Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-02T18:10:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 577340 bytes, checksum: 019f4d91340efac9861eed0ddbc447f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T18:10:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 577340 bytes, checksum: 019f4d91340efac9861eed0ddbc447f1 (MD5) Previous issue date: 2007-12-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os determinantes de resistência aos antimicrobianos vancomicina e oxacilina foram investigados em 264 bactérias do gênero Staphylococcus originados de salame fermentado, de bovinos acometidos com mastite e de casos clínicos humanos. Todos os isolados foram sensíveis ao antibiótico vancomicina e não apresentaram o gene vanA. Dos 57 isolados de salame fermentado, houve um predomínio de CNS, estafilococos coagulase negativos , (89,5%) sobre Staphylococcus aureus (10,5%) e apenas um isolado apresentou-se resistente à oxacilina pelo método de difusão em disco e seu mecanismo de resistência foi proveniente da atividade da -lactamase de expectro extendido). Noventa e cinco isolados de mastite bovina foram submetidos ao teste de atividade da enzima coagulase, predominando a espécie de S. aureus (68,5%), sobre os CNS (32,5%) e ao teste de sensibilidade in vitro, obtendo-se 14 resistentes a oxacilina, sendo dois isolados apresentando o gene mecA e outros 11 atividade de ESBL, predominando este mecanismo de resistência. Dos espécimes clínicos, 52,7% foram CNS e 47,3% S. aureus constituindo 112 isolados, sendo 103 resistentes à oxacilina. Destes, 67 possuíam o gene mecA, 71 apresentaram atividade de ESBL e 40 isolados ambos os mecanismos de resistência. Entre os da espécie S. aureus, predominou a presença do gene mecA como o provável fator de resistência, enquanto nos isolados de CNS, a atividade de ESBL foi mais significativa como possível determinante de resistência. Cinco isolados de origem humana e um de leite mastítico não tiveram seu mecanismo de resistência elucidado, sugerindo ser linhagens MODSA (modified penicillin-binding protein S. aureus) ou outro mecanismo de resistência. Os resultados demonstraram a maior prevalência de resistência a antimicrobianos entre os isolados relacionados a espécimes clínicos humanos seguidos daqueles de vacas mastíticas, bem como a diversidade em possíveis mecanismos de resistência. / The determinants of antimicrobial resistance oxacillin and vancomycin were investigated on 264 Staphylococcus bacteria of the genus originated from fermented sausage, ill with bovine mastitis cases in humans. All isolates were sensitive to the antibiotic vancomycin and not had the vanA gene. Of the 57 isolates of fermented sausage, there was a predominance of CNS, coagulase negative staphylococci, (89.5%) on Staphylococcus aureus (10.5%) and only one isolated presented itself resistant to oxacillin by the disk diffusion method, and its mechanism of resistance was coming from the activity of the enzyme ESBL ( -lactamase-spectrum extended). Ninety-five isolates of bovine mastitis were submitted to the test of coagulase activity of the enzyme, most kinds of S. Aureus (68.5%) on the CNS (32.5%) and the test sensitivity in vitro, obtaining 14 resistant to oxacillin and two isolated presenting the mecA gene and 11 other activity of ESBL, mainly this mechanism of resistance. Two clinical specimens, were 52.7% and 47.3% CNS S. Aureus isolates constituting 112, and 103 resistant to oxacillin. Of these, 67 had the mecA gene, 71 showed activity of ESBL and 40 isolates both mechanisms of resistance. Among the species S. Aureus, the predominant presence of the mecA gene as the likely source of resistance, while in isolated from CNS, the activity of ESBL was more significant as a possible determinant of resistance. Five isolates of human origin and a milk mastítico not have its mechanism of resistance clear, suggesting strains be MODSA (modified penicillin-binding protein S. aureus) or other mechanism of resistance. The results showed a higher prevalence of resistance to antimicrobial among isolates related to human clinical specimens followed those of cows mastíticas, and the diversity in possible mechanisms of resistance.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-10-16T15:05:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 939004 bytes, checksum: 91690f8ed614b34a151ed34ced32bb7e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T15:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 939004 bytes, checksum: 91690f8ed614b34a151ed34ced32bb7e (MD5) Previous issue date: 2011-03-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O presente trabalho teve por objetivo estudar as respostas fisiológicas e morfológicas de células de Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 aos estresses ácido e por sais biliares, alem de identificar e realizar análises filogenética e de expressão de genes possivelmente relacionados a esses estresses. Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 não cresce em caldo MRS pH 3,5 entretanto, células mantidas neste meio por quatro horas toleram o estresse ácido, como demonstrado por curvas de sobrevivência. A maior tolerância da bactéria aos sais biliares mistos e a menor ao ácido glicodeoxicólico são características de L. delbrueckii UFV H2b20 submetida a estes estresses, em estudo in vitro. A análise da morfologia das células por Microscopia de Força Atômica (MFA) mostrou que os estresses ácido e por sais biliares provocaram alterações na morfologia da célula - a superficie da parede se apresentou rugosa com acentuada redução na dimensão correspondente à altura, em todas as condições de estresse testadas. Em conjunto, os resultados demonstram caracteristicas de respostas fisiológicas de L. delbrueckii UFV H2b20 aos estresses ácido e por sais biliares desejáveis e necessárias em bactéria probiótica, ou seja, resistir e sobreviver em condições similares às prevalecentes no trato gastrointestinal (TGI) de humanos. Os genes clpP, clpE, clpL e cle de L. delbrueckii UFV H2b20, cujos produtos pertencem ao complexo proteolítico Clp apresentaram alta identidade de sequência, variando de 96 a 97 % com as de Lactobacillus delbreuckii subsp. bulgaricus ATCC 11842. As árvores filogenéticas reconstruídas por Inferência Bayesiana mostraram os genes clpP, clpL e clpE agrupados com os de L. delbreuckii subsp. bulgaricus ATCC 11842. As exposições das células aos meios MRS pH 3,5, MRS contendo O,l % de sais biliares mistos e a MRS contendo O,l % de ácido glicodeoxicólico por 30 e 60 minutos aumentaram a expressão dos quatro genes, enquanto a exposição a ácido taurodeoxicólico aumentou apenas a do gene clpL. Considerando o envolvimento dos genes clpP, clpL, clpE e cle nas respostas aos estresses ácido e por sais biliares infere-se que a atividade do complexo proteolítico Clp pode representar mecanismo de reparo e/ou degradação de proteínas danificadas pelas condições de estresse analisadas neste estudo. Os genes codificadores de ornitina descarboxilase e de permease de aminoácido identificados em L. delbrueckii UFV H2b20 agruparam na reconstrução filogenética com os de L. delbreuckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, sendo de 96 a 98 % a identidade das sequências. O aumento da expressão do gene que codifica a ornitina descarboxilase após a exposição das células por 30 e 60 minutos em MRS pH 3,5, meio rico, mostra o envolvimento deste gene na resposta ao estresse ácidoem L. delbrueckii UFV H2b20 e evidencia que a proteína codificada por esse gene é a envolvida na regulação do pH intracelular. Sugere- se a descarboxilação de aminoácidos como mecanismo de adaptação à condição de acidez do meio. Com o estudo da expressão dos genes spx, dps e pax, todos envolvidos no estresse oxidativo em L. delbrueckii H2b20, caracterizou-se base molecular envolvida no fenômeno de proteção cruzada in vitro ao constatar-se a sobreposição e a inespecificidade de genes aos estresses investigados. Particularmente, o aumento da expressão do gene dps após exposição das células aos meios MRS pH 3,5 e MRS contendo 0,1 % de ácido glicodeoxicólico foi interpretado como mecanismo de proteção do DNA a acidez interna das células. No presente estudo, bases fisiológicas e moleculares que possibilitam a probiose por L. delbrueckii UFV H2b20 ficam esclarecidas no que tange à existência de mecanismos para sobrevivência e persistência em condições presentes no TGI de humanos. / The objective of this work was to study the physiological and morphological responses of Lactobacillus delbrueckiz' UFV H2b20 to acid and bile salts stress and to identify and accomplish phylogenetic and expression analysis of genes related to these stress. Lactobacz'llus delbrueckiz' UFV H2b20 does not grown MRS broth pH 3.5, however, cells treated in this medium for four hours tolerate acid stress, as demonstrated bysurvivalcurves. This bacterium is more tolerant to mixed bile salts and less tolerant to glycodeoxycolic. Analysis of cell morphology by atomic force microscopy (AFM) showed that acid stress and bile salts caused changes in cell morphology - the wall surface became rough and reducted in height, in all stress conditions tested. The results demonstrate that L. delbrueckz'z' UFV H2b20 may resist similar conditions prevailing in the gastrointestinal tract of humans. The genes clpP, clpE, clpL and cle of L. delbrueckz'z' UFV H2b20, whose products belong to the Clpproteolytic complex showed high sequence identity, ranging from 96 to 97% with those of Lactobacillus delbreuckiz' subsp.bulgaricus ATCC 11842. Phylogenetic treesreconstructedbyBayesian inferenceshowedthegenes clpP, clpE and clpL grouped with the genes of L.delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842. The expression increase of the clpP, clpE, clpL and clegenesin L. delbrueckz'z' UFV H2b20 in response to acid and bile salts stress was observed after 30 and 60 minutes. The exposure of cells to MRS pH 3,5, MRS containing 0,1 % mixed mixed bile salts and MRS containing 0,1 % glycodeoxycolic acid for 30 and 60 minutes increased the expression of four genes, while exposure to taurodexycolic acid increased the expression of clpL alone. The involvement of clpP, clpE, clpL and cle in the responses to acid stress and bile salts showed that the activity of the Clp proteolytic complex may represent the mechanism of repair and/or degradation of proteins damaged by the stress conditions analyzed in this study. The genes encoding ornithine decarboxylase and amino acid permease identified in L. delbrueckz'z' UFV H2b20 grouped in phylogenetic reconstruction with those of L. delbreuckiz' subsp. bulgarz'cus ATCC 11842, with 96 to 98% identity of sequences. The expression of the gene encoding omithine decarboxylase increased after exposing the cells for 30 and 60 minutes in MRS pH 3.5, a rich medium, an evidence of the involvement of this gene in acid stress response in L. delbrueckiz' UFV H2b20 and also that the protein encoded by this gene is involved in the regulation of intracellular pH. It is suggested that the decarboxylation of amino acids as a mechanism for adaptation to acid stress. The molecular basis of the cross protection phenomenon was characterized by the expression of pr, dps and pox, all involved in oxidative stress response. There are overlaps and inespecifity in the expression of those genes to stress investigated. The increased in dps expression following exposure to pH 3.5 to 0,1 % glycodexycolic acid was interpreted as a DNA protective mechanism to low internal cell acidity. In this study, physiological and molecular basis that enable probiose in L. delbrueckz'z' UFV H2b20 are clarified with regard to the existence of mechanisms for survival and persistence under conditions present in the human gut.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-08-28T12:53:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1263074 bytes, checksum: b9c35b0eeba1b96403fdc17ec96e648f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-28T12:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1263074 bytes, checksum: b9c35b0eeba1b96403fdc17ec96e648f (MD5) Previous issue date: 2016-07-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os microrganismos exercem uma ampla diversidade de funções no solo e atuam como indicadores capazes de refletir pequenas mudanças nas propriedades desse, antes mesmo que alterações nos teores de matéria orgânica possam ser detectados, tornando possível evidenciar alterações antrópicas no solo. Devido à contínua ação antrópica sobre os solos existe uma grande necessidade de se estudar como as comunidades microbianas tem respondido a estas alterações. Este trabalho teve como objetivos analisar a diversidade taxonômica e funcional da comunidade bacteriana em solos de pastagem e solos de floresta Amazônico através de técnicas independentes de cultivo, bem como o isolamento de bactérias e leveduras que tivessem potencial antagonista contra fitopatógenos. As análises filogenéticas mostraram que os filos mais abundantes em ambos os ambientes foram Acidobacteria, Proteobacteria, Actinobacteria, Firmicutes e Chloroflexi, porém uma maior diversidade foi encontrada nos solos de pastagem. Na análise funcional foi possível notar que o ambiente de pastagem obteve um maior número de genes relacionados à dormência/esporulação, resposta ao stress e metabolismo de aminoácidos. Genes associados com resistência a antibióticos foram menos abundantes em pastagem do que em floresta, concluindo que os solos de floresta são mais estáveis e menos susceptíveis a ação de fitopatógenos oportunistas quando comparados aos de pastagem. Um total de 54 microrganismos foram isolados das amostras de solo, destes, 45 bactérias e nove leveduras. Duas bactérias, identificadas como Bacillus spp. e Lysinibacillus xylanilyticus, e quatro leveduras apresentaram percentuais de inibição contra Botrytis cinerea, os percentuais de inibição variaram de 19,69% a 44,16 %. Quando testados contra Fusarium oxysporum apenas três isolados de leveduras foram os responsáveis pelos resultados positivos em relação ao controle, com percentuais de 33,11 % a 36,63%. Contra Colletotrichum acutatum cinco isolados de levedura foram capazes de reduzir o tamanho do fitopatógeno, com percentuais variando de 35,53% a 48,64%. Sendo assim os isolados mostraram-se favoráveis para o biocontrole dos patógenos testados. / Microorganisms perform a wide variety of functions in the soil, and are able to act as indicators that reflect small changes in soil properties, even before changes in soil organic matter can be detected, making it possible to observe anthropogenic changes in the soil. Because of continuous human action on the soil, there is a great need to study how microbial communities have responded to these changes. This study aimed to analyze the taxonomic and functional diversity of the bacterial community in grassland soils and forest soils from Mutum Parana river basin in the satate of Rononia, Brazil. For this independent cultivation techniques as well as the isolation of bacteria and yeast that had antagonist potential against plant pathogens were used. Phylogenetic analysis showed that the most abundant phylum in both environments were Acidobacteria, Proteobacteria, Actinobacteria, Firmicutes and Chloroflexi, but the greatest diversity was found in forest soils. In the functional analysis one could notece that the grassland soils obtained a larger number of genes related to dormancy / sporulation, stress response, and amino acid metabolism. Genes associated with resistance to antibiotics were less abundant in pasture than in forest, concluding that forest soils are more stable and less susceptible to action of opportunistic pathogens when compared to pasture. A total of 54 microorganisms were isolated from soil samples of these 45 bacteria and nine yeasts. Two bacteria, identified as Bacillus spp. and Lysinibacillus xylanilyticus and four yeast showed inhibition percentage against Botrytis cinerea, the inhibition percentage ranged from 19.69% to 44.16%. When tested against Fusarium oxysporum, only three yeast isolates present positive results in the control, from 33.11% to 36.63% success percentage. Against Colletotrichum acutatum, five isolates of yeast have reduced the size of the pathogen, with percentages ranging from 35.53% to 48.64%. Thus, isolates were favorable for the biocontrol of the tested pathogens.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-08-29T18:54:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 947486 bytes, checksum: 6d7e934deec08032d3a902d1d879ef0a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T18:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 947486 bytes, checksum: 6d7e934deec08032d3a902d1d879ef0a (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Vírus que possuem genoma constituído por DNA fita simples circular são amplamente distribuídos na natureza. As constantes descobertas aliadas à grande diversidade genética desses vírus têm ampliado a compreensão sobre a trajetória evolutiva desse grupo. A partir de 2010 um grupo divergente de vírus com genoma de DNA fita simples circular, denominado genomovírus, passou a ser identificado em diversos ambientes (fezes e esgoto) e associados a diferentes organismos (plantas, fungos, humanos, mamíferos, moluscos e insetos). Neste trabalho foram caracterizados dois genomovírus denominados Momordica charantia associated gemycircularvirus (MorGemy) e Euphorbia heterophylla associated gemycircularvirus (EupGemy) encontrados associados às plantas silvestres Momordica charantia e Euphorbia heterophylla respectivamente. Ambos os vírus possuem organização genômica típica dos genomovírus. Ambos os vírus apresentam stem-loop com nanonucleotídeo conservado em todos os genomovírus, sendo a sequência TAATRTTAT (N pode ser A ou G). Entretanto, no isolado MorGemy foi observado uma estrutura em stem-loop extra na possível origem de replicação não presente em outros genomovírus já descritos. Em ambos os vírus foi observada a presença de um íntron, no interior da ORF que codifica a proteína Rep sendo que o íntron observado em EupGemy é maior que o observado em MorGemy. Na proteína Rep foram observados os motivos I, II e III, e os domínios Walker A, B, C e GRS, elementos encontrados tipicamente na proteína Rep dos geminivírus. O SDT (Sequence Demarcation Tool) revelou que MorGemy tem 72% de identidade com Pteropus associated gemycircularvirus 3 e Hypericum associated gemycircularvirus 1. Além disso, o EupGemy mostra 66% de identidade com Odonata asssociated gemycircularvirus 1. A taxa de identidade de nucleotídeos do genoma completo dos vírus isolados neste trabalho com outros genomovírus já descritos, permite classificar esses novos isolados como duas novas espécies. / Viruses that have genomes consisting of simple circular DNA are widely distributed in nature. The constant discoveries allied to the great genetic diversity of these viruses have broadened the understanding of the evolutionary trajectory of this group. In 2010 a divergent group of viruses with a circular ssDNA genome called Genomovírus was identified in several environments (feces and sewage) and associated with different organisms (plants, fungi, humans, mammals, mollusks and insects). In this work, two Genomovíruses found associated with wild plants were characterized. Both virus shows a structure Genomovírus-like. However two interesting facts were observed. The first, a presence a second structure on stem-loop in the MorGemy no related in other Genomovírus. Both virus presents stem-loop with nanonucleotide conserved in all Genomovírus. Being that the sequence TAATRTTAT (N could be A or G). We also observed the presence of a íntron in both genome, inside the ORF’s Rep. The íntron of EufGmey is greater than MorGemy. In the Rep protein were observed the motif I, II and III. Interestingly, also were observed the presence of Motifs Walker A to C and GRS domain. These elementes are found on protein Rep’s Geminivírus. The SDT releaved that MorGemy shows 72% of identity with Pteropus associated gemycircularvirus 3 and Hypericum associated gemycircularvirus 1. In addition EupGemy shows 66% of identity with Odonata associated gemycircularvirus 1. The rate of identity of MorGemy and EupGemy with Genomovírus associate with plants combined with analysis phylogeny are an indicative that these virus can have a possible host-virus relation with plants.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-08-30T12:16:36Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2727260 bytes, checksum: 31158917bcec0d8108896d64e8eca79d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-30T12:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2727260 bytes, checksum: 31158917bcec0d8108896d64e8eca79d (MD5) Previous issue date: 2017-07-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Salmonella é um dos principais patógenos que causam infecções relacionadas ao consumo de alimentos contaminados. Salmonella enterica sorotipo Enteritidis (Salmonella Enteritidis) é mais comumente associado a surtos clínicos em vários países, incluindo no Brasil. Por meio do mecanismo de quorum sensing (QS), esse patógeno é capaz de coordenar seu perfil de expressão gênica com a densidade populacional. O mecanismo de QS mediado pelo autoindutor-1 (AI-1) acil homoserina lactona (AHL) em Salmonella é incompleto, uma vez que não há síntese dessa molécula. Entretanto, esse patógeno é capaz de detectar AHLs produzidas por outras espécies e regular funções celulares. Neste trabalho, foi avaliada a influência de n-dodecanoilhomoserina lactona (C12-HSL) no consumo de glicose e no metabolismo de Salmonella Enteritidis PT4 578 cultivada em condições anaeróbias. A análise do sobrenadante do meio de cultura de Salmonella por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) revelou que a absorção de glicose após 4 e 6 h de cultivo na presença de 50 nmol L -1 de C12-HSL foi 26 e 29% menor, respectivamente, do que o constatado na ausência de C12-HSL. Este AI-1 também influenciou na abundância de alguns metabólitos intracelulares, analisados em cromatógrafo gasoso acoplado a espectrômetro de massas (GC-MS). Os metabólitos detectados estão relacionados com as vias de metabolismo de glicerolipídios, purinas, aminoácidos e biossíntese de aminoacil-tRNA. A análise do sobrenadante por cromatografia líquida de ultra desempenho acoplada a um sistema de espectrômetro de massa do tipo triploquadrupolo (UPLC-QqQ /MS) revelou que houve aumento de 1,64 vezes na concentração de C12-HSL até 7 h no meio de cultura em que essa molécula foi adicionada. Os dados obtidos demonstraram a influência de C12-HSL exógena no metabolismo de Salmonella Enteritidis PT4 578 e, além disso, evidenciaram uma possível síntese de C12-HSL por este patógeno. Por se tratar de resultado ainda não observado anteriormente, esta informação deverá ser confirmada por análises futuras. / Salmonella is one of the major pathogens that cause infections related to the consumption of contaminated food. Salmonella enterica serotype Enteritidis (Salmonella Enteritidis) is most commonly associated with clinical outbreaks in several countries, including Brazil. By means of the quorum sensing (QS) mechanism, this pathogen is able to coordinate its gene expression profile with the population density. The mechanism of QS mediated by the autoinducer-1 (AI-1) acyl homoserine lactone (AHL) in Salmonella is incomplete as there is no synthesis of this molecule. However, this pathogen is capable of detecting AHLs produced by other species and regulating cellular functions. In this work, the influence of n-dodecanoilhomoserine lactone (C12-HSL) on glucose consumption and the metabolism of Salmonella Enteritidis PT4 578 cultured under anaerobic conditions was evaluated. Supernatant analysis of the Salmonella culture medium by high performance liquid chromatography (HPLC) showed that glucose uptake after 4 and 6 h of cultivation in the presence of 50 nmol L -1 C12-HSL was 26 and 29% lower, respectively, than that found in the absence of C12-HSL. This AI-1 also influenced the abundance of some intracellular metabolites, analyzed in gas chromatograph coupled to mass spectrometer (GC-MS). The metabolites detected are related to glycerolipid, purine, amino acid and aminoacyl-tRNA biosynthesis pathways. Analysis of the supernatant by ultra-performance liquid chromatography coupled to a triple- quadrupole mass spectrometer system (UPLC-QqQ / MS) revealed that there was a 1.64-fold increase in C12-HSL concentration up to 7 h of cultivation in the culture medium in that this molecule was added. The data obtained demonstrated the influence of exogenous C12-HSL on the metabolism of Salmonella Enteritidis PT4 578 and, in addition, evidenced a possible synthesis of C12-HSL by this pathogen. As this result was not previously observed, this information should be confirmed by future analyzes.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-09T08:55:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1029951 bytes, checksum: 361758ed3d2e0d1b698e70ceef444093 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-09T08:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1029951 bytes, checksum: 361758ed3d2e0d1b698e70ceef444093 (MD5) Previous issue date: 2007-08-06 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O peptídeo denominado SBm 7462 (Sintético Boophilus microplus 7462) é uma vacina desenvolvida a partir da seqüência da proteína intestinal do carrapato B. microplus denominada Bm 86 apresentando ação imunogênica contra o mesmo. O carrapato B. microplus é um importante artrópode da medicina veterinária devido a perdas econômicas e problemas de saúde causados pelo referido parasita no gado da América Central e do Sul, bem como da Austrália. Este trabalho descreve a obtenção de linhagens de Kluyveromyces lactis recombinantes produtoras do referido peptídeo. Dois vetores de expressão integrativos foram construídos a partir do vetor pKLAC1: pKLAC1-seq1, contendo a seqüência 1 constituída por três cópias da seqüência de nucleotídeos que codifica para o SBm 7462 e o pKLAC1-seq4, contendo a seqüência 4 constituída por uma única cópia da seqüência de nucleotídeos que codifica o SBm 7462. As construções foram confirmadas por sequenciamento. O cassete de integração obtido pela clivagem do vetor com a enzima SacII foi utilizado na transformação da linhagem selvagem de K. lactis CBS2359. A integração dos cassetes por recombinação homóloga no locus LAC4 foi confirmada por PCR. A análise dos recombinantes de K. lactis por RT-PCR e a detecção do peptídeo, utilizando anticorpos monoclonais contra SBm 7462, comprovaram a transcrição e a expressão extracelular dos peptídeos. Os recombinantes foram cultivados em regime de batelada em YPGlicerol, alcançando uma concentração de biomassa de 10 g·L-1. A biomassa obtida foi transferida para o meio YNB com 4% (p/v) de lactose para induzir o promotor LAC4 e a síntese de SBm 7462 recombinante. Amostras foram analisadas quanto à concentração de proteína extracelular, por eletroforese em SDS-PAGE e detecção do imunógeno. A indução da síntese dos peptídeos foi testada sob duas condições: sem pulso adicional de lactose e com pulso de lactose, a cada 24 horas, durante 144 horas de indução. A concentração de proteínas extracelulares na segunda condição foi maior quando comparada com a condição sem pulso adicional de lactose. Atividade proteolítica não foi detectada no sobrenadante. O perfil eletroforético em SDS-PAGE revelando três bandas de aproximadamente 6, 10 e 21 kDa relacionadas ao peptídeo de interesse é discutido. A detecção do peptídeo vacinal com anticorpos monoclonais comprovou a presença extracelular do rSBm 7462. / The peptide designated SBm 7462 (Synthetic Boophilus microplus 7462) induces an immunogenic response against the tick B. microplus, an important arthropods in veterinary medicine due to the economic losses and the health problems caused in cattle production in Central and South America and Australia. Here we describe the construction of recombinant Kluyveromyces lactis yeast strains expressing the gene for rSBm 7462. Two integrative expression cassettes harboring one or three copies of the nucleotide sequence coding for the SBm 7462 were built from the vector pKLAC1. The construction of the expression vectors was confirmed by sequencing. The transformation of wild type K. lactis CBS2359, was performed and the integration of the cassettes by homologous recombination into the LAC4 locus of the transformed K. lactis genomes was verified by PCR. The transcription and extracellular expression of the peptides have been confirmed in recombinants K. lactis strains by RT-PCR and monoclonal antibodies against SBm 7462. The recombinants were cultured in shake-flask YPGlycerol medium generating 10 g·L-1 biomass. The biomass obtained was transferred to mineral medium with lactose 4% (w/v) to induce the LAC4 promoter and the synthesis of recombinant SBm 7462. Samples were analyzed for total protein, SDS-PAGE and immunogenic detection. The peptide production was investigated under two conditions: with additional lactose pulse at 24 hours intervals during 144 hours of induction and with no additional lactose pulse. The extracellular protein concentration in the first condition was higher compared to the condition with no additional pulse of lactose. Proteolytic activity was not detected into the medium. Three major protein bands of approximated 6, 10 and 21 kDa related to the desired peptide were detected by SDS-PAGE.

SARAIVA, J. P. B. Atividade da microbiota do solo e desenvolvimento de mudas de bananeira biofertirrigadas. 2009. 82 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Solos e Nutrição de Plantas) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-09-11T12:46:02Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_jpbsaraiva.pdf: 797363 bytes, checksum: 134baaf8a50fb4815f97dd6c10c0042f (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-09-11T22:45:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_jpbsaraiva.pdf: 797363 bytes, checksum: 134baaf8a50fb4815f97dd6c10c0042f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-11T22:45:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_jpbsaraiva.pdf: 797363 bytes, checksum: 134baaf8a50fb4815f97dd6c10c0042f (MD5) Previous issue date: 2009 / Brazil is a major producer of banana (Musa sp.), Accounting for 10% of the total world production (FAO, 2002). From this perspective, we see the need to increase their production, and among the strategies adopted, one can anticipate the acclimatization phase, through the association of banana seedlings with mycorrhizal fungi. Biofertilizers commonly refer to the effluent resulting from aerobic or anaerobic fermentation of organic products alone or supplemented with mineral products. They are used in agriculture for various purposes, and its application promotes the improvement of physical and chemical properties and stimulating biological activity. The objective of this study was to evaluate the development of banana plants subjected to biofertilizer irrigation applied at different stages of their development and activity of the microbiota of a Cambisol Latossólico Eutrophic. The experiment was conducted in a greenhouse belonging to the sector of Soil Microbiology, Department of Soil Science, Federal University of Ceará (UFC). The soil used in the experiment was collected in an area of native vegetation, located in the area of commercial cultivation of banana, belonging to the Frutacor Tableland Farm, located in the city of Quixeré, Ceará. Was considered, for purposes of collection, the soil to a depth of 0 to 20 cm. Initially, the samples were sent to the Laboratory of Soil Microbiology, Department of Soil Science, where it recognized soil preliminary analysis for extraction and quantification of species of mycorrhizal fungi occurring naturally in the soil. The analysis consisted of extraction of spores, using the technique of wet sieving (Gerdemann & Nicolson, 1963). The experiment consisted of 12 treatments with 09 replicates, and 01 control treatment with 15 repetitions, totaling 123 plots. After 30, 45 and 60 days after planting (DAP, were removed 03 repetitions of the treatments, respectively, for evaluation of the mycorrhizal root. In the interval between the stages of planting seedlings and early application of biofertilizer was applied nutrient solution Hewitt (1966) no phosphorus for all the samples and the control treatment (T13) were given a complete nutrient solution with phosphorus, weekly until 90 days after acclimatization (Phase 1). Phase 2, after application of the treatments mentioned above, the evaluation consisted of the following: growth, content of mineral nutrients in plant root colonization (technical Phillips & Hayman, 1970 and Giovanetti & Mosse, 1980), determination of soil microbial biomass (MBC) according to Vance et al. (1987), soil basal respiration (SBR), quantification of CO2 released in mg C-CO2/100 cm3 of soil, during the time interval used in monitoring, and metabolic quotient (qCO2) calculated by the ratio of respiration basal and microbial biomass-C (Anderson & Domsch, 1978). The experiment was carried out using a randomized block design in a factorial 3 x 4. The soilsand mixture biofertilizer received in three different times of application (30,45 and 60 days after planting the seedlings), in four doses (0, 25, 50, 100%). The data were submitted to analysis of variance by F test and compare the means by Duncan test at 5% probability. After evaluating the results, we concluded that the biofertilization banana may occur 30 days after planting, and the 100% concentration the most suitable for plant growth; The biofertilizer at 100% independent the period that is initiated, promoted the production of dry matter and the contents of macronutrients (N, P, K, S, Ca, Na and Mg). The microbiological parameters were not influenced by the doses or times of application of biofertilizer, except for the metabolic quotient (qCO2) which was lower when applied to 100% dose of biofertilizer. / O Brasil é um dos maiores produtores mundiais de banana (Musa sp.), sendo responsável por 10% de toda a produção mundial (FAO, 2002). Nessa perspectiva, percebe-se a necessidade de incrementar a sua produção, e dentre as estratégias adotadas, pode-se antecipar a fase de aclimatação, por meio da associação de mudas de bananeiras com fungos micorrízicos arbusculares. Os biofertilizantes comumente se referem ao efluente resultante da fermentação aeróbia ou anaeróbia de produtos orgânicos puros ou complementados com produtos minerais. São utilizados na agricultura para vários fins, e sua aplicação promove a melhoria das propriedades físicas e químicas e estimulando a atividade biológica. Objetivou-se com o presente estudo avaliar o desenvolvimento de plantas de bananeiras submetidas à biofertirrigação, aplicada em diferentes estádios de seu desenvolvimento, e da atividade da microbiota de um Cambissolo Latossólico Eutrófico. O experimento foi conduzido em casa de vegetação pertencente ao setor de Microbiologia do Solo do Departamento de Ciências do Solo da Universidade Federal do Ceará (UFC). O solo utilizado no experimento foi coletado em uma área de mata nativa, situada em área de cultivo comercial de bananeira, pertencente à Fazenda Frutacor Apodi, localizada no município de Quixeré, Ceará. Foi considerado, para efeito de coleta, o solo a uma profundidade de 0 a 20 cm. Inicialmente, as amostras foram encaminhadas para o Laboratório de Microbiologia do Solo do Departamento de Ciências do Solo, onde foi realizada análise preliminar do solo para extração e quantificação das espécies de fungos micorrízicos arbusculares, que ocorriam de forma natural no solo. A análise constou da extração dos esporos, através da técnica de peneiramento úmido (Gerdemann & Nicolson, 1963). O experimento constou de 12 tratamentos, com 09 repetições; e 01 tratamento controle com 15 repetições, totalizando 123 parcelas. Decorridos 30, 45 e 60 dias após o plantio (DAP), foram retiradas 03 repetições dos tratamentos, respectivamente, para avaliação da colonização micorrízica radicular. No intervalo entre as etapas de plantio das mudas e início da aplicação do biofertilizante, foi aplicada solução nutritiva de Hewitt (1966) sem fósforo para todas as amostras, e para o tratamento controle (T13), foi aplicada solução nutritiva completa com fósforo, semanalmente, até 90 dias, após aclimatação (Fase 1). A Fase 2, após a aplicação dos tratamentos supramencionados, constou da avaliação das seguintes características: crescimento, teor dos elementos minerais na planta, colonização micorrízica radicular (técnica de Phillips & Hayman, 1970 e Giovanetti & Mosse, 1980), determinação do carbono da biomassa microbiana (CBM) segundo Vance et al. (1987), a respiração basal do solo (RBS), quantificação de CO2 liberado em mg de C-CO2/100 cm3 de solo, durante o intervalo de tempo utilizado no monitoramento, e o quociente metabólico (qCO2) calculado pela razão entre a respiração basal e a biomassa microbiana-C (Anderson & Domsch, 1978). O experimento foi implantado por meio de um delineamento estatístico inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 4. A mistura solo-areia recebeu biofertilizante em três épocas diferentes de aplicação (30,45 e 60 dias após o plantio das mudas), em quatro doses (0; 25; 50; 100%). Os dados foram submetidos à análise de variância pelo teste F e comparações nas médias pelo teste de Duncan a 5% de probabilidade. Após a avaliação dos resultados, concluiu-se que a biofertilização da bananeira pode ocorrer aos 30 dias após o plantio, sendo a concentração de (100%), a mais adequada para o crescimento das plantas; O biofertilizante na dose de 100%, independente do período em que é iniciada, promoveu a produção de massa de matéria seca e os teores dos macronutrientes (N, P, K, S, Ca, Na e Mg). Os parâmetros microbiológicos não foram influenciados pelas doses, nem épocas de aplicação do biofertilizante, à exceção do quociente metabólico (qCO2) que foi menor quando aplicada a dose 100% do biofertilizante.

SILVA JÚNIOR, José Maria Tupinambá da. Padrão de colonização micorrízica arbuscular em plantas de acerola, milho e feijão. 2016. 133 f. Tese (Doutorado em Solos e Nutrição de Plantas)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-24T22:56:05Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_jmtsilvajúnior.pdf: 3241721 bytes, checksum: 8693b6ea4510f1387dd538e6230a0b36 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-25T18:34:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_jmtsilvajúnior.pdf: 3241721 bytes, checksum: 8693b6ea4510f1387dd538e6230a0b36 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-25T18:34:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_jmtsilvajúnior.pdf: 3241721 bytes, checksum: 8693b6ea4510f1387dd538e6230a0b36 (MD5) Previous issue date: 2016 / Improve technologies that seek to reduce the use of phosphate fertilizers is essential, considering that most Brazilian soils have low availability of phosphorus (P), ultimately limit the growth of plants and generating a high dependence of phosphate fertilizers. The use of microorganisms as the arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) which are associated with the majority of plant species is now a viable alternative, mainly by beneficial effects of these fungi for plant growth such as increased absorption of nutrient, especially, P. Association between AMF and fruit or annual plants can enhance productivity of these species, in addition to reducing the consumption of phosphate fertilizers. So to evaluate the morphological pattern of colonization by AMF, two studies were conducted, the first in areas of family farmers who grow acerola and reside in Maranguape-Ce. The second study was conducted in a greenhouse and in Soil Microbiology Laboratory of the Department of Soil Science of the University Federal of Ceará, with cowpea plants and corn fertilized with increasing doses of P. In the first survey, Paris morphology, the presence of intracellular vesicles and hyphae was observed in all areas collected. With the extraction of soil AMF spores, the predominance of genres, Glomus sp. and Scutelospora sp, was found in the four areas where soil samples were collected. In research conducted in the greenhouse, it was observed that the growth of the cowpea and corn was favored by phosphorus fertilization to dose 150 mg P kg-1 soil and 120 mg P kg-1 soil, respectively. The mycorrhizal colonization was reduced by higher doses of P added to the soil and the morphology of mycorrhizal colonization intermediate was observed in both species, not occurring influence of phosphorus fertilization on their morphology. In addition, they identified up to fifteen morphotypes especeis AMF in the soil cultivated with cowpea or corn. / Aprimorar tecnologias que buscam a redução do uso de fertilizantes fosfatados é essencial, considerando que grande parte dos solos brasileiros possui baixa disponibilidade de fósforo (P), acabando por limitar o crescimento das plantas e gerando uma dependência elevada de adubos fosfatados. O uso de micro-organismos, como os fungos micorrízicos arbusculares (FMA), que se associam com a maioria das espécies vegetais é uma alternativa viável principalmente pelos efeitos benéficos desses fungos para o crescimento das plantas, como maior absorção de nutrientes, notadamente o P. A associação entre FMA e plantas frutíferas ou anuais poderá fomentar a produtividade dessas espécies, além de reduzir o consumo de adubos fosfatados. Com o intuito de avaliar se diferentes manejos impostos ao sistema solo planta podem alterar o padrão de colonização micorrízica arbuscular em plantas cultivadas foram realizados dois estudos, o primeiro em áreas de agricultores familiares que cultivam acerola e residem em Maranguape-Ce. O segundo estudo, foi conduzido em casa de vegetação e no Laboratório de Microbiologia do Solo pertencente ao Departamento de Ciências do Solo da Universidade Federal do Ceará, com plantas de feijão de corda e milho adubadas com doses crescentes de P. Na primeira pesquisa, o padrão morfológico Paris, com a presença de hifas intracelulares e vesículas, foi observado em todas as áreas coletadas. Com a extração de esporos de FMA do solo, a predominância dos gêneros, Glomus sp. e Scutelospora sp, foi constatada nas quatro áreas em que foram coletadas amostras de solo. Na pesquisa conduzida em casa de vegetação, observou-se que o crescimento do feijão de corda e do milho foi favorecido pela adubação fosfatada até a dose 150 mg P kg-1 solo e 120 mg P kg-1 solo, respectivamente. A colonização micorrízica foi diminuída pelas maiores doses de P adicionados ao solo e o padrão morfológico de colonização micorrízica intermediário foi observado nas duas espécies vegetais, não ocorrendo influência da adubação fosfatada sobre sua morfologia. Além disso, foram identificados até quinze morfotipos de espécies de FMA no solo cultivado com feijão de corda ou milho.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-01T16:44:20Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1782590 bytes, checksum: 4e7ceb4862034e40682c3378f1bef0d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T16:44:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1782590 bytes, checksum: 4e7ceb4862034e40682c3378f1bef0d1 (MD5) Previous issue date: 2014-07-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A bovinocultura leiteira vem sofrendo por profundas transformações nos últimos anos no que diz respeito, principalmente, ao aumento da produtividade com um custo de produção cada vez menor. Em meio a todos os fatores que comprometem o êxito de um sistema de produção de leite, o estado reprodutivo dos animais ocupa um lugar de destaque. Problemas reprodutivos em uma fazenda levam a perdas econômicas devido ao aumento no intervalo entre partos, custos extras com o tratamento da enfermidade, aumento no descarte involuntário de animais e uma diminuição no potencial genético do rebanho. Neste cenário, as patologias infecciosas e inflamatórias uterinas do puerpério (período pós-parto) como metrite, endometrite clínica e endometrite subclínica são as mais comuns, sendo, geralmente, causadas por microorganismos de origem ambiental como Escherichia coli, Trueperella pyogenes, Fusobacterium necrophorum e Prevotella spp. A utilização de antibióticos e hormônios são os tratamentos mais utilizados no controle destas enfermidades, porém o uso indiscriminado de antibióticos nas últimas décadas proporcionou o aparecimento de bactérias resistentes a mais de uma classe de agentes antimicrobianos. Sendo assim, a fagoterapia surge como uma alternativa natural, não tóxica e economicamente viável para o controle destes microorganismos. Neste estudo, isolamos e caracterizamos três bacteriófagos (vB_TpyM-UFV13, vB_TpyP-UFV21 e vB_TpyM-26) que apresentaram perfil protéico e padrão de bandas (RAPD) diferentes, o que auxiliou na diferenciação viral, principalmente entre os membros da família Myoviridae. Estes fagos reduziram o número de células viáveis de T. pyogenes (variação de 9,7 a 17,4%). Além disso, foram capazes de prevenir a formação de biofilme, com valores de redução que oscilarem entre 42,5 a 63,1%. Este trabalho possui como perspectiva o sequenciamento de seus genomas, testes farmacocinéticos utilização destes vírus no controle de enfermidades que acometem vacas de leite como mastite e metrite. / The dairy cattle has suffered profound changes in recent years with regard mainly to increased productivity with a cost of production dwindling. Amid all the factors that impact the success of a system of milk production, reproductive status of animals takes a prominent place. Reproductive problems in a farm lead to economic losses due to increased calving interval, extra costs to the treatment of disease, increased involuntary culling of animals and a decrease in the genetic potential of the herd. In this setting, uterine infectious and inflammatory diseases of the puerperium (postpartum) as metritis, clinical endometritis and subclinical endometritis are the most common and are usually caused by organisms of environmental origin such as Escherichia coli, Trueperella pyogenes, Fusobacterium necrophorum and Prevotella spp. The use of antibiotics and hormones are the most commonly used treatments in the control and treatment of these diseases, but the indiscriminate use of antibiotics over the past decades afforded the appearance of bacteria resistant to more than one class of antimicrobial agents. Thus, the phage appears as a non-toxic, natural and economically viable alternative for the control of these microorganisms. In this study, we isolated and characterized three bacteriophages (vB_TpyM-UFV13, vB_TpyP-UFV21 and vB_TpyM-26) that showed protein profile and banding pattern (RAPD) different, which helped in the their differentiation, especially among members of the family Myoviridae. These phages reduced the number of viable cells of T. pyogenes (range 9.7 to 17.4%). In addition, they were able to prevent biofilm formation, with reduction values that oscillate between 42.5 to 63.1%. This work has as perspective the genome sequence of their genomes and pharmacokinetic tests using these viruses in the control of diseases that affect dairy cows as mastitis and metritis. / Não foi encontrado o cpf do autor e nem o termo de autorização.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-16T13:48:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1250907 bytes, checksum: 2299d09b23deeb532f065839b105d4dc (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-16T13:48:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1250907 bytes, checksum: 2299d09b23deeb532f065839b105d4dc (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Biossurfactantes - ou surfactantes microbianos - são moléculas com propriedades tensoativas produzidas por uma grande diversidade de micro-organismos, presentes em diversos habitats. Os biossurfactantes compõem uma classe de compostos que têm mostrado potencial de aplicação em diversas áreas industriais economicamente importantes. Nas aplicações relacionadas à cadeia do petróleo, a exemplo da recuperação avançada de petróleo, biorremediação de ambientes marinhos contaminados com óleo e tratamento de água de produção, é necessário que os biossurfactantes mantenham sua atividade em condições extremas, especialmente sob elevadas salinidade e temperatura. Nesse contexto, os biossurfactantes são os melhores substitutos de seus homólogos sintéticos, dada a sua tolerância a condições extremas. O objetivo deste estudo foi prospectar isolados produtores de biossurfactantes ativos em concentrações salinas elevadas. Amostras de solos, sem histórico de contaminação por hidrocarbonetos de petróleo, foram coletadas na ilha da Trindade, local de difícil acesso e com atividade antrópica reduzida ou inexistente. Das 12 amostras de solos coletadas, foram selecionados 14 isolados. Avaliaram-se a produção de biossurfactantes, a tensão interfacial (hexadecano) e superficial. Os isolados foram identificados por meio de perfil de ácidos graxos e sequenciamento da região rRNA 16S. Dentre os biossurfactantes obtidos, destacou- se o produzido por Brevibacterium halotolerans, o qual manteve sua atividade em solução contendo até 175 g.L-1 de NaCl. Esse é o primeiro relato de produção de um biossurfactante por essa espécie. Sua elevada tolerância à salinidade coloca o isolado como promissor para aplicações biotecnológicas na cadeia do petróleo. / Biosurfactants or microbial surfactants are biomolecules with tension active properties produced by a wide variety of microorganisms in various habitats, being a unique class of compounds which has shown potential application in various industrial fields economically important. In applications related to oil chain, such as the enhanced oil recovery, bioremediation of marine oil-contamined water treatment and production, it is necessary for maintaining its activity biosurfactants in extreme conditions, especially under high salinity and temperature. Biosurfactants are the best substitutes for their synthetic counter parts due to higher activity in extreme conditions, lower toxicity and better biodegradability. The objective of this study was to explore isolated producers of active biosurfactant in high salt concentrations, for application related to petroleum activities that require these features. n the present study were collected soil samples from a completely isolated region located at Trindade island, being a place of difficult access and little or no humam activity. From 12 soil samples collected 14 isolateds were selected, that had the biosurfactants production quantified, the surface and interfacial tension activity measured and sub sequently identified to species by the fatty acid profile and 16S rRNA region sequencing. Among the biosurfactants obtained, it was stood out produced by Brevibacterium halotolerans, which maintained its activity in a solution containing 175 g. L-1 NaCl. This is the first report of biosurfactant production by this species. Its high salt tolerance isolated places as promising for biotechnological applications in the oil chain.