorphometric results. On the other hand, in animals treated with melatonin there was no change in plasma TNF-α concentration and alveolar bone loss. Based on the results of the present study, pinealectomized and PD animals showed high concentration of TNF-α, but alveolar bone loss occurred only in animals with PD. Pinealectomy did not promote bone alteration, nor did it aggravate this parameter in animals with PD. Supplementation with melatonin promoted decreased TNF-α in pinealectomized and PD animals. In all groups with PD, melatonin protected them from alveolar bone resorption. Therefore, these results demonstrate that melatonin is efficient in controlling both alveolar bone resorption and plasma TNF-α concentration in rats with PD and PNX, demonstrating its local and systemic importance.

Cenário clínico: A síndrome dolorosa miofascial (SDM), causa comum de dor musculoesquelética, pode ser incapacitante e desafiadora terapeuticamente, devido à ineficácia dos tratamentos convencionais para dor. Intervenções terapêuticas alternativas precisam ser pesquisadas para alcançar vias do processo de doença não contempladas com a terapêutica clássica. Dentre estas, o uso da melatonina, com efeitos cronobiótico, ansiolítico e analgésico, tem se apresentado como uma opção terapêutica atrativa no tratamento da SDM, que cursa com alterações de sono, dor, sintomas depressivos e de ansiedade. Objetivos: Avaliar a eficácia da melatonina exógena na redução da dor, no limiar de dor à pressão (LDP) e na qualidade de sono de pacientes com SDM facial. Métodos e Resultados: Um estudo randomizado, controlado foi realizado em 45 mulheres com dor miofascial, com idades entre 18 e 40 anos, segundo critérios Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorder (RDC/TMD). A eficácia da melatonina oral foi avaliada na redução da dor e melhora tanto do limiar de dor a pressão (LDP) como da qualidade do sono. Os participantes foram randomizados para receber 5 mg / dia de melatonina, 5 mg / dia ciclobenzaprina, ou placebo durante um período de quatro semanas. O efeito absoluto das intervenções, apresentado como ES (tamanho do efeito) sobre a dor: placebo versus melatonina foi de 2,08 (1,17-2,97) e de ciclobenzaprina vs placebo foi de -1,25 (0,45-2,06)]. O número de pacientes necessários para tratar (NNT) para evitar a dor moderada a intensa foi 3 (95% CI, 2-4) e 18 (95% IC, 9 a a) nos grupos de melatonina e de ciclobenzaprina, respectivamente, em relação ao placebo. O ES no LDP melatonina vs placebo e ciclobenzaprina vs placebo foi de 2,72 (1,69-3,75) e 1,01 (0,23-1,79), respectivamente. O ES na escala visual analógica de Qualidade de Sono (VASQS) utilizada para avaliar a forma como as pacientes se sentiram ao acordar, durante o período de tratamento, foi nos grupos melatonina versus placebo de 2,47 (1,49-3,45) e 1,01 (0,23-1,79), respectivamente. Conclusão: Melatonina foi mais eficaz do que placebo para melhorar a dor miofascial crônica facial e ambos os tratamentos foram mais eficazes do que placebo para melhorar o LDP e a qualidade de sono. / Background: The Myofascial Pain Syndrome (SDM), a common cause of musculoskeletal pain, can course with disability and can be a therapeutical challenge, due to the ineffectiveness of conventional treatments for pain. Alternative therapeutic interventions must be researched to achieve the process of the disease process that in not dealt with the classical therapy. Among these, the use of melatonin, which takes effect chronobiotic, anxiolytic and analgesic, has been presented as an attractive therapeutic option in the treatment of SDM, which leads to sleep disturbances, pain, anxiety and depressive symptoms. Objectives: Evaluate the efficacy of exogenous melatonin in reducing pain, pain pressure threshold (PPT) and the sleep quality of patients with chronic myofascial face pain. Methods and Results: A randomized, controlled trial was conducted with 45 females, aged 18 to 40 years who presented myofascial pain according to the Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorder (RDC/TMD) guidelines. The efficacy of oral melatonin was evaluated in reducing pain and improving both the pain pressure threshold (PPT) and sleep quality. Participants were randomized to receive 5 mg/day melatonin, 5 mg/day cyclobenzaprine, or a placebo during a four-week period. The absolute effect of interventions, presented as ES (effect size) on pain for melatonin vs. placebo was 2.08 (1.17 to 2.97) and for cyclobenzaprine vs. placebo -1.25 (0.45 to 2.06)], respectively. The Number of Patients Needed to be Treated (NNT) to prevent moderate to intense pain was 3 (95% CI, 2 to 4) and 18 (95% CI, 9 to ) in the melatonin and cyclobenzaprine groups, respectively compared to the placebo. The ES on the PPT for melatonin vs. placebo and cyclobenzaprine vs. placebo was 2.72 (1.69 to 3.75) and 1.01 (0.23 to 1.79), respectively. The ES on the Visual Analog Sleep Quality Scale (VASQS) scores used to assess how they felt when they woke up during the treatment period for the melatonin vs. placebo were 2.47 (1.49 to 3.45) and 1.01 (0.23 to 1.79), respectively. Conclusion: Melatonin was more effective than placebo for improving chronic myofascial face pain and both treatments were more effective than placebo for improving sleep quality and the PPT.