Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-08-29T22:28:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Anderson Gustavo Santos.pdf: 2571906 bytes, checksum: 0241f966a2aefc7dd806932c693fb2fb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T22:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Anderson Gustavo Santos.pdf: 2571906 bytes, checksum: 0241f966a2aefc7dd806932c693fb2fb (MD5) Previous issue date: 2018-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A doença de Parkinson (DP) é uma doença crônica e neurodegenerativa, de etiologia não totalmente elucidada. Estudos demonstram que processos oxidativos podem estar envolvidos nesta morte neuronal. Sabendo-se disso, pesquisas têm sido direcionadas na busca de plantas medicinais e substâncias que possam atuar inibindo tais processos oxidativos. A Passiflora alata é uma planta nativa do Brasil e que possui uma atividade antioxidante descrita na literatura. Além disto, há evidências de que espécies do gênero Passiflora podem atuar frente a doenças neurodegenerativas, como a DP. Através disto, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do tratamento com o extrato hidroalcoólico de P. alata (EHPA) em um modelo animal de DP, induzido pela neurotoxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA). O extrato das folhas de P. alata foi preparado através da extração com solução hidroalcoólica a 95%, e posteriormente foi realizado a determinação do conteúdo de compostos fenólicos e flavonoides, além de ser determinada a sua atividade antioxidante frente aos ensaios DPPH• e ABTS•+. Para avaliar o efeito per se do EHPA, foi realizado uma avaliação do efeito comportamental, de diferentes doses do extrato, em animais não lesionados. Para a identificação do possível efeito neuroprotetor da planta, os animais foram separados em 5 grupos experimentais: SHAM (falso-operado), 6-OHDA controle, 6-OHDA + 100mg/Kg/dia de EHPA, 6-OHDA + 200mg/Kg/dia de EHPA e 6-OHDA + 300mg/Kg/dia de EHPA. Após a divisão dos grupos, os animais foram submetidos a cirurgia estereotáxica para a administração bilateral da neurotoxina 6-OHDA ou de solução salina (SHAM) no feixe prosencefálico medial. No dia seguinte, iniciou-se o tratamento com os extratos, por via oral, tendo uma duração de 14 dias. Após o término do tratamento, os animais foram submetidos aos seguintes testes comportamentais: Reconhecimento social, Campo aberto, Reconhecimento de objetos, Labirinto em cruz elevado e Natação forçada. Após o término dos testes, os animais foram sacrificados e foram coletados sangue e cérebro (estriado) para a determinação de GSH, catalase, parâmetros hematológicos e bioquímicos. Os resultados apresentados sugerem um efeito neuroprotetor resultante do tratamento com o EHPA, indicando uma reversão do déficit cognitivo e comportamentos do tipo depressivo e ansioso, resultantes da lesão com a 6-OHDA. No entanto, não foram observadas alterações comportamentais nos ratos não lesionados. Além disto, o extrato apresentou um bom desempenho frente ao modelo de captura de radicais livres ABTS•+, indicando a sua atividade antioxidante. Não foram observadas diferenças entre os grupos nas concentrações de GSH e na atividade da catalase, tanto no plasma como no estriado. No entanto, alterações hematológicas foram identificadas nos animais lesionados. Conclui-se, portanto, que o tratamento com o EHPA reverteu os prejuízos cognitivos, efeito tipo ansioso e tipo depressivo causados pela infusão intracerebral de 6-OHDA, um modelo animal de DP. / Parkinson’s disease (PD) is a chronic and neurodegenerative disease with an unknown etiology. Studies have shown that oxidative processes may be involved in this neuronal death. Thus, studies have been focused on medicinal plants and substances with antioxidant properties that may inhibit such oxidative processes. Passiflora alata is a Brazilian native plant with an antioxidant and neuroprotective activity, described on literature. In addition, there is evidences that species of the genus Passiflora can act against neurodegenerative diseases, such as PD. Hence, the aim of present investigation was to evaluate the neuroprotective effect of ethanolic extract of Passiflora alata (EEPA) in an animal model of PD, induced by the neurotoxin 6-Hydroxidopamine (6-OHDA). The extract of P. alata’s leaves was prepared by extraction with ethanolic solution (95%), and characterized by its phenolic compounds, flavonoids and the scavenger activity against DPPH• and ABTS•+ radicals. To evaluate the effect per se of EEPA, an evaluation of the behavioral effect was carried out on non-injured animals, with different doses of the extract. For the identification of the possible neuroprotective effect of the plant, male Wistar rats were used, which were separated into 5 experimental groups: SHAM (false-operated), 6-OHDA control, 6-OHDA + 100mg/kg/day of EEPA, 6-OHDA + 200mg/kg/day of EEPA and 6-OHDA + 300mg/kg/day of EEPA. After the division of these groups, the animals were submited to the stereotaxic surgery for bilateral administration of 6-OHDA neurotoxin or saline solution (SHAM) in the medial forebrain bundle. On following day, the treatment with the extracts started and continued for 14 days. After the treatment was finished, all the animals were submitted to the following behavioral tests: Social recognition, Open field, Object recognition, Elevated plus maze and Forced swimming. The non-injured animals, the same treatment protocol and tests were followed. Subsequently, the animals were sacrificed and blood and brain (striatum) were collected for the determination of GSH, catalase, hematological and biochemical parameters. The present results demonstrate a neuroprotective effect resulting from treatment with the EEPA on rats with 6-OHDA injury, indicating a reversal of cognitive deficit and depressive and anxious behaviors. However, no behavioral effects were observed in the non-injured rats. In addition, the extract exhibited a good scavenger activity against the ABTS•+ radical, indicating its antioxidant activity. No differences were observed between groups on GSH concentrations and catalase activity, on blood and striatal tissue. However, hematological changes were identified in the injured animals. In conclusion, the treatment with EEPA reversed the cognitive, anxious and depressive impairments caused by the intracerebral infusion of 6-OHDA, an animal model of PD.

Introdução: Hidrocefalia é uma síndrome caracterizada pelo acúmulo de líquido cérebroespinal no interior das cavidades ventriculares. Considerando a sua fisiopatologia de caráter multifatorial um dos fatores envolvidos é o estresse oxidativo desencadeado pela peroxidação lipídica e formação de radicais livres. O Edaravone é um novo fármaco antioxidante com efeitos neuroprotetores, que ainda não foi testado em pacientes com hidrocefalia. Objetivo: Avaliar a resposta neuroprotetora do Edaravone na hidrocefalia experimental em ratos jovens. Metodologia: A hidrocefalia foi induzida em ratos filhotes, injetando uma porção de caulim na cisterna magna. Os animais foram divididos em três grupos: controle (C) (n=10); hidrocefalia não tratada (HNT) (n=20); hidrocefalia tratado com 20mg/kg Edaravone (HTE) (n=20). O grupo tratado com a droga recebeu todos os dias, a partir do primeiro dia após a indução, uma injeção intraperitoneal com o Edaravone. Os animais foram pesados diariamente, avaliados por testes comportamentais e exame de ressonância magnética, análise histopatológica, imunoistoquímica e bioquímica. Todos os animais foram sacrificados, 14 dias após a indução de hidrocefalia. Resultados: Do terceiro ao oitavo dia após a indução de hidrocefalia, os animais ganharam menos peso do que os controles. No entanto, a partir do nono dia pós-indução, o ganho de peso foi similar nos três grupos experimentais. No teste de campo aberto e no labirinto aquático, o desempenho dos animais do grupo HTE foi melhor, quando comparado com os animais do grupo HNT. Na imunoistoquímica para GFAP, os animais do grupo HNT demonstravam astrócitos intensamente marcados com extensões grossas, enquanto que os animais do grupo de HTE tinham astrócitos mais delicados e com extensões finas. Na análise por caspase-3 os animais tratados com Edaravone mostraram um número menor de células em processos de apoptose. Conclusões: O uso do Edaravone evidenciou uma tendência a diminuir células em processo de apoptose, melhorou a resposta comportamental, e atividade dos astrócitos ligeiramente reduzida evidenciado por GFAP imunomarcação no corpo caloso de ratos jovens com hidrocefalia / Background: Hydrocephalus is a syndrome resulting from the current unbalance between the formation and absorption of cerebrospinal fluid (CSF), and consequent accumulation within the cerebral ventricles. Clinically, hydrocephalic children can present several neurological disorders, not always reversed with treatment, even after the development of more and more sophisticated shunt systems (1). Although lesions of hydrocephalus be multifactorial, it is known that oxidative stress is one of the mechanisms involved. The Edaravone is a new antioxidant drug with neuroprotective effects but has not been tested in hydrocephalus (2). Objectives: To evaluate the neuroprotective response of Edaravone on experimental hydrocephalus in young rats. Methodology: Hydrocephalus was induced in pup rats by injecting kaolin into the cisterna magna. The animals were divided into three groups with 10 rats each one: control (C); untreated hydrocephalus (HNT); hydrocephalus treated with 20mg/kg Edaravone (HTE). The treated group receive the drug every day from the first day after induction. The animals were weighed daily, assessed by behavioral tests and magnetic resonance examination. All animals were sacrificed 14 days after hydrocephalus induction and the brains processed for histological, immunohistochemical and biochemical analysis. In the analysis of caspase-3 treated animals showed Edaravone a smaller number of cells in the process of apoptosis. Results: From the third to the eighth day after the hydrocephalus induction, the animals gained less weight than controls. However, from the ninth day of induction, weight gain was similar in the 3 experimental groups. In the open field test the performance of hydrocephalic rats receiving Edaravone was better than those who did not receive the drug. In immunohistochemistry for GFAP in the corpus callosum, the control rats did not exhibit reactive astrocytes. On the other hand, the animals of HNT group showed intensely labeled astrocytes with thick extensions, while the animals in the HTE group the astrocytes were more delicate and with thin extensions. Conclusion: The use of Edaravone showed a tendency to decrease in cell apoptosis improved the behavioral response and slightly reduced astrocyte activity evidenced by GFAP immunostaining in the corpus callosum of young rats with hydrocephalus

A hidrocefalia é uma condição neurológica complexa, em que ocorre o desequilíbrio na dinâmica do líquido cefalorraquidiano (LCR) provocando um distúrbio na produção, circulação e reabsorção do mesmo, o que pode levar a uma redução e/ou bloqueio do fluxo sanguíneo. Apesar do tratamento com derivação liquórica ser eficiente na redução da ventriculomegalia, muitos danos neurológicos não são revertidos com a cirurgia. Estudos demonstram que o estresse oxidativo está envolvido na gênese das lesões da hidrocefalia. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta neuroprotetora do Resveratrol, reconhecido como um potente antioxidante, na hidrocefalia experimental induzida em ratos Wistar jovens. Foram utilizados ratos machos, com sete dias de vida, que receberam uma injeção de caulim a 15% na cisterna magna para indução da hidrocefalia. Esses animais foram divididos em grupo hidrocefálico sem tratamento (n=20), grupo hidrocefálico tratado com Resveratrol através de aplicação de injeção intraperitoneal (20mg/kg/dia) (n=20) e um grupo de animais que não receberam a injeção de caulim para ser usado como controle (n=10). Foram realizadas avaliações comportamentais e estudos de ressonância magnética. Duas semanas após, os animais foram eutanasiados para coleta dos encéfalos, e realizados testes histológicos, imunoistoquímicos e bioquímicos. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que os animais hidrocefálicos, que receberam diariamente injeção de Resveratrol, apresentaram efeito benéfico nos testes comportamentais mostrando mais agilidade e melhor exploração do ambiente, melhor desenvolvimento sensoriomotor, aprendizagem e capacidade de memorização, apresentaram também discreta diminuição da atividade astrocitária evidenciada pela imunomarcação do GFAP no corpo caloso e exibiram aumento significativo na quantidade de antioxidantes totais no plasma. Conclui-se que o uso do Resveratrol diminuiu a atividade astrocitária, aumentou a quantidade de antioxidantes e melhorou a memória e o desenvolvimento motor dos ratos / Hydrocephalus is a neurological condition complex, wherein the imbalance occurs in the dynamics of cerebrospinal fluid (CSF) causing a disturbance in the production, circulation and absorption thereof, which can lead to a reduction and / or blockage of blood flow. Despite treatment with CSF shunt be effective in reducing ventriculomegaly, many neurological damage is not reversed with surgery. Studies have shown that oxidative stress is involved in the genesis of hydrocephalus injuries. The objective of this study was to evaluate the neuroprotective response Resveratrol, recognized as a potent antioxidant in experimentally induced hydrocephalus in young Wistar rats. male rats were used with seven days of life, which received a 15% kaolin injection into the cisterna magna induction of hydrocephalus. These animals were divided into hidrocefálico untreated group (n = 20), hidrocefálico group treated with resveratrol by intraperitoneal injection application (20 mg / kg / day) (n = 20) and a group of animals that received the kaolin injection to be used as control (n = 10). behavioral assessments and magnetic resonance studies were performed. Two weeks later, the animals were euthanized to collect the brains and performed histological, immunohistochemical and biochemical tests. The results of this study showed that hidrocefálicos animals that received daily injection of Resveratrol showed beneficial effect on behavioral tests showing more agility and better exploitation of the environment, better sensorimotor development, learning and memory capacity, also showed a slight decrease of astrocyte activity evidenced by immunostaining of GFAP in the corpus callosum and exhibited a significant increase in the total amount of antioxidants in plasma. We conclude that the use of Resveratrol decreased the astrocyte activity, increased the amount of antioxidants and improved memory and motor development of mice

Submitted by Rose Suellen (rosesuellen@ufpa.br) on 2018-02-22T13:41:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DistribuicaoTecidualNeuroprotecao.pdf: 2857758 bytes, checksum: d55aa1894aa3b223cbd2de8ac1b5a61b (MD5) / Approved for entry into archive by Rose Suellen (rosesuellen@ufpa.br) on 2018-02-22T13:44:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DistribuicaoTecidualNeuroprotecao.pdf: 2857758 bytes, checksum: d55aa1894aa3b223cbd2de8ac1b5a61b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T13:44:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DistribuicaoTecidualNeuroprotecao.pdf: 2857758 bytes, checksum: d55aa1894aa3b223cbd2de8ac1b5a61b (MD5) Previous issue date: 2017-04-05 / O acidente vascular encefálico isquêmico (AVEi) é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em adultos no mundo inteiro. Atualmente, a única terapia farmacológica disponível para tratar essa desordem neural aguda emprega um agente trombolítico de custo elevado, que deve ser administrado em até 4 horas do início dos sintomas, trazendo consigo o significativo risco de transformar a área inicialmente oligêmica em uma hemorragia cerebral de proporções catastróficas. Nas últimas décadas, nanopartículas especialmente configuradas para ter maior afinidade com certos tecidos e maior difusibilidade através de barreiras biológicas têm sido empregadas como veículos para carrear agentes terapêuticos. Entre estas, a nanopartícula lipídica lipossomal LDE, conjugada ao agente Metotrexato (cLDE/MTX), tem sido testada com sucesso em vários modelos experimentais de inflamação, revelando resultados promissores. Considerando que a modulação do processo inflamatório que acompanha o infarto cerebral possui relevância prognóstica, a presente pesquisa investigou os efeitos do cLDE/MTX em um modelo experimental de isquemia cerebral induzida pelo agente vasoconstrictor endotelina-1 (ET-1) no córtex cerebral de ratos adultos. Na primeira fase do estudo, foi investigado por meio de cintilografia o comportamento da LDE triciada (LDE3H+), injetada pela via caudal, frente à barreira hematoencefálica (BHE) em animais sham (N=18) e em animais submetidos à isquemia focal com injeção de ET-1 (80pMol/μl) diretamente no córtex frontal (N=5). Em seguida, avaliaram-se os efeitos anti-inflamatórios e neuroprotetores do cLDE/MTX (1 mg/kg) injetado pela veia caudal, em animais isquêmicos (N=5), com o grupo controle que recebeu apenas LDE. Todos os animais foram perfundidos com solução salina a 0,9%; e paraformaldeído, a 4%, 7 dias após a indução isquêmica. Os achados histopatológicos foram avaliados pela coloração com violeta de cresila e imuno-histoquímica para corpos neuronais adultos (anti-NeuN), astrócitos (anti-GFAP) e micróglia (anti-Iba1). Os resultados encontrados demonstraram que a LDE3H+ atravessa a BHE tanto nos animais sham quanto nos animais isquêmicos, e o tratamento com cLDE/MTX não reduz a área total de infarto primário, mas reduz consideravelmente a ativação microglial no centro da lesão, induzindo, ainda, a preservação neuronal na periferia do infarto, quando comparado com os animais controles, injetados apenas com a LDE não conjugada (P<0.01). Por fim, a astrocitose normalmente observada na isquemia cerebral manteve-se inalterada. Os resultados indicam que o cLDE/MTX é um promissor agente anti-inflamatório e neuroprotetor neste modelo experimental de acidente vascular encefálico isquêmico. Estudos futuros são desejáveis para ampliar os conhecimentos acerca desses resultados, incluindo modelos animais com sobrevida mais prolongada. / Ischemic stroke is one of the leading causes of morbidity and mortality in adults worldwide. Currently, there is only a single pharmacological therapy available to treat such neural disorder, using a high-cost thrombolytic agent, which must be administered within 4 hours of the onset of symptoms, but with a significant risk of transforming the initially oligoemic area into a catastrophic cerebral haemorrhage. In the last decades, nanoparticles with high affinity for certain types of tissues and specially configured with an enhanced diffusibility through biological barriers, have been employed as vehicles to carry therapeutic agents. Among these, the novel liposomal nanoparticle LDE conjugated to the agent methotrexate (cLDE / MTX) has been successfully tested in several experimental models of inflammation, with promising results. Considering that modulation of the inflammatory process that accompanies cerebral infarction is of prognostic significance, the present study investigated the effects of cLDE / MTX upon an experimental model of cerebral ischemia induced by the vasoconstrictor agent endothelin-1 (ET-1) in the cerebral cortex of adults rats. During the first phase of the study, the behavior of tritiated LDE particles (LDE3H+) concerning the blood-brain barrier (BBB), once injected through the caudal vein, was evaluated in either sham animals (N = 18) and animals submited to ET-1 injection (80pMol / Μl) directly into the frontal cortex (N = 5). Further, the anti-inflammatory and neuroprotective effects of cLDE / MTX (1 mg / kg), also injected by caudal vein, were investigated in ischemic animals (N = 5), with the control group (N = 5) receiving only free LDE. All animals were perfused with 0.9% saline and 4% paraformaldehyde 7 days after ischemic induction. Histopathological findings were evaluated by staining with cresyl violet and immunohistochemistry for adult neuronal bodies (anti-NeuN), astrocytes (anti-GFAP) and microglia (anti-Iba1). The results showed that LDE3H+ positively crosses BBB in both sham animals and ischemic animals, and that cLDE / MTX treatment, despite the fact that it reduces not the total area of primary infarction, was able to considerably reduces microglial activation phenomenon at the center of the lesion, inducing as well a significant neuronal preservation at the periphery of the infarction, when compared to the control animals, injected only with unconjugated LDE (P <0.01). At last, the astrocytosis phenomena usually encountered in cerebral ischemia remained unchanged. The results indicate that cLDE / MTX is a promising anti-inflammatory and neuroprotective agent in such experimental model of ischemic stroke. Future studies are desirable in order to increase knowledge about these outcomes, including in animal models with longer survivals.

Toxinas animais sempre foram estudadas ao longo dos tempos por apresentarem um arsenal químico de moléculas com diversas funções biológicas. Estudos podem conduzir essas moléculas para serem aplicadas na geração de agentes terapêuticos e/ou de ferramentas experimentais para a pesquisa básica e aplicada, justificando sua purificação e análise funcional. Considerando que estudos de venenos de sapos são relevantes, por serem estes considerados uma boa fonte de toxinas que atuam sobre diferentes sistemas biológicos, os objetivos deste trabalho foram identificar a fração Rs5 do veneno de Rhinella schneideri e caracterizar suas ações farmacológicas e/ou toxicológicas no sistema nervoso central. O veneno de Rhinella schneideri foi inicialmente submetido à diálise o que resultou na fração de baixa massa molecular, que foi liofilizada e submetida a uma cromatografia de fase reversa em sistema CLAE em coluna C18. Das 5 frações majoritárias obtidas nesta cromatografia apenas a Rs5 foi utilizada para caracterização de neuroproteção devido aos resultados prévios do grupo. A Rs5 (2 e 4 ?g) se mostrou eficiente em proteger células neuronais quando submetidas à crises induzidas por pilocarpina. As frações Rs3, Rs4 e Rs5 e também a bufalina adquirida comercialmente (BAC) foram utilizadas para ensaios em transportadores de neurotransmissores dopamina (Rs5-IC50: 0,063 ± 0,014 ?M), serotonina (Rs5-IC50: 0,090 ± 0,065 ?M), norepinefrina (Rs5-IC50: 0,079 ± 0,097 ?M), glutamato, GABA (Rs5-IC50: 0,010 ± 0,010 ?M) e glicina (Rs5-IC50: 0,021 ± 0,015 ?M), nos quais demonstraram ações inibitórias ou estimulantes na recaptação. A fração Rs3 foi submetida a ensaios de inibição de crises convulsivas induzidas por PTZ e se mostrou parcialmente eficaz, porém em todos os animais houve aumento do tempo de latência para o desenvolvimento de crises. Na tentativa de se caracterizar um alvo para neuroproteção, ensaios com mitocôndrias isoladas foram realizados. Os resultados mostraram que não ocorre interferência na função mitocondrial em v baixas concentrações da Rs5 (1, 10 e 50 nM) indicando baixa toxicidade nestas doses. Baseando-se nos resultados de recaptação, ensaios comportamentais foram realizados demonstrando que a Rs3 e a Rs5 foram capazes de inibir ansiedade. Por fim, vale ressaltar que estes estudos são inéditos com moléculas do tipo heterosídeos cardiotônicos derivados de anfíbios, sendo pioneiros e relevantes para futuras pesquisas. / Animal toxins have been studied over the years because they present a chemical arsenal of molecules with diverse biological functions. Studies can lead these molecules to be applied in the generation of therapeutic agents and / or experimental tools for basic and applied research, justifying its purification and functional analysis. Whereas toads poisons studies are relevant, since these are considered a good source of toxins that act on different biological systems, the objectives of this study were to identify the Rs5 fraction isolated from Rhinella schneideri toad poison and characterize their pharmacological actions and / or toxicological in central nervous system. The poison of Rhinella schneideri was first submitted to dialysis, which resulted in the fraction of low molecular weight, which was lyophilized and subjected to reverse phase chromatography on HPLC C18 system. Among the majority five fractions obtained by chromatography, only Rs5 was used for characterization of neuroprotection due to previous results of the group. The Rs5 (2 e 4 ?g) proved to be efficient in protecting neuronal cells when subjected to seizures induced by pilocarpine. The fractions Rs3, Rs4 and Rs5 and also bufalin purchased commercially (BAC) were used for testing transporters of neurotransmitters dopamine (Rs5-IC50: 0,063 ± 0,014 ?M), serotonin (Rs5-IC50: 0,090 ± 0,065 ?M), norepinephrine (Rs5-IC50: 0,079 ± 0,097 ?M), glutamate, GABA (Rs5-IC50: 0,010 ± 0,010 ?M) and glycine (Rs5-IC50: 0,021 ± 0,015 ?M), in which they demonstrated inhibitory or stimulating action on reuptake. The Rs3 fraction was subjected to assays of inhibition of seizures induced by PTZ test and proved to be partially effective, but in all animals showed significant increase in latency for the development of seizures. In an attempt to characterize a target for neuroprotection, tests with isolated mitochondria were performed. The results showed that no interference occurs on mitochondrial function at low concentrations of Rs5 (1, 10 e 50 nM) showing low toxicity at these doses. Based on the results of reuptake, behavioral assays were performed showing that Rs3 to Rs5 and were able to inhibit anxiety. Finally, it is important to emphasize that these studies are unprecedented using cardiotonic glycosides derived from amphibians, being pioneers and relevant for future research.

A hidrocefalia é uma condição neurológica complexa, em que ocorre o desequilíbrio na dinâmica do líquido cefalorraquidiano (LCR) provocando um distúrbio na produção, circulação e reabsorção do mesmo, o que pode levar a uma redução e/ou bloqueio do fluxo sanguíneo. Apesar do tratamento com derivação liquórica ser eficiente na redução da ventriculomegalia, muitos danos neurológicos não são revertidos com a cirurgia. Estudos demonstram que o estresse oxidativo está envolvido na gênese das lesões da hidrocefalia. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta neuroprotetora do Resveratrol, reconhecido como um potente antioxidante, na hidrocefalia experimental induzida em ratos Wistar jovens. Foram utilizados ratos machos, com sete dias de vida, que receberam uma injeção de caulim a 15% na cisterna magna para indução da hidrocefalia. Esses animais foram divididos em grupo hidrocefálico sem tratamento (n=20), grupo hidrocefálico tratado com Resveratrol através de aplicação de injeção intraperitoneal (20mg/kg/dia) (n=20) e um grupo de animais que não receberam a injeção de caulim para ser usado como controle (n=10). Foram realizadas avaliações comportamentais e estudos de ressonância magnética. Duas semanas após, os animais foram eutanasiados para coleta dos encéfalos, e realizados testes histológicos, imunoistoquímicos e bioquímicos. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que os animais hidrocefálicos, que receberam diariamente injeção de Resveratrol, apresentaram efeito benéfico nos testes comportamentais mostrando mais agilidade e melhor exploração do ambiente, melhor desenvolvimento sensoriomotor, aprendizagem e capacidade de memorização, apresentaram também discreta diminuição da atividade astrocitária evidenciada pela imunomarcação do GFAP no corpo caloso e exibiram aumento significativo na quantidade de antioxidantes totais no plasma. Conclui-se que o uso do Resveratrol diminuiu a atividade astrocitária, aumentou a quantidade de antioxidantes e melhorou a memória e o desenvolvimento motor dos ratos / Hydrocephalus is a neurological condition complex, wherein the imbalance occurs in the dynamics of cerebrospinal fluid (CSF) causing a disturbance in the production, circulation and absorption thereof, which can lead to a reduction and / or blockage of blood flow. Despite treatment with CSF shunt be effective in reducing ventriculomegaly, many neurological damage is not reversed with surgery. Studies have shown that oxidative stress is involved in the genesis of hydrocephalus injuries. The objective of this study was to evaluate the neuroprotective response Resveratrol, recognized as a potent antioxidant in experimentally induced hydrocephalus in young Wistar rats. male rats were used with seven days of life, which received a 15% kaolin injection into the cisterna magna induction of hydrocephalus. These animals were divided into hidrocefálico untreated group (n = 20), hidrocefálico group treated with resveratrol by intraperitoneal injection application (20 mg / kg / day) (n = 20) and a group of animals that received the kaolin injection to be used as control (n = 10). behavioral assessments and magnetic resonance studies were performed. Two weeks later, the animals were euthanized to collect the brains and performed histological, immunohistochemical and biochemical tests. The results of this study showed that hidrocefálicos animals that received daily injection of Resveratrol showed beneficial effect on behavioral tests showing more agility and better exploitation of the environment, better sensorimotor development, learning and memory capacity, also showed a slight decrease of astrocyte activity evidenced by immunostaining of GFAP in the corpus callosum and exhibited a significant increase in the total amount of antioxidants in plasma. We conclude that the use of Resveratrol decreased the astrocyte activity, increased the amount of antioxidants and improved memory and motor development of mice

Introdução: Hidrocefalia é uma síndrome caracterizada pelo acúmulo de líquido cérebroespinal no interior das cavidades ventriculares. Considerando a sua fisiopatologia de caráter multifatorial um dos fatores envolvidos é o estresse oxidativo desencadeado pela peroxidação lipídica e formação de radicais livres. O Edaravone é um novo fármaco antioxidante com efeitos neuroprotetores, que ainda não foi testado em pacientes com hidrocefalia. Objetivo: Avaliar a resposta neuroprotetora do Edaravone na hidrocefalia experimental em ratos jovens. Metodologia: A hidrocefalia foi induzida em ratos filhotes, injetando uma porção de caulim na cisterna magna. Os animais foram divididos em três grupos: controle (C) (n=10); hidrocefalia não tratada (HNT) (n=20); hidrocefalia tratado com 20mg/kg Edaravone (HTE) (n=20). O grupo tratado com a droga recebeu todos os dias, a partir do primeiro dia após a indução, uma injeção intraperitoneal com o Edaravone. Os animais foram pesados diariamente, avaliados por testes comportamentais e exame de ressonância magnética, análise histopatológica, imunoistoquímica e bioquímica. Todos os animais foram sacrificados, 14 dias após a indução de hidrocefalia. Resultados: Do terceiro ao oitavo dia após a indução de hidrocefalia, os animais ganharam menos peso do que os controles. No entanto, a partir do nono dia pós-indução, o ganho de peso foi similar nos três grupos experimentais. No teste de campo aberto e no labirinto aquático, o desempenho dos animais do grupo HTE foi melhor, quando comparado com os animais do grupo HNT. Na imunoistoquímica para GFAP, os animais do grupo HNT demonstravam astrócitos intensamente marcados com extensões grossas, enquanto que os animais do grupo de HTE tinham astrócitos mais delicados e com extensões finas. Na análise por caspase-3 os animais tratados com Edaravone mostraram um número menor de células em processos de apoptose. Conclusões: O uso do Edaravone evidenciou uma tendência a diminuir células em processo de apoptose, melhorou a resposta comportamental, e atividade dos astrócitos ligeiramente reduzida evidenciado por GFAP imunomarcação no corpo caloso de ratos jovens com hidrocefalia / Background: Hydrocephalus is a syndrome resulting from the current unbalance between the formation and absorption of cerebrospinal fluid (CSF), and consequent accumulation within the cerebral ventricles. Clinically, hydrocephalic children can present several neurological disorders, not always reversed with treatment, even after the development of more and more sophisticated shunt systems (1). Although lesions of hydrocephalus be multifactorial, it is known that oxidative stress is one of the mechanisms involved. The Edaravone is a new antioxidant drug with neuroprotective effects but has not been tested in hydrocephalus (2). Objectives: To evaluate the neuroprotective response of Edaravone on experimental hydrocephalus in young rats. Methodology: Hydrocephalus was induced in pup rats by injecting kaolin into the cisterna magna. The animals were divided into three groups with 10 rats each one: control (C); untreated hydrocephalus (HNT); hydrocephalus treated with 20mg/kg Edaravone (HTE). The treated group receive the drug every day from the first day after induction. The animals were weighed daily, assessed by behavioral tests and magnetic resonance examination. All animals were sacrificed 14 days after hydrocephalus induction and the brains processed for histological, immunohistochemical and biochemical analysis. In the analysis of caspase-3 treated animals showed Edaravone a smaller number of cells in the process of apoptosis. Results: From the third to the eighth day after the hydrocephalus induction, the animals gained less weight than controls. However, from the ninth day of induction, weight gain was similar in the 3 experimental groups. In the open field test the performance of hydrocephalic rats receiving Edaravone was better than those who did not receive the drug. In immunohistochemistry for GFAP in the corpus callosum, the control rats did not exhibit reactive astrocytes. On the other hand, the animals of HNT group showed intensely labeled astrocytes with thick extensions, while the animals in the HTE group the astrocytes were more delicate and with thin extensions. Conclusion: The use of Edaravone showed a tendency to decrease in cell apoptosis improved the behavioral response and slightly reduced astrocyte activity evidenced by GFAP immunostaining in the corpus callosum of young rats with hydrocephalus

A Doença de Alzheimer é uma desordem que acomete milhões de indivíduos por todo o mundo, e a sua incidência tem aumentado muito nas últimas décadas. A doença é caracterizada por diversas alterações no sistema nervoso central, e dentre elas ocorrem alterações importantes no metabolismo da glicose, com redução da utilização desse composto, levando a um importante déficit energético. A Doença de Alzheimer está intimamente relacionada com o Diabetes Mellitus, pois além de ocorrerem alterações semelhantes nas duas desordens, pacientes com diabetes têm risco aumentado de desenvolver Alzheimer. Além da correlação com Diabetes Mellitus, existem evidências de que a hipercolesterolemia também está associada ao maior risco de desenvolver Doença de Alzheimer, o que nos levou a investigar o potencial neuroprotetor das estatinas. Esse trabalho tem como objetivo avaliar alterações comportamentais e bioquímicas em dois modelos de desordens do metabolismo da glicose, bem como avaliar o possível papel neuroprotetor das estatinas, aminoguanidina e n-acetil-cisteína. / Alzheimer’s disease is a disorder that affects millions of individuals around the world, and its incidence has increased in recent decades. Alzheimer’s disease is characterized by several alterations in the central nervous system, and changes in glucose metabolism is among the most important, reducing the uptake of this compound, leading to a significant energy deficit. Alzheimer’s disease is closely related to Diabetes Mellitus, and similar metabolic changes occur in both disorders. Besides, diabetic patients present increased risk for Alzheimer’s disease. In addition, another risk factor to Alzheimer’s is high levels of plasma cholesterol, which lead some research groups to evaluate the potential neuroprotective effect of statins. The aim of this study is to asses behavioral and biochemical changes in two models of glucose metabolism disorders, and evaluate the possible neuroprotective role of statins, aminoguanidine and N-acetyl-cysteine

A acidemia metilmalônica é um erro inato do metabolismo caracterizado pelo acúmulo tecidual de ácido metilmalônico (MMA), dano oxidativo e alterações neurológicas, como degeneração estriatal e convulsões. Considerando que o óxido nítrico é um mensageiro químico trans-sináptico que está envolvido em diversos eventos fisiopatologógicos e seu papel na toxicidade induzida pelo MMA é pouco conhecido, nós decidimos investigar a participação deste radical livre nas alterações comportamentais e neuroquímicas induzidas pela administração intraestriatal de MMA. No primeiro trabalho, foi evidenciado que a administração intraestriatal de um inibidor não-seletivo da enzima óxido nítrico sintase, metil éster de Nϖ-nitro-L-arginina (LNAME: 10-4 - 100 nmol/0,5 μl), exerceu efeito bifásico nas convulsões e na carbonilação proteíca induzidas pela injeção de MMA (4,5 μmol/1,5 μl; 30 minutos após a injeção de L-NAME) no estriado de ratos. Estes resultados sugeriram um envolvimento do óxido nítrico nas convulsões e no dano oxidativo induzido pelo MMA. Em um segundo momento, confirmamos o envolvimento do óxido nítrico nas convulsões induzidas por MMA, uma vez que a injeção intraestriatal de MMA causou um aumento na concentração de nitrito e nitrato (NO2 e NO3) estriatal. Além disso, os episódios convulsivos induzidos por MMA apresentaram uma correlação significativa com a inibição da atividade da Na+,K+-ATPase no estriado injetado, mas não com os níveis de carbonilação protéica, um marcador de dano oxidativo protéico. Neste estudo também foi avaliado o efeito da administração intraestriatal do azul de metileno (AM; 0,015 a 1,5 nmol/ 0,5 μl), que possui atividade antioxidante e é um inibidor da guanilato ciclase, nas convulsões e dano oxidativo induzidos pelo MMA. O AM (1,5 nmol/0,5 μl) diminuiu a formação de NO2 e NO3 estriatal e preveniu as convulsões, a carbonilação protéica e a inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidos pelo MMA. Esses dados sugerem que a atividade da Na+,K+-ATPase pode ser de grande importância para a gênese das convulsões induzidas pelo MMA e que o AM exerce efeito neuroprotetor contra as alterações comportamentais e neuroquímicas induzidas pelo MMA. Além disso, se essas alterações ocorerem nos pacientes com acidemia metilmalônica, é possível propor que o AM poderia ser considerado como uma terapia adjuvante para o tratamento desta acidemia. O efeito da administração do 7-nitroindazol (7-NI; 3-60 mg/kg, i.p.), um inibidor da enzima NOSn, nas convulsões, carbonilação protéica, produção de NO2 e NO3 e na atividade da Na+,K+-ATPase após trinta minutos da administração intraestriatal de MMA (6 μmol/ 2 μl) também foi avaliado. O tratamento com 7-NI (60 mg/kg, i.p.) potencializou as convulsões, aumentou a carbonilação protéica e reduziu a produção de NO2 e NO3 induzidos pelo MMA, entretanto, este tratamento não alterou a atividade da Na+,K+-ATPase. A adminstração intraestriatal de L-arginina (50 nmol/ 0.5 μl), mas não de D-arginina (5 and 50 nmol/ 0.5 μl), aumentou a produção de NO2 e NO3 e preveniu as convulsões, a carbonilação protéica e a inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidos pelo MMA. Esses resultados sugerem que o óxido nítrico neuronal pode exercer um efeito protetor sobre as convulsões bem como nas alterações neuroquímicas evidenciadas neste modelo de acidemia orgânica. Concluindo, estes resultados ampliam o papel dos radicais livres nas alterações comportamentais e neuroquímicas induzidas pela administração intra-estriatal de MMA.

O glutamato, principal neurotransmissor excitatório no sistema nervoso central (SNC), está envolvido em várias funções cerebrais e da retina, como aprendizado/memória, desenvolvimento e envelhecimento cerebral e função visual. No entanto, o aumento da concentração do glutamato na fenda sináptica pode levar a neurotoxicidade. A excitotoxicidade glutamatérgica está relacionada a várias desordens cerebrais, tanto agudas quanto crônicas. Manter o nível de glutamato em concentrações fisiológicas relevantes ao adequado funcionamento do SNC se faz necessário. Para tanto, existem transportadores específicos para o glutamato, responsáveis por controlar os níveis de glutamato na fenda sináptica. Os ácidos graxos essenciais ω3 vêm ganhando especial atenção de pesquisadores por seus efeitos sobre o SNC, tanto responsáveis pelo adequado desenvolvimento e funcionamento cerebral e da retina, quanto por sua ação neuroprotetora frente a patologias relacionadas com a excitotoxicidade glutamatérgica. Na presente tese, nós demonstramos que os ácidos graxos ω3 são importantes para a homeostasia do sistema glutamatérgico tanto no hipocampo quanto na retina de ratos. Uma dieta deficiente em ácidos graxosω3, mantida durante todo o período de desenvolvimento do SNC até a vida adulta, foi capaz de atrasar o desenvolvimento normal das sinapses glutamatérgicas, onde houve uma redução de proteínas sinápticas (NMDA, AMPA e α-CaMKII) no período pós-natal, promovendo alterações comportamentais na vida adulta de ratos, como comportamentos de hiperatividade e ansiedade. Os animais deficientes em ω3 também apresentaram déficits na memória aversiva de longa duração, que foi relacionado com uma baixa interação do receptor NMDA com a proteína cinase Fyn, bem como a redução dos níveis de DHAω3 e BDNF no hipocampo dos ratos. Os ácidos graxos ω3 preveniram as alterações sobre parâmetros do sistema glutamatérgico (queda na captação de glutamato, aumento de transportadores de glutamato GLAST e GLT-1) provocadas por um único evento convulsivo neonatal. Além disso, os animais deficientes em ácidos graxos ω3 apresentaram aumento no conteúdo de GFAP (proteína astrocitária) e redução no conteúdo de NeuN (proteína neuronal) independente do evento convulsivo. Os ácidos graxosω3 também preveniram o déficit de memória de curta duração na vida adulta dos ratos causado pela convulsão 5 neonatal. Na retina de ratos, a deficiência dos ácidos graxos ω3 causou alterações na captação de glutamato e no conteúdo do transportador GLT-1. Após um insulto isquêmico na retina, os animais deficientes em ácidos graxos ω3 apresentaram alterações em parâmetros do sistema glutamatérgico (queda na captação de glutamato, aumento de GLT-1 e EAAC1). Já nos animais que receberam ácidos graxos ω3, o conteúdo de GLT-1 foi maior tanto basal quanto isquêmico, e somente o EAAC1 foi modulado. Nossos resultados mostram a importância dos ácidos graxos ω3 em manter a homeostasia glutamatérgica, contribuindo para o adequado desenvolvimento, funcionamento e proteção do SNC e da retina. / The main excitatory neurotransmitter in central nervous system (CNS), glutamate, is involved in many functions in brain and retina, such as learning / memory, brain and retina development and aging, and visual process. However, increased glutamate concentrations in synaptic cleft could lead to neurotoxicity. Glutamate excitotoxicity was related to many neurological acute and chronic disorders. Keeping glutamate at relevant physiological concentrations to adequate CNS function is necessary. The high affinity glutamate transporters are responsible to maintain glutamate below neurotoxic levels, preventing excitotoxicity. The essential omega-3 fatty acids (ω3) have received attention from scientific community because of its effects on brain development and neuroprotection against pathologies related to glutamatergic excitotoxicity. In the present thesis, we demonstrated that dietary ω3 fatty acids are important for glutamatergic system homeostasis in the hippocampus and retina of rats. A ω3 deficient diet, maintain since gestation until adulthood, was capable to delay the normal glutamatergic synapse development, with a reduction in synaptic proteins (NMDA, AMPA and αCaMKII) in the postnatal period, promoting behavioral alterations in adulthood in rats (hyperactivity and anxiety-like behavior). The deficient animals also presented aversive long-term memory deficit, which was related to reduction in the interaction of NMDA receptor with Fyn kinase protein, as well as in DHA and BDNF hippocampal content in rats. Dietary ω3 fatty acids prevented alterations on glutamatergic system functionality (decrease in glutamate uptake activity, increase in glutamate transporters GLAST and GLT-1 contents) caused by one single neonatal seizures episode. Dietary ω3 fatty acids also prevented aversive short-term memory deficit in adulthood caused by neonatal seizures. In the retina, ω3 deficiency caused decrease in glutamate uptake and reduction in GLT-1 content in basal conditions. After ischemic insult in the retina, ω3 deficient rats presented alteration on parameters of glutamatergic system evaluated (decrease in glutamate uptake activity, increase in GLT-1 and EAAC1 transporters). In ω3 adequate rats, GLT-1 content was higher in basal and ischemic conditions, and only EAAC1 was increase after ischemia. Taking together, our data show the importance of dietary ω3 fatty acids to maintain glutamatergic system homeostasis, contributing to adequate development, function and protection of CNS and retina.