Orientador: Guilherme Duarte Rossi / Resumo: A possibilidade da evolução da resistência dos insetos à maioria dos inseticidas disponíveis e a necessidade por moléculas específicas para o manejo de organismos alvos e não tóxicas ao meio ambiente guiam a contínua busca por novos compostos com atividade inseticida. No presente trabalho, investigamos o potencial da actinobactéria Streptomyces sp. ENT-21 como fonte de moléculas inseticidas sobre lagartas de Diatraea saccharalis (Fabricius) (Lepidoptera: Crambidae), uma importante praga da cana-de-açúcar. Um extrato quitinolítico foi produzido a partir do cultivo de Streptomyces sp. ENT-21 em meio contendo quitina. Este extrato foi fracionado por filtração molecular (Sephadex G25) e separado em amostras proteicas e não proteicas. Os efeitos do extrato quitinolítico bruto e fracionado sobre a taxa de mortalidade e peso das lagartas de D. saccharalis foram avaliados. A adição do extrato quitinolítico bruto de Streptomyces sp. ENT-21 à dieta artificial resultou em 100% de mortalidade das lagartas de D. saccharalis. Após fracionamento a amostra não proteica resultou em maior mortalidade e redução do peso das lagartas em relação à fração proteica. Esses dados sugerem que a atividade quitinolítica não seja o principal modo de ação responsável pela atividade inseticida do extrato quitinolítico. Os dados também sugerem um possível efeito sinérgico entre os composto proteicos e não proteicos presentes no extrato bruto de Streptomyces sp. ENT-21. / Abstract: Insect resistance to most of the available insecticides and the requirement for specific molecules for pest management and safe to the environment guide a continuous search of new insecticidal compounds. In this work, we investigated the potential of the actinobacterium Streptomyces sp. ENT-21 as a source of insecticidal molecules against larval Diatraea saccharalis (Fabricius) (Lepidoptera: Crambidae), an important sugarcane pest. The chitinolytic extract was prepared by cultivating Streptomyces sp. ENT-21 in a chitin containing medium. This extract was fractionated using molecular filtration (Sephadex G25) forming protein and non-protein fractions. The effects of the crude chitinolytic extract as well of the fractions were evaluated over the development of D. saccharalis larvae in bioassays conducted using artificial diet. The addition of the crude chitinolytic extract to the artificial diet used for rearing larval D. saccharalis resulted in 100% of larval mortality. A non-protein fraction resulted in a higher mortality rate and weight reduction over surviving larvae than the protein fraction, suggesting that the chitinolytic activity present in the protein fraction is not the main mode of action involved in the insecticidal activity of the chitinolytic produced extract. Results also suggest a possible synergic effect among protein and non protein compounds in the crude chitinolytic extract from Streptomyces sp. ENT-21. / Mestre

Orientadora: Maysa Furlan / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Marcos Pivatto / Resumo: Cromanos e cromenos são metabólitos secundários comumente encontrados em espécies dos gêneros Piper e Peperomia, pertencentes à família Piperaceae. São caracterizados pela presença de um núcleo benzopirânico (um anel benzeno fundido a um anel pirano). Essa classe de substâncias é importante do ponto de vista farmacológico, uma vez que apresenta vasta gama de atividades biológicas, incluindo antifúngica, tripanocida, antioxidante e antiparasitária. Os benzopiranos isolados de espécies de Piper e Peperomia apresentam diversidade quanto aos substituintes da unidade aromática de suas estruturas químicas. Baseado no exposto, rotas biossintéticas distintas foram propostas. Em espécies de Piper essas rotas envolveriam a via do ácido chiquímico pela atuação do ácido para-hidroxibenzóico, enquanto que em espécies de Peperomia estaria operando a via do acetato. O presente trabalho teve como objetivo estudar a relação biossintética dos benzopiranos presentes nas espécies Piper aduncum e Peperomia obtusifolia, bem como a determinação da dinâmica metabólica envolvida na formação dos mesmos, tanto em nível metabólico como enzimático, uma vez que os cromenos isolados de Piper aduncum descrevem ritmo circadiano bem determinado. Estudos de variação circadiana realizados em Peperomia obtusifolia com o objetivo de acompanhar a formação do cromano ácido 3,4-diidro-5-hidróxi-2,7-dimetil-8-(3-metil-2-butenil)-2-(4-metil-1,3-pentadienil)-2H-1-benzopirano carboxílico (4) não demonstraram ritmo uniforme, do tipo sigmoidal, comum aos cromenos isolados de P. aduncum. O acúmulo do cromano 4 mostrou um máximo às 18h00, mas outros picos de concentração do mesmo foram observados às 06h00 e 15h00 e corroboram para o estabelecimento de um ritmo aleatório. Para a avaliação da origem biossintética de 4, foram realizados experimentos de incorporação utilizando precursor enriquecido... / Abstract: Chromanes and chromenes are secondary metabolites commonly found in species of the genera Piper and Peperomia, belonging to the Piperaceae family. They are characterized by the presence of a benzopyran core showing a benzene ring fused to a pyran ring. This class of compounds is pharmacologically important, since they from shown a broad range of biological activities including antifungal, trypanocidal, antioxidant and anti-parasitic. The benzopyrans isolated from Piper and Peperomia species showed diversity biosynthetic pathways, mainly related to the aromatic moieties. The biosynthesis of Piper species involve the shikimic pathway showing as the first precursor the p-hydroxybenzoic acid, whereas in Peperomia species would be operating the route of acetate. The present work aimed to study the biosynthetic relationship of benzopyrans present in Piper aduncum and Peperomia obtusifolia as well as to determine the metabolic dynamics involved in their formation related to metabolic and enzymatic levels, since the chromenes isolated from Piper aduncum describe well-defined circadian rhythm. Studies of circadian rhythm performed in Peperomia obtusifolia, aiming to follow the formation of chromane 3,4 -dihydro- 5 -hydroxy -2 ,7- dimethyl-8- (3-methyl -2- butenyl) -2 - (4 -methyl -1 ,3- pentadienyl )-2H -1- benzopyran carboxylic acid (4) from P. obtusifolia showed no uniform sigmoidal curve, common to the chromenes isolated from Piper aduncum. The accumulation of the chromane 4 showed a maximum at 18:00 pm, but others peaks of the same concentration were observed at 06:00 am and 15:00 pm, corroborating to establish a random pace. To evaluate the biosynthetic origin of the chromane 4, feeding experiments were conducted using a precursor enriched with stable isotopes (ethyl [2-13C ]-sodium acetate) in the leaves of P. obtusifolia. Experiments were performed using seedlings of P. obtusifolia. The enriched extracts... / Mestre

Orientador: Maria del Pilar Taboada Sotomayor / Banca: Marco Aurelio Cebim / Banca: Mariele Mucio Pedroso / Banca: Bruno Campos Janegitz / Banca: Renata Kelly Mendes Valente / Resumo: O presente estudo está baseado na construção de sensores biomiméticos para determinação sensível e seletiva de dois poluentes, o íon cianeto, que é liberado no ambiente por meio de efluentes da indústria metalúrgica; e o composto 3,4-dicloroanilina, o metabólito do herbicida diuron que causa alteração do sistema endócrino, largamente usado na agricultura. Para o desenvolvimento dos sensores biomiméticos, eletrodos à base de pasta de carbono foram modificados com complexos que mimetizam o sítio ativo das enzimas P450. Os complexos que apresentaram perfil biomimético e melhores resultados na determinação voltamétrica do íon cianeto e do 3,4-dicloranilina, foram respectivamente 1,2,3,4,8,9,10,11,15,16,17,18,22,23,24,25-hexadecafluoro-29H, 31H-ftalocianincacobalto (II) [Co(II)PcF16] e ftalocianinacobre (II) [Cu(II)Pc]. O sensor construído para a determinação do íon cianeto apresentou as melhores respostas utilizando como eletrólito de suporte o hidróxido de sódio 0,5 mol L-1 pH 12,0 e 15% m/m do complexo [Co(II)PcF16], usando a voltametria de onda quadrada a 20 Hz de frequência, 10 mV de amplitude e 10 mV de incremento de potencial. Com os parâmetros otimizados, o sensor apresentou uma faixa linear de resposta de 2,4 x 10-5 mol L-1 a 1,7 x 10-4 mol L-1 e limites de detecção e de quantificação de 1,1 x 10-5 mol L-1 e 3,6 x 10-5 mol L-1, respectivamente. Os melhores resultados obtidos para o sensor desenvolvido para o herbicida 3,4-dicloroanilina foram em solução tampão Britton-Rob... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study is based on the construction of biomimetic sensors for the sensitive and selective determination of two pollutants, the cyanide ion, which is released into the environment through effluents from the metallurgical industry and 3,4-dichloroaniline, the metabolite of the herbicide diuron that causes alteration of the endocrine system, widely used in agriculture. For the development of biomimetic sensors, carbon paste-based electrodes have been modified with complexes that mimic the active site of the P450 enzymes. The complexes that presented biomimetic profile and better analytical performance in the voltammetric determination of cyanide and 3,4-dichloraniline were respectively 1,2,3,4,8,9,10,11,15,16,17,18,22,23,24,25-hexadecafluoro-29H,31H-phthalocyanincobalt (II) [Co(II)PcF16] and phthalocyaninecopper (II) [Cu(II)Pc]. The sensor constructed for the determination of the cyanide ion presented the best responses using sodium hydroxide 0.5 mol L-1 pH 12.0 and 15% w/w of the [Co(II)PcF16] complex as the support electrolyte, using square wave voltammetry at 20 Hz frequency, 10 mV amplitude and 10 mV potential increase (ΔEs). With the optimized parameters, the sensor had a linear response range of 2.4 x 10-5 mol L-1 to 1.7 x 10-4 mol L-1 and limits of detection and quantification of 1,1 x 10-5mol L-1 and 3,6 x 10-5 mol L-1, respectively. The best results for the 3,4-dichloroaniline herbicide were obtained in Britton-Robinson 0.1 mol L-1 pH 5.0 buffer and 15% w/w [Cu(II)Pc] using square wave voltammetry at 30 Hz frequency, 100 mV amplitude and 5 mV potential increase (ΔEs). Under optimized conditions, the sensor presented a linear response range of 2.8 x 10-5 to 3.0 x 10-4 mol L-1 and limits of detection and quantification of 1,1 x 10-5 mol L-1 and 3,7 x 10-5 mol L-1, respectively. The biomimeticity of the sensors were also evaluated, exploring the hyperbolic profile of each response... / Doutor

REIS, Francisco Alex Aragão dos. Prospecção Química de Lippia insignis Moldenke (Verbenaceae). 2016. 86 f. Dissertação (Mestrado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2017-01-13T18:52:00Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_faareis.pdf: 4461757 bytes, checksum: 269b965e657eab3fa10c117f9bfd02de (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-19T13:11:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_faareis.pdf: 4461757 bytes, checksum: 269b965e657eab3fa10c117f9bfd02de (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-19T13:11:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_faareis.pdf: 4461757 bytes, checksum: 269b965e657eab3fa10c117f9bfd02de (MD5) Previous issue date: 2016 / This paper describes the first chemical study of the speciesLippia insignis Moldenke (Verbenaceae), collected in Feira de Santana – BA. From the ethanolic extract of the stems was isolated four compounds: the phenylpropanoid heteroside verbascoside; the lignane isolaricesinol; and the iridoids adoxoside and caryoptoside. From the extract of the leaves was isolated the flavonoid scutellarein 7-O-glucopiranoside. The Nuclear Magnetic Ressonance thecnics (NMR-¹H, ¹³C, COSY, HSQC, HMBC), infrared (IR) and mass spectrometry (MS) as well as the comparison of literature data were used to the structural determination of the isolated metabolites. It was the first relate of the isolated iridoid adoxoside in the genre Lippia. All the isolated compounds have pharmacological activity related in the literature. The chemical study of L. insignis species corroborates to a better understanding of the chemotaxonomy of genus Lippia, confirming the chemical profile of the genre and putting the species as a new source of bioactive molecules. / Este trabalho descreve o primeiro estudo químico realizado na espécie Lippia insignis Moldenke (Verbenaceae), coletada em Feira de Santana – BA. Do extrato etanólico do caule isolou-se quatro metabólitos secundários: o heterosídeo fenilpropanoídico verbascosídeo, a lignana isolaricesinol, e os iridóides adoxosídeo e carioptosídeo. Do extrato metanólico das folhas isolou-se o flavonóide escutellareína 7-O-glucopiranosídeo. Para a identificação dos metabólitos foram utilizadas as técnicas de Ressonância Magnética Nuclear unidimensionais (RMN-¹H e ¹³ C) e técnicas bidimensionais (COSY, HSQC, HMBC), infravermelho (IV) e espectrometria de massa (EM), bem como comparação com dados da literatura. O iridóide adoxosídeo está sendo relatado pela primeira vez no gênero Lippia. Todos os compostos isolados dessa espécie já possuem alguma atividade farmacológica descrita na literatura. O estudo químico de L. insignis corrobora para um maior conhecimento da quimiotaxonomia do gênero Lippia, confirmando o perfil químico do gênero e colocando a espécie como uma nova fonte de moléculas bioativas.

Velho, Ana Luiza Malhado Cazaux de Souza. Estratégias para o estudo de marcadores moleculares da fertilidade em modelos animais: perfil metabolômico do plasma seminal em touros e expressão da integrina subunidade beta 5 no espermatozoide, oócito e embrião bovino. 2017. 107 f. Tese (Tese em Zootecnia) – Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Francisca Gomes (francisbeserra@yahoo.com.br) on 2017-08-14T13:56:09Z No. of bitstreams: 1 2017_Tese_ almcsvelho.pdf: 2322234 bytes, checksum: 1d6b25f3dfd84db9848f1c12ca33f383 (MD5) / Approved for entry into archive by Weslayne Nunes de Sales (weslaynesales@ufc.br) on 2017-08-14T14:21:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_Tese_ almcsvelho.pdf: 2322234 bytes, checksum: 1d6b25f3dfd84db9848f1c12ca33f383 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-14T14:21:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_Tese_ almcsvelho.pdf: 2322234 bytes, checksum: 1d6b25f3dfd84db9848f1c12ca33f383 (MD5) Previous issue date: 2017 / Metabolites and proteins including integrins are important in the reproductive physiology of animals and humans. However, seminal plasma metabolites that are associated with bull fertility are still unknown and the possible roles of the integrin subunit beta 5 (ITGβ5) in fertilization and embryonic development of bovine are not yet known. Therefore, the objectives of the present study were (1) to determine comprehensive metabolome of seminal plasma from Holstein bulls with differing fertility scores, and (2) to ascertain potential metabolites as biomarkers associated with bull fertility, (3) to evaluate expression of ITGβ5 in sperm, oocytes and early bovine embryos, and (4) to ascertain the evolutionary conservation of ITGβ5. In the study 1, chromatography-mass spectrometry (GC-MS) was employed to determine seminal plasma metabolome from 16 Holstein bulls with two fertility scores. Soon after, data were evaluated using multivariate and univariate analyses. Bioinformatics analyzes were performed in order to identify metabolic pathways associated with bull’s seminal plasma metabolites. Our results showed that 63 metabolites were identified in bull seminal plasma. Fructose was the most abundant metabolite detected followed by citric acid, lactic acid, urea, and phosphoric acid. Androstenedione, 4-ketoglucose, D-xylofuranose, 2-oxoglutaric acid and erythronic acid were the least predominant metabolites found in bull’s seminal fluid. PLS-DA showed a distinct separation between high and low fertility bulls as regard to scores plot. Metabolites with the greatest VIP score (VIP > 2) were 2-oxoglutaric acid and fructose. Heat-map analysis based on VIP score and univariate analysis indicated that 2-oxoglutaric acid was less (P = 0.02) and fructose was significantly greater (P = 0.02) in high-fertility bulls as compared to low-fertility bulls. To the best of our knowledge the current study is the first to identify the comprehensive metabolomic profiling of bull seminal plasma with differing fertility score and to present the potential of metabolites such as 2-oxoglutaric acid and fructose as biomarkers of bull fertility using GC-MS. In the study 2, expression levels of ITGβ5 protein in bull sperm were evaluated by western blotting. Real time-qPCR was carried out to evaluate the expression levels of ITGβ5 transcripts in oocytes and embryos from bovine species. In addition, bioinformatic tools were performed to determine to evolutionary conservation of ITGβ5 across species. Western blotting results showed the presence of ITGβ5 on bull spermatozoa. Moreover, RT-qPCR results demonstrated that ITGβ5 is present in bovine oocytes and that ITGβ5 levels were significantly higher in 2-cell embryos and 8-16 cell embryos. Bioinformatics analyses showed that ITGβ5 is conserved across species. Therefore, our results showed the presence of ITGβ5 in spermatozoa as well as oocytes and embryos in early stages of development, suggesting an important role of ITGβ5 upon fecundation and early embryo development in the bovine species. / Os metabólitos e as proteínas, incluindo as integrinas, são importantes na fisiologia reprodutiva de animais e seres humanos. Entretanto, ainda são desconhecidos os metabólitos do plasma seminal que estão associados com a fertilidade de touros e ainda não se sabe os possíveis papéis da integrina subunidade beta 5 (ITGβ5) na fecundação e no desenvolvimento embrionário de bovinos. Assim sendo, os objetivos do presente trabalho foram: (1) determinar o metaboloma do plasma seminal de touros com diferentes escores de fertilidades, (2) identificar metabólitos que demonstram ser potenciais marcadores de fertilidade em touros, (3) avaliar a expressão da ITGβ5 em espermatozoides, oócitos e embriões bovinos em fases iniciais de desenvolvimento e, (4) verificar a conservação evolutiva da ITGβ5 por meio de ferramentas de bioinformática. No estudo 1 foi utilizada a técnica de cromatografia gasosa associada à espectrometria de massas (CG-EM) para determinar o metaboloma do plasma seminal de 16 touros com alta e baixa fertilidade. Em seguida, os dados foram submetidos a análise estatística multivariada e univariada. A partir destes resultados, análises de bioinformática foram realizadas a fim de identificar as vias metabólicas associadas com o metaboloma do plasma seminal desses touros. Sessenta e três metabólitos foram identificados no plasma seminal de touros com diferentes escores de fertilidade. A frutose foi detectada como o metabólito mais abundante, seguido pelo ácido cítrico, ácido lático, ureia e ácido fosfórico. Já androstenediona, 4-cetoglicose, D-xilofuranose, ácido 2-oxoglutárico e o ácido eritrônico foram os metabólitos menos abundantes do fluído seminal de touros. A Análise Discriminante por Mínimos Quadrados Parciais (PLS-DA) revelou uma separação distinta entre os touros de alta e de baixa fertilidade. Os metabólitos com as maiores pontuações de Importância da Variável na Projeção (VIP > 2) foram o ácido 2-oxoglutárico e a frutose. A análise do mapa de calor (heatmap), com base na pontuação de VIP, e as análises univariadas indicaram que o ácido 2-oxoglutárico foi significativamente menor (P = 0,02) e a frutose foi significativamente maior (P = 0,02) em touros de alta fertilidade comparados aos touros de baixa fertilidade. O presente estudo foi o primeiro a identificar o perfil metabolômico do plasma seminal de touros empregando a CG-EM e o primeiro a mostrar o ácido 2-oxoglutárico e a frutose como potenciais biomarcadores de fertilidade em touros. No estudo 2, os níveis de expressão da proteína ITGβ5 em espermatozoide de touros foi avaliada pela técnica de western blotting. A reação de transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR) foi empregada para avaliar os níveis de expressão de transcritos da ITGβ5 em oócitos e embriões bovinos. Além disso, ferramentas de bioinformática foram utilizadas com o intuito de determinar a conservação evolutiva da proteína ITGβ5 entre várias espécies. Os resultados do western blotting confirmaram a presença da proteína ITGβ5 em espermatozoides de touros e, com base nas análises de RT-qPCR, foi observado que a ITGβ5 está presente nos óocitos e que os níveis dela são significativamente mais elevados nos embriões bovinos de 2 células, seguidos pelos embriões de 8-16 células. As análises de bioinformática mostraram que a ITGβ5 é conservada em várias espécies. Desta forma, nossos resultados demonstram a presença da ITGβ5 em espermatozoides, bem como em oócitos e embriões bovinos em estágios iniciais se desenvolvimento, sugerindo um importante papel da ITGβ5 na fecundação e no desenvolvimento embrionário inicial desta espécie.

SOUSA, Debora Bezerra de. Estudo do potencial químico de Fusarium udum. 2017. 139 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Celia Sena (celiasena@dqoi.ufc.br) on 2017-11-07T20:09:55Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-11-07T22:59:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T22:59:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) Previous issue date: 2017 / The present study aims to investigate the chemical potential of Fusarium udum, an endophytic fungus isolated from Chrotalaria paulinea, which is responsible for causing damage to bean planting and species of Chrotalaria. The fungus was cultivated in four distinct culture media: PD (potato-dextrose), PDY (potato-dextrose-yeast), MPD (malt-peptone-dextrose), and Czapek. The culture time was determined by the glucose rate of the culture medium. The ethyl acetate extract from the microorganism cultivated in MPD (25 days) was selected for the pre-liminary chromatographic treatment, and led to the isolation of tyrosol, fusaric acid, and monaspilosin. In another experiment that used the culture media mentioned above, F. udum produced secondary metabolites through different days of incubation (7, 14, 21, 28 days). The chromatographic fractionation of the ethyl acetate extract from the microorganism cultured in PDY (28 days) provided cycle (L-Pro-L-Leu) and triptophol. The micellar extract obtained in this culture was also studied and it supplied the substance adenosine. Usual chromatographic techniques, including liquid-liquid partition, C-18 cartridge chromatography, and high perfor-mance liquid chromatography (HPLC), were used to isolate the secondary metabolites. The structural characterization was conducted by using the spectrometric techniques mass spec-trometry (MS) and nuclear magnetic resonance (NMR) with one and two-dimensional experi-ments and comparison with literature data. / O presente trabalho objetiva a investigação do potencial químico de Fusarium udum, um fungo endofítico isolado de Chrotalaria paulinea, e responsável por causar danos a plantações de feijão e em espécies de Chrotalaria. O fungo foi cultivado em quatro meios de cultura distintos: BD (batata-dextrose), BDL (batata-dextrose-levedura), MPD (malte-peptona-dextrose) e Czapek, sendo o tempo de cultivo determinado pela taxa de glicose do meio. O extrato AcOEt do micro-organismo cultivado em meio MPD (25 dias) foi selecionado para o tratamento cromatográfico preliminar, levando ao isolamento do tirosol, ácido fusárico e monaspilosina. Em um outro experimento, e utilizando os meios de cultivo mencionados, F. udum teve a produção dos metabólitos secundários acompanhada através de diferentes dias de incubação (7, 14, 21, 28 dias). O fracionamento cromatográfico do extrato AcOEt do micro-organismo cultivado em meio BDL (28 dias) forneceu a dicetopiperazina ciclo (L-Pro-L-Leu) e o triptofol. O extrato micelar obtido neste cultivo também foi estudado e forneceu a adenosina. Técnicas cromatográficas usuais, incluindo partição líquido-líquido, cromatografia em cartucho C-18 e cromatografia de alta eficiência (CLAE) foram utilizadas para o isolamento dos metabólitos secundários, enquanto que a caracterização estrutural foi possível através do uso de técnicas espectrométricas utilizando espectrometria de massa (EM) e ressonância magnética nuclear (RMN) com experimentos uni e bidimensionais, além de comparação com dados da literatura.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Algas e Plantas, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:07:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334511.pdf: 2300650 bytes, checksum: 6747c7df4c3183ffa477f50adaa3eda4 (MD5) Previous issue date: 2015 / Passiflora setacea e P. tenuifila são espécies silvestres de maracujás endêmicas do Brasil, com importantes propriedades medicinais. A P. setacea apresenta também potencial para o mercado consumidor devido à qualidade de seus frutos e a P. tenuifila tem sido indicada para o melhoramento genético. A produção de metabólitos secundários via cultura de tecidos in vitro tem sido investigada como uma alternativa à utilização de plantas produzidas no campo, pois oferece ferramentas para promover a otimização da produção. Assim, os objetivos deste estudo foram: analisar a histologia de calos de P. setacea induzidos em 2,4-D; determinar efeitos de diferentes concentrações de ANA e fontes de Carbono, quanto à morfo-histologia, ultraestrutura e teores de metabólitos de calos de P.tenuifila e; caracterizar, com base na ultraestrutura, como a Matriz Extracelular (ME) determina a desintegração das células dos calos friáveis de espécies de Passilfora. Para o estudo sobre indução e histologia, amostras de calos de P. setacea e P. tenuifila, obtidos a partir de diferentes tipos de explantes e meios de cultivo in vitro, foram fixadas em glutaraldeído 2,5% com tampão fosfato de sódio 0,1M, pH 7,2 e desidratadas. Para MO, amostras foram infiltradas em hidroxietilmetacrilato, seccionadas em micrótomo, coradas com azul de toluidina ou submetidas à reação com vermelho de rutênio, para identificar substâncias pécticas. Para análise em MEV, amostras foram secas em ponto crítico de CO2 e, para análise em MET, amostras de calos de P.tenuifila foram pós-fixadas em tetróxido de ósmio, infiltradas em resina Spurr, seccionadas em ultramicrótomo, contrastadas com Acetato de Uranila e Citrato de Chumbo. Calos de P. tenuifila com 45 dias foram coletados para determinar: percentagem de explantes que induziram calos, teor de água, acúmulo de biomassa, análise de metabólitos, atividade antioxidante por DPPH e a dosagem de clorofila. A percentagem mais elevada de explantes que formaram calos de P. setacea foi observada em 2,5 e 5,0 µM de 2,4-D. Calos obtidos a partir de segmentos de hipocótilo em 5,0 µM de 2,4-D e de segmento nodal foliar em 2,5 µM de 2,4-D mostraram características histológicas indicando grande potencial para morfogênese e produção de metabólitos secundários. Em estudo com calos de P. tenufila, todas as fontes de carbono e concentrações de ANA permitiram altas22percentagens de produção de calos, sem diferenças entre os tratamentos. Todos os calos apresentaram textura friável e características histológicas similares. Compostos fenólicos, flavonóides e carotenóides (luteína, zeaxantina e a-caroteno) foram detectados em calos de P. tenuifila. Atividade antioxidante não foi registrada. As características histológicas observadas sugerem que os calos de P.tenuifila, com 45 dias de cultivo, estavam em estádio inicial. No estudo sobre a ME verificamos sua constituição péctica. A superfície dos calos estava revestida com ME membranosa, com aspecto liso externamente e granular ou fibrilar internamente. O aspecto granular ou fibrilar decorre da desconexão entre células. A presença de golgi, vesículas na periferia da célula e evidências da liberação de substâncias e dissociação intercelular foram registradas ultraestruturalmente e sugerem que a consistência friável dos calos de Passiflora é resultante da desconexão das células periféricas.<br> / Abstract : Passiflora setacea and P. tenuifila are wild species of endemic passion fruit in Brazil, with important medicinal properties. P. setacea has also potential for the consumer market due to the quality of its fruit and P. tenuifila has been used for the genetic improvement. The production of secondary metabolites through in vitro tissue culture has been investigated as an alternative to the use of plants produced in the field, it provides tools for promoting the production optimization. The objectives of this study were to analyze the histology of P. setacea callus induced in 2,4-D; examine the effects of different concentrations of NAA and carbon sources in the morphological- histology, ultrastructure and level of metabolites in P.tenuifila callus and; to characterize, based on ultrastructure, how the Extracelular Matrix (EM) determines the disintegration of cells in friable callus of Passilfora species. For the study of induction and histology, samples of P. tenuifila and P. setacea callus, obtained from differents types of explants and in vitro culture media were fixed in 2.5% glutaraldehyde in sodium phosphate buffer 0, 1M, pH 7.2 and dried. For OM, the samples were infiltrated in methacrylate, sectioned with a microtome, stained with toluidine blue or subjected to reaction with ruthenium red to identify pectic substances. For SEM analysis, samples were dried in a critical point of CO2, and for TEM analysis, samples P.tenuifila callus were post-fixed in osmium tetroxide, infiltrated in Spurr resin, sectioned with ultramicrotome, contrasted with uranyl acetate and lead citrate. P.tenuifila calllus were collected with 45 days to determine: percentage of explants that to induced callus, water content, biomass accumulation, analysis of metabolites, antioxidant activity and measurement of chlorophyll. The highest percentage of explants that to induced P. setacea callus was observed at 2.5 and 5.0 uM of 2,4-D. Callus from hypocotyl segment in 5.0 µM 2,4-D and from leaf nodal segment in 2.5 µM 2,4-D showed histological characteristics indicate great potential for morphogenesis and secondary metabolite production. In the study with P. tenufila callus, all sources of carbon and NAA concentrations allowed high induction percentages, without differences between treatments. All callus showed friable texture and similar histological characteristics. Phenolic compounds, flavonoids and carotenoids (lutein, zeaxanthin and a-carotene) were detected in P. tenuifila callus.24Antioxidant activity wasn`t recorded. The histological characteristics suggest that P.tenuifila callus with 45 days were in inicial stage. In the study about the EM we found your pectic constitution. The surface of the callus was coated with EM membranous, with smooth appearance externally and granular or fibrillar internally. The granular or fibrillar aspect stems from the disconnect between cells. The presence of Golgi, vesicles at the periphery of the cell and evidence of release of substances and intercellular dissociation were recorded by ultrastructure study and suggest that the Passiflora friable callus is the result of disconnection of peripheral cells.

BRANCO, Karoliny Farias Castelo. Impacto da restrição alimentar sobre os parâmetros biometricos, hormonais e metábolicos de ovinos Santa Inês. 2015. 51 f. Dissertação (mestrado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-05T19:38:55Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_kfcbranco.pdf: 1130996 bytes, checksum: fbd5efcef36975da8442760b524bad9c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-24T22:47:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_kfcbranco.pdf: 1130996 bytes, checksum: fbd5efcef36975da8442760b524bad9c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-24T22:47:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_kfcbranco.pdf: 1130996 bytes, checksum: fbd5efcef36975da8442760b524bad9c (MD5) Previous issue date: 2015 / The present study aimed to evaluate biometric measurements and blood and hormonal parameters of Santa Ines lambs. Thirty lambs with an average live weight of 13.0 ± 1.49 kg and 60 days of age were used to estimate glucose, cholesterol, β-hydroxybutyrate, urea N, total protein, albumin, globulin, chloride, calcium, phosphorus, magnesium, and leptin, insulin, and thyroxine (T4) hormones. Lambs were assigned to a randomized complete design in a 3 × 2 factorial arrangement consisting of three levels of food restriction (FR) (control, 30%, and 60%), three collection periods corresponding the age of the animals (14, 18, and 23 weeks of age), and two sex categories (castrated and uncastrated). Blood was collected by jugular venipuncture in the three collection periods. For biometric measurements, a randomized complete design in a 3 × 2 factorial arrangement was adopted, taking into account restriction levels and sex categories. Measurements were taken every two weeks throughout the experimental period. The hormone thyroxine was not influenced by age, diet, or sex category. Leptin and insulin increased with the animal age (P <0.01). Glucose concentrations decreased as the FR level were increased (P <0.001). β-hydroxybutyrate concentrations increased as the food restriction was increased (P <0.001). Urea nitrogen was influenced by age and experimental diet (P <0.001), and there was an age × sex category interaction effect (P <0.01). Concentrations of total cholesterol and total proteins were not influenced by experimental treatments (P <0.05), but albumin and globulin were influenced by age (P <0.001, P <0.01). Plasma concentrations of chloride, calcium, magnesium, and phosphorus varied significantly according to age. Animals subjected to FR grew at a slower rate, and the negative influence was more pronounced at 60% FR. At 30% FR, the growth rate decline was more noticeable at 100 days of age for body weight (BW); at 130 days for body condition score (BCS) and chest girth (CG); at 145 days for rump height (RH); and at 160 days for rump length (RL) and breast width (BW). Pearson's correlation analysis showed biometric measurements are co-dependent on the feeding level because correlations were high and significant in control animals (r = 0.61 to 0.95). It is concluded that the metabolic parameters were more influenced by age than by diet, and food restriction affects the metabolic and hormonal profiles, in particular β-hydroxybutyrate and insulin. Body condition score, body weight, and breast width were the most significantly affected by FR parameters. / Objetivou-se com o presente estudo avaliar a biometria, parâmetros sanguíneos e hormonais de cordeiros Santa Inês. Foram utilizados 30 cordeiros com peso vivo médio inicial de 13,0 ± 1,49 kg e aproximadamente 60 dias de idade para estimativa daglicose, colesterol, β- hidroxibutirato, N- ureico, proteínas totais, albumina, globulina, cloreto, cálcio, fósforo, magnésio e os hormônios leptina, insulina e tiroxina (T4). Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 3 x 2, que consistia detrês níveis de restrição alimentar (RA) (controle, 30% e 60%), três períodos de coleta correspondente à idade dos animais (14, 18 e 23 semanas de idade) e duas classes sexuais (castrados e não castrados). O sangue foi coletado por punção da veia jugular nos três períodos de coleta. Para as medidas biométricas utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 2, levando-se em consideração os níveis de restrição e as classes sexuais. As medidas foram realizadas quinzenalmente durante todo período experimental.O hormônio Tiroxina não foi influenciado pela idade, dieta ou classe sexual. Já a leptina e a insulina aumentaram com a idade dos animais (P<0,01). As concentrações de glicose diminuíram de acordo com o aumento do nível de RA (P<0,001). As concentrações de BHB foram maiores à medida que se aumentou a restrição alimentar (P<0,001). O N-ureico foi influenciado pela idade e dieta experimental (P< 0,001) e houve interação idade X classe sexual (P<0,01). As concentrações de colesterol total e proteínas totais não foram influenciadas pelos tratamentos experimentais (P<0,05), entretanto a albumina e globulina foram influenciadas pela idade (P<0,001; P<0,01). As concentrações plasmáticas de cloretos, cálcio, magnésio e fósforo variaram significativamente em função da idade. Os animais submetidos à RA cresceram em ritmo mais lento, sendo que, a influencia negativa foi mais acentuada no R60 (60% de RA). No R30 (30% de RA), o ritmo de crescimento diminuído foi mais perceptível com 100 dias de idade no peso corporal (PC), com 130 dias no escore de condição corporal (ECC) e perímetro torácico (PT), com 145 dias na altura de garupa (AG) e com 160 dias no comprimento de garupa (CG) e largura de peito (LP). A análise da correlação de Pearson mostra que as medidas biométricas são co-dependentes do nível de alimentação do animal, pois as correlações foram altas e significativas nos animais controle (r= + 0,61 a 0,95). Conclui-se que os parâmetros metabólicos foram influenciados mais pela idade do que pela dieta e que a restrição alimentar afeta o perfil metabólico e hormonal, em especial o β-hidroxibutirato e a insulina. O escore de condição corporal, peso corporal e largura de peito foram os parâmetros mais sensivelmente influenciados pela RA.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2016-04-19T04:01:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015Bitstream added on 2016-05-24T17:34:50Z : No. of bitstreams: 1 337988.pdf: 1078258 bytes, checksum: 1deebfb19ce1d7e97d60c8c8afe53a49 (MD5) / A grande diversidade de metabólitos secundários produzidos por basidiomicetos, especialmente aqueles cultivados in vitro, tem ampliado o campo da biotecnologia visando à produção de compostos antimicrobianos. O objetivo desse estudo foi analisar os extratos de isolados do fungo Pisolithus microcarpus (Cooke e Massee) G. Cunn. coletados em duas áreas distintas (degradada pela exploração de carvão e não degradada) quanto a sua capacidade de inibir o crescimento de bactérias potencialmente patogênicas. Inicialmente os fungos foram cultivados em meio Merlin Norkrans Modificado (MNM) durante o período de 30 dias. Após verificado crescimento, foi feita a extração metanólica do micélio e do meio de cultura. O solvente foi evaporado utilizando evaporador rotatório e o extrato resultante foi particionado com acetato de etila e butanol. Os ensaios de difusão em disco foram feitos utilizando os extratos metanólicos e as frações frente a seis estirpes bacterianas: Staphylococcus aureus (ATCC 25923 e ATCC 6538P), Escherichia coli (ATCC 25922 e ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Enterococcus faecalis (ATCC 29212). As placas foram incubadas a 37 ºC por 24 h e a atividade antibacteriana determinada pela formação de halos de inibição no entorno dos discos. Um dos isolados coletado na região carbonífera de Santa Catarina demonstrou atividade antibacteriana frente à S. aureus, pela formação de halos de 18 mm de diâmetro e frente à P. aeruginosa, com halos de 17 mm de diâmetro. Para a separação dos compostos presentes nas frações ativas foi realizada cromatografia em camada delgada, utilizando diversos sistemas de solventes. A análise qualitativa de alcaloides, flavonoides e esteroides indicaram a presença de flavonoides nos extratos, enquanto a análise quantitativa de fenólicos, flavonoides, DPPH e potencial redutor demonstrou a baixa capacidade antioxidante do fungo. Os espectros de ressonância magnética nuclear e de infravermelho demostraram que a fração acetato de etila contém hidrocarbonetos aromáticos, aldeídos e hidrogênios ligados a carbonos e oxigênios, características indicadoras de triterpenos. Os resultados indicam que novos estudos devem ser realizados a fim de identificar esses compostos visando potenciais aplicações biotecnológicas.<br> / Abstract : The great diversity of secondary metabolites produced by basidiomycetes, especially those cultivated in vitro, has opened a broad biotechnological field aiming at the production of antimicrobial compounds. The aim of this study was to analyze the extracts from isolates of the fungus Pisolithus microcarpus (Cooke e Massee) G. Cunn. collected from two distinct areas (coal-mined degrades and non-degraded), for their ability to reduce the growth of potentially pathogenic bacteria. The fungi were initially grown in modified Merlin Norkrans Medium (MNM) during 30 days. After significant growth, a methanolic extraction of the mycelium was performed. The solvent was evaporated using a rotatory evaporator and the resulting extract partitioned using ethyl-acetate and butanol. A disk diffusion assay was performed against six bacterial isolates using the methanolic extracts and fractions: Staphylococcus aureus (ATCC 25923 and ATCC 6538P), Escherichia coli (ATCC 25922 and ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) and Enterococcus faecalis (ATCC 29212). Assay plates were incubated at 37 ºC during 24 h. The antibacterial activity was determined through the formation of inhibition zones around the discs. One isolate collected from the coalfields of Santa Catarina showeed antibacterial activity by forming inhibition zones (18 mm) for S. aureus, and (17 mm) for P. aeruginosa. Thin-layer chromatography was performed with different solvents in order to separate compounds present in the active fractions. Qualitative analysis of alkaloids, flavonoids and steroids indicated the presence of flavonoids in the extracts. Qualitative analyses of phenolics, flavonoids, DPPH and reducing potential showed a low antioxidant activity for the fungus. Nuclear magnetic resonance spectra and infrared spectroscopy showed that the ethyl acetate fraction contains aromatic hydrocarbons, aldehydes and hydrogens attached to carbons and oxygens, an indicator feature of triterpenes. The results indicate that further studies should be conducted to identify these compounds, targeting at future biotechnological applications.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-21Bitstream added on 2014-11-10T11:58:20Z : No. of bitstreams: 1 000773460_20150321.pdf: 1008813 bytes, checksum: deba55d68e74350057c6c524e3e7c525 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-03-27T11:50:06Z: 000773460_20150321.pdf,Bitstream added on 2015-03-27T11:50:37Z : No. of bitstreams: 1 000773460.pdf: 2111669 bytes, checksum: 1ac861fe88f214a1b60524e27ada9a8d (MD5) / Atualmente, avançadas tecnologias têm sido desenvolvidas para a exploração de fontes naturais pouco exploradas (exemplo: rizosfera e suas interações microbianas e organismos marinhos), visando novos agentes quimioterapêuticos. Neste trabalho, plântulas de Senna spectabilis foram cultivadas em hidroponia, com coleta da microflora da rizosfera realizada em três tempos diferentes de desenvolvimento do vegetal. No total, foi possível o isolamento de 51 bactérias e 129 fungos e, após identificação por filogenia (16S rRNA), encontrou-se, como principais gêneros: Shigella, Pseudomonas, Stenotrophomonas, Bacillus, Burkholderia, Pseudoxanthomonas, Arthrobacter, Achromobacter e Rhizobiu. Foram escolhidas três bactérias, codificadas como CSP-50a, CSP-52b e CSP-53b, para o estudo cinético bacteriano, visando à relação do crescimento com a produção metabólica. A análise mostrou que as bactérias atingiram a fase estacionária em 40 horas, período em que há produção de metabólitos secundários. Para a caracterização dos metabólitos, as três linhagens foram inoculadas em meio líquido Nutriente à 25 °C, sob agitação e, ao atingir a fase de interesse, foi realizada partição líquido-líquido com acetato de etila. Os extratos foram analisados por espectrômetria de massas visando a detecção e caracterização dos metabólitos majoritários. Foi possível detectar 08 compostos e identificar 02. Dentro desse o ácido metropheno e, uma uma série isomérica de amidas e formamidas foram evidenciadas. Adicionalmente, a presença da série foi também confirmada através de uso de uma metodologia de desreplicação preliminar utilizando RMN. / Nowadays, advanced technologies are developed for the discovery of unexplored natural sources (e.g. rhizosphere microbial interaction and marine organisms), targeting new chemotherapeutic agents. In this work, Senna spectabilis’s seedlings were cultivated in hydroponic environment, and its rhizosphere’s microflora collected at three different stages of the plant’s development. It was possible to isolate 51 bacterias and 129 fungi and, after identification by phylogenetic (16S rRNA), was determined the main genders, such as Shigella, Pseudomonas, Stenotrophomonas, Bacillus, Burkholderia, Pseudoxanthomonas, Arthrobacter, Achromobacter and Rhizobiu. We chose three of bacterias, coded as CSP-50a, CSP-52b and CSP- 53b, for kinetic’s studies, aiming the comparison between the bacteria growth and the production of metabolites. This analysis showed that they reached the stationary phase at an average of 40 hours, when the production of secondary metabolites started. To characterize those metabolites, the three strains were grown on liquid nutrient medium at 25°C under agitation to achieve the phase of interest, followed by liquid-liquid partition with ethyl acetate. Analysis by mass spectrometry was performed aiming the detection and characterization of the major metabolites. It was possible to detect 08 compounds and identify 02. Metrophene acid, as well as an isomeric formamide series were detected. Additionally the formamides were also confirmed by the use of a preliminary methodology using NMR dereplication tool.