Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5040357 bytes, checksum: d112d16462e653eb7f528351d768dc3f (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cissampelos sympodialis Eichl (Menispermaceae) is a plant commonly found in semi-arid regions of Brazil. Its roots and leaves are used in folk medicine to treat arthritis, rheumatism and respiratory disorders. Studies have shown its anti-inflammatory, immunomodulatory and anti-asthmatic effects. The aim of this study was: 1) to evaluate the effect of administration, intranasally (i.n.) of the leave extract (AFL) and its alkaloids warifteine (WAR), methylwarifteine (MWA) and milonine (MIL) in the lungs of BALB/c mice sensitized and challenged with ovalbumin (OVA) and 2) to analyze the effects of alkaloids on inflammatory cells and their molecules related to inflammation. The parameters evaluated in vivo were: the cell migration into bronchoalveolar lavage (BAL), histopathological changes in the lung tissue and analysis of IgE levels on the serum. In vitro assays, were evaluated the phosphorylation of JNK kinase enzyme and expression of COX-2 on cultured macrophage and mast cells. The results showed that the AFL and the alkaloids were able to inhibit the migration of inflammatory cells, mainly eosinophils to the lung. However the AFL and milonine induced neutrophil migration to the lung. Treatment with the extract and the alkaloids inhibited the production of mucus by goblet cells present in the bronchial epithelium and the migration of TCD4+ and TCD8+ into the lung tissue, except warfteine that increased the TCD8+ subpopulation,. Only the AFL treatment was able to decrease serum IgE concentration and, among the alkaloids, MWA was able to inhibit the production of interleukin-13 (IL-13) by cells from the BAL. In vitro tests showed that the alkaloids presented no toxicity for macrophage and mast cells at all concentrations tested 0.1, 1.0 and 10 μM. However, only milonine was able to inhibit degranulation of mast cells via inhibition of histamine release. The inhibition of JNK phosphorylation was observed with MWA and MIL independent of COX-2 activation. These results indicate that the extract, when administered intranasally, has antiasthmatic effect by decreasing the eosinophil migration into the lung and the mucus production and, MWA is one of the important compounds present into the extract due to decreasing the JNK phosphorylation. In addition, these data provide additional information to produce an herbal plant for the treatment of intranasal airway inflammatory disorders and the MWA may be the molecular marker for the quality and effect of the herbal medicine. / Cissampelos sympodialis Eichl. (Menispermaceae) é uma planta comumente encontrada em regiões semiáridas do Brasil. Suas raízes e folhas são usadas na medicina popular no tratamento de artrite, reumatismo e doenças respiratórias. Estudos têm demonstrado seu efeito anti-inflamatório, antiasmático e imunomodulador. Os objetivos do presente trabalho foram: 1) avaliar o efeito da administração, por instilação nasal (i.n.), do extrato das folhas de Cissampelos sympodialis (AFL) e de seus alcaloides warifteina (WAR), metilwarifteina (MWA) e milonina (MIL) em pulmões de camundongos BALB/c sensibilizados e desafiados com ovalbumina (OVA) e 2) analisar o efeito destes alcaloides sobre células inflamatórias e suas moléculas relacionadas com a inflamação. Os parâmetros avaliados in vivo foram: padrão de migração de células no lavado bronco alveolar (BAL), alterações histopatológicas no tecido pulmonar e análise dos níveis de IgE no soro. Nas análises in vitro, em cultura de macrófagos e mastócitos, foram avaliados a fosforilação das enzimas JNK quinase e a expressão da COX-2. Os resultados demonstraram que o AFL e os alcaloides foram capazes de inibir a migração das células da inflamação, em especial, os eosinófilos no pulmão. Entretanto, o AFL e a milonina induziram aumento no número de neutrófilos no pulmão. Os tratamentos com o extrato e os alcaloides inibiram a produção de muco pelas células caliciformes presentes no epitélio brônquico e a migração de linfócitos T CD4+ e TCD8+ da cavidade pulmonar, com exceção da warifteina que aumentou a subpopulação T CD8+. Apenas o tratamento com AFL foi capaz de diminuir a concentração de IgE sérica e, entre os alcaloides, somente a MWA foi capaz de inibir a produção da interleucina-13 (IL-13) pelas células do BAL. Nos ensaios in vitro, observou-se que os alcaloides não apresentaram toxicidade para mastócitos e macrófagos em todas as concentrações testadas 0.1, 1.0 e 10 μM. Entretanto, apenas a milonina foi capaz de inibir degranulação de mastócitos via inibição da liberação da histamina. A inibição da fosforilação da JNK foi observada com a MWA e a MIL independentes da expressão da enzima COX-2. Estes resultados indicam que o extrato, quando administrado por instilação nasal, apresenta efeito antiasmático principalmente pela diminuição da migração de eosinófilos para o pulmão e pela produção de muco e que a MWA é um dos compostos presentes no extrato importante para o efeito antiasmático da planta devido á diminuição da fosforilação da JNK. Em adição, estes dados fornecem informações para a produção de um fitoterápico da planta para o tratamento intranasal de doenças inflamatórias das vias aéreas e a MWA pode ser o marcador molecular de qualidade e efeito do fitoterápico.

Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-03T15:23:14Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 940006 bytes, checksum: 7a3088e68d7479fcd18f7a8da0705ccc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T15:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 940006 bytes, checksum: 7a3088e68d7479fcd18f7a8da0705ccc (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Cissampelos sympodialis Eichl (Menispermaceae) is a native plant of Paraiba region which is used in folk medicine to treat various inflammatory conditions such as asthma and rhinitis. This plant has several biologically active metabolites such as warifteine, methyl warifteine, milonine, among others. Preliminary data show that warifteine exhibits anti-inflammatory activity in a murine model of asthma. The aim of this study was to evaluate whether milonina, metabolite of Cissampelos sympodialis has acute anti-inflammatory activity. For this purpose, we used the model of paw edema induced by phlogistic agents, histological analysis, anaphylactic shock reaction, scratching behavior and antinociceptive activity tests such as writhing and hot plate. The pretreatment of animals with milonina was able to inhibit significantly (p <0.05) paw edema induced by carrageenan in the period between one and two hours while the challenge with compound 48/80, the milonia was capable of inhibiting (p <0.05) the edema at two times 30 and 60 min. The milonina at 2mg / kg was able to protect 75% of animals from death induced by compound 48/80 in anaphylactic shock test. The morphological analysis of the skin of animals subjected to the itch behavior induced by compound 48/80 showed preservation of epithelial structures. In addition, milonina was able to decrease significantly (p <0.05), nociception induced by acetic acid and hot plate a pattern of the inhibition of inflammatory pain. Thus, these data suggest that milonina has acute anti-inflammatory activity via inhibition of mast cell action. / A planta Cissampelos sympodialis EICHL. (Menispermaceae) é uma planta nativa da região paraibana a qual é utilizada na medicina popular para tratamento de diversas afecções inflamatórias, como asma e rinite. Essa planta apresenta vários metabólitos biologicamente ativos como a warifteína, metil-warifteína, milonina, entre outros. Dados preliminares mostram que metabólitos como wariftéina apresenta atividade anti-inflamatória em modelo murino de asma. O objetivo desse trabalho foi avaliar se a milonina, metabólito de Cissampelos sympodialis apresenta atividade anti-inflamatória aguda. Para isso, utilizou-se modelos animais de edema de pata induzido por agentes flogísticos, análise histológica, choque anafilático, scratching behaviour e testes de atividade antinociceptiva, tais como, contorções abdominais e da placa quente. O pré tratamento dos animais com milonina foi capaz de inibir de forma significativa (p<0,05) o edema de pata induzido por carragenina no período entre uma e duas horas enquanto que, no desafio com o composto 48/80, a milonia foi capaz de inibir (p<0,05) o edema nos dois tempos avaliados isto é 30 e 60 min. A milonina a 2mg/kg foi capaz de proteger em 75% os animais da morte induzida pelo composto 48/80 no teste de choque anafilático. Na análise morfológica da pele dos animais submetidos ao comportamento de coceira induzido pelo composto 48/80 observou-se a preservação das estruturas epiteliais. Em adição, a milonina foi capaz de diminuir de forma significativa (p<0,05), a nocicepção induzida por ácido acético e placa quente um padrão de inibição de dor inflamatória. Diante disso esses dados sugerem que a milonina apresenta atividade anti-inflamatória aguda via inibição da ação de mastócitos.

Submitted by Maria Suzana Diniz (msuzanad@hotmail.com) on 2015-06-19T12:38:56Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4771941 bytes, checksum: 6114eb1b0cca2bd044155269ba37e794 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-19T12:38:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4771941 bytes, checksum: 6114eb1b0cca2bd044155269ba37e794 (MD5) Previous issue date: 2011-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The leaf ethanolic extract of Cissampelos sympodialis showed promising activity in different animal models of asthma. Several alkaloids have been isolated and identified in the extract, including warifteine and methylwarifteine (bisbenzylisoquinoline), as well as milonine (morphinandienone). In this work we describe the development and validation of a method for simultaneous quantification of chemical markers in ethanolic extracts applied to the study of seasonality and isolation of two bisbenzylisoquinoline alkaloids. Already for milonine, warifteine and methylwarifteine were isolated, purified and quantified in crude ethanolic extracts of leaves using a methodology developed and validated. The warifteine and methylwarifteine were isolated from total alkaloid fraction of roots (TAF-r) of C. sympodialis, whereas that the milonine was isolated from the TAF-l. The structural identification was performed by Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy of 1H and 13C, mass spectrometry and infrared spectrometry. The method made use of high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (278 nm) using a reverse phase column C18 (250 x 4.6 mm, 5mm) and a mobile phase mixture of water-triethylamine (0,05%) (A) : methanol (B) in order gradient: 0-5 min. (60%), 5-15 min. (72%), 15-25 min.(80%), 25-30 min. (60%). at a rate of 1 mL / min. and running time of 30 min. The chromatographic method was validated in accordance with the recommended resolution of 899 of Agência Nacional de Vigilância Sanitária, and was linear in the concentration range used (2-100 mg / mL), selective (with good separation between the three chromatographic peaks and interfering) and robust. The calibration model used was of standard addition. In the study of seasonality of the markers was observed that there was significant decrease in the concentration of milonine, warifteine and methylwarifteine between February and April. These prominent decreases between the months of February and April for the three molecules coincide with the fruiting period of the plant being observed the appearance of warifteine and methylwarifteine alkaloids in the fruits. This observation suggests the need of the biosynthesis of these alkaloids for the fruits. Through chromatographic and spectrometric techniques was isolated and identified FAT roots of C. sympodialis a mixture of the epimers 7’- desmetilroraimine and 1' - epi - 7'- desmetilroraimine bisbenzylisoquinoline alkaloids that are inedited in the literature. / O extrato etanólico das folhas de Cissampelos sympodialis Eichl mostrou promissora atividade em diferentes modelos animais de asma. Vários alcaloides têm sido isolados e identificados no extrato, incluindo warifteína e metilwarifteína (bisbenzilisoquinolínicos), assim como milonina (morfinandienônico). Nesse trabalho descrevemos o desenvolvimento e validação de método para quantificação simultânea dos marcadores químicos em extratos etanólico aplicado ao estudo da sazonalidade e o isolamento de dois alcalóides bisbenzilisoquinolínicos. Os alcalóides milonina, warifteína e metilwarifteína foram isolados, purificados e quantificados em extratos etanólico bruto das folhas através de metodologia desenvolvida e validada. A warifteína e metilwarifteína foram isolados da fração de alcaloides totais das raízes (FAT-r) de C. sympodialis, enquanto a milonina foi isolada da FAT-f. A identificação estrutural dos alcaloides foi realizada por espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de 1H e 13C, espectrometria de massas e espectrometria de infravermelho. O método fez uso de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por ultravioleta (278 nm), utilizando uma coluna de fase reversa C18 (250 x 4,6 mm, 5μm) e como fase móvel uma mistura de água-trietilamina (0,05%) (A) : metanol (B) em modo gradiente: 0-5 min. (60%), 5-15 min. (72%), 15-25 min. (80%), 25-30 min. (60%) a um fluxo de 1 mL/min. e tempo de corrida de 30 min. O método cromatográfico desenvolvido foi validado segundo o preconizado na Resolução 899 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, e se mostrou linear na faixa de concentração utilizada (2-100 μg/mL), seletivo (com boa separação entre os três picos cromatográficos e interferentes), preciso (DPR%≤15%), exato (bias 85-115%) e robusto. O modelo de calibração utilizada foi o de adição de padrão. No estudo da sazonalidade dos marcadores foi possível observar que houve diminuição significativa da concentração de milonina, warifteína e metilwarifteína entre os meses de fevereiro e abril. Essas diminuições proeminentes para as três moléculas coincidem com o período de frutificação da planta sendo verificado o aparecimento de warifteína e metilwarifteína nos frutos. Essa observação sugere a necessidade da biossíntese dos alcaloides pelos frutos. Através de técnicas espectrométricas e cromatográfica foi isolado e identificado da FAT-r de C. sympodialis uma mistura de epímeros a 7’- desmetilroraimina e a 1’- epi - 7’- desmetilroraimina que são alcalóides bisbenzilisoquinolínicos inéditos na literatura. Palavras-chaves: CLAE, Menispermaceae, warifteína, metilwarifteína, milonina, Cissampelos sympodialis, variação sazonal.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4771941 bytes, checksum: 8d53bb72987d5fdb08cacfec3e12fffc (MD5) Previous issue date: 2011-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The leaf ethanolic extract of Cissampelos sympodialis showed promising activity in different animal models of asthma. Several alkaloids have been isolated and identified in the extract, including warifteine and methylwarifteine (bisbenzylisoquinoline), as well as milonine (morphinandienone). In this work we describe the development and validation of a method for simultaneous quantification of chemical markers in ethanolic extracts applied to the study of seasonality and isolation of two bisbenzylisoquinoline alkaloids. Already for milonine, warifteine and methylwarifteine were isolated, purified and quantified in crude ethanolic extracts of leaves using a methodology developed and validated. The warifteine and methylwarifteine were isolated from total alkaloid fraction of roots (TAF-r) of C. sympodialis, whereas that the milonine was isolated from the TAF-l. The structural identification was performed by Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy of 1H and 13C, mass spectrometry and infrared spectrometry. The method made use of high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (278 nm) using a reverse phase column C18 (250 x 4.6 mm, 5mm) and a mobile phase mixture of water-triethylamine (0,05%) (A) : methanol (B) in order gradient: 0-5 min. (60%), 5-15 min. (72%), 15-25 min.(80%), 25-30 min. (60%). at a rate of 1 mL / min. and running time of 30 min. The chromatographic method was validated in accordance with the recommended resolution of 899 of Agência Nacional de Vigilância Sanitária, and was linear in the concentration range used (2-100 mg / mL), selective (with good separation between the three chromatographic peaks and interfering) and robust. The calibration model used was of standard addition. In the study of seasonality of the markers was observed that there was significant decrease in the concentration of milonine, warifteine and methylwarifteine between February and April. These prominent decreases between the months of February and April for the three molecules coincide with the fruiting period of the plant being observed the appearance of warifteine and methylwarifteine alkaloids in the fruits. This observation suggests the need of the biosynthesis of these alkaloids for the fruits. Through chromatographic and spectrometric techniques was isolated and identified FAT roots of C. sympodialis a mixture of the epimers 7 - desmetilroraimine and 1' - epi - 7'- desmetilroraimine bisbenzylisoquinoline alkaloids that are inedited in the literature. / O extrato etanólico das folhas de Cissampelos sympodialis Eichl mostrou promissora atividade em diferentes modelos animais de asma. Vários alcaloides têm sido isolados e identificados no extrato, incluindo warifteína e metilwarifteína (bisbenzilisoquinolínicos), assim como milonina (morfinandienônico). Nesse trabalho descrevemos o desenvolvimento e validação de método para quantificação simultânea dos marcadores químicos em extratos etanólico aplicado ao estudo da sazonalidade e o isolamento de dois alcalóides bisbenzilisoquinolínicos. Os alcalóides milonina, warifteína e metilwarifteína foram isolados, purificados e quantificados em extratos etanólico bruto das folhas através de metodologia desenvolvida e validada. A warifteína e metilwarifteína foram isolados da fração de alcaloides totais das raízes (FAT-r) de C. sympodialis, enquanto a milonina foi isolada da FAT-f. A identificação estrutural dos alcaloides foi realizada por espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de 1H e 13C, espectrometria de massas e espectrometria de infravermelho. O método fez uso de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por ultravioleta (278 nm), utilizando uma coluna de fase reversa C18 (250 x 4,6 mm, 5&#956;m) e como fase móvel uma mistura de água-trietilamina (0,05%) (A) : metanol (B) em modo gradiente: 0-5 min. (60%), 5-15 min. (72%), 15-25 min. (80%), 25-30 min. (60%) a um fluxo de 1 mL/min. e tempo de corrida de 30 min. O método cromatográfico desenvolvido foi validado segundo o preconizado na Resolução 899 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, e se mostrou linear na faixa de concentração utilizada (2-100 &#956;g/mL), seletivo (com boa separação entre os três picos cromatográficos e interferentes), preciso (DPR%&#8804;15%), exato (bias 85-115%) e robusto. O modelo de calibração utilizada foi o de adição de padrão. No estudo da sazonalidade dos marcadores foi possível observar que houve diminuição significativa da concentração de milonina, warifteína e metilwarifteína entre os meses de fevereiro e abril. Essas diminuições proeminentes para as três moléculas coincidem com o período de frutificação da planta sendo verificado o aparecimento de warifteína e metilwarifteína nos frutos. Essa observação sugere a necessidade da biossíntese dos alcaloides pelos frutos. Através de técnicas espectrométricas e cromatográfica foi isolado e identificado da FAT-r de C. sympodialis uma mistura de epímeros a 7 - desmetilroraimina e a 1 - epi - 7 - desmetilroraimina que são alcalóides bisbenzilisoquinolínicos inéditos na literatura.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-05T12:23:50Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1922103 bytes, checksum: a207d4c95bf749dd37ae0eb1728c7e80 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T12:23:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1922103 bytes, checksum: a207d4c95bf749dd37ae0eb1728c7e80 (MD5) Previous issue date: 2017-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Inflammation is an immune response that aims to establish a tissue homeostasis during an infection or injury. Recognized as a beneficial process, an inflammation can become harmful when in excess. Thus, therapeutic therapies that are applied to the resolution of the inflammation are studied and developed, with natural products and their derivatives playing a prominent role in the discoveries of new anti-inflammatory molecules. In this context, the objective of this study was to evaluate the antiinflammatory potential of milonine, a Cissampelos sympodialis Eichl alkaloid, in vivo, against the release of mediators by using the murine model of acute inflammation and pain. Swiss mice pretreated with milonine were submitted to protocols of: paw edema induced by LPS, prostaglandin (PGE2), bradykinin (BK) and serotonin (5-HT) to evaluate the anti-edematogenic activity of the alkaloid; microvascular permeability induced by acetic acid to obtain a total protein concentration and histological analysis of the peritoneum; the models of carrageenan-induced peritonitis to evaluate the effect of milonine on the migration of the total and differential cells; and the formalin test to evaluate its nociceptive activity. The results show that milonine was capable of significantly reduce (p<0.001) the formation of the paw edema induced by LPS, PGE2, BK, however it was not capable to reduce the edema induced by 5-HT; significantly reduced (p<0.05) the extravazation of liquid to the peritoneum induced by acetic acid, maintaining its morphology preserved. The alkaloid was also able to inhibit (p<0.01) the migration of the total leukocytes to the peritoneal cavity during the carrageenan-induced inflammation, decreasing the number of polymorphonuclear cells (PMN) without changing mononuclear cells (MNs). In the formalin test, the paw licking time of the animals was inhibited (p<0.01) only in the second phase through the intraperitoneal (i.p.) administration, corroborating the inhibition of inflammatory mediators. Therefore, this study demonstrates that milonine has an antiinflammatory and analgesic activity due to the inhibition of the action of mediators essential for the start of the inflammatory process. / O processo inflamatório é uma resposta benéfica do organismo frente a uma lesão ou infecção, visando a eliminação da injúria inicial, bem como as consequências dessa injúria. Entretanto, a inflamação, em resposta exagerada, pode ser prejudicial. Dessa forma, se faz necessário o desenvolvimento de novos fármacos com propriedades anti-inflamatória e analgésica, sendo utilizado como estratégia terapêutica a busca por moléculas oriundas de produtos naturais que possuam tais propriedades. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial anti-inflamatório da milonina, alcaloide de Cissampelos sympodialis Eichl frente à liberação de mediadores inflamatórios utilizando o modelo murino de inflamação aguda e dor. Camundongos Swiss pré-tratados com milonina foram submetidos aos protocolos de: edema de pata induzido por LPS, prostaglandina (PGE2), bradicinina (BK) e serotonina (5-HT) para avaliar a atividade antiedematogênica do alcaloide; permeabilidade microvascular induzida por ácido acético para obter a concentração de proteínas totais e análise histológica do peritônio; os modelos de peritonite induzida por carragenina para avaliar o efeito da milonina sobre a migração de células totais e diferenciais; e o teste da formalina para avaliar a sua atividade nociceptiva. Os resultados demonstraram que a milonina foi capaz de reduzir significativamente (p<0,001) a formação do edema de pata induzido por LPS, PGE2, BK, porém não foi capaz de reduzir o edema induzido pela 5-HT; diminuiu significativamente (p<0,05) o extravasamento de líquido para o peritônio induzido por ácido acético, mantendo a sua morfologia preservada. O alcaloide também foi capaz de inibir (p<0,01) a migração de leucócitos totais para a cavidade peritoneal durante a inflamação induzida por carragenina, diminuindo o número de células polimorfonucleares (PMN) sem alterar células mononucleares (MNs). No teste da formalina, o tempo de lambida da pata dos animais foi inibida (p<0,01) por milonina apenas na segunda fase quando administrada por via intraperitoneal (i.p.). Portanto, este estudo demonstrou que a milonina possui atividade anti-inflamatória e analgésica por inibir a ação de mediadores essenciais para o início do processo inflamatório.