Submitted by TIALFI BERGAMIN DE CASTRO null (tialfi@gmail.com) on 2017-11-30T15:32:56Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Tialfi Bergamin de Castro.pdf: 8276489 bytes, checksum: bc3c0e56c4cc4526676239eef04d3d30 (MD5) / Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: - Inserir a página com a ficha catalográfica, que é um item obrigatório . Agradecemos a compreensão. on 2017-11-30T18:53:31Z (GMT) / Submitted by TIALFI BERGAMIN DE CASTRO null (tialfi@gmail.com) on 2017-12-04T10:30:00Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Tialfi Bergamin de Castro.pdf: 17135465 bytes, checksum: 7e68f8d98ca4ec7d64be1f324b5e48d7 (MD5) / Submitted by TIALFI BERGAMIN DE CASTRO null (tialfi@gmail.com) on 2017-12-04T14:43:24Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Tialfi Bergamin de Castro.pdf: 17135465 bytes, checksum: 7e68f8d98ca4ec7d64be1f324b5e48d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2017-12-04T16:10:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 castro_tb_dr_sjrp.pdf: 17135465 bytes, checksum: 7e68f8d98ca4ec7d64be1f324b5e48d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-04T16:10:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 castro_tb_dr_sjrp.pdf: 17135465 bytes, checksum: 7e68f8d98ca4ec7d64be1f324b5e48d7 (MD5) Previous issue date: 2017-10-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O câncer de mama é a principal causa de mortes relacionadas ao câncer em mulheres e pesquisas têm sido focadas em identificar e validar biomarcadores que podem ser utilizados para confirmar o diagnóstico e determinar o prognóstico. Mudanças no ritmo circadiano podem contribuir para o desenvolvimento do câncer e sendo assim, a melatonina, um hormônio sintetizado pela glândula pineal à noite, na ausência de luz e seus metabolitos AFMK e AMK são sugeridos como potenciais biomarcadores. A melatonina pode atuar através do receptor MT1 regulando cinases e a expressão de genes específicos relacionados a proliferação, angiogênese, diferenciação celular e transporte de glicose. A expressão elevada de GLUT1 (Glucose Transporter-1) está associada ao prognóstico ruim no câncer. Os objetivos deste estudo foram comparar os níveis de melatonina, AFMK e AMK em mulheres recentemente diagnosticadas com câncer de mama, mulheres em quimioterapia adjuvante, enfermeiras que trabalham à noite em comparação com mulheres saudáveis e hábitos normais e avaliou-se a expressão do receptor MT1 e GLUT1 em tumores de mama e correlacionou com os subtipos moleculares, características patológicas e prognóstico. Foi coletado sangue de 53 mulheres com câncer de mama sendo 47 sem tratamento e 6 em quimioterapia adjuvante, 19 mulheres saudáveis sendo 1 O enfermeiras de turno noturno e 9 mulheres de hábitos normais. Os compostos foram quantificados por espectrometria de massas. Para a expressão de MT1 e GLUT1 foi realizada imunohistoquímica em 42 tumores de mama. Os resultados mostraram que mulheres com câncer de mama tiveram níveis menores de melatonina em comparação com mulheres de hábitos normais (p< 0.01 ), níveis ainda mais baixos em enfermeiras que trabalham no período noturno e em pacientes em quimioterapia adjuvante (p<0.01). Não houve diferença significativa nos níveis de AFMK e AMK entre os grupos (p>0.05). Além disso, pacientes com metástase apresentaram níveis elevados de melatonina e AFMK (p=0.02 e p=0.01, respectivamente) e altos níveis de AFMK estavam presentes quando linfonodos estavam acometidos (p=0.04), pacientes com tumores maiores que 20mm e que dormem com luz à noite (p=0.02 e p=0.007, respectivamente). Na análise imunohistoquímica, alta expressão do MT1 foi associada ao subtipo Luminal A, melhor prognóstico (p<0.05) e em tumores RE+ (p=0.002), enquanto que a expressão elevada de GLUT1 foi associada ao triplo­negativo, pior prognóstico (p<0.05), tumores maiores que 20mm 9p=0.004) e baixa em tumores RE+ (p=0.003). Em conclusão, nossos resultados mostram menores níveis de melatonina em pacientes com câncer de mama e apontam para o benefício da suplementação de melatonina como proteção para mulheres que trabalham à noite o que poderia reduzir o risco de desenvolvimento de câncer de mama. Os resultados da imunohistoquímica indicam que o MT1 e o GLUT1 podem ser utilizados como marcadores prognósticos e são potenciais alvos para o tratamento do câncer de mama. De acordo com os resultados pode­se concluir que a quebra do ciclo circadiano e, portanto, alterações nos níveis de melatonina e a expressão de MT1 e GLUT1 podem estar relacionadas com o risco de desenvolvimento e prognóstico do câncer de mama. / Breast cancer is the Jeading cause of cancer-related deaths in women and researches has been focused on identify and validate biomarkers that can be used to confirm the diagnosis and determine the prognosis. Changes in circadian rhythm may contribute to the development of cancer and thus melatonin, a hormone synthesized by the pineal gland at night, in the absence of light and its metabolites AFMK and AMK are suggested as potential biomarkers. Melatonin can act through the MT1 receptor by regulating kinases and the expression of specific genes related to proliferation, angiogenesis, ce/1 differentiation and glucose transport. High GLUT1 (Glucose Transporter-1) expression is associated with poor prognosis in cancer. The objectives of this study were to compare the leveis of melatonin, AFMK and AMK in women newly diagnosed with breast cancer, women on adjuvant chemotherapy, health nurses which work at night compared to healthy women and normal habits and the expression of MT1 receptor and GLUT1 in breast tumors and correlated with molecular subtypes, pathological features and prognosis. Blood from 53 women with breast cancer was colletcted, 47 of them without treatment and 6 in adjuvant chemotherapy, 19 healthy women, 1 O of them night shift nurses and 9 women of normal habits. Compounds were quantified by mass spectrometry. For the expression of MT1 and GLUT1, immunohistochemistry was performed in 42 breast tumors. The results showed that women with breast cancer had lower leveis of melatonin compared to normal women (p <0.01), even Jower leveis in nurses working at night and in adjuvant chemotherapy (p <0.01). There was no significant difference in AFMK and AMK leveis between groups (p> 0.05). ln addition, patients with metastasis had high leveis of melatonin and AFMK (p = 0.02 and p = 0.01, respectively) and high leveis of AFMK were present when lymph nades were affected (p = 0.04), patients with tumors larger than 20mm and who sleep with light at night (p = 0.02 and p = 0.007, respectively). ln the immunohistochemical analysis, high MT1 expression was associated with the Luminal A subtype, with a better prognosis (p <O.OS) and in ER + tumors (p = 0.002), whereas high GLUT1 expression was associated with tripie negative, worse prognosis (p<0.05), tumors greaterthan 20mm (p= 0.004) and low in ER + tumors (p = 0.003). ln conclusion, our results show Jower leveis of melatonin in breast cancer patients and point to the benefit of melatonin supplementation as protection for women who work at night which could reduce the risk of developing breast cancer. The results of immunohistochemistry indicate that MT1 and GLUT1 can be used as prognostic markers and are potential targets for the treatment of breast cancer. According to the results it can be concluded that the breakdown of the circadian cyc/e and, therefore, changes in melatonin leveis and the expression of MT1 and GLUT1 may be related to the risk of development and prognosis of breast cancer / FAPESP 2015/02935-2

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Samuel Cos Corral / Banca: Bruno Cogliati / Resumo: O câncer de mama apresenta altas taxas de incidência e mortalidade, sendo a neoplasia mais comum entre as mulheres. O rápido crescimento do tumor resulta em hipóxia no microambiente tumoral, levando a uma cascata de eventos que induzem a angiogênese e conseqüente progressão do câncer. Assim, a identificação de agentes terapêuticos que possam inibir a angiogênese é essencial para o controle da progressão tumoral. Nesse sentido, tem sido demonstrado que a administração exógena da melatonina, um hormônio naturalmente secretado pela glândula pineal, apresenta diversos efeitos oncostáticos em diferentes tipos de câncer. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a efetividade do tratamento com melatonina sobre a angiogênese do câncer de mama, em estudos in vitro e in vivo. No estudo in vitro, as linhagens de câncer de mama MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas com melatonina sob condições de hipóxia mimetizadas pelo Cloreto de Cobalto (CoCl2). A viabilidade celular foi verificada pelo ensaio MTT, a expressão do fator de transcrição induzido por hipóxia (HIF-1α) e do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF-A) foi avaliada por PCR em tempo real e imunocitoquímica. Além disso, demais proteínas envolvidas na angiogênese foram avaliadas por Protein Array. No estudo in vivo, as células MDA-MB-231 foram implantadas em camundongos nude atímicos, os quais foram tratados com melatonina (40 mg/kg) por 21 dias. O tumor foi medido semanalmente e a avaliação da angiogênese foi realizada pela técnica de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), com o radiotraçador Tc- 99m-HYNIC-VEGF-c, agente específico para os receptores de VEGF (VEGFR2/VEGF3). Além disso, as proteínas VEGFR2, VEGFR3, fator de fator de von Willebrand (vWF) e marcador de proliferação celular (Ki-67) foram avaliados no tecido tumoral por imuno-histoquímica, e demais proteínas angiogênicas por Protein Array. O estudo in ... / Abstract: Breast cancer has high rates of incidence and mortality, and it is the most common cancer among women. The rapid tumor growth results in hypoxia on tumor microenvironment, leading to a cascade of events that induce angiogenesis and subsequent cancer progression. Thus, the identification of therapeutic agents that can inhibit angiogenesis is essential for the control of tumor progression. Exogenous administration of melatonin, a hormone secreted by the pineal gland, has been shown several oncostatics effects on different types of cancers. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of melatonin treatment on angiogenesis in breast cancer, in the in vitro and in vivo studies. In the in vitro study, breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231) were treated with melatonin under cobalt chloride (CoCl2)-induced hypoxic conditions. Cell viability was measured by MTT assay, the expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor (VEGF-A) was assessed by real-time PCR and immunocytochemistry. Additionally, other proteins involved in angiogenesis were evaluated by the Protein Array. In the in vivo study, the MDA-MB-231 cells were implanted in athymic nude mice, which were treated with melatonin (40 mg/kg) for 21 days. The tumor was measured weekly and evaluation of angiogenesis was performed by single-photon emission computed tomography (SPECT) with Tc-99m-HYNIC-VEGF-c, which is specific for VEGF receptors (VEGFR2/VEGF3). Moreover, VEGFR2, VEGFR3, von Willebrand factor (vWF) and cell proliferation marker (Ki-67) were evaluated in tumor tissue by immunohistochemistry, and other angiogenic proteins by Protein Array. Results from the in vitro study showed that 1 mM of melatonin under hypoxic conditions (200 μM CoCl2) led to decreased cell viability, protein levels of HIF- 1α and gene and protein expression of VEGF-A in both cell lines (p < 0.05). Among other proteins evaluated, melatonin ... / Doutor

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Patricia Simone Leite Vilamaior / Banca: Ana Paula Girol / Banca: Patricia Matos Biselli Chicote / Banca: Wilson Araújo da Silva Junior / Resumo: As neoplasias mamárias são os tumores de maior ocorrência em mulheres no mundo. A alta incidência deste tipo tumoral deve-se a um conjunto de fatores, entre eles o uso de hormônios, como o estrógeno e a exposição a produtos químicos, entre eles o Bisfenol A (BPA). Apesar da introdução de tratamentos mais efetivos para o câncer de mama, muitas vezes ocorre recorrência e/ou crescimento do tumor, invasão e metástase. As "células-tronco tumorais" (CTTs) vem sendo estudadas em tumores humanos nos últimos anos, consideradas as responsáveis pela recorrência do tumor e resistência a terapias. Devido ao determinante papel das CTTs, é importante a identificação de fatores que controlam sua proliferação. Estudos identificaram o fator de transcrição OCT4 (octamer-binding transcription factor 4), como um dos responsáveis pela auto-renovação e manutenção da pluripotência das células-tronco. Dessa forma, o estudo de potenciais fármacos que atuem sobre esta população específica no câncer de mama tem especial interesse. A melatonina, parece apresentar efeitos oncostáticos no entanto, pouco se sabe sob sua ação terapêutica sobre as células-tronco tumorais mamárias. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da melatonina sobre a regulação do marcador de células-tronco OCT4 pelo receptor de estrógeno em células-tronco tumorais mamárias, após o tratamento com estrógeno e bisfenol A. Para o estudo, as células de câncer de mama humano MCF-7 e MDA-MB-231 foram submetidas ao cultivo... / Abstract: Breast neoplasms are the most frequent tumors in women worldwide. The high incidence of this tumor type is due to a number of factors, including the use of hormones such as estrogen and exposure to chemicals, including bisphenol A (BPA). Despite the introduction of more effective treatments for breast cancer often occurs recurrence and/or tumor growth, invasion and metastasis. Recently, it was discovered the existence of "cancer stem cells" (CSCs) in human tumors, being responsible for tumor recurrence and resistance to therapy. Due to the important role of CSCs, the identification of factors that control its proliferation is important. Studies have identified the transcription factor OCT4 (octamer-binding transcription factor 4), as the one responsible for self-renewal and maintenance of pluripotency of stem cells. Thus, it has become interesting the study of potential drugs that target this specific population in breast cancer. Melatonin, seems to have oncostatic effects, however, little is known about its therapeutic action on breast cancer stem cells. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of melatonin on the regulation of the stem cell marker, OCT4, by the estrogen receptor in breast cancer stem cells, after treatment with estrogen and bisphenol A. For the study, human breast cancer cells MCF-7 and MDA-MB-231 cells were submitted to three dimensional growth of mammospheres, representing the stem cells. The CSCs were grown in cell suspension or anchorage ... / Doutor

Orientador: Celso Koogi Sonoda / Banca: Karina Helga Leal Turcio de Carvalho / Banca: Graziela Garrido Mori Panucci / Resumo: Por promover sérios danos ao ligamento periodontal e cementoblastos, a avulsão por trauma pode levar à perda do elemento dentário em consequência de reabsorção radicular. Vários fatores locais foram estudados buscando a elaboração de um protocolo de tratamento. No entanto, poucos trabalhos contemplaram a influência de alterações sistêmicas no processo de reparo. Pessoas com hábitos noturnos podem apresentar deficiência de melatonina, um hormônio produzido principalmente pela glândula pineal, que interfere no metabolismo do tecido conjuntivo fibroso e do tecido ósseo. Logo, o objetivo desse estudo foi analisar o processo de reparo de dentes reimplantados em ratos pinealectomizados. Para isso, foram utilizados 30 ratos divididos em 3 grupos de 10 animais cada. No grupo I (CON) os animais foram submetidos à extração e reimplante imediato do incisivo central superior direito. No grupo II, os animais foram submetidos à pinealectomia (PNL) e, após 30 dias, extração e reimplante dentário imediato. No grupo III (SHAM), os animais foram submetidos à exposição da glândula pineal, porém sem a sua remoção, e após 30 dias, extração e reimplante dentário imediato. Sessenta dias após o reimplante dentário, os animais sofreram eutanásia e as peças contendo os dentes foram processadas para obtenção de cortes histológicos que foram corados por hematoxilina e eosina para análise histomorfométrica. Foi avaliada e quantificada a ocorrência de reabsorção inflamatória, reabsorção por substituição e áreas de anquilose. Os dados foram convertidos em porcentagem para análise estatística. Os resultados evidenciaram maiores índices de reabsorção radicular por substituição no grupo II em comparação aos grupos I e III (Kruskal-Wallis e Teste de Dunn, p<0,05). Conclui-se que a ausência de melatonina pode induzir um comprometimento do processo de reparo de dentes reimplantados em ratos pinealectomizados / Abstract: For causing serious damage to the cementoblasts and periodontal ligament, dental avulsion by trauma can lead to tooth loss as a result of root resorption. Several local factors were studied seeking the development of a treatment protocol. However, few studies have beheld the influence of systemic alterations in the repair process. People with nocturnal habits may have melatonin deficiency, a hormone produced mainly by the pineal gland, which interferes with the metabolism of fibrous connective tissue and bone tissue. Therefore, the aim of this study was to analyze the repair process of reimplanted teeth in pinealectomized rats. For this purpose 30 Wistar rats were divided into 3 groups of 10 animals each. In group I (CON) the animals were subjected to the extraction and immediate replantation of the right maxillary central incisor. In group II the animals underwent to pinealectomy and after 30 days the tooth was extracted and immediately reimplanted. In group III (SHAM), the animals were subjected to exposure of the pineal gland, but without removing it, and then to the tooth reimplantation. Sixty days after tooth replantation, the animals were euthanized and specimens containing the teeth were processed to obtain histological sections that were stained with hematoxylin and eosin for histomorphometric analysis. It was assessed and quantified the occurrence of inflammatory resorption, replacement resorption and areas of ankylosis. Data were converted into percentage for statistical analysis. The results showed higher rates of replacement root resorption in group II compared to groups I and III (Kruskal-Wallis and Dunn's Test, p<0.05). It was concluded that the absence of melatonin may induce an impairment of reimplanted tooth repair process in pinealectomized rats / Mestre

Orientadora: Roberta Okamoto / Coorientadora: Doris Hissako Sumida / Banca: Idelmo Rangel Garcia Júnior / Banca: Ronaldo Célio Mariano / Resumo: O presente estudo teve como objetivo investigar a interface osso / implante em ratos pinealectomizados tratados com melatonina. Métodos: 30 ratos, machos, adultos foram divididos em 3 grupos: controle (CO), pinealectomizados (PnX) e pinealectomizado com melatonina (PNXm). Após 30 dias da Pinealectomia, um implante foi instalado em cada tíbia e a eutanásia foi realizada aos 42 dias. As amostras foram submetidas a histomorfométrica (ELCOI e AON), biomecânica (de torque reverso), microtomografia e análise imunoistoquímica. Os dados quantitativos foram submetidos à análise estatística (P <0,05). Para os resultados histométricos, valores ELCOI para PNX foram menores quando comparados com PNXm (P = 0,0393), enquanto AON não mostrou diferença entre os grupos (P = 0,761). Os valores de torque reverso não mostraram diferença entre os grupos PNX e PNXm (P = 0,5000), e as interações CO vs PNXm, e CO vs PNX mostraram diferença significativa (P <0,05). Os parâmetros volumétricas BV/TV (P = 0,933); Tr.N (P = 0,933); Tb.Th (P = 0,933), Tb.Sp (P = 0,200) não apresentaram diferença estatística. A imunomarcação para OPG, RANKL, TRAP e osteocalcina mostrou similaridade entre os grupos, apesar da PNXm parece assemelhar-se às condições fisiológicas (CO). Portanto, a melatonina melhorou a remodelação óssea na região peri-implante em ratos pinealectomizados / Abstract: This study aimed to investigate the interface bone/implant in pinealectomized rats treated with melatonin. 30 rats, male, adults were divided into 3 groups: control (CO), pinealectomized (PNX) and pinealectomized with melatonin (PNXm). After 30 days of the pinealectomy, one implant was installed on each tibia and euthanasia was performed at 42 days. The samples were submitted to histometric (BIC and NB), biomechanical (reverse torque), microtomography and immunohistochemical analysis. The quantitative data were subjected to statistical analysis (P<0.05). For the histometric results, BIC values to PNX were lower when compared to PNXm (P=0.0393), whereas NB did not showed difference among the groups (P=0.761). Reverse torque did not show difference between the groups PNX and PNXm (P=0,5000), and the interactions CO vs PNXm, and CO vs PNX showed significantly difference (P<0.05). The volumetric parameters BV/TV (P=0.933); Tr.N (P=0.933); Tb.Th (P=0.933), Tb.Sp (P=0.200) did not present statistical difference. The immunolabeling for OPG, RANKL, TRAP and osteocalcin showed similarity among the groups, despite the PNXm it seems to resemble to physiological conditions (CO). Therefore, melatonin improved the bone turnover in peri-implant region in pinealectomized rats / Mestre

Orientador: Luiz Antonio Vane / Resumo: A melatonina foi isolada em 1958 e múltiplas funções desta molécula passaram a ser esclarecidas. As ações em receptores específicos de membrana, ligados à proteína G são responsáveis pelo controle do ciclo circadiano e do ritmo sazonal, no entanto a atividade como varredor dos radicais livres de oxigênio e outros mediadores do metabolismo oxidativo não são mediadas por receptores. A geração de EROS está diretamente ligada ao dano celular e tecidual, sendo a isquemia e a reperfusão (I/R), os mecanismos fisiopatológicos que mais contribuem para o desequilíbrio entre moléculas oxidantes e antioxidantes, resultando no estresse oxidativo. A insuflação da cavidade peritoneal com gás carbônico promove I/R causando desfechos deletérios ao paciente. Com o objetivo de estudar os efeitos da melatonina sobre a inflamação e o estresse oxidativo peritoneal e a expressão gênica das proteínas MTNR1A e MTNR1B entre os pacientes submetidos à laparoscopia cirúrgica, que receberam ou não a melatonina, foram randomizados 80 pacientes em 2 grupos de 40 pacientes cada para receber melatonina (GMEL) - 20mg via oral 12 horas antes e 1 hora antes do procedimento, respectivamente - e 40 pacientes para receber placebo (GPLA) - 12 horas antes e 1 hora antes do procedimento, respectivamente. Amostras de peritônio parietal foram coletadas 10 minutos após o início do pneumoperitônio e 3 minutos após o final do mesmo. A morfologia tecidual foi avaliada no exame histopatológico de lâminas coradas com hematox... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Melatonin was isolated in 1958 and multiple functions of this molecule have been clarified. The actions on specific receptors of membrane, attached to the G protein-coupled receptors are responsible for the control of circadian and seasonal rhythm cycle, however the activity as free radical oxygen scavenger and other mediators of oxidative metabolism are not mediated by receptors. The generation of EROS is directly linked to cellular damage and tissue ischemia and reperfusion being (I/R), the pathophysiological mechanisms that contribute most to the imbalance between oxidants and antioxidants molecules, resulting in oxidative stress. The peritoneal cavity insufflation with carbon gas promotes I/R causing deleterious outcomes for the patient. In order to study the effects of melatonin on the peritoneal inflammation and oxidative stress and genic expression of the proteins MTNR1A and MTNR1B among patients undergoing surgical laparoscopy who received or not melatonin, 80 patients were randomized into 2 groups of 40 patients each to receive melatonin (GMEL) - 20 mg orally 12 hours before and 1 hour before the procedure, respectively -and 40 patients to receive placebo (GPLA) - 12 hours before and 1 hour before the procedure, respectively. Parietal peritoneum samples were collected 10 minutes after the beginning of the pneumoperitoneum and 3 minutes after the end of it. Tissue morphology was evaluated on histopathological examination of slides stained with hematoxylin-eosin fo... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O trabalho noturno faz parte da sociedade atual de forma definitiva, incorporado em várias áreas da produção de bens e serviços. Estudos têm demonstrado as repercussões sobre a saúde dos trabalhadores, especialmente relacionados à ocorrência de patologias crônico degenerativas (síndrome metabólica, diabetes melito, obesidade e doença cardiovascular). O presente trabalho tem por objetivo avaliar o impacto do trabalho noturno sobre a saúde dos trabalhadores, de modo que possa servir como base para a elaboração de possíveis estratégias de intervenção para minimizar os problemas de saúde decorrentes desta forma de organização do trabalho. O capítulo 1 constitui-se de um artigo de revisão sobre os efeitos do trabalho em turnos sobre a saúde dos trabalhadores, em especial distúrbios metabólicos e cardiovasculares, foi publicado na revista Metabolic Syndrome & Diabetology em 2015. O segundo capítulo refere-se a um estudo transversal envolvendo 200 trabalhadores de um hospital universitário, avaliamos a associação entre turno de trabalho, obesidade e qualidade de vida. Para a execução do estudo foram aplicados questionários socio-demográfico, de qualidade de vida (BREF WHOQOL), de atividade física, o Questionário Internacional de Atividade Física (IPAQ), e o Questionário de Cronotipo de Munique (MCTQ). Distúrbios de sono foram investigados através de questões selecionadas do questionário Índice de Qualidade do Sono de Pittisburgh. Os trabalhadores do turno noturno apresentaram maior peso, maior circunferência abdominal, maior índice de massa corporal e maior frequência cardíaca que os trabalhadores diurnos. A análise múltipla demonstrou que os trabalhadores noturnos apresentaram 48% a mais de associação com obesidade abdominal, sendo que a maior duração do sono reduziu em 5% este risco. Apresentaram também uma razão de chance de 78% de associação com obesidade em comparação com os trabalhadores diurnos. A análise dos parâmetros do MCTQ demonstrou que os trabalhadores noturnos apresentaram menor duração de sono nos dias de trabalho e também nos dias livres, associado a um maior jetlag social social. Os resultados confirmaram a associação do trabalho noturno com obesidade visceral e excesso de peso, seja sobrepeso ou obesidade, ao mesmo tempo em que dormir mais horas de sono ou reduzir o débito de sono atenuaram esta associação. O terceiro capítulo refere-se a um estudo com o objetivo de avaliar o impacto da jornada de trabalho em turnos fixos durante à noite em comparação ao diurno sobre o ciclo vigília/sono e as concentrações dos hormônios cortisol e melatonina medidos na saliva durante o dia e a noite em ambos os grupos de trabalhadores, os trabalhadores noturnos foram avaliados em um dia de folga e em um dia de trabalho noturno. Para esta finalidade, foram coletadas amostras de saliva e de sangue de trabalhadores noturnos e diurnos e aplicados questionários sócio-demográfico e o Questionário de Cronotipo de Munique. Os resultados demonstraram que, enquanto os trabalhadores diurnos mantém o ritmo circadiano de secreção do cortisol, com níveis mais elevados durante a manhã e menores à noite, os trabalhadores noturnos, ainda preservam o ritmo do cortisol, tanto no plantão noturno quanto no dia de folga, porém apresentam um descenso menor dos níveis do cortisol salivar. Em relação à melatonina salivar, tanto os trabalhadores diurnos quanto os trabalhadores noturnos no dia de folga apresentaram níveis mais altos de melatonina à noite e níveis mais baixos pela manhã, os trabalhadores noturnos no dia de plantão noturno apresentaram um perfil inverso, com níveis de melatonina mais altos pela manhã e mais baixos à noite. Observou-se que os trabalhadores noturnos apresentam menos horas de sono durante os dias de trabalho em comparação aos diurnos associado a um jetlag social significativamente diferente, caracterizando uma perda crônica de sono. O trabalho noturno impacta no ritmo da melatonina e do cortisol. / Night work is part of today's society definitively, incorporated in various areas of the production of goods and services. Studies have shown the effects on the health of workers, especially related to the occurrence of chronic degenerative diseases (metabolic syndrome, diabetes, obesity, cardiovascular disease). This study aims to assess the impact of night work on the health of workers, which can serve as a basis for intervention strategies to minimize health problems arising from this form of work organization. Chapter 1 consists of a review article on the effects of shift work on workers' health, in particular metabolic and cardiovascular disorders, was published in Metabolic Syndrome and Diabetology in 2015. The second chapter refers to a cross-sectional study involving 200 workers of a university hospital, evaluating the association between shift work, obesity and quality of life. For the implementation of the study, a sociodemographic questionnaire, a quality of life questionnaire (WHOQOL-BREF), the International Physical Activity Questionnaire (IPAQ), and the Munich Chronotype Questionnaire (MCTQ) were applied. Sleep disorders were investigated through questions selected from the Pittsburgh Sleep Quality Index questionnaire. During the physical examination, blood pressure, heart rate, weight, height and BMI were measured, and venous blood was collected after 12-hour fasting for laboratory analysis of fasting blood glucose, glycated hemoglobin, insulin, total cholesterol and fractions, triglycerides, urea, creatinine, liver transaminases, ultrasensitive C-reactive protein, blood count, and platelets. The night shift workers have higher weight, larger waist circumference, higher BMI and higher heart rate than daytime workers. The multivariate analysis showed that night workers were 48% more likely to develop abdominal obesity, while a longer duration of sleep reduced this risk by 5%. They also showed also a risk of 78% for obesity compared with day workers. The analysis of MCTQ parameters showed that night workers had shorter sleep duration on working days and free days, associated with a higher social jetlag social. The results confirmed the association between night work with visceral obesity and weight gain, either overweight or obesity, while sleeping for more hours or reducing the sleep debt attenuated this association. The third chapter concerns a study intended to assess the impact of working hours on fixed shifts during the night compared to the day shift on the sleep/wake cycle and the concentrations of the hormones cortisol and melatonin during the day and night in both groups of workers. For this purpose, saliva and blood samples were collected from night and day workers and the socio demographic and Munich Chronotype Questionnaire were applied. The results showed that while day workers keep the circadian rhythm of cortisol secretion at higher levels in the morning and lower levels in the night, night workers, both in duty and after duty, have a smaller decrease in salivary cortisol levels. Regarding salivary melatonin, both daytime workers and night workers after duty had higher levels at night and lower levels in the morning, night workers on duty had an opposite profile, with higher levels of melatonin in the morning and lower levels in the night. Night workers were observed to have fewer sleeping hours during working days compared with day workers, associated with a significantly different jetlag social, characterizing a chronic sleep loss. Night work impacts the rhythm of melatonin and cortisol.

De acordo com dados da Organização Mundial da Saúde (OMS) estimam-se que os agrotóxicos causam anualmente 70 mil intoxicações agudas e crônicas que evoluem para óbito. Dentre eles, o paraquat (PQ) é o que apresenta maior taxa de mortalidade, sendo responsável por cerca de 13% de todos os casos registrados, principalmente devido a falta de um tratamento efetivo. O principal mecanismo de toxicidade proposto está associado ao ciclo redox do PQ, onde ocorre a formação de espécies reativas (ERs) de oxigênio e nitrogênio, levando ao estresse oxidativo (EO). Na literatura há relatos do uso de antioxidantes para casos de intoxicação do PQ. Dessa maneira, nesse trabalho avaliou-se o uso de melatonina associada a nanocápsulas de núcleo lipídico (Mel-LNC) na proteção contra os danos causados pelo PQ, uma vez que o uso da nanotecnologia melhorou a atividade antioxidante dessa molécula. Para tal utilizou-se o sistema in vitro, linhagem celular de adenocarcinoma pulmonar (A549), e o modelo alternativo in vivo, Caenorhabditis elegans. Mel-LNC e nanocápsulas de núcleo lipídico (LNC) foram preparadas de acordo com o método de deposição do polímero pré-formado. Ambas as formulações foram caracterizadas avaliando tamanho de partícula, potencial zeta e pH, e para Mel-LNC foram determinadas a concentração de melatonina e porcentagem de encapsulação. Os resultados encontrados estão de acordo com os parâmetros já validados para essas formulações. Foi possível verificar que as formulações MEL-LNC e LNC se mantiveram estáveis nos meios de cultura utilizados nos ensaios in vitro e in vivo. No estudo in vitro foi observado que o tratamento com ambas as formulações não causaram diminuição da viabilidade nem dano de DNA na linhagem celular utilizada. Além disso, foi verificado a internalização da Mel-LNC utilizando-se a formulação marcada com rodamina B, sendo possível verificar uma intensa fluorescência vermelha ao redor do núcleo da célula. O pré-tratamento com Mel-LNC foi capaz de aumentar a viabilidade celular e diminuir o dano oxidativo de DNA causado pelo paraquat após 24 horas de exposição, porém isso não ocorreu quando as células foram pré-tratadas com melatonina livre. No estudo com o modelo alternativo C. elegans, foi utilizada uma formulação de Mel-LNC marcada com rodamina B (Mel-LNC-RoB), a fim de verificar a absorção dessa formulação pelo nematoide. Foi possível observar que a internalização da Mel-LNC no C. elegans ocorre principalmente pela via oral, uma vez que se verificou uma intensa fluorescência no intestino do nematoide após o tratamento com a Mel-LNC-RoB e após três horas, essa fluorescência se distribuiu pelo restante do corpo, apresentando inúmeros pontos de fluorescência fora do intestino. Com relação à avaliação do efeito protetor nesse modelo alternativo in vivo, pode-se inferir que o pré-tratamento com Mel-LNC aumentou a sobrevida, diminuiu a produção de espécies reativas (ERs) e manteve o desenvolvimento normal dos nematoides após a exposição ao PQ, sendo que isso não foi verificado quando os mesmos foram pré-tratados com melatonina livre. Além disso, verificou-se que as nanocápsulas de núcleo lipídico (LNC) são seguras para o uso no modelo C. elegans, uma vez que apresentou alto valor para a dose letal 50 (DL50), e alterações no desenvolvimento e produção de ERs somente ocorreram em doses mais elevadas que as utilizadas em nossos experimentos. Dessa maneira, a formulação de Mel-LNC mostrou-se um promissor candidato para estudos futuros nos casos de intoxicação por paraquat. / According to estimations by World Health Organization (WHO), pesticides are responsible for 70 thousand acute intoxication cases that lead to death per year. Among these compounds, paraquat (PQ) presents the highest mortality rate, about 13% of all registered cases, especially for the lack of effective treatment. The major mechanism of toxicity proposed is associated to its redox cycle, in which oxygen and nitrogen reactive species (RS) are generated culminating in oxidative stress (OS). Some reports in the literature support the use of antioxidants for PQ intoxication cases. The present study aimed to evaluate the use of melatonin-loaded lipid-core nanocapsules (Mel-LNC) in the protection against PQ-induced damages, considering that nanotechnology has improved the antioxidant activity of this molecule. For this purpose, an in vitro system composed by lung adenocarcinoma (A549) cell line, and the in vivo alternative model of Caenorhabditis elegans have been utilized. Mel-LNC and unloaded lipid-core nanocapsules were prepared by self-assembly and characterized by particle sizing, zeta potential and pH, and for Mel-LNC formulation it was determined the drug content and encapsulation efficiency. The results are in agreement with the parameters already validated for these formulations. It was possible verify that Mel-LNC and LNC formulations remained stable in the culture medium utilized in in vitro and in vivo experiments. Results from in vitro studies showed that none of the formulations induced reduction in cell viability or DNA damage in treated cells. Besides, it was observed the internalization of Mel-LNC marked with rhodamine B, showing an intense red fluorescence around the cell nucleus. Pretreatment with Mel-LNC was able to enhance cell viability and diminish DNA oxidative damage caused by paraquat after 24h exposure, which could not be observed when cells were pretreated with Mel. In the study with the alternative model C. elegans, a rhodamine (Ro)-linked Mel-LNC formulation was prepared in order to assess the absorption of the formulation by the nematode. Mel-LNC uptake in C. elegans was found to occur mainly by the oral route, once an intense fluorescence was observed in the intestine after treatment with Mel-LNC-RoB, which after 3h distributed to the rest of the body, presenting numerous fluorescence dots outside the intestine. In relation to the evaluation of protection with the in vivo alternative model, results indicate that pretreatment with Mel-LNC increased survival rate, reduced the production of reactive species and maintained the normal development of nematodes after paraquat exposure, while the same observations were not found after pretreatment with free melatonin. In addition, the lipid-core nanocapsules (LNC) were found to be safe in the C. elegans model, due to its high lethal dose (LD50) value, and development alterations and RS production only occurred in the higher doses than those utilized in our experiments. Therefore, the Mel-LNC formulation demonstrated to be a promising candidate for future studies aiming treatment of paraquat intoxication cases.

O fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e o turnover da melatonina estão associados à dor pélvica crônica (DPC) associada à endometriose. Nós realizamos este estudo para entender se a secreção de melatonina, avaliada pela 6-sulfatoximelatonina urinária (aMT6-s), está correlacionada com o controle do BDNF a outros fatores como fator de necrose tumoral (TNF), interleucina 6 (IL-6), interleucina 10 (IL-10), cortisol ou nível de dor. Foram analisadas vinte mulheres com idade entre 18 e 45 anos com dor pélvica crônica e diagnóstico de endometriose por videolaparoscopia. Diferenças nos padrões temporais de aMT6-s e cortisol salivar de acordo com os intervalos de tempo no dia sugerem que ambos apresentaram padrões fisiológicos de flutuação. A dispersão da média da aMT6-s obtida a cada 6 h foi plotada em uma curva de regressão polinomial correspondendo por 43% da variância no perfil de excreção. Aumentos de 1 ng/mL no BDNF sérico levaram a uma modificação média da aMT6-s de -14,32 [intervalo de confiança (IC) 95% (-24,09 a -4,59)] ou vice-versa, enquanto aumentos de 1 ng/mL no TNF sérico levaram a um aumento da excreção média de aMT6-s em 1,32 (IC 95% 0,65 a 1,98). aMT6-s não estava associada com IL-6, IL-10 ou nível de dor. Portanto, nós encontramos que o BDNF sérico está inversamente correlacionado com a aMT6-s, enquanto os níveis de TNF sérico estão positivamente correlacionados com aMT6-s. Estes achados demonstraram que a interação e as relações entre BDNF e secreção de melatonina na endometriose são complexas e que estudos longitudinais subsequentes são necessários para elucidar como estes sistemas interagem a longo prazo. / The brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and melatonin turnover has been involved in the endometriosis-associated chronic pelvic pain (EACPP). We run this study to understand whether melatonin secretion, indexed by urinary 6-sulfatoxymelatonin (aMT6-s), is correlated with BDNF controlling to other factors such as tumor necrosis factor (TNF), interleukin 6 (IL-6), interleukin 10 (IL-10), cortisol or pain index. Twenty females, aged 18 to 45, with chronic pelvic pain and endometriosis diagnoses by videolaparoscopy, were analyzed. Differences in the temporal patterns of aMT6-s and salivary cortisol according to time-of-day intervals suggest that both presented physiological patterns of flotation. The dispersion of mean aMT6-s obtained every 6 h fitted a quadratic curve of polynomial regression accounting for 43% of the variance in the excretion profile. Increases of 1 ng/mL in serum BDNF led to a mean change in aMT6-s of -14.34 [confidence interval (CI) 95% (-24.09 to -4.59)] or vice versa, while increases of 1 ng/mL in serum TNF led to an increment of the mean aMT6-s excretion by 1.32 (CI 95%, 0.65 to 1.98). aMT6-s was not associated with interleukin (IL-6), interleukin (IL-10) or pain index. Therefore, we found that serum BDNF is inversely correlated with aMT6-s, while levels of serum TNF are positively correlated with aMT6-s. These findings demonstrated that the interaction and relations of BDNF and melatonin secretion in endometriosis are complex and that further longitudinal studies are needed to elucidate how these systems interact over a longer term.

Objetivos: O objetivo do trabalho foi preparar suspensões de nanocápsulas poliméricas contendo melatonina e secá-las utilizando adjuvantes hidrossolúveis, bem como realizar a caracterização físico-química e avaliação da permeação cutânea das formulações obtidas. Métodos: As suspensões de nanocápsulas poliméricas contendo melatonina foram preparadas pelo método de deposição interfacial do polímero pré-formado. As suspensões de nanocápsulas foram caracterizadas em termos de determinação do diâmetro de partículas, índice de polidispersão, pH e potencial zeta. Considerando-se que as suspensões poliméricas podem ser formulações instáveis, sujeitas ao crescimento microbiano e degradação química dos componentes, empregou-se a técnica de secagem por aspersão, como uma alternativa para aumentar a estabilidade desse tipo de sistema mediante a sua conversão em produtos pulverulentos. Para que os pós resultantes fossem ressuspendíveis em água optou-se pela utilização de adjuvantes de secagem hidrossolúveis, como a lactose e a maltodextrina, na proporção de 10 % (m/v). As formulações obtidas foram incorporadas em hidrogéis e caracterizadas quanto as suas propriedades organolépticas, doseamento, morfologia e potencial zeta. Além disso, as formulações foram avaliadas através de diálise da melatonina em função do tempo em meio aquoso contendo 5 % de Tween 80® e quanto à permeação in vitro do fármaco através da pele de suíno em função do tempo. Resultados e conclusões: As suspensões e pós de nanocápsulas foram obtidos com sucesso. As formulações apresentaram um perfil de liberação descrito por uma equação biexponencial, exceto a solução de melatonina livre em 10 % de etanol que correspondeu ao modelo monoexponencial. Nos testes de permeação, os pós de nanocápsulas apresentaram permeação significativamente menor da melatonina na pele (p < 0,05) em comparação com o hidrogel contendo fármaco livre, porém não foram significativamente distintos entre si. Em geral, as nanocápsulas em pó secas utilizando lactose, forneceram um pó com melhor redispersibilidade e menor tamanho médio de partícula, adequado para a aplicação tópica. / Aims: The objective was to prepare polymeric melatonin-loaded nanocapsule suspensions and dry them by using hydrophilic excipients and spray-drying technique. Perform physical-chemical characterization and evaluation of skin permeation of the formulations obtained. Methods: The polymeric melatonin-loaded nanocapsule suspensions were prepared by interfacial deposition of preformed polymer. The nanocapsule suspensions were characterized in terms of size, polydispersity index and zeta potential. Considering the instability of suspensions which are vulnerable to microorganism growing and the chemical degradation of components, we propose to convert them in powders by spray-drying for increasing the stability. The presence of water soluble excipients, lactose or maltodextrin, 10 % (w/v), as drying adjuvants furnished redispersible dried powders. These powders were incorporated in gels and characterized in terms of organoleptic parameters, melatonin content, morphology and zeta potencials. Furthermore, dialysis in cellulose membrane and permeation studies in pig’s skin were carried out. Results and Discussion: The suspensions and powders of nanocapsules were successful obtained. The in vitro release profiles of nanostructured formulations were better described by the biexponential model while the ethanol 10 % solution containing free melatonin fits better the monoexponential equation. In permeation tests, the powders (NCL and NCM) demonstrated significant reductions of melatonin permeation (p < 0,05) compared to melatonin free gel, but no significant differences among the different powders. In general, the spray dried nanocapsules using lactose provide a powder with better redispersibility and smaller particle size, suitable for topical application.