O estudo fitoquímico das folhas de Ocotea catharinensis (Lauraceae) resultou no isolamento da neolignana tetraidrofurânica veraguensina (1) e do flavonóide glicosilado afzelina (10), ainda não descritas para a espécie, além de quatro neolignanas hexaidrobenzofurânicas (2-5) anteriormente descritas para mesma. Nos embriões somáticos in vitro constatou-se o acúmulo de duas neolignanas hexaidrobenzofurânicas (2, 3) e duas biciclo[3.2.1]octânicas (6, 7), dois sesquiterpenos (8, 9) e um fenilpropanóide (11). A neolignana biciclo[3.2.1]octânica (7S,8R,1\'R,2\'R,3\'R)-2\'-acetoxi-3,4-metilenodioxi-3\',5\'-dimetoxi-4\'-oxo-Δ1,3,5,5\',8\'-8.1\',7.3\'-neolignana (7), o sesquiterpeno (-)-eudesm-11-em-4α-ol (9) e o fenilpropanóide 6-metóxieugenol (11) não haviam sido isolados anteriormente desta espécie. O perfil dos metabólitos secundários incluiram análises do óleo essencial das folhas cuja análise indicou a predominância de mono- e sesquiterpenos e ausência de fenilpropanóides. Além disso, foram avaliadas atividades antifúngica e antioxidante nos extratos e substâncias isoladas. A fração de CHCl3 do extrato etanólico mostrou atividade antifúngica contra Cladosporium cladosporioide ou C. sphaerospermum. As frações de CHCl3 e de AcOEt do extrato etanólico, as neolignanas hexaidrobenzofurânica (5), biciclooctânica (6), o flavonóide glicosilado (10) e o fenilpropanóide (11) apresentaram atividade antioxidante através do método de DPPH (1,1-difenil-2-picril-hidrazila). A avaliação de hipóteses biossintéticas envolvidas na formação de neolignanas em O. catharinensis fizeram uso de culturas embriogênicas como modelo experimental. Foram realizados diversos estudos de bioconversões de precursores como o isoeugenol e 5-metoxieugenol utilizando-se suspensões celulares e frações enzimáticas porém as conversões in vivo utilizando-se precursores marcados e os embriões foram melhor sucedidas. Entre os precursores radioativos, a L-[U-14C]-fenilalanina foi incorporada às neolignanas hexaidrobenzofurânicas (2, 0,30% e 3, 0,19%) e biciclooctânica (6, 0,12%). No caso do ácido [8-14C]-ferúlico, esse foi incorporado à neolignana hexaidrobenzofurânica (2, 0,17%). Por outro lado, o uso de L-[1-13C]-fenilalanina e análise por espectrometria de massas-massas confirmou o enriquecimento de 13C nas neolignanas hexaidrobenzofurânicas (2 e 3). A análise por RMN de 13C indicou o enriquecimento de 4,3 e 5,0% nos carbonos C9 e C9\', respectivamente. Desta maneira, através dos dados de incorporação desses precursores, desvenda-se parte da via biossintética de neolignanas em O. catharinensis. / The phytochemical study of Ocotea catharinensis (Lauraceae) leaves resulted in the isolation of tetrahydrofuran neolignan veraguensin (1) and glycosylated flavonoid afzelin (10), not yet described for this species, besides four hexahydrobenzofuran neolignans (2-5), which had been previously described. The in vitro somatic embryos showed the accumulation of two hexahydrobenzofuran (2, 3) and two bicyclo[3,2,1]octane (6, 7) neolignans, two sesquiterpenes (8, 9) and one phenylpropanoid (11). Among these compounds (7S,8R,1\'R,2\'R,3\'R)-2\'-acetoxy-3,4-methylenedioxy-3\',5\'-dimethoxy-4\'-oxo-Δ1,3,5,5\',8\'-8.1\',7.3\'-neolignan (7), (-)-eudesm-11-en-4α-ol (9) and 6-methoxy-eugenol (11) have not been previously described for this species. The profile of secondary metabolite included the analysis of essential oil of leaves which indicated the predominance of mono- and sesquiterpene and no phenylpropanoids. In addition, antifungal and antioxidative activities were performed with extracts and isolated compounds. The CHCl3 fraction of ethanol extract exhibited antifungal activities against Cladosporium cladosporioide or C. sphaerospermum. The CHCl3 and EtOAc fractions of ethanol extract, the hexahydrobenzofuran (5) and a bicyclo[3.2.1]octane (6) neolignans, afzelin (10) and 6-methoxy-eugenol (11) displayed antioxidant activities using DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl). The evaluations of biosynthetic hypothesis for neolignan formation in O. catharinensis were based on the use of embriogenic culture as an experimental model. Several assessment for conversion of putative precursors such as eugenol and 5-methoxyeugenol were evaluated using suspension cells and cell free preparations but none of them were as effective as in vivo conversion using labeled precursors directly in embryos. Among the radioactive precursors L-[U-14C]-phenylalanine was incorporated to hexahydrobenzofuran (2, 0.30%; 3, 0.19%) and bicyclo[3.2.1]octane (6, 0.17%) neolignans while [8-14C]-ferulic acid was incorporated only to the hexahydrobenzofuran neolignan (2, 0,17%). The tandem mass spectrometry analysis confirmed the incorporation of 13C atoms in the neolignans (2, 3) indicating the incorporation of one or two molecules of L-[1-13C]-phenylalanine. The analysis of 13C NMR data revealed the enrichment of 4.3 and 5.0% at the positions C9 and C9\', respectively. In summary, the labeling experiments have contributed to unravel the biosynthesis of neolignans in O. catharinensis.

O estudo fitoquímico das folhas de Ocotea catharinensis (Lauraceae) resultou no isolamento da neolignana tetraidrofurânica veraguensina (1) e do flavonóide glicosilado afzelina (10), ainda não descritas para a espécie, além de quatro neolignanas hexaidrobenzofurânicas (2-5) anteriormente descritas para mesma. Nos embriões somáticos in vitro constatou-se o acúmulo de duas neolignanas hexaidrobenzofurânicas (2, 3) e duas biciclo[3.2.1]octânicas (6, 7), dois sesquiterpenos (8, 9) e um fenilpropanóide (11). A neolignana biciclo[3.2.1]octânica (7S,8R,1\'R,2\'R,3\'R)-2\'-acetoxi-3,4-metilenodioxi-3\',5\'-dimetoxi-4\'-oxo-Δ1,3,5,5\',8\'-8.1\',7.3\'-neolignana (7), o sesquiterpeno (-)-eudesm-11-em-4α-ol (9) e o fenilpropanóide 6-metóxieugenol (11) não haviam sido isolados anteriormente desta espécie. O perfil dos metabólitos secundários incluiram análises do óleo essencial das folhas cuja análise indicou a predominância de mono- e sesquiterpenos e ausência de fenilpropanóides. Além disso, foram avaliadas atividades antifúngica e antioxidante nos extratos e substâncias isoladas. A fração de CHCl3 do extrato etanólico mostrou atividade antifúngica contra Cladosporium cladosporioide ou C. sphaerospermum. As frações de CHCl3 e de AcOEt do extrato etanólico, as neolignanas hexaidrobenzofurânica (5), biciclooctânica (6), o flavonóide glicosilado (10) e o fenilpropanóide (11) apresentaram atividade antioxidante através do método de DPPH (1,1-difenil-2-picril-hidrazila). A avaliação de hipóteses biossintéticas envolvidas na formação de neolignanas em O. catharinensis fizeram uso de culturas embriogênicas como modelo experimental. Foram realizados diversos estudos de bioconversões de precursores como o isoeugenol e 5-metoxieugenol utilizando-se suspensões celulares e frações enzimáticas porém as conversões in vivo utilizando-se precursores marcados e os embriões foram melhor sucedidas. Entre os precursores radioativos, a L-[U-14C]-fenilalanina foi incorporada às neolignanas hexaidrobenzofurânicas (2, 0,30% e 3, 0,19%) e biciclooctânica (6, 0,12%). No caso do ácido [8-14C]-ferúlico, esse foi incorporado à neolignana hexaidrobenzofurânica (2, 0,17%). Por outro lado, o uso de L-[1-13C]-fenilalanina e análise por espectrometria de massas-massas confirmou o enriquecimento de 13C nas neolignanas hexaidrobenzofurânicas (2 e 3). A análise por RMN de 13C indicou o enriquecimento de 4,3 e 5,0% nos carbonos C9 e C9\', respectivamente. Desta maneira, através dos dados de incorporação desses precursores, desvenda-se parte da via biossintética de neolignanas em O. catharinensis. / The phytochemical study of Ocotea catharinensis (Lauraceae) leaves resulted in the isolation of tetrahydrofuran neolignan veraguensin (1) and glycosylated flavonoid afzelin (10), not yet described for this species, besides four hexahydrobenzofuran neolignans (2-5), which had been previously described. The in vitro somatic embryos showed the accumulation of two hexahydrobenzofuran (2, 3) and two bicyclo[3,2,1]octane (6, 7) neolignans, two sesquiterpenes (8, 9) and one phenylpropanoid (11). Among these compounds (7S,8R,1\'R,2\'R,3\'R)-2\'-acetoxy-3,4-methylenedioxy-3\',5\'-dimethoxy-4\'-oxo-Δ1,3,5,5\',8\'-8.1\',7.3\'-neolignan (7), (-)-eudesm-11-en-4α-ol (9) and 6-methoxy-eugenol (11) have not been previously described for this species. The profile of secondary metabolite included the analysis of essential oil of leaves which indicated the predominance of mono- and sesquiterpene and no phenylpropanoids. In addition, antifungal and antioxidative activities were performed with extracts and isolated compounds. The CHCl3 fraction of ethanol extract exhibited antifungal activities against Cladosporium cladosporioide or C. sphaerospermum. The CHCl3 and EtOAc fractions of ethanol extract, the hexahydrobenzofuran (5) and a bicyclo[3.2.1]octane (6) neolignans, afzelin (10) and 6-methoxy-eugenol (11) displayed antioxidant activities using DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl). The evaluations of biosynthetic hypothesis for neolignan formation in O. catharinensis were based on the use of embriogenic culture as an experimental model. Several assessment for conversion of putative precursors such as eugenol and 5-methoxyeugenol were evaluated using suspension cells and cell free preparations but none of them were as effective as in vivo conversion using labeled precursors directly in embryos. Among the radioactive precursors L-[U-14C]-phenylalanine was incorporated to hexahydrobenzofuran (2, 0.30%; 3, 0.19%) and bicyclo[3.2.1]octane (6, 0.17%) neolignans while [8-14C]-ferulic acid was incorporated only to the hexahydrobenzofuran neolignan (2, 0,17%). The tandem mass spectrometry analysis confirmed the incorporation of 13C atoms in the neolignans (2, 3) indicating the incorporation of one or two molecules of L-[1-13C]-phenylalanine. The analysis of 13C NMR data revealed the enrichment of 4.3 and 5.0% at the positions C9 and C9\', respectively. In summary, the labeling experiments have contributed to unravel the biosynthesis of neolignans in O. catharinensis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais / Made available in DSpace on 2012-10-23T06:53:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 266107.pdf: 579318 bytes, checksum: 42ade42726704b351dddf7c7c7ff48fa (MD5) / A Ocotea porosa (Nees et Martius ex Nees) Angely (Lauraceae), conhecida popularmente como imbuia, é a espécie arbórea símbolo do estado de Santa Catarina, (Lei Estadual n.4.984/1983). É uma árvore que comumente atinge 15 a 20 metros de altura com diâmetro a altura do peito (DAP) entre 50 a 150 cm. Ocorre em áreas de tipologia florestal típica da Floresta Ombrófila Mista (FOM). Pela sua durabilidade e pela beleza de sua madeira foi uma das espécies mais procuradas pela indústria, principalmente para a fabricação de móveis finos. Devido a essa intensa procura e à drástica redução da área da FOM, a imbuia passou a constar da Lista Oficial de Espécies da Flora Brasileira Ameaçadas de Extinção (Resolução 37/IBAMA/1993), na categoria Vulnerável. Assim, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar aspectos da auto-ecologia de uma população de Ocotea porosa no Planalto Norte do Estado de Santa Catarina, visando gerar informações para definição de estratégias efetivas de conservação da espécie. Para isso foi utilizada uma parcela de 5,1 ha na Reserva Genética Florestal de Caçador (Caçador-SC). Foi realizado um levantamento demográfico dos indivíduos adultos em toda a área da parcela e dos indivíduos jovens em três subparcelas de 50 m x 50 m. Foram coletadas amostras foliares de todos os indivíduos adultos presentes na área e de todos os indivíduos jovens presentes em uma das sub-parcelas, visando a caracterização genética (14 locos alozímicos) dos mesmos. Durante 15 meses foi realizada a caracterização da fenologia reprodutiva da espécie, baseada na observação de 36 indivíduos. Em relação à demografia, a espécie apresentou um padrão de distribuição em "J-invertido" para os indivíduos até cerca de 2,5 m e uma distribuição tendendo a normal para os indivíduos adultos, sendo observada uma descontinuidade na regeneração. O padrão de distribuição espacial da espécie tende a ser agregado, principalmente quando os indivíduos são jovens, o que pode ser decorrência de dispersão restrita. Também em decorrência de dispersão restrita e polinização a curta distância a espécie apresentou autocorrelação genética espacial positiva a curtas distâncias, indicando estruturação familiar. Os indivíduos de O. porosa presentes na parcela apresentaram altos índices de diversidade e elevada endogamia. A espécie aparentemente apresenta autocompatibilidade, o que, aliado a estrutura familiar, ajuda a explicar os altos índices de endogamia. Para a efetiva conservação de populações de O. porosa são necessárias áreas grandes capazes de comportar várias demes, populações de vetores de fluxo gênico e apresentar vários micro-ambientes, necessários ao recrutamento de indivíduos jovens de O. porosa.

No mercado alimentício, a busca de inovações objetiva mais que tornar um alimento mais saboroso. Aspectos como aroma, cor, facilidade de preparo e aceitação do consumidor são decisivos para seu sucesso. Atualmente, na América do Norte e na Europa, um produto denominado grilling plank vem se destacando na defumação de peixes e carnes. Embora no Brasil o churrasco seja prato típico, esse produto, obtido por meio da industrialização da madeira, ainda é pouco conhecido no país.Historiadores relatam que sua origem remonta aos nativos da costa americana do Pacífico, que utilizavam a madeira de árvores de Thuja plicata, espécie encontrada na região, para preparar peixes, o que lhes conferia sabor suave e maciez. A ideia difundiu-se e, atualmente, outras espécies como Prunus avium e Alnus glutinosa também são utilizadas. Considerando-se a biodiversidade de espécies de árvores existente no país, pode-se afirmar que o Brasil apresenta significativo potencial para que sejam encontradas espécies com as propriedades e características necessárias para a industrialização de grilling planks. O presente trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar a madeira de espécies nativas brasileiras com potencial para a confecção do produto em questão. A identificação de espécies propícias foi realizada por meio da caracterização de suas propriedades físicas e químicas, bem como da consulta à bibliografia especializada. As espécies analisadas neste trabalho foram: Amburana cearensis, Cedrela fissilis, Myrocarpus frondosus e Ocotea porosa. / In the food market, the search for innovations aims more than making food more palatable. Aspects like aroma, color, ease of preparation and consumer acceptance are decisive for its success. Currently, both in North America and Europe, a product called grilling plank has been standing out in the smoking of fish and meat. Although in Brazil barbecue is a typical dish, this product, obtained through wood industrialization, is still little known in the country. Historians report that its origin goes back to the Pacific Coast Native Americans, who used Thuja plicata wood, common in the region, to prepare fish, providing them with softness and mild taste. The idea has spread and nowadays other species such as Prunus avium and Alnus glutinosa are used for the same purpose. Due to the biodiversity of tree species in the country, Brazil presents significant potential for finding species with the properties and characteristics necessary for the industrialization of grilling planks. The objective of this work was to identify and characterize the wood of Brazilian native species with potential for the production of the product in question. The identification of propitious species was carried out through the characterization of their physical and chemical properties, as well as the study of specialized literature. The Brazilian species analyzed in this research were: Amburana cearensis, Cedrela fissilis, Myrocarpus frondosus and Ocotea porosa.

Os óleos essenciais das folhas e galhos de quatro indivíduos de O. porosa e três de N. megapotamica foram avaliados durante doze meses através das técnica CG-EM e CG-DIC. Os compostos majoritários encontrados nos óleos voláteis das folhas de O. porosa foram durante esse período α-pineno, β-pineno, mirceno, nerolidol e espatulenol, enquanto nos galhos predominavam nerolidol, óxido de cariofileno, α-muurolol, β-eudesmol e o espatulenol, apenas em dois dos quatro indivíduos estudados. Em N. megapotamica, foram observadas diferenças quanti e qualitativas entre os indivíduos para os óleos das folhas e apenas quantitativas para os dos galhos. Nas folhas os componentes majoritários foram α-santaleno, trans-α-bergamoteno, β-santaleno, γ-amorfeno, biciclogermacreno e alohimachalol para os indivíduos 1 e 2, enquanto no indivíduo 3 predominavam o δ-elemeno e muurola-4, 10 (14)-dien-1-β-ol. Nos galhos desta espécie os componentes majoritários identificados no indivíduo 1 foram α-santaleno, espatulenol, α-muurolol, e 5 iso cedranol; α-santaleno, guaiol, 5 iso cedranol e α-bisabolol, no indivíduo 2; no indivíduo 3 predomina o α-muurolol. A análise dos componentes ao longo dos meses mostrou que os componentes dos óleos estudados não apresentaram uma variação estatisticamente significativa, a variabilidade entre os indivíduos foi maior que aquela observada com a sazonalidade. Os óleos estudados não apresentam atividade fungitóxica para C. sphaerospermum, C. cladosporioides, A. Níger, C. albicans e também não foram ativos frente às bactérias E. coli e P. aeruginosa, somente frente a S. aureus foi observada atividade antibacteriana. / Essential oils extracted from leaves and stems of four individuals of O. porosa and N. megapotamica were evaluated during a period of 12 months using GC/MS and GC/FID techniques. During this period the major compounds found in the volatile oils of O. porosa leaves were α-pinene, β-pinene, myrcene, nerolidol, spathulenol, whereas in stems were nerolidol, caryophyllene oxide, α-muurolol, β-eudesmol and spathulenol, only in two out of the four studied individuals. Among the N. megapotamica specimens qualitative and quantitative differences were observed in the leaf oils but only quantitative in the case of stems. In the leaves of individuals 1 and 2 the major compounds were α-santalene, trans-α- bergamotene, β-santalene, &$947;-amorphene, bicyclogermacrene and alo-himachalol, while for individual 3 δ-elemene and muurola-4, 10 (14)-diene-1-β-ol were predominant. In the stems of this species, the major compounds identified were α-santalene, spathulenol, α-muurolol and 5 iso cedranol in the individual 1; α-santalene, guaiol, 5 iso cedranol and α-bisabolol in individual 2; and was the predominant compound α-muurolol in individual 3. The chemical composition of the essential oils, during the analyzed period, did not present a statistically significant variation. Variability among individuals was higher than the one observed with seasonality. The studied oils did not present fungitoxic activity for C. sphaerospermum, C. cladosporioides, A. niger, C. albicans and were also not active against the Gram-negative bacteria E. coli e P. aeruginosa. However, both oils presented some activity against the Gram-positive bacterium S. aureus.

Ocotea odorifera é uma espécie nativa da Mata Atlântica, com características recalcitrantes, que se encontra em risco de extinção devido a sua exploração econômica. Técnicas baseadas na biotecnologia podem ser utilizadas para o processo de conservação e reintrodução no seu ambiente natural de espécies ameaçadas de extinção. Dentre as técnicas biotecnológicas, a embriogênese somática (ES) vem sendo utilizada com bastante sucesso em programas de melhoramento genético e conservação de germoplasma de espécies arbóreas. Contudo, para o estabelecimento de protocolos eficientes de ES são necessários estudos básicos de fisiologia e bioquímica do desenvolvimento da semente e da germinação, para que as condições in vivo possam ser recriadas de forma eficiente in vitro. O objetivo deste trabalho foi avaliar as variações no conteúdo endógeno de aminoácidos, PAs, AIA, ABA e estabelecer marcadores protéicos durante a germinação de sementes de O. odorifera. As sementes foram germinadas em substrato de vermiculita em fotoperíodo de 16h a 27°C. A seguir, coletadas após 0, 15, 30 e 45 dias de semeadura. Foi observado que: a) o conteúdo de aminoácidos aumentou durante o processo germinativo. A asparagina foi observada em maior quantidade e predominou durante todo o período analisado. A metionina e a ornitina, precursores das PAs, e o triptofano, precursor do AIA, aumentaram ao longo do processo germinativo; b) o conteúdo total de PAs decresceu nos últimos 15 dias de avaliação. Neste período, as poliaminas conjugadas apresentaram aumento indicando possível relação entre conjugação e disponibilidade de PAs nas células; c) a relação Put/(Spm+Spd) diminui ao final do período analisado enquanto no mesmo período a Spm foi a PA livre mais abundante indicando relação entre Spm e alongamento celular; d) O AIA apresentou aumento ao logo do processo germinativo, ao mesmo tempo em que a queda no conteúdo de ABA pode ser observada; e) o conteúdo de proteínas decresceu ao longo do processo germinativo. Os perfis protéicos diferiram pouco entre os estádios analisados. Entretanto, foi observada variação significativa na abundância (% de volume) em 39 spots, que foram definidos como marcadores do processo germinativo. Dentre esses spots incluem-se 26 que reduziram e 2 spots que aumentaram suas abundâncias ao longo do processo germinativo, 10 que apresentaram tanto aumento quanto diminuição durante o período observado e apenas 1 exclusivo da semente madura. Estes resultados abrem perspectivas para a avaliação de parâmetros fundamentais para a otimização de protocolos de ES e permitiram uma maior compreensão das variações endógenas dos diferentes compostos citados no processo germinativo das sementes de O. odorifera. / Ocotea odorifera is a native tree from the Atlantic Forest with recalcitrant features that is in risk of extinction because its economical exploration. Techniques based on biotecnology can be used for the conservation and reintroduction process of species in risk of extinction in their natural environment. Between these biotecnologycal techniques, the somatic embryogenesis (SE) have been used sucessfully in programs of genetic breeding and tree germoplasm conservation. However, basic studies of physiology and biochymical of the seed development and germination are necessary for the establishment of efficient protocols of SE. Thus, these condictions in vivo can be recriated in vitro. The aim of this work was to evaluate the variations in the endogenous content of amino acids, polyamines, IAA, ABA and protein markers throughout the seed germination of O. odorifera seeds. The seeds were germinated on vermiculite substrate at 27°C and 16h of photoperiod and collected after 0, 15, 30 e 45 days of sowing. It was observed that: a) the amino acids content increased troughout the germination process. Asparagine was the highest content sighted and prevailed during the period studied. Methionine and ornithine, polyamines precursors, and tryptophan, IAA precursor, increased troughout germination process; b) the total PAs content decreased in the last 15 days of evaluation. At the same period, conjugated PAs showed an increase, indicating a relation between conjugation and avalability of polyamines inside the cells; c) the Put/(Spm+Spd) relation decreased while the Spm was the most abundant free PA observed at the end of the period analyzed indicating a relation between Spm and celular elongation; d) IAA increased during all the process while a decrease of ABA was sigthed; e) protein content decreased troughout the period observed. The proteic profile didnt change a lot between the stages. Os perfis protéicos diferiram pouco entre os estádios analisados. Entretanto, foi observada variação significativa na abundância (% de volume) em 39 spots, que foram definidos como marcadores do processo germinativo. Among them, could be include 26 that decreased and 2 that decreased its abundances troughout the germinative process, 10 that both increased and decreased throughout the period analyzed and just 1 exclusive from mature seed. These results open perspectives to avaliation of fundamentals parameters to optmization of ES protocols and allow a better comprehension about the edogenous variation of the differents compounds citeds in the process of O. odorifera seeds germination.

O gênero Ocotea Aubl. (Lauraceae), amplamente distribuído no estado do Rio Grande do Sul, foi investigado visando a análise química dos óleos voláteis e a avaliação in vitro das atividades anti-inflamatória, antioxidante e antifúngica dos óleos obtidos. Foram coletadas quatro espécies de Ocotea (O. acutifolia, O. indecora, O. puberula e O. silvestris) em diversas localidades do Rio Grande do Sul. A composição química foi determinada por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas, onde os óleos apresentaram predominância de sesquiterpenos. Não foi observada a presença de monoterpenos nas espécies estudas, exceto para uma das coletas realizadas para O. indecora, cujo óleo apresentou 16% de monoterpenos hidrocarbonetos, representados em especial por beta-pineno. Para uma das espécies, O. acutifolia, foi observada a predominância de um diterpeno no óleo. A atividade anti-inflamatória foi realizada pelo método da câmara de Boyden, sendo que nenhum óleo analisado apresentou atividade. Na avaliação da atividade antioxidante, esta foi determinada pela reação com 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH) por espectrofotometria. Apenas o óleo de O. silvestris foi testado, e o resultado foi negativo para essa atividade. A avaliação da atividade antifúngica foi realizada através da concentração inibitória mínima e os óleos voláteis testados apresentaram uma inibição no crescimento da cepa de Candida parapsilosis numa concentração de 500 μg/mL. / The genus Ocotea Aubl. (Lauraceae), widely distribuited in the state of Rio Grande do Sul, was investigated aiming to chemical analysis of volatile oils and in vitro evaluation of anti-inflammatory, antioxidant and antifungal activities of the obtained oils. Four species of Ocotea (O. acutifolia, O. indecora, O. puberula and O. silvestris) were collected from different localities of Rio Grande do Sul. The chemical compositions was determined by gas chromatography coupled to mass spectrometry, where the oils showed a predominance of sesquitepenes. O. indecora, except for, it was observed the absence of monoterpenos in the studied species. In this species, the oil presents 16% hydrocarbon monoterpenos represented in particular beta-pinene. For one species, O. acutifolia, the predominance of a diterpene in the oil was observed. The anti-inflamatory activity was evalued by the Boyden Chamber method, and this activity was observed for the tested oils. In the evaluation of antioxidant activity, this was determined by reaction with 2,2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH) by spectrophotometry method. In this test only the oil, O. silvestris was tested and the result was negative for this activity. The evaluation of antifungal activity was performed by minimum inhibitory concentration and volatile oils tested showed an inhibition in the growth of Candida parapsilosis strain at a concentration of 500 μg/mL.

Ocotea odorifera é uma espécie nativa da Mata Atlântica, com características recalcitrantes, que se encontra em risco de extinção devido a sua exploração econômica. Técnicas baseadas na biotecnologia podem ser utilizadas para o processo de conservação e reintrodução no seu ambiente natural de espécies ameaçadas de extinção. Dentre as técnicas biotecnológicas, a embriogênese somática (ES) vem sendo utilizada com bastante sucesso em programas de melhoramento genético e conservação de germoplasma de espécies arbóreas. Contudo, para o estabelecimento de protocolos eficientes de ES são necessários estudos básicos de fisiologia e bioquímica do desenvolvimento da semente e da germinação, para que as condições in vivo possam ser recriadas de forma eficiente in vitro. O objetivo deste trabalho foi avaliar as variações no conteúdo endógeno de aminoácidos, PAs, AIA, ABA e estabelecer marcadores protéicos durante a germinação de sementes de O. odorifera. As sementes foram germinadas em substrato de vermiculita em fotoperíodo de 16h a 27°C. A seguir, coletadas após 0, 15, 30 e 45 dias de semeadura. Foi observado que: a) o conteúdo de aminoácidos aumentou durante o processo germinativo. A asparagina foi observada em maior quantidade e predominou durante todo o período analisado. A metionina e a ornitina, precursores das PAs, e o triptofano, precursor do AIA, aumentaram ao longo do processo germinativo; b) o conteúdo total de PAs decresceu nos últimos 15 dias de avaliação. Neste período, as poliaminas conjugadas apresentaram aumento indicando possível relação entre conjugação e disponibilidade de PAs nas células; c) a relação Put/(Spm+Spd) diminui ao final do período analisado enquanto no mesmo período a Spm foi a PA livre mais abundante indicando relação entre Spm e alongamento celular; d) O AIA apresentou aumento ao logo do processo germinativo, ao mesmo tempo em que a queda no conteúdo de ABA pode ser observada; e) o conteúdo de proteínas decresceu ao longo do processo germinativo. Os perfis protéicos diferiram pouco entre os estádios analisados. Entretanto, foi observada variação significativa na abundância (% de volume) em 39 spots, que foram definidos como marcadores do processo germinativo. Dentre esses spots incluem-se 26 que reduziram e 2 spots que aumentaram suas abundâncias ao longo do processo germinativo, 10 que apresentaram tanto aumento quanto diminuição durante o período observado e apenas 1 exclusivo da semente madura. Estes resultados abrem perspectivas para a avaliação de parâmetros fundamentais para a otimização de protocolos de ES e permitiram uma maior compreensão das variações endógenas dos diferentes compostos citados no processo germinativo das sementes de O. odorifera. / Ocotea odorifera is a native tree from the Atlantic Forest with recalcitrant features that is in risk of extinction because its economical exploration. Techniques based on biotecnology can be used for the conservation and reintroduction process of species in risk of extinction in their natural environment. Between these biotecnologycal techniques, the somatic embryogenesis (SE) have been used sucessfully in programs of genetic breeding and tree germoplasm conservation. However, basic studies of physiology and biochymical of the seed development and germination are necessary for the establishment of efficient protocols of SE. Thus, these condictions in vivo can be recriated in vitro. The aim of this work was to evaluate the variations in the endogenous content of amino acids, polyamines, IAA, ABA and protein markers throughout the seed germination of O. odorifera seeds. The seeds were germinated on vermiculite substrate at 27°C and 16h of photoperiod and collected after 0, 15, 30 e 45 days of sowing. It was observed that: a) the amino acids content increased troughout the germination process. Asparagine was the highest content sighted and prevailed during the period studied. Methionine and ornithine, polyamines precursors, and tryptophan, IAA precursor, increased troughout germination process; b) the total PAs content decreased in the last 15 days of evaluation. At the same period, conjugated PAs showed an increase, indicating a relation between conjugation and avalability of polyamines inside the cells; c) the Put/(Spm+Spd) relation decreased while the Spm was the most abundant free PA observed at the end of the period analyzed indicating a relation between Spm and celular elongation; d) IAA increased during all the process while a decrease of ABA was sigthed; e) protein content decreased troughout the period observed. The proteic profile didnt change a lot between the stages. Os perfis protéicos diferiram pouco entre os estádios analisados. Entretanto, foi observada variação significativa na abundância (% de volume) em 39 spots, que foram definidos como marcadores do processo germinativo. Among them, could be include 26 that decreased and 2 that decreased its abundances troughout the germinative process, 10 that both increased and decreased throughout the period analyzed and just 1 exclusive from mature seed. These results open perspectives to avaliation of fundamentals parameters to optmization of ES protocols and allow a better comprehension about the edogenous variation of the differents compounds citeds in the process of O. odorifera seeds germination.

O gênero Ocotea Aubl. (Lauraceae), amplamente distribuído no estado do Rio Grande do Sul, foi investigado visando a análise química dos óleos voláteis e a avaliação in vitro das atividades anti-inflamatória, antioxidante e antifúngica dos óleos obtidos. Foram coletadas quatro espécies de Ocotea (O. acutifolia, O. indecora, O. puberula e O. silvestris) em diversas localidades do Rio Grande do Sul. A composição química foi determinada por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas, onde os óleos apresentaram predominância de sesquiterpenos. Não foi observada a presença de monoterpenos nas espécies estudas, exceto para uma das coletas realizadas para O. indecora, cujo óleo apresentou 16% de monoterpenos hidrocarbonetos, representados em especial por beta-pineno. Para uma das espécies, O. acutifolia, foi observada a predominância de um diterpeno no óleo. A atividade anti-inflamatória foi realizada pelo método da câmara de Boyden, sendo que nenhum óleo analisado apresentou atividade. Na avaliação da atividade antioxidante, esta foi determinada pela reação com 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH) por espectrofotometria. Apenas o óleo de O. silvestris foi testado, e o resultado foi negativo para essa atividade. A avaliação da atividade antifúngica foi realizada através da concentração inibitória mínima e os óleos voláteis testados apresentaram uma inibição no crescimento da cepa de Candida parapsilosis numa concentração de 500 μg/mL. / The genus Ocotea Aubl. (Lauraceae), widely distribuited in the state of Rio Grande do Sul, was investigated aiming to chemical analysis of volatile oils and in vitro evaluation of anti-inflammatory, antioxidant and antifungal activities of the obtained oils. Four species of Ocotea (O. acutifolia, O. indecora, O. puberula and O. silvestris) were collected from different localities of Rio Grande do Sul. The chemical compositions was determined by gas chromatography coupled to mass spectrometry, where the oils showed a predominance of sesquitepenes. O. indecora, except for, it was observed the absence of monoterpenos in the studied species. In this species, the oil presents 16% hydrocarbon monoterpenos represented in particular beta-pinene. For one species, O. acutifolia, the predominance of a diterpene in the oil was observed. The anti-inflamatory activity was evalued by the Boyden Chamber method, and this activity was observed for the tested oils. In the evaluation of antioxidant activity, this was determined by reaction with 2,2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH) by spectrophotometry method. In this test only the oil, O. silvestris was tested and the result was negative for this activity. The evaluation of antifungal activity was performed by minimum inhibitory concentration and volatile oils tested showed an inhibition in the growth of Candida parapsilosis strain at a concentration of 500 μg/mL.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4886781 bytes, checksum: 77da1f8dad17f8c8f812258fa8a8dd89 (MD5) Previous issue date: 2012-04-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Yangambin, a furofuran lignan isolated from Ocotea duckei Vattimo (Lauraceae) has important pharmacological activities, such as selective antagonist of platelet activating factor (PAF), cardiovascular protective effects, CNS depressant, and others. Besides, it is presented as a phytochemical marker of the specie and a promising substance for a herbal drug development. Thus, this study aimed at the development and validation of an analytical method on HPLC-DAD for simultaneous quantitative determination of yangambin and its epimer, epi-yangambin, in extracts and fractions of Ocotea duckei. For method development, a synthetic approach was made in order to obtain the lignans with high purity. The synthetic route includes a biotransformation process with coconut water peroxidase for a stereoseletive synthesis of yangambin. The chromatographic conditions for the study were: reverse phase column C-18 (250 x 4,6 mm x 5 μm), mobile phase was a mixture of water and acetonitrile (50:50) at a flow rate of 1,0 mL/min, detection at a wavelength of 215 nm. Lignans were isolated from crude ethanolic extract of the plant (leaves and stem bark) through a lignoids isolation procedure. Epimers were separated by semi-preparative HPLC-DAD to yield compounds free from impurities, being characterized by spectroscopic methods (1H and 13C NMR), infrared (IR), mass spectrometry (MS), optical rotation, circular dichroism, and thermal analysis. Validation of analytical method was performed in accordance with Resolution nº 899/2003, from ANVISA, proving to be: selective for the two epimers, linear at the concentration range of 1,0 60,0 μg/mL, precise (CV ≤ 5% ), accurate (99-101%) and robust. Application of the validated analytical method in a quantitative study allowed to determine that each 1,0g of crude ethanolic extract from stem bark and leaves presents 58,07 mg of yangambin and 88,94 mg of epi-yangambin. In total lignoids fraction, each 1,0g has 188,75 mg of yangambin and 250,02 mg of epi-yangambin. / A iangambina, lignana furofurânica isolada de Ocotea duckei Vattimo (Lauraceae), possui importantes atividades farmacológicas, como antagonista seletivo do fator de agregação plaquetária (PAF), ações protetoras cardiovasculares, depressora do SNC, dentre outras. Além disso, se apresenta como o marcador fitoquímico da espécie e é uma substância promissora para o desenvolvimento de um fitofármaco. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e validação de metodologia analítica em CLAE-DAD para a quantificação simultânea da iangambina e seu epímero, epi-iangambina, nos extratos e frações de Ocotea duckei. Para o desenvolvimento do método, elaborou-se uma proposta sintética para obtenção das lignanas com grau de pureza elevado. A rota sintética utiliza processo de biotransformação através da peroxidase da água de coco para a síntese da iangambina de modo estereoseletivo. As condições do método cromatográfico desenvolvido foram: coluna de fase reversa C-18 (250 x 4,6 mm x 5 μm), como fase móvel uma mistura de água e acetonitrila (50:50), a um fluxo de 1 mL/min, detecção no comprimento de onda de 215 nm. As lignanas foram isoladas do extrato etanólico bruto da planta (folhas e casca do caule) através de metodologia de isolamento para lignóides. Os epímeros foram separados através de CLAE-DAD semi-preparativa, obtendo-se os marcadores livres de impurezas, sendo caracterizados por métodos espectroscópicos (RMN de 1H e 13C), Infravermelho (IV), espectrometria de massas (EM), rotação ótica, dicroísmo circular, além de técnicas termoanalíticas. A validação da metodologia analítica foi realizada de acordo com a Resolução RE nº 899/2003 da ANVISA, mostrando-se ser: seletivo para os dois epímeros, linear na faixa de concentração de 1-60 μg/mL, preciso (CV ≤ 5%), exato (99-101%) e robusto. A aplicação da metodologia analítica num estudo quantitativo permitiu estabelecer que em 1,0g do extrato das cascas do caule e folhas tem-se cerca de 58,07 mg de iangambina e 88,94 mg de epi-iangambina. Na fração de lignóides totais, para cada 1,0g tem-se 188,75 mg de iangambina e 250,02 mg de epi-iangambina.