Orientador: Francesco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morais_AnibaldeAraujo_M.pdf: 6678513 bytes, checksum: de99d3b7d31fbe9cd0b670e0bbcf0e14 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O reparo de nervos periféricos usando próteses tubulares é uma técnica alternativa que pode produzir resultados similares ou melhores que outras técnicas cirúrgicas utilizadas. Entretanto, sua eficiência depende essencialmente da biocompatibilidade e das propriedades estruturais do material do tubo. Nesse trabalho foi avaliado a degradação in vivo de tubos (lOmm) de poli(ácido lático) PLLA adicionado 10% de plastificante tri-etil-citrato. Dezesseis ratos machos da linhagem Wistar, foram submetidos a tubulização e divididos em quatro grupos experimentais (n=4) segundo tempos de sobrevida de 30, 90, 180 e 430 dias após a intervenção cirúrgica. Todas as cirurgias foram precedidas de anestesia profunda com pentobarbital sódico (60mg/kg). O nervo ciático esquerdo foi exposto e seccionado na porção média da coxa. Os cotos proximal e distal foram introduzidos no tubo, deixando-se uma distância de 5mm entre eles, sendo ancorados à parede deste através de um ponto de sutura epineural. Após os tempos de sobrevida de 30, 90, 180 e 430 dias, os animais foram novamente anestesiados e o nervos tubulizado e contralateral foram fixados in situ, por um período de 20 minutos, com uma solução de glutaraldeído 5% (tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), e removidos. A seguir foram deixados imersos na mesma solução fixadora por 24 horas, à temperatura de 4°C. Após esse período, os nervos processados foram então pós-fixados por um período de 2 horas em uma solução de tetróxido de ósmio 2% (tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), lavados e mantidos em acetato de uranila 2% (tampão fosfato 0,1 M; pH 7,4) por um período de 12 horas. Ao final os espécimes foram lavados, desidratados em gradiente de álcool etílico (30, 50, 70, 90 e 100%) e posteriormente incluídos em resina araldite. A partir dos fragmentos contendo a porção central do nervo regenerado e da porção anatomicamente correspondente dos nervos normais, foram obtidos cortes transversais semi-finos (1,0mm) que, após coloração com azul de toluidina (0,5%, tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), foram analisados à microscopia de luz. Após esta análise, as regiões de interesse de cada espécime foram selecionadas para a obtenção de cortes ultrafinos (500 Â). Estes foram recolhidos em telas de cobre (200 mesh), contrastados com citrato de chumbo (1%) e acetato de uranila (2%), observados e documentados ao microscópio eletrônico. Nossos resultados mostraram que 30 dias após a tubulização a regeneração do nervo ciático havia ocorrido. Na estrutura destes podiam se observar axônios mielínicos e amielínicos organizados em minifascículos. No espaço endoneural estavam presentes fibras colágenas bem como células semelhantes a fibroblastos e macrófagos. Externamente, havia se organizado uma bainha de tecido conjuntivo com uma organização típica de epineuro. Após os períodos de 90, 180 e 430 dias esses elementos do nervo foram amadurecendo, assumindo gradualmente uma ultra-estrutura similar à dos nervos normais. Após 30 dias, o implante apresentava sinais de degradação, mantendo, contudo sua estrutura tubular. A análise microscópica e ultra-estutural após 90, 180 e 430 dias mostrou que esta foi sendo gradativamente modificada pela invasão de células. A parede dos tubos foi sendo alterada pela formação de sulcos, que evoluíram para verdadeiros túneis, provocando assim a microfragmentação desta. Em nenhum dos tempos analisados foi constatada a ocorrência de processos inflamatórios intensos ou necrose nos tecidos circundantes que acusassem rejeição do material. Considerando que os tubos empregados permitiram o início e a evolução regular da regeneração do nervo à medida que estes foram sendo absorvidos, nossos achados mostram que o PLLA adicionado de 10% de tri-etil-citrato possui propriedades adequadas para a construção próteses tubulares destinados ao reparo cirúrgico de nervos periféricos / Abstract: The peripheral nerves repair, by using tubular prosthesis, is an alternative technique which can produce similar results to or better than the other surgical techniques in use. Meanwhile, its efficiency depends essentialIy on the biocompatibility and the structural proprieties of the tube material. In the present work, the degradation of poly (L-lactic acid) PPLA tubes (10 mm) with the addition of 10% triethyl citrate plasticizer in vivo, has been appraised. Sixteen male mice of the Wistar lineage were submitted to tubulization and were divided into four experimental groups (n=4) according to overliving times of 30, 90, 180 and 430 days after the surgical intervention. All surgeries were preceded of deep anesthesia with sodium pentobarbital (60 mg/Kg). The left sciatic nerve was exposed and transected at the midthigh. The proximal and distal stumps were introduced into the tube, with 5mm distance left between them, and were sutured to its walI through an epineural suture stitch. After the overliving times of 30, 90, 180 and 430 days, the animals were anesthetized again and the tubulized and countralateral nerves were fixed in situ during 20 minutes with a 5% glutaraldehyde buffer solution and removed. Following, they were left immerged in the same solution for 24 hours, at 4°C temperature. After that period, the nerves were processed and then post fixed during 2 hours in a solution of osmium tetroxide 2% (phosphate buffer 0,1M; pH 7,4), washed and kept in uranyl acetate 2% (phosphate buffer 0,1 M; pH 7,4) for a period of 12 hours. Finally, the specimens were washed and dehydrated in ethyl alcohol gradient (30, 50, 70, 90 and 100%) and afterwards were included in araldite resin. From the fragments containing the central portion of the regenerated nerve and the portion of the normal nerves anatomicalIy corresponding to it, transverse semithin sections were obtained (1,0 mm), which after being stained with toluidine blue (0.5%, phosphate buffer 0,1M; pH 7.4), were analyzed at light microscopy. After that analysis, those regions of each specimen, for which there was interest, were selected for obtaining ultrathin sections (500 Â). They were colIected in copper web (200 mesh), and contrasted with lead citrate (1 %) and uranyl acetate (2%); they were observed and documented at the electronic microscope. Our results showed that 30 days after the tubulization, the sciatic nerves regeneration had occurred. In their structure, one could see axons myelin and anmyelin organized in mini-fascicles. The colIagen fibers were present in the endoneural space, as well as fibers similar to fibroblasts and macrophages. ExtemalIy, there had been organized a connective tissue sheath with an epineurium typical organization. After those periods o 90, 180 and 430 days, those nerve elements were ripening and assuming gradualIy an ultra-structure similar to the normal nerves. Thirty days after, the implantation showed degradation signals but it stilI maintained its tubular structure. The ultra-structural and microscopic analysis after 90, 180 and 430 days showed that the latter was under a gradual modification process by celIs invasion. The tube walIs were being changed by the formation of grooves, which developed into real tunnels, causing consequently its microfragmentation. In neither of the times which were analyzed, was it possible to verify either the occurrence of intense inflammatory processes or necrosis on the surrounding tissues which could reveal the material rejection. On considering that the tubes used alIowed the beginning and the regular evolution of the nerve regeneration while they were absorbed, our findings show that the PPLA with 10% of triethyl citrate addition holds the adequate properties for building tubular prostheses for the application of peripheral nerve surgical repair / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Vilma Cloris de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-20T10:06:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bittencourt_AlexandreMotta_M.pdf: 1331483 bytes, checksum: c33e966c85f653dc996c09bda6a398ec (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: Os estudos sobre a luxação do Nervo Ulnar ao nivel do cotovelo, demonstram a necessidade de um maior conhecimento em relação °a sua etiologia, incidência, tratamento e prognôstico. A carência de dados e estudos mais aprofundados edm relação aos aspectos anatõmicos desta região, além do número de luxações espontâneas e traumáticas, nos levaram seguinte objetivo: estudar de maneira sistemática, a profundidade do Sulvo Unar, o diametro do nervo Ulnar , os meios de manutenção dos nervos e as possiveis estruturas capazez de prococar luxações. Para o proposto foram utilizadas 50 membros superiores de humano adulto de ambos os sexos, e 100 ossos macerados de adulto, e feito uso de métodos de dissecção a olho nu; o paquímetro foi utilizado para a medição da profundidade e diâmetro do Nervo. A análise estatística seguiu-se i estes ~stu dos. Julgamos portanto poder emitir as seguintes conclusoes alusivas ao assunto: o Nervo Ulnar apresenta um diâmetro de 0,33cm em média quando submetido a uma flexão de aproximadamente 400, enquanto que o Sulco Ulnar apresenta uma didade média de O,43cm. O Nervo é mantido em seu leito pelo Ligamento Epitrocleo-Olecranianó, pela Aponeurose do Flexor Ulnar do Carpo, e espessamento da Fáscia Muscular perficial. Em 40% dos casos estudados o Ligamento Epitrocleo-Olecraniano esteve presente. Com estas afirmações acreditamos poder colaborar com resultados concretos, para uma melhor compreensão do problema e oferecer subsídios para uma possível técnica cirúrgica mais adequada, diminuindo desta forma o número de luxações ficadas como idiopáticas / Abstract: The studies of the dislocation of the Ulnar Nerve at the leveI of the elbow show the necessity of greater . knowledge in relation to its etiology, incidence, treatment and prognosis. The lack of data and of depth studies with relation to the anatomical aspects pertaining to this region, as well as large number of spontaneous and traumatic dislocation have brought us to the following objective: to study systenmatically, the depth of the Ulnar groove, the diameter of the Ulnar Nerve, the means of maintaining the Nerve in the groove between the internal Condyle and Olecranian (the Epitrochear-Olecranian groove) and the possible strutures capable of provoking dislocations. To carry out our proposal, SO adult human upper limbs of both sexes were utiliyed as well as the maceration of 100 adult bones, and free dis$ection methods; a Pachymeter was also utilized to measure the depth and diameter of the Nerve. A statistical analysis followed these studies. We judged it possible to admit the XX following conclusions referring to this subject: the Ulnar Nerve presented anaverage diameter of 0.33cm when flexioned to an angle of approximat~ly 400, while the Ulnar groove presented an average depth of 0.43cm. The Nerve is maintained in its bed by the Epitrochlear-Olecranian ligament by the aponeurosis of the Flexor Carpi Ulnaris and the thickening of the superficial muscular fascia. In 40% of the cases studied, the Epitrochrear-Olecraniam ligament was pre~ent and in 4% of the cases, the aponeurosis of the Flexor Carpi Ulnaris and the superficial muscular fllisciawere flaccid. Whit these affirmations we believe we may corroborated with concrete results, to a better comprehension of the problem and possibly offer aid toward a more adequate surgical technique, diminishing in this way the number of idiopathic dislocations / Mestrado / Mestre em Odontologia

Orientadores: Humberto Santo Neto, Maria Julia Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-19T06:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Somazz_MarcoCesar_D.pdf: 2572857 bytes, checksum: a0a440a913033721ce0839d773014b1f (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Foram realizados autotransplantes de retalhos musculares em 19 ratos wistar fêmeas com 6 a 7 semanas de idade. Em um grupo de 6 animais utilizou-se o músculo tibial anterior; um segundo grupo formado por S ratos recebeu retalho obtido através do músculo sóleo e, o terceiro com 5 animais serviu para análise da morfologia normal do nervo ciático. Os músculos a serem enxertados receberam unia injeção de cloridrato de lidocaína (xilocaínaR) a BX, sendo que nos casos do músculo tibial anterior o volume foi de 0,3 ml e no grupo do músculo sóleo foi de 0,1 ml. Estes procedimentos -Foram realizados sob anestesia induzida por inalação de éter etílico e executados na perna direita dos animais. Após vinte e quatro horas, os ratos foram novamente anestesiados com uma mistura de cloridrato de cetamina (Ketalar1*5) e cloridrato de tiazina (RumpumR) na dose de 0,3 ml/i00 de peso corporal. A seguir a região glútea e posterior da coxa esquerda foram depiladas. Procedeu-se, então, a retirada do Fragmento museu1 ar com auxilio do microscópio cirúrgico e realizada uma fina dissecção do retalho, deixando-o com um diâmetro ligeiramente superior ao do nervo ciático e comprimento de 5 mm nos casos do tibial anterior e de 3-4 mm nos casas do músculo sóleo. Ainda sob lupa, a pele da região glútea e posterior da coxa esquerda foi aberta e o nervo ciático exposto. Com uma tesoura microcirúrgica seccionou-se o nervo e retirou-se um fragmento de í mm de comprimento. Suturou-se, então, o implante entre os cotos nervosos com uni ponto em cada extremidade com -Fio monafilamento nylon 10.0 Dermalon. Após um período de sobrevida de 50 dias, os ratos Foram anestesiados e, com o auxílio do microscópio cirúrgico o nervo ciático -Foi exposto e fixado in situ com fixador Karnovsky (Í965). 0 fixador a A°C foi deixado banhando o nervo por i0 minutos. A seguir, o nervo foi retirado e seccionado em dois fragmentos, um correspondendo à região do implante e o outro ao coto distai. Estes foram então processados para microscopia eletrônica. Observamos que, o tratamento empregado na preparação dos retalhos musculares permitiu o crescimento axortal a partir do coto proximal. Estes atravessaram a região do implante e colonizaram o coto distai. Isto foi possível uma vês que, o cloridrato de lidocaína provocou intensa mionecrose tendo como resultado a formação de tubos de membrana basal muscular "vazios", através do qual ocorreu a regeneração dos axônios / Abstract: Evacuated muscle is a possible substitute for nerve autografts in the repair of damage peripheral nerves. Previous experiments have shown that killed or evacuated muscle grafts are as effective as nerve autografts for briding gaps of up to A mm between proximal and distal nerve stumps. Evacuated muscle rafts are made of extracellular matrix components, which are good substrates for axon growth in vitro. However there are some difficults to obtain the muscle autografts. In the present we have studied the possibility of a new method to obstain this graft. In forty adult female mice the tibialis anterior muscle (8 animals) and soleus muscle (6 animals) were injected by 0,3 ml and 0,1 ml of the lidocaine hydrochloride respectively. Twenty¿ for hours later each animal receveid a muscle autograft. There the ciatic nerve left was seccionated and the graft was inserid by a 10.0 their mononylon surgical under microscopic. Fifty days after, the animals that received the muscle graft, were anest het ised by ket amine hydrochloride and xyl&;£ine and the graft region and the distal end as well, were processed by eletronic microscopic methods. Our results showed the fifty days after implants both region graft and distal end were recolonised by mielinic and amielinic axons. The ultrastructural aspects, remind that ones observed by others methods of nerve repair by muscle graft / Doutorado / Anatomia / Doutor em Ciências

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1289_1.pdf: 6503896 bytes, checksum: 2024a3abccca22b725a7b6c451be0695 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O nervo isquiático (nervo espinal) é constituído por fibras mielínicas aferentes somáticas e eferentes somáticas e autonômicas. Distribui-se extensamente aos membros inferiores e é comumente afetado pelas neuropatias, principalmente a diabética. O nervo vestíbulo-coclear (VIII nervo craniano) é um nervo aferente puramente sensitivo, constituído por prolongamentos de neurônios bipolares localizados no gânglio espiral (de Corti). Muito tem sido descrito na literatura a respeito das alterações morfológicas e morfométricas nos nervos espinais, tanto em pacientes diabéticos quanto em modelos experimentais da doença. Entretanto, uma comparação entre essas alterações e as eventuais lesões observadas em nervos cranianos ainda não foi realizada. Mais ainda, é amplamente descrito na literatura que pacientes diabéticos apresentam distúrbios da audição. Apesar das alterações histológicas das estruturas da orelha interna de pacientes e em modelos experimentais, uma avaliação histológica do nervo vestíbulo-coclear ainda não foi descrita. No presente estudo, foram descritas alterações ultraestruturais na comparação entre um nervo espinal e um craniano, em ratos com diabete crônico induzido experimentalmente. Foram utilizados ratos machos da linhagem Wistar (n=12), mantidos com dieta padrão do biotério, ao longo do experimento. Animais com 42 dias de idade (n=6), em jejum por 24 horas, foram injetados 60 mg/kg de STZ em dose única, via i.p. Animais controles (n=6) receberam igual volume da solução tampão citrato, pH de 4.5. Após 10 semanas da inoculação da droga os animais adultos foram perfundidos sistemicamente com solução Karnowisky. Em seguida, os nervos isquiáticos e vestíbulo-cocleares de ambos os lados foram retirados, processados com técnicas histológicas de rotina para inclusão em resina epóxi e observados ao microscópio eletrônico de transmissão. Nossos resultados mostraram a presença de fibras mielínicas grandes com sinais de atrofia e degeneração axonal tanto no nervo isquiático quanto no nervo vestíbulo-coclear. Algumas fibras mielínicas de pequeno diâmetro dos nervos isquiáticos mostraram sinais de degeneração da bainha de mielina, caracterizando, para esse nervo, uma neuropatia tipo mista. Em ambos os nervos, células de Schwann com citoplasma edemaciado estavam presentes. Nossos achados sugerem que o diabete crônico induzido pela STZ em ratos, provocou alterações das fibras mielínicas e das células de Schwann, compatíveis com os sinais e sintomas clássicos da neuropatia diabética. As alterações observadas no nervo espinal são comparáveis às observadas no nervo craniano. Alterações morfológicas ultraestruturais do nervo vestíbulo-coclear no diabete experimental em ratos estão sendo descritas pela primeira vez na literatura e podem corroborar para o melhor entendimento das alterações da audição encontradas em pacientes diabéticos

Submitted by PPG Medicina e Ci?ncias da Sa?de (medicina-pg@pucrs.br) on 2018-07-13T12:12:39Z No. of bitstreams: 1 JOSIEL_SCHILLING_POETA.pdf: 5065733 bytes, checksum: 08aa2054169f20b8e7aff32b78b58210 (MD5) / Approved for entry into archive by Sheila Dias (sheila.dias@pucrs.br) on 2018-07-18T14:22:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JOSIEL_SCHILLING_POETA.pdf: 5065733 bytes, checksum: 08aa2054169f20b8e7aff32b78b58210 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-18T14:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JOSIEL_SCHILLING_POETA.pdf: 5065733 bytes, checksum: 08aa2054169f20b8e7aff32b78b58210 (MD5) Previous issue date: 2018-03-28 / Introduction: Lesions affecting the peripheral nerves are quite common and can cause devastating damage to their lives of individuals, leading to important functional changes such as pain, morbidity and disability as well as, affecting their psychological condition. When the VII pair of cranial nerve is affected, patients may develop Peripheral Facial Paralysis (PFP), which include aesthetic, functional and emotional damages, as well as pain and discomfort. Treatment for lesions involving the peripheral nerves still presents limitations, since post-surgical results remain uncertain and unsatisfactory, especially in cases where nerve damage causes loss of substance. The use of autologous nerve grafting remains the "gold standard" of treatment; although it does present some important disadvantages. Trying to overcome all the difficulties and limitations, regenerative medicine together with tissue engineering have united their efforts with the purpose of improving the surgical techniques in the repair of this type of injury. Thus, in this context, many researches are being carried out with the aim of developing bioabsorbable materials associated with neurotrophic factors that can be used by the tubulization technique in substitution of the "gold standard". Objective: To evaluate the regeneration of the facial nerve of wistar rats submitted to a total transection of the nerve with loss of substance through the use of the tubulization technique with a PLGA / PCL polymer and autologous adipose stem cells. Material and Methods: 72 wistar rats were randomly divided into 3 groups (A, B, C) and submitted to a surgical procedure of injury (total transection with loss of substance) in the mandibular branch of the facial nerve, forming a gap of 6 mm. Immediately after the injury, the surgical procedure of nerve repair was performed according to the group to which they belonged. The rats of group A (control) were treated through the autologous nerve graft, with suture in the stumps. Group B rats were treated by the tubulization technique using a PLGA / PCL absorbable polymer sutured between the stents. The rats of group C were also treated by the tubulization technique, with the same polymer, but containing a quantity of autologous adipose stem cells in their interior. After 30, 60 and 90 days, the animals were euthanized for histological analysis. Results: The presence of the PLGA / PCL polymer, used by the tubulization technique, appears to have stimulated the formation of fibrosis in all evaluated groups. In 30 days there was no difference in the regeneration of nerve fibers between the three methods used to treat the facial nerve lesion of the rats used in this experiment. The use of stem cells associated with the PLGA/PCL tube presented better results than the "gold standard" in only 60 days. At 90 days, the "gold standard" and the technique of tubulization, without the use of stem cells, had the same results in nerve regeneration, and still, they were superior in relation to tubulization with the use of stem cells. / Introdu??o: As les?es que acometem os nervos perif?ricos s?o bastante comuns e podem causar danos devastadores na vida das pessoas, provocando altera??es funcionais importantes como, por exemplo, dor, morbidade e incapacidade, al?m de afetar a sua condi??o psicol?gica. Quando o s?timo (VII) par de nervos cranianos ? afetado, os pacientes podem desenvolver quadros de Paralisia Facial Perif?rica (PFP), que incluem preju?zos est?ticos, funcionais e emocionais, al?m de dor e desconforto. O tratamento para as les?es que envolvem os nervos perif?ricos ainda apresenta limita??es, visto que os resultados p?s-cir?rgicos continuam incertos e insatisfat?rios, principalmente nos casos em que a les?o ao nervo provoca perda de subst?ncia. O uso do enxerto aut?logo de nervo continua sendo o ?padr?o ouro? de tratamento, embora apresente algumas desvantagens importantes. Tentando suprir todas as dificuldades e limita??es, a medicina regenerativa, juntamente com a engenharia tecidual, t?m unido seus esfor?os com a finalidade de melhorar as t?cnicas cir?rgicas no reparo desse tipo de les?o. Nesse contexto, muitas pesquisas est?o sendo realizadas com o intuito de desenvolver materiais bioabsorv?veis, associados a fatores neurotr?ficos, que possam ser utilizados pela t?cnica da tubuliza??o em substitui??o ao ?padr?o ouro?. Objetivo: Avaliar a regenera??o do nervo facial de ratos wistar submetidos a uma transec??o total com perda de subst?ncia atrav?s do emprego da t?cnica da tubuliza??o com um pol?mero de PLGA/PCL e c?lulas tronco adiposas aut?logas. Material e M?todos: 72 ratos wistar foram randomicamente divididos em tr?s grupos (A, B, C) e submetidos a um procedimento cir?rgico de les?o (transec??o total com perda de subst?ncia) no ramo mandibular do nervo facial, formando um ?gap? de 6mm. Imediatamente ap?s a les?o, foi realizado o procedimento cir?rgico de reparo do nervo de acordo com o grupo ao qual pertenciam. Os ratos do grupo A (controle) foram tratados atrav?s do enxerto aut?logo de nervo, com sutura nos cotos. Os ratos do grupo B foram tratados pela t?cnica da tubuliza??o utilizando um pol?mero absorv?vel de PLGA/PCL suturado entres os cotos. J? os ratos do grupo C tamb?m foram tratados pela t?cnica da tubuliza??o, com o mesmo pol?mero, por?m contendo uma quantidade de c?lulas-tronco adiposas aut?logas em seu interior. Ao fim de trinta, sessenta e noventa dias, os animais foram eutanasiados para an?lise histol?gica. Resultados: A presen?a do pol?mero de PLGA/PCL, usado pela t?cnica da tubuliza??o, parece ter estimulado a forma??o de fibrose em todos os tempos avaliados. Em trinta dias n?o ocorreu nenhuma diferen?a na regenera??o das fibras nervosas entre os tr?s m?todos utilizados para o tratamento da les?o no nervo facial das cobaias neste experimento. O uso de c?lulas tronco, associadas ao tubo de PLGA/PCL, apresentou melhores resultados em rela??o ao ?padr?o ouro? somente em sessenta dias. Aos noventa dias, o ?padr?o ouro? e a t?cnica da tubuliza??o, sem a utiliza??o das c?lulas-tronco, tiveram os mesmos resultados na regenera??o do nervo e, ainda, se mostraram superiores em rela??o ? tubuliza??o com o uso de c?lulas-tronco.

Introdução: A dor neuropática (dor originada como consequência direta de uma lesão ou doença afetando o sistema somatossensorial, em seus elementos periféricos ou no sistema nervoso central - SNC) possui uma alta incidência na população mundial e afeta a qualidade da vida dos pacientes acometidos por ela. O tratamento dessa condição dolorosa é ainda um desafio aos profissionais da saúde, pois os fármacos usados possuem ação limitada e diversos efeitos colaterais. Assim, há um grande interesse na busca por novos fármacos para tratar dor neuropática. Os estudos mostram o envolvimento das espécies reativas de oxigênio (EROs) nos distintos tipos de dor, incluindo a neuropática. Dado ao envolvimento dessas espécies, moléculas com ação antioxidante são fortes candidatas como coadjuvantes no tratamento de condições dolorosas. Diversos estudos mostraram que a administração de N-acetilcisteína (NAC), uma molécula com ações complexas, dentre elas a de antioxidante, produz antinocicepção em animais com constrição crônica no nervo isquiático (CCI, do inglês chronic constriction injury), um modelo de dor neuropática. Contudo, ainda são pouco conhecidos os mecanismos envolvidos no efeito antinociceptivo da NAC. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos temporais da administração intraperitoneal de solução salina e NAC, na dose de 150 mg/kg/dia, dado por 1, 3 ou 7 dias, sobre indicadores de comportamento nociceptivo e de recuperação de função locomotora, e moléculas de sinalização celular e parâmetros de estresse oxidativo em medula espinal lombossacral de ratos sem e com CCI. Esse segmento da medula espinal foi escolhido por ser a região de entrada das informações aferentes do nervo isquiático. O projeto que antecedeu o presente estudo foi aprovado pela Comissão de Ética no uso de animais da UFRGS (número de protocolo: 23407). Metodologia: Foram utilizados 180 ratos Wistar machos, pesando 200-300g, divididos em 3 grupos experimentais: controle (animais que não sofreram nenhuma intervenção cirúrgica), sham (animais que tiveram o nervo isquiático direito apenas exposto) e CCI (animais que tiveram o nervo isquiático direito exposto e recebeu 4 amarraduras em seu terço inicial). Estes grupos experimentais foram subdivididos em subgrupos que receberam administração X intraperitoneal de solução salina ou NAC, na dose de 150 mg/kg/dia, por período de 1, 3 ou 7 dias. Os testes de von Frey eletrônico e do índice funcional do isquiático (IFI) avaliaram a sensibilidade mecânica e a recuperação funcional do nervo, respectivamente, nos períodos antes da lesão e 1, 3 e 7 dias após a lesão nervosa. Ao final dos períodos de 1, 3 e 7 dias, os animais foram mortos por decapitação e a medula espinal lombossacral retirada e usada para as determinações: formação do ânion superóxido, hidroperóxidos lipídicos, capacidade antioxidante total (TAC, do inglês total antioxidante capacity), ácido ascórbico, expressão da proteína p-38 fosforilada, e quantificação do RNA mensageiro (mRNA) do NFкB. Outros grupos de animais foram perfundindos com paraformoldeído 4% preparado em tampão fosfato salino, 0,2 M, pH 7,4. Após a coleta e a crioproteção em solução de sacarose 15 e 30%, a medula espinal e os gânglios da raiz dorsal do nervo isquiático ipsilateral à lesão foram submetidos às técnicas de imunohistoquímica à proteína p-38 e histoquímica a NADPH-diaforase, essa última para marcação de células com atividade da óxido nítrico sintase (NOS), a enzima envolvida na síntese de NO. Os resultados de sensibilidade foram analisados por ANOVA de medidas repetidas; os demais resultados por ANOVA de três vias (fatores: lesão, tratamento e tempo), exceto os do NFκB, que foram por ANOVA de duas vias. O pós-teste usado foi o de Tukey. O P foi considerado significativo quando > 0,05. Resultados: A sensibilidade mecânica aumentou no dia 1 pós-lesão em todos os grupos CCI, e permaneceu elevada nos demais períodos analisados nos ratos com CCI tratados com solução salina. No grupo de ratos com CCI que recebeu tratamento com NAC, o valor da sensibilidade mecânica foi similar ao encontrado na pré-lesão, tanto aos 3 como aos 7 dias. No grupo sham que recebeu salina houve aumento na sensibilidade mecânica no dia 1, estando esse parâmetro com valor similar ao encontrado nos ratos controle nos demais períodos analisados. O aumento na sensibilidade mecânica não foi observado nos ratos sham que receberam NAC. O IFI melhorou nos ratos com CCI que receberam salina e NAC por 7 dias. Porém, enquanto o percentual de recuperação desse índice foi 28% nos ratos tratados com salina, a administração de NAC provocou recuperação de 44%. Paralelamente a essas mudanças, houve aumento estatisticamente significativo na geração de ânion superóxido na medula espinal de todos os ratos com CCI, independente do tratamento e do período de tempo analisado. Os hidroperóxidos lipídicos aumentaram (823%) na medula espinal de ratos com CCI tratados com salina no dia 1, mas o acréscimo foi de apenas 142% nos ratos com CCI que receberam NAC. Aos 3 e 7 dias, os hidroperóxidos lipídicos estavam ainda aumentados na medula espinal de ratos sham e com CCI, mas o aumento foi de 180%. A TAC teve redução apenas nos animais CCI tratados com salina, no dia 7. Os valores de ácido ascórbico aumentaram significativamente na medula espinal de ratos com CCI que receberam salina, nos dias 1 e 3. Apesar de elevado, o valor de ácido ascórbico na medula espinal desses ratos aos 7 dias não foi estatisticamente significativo quando comparado ao encontrado nos ratos controle. Nos ratos com CCI tratados com NAC não houve diferença significativa nos valores de ácido ascórbico da medula espinal comparados àqueles dos ratos controle. Quanto às moléculas de sinalização intracelular, observou-se aumento na expressão da p-38 fosforilada nos ratos sham e com CCI tratados com salina, nos dias 1, 3 e 7, comparados aos controles. O tratamento com NAC provocou o retorno da expressão dessa proteína nos ratos sham nesses dias, e uma redução de aproximadamente 187% nos ratos com CCI nos dias 3 e 7, sendo no dia 1 o valor similar ao do grupo controle. NAC também reduziu o aumento na imunorreatividade a p-38 em neurônios do gânglio da raiz dorsal e neurônios e células semelhantes à glia da medula espinal, aumentos esses induzidos pela CCI nos dias 1, 3 e 7. NAC também XI reduziu o aumento induzido pela CCI no número de neurônios reativos a NADPH-diaforase nas lâminas superficiais do corno dorsal e substância cinzenta localizada em volta do canal central da medula espinal. O tratamento com NAC ainda reduziu o mRNA do NFкB aumentado pela CCI e cirurgia sham. Conclusão: Estes resultados mostram que a administração intraperitoneal de NAC, na dose de 150 mg/kg/dia, reproduziu o efeito antinociceptivo dessa molécula e promoveu melhora no IFI. Paralelamente, o tratamento modificou parâmetros de estresse oxidativo e sinalização intracelular na medula espinal, os quais possivelmente se relacionam com as melhoras na sensibilidade mecânica e recuperação funcional do nervo isquiático nos ratos com CCI. A partir desses resultados, pode-se dizer que o efeito antinociceptivo da NAC em ratos com dor neuropática por CCI envolve não apenas sua ação antioxidante, mas também seu efeito em vias de sinalização intracelular. / Introduction: Neuropathic pain (pain arising as a direct result of an injury or disease affecting the somatosensory system in their peripheral elements or the central nervous system - CNS) has a high incidence in the world population and affects the quality of life of patients affected by it. The treatment of this painful condition is still a challenge for health professionals, since the drugs used have limited action and cause side effects. Thus, there is great interest in the search for new pharmaceuticals to treat neuropathic pain. Research shows the involvement of reactive oxygen species (ROS) in different types of pain, including neuropathic pain. Given the involvement of these species, molecules with antioxidant action are strong candidates as adjuvants in the treatment of painful conditions. Several studies have shown that N-acetylcysteine (NAC), a molecule with complex actions, including an antioxidant one, produces antinociception in animals with chronic constriction of the sciatic nerve (CCI, chronic constriction injury), a neuropathic pain model. However, the mechanisms involved in the antinociceptive effect of NAC are still poorly understood. Thus, this study aimed to evaluate the temporal effects of intraperitoneal administration of saline and NAC at a dose of 150 mg/kg/day, given for 1, 3 or 7 days, on nociceptive behavior and recovery of locomotor function, and cell signaling molecules and oxidative stress parameters in lumbosacral spinal cord of rats with and without CCI. This segment of the spinal cord was chosen because it is the entry region of the sciatic nerve afferent information. The project that preceded this study was approved by the Ethics Committee of UFRGS on the use of animals (protocol number: 23407). Methods: We used 180 male Wistar rats, weighing 200-300g, divided in 3 groups: control (animals which underwent no surgery), sham (animals which had only the right sciatic nerve exposed) and CCI (animals that had the right sciatic nerve exposed and received 4 ligatures in its initial third). These experimental groups were subdivided into subgroups receiving intraperitoneal administration of saline or NAC at a dose of 150 mg/kg/day for a period of 1, 3 or 7 days. Electronic von Frey tests and the sciatic functional index (SFI) evaluated the mechanical sensitivity and functional recovery of the nerve, respectively, in the periods before the injury and 1, 3 and 7 days after the nerve injury. At the end of these periods, the animals were killed by decapitation and the lumbosacral spinal cord was removed and used to determine the formation of superoxide, lipid hydroperoxide, total antioxidant capacity (TAC), ascorbic acid, expression of phosphorylated p-38 protein, and quantification of messenger RNA (mRNA) of NFκB. Other animal groups were perfused with 4% paraformaldehyde prepared in 0.2 M phosphate buffered saline, pH 7.4. After collection and cryoprotection in 15% and 30% sucrose solution, the spinal cord and dorsal root ganglia of the sciatic nerve ipsilateral to the lesion were subjected to immunohistochemistry of protein p-38 and histochemistry of NADPH-diaphorase, the latter for labeling the activity of nitric oxide (NO) synthase, the enzyme involved in the synthesis of NO. The results of sensitivity were analyzed by ANOVA of repeated measures; the other results by three-way ANOVA (factors: injury, treatment, and time), except those of NFκB, which were analyzed by two-way ANOVA. The post-test used was Tukey’s. P was considered significant when <0.05. Results: Mechanical sensitivity increased on day 1 post-injury in all CCI groups, and remained elevated in the other period analyzed in saline-treated CCI rats. In the group of NAC-treated CCI rats, the value of mechanical sensitivity was close to the pre-injury one, both at 3 and 7 days. In the sham group receiving saline, there was an increase in mechanical sensitivity on day 1, whose value was close to those of control rats in the other periods analyzed. Increased mechanical sensitivity was not observed in sham rats receiving NAC. The SFI improved in CCI rats receiving saline and NAC for 7 days. However, while the recovery rate of this index was 28% in the saline-treated rats, NAC administration caused a recovery of 44%. Alongside these changes, there was a statistically significant increase in the generation of superoxide anion in the spinal cord of all CCI rats, regardless of treatment and time period analyzed. Lipid hydroperoxides increased (823%) in the spinal cord of saline-treated CCI rats on day 1, but the increment was only 142% in CCI rats receiving NAC. At 3 and 7 days, lipid hydroperoxides were further increased in the spinal cord of sham and CCI rats, but the increment was 180%. TAC was reduced only in saline-treated CCI animals, on day 7. Ascorbic acid values increased significantly in the spinal cord of CCI rats receiving saline on days 1 and 3. Although high, ascorbic acid in the spinal cord of these rats on day 7 was not statistically significant as compared to control rats. In NAC-treated CCI rats, there was no significant difference in ascorbic acid values of the spinal cord as compared to control rats. As regards intracellular signaling molecules, increased expression of phosphorylated p-38 was observed in saline-treated CCI and sham rats on days 1, 3 and 7 compared to controls. NAC treatment caused a return of expression of this protein in sham rats on these days, and a reduction of approximately 187% in CCI rats on days 3 and 7, with the value of day 1 close to that of the control group. NAC also reduced the increase in p-38 immunoreactivity in dorsal root ganglion neurons and neurons and cells similar to spinal cord glia, such increases induced by CCI on days 1, 3 and 7. NAC also reduced the CCI-induced increase in the number of NADPH diaphorase reactive neurons in the superficial lamina of the dorsal horn and gray matter located around the central canal of the spinal cord. NAC treatment also reduced the mRNA of NFкB increased by CCI and sham surgery. Conclusion: These results show that intraperitoneal administration of NAC at 150 mg/kg/day reproduced the antinociceptive effect of this molecule and promoted improvement in SFI. In addition, the treatment changed oxidative stress parameters and intracellular signaling in the spinal cord, which are possibly related to improvements in mechanical sensitivity and functional recovery of the sciatic nerve in rats with CCI. From these results, one can say that the antinociceptive effect of NAC in rats with neuropathic pain from CCI involves not only its antioxidant action, but also its effect on intracellular signaling pathways.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437576-Texto+Completo-0.pdf: 3153412 bytes, checksum: 4288c104a29a899cfdb4c5faac9a5303 (MD5) Previous issue date: 2012 / Objective: This study evaluates the effect of Platelet Rich Plasma (PRP) and Platelet Rich Fibrin (PRF) on peripheral nerve repair, comparing the results to the gold-standard (autologous nerve graft) and to the control group with saline solution. Materials and Methods: Thirty six Wistar rats were used in the study, and four of these were blood donors to obtain the PRP and the PRF. The Injuries were made on the sciatic nerve from the left paw with 10mm long gap and they were repaired with one of the four treatments: Autologous nerve grafts (ANG); tubulization with saline solution (TS); tubulization with PRP; tubulization with PRF. Walking track analysis were performed at pre-operative period, 30, 60 and 90 days after surgery. On the 90 postoperative day, the rats were euthanized and histomorphometric analysis were made measuring the fiber diameter, axonal diameter and the myelin sheath thickness. Results: On 90 days post-operative, the ANG, PRF and PRP groups presented a significant functional improvement in relation to the TS group (p = 0. 000), which showed functional deficit. On the histomorpometric test, the ANG group presented a better structural organization, with a regular distribution among the myelinated fibers, and little conjunctive tissue between the fibers. The TS, PRP and PRF groups had a larger endoneural tissue between the nerve fibers and presented degenerative process. The ANG group achieved a larger nerve fiber diameter at the proximal segment while comparing with the TS (p = 0. 037), and also comparing with the PRF (p = 0. 001) and the PRP (p = 0. 002) while analyzing the medial segments. About the axonal diameter and the myelin sheath thickness, no statistical significant difference has been found between the groups. Conclusion: This research data suggests that PRP and PRF have positive effects on functional nerve recovery, presenting results similar to the ANG group. However, the PRP and PRF don’t achieve a significant improvement on the histomorphometric analysis. / Objetivo: Avaliar o efeito do uso de Plasma rico em plaquetas (PRP) e de Plaqueta rica em fibrina (PRF) no reparo de nervos periféricos, comparando com os resultados do padrão-ouro (enxerto autólogo) e com grupo controle (solução salina).Materiais e Métodos: Trinta e seis ratos Wistar foram utilizados no estudo, sendo quatro ratos utilizados apenas como doadores de sangue para obtenção de PRP e PRF. Foram criadas lesões de 10mm nos nervos ciáticos da pata esquerda dos ratos, e estas foram reparadas com um dos 4 tipos de tratamentos: enxerto autólogo (AE); tubulização com solução salina (TS); tubulização com PRP; tubulização com PRF. Foram realizados Testes de marcha no período pré-operatório, 30, 60 e 90 dias pós-operatórios. Após 90 dias, os ratos foram eutanásiados e foram realizadas análises histomorfométricas avaliando diâmetro das fibras, diâmetro axonal e espessura de bainha de mielina. Resultados: Com 90 dias pós-operatórios, os grupos AE, PRF e PRP demonstraram uma melhora funcional significativa em relação ao grupo TS (p = 0,000), que continuou apresentando déficit na marcha. Na histomorfometria, o grupo AE apresentou uma melhor organização estrutural, com distribuição regular das fibras mielinizadas, com pouco tecido conjuntivo entre as fibras. Os grupos TS, PRP e PRF demonstraram maior espaço endoneural entre as fibras nervosas e a presença de processos degenerativos. O grupo AE demonstrou maior diâmetro de fibra nervosa no segmento proximal quando comparado ao grupo TS (p = 0,037), e também apresentou maior diâmetro de fibra em relação ao grupo PRF (P = 0,001) e PRP (P = 0,002), quando comparados os segmentos medianos. Quanto ao diâmetro axonal e espessura da bainha de mielina, não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre nenhum dos grupos. Conclusão: Os dados deste estudo sugerem que tanto o PRP quando o PRF possuem efeito positivo na recuperação funcional nervosa, apresentando resultados funcionais similares aos encontrados pelo grupo AE. Porém, não apresentam melhora significativa nas análises histomorfométricas.

Pontoporia blainvillei é o golfinho mais ameaçado do oceano Atlântico sul ocidental devido à intensa mortalidade acidental durante atividades pesqueiras. A alta taxa de captura de indivíduos com menos de três anos de idade sugere a imaturidade funcional no uso da ecolocalização. Neste trabalho é utilizado o diagnóstico por imagem a partir de tomografias computadorizadas (n=2) e ressonâncias magnéticas (n=3), bem como dissecações de cabeças frescas (n=4) obtidas a partir de animais acidentalmente capturados em redes de pesca, para investigar as mudanças ontogenéticas das estruturas envolvidas na produção e recepção de ondas sonoras para o comportamento de ecolocalização. Ainda, uma análise comparativa de uma série ontogenética de 69 sincrânios foi realizada para elucidar uma relação entre osteologia e as estruturas moles do biosonar (musculatura facial, passagem nasal e gorduras especializadas), bem como descrever as transformações da mandíbula ao longo do desenvolvimento. A tomografia computadorizada fornece uma sequência de cortes (slices) com 1 mm de espessura nos planos sagital, coronal e axial, sendo cada pixel de qualquer plano interligado nos três planos. Assim, com o auxílio do programa Materialise © Mimics torna-se possível a manipulação e quantificação (volume, superfície e densidade) das estruturas analisadas em ambiente tridimensional (3D). Os indivíduos analisados revelaram a alta variabilidade morfológica que as toninhas apresentam na forma do biosonar ao longo da ontogenia, e as distintas taxas de desenvolvimento entre estruturas de mesmo aparato funcional (aparato produtor e receptor de sons de alta frequência). A formação da Bursae cantantes e do osso maxilar, por exemplo, apresentam distintas taxas de desenvolvimento em sua forma e são importantes estruturas para a funcionalidade do aparato produtor do som. O complexo timpano-periótico representa a estrutura que se desenvolve mais precocemente; ao contrário da mandíbula, que até a fase adulta apresenta sinais de não maturação da estrutura. À luz da vasto conhecimento a respeito da história de vida da espécie ao longo de sua distribuição, como a biologia alimentar e reprodutiva, são discutidos não só para relacionar as modificações do biosonar com a crescente capacidade de explorar a diversidade de presas no ambiente ao longo da ontogenia, mas como a ontogenia pode interferir no sucesso adaptativo da espécie visto sua história evolutiva. O conhecimento das modificações na ontogenia do biosonar em Pontoporia blainvillei pode ajudar na compreensão das limitações do seu uso por indivíduos imaturos e gerar subsídios para a conservação da espécie.

Introdução: A dor neuropática (dor originada como consequência direta de uma lesão ou doença afetando o sistema somatossensorial, em seus elementos periféricos ou no sistema nervoso central - SNC) possui uma alta incidência na população mundial e afeta a qualidade da vida dos pacientes acometidos por ela. O tratamento dessa condição dolorosa é ainda um desafio aos profissionais da saúde, pois os fármacos usados possuem ação limitada e diversos efeitos colaterais. Assim, há um grande interesse na busca por novos fármacos para tratar dor neuropática. Os estudos mostram o envolvimento das espécies reativas de oxigênio (EROs) nos distintos tipos de dor, incluindo a neuropática. Dado ao envolvimento dessas espécies, moléculas com ação antioxidante são fortes candidatas como coadjuvantes no tratamento de condições dolorosas. Diversos estudos mostraram que a administração de N-acetilcisteína (NAC), uma molécula com ações complexas, dentre elas a de antioxidante, produz antinocicepção em animais com constrição crônica no nervo isquiático (CCI, do inglês chronic constriction injury), um modelo de dor neuropática. Contudo, ainda são pouco conhecidos os mecanismos envolvidos no efeito antinociceptivo da NAC. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos temporais da administração intraperitoneal de solução salina e NAC, na dose de 150 mg/kg/dia, dado por 1, 3 ou 7 dias, sobre indicadores de comportamento nociceptivo e de recuperação de função locomotora, e moléculas de sinalização celular e parâmetros de estresse oxidativo em medula espinal lombossacral de ratos sem e com CCI. Esse segmento da medula espinal foi escolhido por ser a região de entrada das informações aferentes do nervo isquiático. O projeto que antecedeu o presente estudo foi aprovado pela Comissão de Ética no uso de animais da UFRGS (número de protocolo: 23407). Metodologia: Foram utilizados 180 ratos Wistar machos, pesando 200-300g, divididos em 3 grupos experimentais: controle (animais que não sofreram nenhuma intervenção cirúrgica), sham (animais que tiveram o nervo isquiático direito apenas exposto) e CCI (animais que tiveram o nervo isquiático direito exposto e recebeu 4 amarraduras em seu terço inicial). Estes grupos experimentais foram subdivididos em subgrupos que receberam administração X intraperitoneal de solução salina ou NAC, na dose de 150 mg/kg/dia, por período de 1, 3 ou 7 dias. Os testes de von Frey eletrônico e do índice funcional do isquiático (IFI) avaliaram a sensibilidade mecânica e a recuperação funcional do nervo, respectivamente, nos períodos antes da lesão e 1, 3 e 7 dias após a lesão nervosa. Ao final dos períodos de 1, 3 e 7 dias, os animais foram mortos por decapitação e a medula espinal lombossacral retirada e usada para as determinações: formação do ânion superóxido, hidroperóxidos lipídicos, capacidade antioxidante total (TAC, do inglês total antioxidante capacity), ácido ascórbico, expressão da proteína p-38 fosforilada, e quantificação do RNA mensageiro (mRNA) do NFкB. Outros grupos de animais foram perfundindos com paraformoldeído 4% preparado em tampão fosfato salino, 0,2 M, pH 7,4. Após a coleta e a crioproteção em solução de sacarose 15 e 30%, a medula espinal e os gânglios da raiz dorsal do nervo isquiático ipsilateral à lesão foram submetidos às técnicas de imunohistoquímica à proteína p-38 e histoquímica a NADPH-diaforase, essa última para marcação de células com atividade da óxido nítrico sintase (NOS), a enzima envolvida na síntese de NO. Os resultados de sensibilidade foram analisados por ANOVA de medidas repetidas; os demais resultados por ANOVA de três vias (fatores: lesão, tratamento e tempo), exceto os do NFκB, que foram por ANOVA de duas vias. O pós-teste usado foi o de Tukey. O P foi considerado significativo quando > 0,05. Resultados: A sensibilidade mecânica aumentou no dia 1 pós-lesão em todos os grupos CCI, e permaneceu elevada nos demais períodos analisados nos ratos com CCI tratados com solução salina. No grupo de ratos com CCI que recebeu tratamento com NAC, o valor da sensibilidade mecânica foi similar ao encontrado na pré-lesão, tanto aos 3 como aos 7 dias. No grupo sham que recebeu salina houve aumento na sensibilidade mecânica no dia 1, estando esse parâmetro com valor similar ao encontrado nos ratos controle nos demais períodos analisados. O aumento na sensibilidade mecânica não foi observado nos ratos sham que receberam NAC. O IFI melhorou nos ratos com CCI que receberam salina e NAC por 7 dias. Porém, enquanto o percentual de recuperação desse índice foi 28% nos ratos tratados com salina, a administração de NAC provocou recuperação de 44%. Paralelamente a essas mudanças, houve aumento estatisticamente significativo na geração de ânion superóxido na medula espinal de todos os ratos com CCI, independente do tratamento e do período de tempo analisado. Os hidroperóxidos lipídicos aumentaram (823%) na medula espinal de ratos com CCI tratados com salina no dia 1, mas o acréscimo foi de apenas 142% nos ratos com CCI que receberam NAC. Aos 3 e 7 dias, os hidroperóxidos lipídicos estavam ainda aumentados na medula espinal de ratos sham e com CCI, mas o aumento foi de 180%. A TAC teve redução apenas nos animais CCI tratados com salina, no dia 7. Os valores de ácido ascórbico aumentaram significativamente na medula espinal de ratos com CCI que receberam salina, nos dias 1 e 3. Apesar de elevado, o valor de ácido ascórbico na medula espinal desses ratos aos 7 dias não foi estatisticamente significativo quando comparado ao encontrado nos ratos controle. Nos ratos com CCI tratados com NAC não houve diferença significativa nos valores de ácido ascórbico da medula espinal comparados àqueles dos ratos controle. Quanto às moléculas de sinalização intracelular, observou-se aumento na expressão da p-38 fosforilada nos ratos sham e com CCI tratados com salina, nos dias 1, 3 e 7, comparados aos controles. O tratamento com NAC provocou o retorno da expressão dessa proteína nos ratos sham nesses dias, e uma redução de aproximadamente 187% nos ratos com CCI nos dias 3 e 7, sendo no dia 1 o valor similar ao do grupo controle. NAC também reduziu o aumento na imunorreatividade a p-38 em neurônios do gânglio da raiz dorsal e neurônios e células semelhantes à glia da medula espinal, aumentos esses induzidos pela CCI nos dias 1, 3 e 7. NAC também XI reduziu o aumento induzido pela CCI no número de neurônios reativos a NADPH-diaforase nas lâminas superficiais do corno dorsal e substância cinzenta localizada em volta do canal central da medula espinal. O tratamento com NAC ainda reduziu o mRNA do NFкB aumentado pela CCI e cirurgia sham. Conclusão: Estes resultados mostram que a administração intraperitoneal de NAC, na dose de 150 mg/kg/dia, reproduziu o efeito antinociceptivo dessa molécula e promoveu melhora no IFI. Paralelamente, o tratamento modificou parâmetros de estresse oxidativo e sinalização intracelular na medula espinal, os quais possivelmente se relacionam com as melhoras na sensibilidade mecânica e recuperação funcional do nervo isquiático nos ratos com CCI. A partir desses resultados, pode-se dizer que o efeito antinociceptivo da NAC em ratos com dor neuropática por CCI envolve não apenas sua ação antioxidante, mas também seu efeito em vias de sinalização intracelular. / Introduction: Neuropathic pain (pain arising as a direct result of an injury or disease affecting the somatosensory system in their peripheral elements or the central nervous system - CNS) has a high incidence in the world population and affects the quality of life of patients affected by it. The treatment of this painful condition is still a challenge for health professionals, since the drugs used have limited action and cause side effects. Thus, there is great interest in the search for new pharmaceuticals to treat neuropathic pain. Research shows the involvement of reactive oxygen species (ROS) in different types of pain, including neuropathic pain. Given the involvement of these species, molecules with antioxidant action are strong candidates as adjuvants in the treatment of painful conditions. Several studies have shown that N-acetylcysteine (NAC), a molecule with complex actions, including an antioxidant one, produces antinociception in animals with chronic constriction of the sciatic nerve (CCI, chronic constriction injury), a neuropathic pain model. However, the mechanisms involved in the antinociceptive effect of NAC are still poorly understood. Thus, this study aimed to evaluate the temporal effects of intraperitoneal administration of saline and NAC at a dose of 150 mg/kg/day, given for 1, 3 or 7 days, on nociceptive behavior and recovery of locomotor function, and cell signaling molecules and oxidative stress parameters in lumbosacral spinal cord of rats with and without CCI. This segment of the spinal cord was chosen because it is the entry region of the sciatic nerve afferent information. The project that preceded this study was approved by the Ethics Committee of UFRGS on the use of animals (protocol number: 23407). Methods: We used 180 male Wistar rats, weighing 200-300g, divided in 3 groups: control (animals which underwent no surgery), sham (animals which had only the right sciatic nerve exposed) and CCI (animals that had the right sciatic nerve exposed and received 4 ligatures in its initial third). These experimental groups were subdivided into subgroups receiving intraperitoneal administration of saline or NAC at a dose of 150 mg/kg/day for a period of 1, 3 or 7 days. Electronic von Frey tests and the sciatic functional index (SFI) evaluated the mechanical sensitivity and functional recovery of the nerve, respectively, in the periods before the injury and 1, 3 and 7 days after the nerve injury. At the end of these periods, the animals were killed by decapitation and the lumbosacral spinal cord was removed and used to determine the formation of superoxide, lipid hydroperoxide, total antioxidant capacity (TAC), ascorbic acid, expression of phosphorylated p-38 protein, and quantification of messenger RNA (mRNA) of NFκB. Other animal groups were perfused with 4% paraformaldehyde prepared in 0.2 M phosphate buffered saline, pH 7.4. After collection and cryoprotection in 15% and 30% sucrose solution, the spinal cord and dorsal root ganglia of the sciatic nerve ipsilateral to the lesion were subjected to immunohistochemistry of protein p-38 and histochemistry of NADPH-diaphorase, the latter for labeling the activity of nitric oxide (NO) synthase, the enzyme involved in the synthesis of NO. The results of sensitivity were analyzed by ANOVA of repeated measures; the other results by three-way ANOVA (factors: injury, treatment, and time), except those of NFκB, which were analyzed by two-way ANOVA. The post-test used was Tukey’s. P was considered significant when <0.05. Results: Mechanical sensitivity increased on day 1 post-injury in all CCI groups, and remained elevated in the other period analyzed in saline-treated CCI rats. In the group of NAC-treated CCI rats, the value of mechanical sensitivity was close to the pre-injury one, both at 3 and 7 days. In the sham group receiving saline, there was an increase in mechanical sensitivity on day 1, whose value was close to those of control rats in the other periods analyzed. Increased mechanical sensitivity was not observed in sham rats receiving NAC. The SFI improved in CCI rats receiving saline and NAC for 7 days. However, while the recovery rate of this index was 28% in the saline-treated rats, NAC administration caused a recovery of 44%. Alongside these changes, there was a statistically significant increase in the generation of superoxide anion in the spinal cord of all CCI rats, regardless of treatment and time period analyzed. Lipid hydroperoxides increased (823%) in the spinal cord of saline-treated CCI rats on day 1, but the increment was only 142% in CCI rats receiving NAC. At 3 and 7 days, lipid hydroperoxides were further increased in the spinal cord of sham and CCI rats, but the increment was 180%. TAC was reduced only in saline-treated CCI animals, on day 7. Ascorbic acid values increased significantly in the spinal cord of CCI rats receiving saline on days 1 and 3. Although high, ascorbic acid in the spinal cord of these rats on day 7 was not statistically significant as compared to control rats. In NAC-treated CCI rats, there was no significant difference in ascorbic acid values of the spinal cord as compared to control rats. As regards intracellular signaling molecules, increased expression of phosphorylated p-38 was observed in saline-treated CCI and sham rats on days 1, 3 and 7 compared to controls. NAC treatment caused a return of expression of this protein in sham rats on these days, and a reduction of approximately 187% in CCI rats on days 3 and 7, with the value of day 1 close to that of the control group. NAC also reduced the increase in p-38 immunoreactivity in dorsal root ganglion neurons and neurons and cells similar to spinal cord glia, such increases induced by CCI on days 1, 3 and 7. NAC also reduced the CCI-induced increase in the number of NADPH diaphorase reactive neurons in the superficial lamina of the dorsal horn and gray matter located around the central canal of the spinal cord. NAC treatment also reduced the mRNA of NFкB increased by CCI and sham surgery. Conclusion: These results show that intraperitoneal administration of NAC at 150 mg/kg/day reproduced the antinociceptive effect of this molecule and promoted improvement in SFI. In addition, the treatment changed oxidative stress parameters and intracellular signaling in the spinal cord, which are possibly related to improvements in mechanical sensitivity and functional recovery of the sciatic nerve in rats with CCI. From these results, one can say that the antinociceptive effect of NAC in rats with neuropathic pain from CCI involves not only its antioxidant action, but also its effect on intracellular signaling pathways.

A dor neuropática ocorre como resultado de uma lesão ao sistema nervoso. Clinicamente, sua causa está relacionada, na maioria dos casos, ao comprometimento dos nervos periféricos, por isso a utilização de modelos animais de lesão nervosa periférica é amplamente aceita para o seu estudo. A medula espinal representa o centro de processamento primário da informação nociceptiva e a fisiopatologia da dor neuropática envolve principalmente o mecanismo de sensibilização central. Esse fenômeno é caracterizado pelo aumento na resposta das células do corno dorsal espinal aos estímulos aferentes. Diversas moléculas estão envolvidas nesse mecanismo e, recentemente, as espécies ativas do oxigênio (EAO) têm sido sugeridas como possíveis mediadores da dor neuropática. Para verificar essa relação, o presente estudo avaliou os efeitos temporais da secção do nervo ciático sobre marcadores de estresse oxidativo e nitrosativo e de defesas antioxidantes na medula espinal lombossacral de ratos, bem como a ativação da Akt. Os animais foram dividos nos grupos denervado (secção do nervo ciático), sham (o nervo foi exposto, porém, não seccionado) e controle (sem nenhum procedimento cirúrgico). Inicialmente os animais foram testados quanto à hiperalgesia térmica através do teste da placa quente. Foi demonstrado que 3 dias após a lesão, os animais sham e denervados apresentaram-se hiperalgésicos, mas aos 7 dias apenas os denervados ainda exibiam esta resposta. Aos 15 dias após a lesão, a hiperalgesia já havia sido revertida em todos os grupos estudados. As defesas antioxidantes enzimáticas foram avaliadas pela medida da atividade e da expressão das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase. A atividade da catalase reduziu aos 3 e 7 dias após a cirurgia nos animais sham e denervados, e a atividade da SOD diminuiu apenas nos animais denervados no período de 7 dias após a lesão. A expressão dessas enzimas, medida por Western blot, não apresentou variações. Para a determinação de lipoperoxidação foi realizada a medida das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), a qual não apresentou diferenças entre os grupos estudados. Esses resultados iniciais sugerem que o procedimento cirúrgico, por estimular os aferentes nociceptivos dos tecidos relacinados, é suficiente para diminuir a atividade antioxidante enzimática da medula espinal, porém, essas alterações são mais expressivas nos animais submetidos à axotomia. Após, foi realizado o estudo de outras enzimas antioxidantes, a glutationa peroxidase (GPx) e a glutationa-S-transferase (GST), e também do principal antioxidante não-enzimático, a glutationa (GSH). A atividade da GST na medula não foi alterada pela lesão nervosa, e a atividade da GPx aumentou 3 dias após a cirurgia nos grupos sham e denervado, juntamente com a redução do conteúdo de glutationa. A queda da glutationa deve ser atribuída à maior atividade da GPx, que a utiliza como substrato na redução do peróxido de hidrogênio (H2O2) a água. Nessa etapa, foi determinada ainda a expressão da óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) e a medida dos metabólitos do óxido nítrico (NOx). A expressão da nNOS mostrou-se aumentada 7 dias após a lesão nos animais denervados. A formação de NOx foi maior nos períodos de 1, 7 e 15 dias após a axotomia. Esses resultados sustentam o envolvimento do óxido nítrico na dor neuropática. Na última parte deste trabalho foi realizada a medida da concentração do H2O2 na medula espinal, que apresentou aumento nos animais sham e denervados 1, 7 e 15 dias após a cirurgia. Também foi avaliada, por Western blot, a expressão dos adutos de Michael formados pelo 4- hidroxinonenal (HNE) e da Akt total e fosforilada. Aos 7 dias após a lesão nervosa houve um aumento na expressão da Akt total e dos adutos de Michael formados pelo HNE. A Akt fosforilada apresentou um aumento na sua expressão 1, 3 e 7 dias após a axotomia. Como o HNE é um produto da lipoperoxidação, pode-se afirmar que a lesão nervosa estimula este processo na medula espinal. A ativação da Akt, entretanto, pode ser um indicativo de proteção para as células nervosas, pois esta proteína participa de cascatas de sinalização relacionadas à sobrevivência celular. A partir do presente trabalho pode-se concluir que a estimulação nociceptiva induzida pela cirurgia causa alterações em sistemas antioxidantes como a catalase, a GSH e a GPx, bem como na produção de H2O2 na medula espinal, o que não é específico da lesão neuropática. Contudo, a dor neuropática está relacionada com a redução da atividade da SOD e o aumento na produção de HNE e de NO. Assim, após a lesão nervosa ocorre formação de EAO, as quais podem atuar como sinalizadores na modulação do processamento nociceptivo na medula espinal e, talvez, interferir em mecanismos neuroprotetores, como, por exemplo, pela ativação da Akt. / Neuropathic pain occurs as result of nervous system injury. Clinically, in almost all cases, its etiology is related to impairment of peripheral nerves. Thus, animal models of peripheral nerve injury are widely accepted to neuropathic pain studies. The spinal cord is the center of primary processing of the nociceptive information and the pathophysiology of the neuropathic pain involves mainly a central sensitization mechanism. This phenomenon is characterized by an increased response of spinal dorsal horn cells to afferent stimulus. Many molecules are involved in this mechanism and, recently, reactive oxygen species (ROS) have been suggested as putative mediators of neuropathic pain. In order to verify this relationship, the present study evaluated the temporal effects of sciatic nerve transection on oxidative and nitrosative stress markers, antioxidant defenses and Akt activation in the lumbossacral spinal cord of rats. Animals were divided in three groups: naïve, sham and sciatic nerve transection (SNT). Initially, hot plate test was performed to evaluate hyperalgesia. It was demonstrate hyperalgesia 3 days after injury in sham and SNT groups. At 7 days, only SNT animals exhibited this response and 15 days after injury the hyperalgesia was reverted in all groups. The enzymatic antioxidant defenses were evaluated by means of superoxide dismutase (SOD) and catalase activities and expression. The catalase activity was decreased at 3 and 7 days after surgery in sham and SNT group, and SOD activity was reduced only in SNT rats at 7 days after injury. No changes were observed in SOD and catalase expression, measured by Western blot. In order to evaluate lipid peroxidation (LPO), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) were analyzed, and no differences among the groups were shown. These results demonstrated that the injury modifies antioxidant enzymatic activity in spinal cord. Afterwards, other antioxidant enzymes, glutathione peroxidase (GPx) and glutathione-S-transferase (GST) and the main non-enzymatic antioxidant, glutathione (GSH), also were studied. GST activity was not changed after nerve injury. There was an increase in GPx activity and a decrease in GSH content 3 days after surgery in both sham and SNT groups. The decrease in GSH may be attributed to the increase in GPx activity, since GSH is necessary to reduction of hydrogen peroxide (H2O2) to water catalyzed by GPx. The expression of neuronal nitric oxide synthase (nNOS) and the determination of nitric oxide metabolites (NOx) also were conducted. nNOS expression increased 7 days after SNT. NOx production was higher at 1, 7 and 15 days after axotomy. These results emphasize the involvement of nitric oxide in neuropathic pain. In the last part of this study, the measurement of H2O2 in spinal cord was conducted, showing an increase in sham and SNT animals at 1, 7 and 15 days after surgery. It was also evaluated, by Western blot, the 4-hydroxy-2-nonenal (HNE)-Michael adducts and the total and phospho-Akt. At 7 days, there was an increase in total-Akt expression and HNE-Michael adducts. Phospho-Akt expression increased 1, 3 and 7 days after axotomy. HNE is a lipid peroxidation product, thus, may be suggested that nerve injury stimulates this process in spinal cord. However, the Akt activation may be a means of protection to nerve cells, since this protein participate of signal cascades related to cell survival. In summary, the results of present study show that the peripheral nerve injury interferes in the systems related to oxidative stress, besides activate cell survival mechanisms. In conclusion, nociceptive stimulation induced by surgery causes changes in antioxidants systems such as catalase, GSH and GPx, as well in H2O2 production in spinal cord, which is not specific to neuropathic injury. However, neuropathic pain is related with SOD activity decrease and HNE and NO production increase. Thus, after nerve injury occur ROS formation which can act as signaling molecules in nociceptive processing modulation in spinal cord and, maybe, interferes in neuroprotection mechanisms, such as Akt activation.