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Efeito do alendronato sódico sobre a atividade clástica na periodontite experimental em ratos / Effect of alendronate on the clastic activity in induced periodontitis in rats

Moreira, Mariana Matheus 15 July 2014 (has links)
A periodontite é uma doença de natureza multifatorial e infecciosa, que resulta na inflamação e perda dos tecidos de suporte dos dentes. Essa inflamação é causada por bactérias associadas ao biofilme, causando a perda progressiva de inserção. Os bisfosfonatos são fármacos com capacidade de inibir a reabsorção óssea, atuando nas células clásticas. O presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos do alendronato, um bisfosfonato nitrogenado com grande potência antireabsortiva, na evolução da doença periodontal induzida em ratos, bem como a possível presença de necrose óssea no processo alveolar. Foram utilizados 48 ratos Wistar albinos, do sexo masculino, com 3 meses de vida e peso médio de 250g. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: Alendronato (ALN) e Controle (CON). A periodontite foi induzida com a inserção de um fio de seda 4.0 no sulco gengival do segundo molar superior. Os ratos do grupo ALN, receberam doses diárias de 2,5 mg/kg durante 7 dias antes e 7, 14, 21 e 30 dias após a indução da doença; o grupo CON recebeu solução salina estéril. Nos tempos citados as maxilas foram fixadas, descalcificadas e incluídas em parafina ou resina Spurr. Os cortes foram corados com HE, para análise morfológica, e histomorfométrica. Alguns cortes foram submetidos à imuno-histoquímica para detecção de RANKL e OPG. Foi utilizado o método TRAP, marcador de osteoclastos e microscopia eletrônica de transmissão para análise ultraestrutural. O ALN inibiu a reabsorção da crista alveolar de todos os grupos tratados. As células clásticas apresentaram-se em estado latente. No grupo controle a crista alveolar foi reabsorvida e o TRAP revelou clastos ativos, achados confirmados pela microscopia eletrônica de transmissão. A expressão de RANKL, molécula ativadora da célula clástica, não foi inibida pela droga. A expressão de OPG foi aumentada nos animais tratados. Os animais do grupo tratado durante 21 e 30 dias, apresentaram sinais de osteonecrose na crista alveolar, como lacunas de osteócitos vazias e regiões exposta de osso. Os resultados demonstraram que o uso de alendronato durante a doença periodontal inibe a reabsorção óssea e que durante tempos prolongados pode gerar osteonecrose na região da crista óssea. / Periodontitis is an infectious disease of multifactor nature that results in the inflammation of the tissues supporting the teeth. This inflammation is caused by accumulation of biofilm and causes progressive insertion and bone loss. The bisphosphonates are drugs with the capability to inhibit the activity of clastic cells. The aim of this study was to investigate the effects of alendronate, a nitrogenated bisphosphonate with high antiresorptive power on experimental periodontal disease, and to analyze the possible presence of osteonecrosis in the rat alveolar process. Forty-eight male Wistar rats, three months old, with 250g weight were used. The animals were randomly divided into two groups: Alendronate (ALN) and Control (CON). The periodontitis was induced with a 4.0 silk wire inserted into the gingival sulcus around the right upper second molar. The ALN rats, received daily doses of 2.5 mg/kg alendronate (ALN) for 7 days before the induction of periodontitis; the treatment continued for additional 7, 14, 21 or 30 days. The CON rats, received sterile saline solution. In the time points cited, the maxillae were fixed, decalcified and embedded in Spurr resin or paraffin. The specimens were morphologically analyzed in HE stained sections, after which histomorphometry was carried out. Some stained sections were used for immunolabeling for RANKL and OPG. The osteoclasts were marker by tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histochemistry. The ultrathin sections were examined in a transmission electron microscope. ALN reduced the activity of osteoclasts and significantly decreased the resorption of the alveolar crest. In the control group the alveolar crest appeared resorbed, while TRAP showed active osteoclasts, findings confirmed by transmission electron microscopy. The expression of RANKL, an osteoclast-activating molecule, was not inhibited by the drug. The expression of OPG was increased in the treated animals. The animals of the group treated for 21 and 30 days showed signs of osteonecrosis of the alveolar crest, as empty osteocyte lacunae in the exposed bone regions. The results showed that the use of ALN for periodontal disease inhibited bone resorption; when it was administered for prolonged periods it can cause osteonecrosis in the bone crest area.
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Efeito da ovariectomia sobre os tecidos periodontais após o reimplante dentário imediato : análise histomorfométrica, imunoistoquímica e micro-ct em ratas /

Marão, Heloisa Fonseca. January 2013 (has links)
Orientador: Sônia Regina Panzarini Barioni / Co-orientador: Cláudio Aparecido Casatti / Banca: Jéssica Lemos Gulinelli / Banca: Maurício Zardo / Banca: Idelmo Rangel Garcia Junior / Banca: Celso Koogi Sonoda / Resumo: Recentes investigações sugerem que a deficiência de estrógeno, contribue para alteração nos tecidos periodontais. Considerando o estudo do traumatismo dento-alveolar em indivíduos com essa condição, o objetivo do trabalho foi analisar o efeito da ovariectomia sobre os tecidos periodontais após o reimplante dentário imediato por meio da análise histomorfométrica, imunoistoquímica e micro-ct em ratas. Oitenta ratas Wistar (Rattus norvegicus, albinus) com ciclos estrais normais foram divididas aleatoriamente em dois grupos: Grupo ovariectomizadas (OVX), e Grupo Sham (grupo controle). Após 2 meses da ovariectomia, foi realizado extração dos incisivos superiores seguido de reimplante dentário imediato e os animais sofreram eutanásia aos 28, 45 e 60 dias após o reimplante. Foi realizada a análise histomorfométrica e imunoistoquímica com avaliação das proteínas PCNA, OPG, CASPASE-3, RUNX-2 e TRAP. Em todos os grupos houve reinserção do ligamento periodontal no tecido ósseo e cemento e a imunorreatividade à PCNA foi evidente em células periodontais independente do grupo Sham ou OVX. A reabsorção radicular externa esteve mais acentuada a partir dos 45 dias com células imunorreativas à TRAP presentes na superfície óssea e dentária. Todavia, uma considerável parcela também estava dispersa no ligamento periodontal em todos os grupos. Não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos para as proteínas PCNA e TRAP. Já a análise histomorfométrica revelou diferença estatisticamente significante entre os grupos nos detalhes histomorfométricos do ligamento periodontal e raíz dentária para os sub-itens de intensidade... / Abstract: Recent researchs suggest estrogen deficiency leads to changes in periodontal tissues. In order to study dental traumatology under this condition, the aim of the study was analyze the effects of ovariectomy on periodontal tissues following immediate tooth replantation through histomorphometric, immunohistochemistry and μ-ct analysis in rats. Eighty Wistar rats (Rattus norvegicus albinos) with normal estrous cycles were randomly divided into two groups (n = 20 per group): 1) Group ovariectomized (OVX), and 2) Sham group (control group). After two months, the rats were followed by extraction of upper right incisor and immediate replantation. The rats were sacrificed immediately 28, 45 and 60 days after tooth reimplantation. Histomorphometric and immunohistochemical analysis was performed by evaluation of PCNA, OPG, CASPASE-3, RUNX-2 and TRAP proteins. Periodontal ligament was reinseted in the bone and cementum and the immunohistochemical analysis revealed PCNA expression in the periodontal ligament independent of Sham or OVX group. At 45 days, the external root resorption was greater with expression of TRAP proteins in the bone and tooth surface. However, in both groups, were also dispersed in the periodontal ligament. There was no statistically significant difference between the groups for the PCNA and TRAP proteins. The histomorphometric analysis showed statistically significant difference between groups in the histomorphological details of periodontal ligament and root resorption for the sub-items: intensity of chronic inflammatory infiltrate at 60 days (p <0.01), the organization of the periodontal ligament at 45 days (p <0:05) and depth... / Doutor
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Caracterização do papel da Purina Nucleosídeo Fosforilase (PNP) nos mecanismos de regulação da atividade osteoclástica

Deves, Candida January 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423675-Texto+Parcial-0.pdf: 173088 bytes, checksum: 99755374f8de265672c0fc78a783ae8c (MD5) Previous issue date: 2010 / Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP) is a purine-metabolizing enzyme that catalyzes the reversible phosphorolysis of purine nucleosides such as (deoxy)inosine and (deoxy)guanosine (dGuo) to their respective bases and (deoxy)ribose-1- phosphate. It is a key enzyme in the purine salvage pathway of mammalian cells. Tcells rely on PNP activity to maintain its functions and are particularly sensitive to PNP deficiency. The present investigation sought to determine whether the pharmacological blockage of PNP activity with a transitIon state analog (Immucillin-H) can arrest bone loss in two models of induced periodontal disease in rats. Experimental data showed that immucillin-H inhibitted bone loss induced by ligatures and bacterial LPS, with reduced number of infiltrating osteoclasts and inflammatory cells. In vitro assays revealed that Immucillin cannot directly abrogate differentiation of osteoclast precursor cells but affects lymphocyte-mediated osteoclastogenesis. On the other hand, incubation of pre-activated T-CD4+ with Immucillin-H decreased RANKL secretion with no compromise of cell viability. Immucillin-H, an analog of the transition state of PNP activity, holds great promise as a drug in the treatment of diseases characterized by imbalances of bone metabolism. / A Purina Nucleosídeo Fosforilase (PNP) é uma enzima envolvida no metabolismo de purinas que catalisa a fosforólise reversível de nucleosídeos purínicos tais como (deoxi)inosina e (deoxi)guanosina formando suas bases purínicas correspondentes e (deoxi)ribose-1-fosfato. A PNP é considerada uma enzima chave na via de salvamento de purinas de células de mamíferos. Especificamente, células T são dependentes da atividade da PNP para manter suas funções e sensíveis a alterações da mesma. O presente estudo tem como objetivo determinar se o bloqueio farmacológico da PNP com um análogo do estado de transição da enzima (lmmucillin-H) é capaz de impedir a perda óssea em dois modelos de doença periodontal induzida em ratos. Dados experimentais mostram que o lmmucillin-H inibiu a perda óssea induzida por ligaduras e por lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano assim como reduziu o número de osteoclastos e células inflamatórias. Ensaios in vitro revelaram que o lmmucillin-H não age diretamente inibindo a diferenciação de células precursoras de osteoclastos, no entanto, afeta a osteoclastogênese mediada por linfócitos. Importante, a incubação de linfócitos T CD4+ pré-ativados e tratados com lmmucillin-H diminuiu a secreção de RANKL. Desta forma, o lmmucillin-H apresenta grandes premissas como uma droga no uso de doenças caracterizadas por alterações no metabolismo ósseo.
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Impacto de andrógenos na diferenciação e atividade de osteoclastos em cultura celular / Impact of androgens in differentiation and activity of osteoclasts in cell culture

Pitombo, Jonleno Coutinho Paiva [UNESP] 21 March 2016 (has links)
Submitted by JONLENO COUTINHO PAIVA PITOMBO null (jomtombo@hotmail.com) on 2016-05-23T15:01:17Z No. of bitstreams: 1 Jonleno Coutinho P Pitombo.pdf: 2907326 bytes, checksum: b153a02592cf15ac920e757f91e472b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-05-25T16:58:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pitombo_jcp_me_arafo.pdf: 2907326 bytes, checksum: b153a02592cf15ac920e757f91e472b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T16:58:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pitombo_jcp_me_arafo.pdf: 2907326 bytes, checksum: b153a02592cf15ac920e757f91e472b8 (MD5) Previous issue date: 2016-03-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os mecanismos de ação dos andrógenos sobre homeostase e regulação das células que participam do turnover ósseo em fêmeas ainda são pouco compreendidos. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar a participação de andrógenos na diferenciação e atividade de osteoclastos in vitro. Células totais de medula óssea de fêmur e tíbia de camundongos fêmeas foram utilizadas como fonte de células precursoras de osteoclastos, sendo cultivadas utilizando-se α-MEM suplementado e em presença de RANK-L (30ng/mL) e M-CSF (50ng/mL). As células foram tratadas com testosterona (T) diidrotestosterona (DHT) e antagonistas de receptores de hormônios sexuais, como flutamida (FLU) e fulvestranto (FUL). O anastrozol (ANA) foi usado para inibição da enzima aromatase e o etanol (0,01%) foi utilizado como controle. Após cinco dias, as células foram fixadas, coradas com TRAP e contadas, considerando-se células TRAP-positivas com 3 ou mais núcleos. Para o ensaio de atividade, foram utilizadas placas revestidas com fosfato de cálcio inorgânico e a área de reabsorção foi calculada com o auxílio de software. O estágio de diferenciação osteoclástica foi avaliado por RT-qPCR e a modulação da expressão de receptores para hormônios sexuais foi avaliada por Western Blot. Os andrógenos (T e DHT) não exerceram efeitos sobre a diferenciação e atividade de osteoclastos (ANOVA; p>0,05). Por outro lado, os tratamentos com ANA, FLU e FUL, associados ou não a T, regularam positivamente a diferenciação e atividade de osteoclastos. A expressão gênica de RANK, Catepsina K, NFATc1 e β3 integrina não foi alterada pelos tratamentos propostos (ANOVA; p>0,05). Além disso, os tratamentos com T, DHT, FLU e FUL modularam a expressão proteica do receptor de andrógeno (AR) e dos receptores de estrógeno (ERα e ERβ) por Western Blot. Tomados em conjunto, nossos resultados indicam que os andrógenos exercem limitada participação na diferenciação e atividade de osteoclastos de camundongos fêmeas e que este processo é mediado, ao menos em parte, por ações indiretas da T e pela modulação de receptores de hormônios sexuais. / The action mechanisms of androgens on homeostasis and the regulation of cells that participate in bone turnover in females are still poorly understood. This study had as main objective to evaluate the participation of androgens in the differentiation and activity of in vitro osteoclasts. Total bone marrow cells from femur and tibia of female mice were used as a source of precursor cells of osteoclasts, they were cultivated using supplemented α-MEM and in the presence of RANK-L (30ng/mL) and M-CSF (50ng/mL). The cells were treated with testosterone (T), dihydrotestosterone (DHT) and antagonists of sexual hormone receptors such as flutamide (FLU) and fulvestrant (FUL). Anastrozole (ANA) was used for inhibiting the aromatase enzyme and ethanol (0.01%) was used as a control. After five days, the cells were fixed, colored with TRAP and counted, considering TRAP-positive cells those ones containing 3 or more nuclei. For the activity assay, were used plaques covered with inorganic calcium phosphate and the area of reabsorption was calculated with the assistance of a software. The osteoclast differentiation stage was evaluated by RT-qPCR and the modulation of the expression of receptors for sexual hormones was assessed by Western Blotting. The androgens (T and DHT) did not exert effects in differentiation and activity of osteoclasts (ANOVA, p> 0.05). On the other hand, the treatments with ANA, FLU and FUL, associated or not to T, positively regulated the differentiation and activity of osteoclasts. The genic expression of RANK, Cathepsin K, NFATc1 and β3 integrin was not altered by the proposed treatments (ANOVA, p> 0.05). Moreover, the treatments with T, DHT, FLU and FUL modulated the protein expression of the androgen receptor (AR) and of the estrogen receptors (ERα and ERβ) by Western Blotting. Taken together, our results indicate that the androgens exert limited participation in differentiation and activity of osteoclasts of female mice and that this process is mediated, at least in part, by indirect actions of T and by the modulation of sexual hormone receptors. / CNPq: 133815/2014-5 / FAPESP: 2013/12014-6
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Efeitos imunomodulatórios do extrato de Allium cepa L. e da quercetina sobre a produção de mediadores inflamatórios e a osteoclastogênese in vitro

Teixeira, Tatiane de Oliveira 13 May 2015 (has links)
Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-03-31T12:23:56Z No. of bitstreams: 1 PDF Final 11.03.pdf: 6124430 bytes, checksum: 32e0beca7261414b74bb431f4d37f3f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-31T12:23:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF Final 11.03.pdf: 6124430 bytes, checksum: 32e0beca7261414b74bb431f4d37f3f0 (MD5) / FAPESB, CNPq, e CAPES / Introdução: A periodontite é uma doença inflamatória que afeta a inserção do tecido conjuntivo e do osso de suporte que rodeia os dentes. Os osteoclastos estão implicados na homeostasia do tecido ósseo em situações patológicas, como na doença periodontal. O desequilíbrio na remodelação óssea pela indução de inflamação e perda óssea mediada pelos osteoclastos pode ser desencadeado pelo LPS de P. gingivalis (PgLPS). Alguns fatores e fármacos podem restaurar a homeostase do osso, com a regulação de mediadores inflamatórios como o extrato metanólico de Allium cepa L. (AcE) e a quercetina (Qt), que têm demonstrado possuir propriedades anti-inflamatórias. Objetivos: Nossos objetivos foram analisar os efeitos imunomoduladores in vitro do AcE e da Qt na osteoclastogênese em condições inflamatórias (PgLPS-induzida). Métodos: Células precursoras de osteoclastos (RAW 264.7) foram diferenciadas com 30 ng/mL de RANKL, coestimuladas com PgLPS (1 μg/mL) e tratadas com AcE (50-1000 μg/mL) ou Qt (1,25, 2,5 ou 5 μM). Ensaios de redução da resazurina e ensaio para mensuração de proteína total foram utilizados para avaliar a viabilidade celular. Ensaio de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) foi utilizado para determinar a quantidade de p-nitrofenol libertado; e coloração de TRAP foi utilizada para avaliar o número e o tamanho dos osteoclastos multinucleados. Os níveis de citocinas foram quantificados por ELISA em sobrenadantes de cultura celular. Utilizando-se ensaios de Western blot, foi avaliada a fosforilação e a degradação do IκBα. Resultados: Foram determinadas concentrações não citotóxicas de AcE e de Qt em culturas celulares. A osteoclastogênese foi modulada negativamente nas concentrações testadas de AcE e de Qt em comparação com o controle. Todas as concentrações de AcE e de Qt diminuíram significativamente o número de osteoclastos grandes, presumivelmente mais ativos, e as concentrações de AcE a 1000 μg/mL μM reduziram o número de osteoclastos pequenos. Observou-se um decréscimo da produção de IL-6 e IL-1α e um aumento da produção de IL-3 e IL-4. Além disso, tanto o AcE quanto a Qt regularam negativamente a via do NF-κB. Conclusão: Esses resultados sugerem que o AcE e a Qt podem ser inibidores de osteoclastogênese em condições inflamatórias, por meio da diminuição da ativação da via do NF-κB induzida por PgLPS e RANKL. Mais estudos são necessários para apoiar o uso do AcE e da Qt para tratar doenças que envolvam perda óssea patológica, incluindo-se a periodontite. / Introduction: Periodontitis is an inflammatory disease that affects connective tissue attachment and the supporting bone that surrounds the teeth. Osteoclasts are implicated in normal bone remodeling and bone loss. P. gingivalis LPS (PgLPS) can cause an imbalance in the remodeling by inducing inflammation and osteoclast-mediated bone loss. Allium cepa L. (AcE) and quercetin (Qt) have been shown to possess anti-inflammatory properties. Objectives: Our aims were to examine the in vitro modulatory effects of AcE and Qt on osteoclastogenesis under inflammatory conditions (LPS-induced). Methods: RAW 264.7 cells were differentiated with 30ng/mL of RANKL, co-stimulated with PgLPS (1μg/mL) and treated with AcE (50-1000 μg/mL) or Qt (1.25, 2.5 or 5 μM). Resazurin reduction and total protein content assays were used to detect cell viability. Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) assays were used to determine the amount of released p-nitrophenol that indicates the degree of differentiation in RANKL-stimulated cells; and TRAP staining was used to evaluate the number and size of TRAP-positive multinucleated osteoclast cells. Cytokine levels were measured using ELISA on osteoclast precursor cell culture supernatants. Using western blot analysis IκBα phosphorylation and IκBα degradation were evaluated. Results: Both AcE and Qt did not affect cell viability. Osteoclastogenesis was significantly affected by AcE and Qt when compared to control. Small (less active) osteoclast counts were decreased by AcE (1000 μg/mL) and Qt (2.5 and 5 μM), while all concentrations of AcE and Qt significantly decreased the number of large and presumably active osteoclasts. We observed lower production of IL-6 and IL-1α and an increased production of IL-3 and IL-4. Also both AcE and Qt downregulated NF-κB pathway. Conclusion: These findings suggest that AcE and Qt may be inhibitors of osteoclastogenesis under inflammatory conditions (LPS-induced) via attenuation of RANKL/ PgLPS-induced NF-κB activation. Further studies are needed in other to support the use of AcE and Qt to treat diseases involving pathological bone loss including periodontitis.
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Estudo da ação local do risendronato de sódio na periodontite experimental induzida em ratas

Perrella, Fernando Augusto [UNESP] 05 July 2011 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-05Bitstream added on 2014-06-13T20:44:51Z : No. of bitstreams: 1 perrella_fa_dr_sjc.pdf: 2692484 bytes, checksum: 5297a6084221ad4ddcef147cf5f213aa (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do uso local de uma solução aquosa de risendronato de sódio (RS) em diferentes concentrações na inibição da perda óssea alveolar decorrente de periodontite experimental induzida em ratas. Os 48 animais foram divididos em 2 grupos constituídos por 24 animais: GD (dupla aplicação) e GU (única aplicação). Os dois grupos foram subdivididos em 8 subgrupos: R1 (duas aplicações de 0,125 mg de RS), R2 (duas aplicações de 0,25 mg de RS), R3 (duas aplicações de 0,5 mg de RS) e A1 (duas aplicações de água destilada); R4 (uma aplicação de 0,125 mg de RS), R5 (uma aplicação de 0,25 mg de RS), R6 (uma aplicação de 0,5 mg de RS) e A2 (uma aplicação de água destilada). Foi induzida a periodontite pela confecção de ligaduras ao redor dos primeiros molares inferiores direitos em todos os animais. Nos grupos A1 e A2, os molares contralaterais serviram de controles negativos (C1 e C2). A medicação foi aplicada aos 5 e 10 dias após indução da periodontite nos animais do GD, e nos animais do GU apenas aos 10 dias. Decorrente 15 dias os animais foram submetidos à eutanásia. Foram feitas análises histológica, histomorfométrica, imuno-histoquímica anti-osteocalcina e enzimo-histoquímica para TRAP (fosfatase ácida tartarato resistente). Os grupos que receberam RS exibiram maior volume trabecular da crista óssea remanescente que o controle significante estatísticamente, mas não foram observados diferenças entre os grupos tratados. A perda óssea alveolar foi menor nos grupos tratados com risendronato comparado com controle e foi dose-dependente. Os grupos que receberam a menor dose (R1 e R4) apresentaram menor perda óssea estatisticamente... / The aim of this study was to evaluate the local use of an aqueous solution of sodium risendronate (RS) at different concentrations on the inhibition of alveolar bone loss caused by experimental periodontitis induced in rats. The 48 animals were divided into two groups consisting of 24 animals: GD (double application) and GU (one application). The two groups were subdivided into eight subgroups: A1 (two applications of 0.125 mg RS), R2 (two applications of 0.25 mg RS), R3 (two applications of 0.5 mg RS) and A1 (two applications of distilled water), and R4 (one application of 0.125 mg RS), R5 (one application of 0.25 mg RS), R6 (one application of 0.5 mg RS) and A2 (one applications with distilled water). Periodontitis was induced in first molars in all animals. In groups A1 and A2, the contralateral molars served as controls (C1 and C2). The medication was applied at 5 and 10 days after induction of periodontitis in animals of GD, and animals of GU only after 10 days. After 15 days the animals were euthanized. Analysis was performed on histological, histomorphometric, immunohistochemical antiosteocalcin and enzimohistochemical for TRAP (tartrate resistant acid phosphatase). The groups that received RS exhibited greater volume of trabecular bone crest that controlling statistically significant, but no differences were observed between treated groups. The alveolar bone loss was lower in treated groups compared with placebo and was dose-dependent. The groups that received the lowest dose (R1 and R4) showed statistically significant less bone loss than the intermediate dose (R2 and R5), which in turn exhibited lower rates compared with higher doses (R3 and R6). The two types of approaches, however, did not show statistical significance. The number of TRAP-positive cells was... (Complete abstract click electronic access below)
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Efeito da ovariectomia sobre os tecidos periodontais após o reimplante dentário imediato: análise histomorfométrica, imunoistoquímica e micro-ct em ratas

Marão, Heloisa Fonseca [UNESP] 13 September 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-13Bitstream added on 2014-08-27T15:57:09Z : No. of bitstreams: 1 000750428.pdf: 3561830 bytes, checksum: fc7aef2e36f774b1718408ccdc2728e5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Recentes investigações sugerem que a deficiência de estrógeno, contribue para alteração nos tecidos periodontais. Considerando o estudo do traumatismo dento-alveolar em indivíduos com essa condição, o objetivo do trabalho foi analisar o efeito da ovariectomia sobre os tecidos periodontais após o reimplante dentário imediato por meio da análise histomorfométrica, imunoistoquímica e micro-ct em ratas. Oitenta ratas Wistar (Rattus norvegicus, albinus) com ciclos estrais normais foram divididas aleatoriamente em dois grupos: Grupo ovariectomizadas (OVX), e Grupo Sham (grupo controle). Após 2 meses da ovariectomia, foi realizado extração dos incisivos superiores seguido de reimplante dentário imediato e os animais sofreram eutanásia aos 28, 45 e 60 dias após o reimplante. Foi realizada a análise histomorfométrica e imunoistoquímica com avaliação das proteínas PCNA, OPG, CASPASE-3, RUNX-2 e TRAP. Em todos os grupos houve reinserção do ligamento periodontal no tecido ósseo e cemento e a imunorreatividade à PCNA foi evidente em células periodontais independente do grupo Sham ou OVX. A reabsorção radicular externa esteve mais acentuada a partir dos 45 dias com células imunorreativas à TRAP presentes na superfície óssea e dentária. Todavia, uma considerável parcela também estava dispersa no ligamento periodontal em todos os grupos. Não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos para as proteínas PCNA e TRAP. Já a análise histomorfométrica revelou diferença estatisticamente significante entre os grupos nos detalhes histomorfométricos do ligamento periodontal e raíz dentária para os sub-itens de intensidade... / Recent researchs suggest estrogen deficiency leads to changes in periodontal tissues. In order to study dental traumatology under this condition, the aim of the study was analyze the effects of ovariectomy on periodontal tissues following immediate tooth replantation through histomorphometric, immunohistochemistry and ?-ct analysis in rats. Eighty Wistar rats (Rattus norvegicus albinos) with normal estrous cycles were randomly divided into two groups (n = 20 per group): 1) Group ovariectomized (OVX), and 2) Sham group (control group). After two months, the rats were followed by extraction of upper right incisor and immediate replantation. The rats were sacrificed immediately 28, 45 and 60 days after tooth reimplantation. Histomorphometric and immunohistochemical analysis was performed by evaluation of PCNA, OPG, CASPASE-3, RUNX-2 and TRAP proteins. Periodontal ligament was reinseted in the bone and cementum and the immunohistochemical analysis revealed PCNA expression in the periodontal ligament independent of Sham or OVX group. At 45 days, the external root resorption was greater with expression of TRAP proteins in the bone and tooth surface. However, in both groups, were also dispersed in the periodontal ligament. There was no statistically significant difference between the groups for the PCNA and TRAP proteins. The histomorphometric analysis showed statistically significant difference between groups in the histomorphological details of periodontal ligament and root resorption for the sub-items: intensity of chronic inflammatory infiltrate at 60 days (p <0.01), the organization of the periodontal ligament at 45 days (p <0:05) and depth... / FAPESP: 10/12593-8 / FAPESP: 12/08254-98
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Efeito da administração intermitente do PTH (1-34) na periodontite experimental em ratas expostas à fumaça de cigarros / Effect of Intermitent Administration PTH (1-34) on periodontitis in rats exposed to cigarette smoking inhalation

Cayana, Ezymar Gomes 16 August 2018 (has links)
Orientadores: Enilson Antônio Sallum, João Baptista César Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cayana_EzymarGomes_D.pdf: 2999544 bytes, checksum: 87318d3714c0dada68775562aa703c38 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar histológica e histoquimicamente a influência da inalação da fumaça de cigarros (IFC) e da administração intermitente de PTH 1-34 sobre a perda óssea alveolar na região de furca em ratas submetidas a periodontite experimental induzida por meio de ligaduras. Animais foram aleatoriamente distribuídos nos grupos: 1 - placebo (veículo) controle (n=11); 2- IFC + placebo (n=15); 3- PTH 1-34 (n=10); 4 - IFC + PTH 1-34 (n=15). Dentes controlaterais, não receberam ligaduras e serviram como controle. Após 60 dias com ligaduras, os animais foram sacrificados. A avaliação histométrica foi realizada quantificando a área de perda óssea na região da bifurcação e a análise histoquímica por meio de reação de fosfatase ácida tártarato resistente (TRAP). Os dados coletados foram analisados estatisticamente utilizando a análise de variância ANOVA e o teste Tukey (=5%). Nos dentes com ligaduras, uma análise intergrupo revelou aumento estatisticamente significante da perda óssea como resultado do modelo de periodontite induzida quando o grupo 2 foi comparado com os grupos 1, 3 e 4 respectivamente (p<0,05). O número de células marcadas positivamente pelo TRAP na superfície linear da crista óssea demonstrou um aumento significativo no número de osteoclastos para o grupo 2 quando comparado com os grupos 1, 3 e 4, respectivamente (P<0,05). Dentro dos limites do presente estudo, pode-se concluir que o PTH 1-34 na ausência ou presença de IFC pode reduzir significativamente a perda óssea resultante da periodontite experimental induzida por ligaduras / Abstract: The aim of the present investigation was to histologically and histoquimically evaluate, in an animal model (rats), the influence of cigarette smoke inhalation (CSI) and intermittent administration of PTH in rodents would block the alveolar bone loss when a ligature-induced periodontitis is used. Animals were randomly assigned in groups: 1 - placebo (vehicle) Control-ligated (n=11); 2 - CSI + placebo- ligated (n=15); 3 - PTH-treated ligated (n=10); 4 - CSI + PTH-treated ligated (n=15). Contralateral teeth were unligated to serve as controls. After 60 days with ligatures, the animals were killed. The histometric avaluete determined the area between the bone crest and cementum surface in the furcation regions of teeth and the number of cells positive for tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP). The date were statistically analysed using ANOVA and Tukey's test (alpha=5%). At the ligated sites, intergroup analysis revealed significantly increased the bone loss resulting from ligature-induced periodontitis when group 2 compared with group 1, 3 and 4, respectively (P<0,05). The number of TRAP-Positive cell in the linear surface of the bone crest showed an increase for the group 2 compared with the group 1, 3 and 4, respectively (P<0,05). Whithin the limits of the present study, it can be concluded that PTH in the absence or presence of CSI may be minimize significantly the bone resorption associated with periodontitis / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica
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Analise da farmacocinetica e dos indices PK/PD da doxiciclina no plasma, fluido gengival e saliva e avaliação de seu efeito sobre a osteoclastogenese mediada por RANKL / Analysis of pharmacokinetics and PK/PD indices of doxycycline in plasma, gingival crevicular fluid and saliva and evaluation of its effect on the osteoclastogenesis RANKL-mediated.

Franco, Gilson Cesar Nobre 30 January 2007 (has links)
Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Francisco Carlos Groppo, Toshihisa Kawai / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T05:44:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franco_GilsonCesarNobre_D.pdf: 2005090 bytes, checksum: e5ea5ec57b82c8e2fa17e200ad139928 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Doxiciclina (Dox) é um antimicrobiano pertencente à família das tetraciclinas com um amplo espectro de ação contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Além de suas propriedades antimicrobianas, Dox é atualmente empregada na periodontia como um modulador da resposta do hospedeiro (MRH), ao inibir a atividade da enzima metaloproteinase de matriz (MMP), a qual está relacionada ao processo de destruição tecidual. Neste contexto, este trabalho teve os seguintes objetivos: 1-determinar os parâmetros farmacocinéticos e integrar os índices PK/PD da Dox para o plasma, fluido gengival (FG) e saliva; 2-analisar os efeitos in vitro e in vivo da Dox sobre a osteoclastogênese com a finalidade de elucidar possíveis propriedades biológicas adicionais deste fármaco como MRH. Para a análise farmacocinética, 12 voluntários receberam dose oral única de 100 mg de Dox. Sangue, FG e saliva foram coletados em tempos pré-determinados e a concentração da Dox nestes fluidos foi determinada por bioensaio. A análise dos principais índices PK/PD da Dox foi realizada considerando o CIM para P. gingivalis. Para o segundo objetivo, o efeito da Dox sobre os processos de diferenciação e ativação osteoclástica foi verificado, respectivamente, pela contagem de células TRAP+ multinucleadas geradas a partir de células precursoras estimuladas com sRANKL na presença ou ausência de Dox e pela análise das lacunas de reabsorção formadas por estas células, quando cultivadas sobre discos de dentina. In vivo, o efeito da Dox sobre a osteoclastogênese foi determinado através da indução deste processo em calvária de camundongo. Solução de sRANKL/LPS foi injetada na região da calvária e os animais receberam, por gavagem, Dox ou placebo diariamente. Após 10 dias, a calvária foi removida para análise histoquímica. Em acréscimo, a atividade da Dox sobre a expressão de genes responsáveis pelos processos de diferenciação e ativação osteoclástica foi analisada por RT-PCR. Durante os experimentos in vitro e in vivo, a produção e atividade da MMP foram verificadas através de Western-blot e Zimograma respectivamente. Os resultados demonstraram que as maiores concentrações de Dox foram observadas no plasma, seguido pelo FG e saliva. A análise dos índices PK/PD da Dox indicou que a dose de 100 mg foi insuficiente para se obter os valores ideais antimicrobianos preconizados na /CIM. Os experimentos in vitro e in vivo sobre o efeito da Dox como MRH demonstraram que este fármaco inibiu os processos de diferenciação e ativação dos osteoclastos. Dox também modulou a expressão de proteínas diretamente relacionadas a osteoclastogênese, incluindo TRAP, Catepsina K e c-Myc. Finalmente, embora a síntese da MMP não tenha sido afetada, a atividade da MMP foi reduzida na presença de Dox. Portanto, os resultados do presente estudo sugerem que uma dose inicial maior do que 100 mg é necessária para alcançar o valor preconizado para ASC/CIM e Cmax/CIM, com a finalidade de se obter os melhores resultados clínicos antimicrobianos. A análise da Dox como MRH indicou que este fármaco pode atuar neste processo não somente pela sua capacidade de inativar a MMP, e sim, por apresentar a propriedade de inibir a diferenciação e ativação osteoclástica, incluindo a modulação de sua expressão gênica. literatura para os parâmetros ASC/CIM e Cmax / Abstract: Doxycycline (Dox), a member of the tetracycline family, is an antimicrobial agent with a broad-spectrum of activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria. In addition to its antimicrobial properties, Dox is used in the treatment of periodontal diseases as a host response modulator by inhibiting the activity of an important enzyme, matrix metalloproteinase (MMP), which is related to the process of tissue destruction. In this context, this study had the following aims: 1-to determine the pharmacokinetic parameters of Dox and to integrate the PK/PD indices for plasma, gingival crevicular fluid (GCF) and saliva; 2-to analyze the effects in vitro and in vivo of Dox on the osteoclastogenesis and on the osteoclast activation in order to elucidate additional biological properties of Dox on the host response modulation (HRM). Twelve volunteers received single oral administration of Dox (100 mg). Blood, GCF and saliva were collected and the concentrations were measured by bioassay technique. The PK/PD analyses were carried out using the MIC for P. gingivalis. For the second objective, the effect of Dox on the osteoclast differentiation and activation processes was determined, respectively, by the counting of TRAP+ multinuclear cells derived from osteoclast precursory cells sRANKL-stimulated in the presence or absence of Dox and by the analysis of the resorption areas formed by these cells when cultured on dentin discs. In vivo, Dox¿s effect on the osteoclastogenesis was verified using the model of osteoclastogenesis induction in mouse calvaria. sRANKL/LPS was injected in the supra-calvaria area and the animals received Dox or placebo daily by gavage. After the experimental period of 10 days, the calvariae were removed for histochemistry analyses. In addition, the effect of Dox on the expression of genes related to the osteoclast differentiation and activation processes was carried out using RT-PCR technique. MMP production and activity were ensured during in vitro and in vivo experiments by Western-blot and Zymography, respectively. The results demonstrated that Dox achieved the highest concentration in the plasma, following by GCF and saliva. PK/PD analyses showed that the dose of 100 mg was insufficient to get the antimicrobial levels indicated in the literature for AUC/MIC and Cmax/MIC indices. In vitro and in vivo studies of Dox¿s effects on the HRM demonstrated that this drug could inhibit the osteoclast differentiation and activation process. Dox also showed an important property of down-regulation in the expression of proteins directly related to osteoclastogenesis, including TRAP, Cathepsin K and c-Myc. Finally, although Dox did not affect the expression of MMP protein, MMP activity was remarkably decreased by Dox. Therefore, the present study suggests that higher doses than 100 mg would be necessary to obtain effective antimicrobial levels and the effect of DOX on the HRM can be due to not only by MMP inhibition but also by the direct effect on RANKL-mediated osteoclast differentiation and activation, including its gene regulation / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia
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Efeito do alendronato sódico sobre a atividade clástica na periodontite experimental em ratos / Effect of alendronate on the clastic activity in induced periodontitis in rats

Mariana Matheus Moreira 15 July 2014 (has links)
A periodontite é uma doença de natureza multifatorial e infecciosa, que resulta na inflamação e perda dos tecidos de suporte dos dentes. Essa inflamação é causada por bactérias associadas ao biofilme, causando a perda progressiva de inserção. Os bisfosfonatos são fármacos com capacidade de inibir a reabsorção óssea, atuando nas células clásticas. O presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos do alendronato, um bisfosfonato nitrogenado com grande potência antireabsortiva, na evolução da doença periodontal induzida em ratos, bem como a possível presença de necrose óssea no processo alveolar. Foram utilizados 48 ratos Wistar albinos, do sexo masculino, com 3 meses de vida e peso médio de 250g. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: Alendronato (ALN) e Controle (CON). A periodontite foi induzida com a inserção de um fio de seda 4.0 no sulco gengival do segundo molar superior. Os ratos do grupo ALN, receberam doses diárias de 2,5 mg/kg durante 7 dias antes e 7, 14, 21 e 30 dias após a indução da doença; o grupo CON recebeu solução salina estéril. Nos tempos citados as maxilas foram fixadas, descalcificadas e incluídas em parafina ou resina Spurr. Os cortes foram corados com HE, para análise morfológica, e histomorfométrica. Alguns cortes foram submetidos à imuno-histoquímica para detecção de RANKL e OPG. Foi utilizado o método TRAP, marcador de osteoclastos e microscopia eletrônica de transmissão para análise ultraestrutural. O ALN inibiu a reabsorção da crista alveolar de todos os grupos tratados. As células clásticas apresentaram-se em estado latente. No grupo controle a crista alveolar foi reabsorvida e o TRAP revelou clastos ativos, achados confirmados pela microscopia eletrônica de transmissão. A expressão de RANKL, molécula ativadora da célula clástica, não foi inibida pela droga. A expressão de OPG foi aumentada nos animais tratados. Os animais do grupo tratado durante 21 e 30 dias, apresentaram sinais de osteonecrose na crista alveolar, como lacunas de osteócitos vazias e regiões exposta de osso. Os resultados demonstraram que o uso de alendronato durante a doença periodontal inibe a reabsorção óssea e que durante tempos prolongados pode gerar osteonecrose na região da crista óssea. / Periodontitis is an infectious disease of multifactor nature that results in the inflammation of the tissues supporting the teeth. This inflammation is caused by accumulation of biofilm and causes progressive insertion and bone loss. The bisphosphonates are drugs with the capability to inhibit the activity of clastic cells. The aim of this study was to investigate the effects of alendronate, a nitrogenated bisphosphonate with high antiresorptive power on experimental periodontal disease, and to analyze the possible presence of osteonecrosis in the rat alveolar process. Forty-eight male Wistar rats, three months old, with 250g weight were used. The animals were randomly divided into two groups: Alendronate (ALN) and Control (CON). The periodontitis was induced with a 4.0 silk wire inserted into the gingival sulcus around the right upper second molar. The ALN rats, received daily doses of 2.5 mg/kg alendronate (ALN) for 7 days before the induction of periodontitis; the treatment continued for additional 7, 14, 21 or 30 days. The CON rats, received sterile saline solution. In the time points cited, the maxillae were fixed, decalcified and embedded in Spurr resin or paraffin. The specimens were morphologically analyzed in HE stained sections, after which histomorphometry was carried out. Some stained sections were used for immunolabeling for RANKL and OPG. The osteoclasts were marker by tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histochemistry. The ultrathin sections were examined in a transmission electron microscope. ALN reduced the activity of osteoclasts and significantly decreased the resorption of the alveolar crest. In the control group the alveolar crest appeared resorbed, while TRAP showed active osteoclasts, findings confirmed by transmission electron microscopy. The expression of RANKL, an osteoclast-activating molecule, was not inhibited by the drug. The expression of OPG was increased in the treated animals. The animals of the group treated for 21 and 30 days showed signs of osteonecrosis of the alveolar crest, as empty osteocyte lacunae in the exposed bone regions. The results showed that the use of ALN for periodontal disease inhibited bone resorption; when it was administered for prolonged periods it can cause osteonecrosis in the bone crest area.

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