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Evolução das vias de controle do desenvolvimento tecidual em holometábolos / Evolution of the control pathways of tissue development in holometabolous insects

Monfardini, Raquel Dietsche 10 December 2018 (has links)
A extensão da fase larval em decorrência de danos nos discos imaginais é um mecanismo de controle do desenvolvimento observado em diversas espécies de insetos. Em Drosophila melanogaster, esse mecanismo é regulado pela proteína Ilp8, porém não há estudos que buscam compreender como o gene ilp8 evoluiu bem como essa resposta é controle é regulada em outros insetos. Este trabalho foi um dos primeiros passos para compreendermos como ocorre a regulação do desenvolvimento. O primeiro passo foi determinar quais espécies de insetos possuem homólogos ao ilp8 de D. melanogaster. Por meio de buscas em bancos de dados disponíveis publicamente foi possível encontrar esse gene nos principais grupos de dípteros, sugerindo que sua origem tenha ocorrido durante a diferenciação de Brachycera. Nesse contexto, para avaliarmos se o ilp8 já estava associado com a regulação do desenvolvimento, foram realizados ensaios de dano tecidual associados com RNA-seq em espécies com (D. melanogaster, Chrysomya megacephala e Hermetia illucens) ou sem (Manduca sexta) homólogos ao ilp8. Com essa abordagem, foi possível estudar a variação na expressão global em resposta ao dano causado. Ainda que as quatro espécies estudadas apresentavam extensão do período larval em decorrência do dano nos discos imaginais, apenas D. melanogaster apresentou aumento na expressão do ilp8 nas larvas com dano. Esse resultado parece indicar que, apesar de ser relativamente antigo, a associação da proteína Ilp8 com a sinalização do dano durante o desenvolvimento só aconteceu após a diferenciação de Drosophila / The metamorphosis delay due to tissue damage in imaginal discs is a control mechanism of larval development observed in several species of insects. This mechanism is regulated by the Ilp8 protein in Drosophila melanogaster, but there are no studies about how the ilp8 gene evolved, and how this mechanism is regulated in other insects. The objective of this project is to understand how the metamorphosis delay evolved as a control mechanism of tissue development. The first step was to determine which insect species have homologs of the ilp8 gene of D. melanogaster. By searching publicly available databases it was possible to find this gene in the main dipteran groups, suggesting that it is an inovation of the Brachycera group. To understand the evolution of the relationship between ilp8 and the tissue-damage-dependent delay in metamorphosis, we performed tissue damage assays associated with RNA-seq in species with (D. melanogaster, Chrysomya megacephala and Hermetia illucens) or without (Manduca sexta) ilp8 homologues. With this approach it was possible to study the global expression variation in response to the tissue damage. Although the four species studied delayed metamorphosis upon treatment with the DNA-damaging agent EMS, only D. melanogaster showed a detectable increase of the ilp8 expression in the damaged larvae. These results indicate that the metamorphosis-delay function of the ilp8 gene evolved relatively late during its evolution, when Drosophila differentiated from other Brachycera
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Metabolismo de triptofano em melanomas: o que dizem as células do microambiente? / Tryptophan metabolism in melanomas:what do microenvironment cells can say?

Clara, Renan Orsati 25 February 2015 (has links)
O melanoma é composto por células malignas e também por um estroma de sustentação que inclui fibroblastos, células imunológicas, endoteliais, matriz extracelular, dentre outros fatores. Assim, os tumores não são entidades independentes, eles interagem ativamente com o microambiente adjacente de forma bidirecional através de sinais moleculares que modulam o fenótipo maligno. Um dos sinais bioquímicos para desenvolvimento desse fenótipo se dá pelo catabolismo de Trp pela via das quinureninas, que gera compostos com diversas atividades biológicas, que no tumor estão envolvidas com tolerância e imunoescape e, logo, com prognóstico ruim para os pacientes. Até o presente momento apenas o consumo de Trp e a formação de um único metabólito, a quinurenina (KYN), tem sido associada a malignidade dos melanomas. A fim de ampliar e elucidar os mecanismos bioquímicos do metabolismo desse aminoácido em melanomas, estudamos mais de quinze compostos de todas as rotas catabólicas de Trp em células da pele, células imunológicas, linhagens tumorais e amostras clínicas de melanoma. De forma inédita pudemos observar que as células da pele tem maior habilidade de sintetizar KYN quando comparadas às linhagens tumorais, demonstrando que o catabolismo de Trp peritumoral pode ser responsável pelos fenômenos de imunotolerância e escape. Além disso, o metabolismo de Trp pode estar envolvido nos mecanismos de homeostasia da pele, já que especificamente essas células produzem compostos com atividade biológica nesse órgão. As células imunológicas possuem um perfil metabólico completamente diferente umas das outras: monócitos, macrófagos e dendríticas possuem maior ativação da via KYN enquanto linfócitos e neutrófilos possuem maior indução da rota que gera serotonina e melatonina. Mesmo nos diferentes fenótipos de macrófagos, M1 e M2a, foram observadas marcações especificas de metabolismo, que podem estar relacionadas às atividades anti- ou pró-tumoral dessas células no microambiente. Em amostras clínicas, apesar da principal diferença entre nevos e melanomas ser a concentração de KYN, diversas outras alterações no metabolismo de tiptofano foram observadas, o que mostra a complexa magnitude deste metabolismo na fisiopatologia da pele / Melanoma is composed of malignant cells and also by a stromal support that includes fibroblasts, immune cells, endothelial cells, extracellular matrix, among other factors. Thus, tumors are not separate entities; they actively interact with the surrounding microenvironment bi-directionally through molecular signals that modulate the malignant phenotype. One of biochemical signals for the development of this phenotype occurs by Trp catabolism through kynurenine pathway, that generates compounds with diverse biological activities, which in tumors are involved with tolerance and imunoescape and therefore with poor prognosis for patients. To date only the consumption of Trp and formation of a single metabolite, kynurenine (KYN), has been associated with malignant melanomas. In order to enlarge and clarify the biochemical mechanisms of this amino acid metabolism in melanomas, we have studied more than fifteen compounds of all catabolic routes of Trp in skin cells, immune cells, tumor cell lines and clinical samples of melanoma. In an unique way we could observe that the skin cells has superior ability to synthesize KYN when compared to tumor cell lines, demonstrating that the peritumoral catabolism of Trp may be responsible for the phenomena of immune tolerance and escape. Furthermore, the Trp metabolism may be involved in skin homeostasis mechanisms, since these cells produce specific compounds with biological activity in this organ. The immune cells have a completely different metabolic profile among them: monocytes, macrophages and dendritic cells have greater KYN pathway activation, and lymphocytes and neutrophils possess greater induction of the route that generates serotonin and melatonin. Even in different macrophages phenotypes, M1 and M2a, we observed specific metabolic marks, which may be related to the anti- or pro-tumoral activity of these cells in the tumor microenvironment. In clinical samples, although the main difference between nevi and melanomas is the concentration of KYN, a range of other changes in Trp metabolism were observed, which shows the complex magnitude of this metabolism in the skin pathophysiology
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Efeito metabólico do consumo de açaí (Euterpe oleracea Mart.) em bebidas comerciais. / Metabolic effect of the consumption of acai (Euterpe oleracea MART.) in commercial beverages.

Rosa, Fernando de Oliveira 31 October 2013 (has links)
A alimentação não é mais vista apenas como uma fonte de calorias e nutrientes, mas sim como agente capaz de induzir benefícios na prevenção de doenças, bem como na promoção de bem estar físico e mental. Assim, uma boa alimentação da população contribui com a redução de custos em cuidados com a saúde e com o aumento da longevidade. Estratégias nutricionais podem, por exemplo, como no caso da adição de antioxidantes, reduzir o risco de doenças, melhorar a qualidade de vida e aumentar o próprio tempo de vida do indivíduo. O dano oxidativo é um fator causador do desenvolvimento de doenças e os antioxidantes têm a capacidade de prevenir ou atenuar estes processos. Sendo assim, há crescente interesse na ingestão de alimentos naturais e produtos orgânicos, na forma de alimentos funcionais e suplementos dietéticos. Entre os alimentos que, comprovadamente, exercem efeito antioxidante, está o açaí, Euterpe oleracea MARTIUS, fruta nativa da região amazônica consumida rotineiramente pela população na forma de polpa, suco, vinho e em outras variedades. Nos últimos anos o açaí tem sido objeto de muita atenção devido ao seu alto potencial antioxidante, anti inflamatório e seu papel como alimento funcional. Sendo assim, foi nosso interesse estudar os efeitos do consumo crônico da fruta, oferecida como consumida pela população em sucos. Os resultados apontam que, quando associado ao consumo de altas taxas de glicose, as propriedades do açaí podem estar reduzidas, uma vez que não foi observada ampla capacidade antioxidante e verificou-se um desvio para o perfil pró-inflamatório no tecido adiposo, induzido pelo consumo de carboidrato em alta concentração. / Feeding is no longer seen as just a source of calories and nutrients, but as an agent capable to induce benefits to prevent diseases, and also to promote physical and mental wellbeing. Therefore, a good nutritional status of the population contributes to cost reductions of health care services and increases longevity. Nutritional strategies, for instance the supplementation with antioxidants, could reduce the risk of diseases that are associated with oxidative stress. The oxidative damage is an important factor in aging and in the development of illness, such as insulin resistence, arteriosclerosis, cancer and others. Antioxidants have the ability to prevent or reduce these processes. Hence, there is a growing interest in consuming natural foods and organic products as functional foods and dietary supplements. The açai berry Euterpe oleracea MARTIUS, a native fruit of Amazonia, recently gained scientific interest due to its high antioxidant and anti inflammatory effects. Açai is frequently consumed by the population as pulp, juice, wine or other varieties that additionally qualifies this fruit as a functional food. Therefore, our interest was to investigate the chronic effects of açai consumption by the population in form of beverages. The results indicate that the açai properties do not prevail, if the consumption is associated with high levels of glucose. The açai properties may be reduced, once the antioxidant ability was not observed, also there was a deviation to pro-inflammatory profile in adipose-tissue, induced by the high levels of carbohydrate consume.
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Influência do nifedipino na disposição cinética dos enantiômeros da venlafaxina e seus metabólitos em voluntários sadios / Influence of nifedipine on the kinetic disposition of venlafaxine enantiomers and its metabolites in healthy volunteers

Tozatto, Eduardo 01 June 2012 (has links)
A venlafaxina é um fármaco usado no tratamento da depressão e dos transtornos de ansiedade generalizada. É disponível na clínica na forma de mistura racêmica dos enantiômeros S-(+) e R-(-) em formulação de liberação controlada. O enantiômero S-(+) inibe a recaptação da serotonina, enquanto o enantiômero R-(-) inibe a recaptação da serotonina e da norepinefrina. A venlafaxina é biotransformada pelo CYP2D6 e CYP2C19 em seu principal metabólito, O-desmetilvenlafaxina, o qual apresenta atividade farmacológica semelhante à venlafaxina. Outros metabólitos da venlafaxina, dependentes do CYP3A4, incluem a N-desmetilvenlafaxina e a N,O-di-desmetilvenlafaxina. A absorção e a distribuição da venlafaxina são moduladas pela ação da glicoproteina-P. O nifedipino, um fármaco da classe dos inibidores dos canais de cálcio, é descrito como inibidor da glicoproteina-P. O presente estudo investiga a influência do nifedipino na disposição cinética e no metabolismo da venlafaxina em voluntários sadios caracterizados como portadores de atividade normal do CYP3A (omeprazol como fármaco marcador) e fenotipados como metabolizadores rápidos do CYP2C19 (omeprazol como fármaco marcador) e do CYP2D6 (metoprolol como fármaco marcador). Os voluntários investigados receberam, em estudo cruzado e randomizado, dose única oral de 150 mg de venlafaxina racêmica (Fase 1) e 40 mg de nifedipino associada com dose única oral de 150 mg de venlafaxina racêmica (Fase 2). Foram coletadas amostras seriadas de sangue até 72 horas após a administração dos fármacos para o estudo farmacocinético. As concentrações plasmáticas dos enantiômeros da venlafaxina e de seus metabólitos foram determinadas por LC-MS/MS utilizando a coluna Chirobiotic V com fase móvel constituída de mistura de metanol: solução aquosa de acetato de amônio 15 mmol/L pH 6,0 (80:20, v/v). A farmacocinética da venlafaxina mostrou-se enantiosseletiva com acúmulo plasmático (AUC 526,0 vs 195,7 ng.h/mL) e menores valores de clearance (Cl/f 142,67 vs 408,01 L/h) para o enantiômero S-(+). A disposição cinética do metabólito ativo O-desmetilvenlafaxina apresentou enantiosseletividade apenas no parâmetro concentração plasmática máxima com observação de maiores valores para o enantiômero R-(-) (Cmax 69,33 vs 56,94 ng/mL). A disposição cinética da N,O-di-desmetilvenlafaxina também mostrou-se enantiosseletiva apenas para o parâmetro concentração plasmática máxima, mas com observação de maiores valores para o enantiômero S-(+) (Cmax 7,08 vs 4,61 ng/mL). A administração de dose única oral de 40 mg de nifedipino não alterou a farmacocinética de ambos os enantiômeros da venlafaxina e de seus metabólitos O-desmetilvenlafaxina e N,O-di-desmetilvenlafaxina, seja utilizando teste estatístico não paramétrico (teste de Wilcoxon para dados pareados, p < 0,05), seja avaliando o IC 90% das razões das médias geométricas de AUC e Cmax (Fase 2/Fase 1). Os dados obtidos evidenciam que o nifedipino na dose de 40 mg não age como um inibidor da P-gp / Venlafaxine is a drug used to treat depression and generalized anxiety disorders. It is available in clinical practice in the form of a racemic mixture of S-(+) and R-(-) enantiomers, in controlled release formulation. The S-(+) enantiomer inhibits the reuptake of serotonin, while the R-(-) enantiomer inhibits the reuptake of both serotonin and norepinephrine. Venlafaxine is biotransformed by CYP2D6 and CYP2C19 in its major metabolite, O-desmethylvenlafaxine, which has similar pharmacological activity when compared to venlafaxine. Other metabolites of venlafaxine, dependent of CYP3A4, include N-desmethylvenlafaxine and N, O-di-desmethylvenlafaxine. The absorption and distribution of venlafaxine are modulated by the action of P-glycoprotein. Nifedipine, a calcium channel blocker drug, is described as an inhibitor of P-glycoprotein. The present study investigates the influence of nifedipine on the kinetic disposition of venlafaxine enantiomers and its metabolites in healthy volunteers characterized as having normal activity of CYP3A (omeprazole as a probe drug) and phenotyped as rapid metabolizers of CYP2C19 (omeprazole as a probe drug) and CYP2D6 (metoprolol as a probe drug). The enrolled volunteers received, in a randomized, two-way study, a single 150 mg oral dose of racemic venlafaxine (Phase 1) and 40 mg oral dose of nifedipine associated with a single 150 mg oral dose of racemic venlafaxine (Phase 2). Serial blood samples were collected until 72 hours after drug administration to the pharmacokinetic study. Plasma concentrations of venlafaxine enantiomers and its metabolites were determined by LC-MS/MS using a Chirobiotic V column and a mobile phase constituted of methanol: aqueous 15 mmol/L ammonium acetate solution pH 6.0 (80:20, v/v). The venlafaxine pharmacokinetics is enantioselective with plasma accumulation (AUC 526.0 vs 195.7 ng h/mL) and lower clearance values (CL/f 142.67 vs 408.01 L/h) for the S-(+) enantiomer. The kinetic disposition of the active metabolite O-desmethylvenlafaxine exhibits enantioselectivity only in the maximum plasma concentration parameter with higher values for the R-(-) enantiomer (Cmax 69.33 vs 56.94 ng/mL). The kinetic disposition of N,O-di-desmethylvenlafaxine is also enantioselective only for the maximum plasma concentration parameter, but with higher values for the S-(+) enantiomer (Cmax 7.08 vs 4.61 ng/ml). Administration of a 40 mg single oral dose of nifedipine do not alter the pharmacokinetics of both enantiomers of venlafaxine and its metabolites O-desmethylvenlafaxine and N,O-di-desmethylvenlafaxine, using non-parametric statistical test (Wilcoxon test for paired data, p <0.05), or evaluating the 90% CI of the AUC and Cmax geometric mean ratios (Phase 2/Phase 1). The obtained data show that nifedipine in a 40 mg oral dose does not act as a P-gp inhibitor.
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Efeito da atmosfera enriquecida com CO2 em mudas de Psidium guajava L. cv. Pedro Sato / Effect of elevated CO2 on seedlings of Psidium guajava L. cv. Pedro Sato.

Rezende, Fernanda Mendes 03 December 2013 (has links)
Psidium guajava é uma espécie tropical, frutífera, de grande importância na fruticultura brasileira e é usada em diversas partes do mundo para o tratamento de doenças que acometem a humanidade. Além de sua importância alimentícia e medicinal, P. guajava também se mostrou boa bioindicadora de poluentes atmosféricos como ozônio e SO2 , pois apresenta respostas características e dose-dependentes das concentrações desses poluentes. Mostrou-se, dessa forma, uma espécie interessante para o estudo de respostas de espécies tropicais a elevadas concentrações de CO2 atmosférico. A fim de avaliar se o elevado CO2 seria uma situação estressante para essa espécie, foi realizada uma fumigação de 130 mudas de P. guajava cv. Pedro Sato em quatro câmaras de topo aberto: duas com ar ambiente ((&sim;390 ppm) e duas com atmosfera enriquecida com CO2 (&sim;720 ppm). Foram realizadas coletas quinzenais, retirando-se cinco indivíduos de cada câmara, aleatoriamente, que foram separados em raiz, caule e folhas e imediatamente congelados com nitrogênio líquido. Foram analisados componentes relacionados a sinalização e inativação de espécies reativas de oxigênio em folhas: os teores de poliaminas solúveis, ácido ascórbico e glutationa, além de fenóis, flavonoides, proantocianidinas e taninos totais. Além disso, os extratos metanólicos de folhas foram submetidos à CLAE para análises quali e quantitativas dos principais flavonoides. Parâmetros relacionados ao desenvolvimento da planta também foram analisados, como incremento em altura, massa seca, fração de massa, acúmulo de carbono, açúcares solúveis e amido. As análises de poliaminas, ácido ascórbico, glutationa, e compostos fenólicos de folhas não revelaram alterações significativas entre os tratamentos, exceto para a análise de taninos totais onde foi observado um aumento significativo dessas substâncias nas plantas mantidas a elevado CO2 e após 90 dias de fumigação. A análise por CLAE revelou que a maioria dos flavonoides dessa espécie é derivada de quercetina. Com relação aos parâmetros de crescimento, P. guajava não apresentou diferenças significativas de incremento em altura e massa seca, mas apresentaram acúmulo de amido nas folhas. Analises multivariadas foram utilizadas para integrar as 46 variáveis analisadas. Neste estudo viu-se que a situação de elevado CO2 em mudas de P. guajava é favorável, visto que ocorre acúmulo de amido, substâncias anti-herbivóricas (taninos) e, aparentemente, não há alteração no balanço redox. Contudo, é de extrema importância estudos que avaliem alterações concomitantes de parâmetros ambientais, como aumento de temperatura, disponibilidade de água, ozônio e elevado CO2 . A goiabeira apresenta grande importância econômica relacionada à produção e qualidade de seus frutos, dessa forma são necessários estudos que avaliem o efeito do aumento do CO2 na quantidade e qualidade de frutos produzidos por esta espécie. Por ser uma espécie de crescimento lento, períodos de exposição mais longos são aconselháveis para uma melhor analise da susceptibilidade dessa espécie ao elevado CO2 / Psidium guajava is a tropical fruit species of great importance in Brazilian economy; it is also used in several parts of the world as medicinal. Besides its importance as medicinal and nutritional species, P. guajava has also showed to be a good bioindicator of air pollutants, such as ozone and SO2 . It presents characteristic responses, dose-dependent of the concentrations of these pollutants. Therefore, this species seems to be interesting to study the responses of a tropical species to high concentrations of atmospheric CO2 . In order to assess whether the high CO2 would be a stressful situation for this species, we performed a fumigation experiment using 130 seedlings of P. guajava cv. Pedro Sato in four open-top chambers: two with ambient air (&sim; 390 ppm CO2 ) and two with elevated CO2 (&sim; 720 ppm). Biweekly, five individuals of each chamber were randomly collected, separated into root, stem and leaves and immediately frozen with liquid nitrogen. Were analyzed parameters related to signaling and inactivation of reactive oxygen species in leaves: levels of soluble polyamines, ascorbate and glutathione, as well as contents of phenols, flavonoids, tannins and proanthocyanidins. Furthermore, the methanol extracts were subjected to HPLC for quantitative and qualitative analysis of the major flavonoids. Parameters related to the development of the plant were also analyzed, as height increment, dry mass, mass fraction, carbon accumulation, soluble sugars and starch accumulation. The analysis of polyamines, ascorbate, glutathione and phenolic compounds of leaves, showed no significant changes when comparing treatments, except for the analysis of tannins which was observed a significant increase of these substances in plants at high CO2 after 90 days of fumigation. HPLC analysis revealed that most of flavonoid composition is quercetin derivatives. The growth parameters showed no significant differences in height increment and dry mass, but the leaves showed accumulation of starch after CO2 fumigation. Multivariate analyzes were used to integrate the 46 variables analyzed. In this study it was seen that the elevated CO2 seem to be favorable to seedlings of P. guajava, once there is an accumulation of starch, antiherbivore substances (tannins) and, apparently, there was no change in the redox balance. However, it is extremely important to perform studies that evaluate concomitant changes in environmental conditions, such as increased temperature, availability of water, ozone and elevated CO2 . Guava has great economic importance in Brazil, fact related to the production and quality of its fruits, so more studies are needed to assess the effect of increased CO2 in the quantity and quality of fruits produced by this species. As a slow-growing species, longer exposure periods are recommended to better analyze the susceptibility of this species to elevated CO2
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Produção, utilização e comercialização de dieta completa peletizada ou extrusada para equinos / Production, use and marketing of pelleted or extruded complete diet for horses

Feltre, Kátia 13 June 2017 (has links)
O objetivo dessa pesquisa foi avaliar os efeitos de um produto completo, peletizado ou extrusado, composto por diferentes fontes de fibra (rolão de milho, capim-elefante desidratado e feno de Tifton 85) no manejo alimentar de equinos bem como a sua viabilidade econômica. Foram utilizados oito pôneis, machos, castrados da raça Mini-Horse. As dietas foram divididas em Dieta Controle (50% de feno de Tifton 85 e 50% de concentrado peletizado, fornecidos separadamente) e Dieta Completa (50% de volumoso mais concentrado) fornecidas como produto único. O delineamento experimental foi dois Quadrados Latinos balanceados em esquema fatorial 2x4, com aplicação de contrastes a fim de comparar os efeitos do processamento em relação à dieta controle. Para comparar os efeitos dentro das dietas processadas, procedeu-se com a exclusão do grupo controle aplicando-se esquema fatorial 2x3. Para os resultados significativos, foi utilizado o teste de Tukey com p&lt;0,05. Foram realizados quatro períodos com 20 dias cada intercalados por 21 dias de intervalo. As variáveis avaliadas foram: parâmetros sanguíneos e fecais, os Coeficientes de Digestibilidade Aparente dos nutrientes (CDA) e a viabilidade econômica da produção. Os resultados dos contrastes apontaram diferenças (p&lt;0,05) para as frequências (%) do tempo em pé, de alimentação e de deslocamento e no tempo de ingestão da dieta (minutos); para a Área Abaixo da Curva (AAC) de glicose (G) e insulina (In); para a concentração de colesterol; nos CDA da matéria seca (MS), fibra em detergente neutro (FDN) e ácido (FDA). A comparação feita entre as dietas processadas mostrou que a fonte de fibra interferiu (p&lt;0,05) nos valores de AAC-In: a dieta com rolão de milho apresentou maior AAC-In. O CDA da MS e da Matéria Orgânica foi menor para a dieta contendo capim-elefante desidratado. Para os CDA da FDN e FDA, a dieta com capim-tifton 85 apresentou melhores resultados. O processamento interferiu (p&lt;0,05) na AAC-G e AAC-In: a peletização resultou em maior AAC em relação ao produto extrusado; na concentração de ácido láctico nas fezes: a peletização apresentou maiores concentrações em relação à extrusão; no CDA da FDA: a extrusão melhorou a digestibilidade aparente para essa variável. Houve efeito interativo (p&lt;0,05) para as concentrações de triglicérides e lipoproteína de muito baixa densidade: a dieta com feno de Tifton 85 extrusado apresentou maiores concentrações em relação à dieta contendo rolão de milho; e para o CDA do extrato etéreo (EE): a dieta contendo rolão de milho peletizado apresentou maior CDA em relação à extrusada. A análise econômica considerou os itens que compõem os custos de produção, desde a produção agrícola do volumoso até a comercialização da Dieta Completa e mostrou-se viável economicamente nos três cenários propostos. Pode-se concluir que as fontes de fibra interferem na AAC-In e na digestibilidade aparente dos nutrientes; o processamento interfere nas AAC de glicose e Insulina, bem como nas concentrações de ácido láctico e na digestibilidade aparente dos nutrientes. Além disso, a interação entre esses fatores influenciam no metabolismo lipídico e no CDA do EE. Porém, esses resultados não trazem prejuízos comportamentais e metabólicos aos equinos. / The aim of this research was to evaluate the effects of a complete product, pelleted or extruded, composed of different sources of fiber (dehydrated whole corn plant, dehydrated elephant-grass and Tifton 85 hay) in equine feeding management as well as its economic feasibility. For this research, we used eight male, geldings, ponies of the Mini-Horse breed. Diets were divided into Control Diet (50% Tifton 85 hay and 50% pelleted concentrate, supplied separately) and Complete Diet (50% roughage more 50% concentrated) provided as a single product. The experimental design was two Latin Squares balanced in a 2x4 factorial scheme, with contrasts applied in order to compare the effects of processing in relation to the control diet. In order to compare the effects within the processed diets, we proceeded to the exclusion of the control group applying a 2x3 factorial scheme. For the significant results, Tukey\'s test was used with p&lt;0.05. We used four periods with 20 days each, intercalated for 21 days of washout. We evaluated the following variables: blood and fecal parameters, the Apparent Digestibility Coefficients of the nutrients (ADC) and the economic feasibility of the production. The results of the contrasts indicated differences (p&lt;0.05) in the frequencies (%) of standing time, feeding and locomotion, and time of diet intake (minutes); for the Area Under the Curve (AUC) of glucose (G) and insulin (In); for cholesterol concentration; in ADC of dry matter (DM), neutral detergent fiber (NDF) and acid (ADF). The comparison made between the processed diets showed that the fiber source interfered (p&lt;0.05) in the AUC-In values: the dehydrated whole corn plant diet presented higher AUC-In. The ADC of DM and Organic Matter was lower for the diet containing dehydrated elephant-grass. For the ADC of NDF and ADF, the tifton 85 grass diet presented better results. Processing interfered (p&lt;0.05) in AUC-G and AUC-In: pelleting resulted in higher AUC in relation to the extrusion; in the concentration of lactic acid in feces: the pelleting presented higher concentrations in relation to the extrusion; in the ADC of ADF: the extrusion improved the apparent digestibility for this variable. There was an interactive effect (p&lt;0.05) for the concentrations of triglycerides and very low density lipoprotein: the diet with extruded Tifton 85 hay presented higher concentrations in relation to the diet containing dehydrated whole corn plant; for the ADC of the ethereal extract (EE): the diet containing pelletized dehydrated whole corn plant, presented higher ADC than the extruded one. The economic analysis considered the items that make up the costs of production, from the agricultural production of the hay to the commercialization of the Complete Diet, and was economically feasible in the three proposed scenarios. It can be concluded that fiber sources interfere in AUC-In and apparent digestibility of nutrients; the processing interferes in AUC of glucose and Insulin, as well as in fecal lactic acid concentrations and in the apparent digestibility of the nutrients. In addition, the interaction between these factors influences the lipid metabolism and the ADC of the EE. However, these results do not bring behavioral and metabolic damages to horses.
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Estudo e caracterização do processo de glutatiolação e desglutatiolação da unidade 20S do proteassomo da levedura Saccharomyces cerevisiae: Implicações na regulação do metabolismo redox intracelular e na geração de peptídeos / Study and characterization of the S-glutathiolation and deglutathiolation of the 20S proteasome core from the yeast Saccharomyces cerevisiae: Implications on the intracellular redox metabolism and peptide generation.

Silva, Gustavo Monteiro 15 October 2010 (has links)
O proteassomo é o componente do sistema Ubiquitina-Proteassomo (UPS), responsável pela degradação de proteínas intracelulares marcadas com cauda de ubiquitina. No entanto, a unidade catalítica do proteassomo (20SPT), destituída de unidades regulatórias, é capaz de degradar proteínas de maneira ubiquitina-independente. Diversas modificações pós-traducionais já foram descritas para o 20SPT, incluindo a S-glutatiolação. De acordo com Demasi e col., (2003) o 20SPT da levedura Saccharomyces cerevisiae possui a atividade tipo-quimiotripsina modulada por glutationa e o mecanismo de glutatiolação implica na formação do intermediário ácido sulfênico. No presente trabalho, identificamos por espectrometria de massas (MS/MS) um total de sete resíduos diferentes de cisteína glutatiolados no 20SPT, sendo seis in vitro por incubação com GSH e três in vivo, extraído de células crescidas até atingir fase estacionária tardia em meio rico. Analisando a estrutura 3D do 20SPT, observou-se que os resíduos de cisteína glutatiolados não estão localizados na entrada da câmara catalítica nem próximos aos sítios-ativos, indicando um mecanismo alostérico da modulação da atividade proteassomal. O proteassomo glutatiolado extraído de leveduras é capaz de degradar proteínas oxidadas de maneira mais eficiente que o proteassomo reduzido por DTT, e ainda, esta degradação gera perfis peptídicos diferenciados por utilizar distintamente as atividades sítio-especificas, como visualizado por análises de HPLC e MS/MS. Por microscopia eletrônica verificamos a conformação aberta da câmara catalítica do proteassomo glutatiolado, sendo esta imediatamente fechada pela remoção da glutationa do 20SPT na presença de DTT. Caracterizamos ainda, enzimas reponsáveis pela desglutatiolação do 20SPT, capazes de recuperar as atividades proteassomais que haviam sido diminuídas pela glutatiolação: as oxidoredutases glutarredoxina 2 e as tiorredoxinas citosólicas. O mecanismo ainda inclui a hidrólise dessas oxidorredutases, fenômeno também verificado para diversas proteínas da suprafamília tiorredoxina, provavelmente devido a propriedades estruturais desta família. A glutatiolação do proteassomo apresenta-se como uma nova modificação pós-traducional de ocorrência fisiológica dependente do estado redox celular. Esta modificação promove aumento da atividade proteolítica, sugerindo uma função antioxidante atuante na remoção de proteínas oxidadas durante desafios oxidativos / The proteasome is the protease of the Ubiquitin-Proteasome System (UPS) responsible for the breakdown of intracellular ubiquitin-tagged proteins. However, the catalytic particle of the proteasome (20SPT) is capable of hydrolyzing some substrates in an ubiquitin-independent fashion. The S-glutathiolation of the 20SPT was described among several post-translational modifications and according to Demasi et. al. (2003), the chymotrypsin-like activity of proteasome from yeast Saccharomyces cerevisiae is regulated by glutathione. The mechanism of S-glutathiolation is dependent on the formation of the sulfenic acid intermediate in the cisteine residues of the 20SPT. In this present work, we identified in vitro and in vivo, a total of seven different S-glutathiolated proteasomal cysteine residues by mass spectrometry studies (MS/MS) and, by analyzing the 3D structure of the 20SPT, the modified cysteine residues are not located either on the entrance of the catalytic core or near to the active sites, indicating an allosteric mechanism of proteasomal modulation. During protein degradation, the natively S-glutathiolated 20SPT produces different patterns of peptide products when compared to the DTT-reduced particle through distinct site-specific cleavage of the protein substrates, as herein demonstrated by HPLC and MS/MS analyses. Furthermore, by electron microscopy, we showed that the entrance of the natively glutathiolated 20SPT is in the open conformation that immediately shifts to the closed conformation in the presence of DTT. We have also characterized the deglutathiolase role of the oxidoreductases Glutaredoxin 2 and Citosolic Thioredoxins 1 and 2 which recover the partially inhibited 20SPT activities. The deglutathiolation mechanism also includes the oxidoreductase degradation dependent on the 20SPT activation. The proteasome Sglutathiolation emerges as a new physiological post-translational modification correlated to the cellular redox state. Moreover, the S-glutathiolation of the 20SPT increases its proteolytic activity suggesting an antioxidant role by removing oxidized proteins generated during oxidative challenges.
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Avaliação da distribuição, metabolismo e nefrotoxicidade do timerosal - um conservante a base de mercúrio usado em vacinas - utilizando modelos in vivo e in vitro / Evaluation of the distribution, metabolism and nephrotoxicity of thimerosal - a mercury containing preservative found in vaccines - using in vivo and in vitro models

Carneiro, Maria Fernanda Hornos 30 September 2014 (has links)
O timerosal é um agente antisséptico utilizado em vacinas como conservante. Devido a presença de etilmercúrio (EtHg) em sua composição (com aproximadamente 49% de mercúrio (Hg) em peso), uma preocupação existe em relação aos possíveis efeitos tóxicos em humanos. No entanto, pouco se sabe sobre o perfil cinético do EtHg em mamíferos. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo avaliar a distribuição tecidual e meias-vidas do Hg, seu metabolismo no sangue (conversão a mercúrio inorgânico) e nefrotoxicidade após exposição ao timerosal, utilizando modelos in vivo e in vitro. Para isto, o trabalho foi dividido em 3 estudos: (I) camundongos machos Swiss foram expostos a 20 ?g de Hg sob a forma de timerosal via intramuscular. Sangue, cérebro, coração, rim e fígado foram coletados após 0,5; 1; 8; 16; 144; 720 e 1980 horas (h) da exposição (n=4) e analisados quanto às concentrações das espécies de Hg por HPLC-ICP-MS; (II) alíquotas (n=4) de sangue total, plasma e eritrócitos humanos foram expostas a timerosal ou EtHg (3 mg/l) durante 24 h e analisadas quanto às concentrações das espécies de Hg por HPLC-ICP-MS; (III) células HK2 foram expostas durante 24 h a timerosal (0 ?M a 2 ?M) e avaliadas quanto à viabilidade e proliferação celular, apoptose, expressão de proteínas Bax e TGF-?1, saúde mitocondrial e concentrações de fibronectina no meio. Verificou-se que o transporte de EtHg do músculo para os tecidos e a sua conversão em Hg inorgânico (Hgi) ocorrem rapidamente. Após 0,5 h da exposição ao timerosal, as concentrações mais altas de ambos EtHg e Hgi foram encontradas no rins (> 70% do Hg total no corpo do animal). O cérebro apresentou uma menor contribuição para a carga corporal de Hg (<1,0% do Hg total no corpo do animal). Após trinta dias da exposição ao timerosal, houve excreção considerável de Hg e o fígado apresentou a maior parte do Hg ainda restante no corpo dos animais. As meias-vidas foram estimadas (em dias) em 8,8; 10,7; 7,8; 7,7 e 45,2; para o sangue, cérebro, coração, fígado e rim, ii respectivamente. Sugere-se que a extensão da conversão de EtHg a Hgi é modulada em parte pela partição do EtHg no plasma e no sangue, uma vez que o EtHg é rapidamente convertido a Hgi nas células vermelhas, mas não no plasma. O mecanismo de dealquilação em células vermelhas parece ser mediado pela reação de Fenton (formação de radicais hidroxil). Ainda, EtHg/timerosal diminuiu a viabilidade celular e mitose, promoveu a apoptose, prejudicou o estado de transição de permeabilidade mitocondrial, aumentou a expressão de Bax e TGF-?1 e secreção de fibronectina. Coletivamente, os resultados demonstram que a cinética do timerosal (EtHg) está mais próxima a do Hgi - e não do MeHg - e o rim deve ser considerado um alvo potencial de toxicidade do EtHg, já que é o órgão exposto às maiores concentrações de Hg , e onde o metal apresenta sua maior meia-vida biológica. Adicionalmente, o EtHg/timerosal demonstrou ser um agente antiproliferativo, apoptótico e pró-fibrótico em células humanas renais. / Thimerosal is an antiseptic agent used in vaccines as a preservative. Due to the presence of ethylmercury (EtHg) in its composition (approximately 49% mercury (Hg) by weight), there is a concern regarding possible toxic effects in humans. However, little is known about the kinetic profile of EtHg in mammals. Thus, this study aimed to evaluate the tissue distribution and half-life of Hg, its metabolism in blood (conversion to inorganic mercury) and nephrotoxicity after exposure to thimerosal, using in vivo and in vitro models. The work was divided into three studies: (I) Swiss male mice were exposed to 20 ?g of Hg in the form of thimerosal intramuscularly. Blood, brain, heart, kidney and liver were collected after 0.5, 1, 8, 16, 144, 720 and 1980 hours (h) of exposure (n=4) and analyzed for concentrations of Hg species by HPLC-ICP-MS; (II) aliquots (n=4) of whole blood, plasma and erythrocytes were exposed to thimerosal or EtHg (3 mg/l) for 24 h and analyzed for Hg species concentrations by HPLC-ICP-MS; (III) HK2 cells were exposed for 24 h to thimerosal (0 ?M to 2 ?M) and evaluated for cell viability and proliferation, apoptosis, Bax and TGF-?1 expression, mitochondrial health and concentrations of fibronectin in the medium. It has been found that the transport of EtHg from muscle to tissues and its conversion into inorganic Hg (Hgi) occur quickly. After 0.5 h of exposure to thimerosal, higher concentrations of both EtHg and Hgi were found in the kidneys (> 70% of total Hg in the animal body). The brain showed a minor contribution to the body burden of Hg (<1.0% of total Hg in the animal body). Thirty days after exposure to thimerosal, there was considerable excretion of Hg and liver had the most Hg still remaining in the animal body. Half-lives were estimated (in days) at 8.8; 10.7; 7.8; 7.7 and 45.2; for blood, brain, heart, liver and kidney, respectively. It is suggested that the extent of conversion of the EtHg into Hgi is modulated in part by the partition of EtHg in plasma and blood, since EtHg is rapidly converted into Hgi in red cells but not in plasma. The mechanism of dealkylation in red cells seems to be mediated by the Fenton reaction iv (formation of hydroxyl radicals). Additionally, EtHg/thimerosal decreased cell viability and mitosis, promoted apoptosis, impaired mitochondrial permeability transition state, increased expression of Bax and TGF-?1 and fibronectin secretion in the media. Collectively, the results demonstrate that the kinetics of thimerosal (EtHg) is closer to the Hgi - and not the MeHg - and kidney should be considered a potential target for EtHg toxicity, since it is exposed to the highest concentrations of Hg and it is the tissue where the metal has a greater biological half-life. Additionally, EtHg/thimerosal was shown to be an antiproliferative, apoptotic and pro-fibrotic agent in human kidney cells.
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Tipos de desaquecimentos na recuperação de cavalos Quarto de Milha submetidos à prova de tambor / Type of slowdown effect on the recovery of Quarter Horse submitted to racing barrel

Mota, Thaís Pagotti 17 November 2016 (has links)
Com o objetivo de avaliar o efeito do método de desaquecimento sobre a recuperação de cavalos submetidos a prova de tambor, foram utilizados 10 equinos adultos, da raça Quarto de Milha treinados para prova de tambor. O treinamento dos animais foi acompanhado por 30 dias e consistiu de 3 seções de treinamento semanal com duração média de uma hora, acompanhados de cinco minutos de desaquecimento a passo. Para a avaliação dos métodos de desaquecimento, os cavalos fora submetidos a simulações da prova de três tambores. O protocolo foi divido em dois métodos de desaquecimento: 5 minutos de trote e 5 minutos de passo ou 10 minutos ao passo. Todos os animais foram submetidos aos dois métodos de desaquecimento em períodos distintos. A frequência cardíaca foi aferida através de frequencímetro portátil fixado na cilha da sela do animal, nos tempos: antes do exercício, antes e ao término de cada etapa do protocolo descrito acima e imediatamente após a passagem pelo tambor, imediatamente após o desaquecimento, 2; 4 e 6 minutos após o desaquecimento, após a retirada da sela e após a ducha. As amostras de sangue foram coletadas por meio de venopunção da jugular, nos tempos: antes do exercício, imediatamente após a passagem pelo tambor; 2; 4; 6 minutos e 6; 24; 48 e 72 horas, para as concentrações de glicose e lactato. Para o acompanhar a atividade das enzimas musculares (CK, AST e LDH) foram coletadas amostras de sangue nos tempos: antes do exercício, após a passagem pelo tambor, 6 minutos e 6; 24; 48 e 72 horas após o desaquecimento. Para a determinação das variáveis: glicose, lactato e as enzimas creatinaquinase, lactato desidrogenase e aspartato aminotransferase foram utilizados kits bioquímicos, lidos por espectrofotômetro semi automático. No decorrer do aquecimento dos animais, foi observado aumento progressivo da frequência cardíaca (FC) conforme aumentava-se a velocidade. A FC atingida após a passagem pelo tambor foi em média de 167,25 &plusmn; 32,64 (bpm). Foi observado efeito do método de desaquecimento (p&lt;0,05) sobre a frequência cárdica, com ajuste linear da regressão (y=88,87-2,1804x) para desaquecimento a passo e ajuste quadrático para o desaquecimento a trote e passo (y= 97,6-7,811x+0,4154 x2). Não foi observado efeito (p&gt;0,05) do método de aquecimento e tempos de coleta sobre a atividade das enzimas CK, AST e LDH. Não foi observado efeito (p&gt;0,05) do método de desaquecimento sobre a concentração sanguínea de glicose e lactato porém foi observado efeito do tempo de coleta (p&lt;0,05). Na coleta de 24 horas após o exercício, observou-se concentração sanguínea de lactato dos animais desaquecidos ao trote e passo foi de 0,68&plusmn;0,7mmol/l enquanto que os cavalos desaquecidos ao passo apresentaram 1,13 &plusmn; 0,81mmol/L. O desaquecimento do cavalo de tambor é importante para a sua recuperação. Cavalos desaquecidos utilizando trote e passo aparentam ter recuperação mais efetiva em 24 horas, favorecendo a realização de atividades em dias seguidos, como é pratica desta modalidade equestre. Este trabalho pode ser utilizado com base para o desenvolvimento de programas de treinamento de cavalos desta modalidade para garantir melhor desempenho e recuperação. / In order to evaluate the effect of cooling down method on the recovery of horses subjected to barrel racing, ten adult Quarter horse breed horses were used, trained to barrel test. The animals training was monitored for 30 days and consisted of three weekly training sessions with an average duration of one hour, followed five minutes of slowdown by step. For the evaluation of the slowdown methods, the horses had been submitted to simulations of three barrel tests. The protocol was divided into two methods of slowdown: 5 minutes trotting and 5 or 10 minutes by step. All animals were submitted to both slowdown methods in different periods. Heart rate was measured using a portable frequency meter fixed on the animal\'s saddle at the times: before exercise, before and at the end of each protocol step described above and immediately after passage through the barrel immediately after the slowdown, 2; 4 e 6 minutes after slowdown, after removing the saddle and after the shower. Blood samples were collected by venipuncture of the jugular at the time: before exercise, immediately after passage through the barrel; 2; 4; 6 minutes and 6; 24; 48 and 72 hours, for concentrations of glucose and lactate analysis. To monitor the activity of the muscle enzyme (CK, AST and LDH) blood samples were collected at the times: before exercise, after passing through the barrel, 6 minutes and 6; 24; 48 and 72 hours after the cooling. To determine the variables: glucose, lactate, creatine kinase enzymes, lactate dehydrogenase and aspartate aminotransferase biochemical kits were used, read by semi automatic spectrophotometer. During the animals heating, a progressive increase in heart rate (HR) was observed as the speed increasing. The HR reached after passage through the barrel was on averaged 167.25 (bpm). It was observed effect of slowdown method (p &lt;0.05) on the HR with linear regression adjustment (y = 88,87-2,1804x) to slowdown by step and quadratic adjustment for trotting and step slowdown (97,6-7,811x + 0.4154 y = x2). There was no effect (p&gt; 0.05) of the heating method and collection times on the activity of CK, AST and LDH. There was no effect (p&gt; 0.05) of the slowsown method on blood glucose and lactate but there was an effect of collection time (p &lt;0.05). At 24 hours after exercise, the blood lactate concentration of the slowdown animals at trot and step was 0.68 mmol / l while the cooled-down horses while had 1.13 mmol / l. The barrel horse slowdown is very important for it\' recovery. slowdown horses using trot and step seem to have more effective recovery within 24 hours, favoring the performance of activities in consecutive days, as is practiced in this equestrian modality. This study can be used as basis for the development of horse training programs of this modality to ensure optimum performance and recovery.
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Análise da variação na concentração dos ácidos clorogênicos diante de diferentes tratamentos pós-coleta / Analysis of the variation on chlorogenic acids\' concentration towards different post-harvest treatments

Moreira, Eduarda Antunes 02 October 2017 (has links)
Considerando que diversas atividades biológicas dos ácidos clorogênicos já foram descritas na literatura, uma melhor compreensão da biossíntese e do acúmulo desses polifenois nas plantas está diretamente vinculada aos parâmetros de qualidade de fitoterápicos. Este trabalho teve o objetivo de monitorar a variação na concentração de metabólitos secundários do grupo dos ácidos clorogênicos no tecido foliar de diversas espécies diante de diferentes tratamentos pós-coleta. Este monitoramento foi realizado através da quantificação das substâncias por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas em sequência (CLUE-EM/EM). Na primeira fase do estudo, foram coletadas folhas de cada espécie selecionada para o estudo (Caju - Anacardium occidentale L.; Graviola - Annona muricata L.; Pata-de-Vaca - Bauhinia variegata L.; Limão - Citrus limon (L.) Burm. f.; Café - Coffea arabica L.; Pitanga - Eugenia uniflora L.; Alecrim - Rosmarinus officinalis L., e Jambolão - Syzygium cumini (L.) Skeels). As folhas foram submetidas a um processo de extração e os extratos obtidos foram analisados por CLAE-EM/EM. Foram encontradas nove substâncias monossubstituídas nas posições 3, 4 e 5 pertencentes aos subgrupos dos ácidos p-cumaroilquínicos, cafeoilquínicos e feruloilquínicos dos ácidos clorogênicos, além de ácidos dicafeoilquínicos. A identificação dos sinais cromatográficos foi realizada por meio dos padrões de fragmentação de cada composto. Na segunda fase do estudo, foram coletadas quatro folhas dos indivíduos em estudo. As folhas foram congeladas em nitrogênio líquido (para interrupção do metabolismo) em tempos diferentes: imediatamente após a coleta (T0), 30 min após a coleta (T0,5), 1 h após a coleta (T1) e 2 h após a coleta (T2). Este procedimento foi realizado uma vez por mês durante seis meses. Em outro momento foram retiradas seis folhas de três indivíduos de espécies selecionadas (Alecrim, Pitanga, Pata-de-Vaca, Limão e Café) e cada folha foi congelada nos tempos T0 (imediatamente após a coleta), T6 (6 h após a coleta), T12 (12 h após a coleta), T24 (24 h após a coleta), T48 (48 h após a coleta) e Ts (após secagem das folhas - aproximadamente 30 dias após a coleta). O material coletado foi extraído e analisado por CLUE-EM/EM, no modo MRM. O método analítico quantitativo foi validado, considerando os parâmetros de linearidade, exatidão e precisão. As concentrações dos ácidos clorogênicos em estudo não apresentaram um padrão de variação que se relacione com os tempos de tratamento ou um aumento linear nas respostas dentro do intervalo de 2 h após o início do catabolismo do tecido. As amostras com tempos de tratamento mais longo, por sua vez, apresentaram aumento significativo de diversos compostos nas folhas que não tiveram seu metabolismo interrompido 30 dias após a coleta. Este acúmulo de ácidos clorogênicos corrobora a hipótese de que o aumento da concentração destes compostos pode estar relacionado ao catabolismo de polímeros fenólicos de maior massa. / Considering that diverse chlorogenic acids\' biological activities have been described, a better understanding of their biosynthesis and accumulation is closely related to phytotherapics\' quality parameters. This research aimed to monitor the variation on the concentration of secondary metabolites from the chlorogenic acids\' group on the leaf\'s tissue of diverse species, towards different post-harvest treatments. The monitoring was performed through the quantification of the compounds by UPLCMS/ MS. On the first phase of the project, leaves from each selected species (Cashew - Anacardium occidentale L.; Soursop - Annona muricata L.; Pata-de-Vaca - Bauhinia variegata L.; Lemon - Citrus limon (L.) Burm. f.; Coffee - Coffea arabica L.; Cherry - Eugenia uniflora L.; Rosemary - Rosmarinus officinalis L., and Jambolan - Syzygium cumini (L.) Skeels) were harvested. This material was submitted to an extraction process, and the obtained extracts were analyzed by HPLC-MS/MS. Nine substances were found, monossubstituted on positions 3-, 4- and 5-, belonging to the subgroups of p-coummaroylquinic, caffeoylquinic and feruloylquinic acids, in addition to dicaffeoylquinic acids. The chromatographic signals\' identification was preceded observing the fragmentation pattern of each compound. On the second phase of the study, four leaves were collected from each individual. The leaves were frozen with liquid nitrogen (to interrupt the metabolism) on different moments - immediately after the collection (T0), 30 min after de collection (T0,5), 1 h after the collection (T1) and 2 h after the collection (T2). This procedure happened once a month during six months. On August, 2016, a different collection was performed for a broader observation: six leaves were harvested from three individuals from selected species (Rosemary, Cherry, Pata-de-Vaca, Limon and Coffee), and each leave was frozen on T0 (immediately after the collection), T6 (6 h after the collection), T12 (12 h after the collection), T24 (24 h after the collection), T48 (48 h after the collection) and Ts (after leaf\'s drying - approximately 30 days after collection). The harvested material was extracted and analyzed by UPLC-MS/MS, on MRM mode. The analytical method was validated for linearity, accuracy and precision. Chlorogenic acids\' concentrations did not show a pattern of variation that related to the different treatments or a linear increase on response until 2 hours after the beginning of the tissue catabolism. The samples submitted to a broader treatment interval, however, showed a significant rise on the concentration of different compounds, on leaves that did not have their metabolism interrupted until 30 days after the collection. This accumulation of chlorogenic acids agrees with the hypothesis that the raise on the concentration of these substances can be related to the catabolism of polymeric phenols of higher mass.

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