As enzimas CYP450 são as principais enzimas metabolizadoras de fármacos. Elas são codificadas por genes que apresentam polimorfismos gênicos que lhes confere características fenotípicas diversas. Estes fenótipos são: Metabolizadores Lentos ou PM, Metabolizadores Normais ou EM, Metabolizadores Intermediários ou IM e Metabolizadores Ultra-rápidos ou UM. A Farmacogenética é a ciência que estuda estas variações gênicas e sua relação com a resposta terapêutica no organismo. Entre as enzimas CYP450 se encontram as enzimas CYP2D6, que são responsáveis pelo metabolismo de 25% dos fármacos clinicamente prescritos. O objetivo principal deste estudo foi a identificação dos polimorfismos mais importantes deste gene: CYP2D6*1, CYP2D6*2, CYP2D6*3, CYP2D6*4, CYP2D6*5, CYP2D6*6, CYP2D6*10, CYP2D6*17 e CYP2D6*41 pelos métodos de Genotipagem (PCR Tetra Primer e Seqüenciamento) e Fenotipagem (analisado pelo Índice Metabólico) em 75 voluntários sadios da região de Campinas. Para a caracterização da Fenotipagem foi usada a substância teste Dextrometorfano (DM). Esta foi monitorada por espectrometria de massa mediante a determinação da concentração do seu principal metabólito o Dextrorfano (DX), que foi extraída das amostras de urina. Os resultados foram comparados entre estas duas metodologias e apresentaram alta correlação. Os resultados obtidos são a identificação das freqüências dos alelos *1, *3 e *4 pelo método PCR Tetra Primer (30.66%, 1.3% e 14%, respectivamente). O método de seqüenciamento detectou também outros alelos que não foram detectados pela PCR Tetra Primer. A avaliação do número de cópias do gene CYP2D6 também foi avaliada, detectando em um voluntário 3 cópias do gene CYP2D6, característica de metabolizadores Ultra-rápidos. Podemos afirmar que os métodos usados forneceram perfis dos polimorfismos de maneira rápida e prática. / The CYP450 enzymes are the major drug metabolizing enzymes. They are encoded by genes that show genetic polymorphisms which gives them several phenotypic characteristics. These phenotypes are Poor Metabolizers or PM, or Extensive Metabolizers or EM, Intermediate Metabolizers or IM, and finally, Ultra-rapid Metabolizers or UM. Pharmacogenetics is the science that studies these genetic variations and its relationship to therapeutic response in the body. One of CYP450 enzymes is CYP2D6 enzyme, which are responsible for the metabolism of 25% of clinically prescribed drugs. The main objective of this study was to identify the most important polymorphisms of this gene: CYP2D6 * 1, CYP2D6 * 2, CYP2D6 * 3, CYP2D6 * 4, CYP2D6 * 5, CYP2D6 * 6, CYP2D6 * 10, CYP2D6 * 17 and CYP2D6 * 41 by genotyping methods (PCR Tetra Primer and Sequencing) and phenotyping (by metabolic rate monitoring) in 75 healthy volunteers in Campinas region.To characterize the phenotyping was used to test substance Dextromethorphan (DM). This was monitored by mass spectrometry by determining the concentration of its major metabolite the Dextrorphan (DX), which was extracted from urine samples. The results were compared between these two methods and showed high correlation. We can obtain the identification of allelic frequencies of alleles * 1, * 3 and * 4 by Tetra Primer PCR (30.66%, 1.3% and 14% respectively). The sequencing method has also detected other alleles that were not detected by PCR Tetra Primer. The assessment of the number of copies of the CYP2D6 gene was also assessed. This method detected a volunteer which carrying three copies of CYP2D6 gene, characteristic of Ultra-rapid metabolizers. We can say that the methods used in this study provide polymorphism profiles quickly and conveniently.

No presente estudo analisou-se o metabolismo de glicose e glutamina, através da determinação da atividade enzimática, em carcinomas ductais infiltrativos de pacientes sem tratamento. As pacientes estavam na faixa etária entre 32 e 68 anos e cerca de 75% no período pós-menopausa. Os tumores estudados apresentavam graus de diferenciação e tamanho distintos; no entanto, sem metástases distantes. Os seguintes parâmetros foram analisados: a) efeito da insulina sobre o consumo de glicose em fatias tumorais, b) atividades das enzimas da via glicolítica e da glutaminase nas áreas do centro e periferia do tumor, c) parâmetros cinéticos da piruvato quinase purificada. Os resultados foram comparados entre os tumores e a glândula mamária e entre as áreas centrais e periféricas dos próprios tumores. O consumo de glicose mostrou-se maior nos carcinomas, principalmente no centro que na periferia do tumor, mas não foi alterado pela insulina. Não houve relação entre o consumo de glicose e o tamanho dos tumores, nem com o grau histológico. Inversamente, na glândula mamária, a insulina (100 µU/ml) aumentou a captação de glicose. A concentração de lactato produzida, pela incubação das fatias tumorais com glicose, foi significativamente maior nos carcinomas do que na glândula mamária, equivalente ao aumento do fluxo glicolítico. A atividade das enzimas da via glicolítica foi maior nos carcinomas em comparação ao tecido normal. A atividade foi também significativamente diferente tanto na comparação entre as áreas do centro e periferia do tumor, quanto considerando-se o grau de diferenciação dos carcinomas. Nas áreas centrais, as atividades enzimáticas foram mais elevadas, enquanto que considerando-se os graus histológicos, tumores menos diferenciados apresentaram atividades mais elevadas que os de maior grau de diferenciação. Dentre as enzimas reguladoras da glicólise, a piruvato quinase apresentou a maior atividade em comparação à hexoquinase e fosfofrutoquinase-1. Este aumento foi significativamente maior nos carcinomas associados com comprometimento de linfonodos axilares. A piruvato quinase purificada mostrou Km de 0,23 mM para fosfoenolpiruvato e 0,3 mM para ADP. ATP inibiu em 40% a atividade da enzima, enquanto que alanina, fenilalanina e cálcio inibiram em 55%, 84% e 93% a atividade da enzima, respectivamente. A frutose 1,6bifosfato induziu 36% de ativação e reverteu em 100% a inibição causada por fenilalanina, em 87% aquela da alanina e cerca de 56% para ATP, mas não reverteu a inibição por cálcio quando em concentrações saturantes e apenas em 15% em concentrações sub-saturantes. O padrão eletroforético da piruvato quinase diferiu da mama e tumores benignos (fibroadenomas), o que pode representar um marcador de malignidade. A atividade das enzimas citrato sintetase e glicerol-3-fosfato desidrogenase mostrou-se diminuída de acordo com o aumento da atividade glicolítica e relacionou-se diretamente com o grau de diferenciação dos carcinomas. Tumores diferenciados mostraram maior atividade. A atividade da glutaminase foi maior nos carcinomas em comparação à glândula mamária, sendo ainda maior nas áreas do centro do tumor que nas áreas periféricas. O grau de diferenciação também correlacionou-se com a atividade da enzima, mas não foram observadas diferenças significativas quando considerou-se o tamanho tumoral. As diferenças metabólicas observadas podem associar-se ao comportamento clínico heterogêneo entre pacientes com o mesmo tipo de carcinoma. / Glucose and glutamine metabolism of infiltrating ductal carcinomas of untreated patients was studied by determining enzyme activities. The patients were between 32 and 68 years old and about 75% were in post-menopausal period. The tumors have different histological grading and sizes but no distant metastasis. The following parameters were analysed: a) effect of insulin on glucose uptake by tumor slices, b) glycolytic (hexokinase, phosphofructokinase, pyruvate kinase, lactate dehydrogenase) and glutaminolytic (glutaminase) enzyme activities, c) kinetic parameters of purified pyruvate kinase. The results were compared to those of mammary gland and between center and periphery regions of the tumors. Glucose, consumption was higher in the carcinomas, compared to mammary gland, specially in the solid region (center) than in the periphery, but it was not altered by insulin. No correlation was found between glucose consumption rate and the tumor size or differentiation grading. Inversely, in the mammary gland, insulin (100 µU/ml) increasead glucose uptake. Lactate production was significantly higher in the carcinomas than in the mammary gland according to the glycolytic flux. The glycolytic enzyme activities were higher in the carcinoma than in the mammary gland. The enzyme activities were more elevated in the center as compared to peripheric areas of the tumor. In the tumor center, the enzyme activities were highest in the undifferentiated carcinoma. Pyruvate kinase (PK) presented higher activity than phosphofructokinase 1 and hexokinase activities. Purified PK from the tumor presented a reduced Km for phosphoenolpyruvate (0,23 mM) and ADP(O,3 mM). ATP inhibited 40% of the enzyme activity, while alanine, phenilalanine and calcium inhibited it by 55%, 84% and 93%, respectively. Fructose 1,6 bisphosphate enhanced 36% of enzyme activity and reverted by 100% the inhibition caused by phenilalanine, 87% that of alanine and 56% that of ATP, but did not revert the inhibition by Ca+2 when at saturating concentration, having a capacity of reverting only 15% of the inhibition caused by near-saturating concentration of Ca+2. The citrate synthase and α-glycerol phosphate dehydrogenase activities were reduced according to increase in the glycolytic activity and had a direct correlation with the histological grading. Differentiated tumors had higher activities. Glutaminase activity was elevated in carcinomas as compared to mammary gland, being even higher in the central regions of the tumors. The enzyme activity was also higher in the moderate differentiated tumors than that in the differentiated tumors, but no significant differences were observed when the tumor size was considered. There was a relationship between the data and the clinicai heterogeneity of the disease.

O objetivo deste trabalho foi analisar a influência dos fatores etários, sexuais, da gestação, do puerpério, da lactação e dos sistemas de criação nos constituintes do metabolismo lipídico e glicemia de búfalos. A análise bioquímica foi obtida por meio da determinação dos teores séricos de colesterol, triglicérides, ß-hidroxibutirato (ß-HBO), ácidos graxos não esterificados (NEFA), e teores plasmáticos de glicose. Também foi objetivo sugerir valores de referência para estes metabólitos. Foram utilizadas seis propriedades de bubalinos das raças Murrah, Mediterrâneo, e mestiços, todas localizadas no Estado de São Paulo. No total, foram colhidas amostras de soro e plasma de 635 animais, entre novembro de 2009 e julho de 2010. Para a avaliação da condição do estado geral dos animais, foi utilizada avaliação do escore de condição corporal (ECC) atribuindo notas de 1 a 5 somente para animais acima de 24 meses. Os valores da média aritmética, desvio padrão, erro padrão da média, coeficiente de variação, intervalo de confiança (95%), e valores mínimo e máximo foram calculados utilizando o procedimento Means do SAS versão 9.2. Os testes de normalidade dos resíduos e homogeneidade das variâncias foram realizados utilizando o Guide Data Analise do SAS. Os dados foram analisados por ANOVA, usando o procedimento Glimmix do SAS. As informações de grupo (Idade; Gestação; Lactação; Sexo; Puerpério; Sistema de Criação), Fazenda; Categoria; Número de Crias e ECC, assim como suas interações, foram utilizadas nos modelos estatísticos. Concluiu-se que os constituintes metabólicos foram consideravelmente influenciados pela idade, sexo, puerpério, lactação e sistema de criação, não sendo verificada influência relevante pela gestação de novilhas. Devido à grande quantidade de amostras estrategicamente colhidas, obtidas de diferentes realidades criatórias, também foi possível sugerir valores de referência para o lipidograma e glicemia de búfalos de diferentes idades, sexos, momentos gestacionais, fases do periparto e períodos de lactação. / The aim of this study was to analyze the influence of age, gender, pregnancy, puerperium, lactation and breeding systems in the constituents of lipid metabolism and glucose of buffaloes. The biochemical analysis was obtained by determining the levels of serum cholesterol, triglycerides, beta-hydroxybutyrate (ß-HBO), non-esterified fatty acids (NEFA) and plasma glucose levels. It was also meant to suggest reference values for these metabolites. Were used six properties of buffaloes Murrah, Mediterranean, and crossbreed, all located in the São Paulo state. Were collected 635 samples of serum and plasma between November 2009 and July 2010. To assess the condition of the general state of animals was used to evaluate body condition score (BCS) by assigning scores from 1 to 5 only for animals over 24 months. The values of the arithmetic mean, standard deviation, standard error means, coefficient of variation, confidence interval (95%), and minimum and maximum values were calculated using the Means procedure of SAS version 9.2. Tests for normality of residuals and homogeneity of variances were performed using the SAS Guide to Data Analysis. Data were analyzed by ANOVA using the SAS procedure Glimmix. The group information (Age, Pregnancy, Lactation, Gender, Puerperium; Creation System), Farm, Category, Number of Offspring and BCS, as well as their interactions, were used in statistical models. It was concluded that the metabolic components were significantly influenced by age, gender, postpartum, lactation and breeding system, and is not verified by the relevant influence pregnant heifers. Due to the large number of samples strategically taken, obtained from different stock breeding, were also suggest reference values for serum lipids and glucose of buffaloes in different ages, genders, moments of pregnancy, stages of peripartum and lactation periods.

As dietas intermitentes (IF) compreendem ciclos alternados de 24 horas de jejum e alimentação. Como os efeitos de IF sobre o balanço redox não são bem conhecidos, esse trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos desta dieta sobre o estado redox de diferentes tecidos de ratos. Após um mês de tratamento, os fígados dos ratos em IF apresentaram um aumento de capacidade respiratória mitocondrial juntamente com níveis elevados de proteínas carboniladas. Verificou-se ainda um aumento em danos oxidativos no cérebro destes animais. IF promoveu significativa proteção contra danos oxidativos no coração, enquanto que não houve alterações no estado redox do músculo esquelético. Os efeitos metabólicos de IF também foram investigados com o intuito de compreender os mecanismos envolvidos com o menor peso e a hiperfagia promovidos por esta intervenção. Observou-se que o menor peso dos ratos submetidos à IF é consequência de um aumento em taxas metabólicas em dias de alimentação somado à oxidação lipídica aumentada durante o jejum. A hiperfagia, por sua vez, é consequencia de elevação nos níveis de neurotransmissores orexigênicos hipotalâmicos, mesmo quando estes animais estão alimentados. Os níveis do neutransmissor TRH também foram modulados por esta dieta, o que pode estar relacionado com as alterações de taxas metabólicas observadas no modelo. Concluímos, portanto, que as dietas intermitentes promovem modificações funcionais no hipotálamo que estão associadas com diferenças no peso corpóreo e no apetite. Além disso, IF afeta o balanço redox de forma tecido específica, levando a um desbalanço oxidativo no fígado e no cérebro e à proteção contra danos oxidativos no coração. / Intermittent fasting (IF) is a dietary intervention that comprises 24 hour cycles alternating ad libitum feeding and fasting. We address here the effects of IF on redox state in different tissues, which are still poorly understood. After one month on the diet, IF rats livers presented increased mitochondrial respiratory capacity along with increased levels of protein carbonyls. Surprisingly, IF animals also presented an increase in oxidative damage in the brain. Conversely, IF promoted a substantial protection against oxidative damage in the heart. No difference in redox homeostasis was observed in the skeletal muscle. We also assessed metabolic effects of IF to uncover the mechanisms involved in the lower body mass and loss of feeding control in IF rats. As measured calorimetrically, IF animals presented high metabolic rates during feeding days and increased lipid oxidation on fasting days, which explains the lower body weight. IF-induced overeating was a consequence of increased expression of hypothalamic orexigenic neurotransmitters, even on feeding days. THR levels also were changed, in parallel with the feeding-dependent alterations on metabolic rates. Overall, we find that intermittent fasting promotes functional hypothalamic alterations associated with differences in body weight and appetite. In addition, IF affects redox balance in a tissue-specific manner, leading to redox imbalance in the liver and brain, as well as protection against oxidative damage in the heart

Diversos estudos têm demonstrado o envolvimento benéfico da utilização do aminoácido glutamina em meios de cultura, favorecendo a organogênese dos tecidos vegetais cultivados. Sabe-se que as fontes de nitrogênio podem influenciar na produção endógena de fitormônios, entretanto o papel exato da glutamina ainda não está bem estabelecido. Em Ananas comosus (L.) Merr., a adição de glutamina ao meio de cultura exerceu efeito promotor sobre a taxa de organogênese e o vigor do crescimento das gemas caulinares a partir de bases foliares. Além da glutamina, discute-se se o estresse resultante da explantação também poderia estar envolvido com a indução do processo organogenético, acarretando na produção de espécies reativas de oxigênio e na alteração do estado redox endógeno. Esse estresse para ser benéfico, entretanto, deveria estar restrito a certo limite. O presente trabalho visou compreender o efeito favorável da glutamina na organogênese adventícia em bases foliares de abacaxizeiro cultivadas in vitro. O envolvimento da glutamina com uma possível diminuição do estresse oxidativo durante o período de indução da organogênese também foi abordado. Para tanto, buscou-se correlacionar a influência do suprimento de glutamina no meio de cultura com os teores endógenos de peróxido de hidrogênio, glutationa e ascorbato. O estado redox da glutationa e do ascorbato durante o período de indução da organogênese adventícia também foi analisado. Além disso, foram analisadas as atividades de duas enzimas antioxidantes nesses explantes foliares, a superóxido dismutase e a catalase. Tentativamente, a glutationa foi adicionada ao meio de cultura, contendo ou não glutamina, visando conhecer o efeito desse antioxidante no processo organogenético. Os resultados mostraram que a glutationa substituiu, mas não intensificou, o efeito benéfico da glutamina sobre a taxa de organogênese das bases foliares de abacaxizeiro. Esse antioxidante não substituiu o efeito positivo do aminoácido no ganho de massas fresca e seca dos eixos caulinares formados, no entanto atuou favoravelmente na formação de um maior número de gemas adventícias por explante inoculado. Ao que parece, o cultivo in vitro das bases foliares gerou um estresse oxidativo nesses tecidos logo no início do período de cultivo, a julgar pela alta concentração de H2O2 detectada nas primeiras 24 horas. Entretanto, essa possível condição estressante foi controlada ao longo do período de cultivo, retornando a uma homeostase do tecido e conferindo condição para que as células se reprogramassem para seguir a uma rota de organogênese caulinar. A glutamina pareceu favorecer a manutenção de um estado redox reduzido tanto de ASC quanto de GSH durante o período em que houve o possível estresse oxidativo. Os resultados das atividades das enzimas antioxidantes sugeriram que a CAT pode ter sido responsável pela regulação do conteúdo endógeno de H2O2, já que a SOD não apresentou alterações expressivas ao longo do período de indução da organogênese tanto em SIM quanto em SIMGln. Em conjunto, os resultados sugerem que o estresse oxidativo causado pelo cultivo in vitro pode ter gerado uma sinalização importante para que a organogênese se inicie, sendo que a glutamina exerceria um papel de manter o estado redox dos tecidos foliares reduzido no momento da maior concentração de H2O2 endógeno. / A positive influence of glutamine on organogenesis of in vitro cultured plant tissues has been demonstrated by several studies. It is well known that the endogenous synthesis of phytohormones can be influenced by nitrogen sources, although it is not completely established in which way glutamine acts in this process. The addition of this amino acid to the culture medium has enhanced the organogenesis rate and resulted in a better vigor of the shoots that were originated from the leaf bases of Ananas comosus (L.) Merr. cultured in in vitro conditions. It is also suggested that the tissue excision may result in a stressful condition by increasing the production of reactive oxygen species and changing the endogenous redox state, which might be involved in the induction of organogenic process. However, this stress should be beneficial only if restricted. The aim of this work was to comprehend the positive influence of glutamine on the in vitro adventitious organogenesis of pineapple leaf bases. It was also attempted to determine whether the glutamine would be involved on a possible oxidative stress decrease during the organogenesis induction. In order to answer these questions, we tried to correlate the presence of glutamine in the culture medium and the endogenous hydrogen peroxide, glutathione, ascorbate levels. The redox state of these antioxidants is also analyzed during the induction of adventitious shoot organogenesis. Moreover, two antioxidants enzymes activities are quantified in the leaf explants: catalase and superoxide dismutase. The glutathione influence on the process was also investigated, considering the glutamine presence or not. It was done in order to establish the effect of this antioxidant in the organogenic process. The results showed that glutathione could replace, but not enhance, the positive effect of glutamine on the organogenesis rate of pineapple leaf bases. This antioxidant did not substitute the positive effect presented by the glutamine on the acquisition of fresh and dry masses by the new shoots. On the other hand, glutathione enhanced the number of adventitious buds per explant. Apparently, the excision of the leaf bases and its subsequent cultivation in the induction culture medium resulted in the tissue oxidative stress early in the first 24 hours of incubation. This could be inferred by the high H2O2 concentrations detected during this period. However, this possible stressful condition was controlled during the culture period, leading to the return of the homeostasis of the tissue and allowing the cells to become determined to shoot organogenesis. During the probable period of oxidative stress, glutamine seemed to maintain the reduced redox state on both ASC and GSH. The results of the antioxidant enzymes activities suggested that CAT may have been responsible for the regulation of the endogenous H2O2 levels, while SOD did not showed significant changes during the induction of organogenesis of leaf bases cultivated either in SIM or SIMGln. Taken together, the results obtained in this work suggest that the oxidative stress caused by the excision of the leaf tissues and its in vitro cultivation may be an important signal to the induction of the leaf organogenesis. Furthermore, the glutamine may have a role in the maintenance of the reduced redox state when higher levels of endogenous H2O2 are present in the tissues.

As orbitelas de fio viscoso dao origem ao ramo mais diverso (Araneoidea) de Orbiculariae. Varias hipoteses foram levantadas para o aumento de diversidade de Araneoidea, mas nenhuma delas parece explicar completamente o fenomeno. O presente trabalho investigou uma nova hipotese: o surgimento do fio viscoso permitiu uma reducao da tenacidade, o que permitiria a exploracao de uma maior diversidade de microlocais, levand2,00cmo a maior diversificacao das especies no tempo evolutivo (Capitulo 1). A literatura mostra que a decisao de permanecer/desertar o microlocal (tenacidade) esta associada ao investimento na construcao da teia: aranhas de teias de alto custo (teias de lencol) tendem a apresentar tenacidade maior do que aranhas de teias de baixo custo (orbitelas). Para verificar se essa tendencia existe entre orbitelas com diferentes graus de investimento em teia, avaliamos a resposta de duas orbitelas, uma de fio viscoso (Metazygia rogenhoferi, Araneidae) e outra de fio cribelado (Zosis geniculata, Uloboridae) em funcao da reducao na dieta. Acompanhamos mudancas no abandono de microlocal e alteracoes de investimento em teia. A especie ecribelada nao muda a taxa de abandonos com a reducao na dieta, e mantem uma tenacidade baixa. Ao contrario, a especie cribelada aumenta a tenacidade e diminui o investimento em seda. No segundo experimento (Capitulo 2), medimos o custo de construcao dessas duas especies, para verificar se as teias orbiculares cribeladas tem um custo efetivamente maior do que o das teias orbiculares ecribeladas. Para tanto, realizamos medidas diretas do consumo de O2 (tecnica de respirometria fechada intermitente) em situacao de repouso e durante a construcao da teia. Essas medidas mostram que Z. geniculata mantem o metabolismo de repouso mais baixo, indicio de uma adaptacao metabolica para enfrentar uma restricao energetica maior. O consumo de O2 e tres vezes maior na construcao de cada centimetro de fio cribelado quando 1 comparado ao fio viscoso. O fato da teia orbicular ecribelada ser mais economica pode ajudar a entender a maior diversidade que este grupo apresenta em relacao ao ancestral de teia orbicular cribelada. Apresentando um metabolismo de atividade de construcao de teia mais economico, as orbitelas de fio viscoso puderam aumentar o seu nivel geral de atividade, deslocando-se mais frequentemente pelo ambiente, apresentando uma estrategia mais ativa de forrageamento. Isto leva a abandono mais frequente de microlocais expondo, assim, as orbitelas ecribeladas a uma maior diversidade de ambientes que, no longo prazo, poderia ser a chave para o aumento evolutivo na diversidade deste grupo. A perda do cribelo esta associada a um aumento significativo na diversidade de especies nao apenas entre as orbitelas, mas tambem em varios outros grupos dentro de Araneomorphae (Capitulo 3). Sendo o ponto comum, que se correlaciona a um aumento de diversidade em contextos morfologicos variados (diferentes grupos taxonomicos), bem como em situacoes ecologicamente distintas, a perda do cribelo surge como um fator causal privilegiado neste processo evolutivo. A hipotese de que a perda do fio cribelado de alto custo de construcao e responsavel pela maior diversificacao dos taxons ganha peso a partir da analise das multiplas perdas do cribelo ao longo da filogenia de Araneomorphae / The origin of the most diverse branch of orbweavers, the Araneoidea, coincides with the origin of the viscid silk in the group Orbiculariae. Many hypotheses were proposed to explain the increased diversity in Araneoidea, however none of them explain this phenomena completely. The present work investigates a new hypothesis: the disappearance of the cribellate silk (substituted by the viscid silk) allowed a reduction in tenacity, which in turn allowed the exploration of a major diversity of microhabitats, leading to a major diversification in the evolutionary time (Chapter 1). The literature shows that the decision of stay/leave the microhabitat (tenacity) is associated to the investment in web construction: spiders with costly webs (sheet web spiders) tend to present higher tenacity than spiders with low cost webs (orb web spiders). In order to test if this tendency also occurs among orbweavers with different web costs, we evaluated the response of a viscid (Metazygia rogenhoferi, Araneidae) and a cribellate silk orbweaver (Zosis geniculata, Uloboridae) to a reduction in food supply. We measured web parameters and the latency to abandon the site. The ecribellate spider maintain unaltered its low tenacity levels, even after the reduction in food supply. On other hand, the cribellate spider increases the tenacity and reduces web investment. In the second experiment (Chapter 2) we measured the construction and maintenance costs of the two species in order to verify if the cribellate orb webs have effectively a higher cost than the ecribellate ones. This was made through direct measurement of the spider 02 consumption (closed intermittent respirometry technique) while resting and building the web. These measurements show that Z. geniculata keeps a lower resting metabolism, what suggests a metabolic adaptation to energetic restrictions. While building the web, the consumption of O2 per centimeter of adhesive silk was three times higher in the cribellate than in the ecribellate web. The lower 3 cost of the ecribellate orb web can help us understand the higher diversity of this group in relation to the basal cribellate orb web. With a low cost web, the viscid silk orbweavers can have sustain a higher activity level, moving more frequently and showing a more active foraging strategy. The frequent abandonment of microhabitats expose these spiders to a higher environmental diversity. In the long evolutionary run this can be the key to the high diversity in this group. Loosing the cribellum is associated to a significant increase in species diversity not only among orbweavers, but also in many other Araneomorphae groups (Chapter 3). As a common theme uniting the increase in diversity in such disparate groups, with such diverse morphologies and ecologies, the loss of the cribellum emerges as a favored causal factor in this evolutionary process. The analysis of the multiple losses of the cribellum along the phylogeny of Araneomorphae gives strength to the hypothesis that the loss of the high cost cribellate thread leads to major taxonomic diversifications

Avaliaram-se as alterações na eliminação da antipirina e de seus principais produtos de biotransformação, 3-hidroximetilantipirina (3HMA), 4-hidroxiantipirina (4HOA) e norantipirina (NORA) em pacientes portadores de doenças hepáticas. Investigaram-se onze pacientes com cirrose hepática confirmada por biopsia, nove pacientes com esquistossomose hepatesplênica e vinte e cinco voluntários sadios. Os \"clearancesn total e hepático da antipirina foram reduzidos com prolongamento de sua meiavida de eliminação nos pacientes cirróticos. Os \"clearances\" de formação da 3HMA, 4HOA e NORA também foram reduzidos como consequência de seu comprometimento hepático. Os pacientes com esquistossomose hepatesplênica mostraram alterações no metabolismo da antipirina, afetando os \"clearances\" de formação da 3HMA e da 4HOA, enquanto que para a NORA este parãmetro manteve-se inalterado. Deste modo, a determinação do \"clearance\" total da antipirina e da excreção urinária da antipirina e seus principais produtos de biotransformação mostrou ser teste útil para avaliar o metabolismo oxidativo nas doenças hepáticas. / Changes on elimination of antipyrine and its main metabolites, 3-hydroxymethylantipyrine (3HMA), 4hydroxyantipyrine (4HOA) and norantipyrine (NORA) in patients with liver disease were evaluated. Eleven patients with liver cirrhosis virus B, biopsy confirmed, nine patients with hepatesplenic shistosomiasis and twenty-five healthy volunteers were investigated. Total body clearance and hepatic clearance of antipyrine were reduced with prolongation of its elimination half-life in cirrhotic patients. Clearances for production of 3HMA, 4HOA and NORA were reduced as a consequence of this liver impairment. Patients with hepatesplenic shistosomiasis showed changes on antipyrine metabolism affecting only the clearance for production of 3HMA and 4HOA, while NORA was unchanged. Therefore, the determination of antipyrine plasma clearance and urinary excretion of antipyrine and its main metabolites showed to be a usefu

Ao longo da história da humanidade, os produtos naturais oriundos de plantas, vêm sendo investigados e utilizados no tratamento de inúmeras doenças. Os alcaloides do gênero Corydalis, do tipo tetrahidroprotoberberina e, em especial a govaniadina, foram identificados como uma nova categoria de ligantes dopaminérgicos e responsáveis por atividades analgésica, antimalárica, leishmanicida e antiurease. A partir destes dados, objetivou-se investigar o perfil farmacocinético, o metabolismo e a permeabilidade intestinal in vitro do alcaloide govaniadina. Como resultado geral para o metabolismo in vitro, empregando fração microssomal animal e humana, foram obtidos cinco metabólitos: um O-desmetilado (M1); um di-hidroxilado (M2); um mono-hidroxilado (M3) e dois glicuronidados (M4 e M5). Um método por CLUEEM/ EM foi desenvolvido e validado para investigação do perfil farmacocinético da govaniadina em plasma de ratos, após a administração intravenosa. A análise das curvas de decaimento plasmático versus tempo de coleta indicam que os dados se ajustam ao modelo bicompartimental, com meia-vida de distribuição = 9,2 ± 8,9 min, clearance = 41,7 ± 30,4 mL min-1 kg-1 e meia-vida de eliminação = 55,1 ± 37,9 min. Com relação aos estudos de viabilidade celular, a govaniadina apresentou efeitos citotóxicos moderados frente às linhagens celulares Hep G2, HeK-T-293 e CCFSTTG1 em concentrações até 100 ?mol L-1. Estudo de permeabilidade intestinal in vitro em modelo Caco-2, sugere transporte por difusão passiva, com coeficiente de permeabilidade aparente de 20,6 ± 3,9 × 10-6 cm/s e taxa de efluxo de 0,55. Estes resultados serão importantes para direcionar os experimentos futuros no que tange ao desenvolvimento farmacêutico da govaniadina / Throughout humankind history, natural products from plants have been investigated and have been used in the treatment of countless diseases. Tetrahydroprotoberberine alkaloids from the Corydalis, in particular govaniadine, has been identified as a new category of dopaminergic ligands and responsible for analgesic, antimalarial, leishmanicidal and antiurease properties. Taking these data into account, the aim of this work was to investigate the pharmacokinetic profile, the in vitro metabolism and the intestinal permeability of the alkaloid govaniadine. As a general result for the in vitro metabolism, employing animal and human microsomal fraction, five metabolites were obtained: one O-demethylated (M1); one dihydroxylated (M2); one monohydroxylated (M3) and two glucuronidated (M4 and M5). A LC-MS/MS method was developed and validated for the investigation of the govaniadine pharmacokinetic profile in rat plasma following intravenous administration. The mean plasma concentration versus time profile was best fitted to a two-compartmental model, with a distribution half-life = 9.2 ± 8.9 min, clearance = 41.7 ± 30, 4 mL min-1 kg-1 and an elimination half-life = 55.1 ± 37.9 min. Regarding cell viability studies, govaniadine showed moderate cytotoxic effects against Hep G2, HeK-T-293 and CCF-STTG1 cell lines at concentrations up to 100 ?mol L-1. In vitro intestinal permeability study in Caco-2 model, suggests passive diffusion transport, with an apparent permeability value of 20.6 ± 3.9 × 10-6 cm/s and an efflux rate of 0.55 . These results will be important to guide future experiments concerning govaniadine pharmaceutical development

Com o objetivo de verificar o consumo alimentar e o estado nutricional em relação ao zinco de crianças submetidas a um programa de suplementação com ferro, foram estudadas 150 crianças com idade entre 2 e 7 anos, que pertenciam a por 2 creches do município de São Paulo. O período de estudo foi de 7 meses, dividido em três fases (F0, F1 e F2); onde avaliou-se em cada fase a dieta oferecida e a concentração de zinco no eritrócito das crianças. Na fase inicial do estudo (F0) avaliou-se a dieta normal oferecidas nas creches e o estado nutricional inicial das crianças; na F1, a creche ST recebeu o alimento fortificado com ferro e a creche SM recebeu o mesmo alimento porém sem a fortificação. Já na F2, a creche ST recebeu o alimento sem fortificação e a SM o alimento fortificado. Pelos resultados obtidos pode-se concluir que: as dietas se apresentaram deficientes em caloria e zinco para a creche ST e também em ferro para a creche SM, não estando adequada especialmente para as crianças acima de 4 anos; a fortificação do queijo \"petit suisse\" com ferro aminoquelato não causou mudança na concentração de zinco nos eritrócitos das crianças analisadas ao longo do estudo, embora o estado nutricional das mesmas em relação a este mineral encontrava-se deficiente podendo ser atribuido à qualidade da dieta. / Aiming to value the food consumption and the nutritional status of zinc on infants submitted to an iron supplementation program, were studied 150 pre-schollars aged 2 to 7 years old of two nurseries (ST e SM) in the city of São Paulo. Studies were seven month, based on three stages (F0, F1 e F2), where was assessed the diets offered and the erythrocite zinc on infants, in the each stage. In the initial stage (F0), were assessed the regular diets offered by the nurseries and the initial nutritional status on infants; in the F1), the diets from nursery ST had meals supplemented with iron and the diets from nursery SM had the same meals although without the supplementation. In F2), the diets from nursery ST had meals without the supplementation and the diets from nursery SM the meals supplemented with iron. According with the results we can conclude: the diets were calories and zinc deficient to nursery ST and iron defícient to nursery SM, also; the iron supplementation in the \"petit suisse\" cheese with aminoquell iron did not cause any change in the erythrocite zinc concentration of the children being studied although the nutritional status were zinc deficient due to a quality of the diets.

A folha é o principal órgão de absorção e assimilação de nutrientes dos membros epífitos com tanque da família Bromeliaceae. Pouco se conhece sobre a nutrição dessas bromélias, entretanto algumas evidências (TAKAHASHI, 2007) indicaram a possibilidade de haver uma absorção preferencial do nitrogênio na porção basal e a assimilação desse nutriente na porção apical foliar. Para se compreender melhor os mecanismos de assimilação do nitrogênio utilizados pelas bromélias epífitas com tanque, foi proposto neste trabalho dois principais objetivos: 1) verificar possíveis diferenças quanto à capacidade de assimilação do nitrogênio em diferentes porções foliares de uma bromélia epífita com tanque; 2) constatar possível preferência em assimilar fonte nitrogenada orgânica ou inorgânica, quando ambas estão disponíveis no interior do tanque. A estratégia utilizada para o primeiro objetivo foi cultivar bromélias da espécie Vriesea gigantea, cultivadas em casa de vegetação e registrar em suas folhas as variações temporais das atividades enzimáticas da urease, redutase do nitrato (NR), sintetase da glutamina (GS), desidrogenase do glutamato dependente de NADH (GDH-NADH) e arginase após o fornecimento, no interior do tanque das bromélias, de uma solução nutritiva contendo NO3-/NH4+ (3:2) ou uréia (5mM de N total), como fontes de nitrogênio. Foram analisadas as atividades enzimáticas nas porções apical e basal foliar de Vriesea gigantea nos seguintes tempos: 0, 1, 3, 6, 9, 12, 24, 48, 51, 54, 57, 60 e 73 horas após a rega. Além disso, também foram quantificadas as concentrações do amônio e da uréia endógenos presentes nos tecidos foliares de ambas as porções. Os resultados mostraram que, independente do tratamento, as atividades de GS, GDH e arginase foram mais altas na porção apical em todos os tempos de coleta. Já as atividades da NR e urease, foram crescentes e mais intensas na porção basal, da mesma forma como foi visto para as concentrações endógenas de amônio durante as primeiras 24 horas. As maiores concentrações de uréia endógenas também foram registradas principalmente na porção basal foliar. Esses resultados permitem inferir que a região apical pode estar envolvida, preferencialmente, com a assimilação do nitrogênio, enquanto que a basal, com a sua absorção, redução do nitrato e hidrólise da uréia. Além disso, sugere-se também que ocorra o transporte de amônio da base para a região de sua assimilação em aminoácidos (ápice) através do xilema e apoplasto. Em relação ao segundo objetivo, a estratégia utilizada foi fornecer à bromélia Vriesea gigantea com uma solução nutritiva que continha 5mM de nitrogênio total, disponível na forma inorgânica + orgânica (NH4+/NO3- + uréia nas proporções 1:1 ou 1:3, respectivamente). Como controle foram empregados os seguintes tratamentos: ausência de nitrogênio e presença de somente fontes inorgânicas (5mM de nitrogênio total). As porções apical e basal das folhas foram coletadas 9 horas após o fornecimento das soluções nutritivas e, posteriormente, utilizadas nas análises enzimáticas referentes às atividades da urease, NR, GS, e GDH-NADH. Além disso, foram quantificados em ambas as porções os teores endógenos de amônio, uréia, amido, açúcares totais e clorofila total. Também foram determinados as densidades de tricomas e estômatos nas duas regiões foliares. Verificou-se que as maiores atividades da GS (porção apical) e GDH (porção basal) foram registradas nos dois tratamentos com uréia (1:1 e 1:3) quando comparadas com as dos dois controles. As maiores concentrações de amônio endógeno na porção basal também foram detectadas nos mesmos tratamentos com uréia (1:1 e 1:3). Já a atividade da NR apresentou os maiores valores nos tratamentos de proporção 1:1 e no controle 2 (com somente fontes inorgânicas) na porção basal foliar. De modo interessante, a GS não mostrou o mesmo desempenho nos dois tratamentos (1:1 e controle 2), sendo que, no tratamento de proporção 1:1, a atividade foi o dobro daquela registrada no controle 2. Todos esses resultados analisados em conjunto permitem inferir que a bromélia Vriesea gigantea pode ter preferência por assimilar o nitrogênio proveniente da uréia quando essa fonte se encontra disponível no interior do tanque, mesmo quando também há a presença de formas inorgânicas (nitrato e amônio). / The leaf is considered the most important vegetative organ of tank epiphytic bromeliads due to its ability to absorb and assimilate nutrients. Little is known about the nutrition of these bromeliads, but there are evidences that the basal region of the leaf may be preferentially involved with the absorption of nutrients, whereas the apical region may be involved with its assimilation (TAKAHASHI, 2007). In order to better understand the mechanisms utilized by these tank epiphytic bromeliads to optimize the nitrogen acquisition and assimilation, it was proposed in this study two main objectives: 1) verify the existence of a differential capacity to assimilate nitrogen in different leaf portions of a tank epiphytic bromeliad; 2) analyze the nitrogen assimilation preference between inorganic and organic nitrogen sources when both are available in the tank water. The experiments of the first objective were conducted using Vriesea gigantea plants, a typical specie of tank epiphytic bromeliad, cultivated in greenhouse. Nutrient solution containing NO3-/NH4+ (3:2) or urea as nitrogen source (5mM of total N) was supplied into the tank of these plants and the activities of urease, nitrate reductase (NR), glutamine synthetase (GS), NADH-dependent glutamate dehydrogenase (GDH-NADH) and arginase were quantified in apical and basal leaf portions after 0, 1, 3, 6, 9, 12, 24, 48, 51, 54, 57, 60 and 73 hours. The ammonium and urea present in the tissues were also analyzed. Independent of the nitrogen source utilized, GS, GDH and arginase activities were higher in the apical portions of leaves in all the period analyzed. On the other hand, the opposite was observed in relation to NR and urease activities. The highest activities were detected in the basal portion of leaves at all harvest times, with increasing values during the first 24 hours of experiment. Interestingly, this same pattern was also observed in relation to the endogenous ammonium and urea: the highest contents were detected in the basal portion of leaves, with a gradual increase of ammonium in the first 24 hours of analysis. These results suggest that the basal portion of leaves was preferentially involved in nitrogen uptake, nitrate reduction and urea hydrolysis, while the apical portion was the main responsible for nitrogen assimilation. Moreover, it was possible to infer that the ammonium may be transported from the base (uptake region) to the apex of the leaves (the main nitrogen assimilation region) through the xylem and apoplast. In order to analyze the nitrogen assimilation preference of Vriesea gigantea, a nutrient solution containing 5mM of nitrogen containing a mixture of inorganic and organic sources (NH4+/NO3- + urea in the proportion 1:1 or 1:3, respectively) were supplied into the tank of the bromeliads. As a control, a nutrient solution containing no nitrogen source (control 1) or 5mM of inorganic nitrogen sources (control 2) were used. The basal and apical leaf tissues were collected after 9 hours and the activities of urease, NR, GS and GDH-NADH were analyzed. Endogenous ammonium, urea, starch, total soluble carbohydrates and total chlorophyll were also quantified. Furthermore, the density of trichomes and stomata were also analyzed on the abaxial leaf surface of both regions. The highest activities of GS (apex) and GDH (base), as well as the endogenous ammonium content (base), were registered in both treatments with urea (1:1 and 1:3) in comparison with both controls. A different pattern was obtained analyzing NR: the highest activities were observed in plants that received nutrient solutions containing only inorganic nitrogen (control 2) or a mixture of inorganic and organic nitrogen in the proportion 1:1. Moreover, an interesting behavior was observed in relation to the GS activity: it was detected the double activity of this enzyme when Vriesea gigantea was in contact with a mixture of inorganic and organic nitrogen (1:1) in comparison to the plants in the presence of only inorganic nitrogen sources. All results suggest that Vriesea gigantea may have preference to assimilate organic nitrogen source (urea), when the inorganic nitrogen sources (ammonium and nitrate) are also available in the tank water.