O trevo vermelho (Trifolium pratense L.) é uma leguminosa forrageira muito importante no Rio Grande do Sul, constituindo uma boa alternativa dentre as espécies forrageiras de inverno. Entretanto, como não existem cultivares desenvolvidas para as condições ambientais do Estado, a produção e, principalmente, a persistência dessas pastagens são comprometidas. Por isso o Departamento de Plantas Forrageiras e Agrometeorologia da UFRGS conduz um programa de melhoramento genético da espécie, buscando o desenvolvimento de populações melhor adaptadas às condições locais. O objetivo do trabalho foi avaliar, em dois ambientes contrastantes, Eldorado do Sul e Veranópolis, três populações de trevo vermelho selecionadas pelo referido programa, comparando-as com uma cultivar padrão. Em Eldorado do Sul foram implantados dois experimentos, um em 1999 e outro em 2000, enquanto em Veranópolis foi instalado apenas um, em 2000. Quanto à produção de matéria seca, os resultados variaram conforme o ano e o local. De modo geral, a cultivar padrão foi mais produtiva no primeiro corte, enquanto as populações selecionadas produziram mais forragem no final das estações de crescimento. Somente em Veranópolis o experimento foi avaliado por mais de um ano, com as populações selecionadas apresentando maior estabilidade produtiva que a cultivar padrão e produzindo mais forragem na segunda estação de crescimento. Em geral, as populações selecionadas também apresentaram maior persistência que o padrão. Ambos os locais mostraram-se favoráveis à avaliação e seleção para persistência do trevo vermelho, porém Veranópolis foi o mais adequado para a avaliação da produção de matéria seca.

O presente trabalho teve como objetivo geral caracterizar a variabilidade genética existente em um grupo de genótipos de arroz irrigado do banco de germoplasma disponível no programa de melhoramento do Instituto Rio Grandense do Arroz (IRGA) e como objetivos específicos identificar marcadores morfológicos que separem os dois grupos de arroz índica e japônica, avaliar a amplitude da base genética desse germoplasma e comparar o padrão de agrupamento obtido pelos marcadores morfológicos e moleculares.

O conhecimento do germoplasma disponível permite ao melhorista de fumo planejar estrategicamente o uso de genitores visando à ampliação da variância genética nas populações segregantes. Apesar de acreditar-se que a base genética do fumo é estreita, nenhum estudo foi feito com os genótipos utilizados pelos programas de melhoramento de fumo no Sul do Brasil. Os objetivos deste trabalho foram investigar a base genética e caracterizar genótipos de fumo utilizados em programas de melhoramento no Sul do Brasil através de caracteres fenotípicos e marcadores moleculares, comparando diferentes métodos quanto à capacidade de distinção de genótipos individuais. Trinta e dois genótipos de fumo foram avaliados para 32 características fenotípicas, 271 marcadores RAPD, 86 microssatélites e 484 marcadores AFLP. Características fenotípicas e marcadores moleculares RAPD e AFLP foram eficientes para distinguir os genótipos estudados, permitindo evidenciar moderada similaridade e estreita base genética. Apesar disso, foi encontrada variabilidade para as características fenotípicas de maior importância econômica em fumo, sendo possível caracterizar individualmente os 32 genótipos através de 23 das 32 características fenotípicas avaliadas. Os genótipos K-326 LF e BY-64 divergiram dos demais e se destacaram para características de importância econômica, como rendimento, índice qualitativo de folhas, teor de nicotina e percentual de talo, sendo de grande potencial como genitores em cruzamentos elite. Foram identificados marcadores RAPD e AFLP específicos, capazes de distinguir, individualmente, os genótipos estudados. Os resultados deste estudo permitem concluir que os diferentes métodos utilizados se complementam na distinguibilidade dos genótipos e devem ser utilizados conjuntamente para o desenvolvimento de germoplasma e linhagens superiores de fumo.

BANDEIRA, A. M. P. Caracterização de Genótipos de aceroleira por variáveis agronômicas e de pós-colheita em diferentes estações climáticas. 2012. 115 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-06-26T18:25:15Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_ampbandeira.pdf: 1850815 bytes, checksum: ce3611d9fbd0c79e721c8e41b3fd61e4 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-02T17:08:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_ampbandeira.pdf: 1850815 bytes, checksum: ce3611d9fbd0c79e721c8e41b3fd61e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-02T17:08:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_ampbandeira.pdf: 1850815 bytes, checksum: ce3611d9fbd0c79e721c8e41b3fd61e4 (MD5) Previous issue date: 2012 / Although several studies have developed the culture of acerola, there is still a large number of genotypes to be characterized in many ways, mainly genetic. Additionally, from genetic factors, the composition of acerola fruit can be affected depending on environmental conditions during development (season dry/wet). Giver the demand for new clones to postharvest developed in the years 1996 to 2007, a breeding program of acerola, launching in 2003, four clones recommended for the state of Ceará: BRS 235 (Apodi), BRS 236 (Cereja), BRS 237 (Roxinha) and BRS 238 (Frutacor), leading through the selection of garden seeds. The objective of this study was to characterize the genotypes of acerola garden seed through agronomic variables and post-harvest assessment of the existence of genetic diversity of this material. The experiment was installed in the field of experimental Pacajus (CE) under completely randomized design, 36 genotypes were evaluated for agronomc traits (morphology, phenology, and producyion) and 25 genotypes for post-harvest variables (weight, firmness, soluble solids, acidity, ratio ss/ta, pH of the pulp, vitamin C, anthocyanins, flavonoids, antioxidant activity and polyphenols) with three repetitions and the season dry of 2009 and wet and dry of 2010. Descriptive analysis was perfomed for agronomic traits in which it was found that the genotypes have height and diameter suitable for commercial plantation. Peaks were observed flowering in april, october and December and five fruiting peaks. As for productivity, the highlights were the clones 9, 14, 28, 37 and 38. We performed univariate and joint where we observed in variables during the post-harvest season with respect to weight, soluble solids, titratable acidity, vitamin C, anthocyanins, polyphenols and antioxidant activity, however, changes in texture, pH and flavonoids were significant. By multivariate analysis showed the existence of diversity among materials, especially clones 13 and 37. We used the selection index of Mulamba and Mock choice of materials to that presented a number of favorable attributes as the characteristics of post-harvest which highlights the clones 3, 13, 14, 27 and 38. / Apesar de vários estudos já desenvolvidos com a cultura da acerola, ainda existe um grande número de genótipos a ser caracterizados sob vários aspectos, principalmente os genéticos. Adicionalmente, além dos fatores genéticos, a composição dos frutos da aceroleira pode ser afetada em função das condições ambientais durante seu desenvolvimento (estação seca / úmida). Diante da demanda por novos clones a Embrapa Agroindústria Tropical desenvolveu, nos anos de 1996 a 2007, um programa de melhoramento genético da aceroleira, lançando no ano de 2003 quatro clones recomendados para o Estado do Ceará: BRS 235(Apodi), BRS 236 (Cereja), BRS 237 (Roxinha) e BRS 238 (Frutacor), originando através de seleção o Jardim de Sementes. Assim, o objetivo deste trabalho consistiu na caracterização dos genótipos de aceroleira do Jardim de Sementes por meio de variáveis agronômicas e de pós-colheita e avaliação da existência de diversidade genética desse material. O experimento foi instalado no campo Experimental de Pacajus (CE), sob delineamento inteiramente casualizado, avaliou-se 36 genótipos para variáveis agronômicas (morfologia, fenologia e produção) e 25 genótipos para as variáveis de pós-colheita (peso, firmeza, sólidos solúveis, acidez titulável, relação SS/AT, pH da polpa, vitamina C, antocianina, flavonóides, atividade antioxidante e polifenóis), com três repetições e nas estações seca de 2009 e úmida e seca de 2010, foi realizada análise descritiva para as variáveis agronômicas, na qual verificou-se que os genótipos apresentam altura e diâmetro adequados para plantios comerciais. Observaram-se picos de floração nos meses de abril, outubro e dezembro e cinco picos de frutificação. Quanto à produtividade, destacaram-se os clones 9, 14, 28, 37 e 38. Foram realizadas análises univariada e conjunta onde foram observadas mudanças nas variáveis de pós-colheita durante as estações com relação a peso, sólidos solúveis, acidez titulável, vitamina C, antocianinas, atividade antioxidante e polifenóis; entretanto, as mudanças na firmeza, pH e flavonóides não foram significativas. Através da análise multivariada verificou-se a existência de diversidade entre os materiais, destacando-se os clones 13 e 37. Utilizou-se do índice de seleção de Mulamba e Mock para escolha dos materiais que apresentassem uma série de atributos favoráveis quanto as características de pós-colheita onde destacaram-se os clones 3, 13, 14, 27 e 38.

SANTOS, F. H. C. Identificação de QTLs candidatos associados à qualidade pós-colheita do pedúnculo de caju. 2008. 123 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-03T19:51:39Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_fhcsantos.pdf: 870825 bytes, checksum: b156596723b2a83893246b439a0299f3 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-16T20:10:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_fhcsantos.pdf: 870825 bytes, checksum: b156596723b2a83893246b439a0299f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-16T20:10:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_fhcsantos.pdf: 870825 bytes, checksum: b156596723b2a83893246b439a0299f3 (MD5) Previous issue date: 2008 / Detection of quantitative trait loci (QTLs) and marker assisted selection associated with theses QTLs have shown a great interest in breeding programs focused on fruit quality traits. The aim of this work were to study the quality of cashew apple in several genotypes and identify QTLs associated with these traits, using the cashew genetic maps already developed. For the physical and physical-chemical analyses, it was collected 15 cashew apple per plant, from 66 genotypes of the generation F1 originated from the cross CCP 1001 x CP 96 and from the clone CCP 76, used as a control. The following characteristics were evaluated: color (lightness, redness and yellowness), weight (whole, nut and apple), apple length and diameter (upper and lower), oligomeric phenolic, total soluble solids (TSS), total titratable acidity (TTA), TSS/TTA ration and vitamin C. Detection of candidate QTLs were realized using the methods non-parametric mapping, interval mapping and multiple QTL mapping. The results evidence high phenotypic variability in the generation F1 for all characters analyzed, with potential for the selection of genotypes with the best characteristics for fresh fruit market. The QTL analyses showed 54 QTLs associated with quality of cashew apple. The characteristic redness presented the lowest number of QTL (two), while apple weight demonstrated the highest number (seven). These QTLs explained 3.15 to 21.33 % of the total phenotypic variance. The results strongly support the presence of true QTLs. These QTLs are in the process of validation to be used in the marker assisted selection in cashew breeding programs. / A identificação de locos que controlam características quantitativas (QTLs), e a seleção assistida por marcadores moleculares associados a esses QTLs, tem despertado grande interesse em programas de melhoramento visando à qualidade dos frutos. Objetivou-se com este estudo avaliar a qualidade de cajus em genótipos de cajueiro e identificar QTLs candidatos relacionados com estes caracteres, utilizando os mapas genéticos já desenvolvidos para o cajueiro. Para as análises físicas e físico-químicas foram coletados quinze cajus/planta em 66 plantas da geração F1 originada do cruzamento CCP 1001 x CP 96 e no clone CCP 76, utilizado como testemunha. Foram avaliadas as seguintes características: coloração (luminosidade, intensidade de vermelho e amarelo), pesos (total, castanha e pedúnculo), tamanho (comprimento, diâmetros basal e apical), fenólicos oligoméricos, sólidos solúveis totais, acidez total titulável, doçura e vitamina C. Para identificação dos QTLs candidatos foram utilizadas as metodologias de mapeamento não paramétrico, mapeamento de intervalo e mapeamento de QTLs múltiplos. Os resultados demonstraram elevada variação fenotípica na geração F1 para todos os caracteres em estudo, com potencial para seleção de genótipos que atendam as exigências do mercado in natura. As análises de QTLs permitiram a identificação de 54 QTLs associados a qualidade do pedúnculo. O caráter que apresentou o menor número de QTLs foi intensidade de vermelho, com dois, e o que apresentou o maior número foi o peso do pedúnculo, com sete. Estes QTLs explicaram entre 3,15 % e 21,33 % da variação fenotípica total. Os resultados obtidos suportam fortemente a presença de QTLs verdadeiros. Estes QTLs estão em processo de validação para que possam ser utilizados na seleção assistida por marcadores em programas de melhoramento genético do cajueiro.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:05:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327441.pdf: 1029331 bytes, checksum: ed98a015aebda97cf6ecf74163b0c133 (MD5) Previous issue date: 2014 / As doenças míldio (Plasmopara viticola) e oídio (Erysiphe necator) são um sério problema para os produtores de V. vinifera. Explorar a resistência genética a estas doenças é uns dos maiores objetivos nos programas de melhoramento genético. O presente trabalho teve por objetivo identificar e selecionar via SAM (Seleção assistida por marcadores moleculares) plantas de videira contendo os locos de resistência contra o míldio (Rpv1 e Rpv3) e o oídio (Run1 e Ren3) piramidados e em homozigose, para utilizá-las em novos ciclos de cruzamento. Foram analisadas as populações experimentais de videira UFSC-2013-1 e UFSC-2013-2 provenientes das linhas de melhoramento 2000-305-134 (uvas tintas) e 2000-305-97 (uvas brancas) que apresentam os locos de resistência Rpv1/Run1, Ren3 e Rpv3 piramidados e em heterozigose. As 637 plantas das duas progênies F2 foram genotipadas com seis marcadores microssatélites ligados aos locos de resistência. Para a análise de segregação foi utilizado o teste ?2. Nas duas populações estudadas observou-se distorção na segregação com os marcadores microssatélites ligados aos locos de resistência Rpv1/Run1, localizados no cromossomo 12. Para o míldio, foram encontradas 300 plantas (48,2%) apresentando os dois locos de resistência piramidados sendo que, destas, 10 plantas carregam os locos de resistência em homozigose. Na avaliação fenotípica o menor valor médio de esporangióforos/disco foi observado nas plantas contendo os dois locos de resistência ao míldio em homozigose (4,9). Para o oídio a genotipagem permitiu identificar 311 plantas (50,5%) apresentando os dois locos de resistência piramidados; destas sete plantas exibiram os dois alelos em homozigose. Na avaliação geral foram encontradas 27 combinações genéticas, onde 231 plantas (38,2%) apresentaram os quatro locos de resistência (Rpv1/Run1, Ren3, Rpv3) piramidados. Foi identificada uma planta carregando os alelos de resistência em homozigose em todos os locos e nove plantas que apresentaram os dois locos de resistência para o míldio em homozigose e para o oídio um loco em homozigose e outro em heterozigose. Estas plantas apresentam extrema importância para o melhoramento genético da videira, pois ao ser utilizada em novos cruzamentos com variedades de importância econômica para o Brasil, todas as progênies obtida apresentarão resistência piramidada para as duas doenças.<br> / Abstract : The diseases downy mildew (Plasmopara viticola) and powdery mildew (Erysiphe necator) are a serious problem for producers of V. vinifera. Exploring the genetic resistance to these diseases is a major objective in breeding programs. This study is aimed to identify and select via Marker Assisted Selection (MAS), grape plants containing resistance alleles at distinct the loci against downy mildew (Rpv1 and Rpv3) and powdery mildew (Run1 and Ren3) pyramided and homozygous, to be used in new cycles of crossing. Two experimental populations of grapes were analized, UFSC-2013-1 and UFSC-2013-2, both derived from the breeding lines 2000-305-134 (red wine grape) and 2000-305-97 (white grape) that carry resistance loci against both diseases Rpv1/Run1, Ren3 and Rpv3 pyramided and heterozygous. The 637 plants from two F2 progenies were genotyped with six microsatellite markers linked to the resistance loci. The segregation analysis by the ?2 test revealed distorted segregation at microsatellite loci, which are linked to resistance loci Rpv1/Run1, located on chromosome 12. For downy mildew, 300 plants were found (48.2%) showing the two resistance loci pyramided and, from these, 10 plants carried homozygous loci for resistant alleles. Results from phenotypic evaluation showed the lower mean sporangiophores per disc in plants containing both resistance loci, to downy mildew, in homozygous conditions (4.9). For powdery mildew the genotyping allowed us to identify 311 plants (50.5%) that presented resistant alleles at the two pyramided loci, from which, seven plants exhibited homozygous alleles at both loci. Overall, there were found all the 27 genotypic combinations (since two loci are linked), being 231 plants (38.2%) showing resistant alleles at the four loci (Rpv1/Run1, Ren3 and Rpv3) pyramided. One plant was identified carrying resistant alleles at all loci in homozygous conditions and nine plants with two homozygous loci for downy mildew and for powdery mildew one homozygous loci and other heterozygous.These plants are extremely important for the genetic improvement of the vine, they will be used in new crosses with varieties of economic importance to Brazil, because all obtained progeny will present pyramided resistance to the both diseases.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-05-26T04:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333237.pdf: 2953007 bytes, checksum: d47a19328ddecfa298f35cb142d3e1bd (MD5) Previous issue date: 2014 / O milho MON810 tem inserido em seu genoma o gene truncado cry1Ab oriundo da bactéria B. thuringiensis (Bt). O gene cry1Ab produz a proteína inseticida Cry1Ab que confere à planta resistência aos insetos da ordem Lepidoptera. Mas a inserção do gene cry1Ab no milho MON810 foi incompleta, dado que parte da região 3' da construção original não foi integrada no genoma do milho, incluindo o terminador NOS. Neste contexto, o principal objetivo foi detectar as possíveis interações da proteína Cry1Ab com as proteínas endógenas de milho. Neste estudo foram utilizadas folhas de milho MON810 no estádio V2 para a caracterização da proteína Cry1Ab e a detecção de possíveis proteínas ligadas à Cry1Ab. Na caracterização da Cry1Ab, foi quantificada a proteína Cry1Ab no limbo e na bainha das folhas por DAS-ELISA, mostrando que o conteúdo da proteína Cry1Ab no limbo (55,56 ± 6,54µg Cry1Ab/g massa fresca) foi seis vezes maior do que na bainha (10,29 ± 2,42µg /g massa fresca). Para a extração da proteína Cry1Ab os protocolos de Mekawi e Gruber resultaram em maior rendimento de extração da proteína Cry1Ab. Os extratos protéicos de milho MON810 foram analisados por Western Blot. O ensaio evidenciou quatro bandas imunorreativas de 70 kDa, 65 kDa, 39 kDa e 34 kDa correspondentes à proteína Cry1Ab, embora em alguns dos extratos foram detectadas bandas imunorreativas maiores do que 120 kDa em vez da proteína Cry1Ab ativa (70 kDa e 65 kDa). No ensaio de imunoprecipitação foram identificadas 49 proteínas de milho coimunoprecipitadas com a proteína Cry1Ab. De forma similar, o ensaio de Ligand blot mostrou que a proteina Cry1Ab poderia estar ligada com proteinas do milho, especialmente uma de 18 kDa, presente tanto nas plantas transgênicas ou na isolinha. Em conclusão, este estudo encontrou (i) evidencia da interação entre a proteína Cry1Ab e proteínas do milho; (ii) variação na quantidade de proteína Cry1Ab em distintas partes da folha e (iii) quarto formas moleculares distintas (70 kDa, 65 kDa, 39 kDa e 34 kDa) da proteína Cry1Ab, ao invés de uma como indicado pela empresa proponente da tecnologia.<br> / Abstract: The MON810 maize has a truncated version of the cry1Ab gene from Bacillus thuringiensis inserted into its genome. The cry1Ab gene produces the insecticidal protein Cry1Ab that confers on the maize resistance to insects of the order Lepidoptera. The construct used in the genetic transformation of MON810 maize contained the CaMV 35S promoter, the hsp70 intron, the cry1Ab gene and the NOS terminator. However, a truncation at the 3 end of the cry1Ab gene led to the complete loss of the NOS terminator, and insertion of cry1Ab gene was incomplete. In this context, the aim of this work was to detect possible interactions of Cry1Ab protein with endogenous protein maize. This study used MON810 leaves (stage V2) to characterize the Cry1Ab protein and to detect possible interaction of Cry1Ab with endogenous maize proteins. To characterize the Cry protein, it was quantified in lamella and sheath by DAS-ELISA. Cry1Ab protein concentration in lamella (55.56 ± 6,54µg Cry1Ab / g fresh weight) was six times greater than the sheath (10.29 ± 2,42µg / g fresh weight). For the extraction of the Cry1Ab protein, five extraction protocols were compared. The protocols of Mekawi and Gruber gave the highest extraction yields of the Cry1Ab protein. The protein extracts of transgenic maize were analyzed by Western blot. The analysis revealed four immunoreactive bands immunoreactive (70 kDa, 65 kDa, 39 kDa and 34 kDa) corresponding to the Cry1Ab protein, although in some extracts, immunoreactive bands greater than 120 kDa were detected instead of the active Cry1Ab protein (70 kDa and 65 kDa). In addition, in the immunoprecipitation assay there were 49 co-imunoprecipitated proteins from maize with the Cry1Ab protein. Similarly, Ligand blot assay showed that the Cry1Ab protein could be binding with maize proteins, especially an 18 kDa protein which was present in both transgenic and isogenic maize. In conclusion, it was found (i) evidence of interaction between Cry1Ab protein and corn proteins; (ii) variation in the amount of Cry1Ab in distinct part of the leaves, and (iii) four distinct molecular form (70 kDa, 65 kDa, 39 kDa e 34 kDa), instead one indicated by the proponent of the technology.

JEREISSATI, E. S. Transformação genética de feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp] e tabaco (Nicotiana tabacum) com uma quitinase de classe I. 2012, Transformação genética de feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp] e tabaco (Nicotiana tabacum) com uma quitinase de classe I. 120 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-01-15T18:58:02Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_esjereissati.pdf: 8084916 bytes, checksum: 05dd57f88cba77dba6c72ab53b984f08 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-19T17:21:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_esjereissati.pdf: 8084916 bytes, checksum: 05dd57f88cba77dba6c72ab53b984f08 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-19T17:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_esjereissati.pdf: 8084916 bytes, checksum: 05dd57f88cba77dba6c72ab53b984f08 (MD5) Previous issue date: 2012 / Heterologous expression of genes encoding pathogenesis related proteins (PR-proteins) represents a promising alternative for the development of plants resistant to fungi. Among the PR-proteins with great biotechnological potentials are the chitinases, a class of hydrolases which catalyze the degradation of chitin, a polymer constituent of cell wall of several species of pathogenic fungi. Besides their function related to defense mechanisms, it is believed that these enzymes may play other roles, such as regulation of growth and development processes in plants. Using two approaches, this study sought to investigate the role of a class I chitinase of cowpea (VuChiI) in defense and plant development. The first approach consisted of silencing of the gene encoding for VuChiI in cowpea. Apical meristems excised from cowpea seeds were bombarded with microparticles containing a silencing vector (pKANNIBAL), which was cloned with a construct harboring an intron harpin of the gene VuChiI. Plants regenerated in a Murashige and Skoog (MS) media containing imazapyr as a selection agent, were analyzed by PCR, resulting in confirmation of genetic transformation of five plants from the 1092 apical meristems bombarded. Northern blot analysis of total RNA extracted from the putative transgenic plants allowed for the detection of siRNAs. Upon regeneration and germination, only one of the five transformed plants produced a pod containing six seeds. Of these, only one germinated when further planted. The transformed plants exhibited a life cycle of over 365 days, as against the normal cycle of 65-70 days. Based on these results we posit that silencing of class I cowpea chitinase may have led to changes in plant development. The second strategy consisted of co-cultivation of tobacco leaf discs with Agrobacterium tumefaciens strain LB4404 suspension to express recombinant protein in the extracellular space of the regenerated plants in order to expose the protein fungus even before its penetration into the plant cell. To achieve this, a sequence of cowpea chitinase insert was cloned into the binary vector pCAMBIA1305.2 under the control of CaMV35S promoter and signal peptide fused to glycine-rich protein of Oryza sativa (GRP), which allowed the secretion of recombinant protein via apoplast. This led to the generation of three strains as confirmed by PCR. Seeds obtained from transformed R1 generation of the plants were germinated and analyzed for transmission of the transgene using X2 test, which confirmed its transmission to the progeny in a Mendelian fashion. The experimental models developed in this work may serve to further assess the biological roles of class I chitinase from cowpea. / A expressão heteróloga de genes que codificam proteínas relacionadas à patogênse (PR-proteínas) representa uma alternativa promissora para o desenvolvimento de plantas resistentes ao ataque de fungos. Dentre as PR-proteínas com grande potencial biotecnológico, estão as quitinases, hidrolases que catalisam a degradação da quitina, que é um polímero constituinte da parede celular de muitas espécies de fungos fitopatogênicos. Além da função relacionada aos mecanismos de defesa, acredita-se que essas enzimas podem desempenhar outros papéis, como a regulação de processos de crescimento e desenvolvimento em plantas. O objetivo deste trabalho foi estudar o papel de uma quitinase de classe I de feijão-caupi (VuChiI) na defesa e no desenvolvimento vegetal e para isso duas abordagens foram conduzidas. A primeira consistiu no silenciamento do gene que codifica esta proteína em plantas de feijão-caupi. Nos experimentos de silenciamento gênico foram utilizados meristemas apicais de plântulas de feijão-caupi, que foram então bombardeados com micropartículas portando um vetor de silenciamento (pKANNIBAL), onde foi clonada uma construção em grampo (intron harpin) do gene de VuChiI. As plantas regeneradas em meio de cultura de Murashige e Skoog (MS) contendo o herbicida imazapyr, como agente de seleção, foram analisadas por PCR, o que resultou na confirmação da transformação genética de cinco plantas, a partir de 1.092 meristemas apicais bombardeados. O RNA foi extraído das plantas transformadas e utilizado em análises de Northern blot que possibilitou a detecção de siRNAs no RNA total extraído das plantas putativamente transgênicas. Apenas uma das plantas transformadas produziu uma vagem contendo seis sementes, das quais apenas uma germinou. As plantas transformadas apresentaram ciclo de vida de mais de 365 dias enquanto que o esperado é de 65-70 dias. Com base nos resultados sugere-se que o silenciamento da quitinase de classe I de feijão-caupi pode ter promovido alteração no desenvolvimento da planta. A segunda estratégia de transformação genética consistiu no co-cultivo de discos foliares de tabaco com suspensão de Agrobacterium tumefaciens LB4404, com o intuito de expressar a proteína recombinante no espaço extracelular das plantas regeneradas. Essa estratégia tem como objetivo fazer com que a proteína entre em contato com o fungo antes mesmo que este agente patogênico penetre na célula vegetal. Para tanto, o inserto referente à quitinase de feijão-caupi foi clonado no vetor binário pCAMBIA1305.2 sob controle do promotor CaMV35S e fundido ao peptídeo sinal GRP (glycine-rich protein de Oryza sativa), que permite a secreção da proteína recombinante via apoplasto. Foram produzidas três linhagens de plantas que tiveram a transformação genética confirmada por PCR. As sementes obtidas das plantas transformadas, geração R1, foram semeadas em meio seletivo para a análise da transmissão do transgene. O teste de X2 indicou que o transgene foi transmitido para a progênie em proporções Mendelianas. Os modelos experimentais desenvolvidos neste trabalho poderão contribuir para a elucidação dos papéis biológicos da quitinase de classe I de feijão-caupi.

GARANTIZADO, F. E. A. Caracterização da Proteína desacopladora mitocondrial (pUCP) de Vigna unguiculata (L.) Walp. 2007. 121 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-01-22T20:26:23Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_feagarantizado.pdf: 1734197 bytes, checksum: 167e17572de926c99e9c2426bedb1e93 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-02-25T20:29:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_feagarantizado.pdf: 1734197 bytes, checksum: 167e17572de926c99e9c2426bedb1e93 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-25T20:29:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_feagarantizado.pdf: 1734197 bytes, checksum: 167e17572de926c99e9c2426bedb1e93 (MD5) Previous issue date: 2007 / The uncoupling proteins of plants (pUCPs) are integral proteins of membrane, located in the mitochondrial inner membrane, belong the Mitochondrial Anion Carrier Family (MACF). They are responsible for the dissipation as heat of the electrochemical gradient of protons, generated during respiration. In the presence of free fatty acid acids (FFA), the UCPs facilitate the re-entry of protons from intermembrane space for the matrix and these protons are deviated from the influence of the ATP sintase what leads to the inhibition the oxidative phosphorilation. The function of these enzymes completely is still not elucidated, but literature suggests its participation in processes of fruit maturation, in the adaptation to stress conditions and in cell protection by avoiding the production of reactive species of oxygen (EROS). The involvement of this enzyme in adaptive thermogenesis is questionable. The objective of the present work was to characterize the enzymatic activity of pUCP of mitochondria from hypocotyls of Vigna unguiculata (L.) Walp through polarographic assays and to identify the(s) gene(s) of pUCPs, through its expression in different conditions of abiotic stress. The activity of pUCP was evaluated in the presence of fatty acids (palmitic, linoleic, myristic and lauric) and BSA, having succinate and malate as oxidizable substrates at different pHs (6,5, 7,2 and 7,8). The higuest activities were obtained in the presence of linoleic acid, succinate as substrate and with more alkaline pHs (7,2 and 7,8). Degenerate primers, obtained from ten different pUCPs, called pump1 and pump2, has been designed for amplification of the gene fragments through RT-PCR and PCR. The total RNA was isolated from plants leaves of V. unguiculata submitted to different stress conditions (100 mM NaCl, 1 mM H2O2 and 200,67 g/L PEG) and cDNAs fragments amplified by RT-PCR had been purified and cloned in the plasmid PCR4-TOPO. Seven cDNA fragments of approximately 760 pb had been sequenced and presented 100% of identity among themselves. The comparison of the deduced amino acid sequence of this cDNA fragment with those of soybean disclosed 94% of identity with the gene GmUCP1a and 90% of identity GmUCP1b soybean gene. These results suggest that the pUCP gene identified in V. unguiculata (VuUCP1a) is ortologous to the GmUCP1a gene from soybean (Glycine max). The expression of genes of pUCP in beans, under abiotic stress conditions (salinity, oxidative and osmotic conditions) analyzed through RT-PCR disclosed a differential profile what suggests induction of expression of VuUCP1a only in response to salt stress. The genomic DNA of V. unguiculata was isolated and two gene fragments (1700 and 1900 pb) had been amplified by PCR. The amplification of two fragments from the genomic DNA suggests the existence of at least two pUCPs genes in beans what leads to the conclusion of a pUCP multigenic family. / As proteínas desacopladoras de planta (pUCPs) são proteínas integrais de membrana, localizadas na membrana mitocondrial interna, pertencentes a Família de Carreadores de Ânions Mitocondriais (FCAM), responsáveis pela dissipação do gradiente eletroquímico de prótons, gerado pela respiração, como calor. Na presença de ácidos graxos livres (AGL), as pUCPs facilitam a reentrada de prótons do espaço intermembranar para a matriz, desviando-os da ATP Sintase, inibindo assim a fosforilação oxidativa. A função dessas enzimas ainda não está completamente elucidada, mas a literatura sugere a sua participação em processos de amadurecimento de frutos, adaptação a situações de estresses bióticos e abióticos e proteção da célula evitando a produção de espécies reativas de oxigênio (EROS). Sua participação na termogênese adaptativa é questionável. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar a atividade enzimática da pUCP de mitocôndrias de hipocótilos de Vigna unguiculata (L.) Walp através de ensaios polarográficos, identificar o(s) gene(s) das pUCPs, estudando a sua expressão em diferentes situações de estresses abióticos. A atividade da pUCP foi avaliada em presença de ácidos graxos (palmítico, linoléico, mirístico e láurico) e BSA tendo succinato e malato como substratos e distintos pHs (6,5, 7,2 e 7,8). As maiores atividades foram obtidas com ácido linoleico na presença de succinato em pHs mais alcalinos (7,2 e 7,8). Primers degenerados a partir de dez diferentes pUCPs, denominados pump1 e pump2, foram desenhados para a amplificação dos fragmentos gênicos por RT-PCR e PCR. Isolou-se o RNA total de folhas de plântulas de V. unguiculata submetidas a diferentes condições de estresses (NaCl 100mM, H2O2 1mM e PEG 200,67g/L) que foram amplificados por RT-PCR, purificados e clonados no plasmídio pCR4-TOPO. Sete fragmentos gênicos de aproximadamente 760 pb foram seqüenciados, apresentando 100% de identidade entre si. A comparação da seqüência deduzida de aminoácidos desse fragmento de cDNA com a soja revelou 94% de homologia com GmUCP1a e 90% de homologia com GmUCP1b. Os resultados sugerem que o gene do feijão identificado em V. unguiculata (VuUCP1a) é ortólogo ao gene GmUCP1a de soja (Glycine max). A expressão de VuUCP1a em feijão em condições de estresses abióticos (salino, oxidativo e osmótico) através de análise por RT-PCR revelou um perfil diferencial, sugerindo indução de expressão de VuUCP1a apenas em resposta ao estresse salino. Isolou-se o DNA genômico de V. unguiculata e dois fragmentos gênicos (1700 e 1900pb) foram amplificados por PCR. A amplificação de dois fragmentos distintos a partir do DNA genômico sugere a existência de pelo menos dois genes codificando pUCPs em feijão, sendo assim, a pUCP é codificada por uma família multigênica.

MONTENEGRO, Assis Rubens. Avaliação genética de características produtivas e reprodutivas de animais da raça Girolando. 2013. 113 f. Dissertação (mestrado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-26T18:56:14Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_armontenegro.pdf: 1006839 bytes, checksum: 1eebcb0ac2adf32fedf14b54e6320e55 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T19:24:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_armontenegro.pdf: 1006839 bytes, checksum: 1eebcb0ac2adf32fedf14b54e6320e55 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T19:24:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_armontenegro.pdf: 1006839 bytes, checksum: 1eebcb0ac2adf32fedf14b54e6320e55 (MD5) Previous issue date: 2013 / In order to estimate genetic parameters and correlated response to first milk production at 305 days (P305), age at first calving (IPP), first calving interval (IDP) and projected production (PP) Girolando created in Brazil, analyzed 9,632 records of births collected in several Brazilian herds in the period 2000-2010. The production of milk in 305 days, age at first calving, first calving interval and projected productions were analyzed using an animal model in univariate and bivariate. For P305 and IDP, the model included the fixed effects of contemporary group (CG), season of calving and cow age in days as a covariate (linear and quadratic) and random direct genetic effect. For IPP, the model was formed by contemporary group, season of birth and random direct genetic effect. The GC for P305, IDP and PP was defined as herd and year of birth, and the IPP effects of herd and year of birth. Variance components were estimated by restricted maximum likelihood (REML). In the first experiment, genetic trends were estimated by linear regression analyzes of breeding values, weighted by the number of observations, depending on the year of birth of the animal. The relative efficiency of indirect selection was obtained by dividing the correlated response for reproductive traits when selection was practiced for milk production and genetic gain direct. In the second experiment, including the random effect of permanent environment for P305 and PP. The lactation projected were from of 151, 181, 211 and 241 days and files formed with three levels (10, 40, 70 and 100%) for milk accumulated at 305 days (P305) projected by lactation (PP), totaling 16 files. Groups were formed coincidence of bulls by their breeding values for each substitution level and data projection. The mean values and standard deviations for P305, IPP and IDP were 4003.80 ± 1568.99 kg, 1071.40 ± 182.52 days and 440.10 ± 100.52 days, respectively. The estimated of heritability were 0.25, 0.20 and 0.03 for P305, IPP and IDP, respectively. The results suggest that the productions up to 305 days and age at first calving have additive genetic variability and can be used as selection criteria of Girolando breed. The genetic correlation between P305 and IDP was 0.13, between IPP and IDP, 0.18; between P305 and IPP, -0.59. The results indicate that the genetically superior animals for milk production are also earlier. However, the genetic gain for IPP will be greater if performed direct selection for the trait. Genetic trends for P305, IPP and IDP were 11.58 kg, -0.30 days and 0.02 days, respectively. The genetic gain IPP will be greater if performed direct selection for the trait. The increase of 257.0 kg of milk will result in 2.7 days more in the first calving interval. The estimate of herdabildiade (h ²) for P305 was 0.16. Already the PP showed h ² average 0.15, varying between from 0.14 to 0.16. Genetic correlations between P305 and PP were all equal to unity. Selecting bulls 1% higher for P305 obtained coincidence of 80% except for PP15070% and PP150100%. For other levels of selection, the coincidences were higher varying from 82 to 100%. It was found that the use of lactation projected from 150 days is an effective methodology for the inclusion of analysis information. / Com o objetivo de estimar parâmetros genéticos e a resposta correlacionada para primeira produção de leite até 305 dias (P305), idade ao primeiro parto (IPP), primeiro intervalo de partos (IDP) e produções projetadas (PP) da raça Girolando criada no Brasil, foram analisados 9.632 registros de partos coletados em vários rebanhos brasileiros no período de 2000 a 2010. A produção de leite em 305 dias, idade ao primeiro parto, primeiro intervalo de parto e produções projetadas foram analisadas por meio de modelo animal em análises uni e bicaracterísticas. Para P305 e IDP, o modelo incluiu os efeitos fixos de grupo de contemporâneos (GC), época de parto e idade da vaca em dias como co-variável (regressão linear e quadrática) e o efeito aleatório genético direto. Para a IPP, o modelo foi formado por grupo de contemporâneos, época de nascimento e o efeito aleatório genético direto. O GC para P305, IDP e PP foi definido como rebanho e ano de parto, e para IPP os efeitos de rebanho e ano de nascimento. Os componentes de variância foram estimados pelo método de máxima verossimilhança restrita (REML). No primeiro experimento, as tendências genéticas foram calculadas por análises de regressão linear dos valores genéticos, ponderados pelo número de observações, em função do ano de nascimento dos animais. A eficiência relativa da seleção indireta foi obtida pela divisão da resposta correlacionada para as características reprodutivas, quando a seleção foi praticada para produção de leite e o ganho genético direto. No segundo experimento, foi incluindo o efeito aleatório de ambiente permanente para P305 e PP. Foram projetadas lactações a partir de 151, 181, 211 e 241 dias e formados arquivos com níveis de substituição (10, 40, 70 e 100%) das produções de leite acumulada até 305 dias (P305) pelas lactações projetadas (PP), totalizando 16 arquivos. Foram formados grupos de coincidência dos touros pelos seus valores genéticos para cada nível de substituição e data de projeção. Os valores das médias e dos desvios padrões para P305, IPP e IDP foram 4003,80 ±1568,99 kg, 1071,40 ±182,52 dias e 440,10 ±100,52 dias, respectivamente. As estimativas de herdabilidade obtidas foram 0,25, 0,20 e 0,03 para P305, IPP e IDP, respectivamente. Os resultados sugerem que a produções em até 305 dias e idade ao primeiro parto possuem variabilidade genética aditiva, podendo ser utilizadas como critério de seleção da raça Girolando. A correlação genética entre P305 e IDP foi 0,13; entre IDP e IPP, 0,18; entre P305 e IPP, -0,59. Os resultados indicam que os animais superiores geneticamente para produção de leite são também mais precoces. Entretanto, o ganho genético para IPP será maior se for realizada a seleção direta para a característica. As tendências genéticas para P305, IPP e IDP foram 11,58 kg, -0,30 dias e 0,02 dias, respectivamente. O ganho genético para IPP será maior se for realizada a seleção direta para a característica. O acréscimo de 257,0 kg de leite resultará em 2,7 dias a mais no primeiro intervalo de parto. A estimativa da herdabildiade (h²) para P305 foi de 0,16. Já as PP apresentaram h² média de 0,15, variando entre 0,14 a 0,16. As correlações genéticas entre P305 e PP foram todas igual a unidade. Selecionando 1% dos touros superiores para P305 obteve coincidência de 80% exceto para PP15070% e PP150100%. Para os demais níveis de seleção, as coincidências foram maiores variando de 82 até 100%. Constatou-se que a utilização de lactações projetadas a partir de 150 dias é uma metodologia eficiente na inclusão de informações para análise.