Orientador: Maria Suzana de Stefano Menin / Banca: Licínio Carlos Viana Silva Lima / Banca: GeivaCarolina Calsa / Banca: Divino José da Silva / Banca: Alberto Albuquerque Gomes / Resumo: No Brasil, questões religiosas e educação sempre estiveram imbricadas. No entanto, atualmente, a restrição ao proselitismo demarca uma fronteira entre o Ensino Religioso (ER) e outras formas de educação religiosa. Visto como disciplina prevista constitucionalmente e regulamentado pela Lei de Diretrizes e Bases da Educação Nacional, buscou-se, com este trabalho em nível de doutorado, saber como se organiza o Ensino Religioso em escolas públicas situadas em estados que possuem bases normativas bem distintas, procurando identificar e compreender essencialmente as lógicas que norteiam a ação da disciplina na escola. O objetivo geral é, portanto, compreender as articulações/desarticulações, congruência/incongruências presentes na ação curricular do ER em três estados brasileiros que possuem normativas para esse ensino bem distintas: Rio de Janeiro, São Paulo e Paraná. Para persegui-lo, colocou-se como objetivos específicos: (1) Identificar as regras que cooperam para a organização do ER na escola, corroborando, assim, para (2) interpretar as lógicas de ação e os possíveis choques de racionalidade presentes na organização do ER e; (3) Verificar como são produzidas ou de onde advêm essas regras. O direcionamento teórico-metodológico adotado assume a sociologia das organizações, as ciências da administração escolar e a investigação em educação no estudo da ação curricular em pauta. Apontando como se dá a passagem do plano das orientações para o plano da ação organizacional, demonstra-se, nos resultados obtidos junto aos professores da disciplina dos três estados estudados, uma preocupação com a diversidade, com a formação em valores e em tornar a disciplina atrativa aos alunos / Abstract: In Brazil religious affairs and education have always been intertwined. However, currently, the restriction on proselytizing marks a boundary between Religious Education (RE) and other forms of religious education. Seen as planned curricular component Constitution and regulated by the Law of Guidelines and Bases of National Education, we sought with this work at the doctoral level, know how to organize Religious Education in public schools located in states that have very different normative bases, essentially seeking to identify and understand the logic guiding the action of the subject in school. The overall objective is therefore to understand the joints / dislocations, consistency / inconsistency present in the ER curricular action in three Brazilian states that have regulations for that distinct teaching: Rio de Janeiro, São Paulo and Paraná. To pursue it, was placed the following objectives: (1) identify the rules that cooperate to organize the ER at school, corroborating thus to (2) interpret the logics of action and possible rationality clashes present in the organization and ER; (3) Check how they are produced or where these rules come. The theoretical-methodological guidance adopted assumes the sociology of organizations, sciences school administration and research in education in curriculum action of the study at hand. Pointing how is the passage of the plan of the guidelines for the plan of organizational action, it is demonstrated in the results obtained from the teachers of the course of the three states studied, a concern with diversity, with training in values and making the discipline Attractive students / Doutor

Orientador: João Augusto Gentilini / Banca: Luis Bezerra Neto / Banca: Silvio Henrique Fiscarelli / Banca: Solange Nunes de Oliveira Schiavetto / Banca: Marta Leandro da Silva / Resumo: Este estudo analisa a implementação da política pública para a Educação do Campo e o papel do gestor nesse processo. O objetivo principal foi investigar e analisar a efetividade da política pública de Educação do Campo nas escolas do campo que oferecem Educação Infantil e anos iniciais do Ensino Fundamental, na Microrregião de Poços de Caldas-MG. Buscou compreender como a atuação do gestor educacional, enquanto instância de ação, pode contribuir de forma eficiente na implementação da política de Educação do Campo, a partir de Marcos Normativos que visam contemplar todas as questões relacionadas à educação nesse contexto educacional, com vistas à efetivação das ações propostas por essa política pública, nas escolas do campo, em relação a seus diretos e necessidades, de forma a contribuir para a eliminação do estado de menoridade e exclusão a que sempre tiveram, historicamente, submetidos. Esse estudo, inserido no campo teórico da investigação qualitativa, se estruturou de forma a permitir a discussão e análise, inicialmente, sobre política pública educacional e a política atual de Educação do Campo, a partir da identificação dos marcos legais que amparam as propostas para a educação nas escolas do campo na Microrregião de Poços de Caldas-MG. A discussão seguinte versou sobre a gestão da educação, e as possibilidades-necessidades de intervenções eficientes dos gestores, nos âmbitos municipal e local. A pesquisa de campo permitiu identificar, a partir de dados coletados em escolas do campo, que a política educacional ainda não consegue impactar de forma efetiva algumas escolas do campo na Microrregião de Poços de Caldas-MG, evidenciando-se a pertinência desse estudo. Concluiu-se que a política de Educação do Campo necessita, mais do que um ordenamento legal, da intervenção eficiente dos gestores educacionais, como... / Abstract: This study analyzes the implementation of public policy field education and the manager's role in this process. The main objective was to investigate and analyze the effectiveness of public policy field Education in schools of the field that offer Early Childhood Education and early years of elementary school, in the micro-region of Poços de Caldas-MG. It ought to understand how the performance of the educational manager, as the body in action, can contribute efficiently in the implementation of Rural Education policy from Normative Marks aimed to cover all issues related to education in educational context, with a view to effecting effectivation of the actions proposed by this public policy in schools field in relation to their direct needs and in order to contribute to the elimination of the state of minority and exclusion that have always historically submitted. The study, inserted in the theoretical field of qualitative research, was structured to allow discussion and analysis initially on public education policy and the current policy of Field Education, from the identification of legal frameworks which support the proposals for the education in schools field in the micro-region of Poços de Caldas-MG. The following discussion was on the management of education, and efficient interventions, needs possibilities of managers in municipal and local levels. The field research identified from data collected in the field schools, the educational policy can not effectively impact some schools field in the micro-region of Poços de Caldas-MG, demonstrating the relevance of this study. It was concluded that the field of education policy needs more than one legal system, efficient intervention of educational managers, as subjects of will and action, in ways that the proposals for the Rural Education materialize. / Doutor

Orientador: Theresa Maria de Freitas Adrião / Banca: Adriana Dragone Silveira / Banca: Teise de Oliveira Guaranha Garcia / Resumo: Essa dissertação objetiva identificar a concepção de gestão escolar proposta pelo programa "Gestão Nota 10" desenvolvido pelo Instituto Ayrton Senna - IAS para as redes públicas de educação relacionando às concepções de gestão escolar propostas pela Gestão da Qualidade Total (GQT) e pelo Movimento das Escolas Eficazes. A pesquisa integrou o projeto "Análises das consequências de parcerias firmadas entre os municípios brasileiros e o Instituto Ayrton Senna". O Gestão Nota 10 foi definido pelo próprio Instituto como um programa para o "gerenciamento das rotinas nas escolas e secretarias para melhoria da qualidade do ensino", foi concebido em 2005, sua metodologia trabalha com indicadores, notas gerenciais, capacitação dos profissionais em serviço e informação em tempo real. A pesquisa pautou-se na análise dos documentos disponibilizados pelo IAS (site, revistas e manuais), pela qual identificou-se uma relação entre proposto pelo programa Gestão nota 10 do IAS como o foco no aluno, o papel de liderança exercido pelo diretor, a definição de metas, o trabalho coletivo, a participação da família, a função da avaliação dos resultados e a padronização dos processos pedagógicos e às orientações disseminadas pela Gestão da Qualidade Total - GQT e pelo Movimento das Escolas Eficazes que foram implantados na década de noventa, mas que ainda se mostram presentes nas escolas brasileiras / Abstract: This dissertation aims to identify the design proposed by school management program "Management Note 10" developed by the Ayrton Senna Foundation - IAS networks for public education relating to the concepts proposed by the school management Total Quality Management (TQM) and the Movement of Schools effective. The research was part of the project "Analysis of the consequences of partnerships between city department and the Ayrton Senna Foundation. The Management Note 10 was defined by the Institute as a program to "management routines in schools and offices to improve the quality of education," was conceived in 2005, his methodology works with bookmarks, notes management, professional training and in-service real-time information. The research was based on analysis of documents provided by the IAS (website, magazines and manuals), in which we identified a relationship between management program proposed by footnote 10 of IAS as the focus on the student, the leadership role played by the director, goal setting, collective work, family participation, the role of standardization and evaluation of the results of the pedagogical processes and guidelines disseminated by Total Quality Management - TQM and the Effective Schools Movement that were imported since the 90s to Brazilian schools / Mestre

Orientador: João Augusto Gentilini / Banca: Maria Cecília Luiz / Banca: Sílvio Henrique Fiscarelli / Resumo: O objetivo desta dissertação é apontar as possibilidades, mas também as dificuldades e entraves à participação dos pais em escolas de ensino fundamental. Tal participação, analisada na perspectiva da gestão democrática, é definida na Lei de Diretrizes e Bases da Educação (Lei 9394/96) e também na perspectiva de pais e gestores das escolas públicas. A pesquisa, de natureza qualitativa, foi desenvolvida em duas escolas municipais do interior do Estado de São Paulo, ambas na periferia do mesmo município, mas em regiões distintas. O referencial teórico escolhido partiu de um levantamento de pesquisas em bancos de teses e dissertações acerca da temática proposta, além de pesquisa bibliográfica, selecionando-se autores que trataram das mudanças paradigmáticas no campo da gestão democrática. Como procedimentos de pesquisa, realizou-se múltiplas técnicas que serviram para conhecer as realidades e ouvir pais e gestores, por meio de: entrevista aberta com os gestores, análise dos documentos escolares (atas de conselho escolar e o Projeto Político-Pedagógico), grupos focais com os pais e, por fim, observação de uma reunião de conselho escolar em cada unidade investigada. Dentre as conclusões apontadas pela pesquisa, destaca-se a dificuldade dos gestores em concretizar, na prática, um processo de gestão participativa e democrática, pois nem sempre conseguem superar as dimensões meramente formal e burocrática. Por parte dos pais, a baixa participação é devido principalmente às dificuldades em compatibilizar seus compromissos de trabalho (horário, etc.) com as exigências do processo de participação. A pesquisa mostra que há um movimento em direção ao processo, com certos avanços, mas que ainda necessita ser aprofundado e aperfeiçoamento para atender, plenamente, as expectativas geradas a partir da LDB 9394/1996 / Abstract: The purpose of this paper is to point out the possibilities, but also the difficulties and obstacles to parental participation in elementary schools. The parental participation analyzed as the perspective of democratic management, defined in the Law of directives and bases of education (Law 9394/96), and also analyzed from the perspective of parents and public schools managers. This research based on the qualitative research was developed in two municipal schools from the São Carlos city, located in São Paulo state, the two elementary schools located on the outskirts of the city, but in different regions. The theoretical references were based on research in databases and dissertations about the thematic proposal, besides the bibliographic research, the selected authors talk about the paradigmatic changes, specifically in the field of democratic management. As research procedures were used multiple techniques that served to know the realities and listening to parents and managers through: open interviews with managers, analysis of school documents (school board minutes and the Pedagogical Political Project), focus groups with parents and, finally, notice of a meeting of the School Board in each reporting unit. Among the findings identified by the research, highlights the difficulty of managers to implement in practice, a process of participatory and democratic management, because they cannot always overcome the merely formal and bureaucratic dimensions. For the parents, the low participation is mainly due to difficulties in reconciling their work commitments (time, etc.) with the requirements of the participation process. Research shows that there is a movement toward the process, with some progress but still needs to be deepened and improvement to meet fully the expectations generated from the LDB 9394/1996 / Mestre

Orientador: Paschoal Quaglio / Banca: Alfredo Peixoto Martins / Banca: João dos Reis Silva Jr / Banca: Lourdes Marcelino Machado / Banca: Maria Sylvia Simões Bueno / Resumo: A escolha do tema do presente trabalho - "Construindo uma gestão participativa" - surgiu da necessidade de relatar minha experiência profissional como Diretor de uma das unidades do Centro Paula Souza - a Escola Técnica Estadual Amim Jundi - "o local da construção". Minha vida profissional e, posso acrescentar, minha vida pessoal sempre estiveram pautadas por atitudes, hábitos e princípios democráticos. A busca de respostas, tanto para a solução de problemas no cotidiano escolar, bem como para a fundamentação teórica das experiências vividas, estão traduzidas, inicialmente, pela dissertação de Mestrado - Conselho de Escola: Possibilidades e Limitações; e, na atualidade, pelo desenvolvimento deste trabalho. É óbvio que a própria escolha do tema, tanto da dissertação quanto da tese, demonstra minha crença na democracia, apesar do contexto político e econômico, que, às vezes, dificultam a efetiva realização desse ideal de governo. Durante as leituras específicas sobre gestão participativa, as pesquisas e levantamento de documentos, na verdade, durante o desenvolvimento do presente trabalho, pude perceber o quanto há para caminhar no sentido de edificar a gestão participativa, não somente na Amim Jundi, mas nas escolas de modo geral. O objetivo central deste estudo é expor, analiticamente, as mudanças efetuadas na organização e gestão da Escola Técnica Estadual Amim Jundi, no período de 1996 a 2000. Situada no município de Osvaldo Cruz - SP, a Amim Jundi faz parte do complexo institucional denominado Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza - CEETEPS - instituição pública voltada para a educação profissional de nível básico, técnico e tecnológico. / Abstract: The choice of the present work - Building a participative management - has risen from my need of reporting my professional experience as Director of one of Centro Paula Souza units - the Escola Técnica Estadual Amim Jundi - "The building site". My professional life and, I should add that, my personal life have always been supported by democratic attitudes, habits and principles. The search for answers, as to the solution of problems in the school daily life as to the theoretical basis of the experience passed through, are translated, first, by the Masters Dissertation - School Council: possibilities and Limits; and, today, by the development of the present work. Obviously, the choice of the theme itself, as much of the Dissertation as the Thesis, demonstrates my belief in democracy, despite the political and economic context, which, sometimes, makes difficult the effective achievements of this government ideal. During the specific readings about participative management, research and document collection, actually, during the development of this work, I could tell how far it is to make progress in order to construct the participative management, not only at Amim Jundi School, but in schools in general. This work aims to show, analytically, the changes done in the organization and management of Amim Jundi School, from 1996 to 2000. located in the town of Osvaldo Cruz - SP, Amim Jundi School makes part of the institutional complex called Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza - CEETEPS (Paula Souza Technological Education State Center) - a public institution devoted to the professional education in basic, technical and technological levels. / Doutor

Orientador: Neide de Melo Aguiar e Silva. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional de Blumenau, Centro de Ciências da Educação, Programa de Pós-Graduação em Educação.

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-26Bitstream added on 2015-03-03T12:06:21Z : No. of bitstreams: 1 000809785.pdf: 1310088 bytes, checksum: f25bc3b5e44ee675f826eb7104052b2f (MD5) / Coordenadoria de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior. / O presente estudo foi elaborado com o objetivo de mapear o fazer cotidiano de uma escola pública considerada com alto nível de qualidade. A estratégia metodológica foi a de observação participante e da análise documental com enfoque etnográfico, estratégia esta que permite traduzir em palavras, os contextos e processos sociais do grupo estudado, sem prejuízo de sua complexidade e dinâmica natural. Dado, este propósito, a pesquisa de campo foi realizada por um período de 09 (nove) meses, de 13/03/2013 à 13/12/2013, totalizando pouco mais de 300 (trezentas) horas de observação participante numa escola da rede pública estadual de São Paulo, localizada no interior do estado e que atende aos anos finais do ensino fundamental e ao ensino médio. Por meio da observação participante, principal recurso da metodologia escolhida, análise de documentos oficiais, entrevistas abertas e análise quantitativa das respostas dadas pelos pais e alunos no questionário socioeconômico e cultural do SARESP 2013, atreladas a uma observação e estudo das características organizacionais da escola estudada (estrutura física, estrutura administrativa e estrutura social) foi possível o apontamento de diversas características e manifestações que tornaram esta escola uma referência na região, com altos índices de aproveitamento nas avaliações externas e valorização da comunidade escolar / This research was designed with the intention to come to know and to learn the everyday life of a public school that meets high level of quality standard. The methodology used was the Ethnographic Case Study Approach, which permits to put into words the chosen group's context and social processes, taking in consideration its complexity and natural dynamic. The fieldwork was done at a public school of the State of São Paulo that teaches from the 6th grade of Middle School to the Senior of High School and it is located on the west side of the state. The fieldwork was completed in 9 (nine) months, from March 13 to December 13 of 2013 and 300 (three-hundred) hours was dedicated in participant observation. Through the participant observation, most important tool of the methodology chosen; the analyzes of official documents and the quantitative analyses of parents' and students' answers for the SARESP 2013 socioeconomic and cultural questionnaire, attached to a appreciation and close study of the school's organization characteristics (such as physical, administrative and social structure) it was possible to comprehend the possible characteristics and manifestations that made the school a reference in the region, with high rates of utilization on the external tests and improvement of the school community

Made available in DSpace on 2016-12-12T20:34:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SandroLIma.pdf: 254149 bytes, checksum: 69e00d856984fa5ba7d51340701d4e75 (MD5) Previous issue date: 2005-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esté trabajo tiene como foco la preocupacion al proyecto pedagógico de la escuela que busca el envoviemento de todos los mienbros en las discusiones y una actulisación constante. Lo que se propone es el analise de : la construcción, ejecución, y evaluación, del proyerto em desenbolvimento: que es la tentativa de colocar em practica la teoria de lo que se propone el proyecto. Par facilitar su entendimiento organisarom cinco estagios sintetisados. Em el primero se apresentan los passos ademas de dar a conocer el proyecto Pedagógico.En el segundo se busca la reflección, en eltercero se aresenta una pesquisa acción para el conocimiento de la escuela. En el cuarto estagio se discute la relación teoria e practica. Y en el ultimo estagio se visa que el aprender y hacen el camino y esté la función del proyerto / Este trabalho tem como foco a preocupação com o projeto político pedagógico da escola que busca o envolvimento de todos os membros nas discussões a uma atualização constante. O que se propõe é a análise da construção, execução e avaliação do projeto em desenvolvimento, que é a tentativa de colocar em prática a teoria discutida neste processo. Para facilitar o entendimento, foram organizados cinco estágios sintetizados: no primeiro são apresentados os passos para conhecer a proposta pedagógica; o segundo capítulo informa e argumenta sobre a proposta pedagógica; o terceiro apresenta uma pesquisa ação para o conhecimento da escola; no quarto capítulo é discutida a relação teoria e prática e o último capítulo visa aprender o caminho e a função do projeto.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Educação, 2008. / Submitted by Priscilla Brito Oliveira (priscilla.b.oliveira@gmail.com) on 2009-09-28T19:36:56Z No. of bitstreams: 4 calendario2008.pdf: 74254 bytes, checksum: b0c4a12ea3a217bb0ebba1735bb926df (MD5) DISSERTAÇÃO-___SIGLAS_E_RESUMOS.doc: 37376 bytes, checksum: 148288522f614c37863ac6d4df30ce1a (MD5) Corpo da Dissertacao.pdf: 416976 bytes, checksum: ad99a3d635de2468409318cfd6bfca8c (MD5) Dissertacao_Capa.pdf: 52731 bytes, checksum: 20064515a5d2e1e15d78829db32282f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2010-06-14T15:18:15Z (GMT) No. of bitstreams: 4 calendario2008.pdf: 74254 bytes, checksum: b0c4a12ea3a217bb0ebba1735bb926df (MD5) DISSERTAÇÃO-___SIGLAS_E_RESUMOS.doc: 37376 bytes, checksum: 148288522f614c37863ac6d4df30ce1a (MD5) Corpo da Dissertacao.pdf: 416976 bytes, checksum: ad99a3d635de2468409318cfd6bfca8c (MD5) Dissertacao_Capa.pdf: 52731 bytes, checksum: 20064515a5d2e1e15d78829db32282f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-14T15:18:15Z (GMT). No. of bitstreams: 4 calendario2008.pdf: 74254 bytes, checksum: b0c4a12ea3a217bb0ebba1735bb926df (MD5) DISSERTAÇÃO-___SIGLAS_E_RESUMOS.doc: 37376 bytes, checksum: 148288522f614c37863ac6d4df30ce1a (MD5) Corpo da Dissertacao.pdf: 416976 bytes, checksum: ad99a3d635de2468409318cfd6bfca8c (MD5) Dissertacao_Capa.pdf: 52731 bytes, checksum: 20064515a5d2e1e15d78829db32282f9 (MD5) Previous issue date: 2008 / A presente pesquisa tem como objetivo identificar e analisar a forma de participação da comunidade local na gestão escolar de duas escolas da Rede Pública de Ensino do Distrito Federal. A metodologia escolhida para o desenvolvimento desta investigação situa-se numa abordagem qualitativa. Na análise dos dados encontrados buscou-se um “olhar dialético” sobre a realidade concreta e objetiva, tendo a contradição uma das importantes categorias de análise da metodologia dialética. O estudo está dividido em três capítulos: o primeiro trata da democracia, redemocratização da sociedade brasileira e da participação. É feita uma análise crítica da democracia liberal e de suas limitações. É analisada a relação entre a sociedade civil e o Estado, por meio da democratização da educação. Trabalhou-se com o conceito de democracia elitista e democracia participativa definidos por Macpherson, com base em Schumpeter. Compreendendo a participação como elemento central na realização de um processo democrático, esse tema ficou no mesmo capítulo. O segundo capítulo intitulado “Democratização da Educação, Gestão Democrática Escolar e Conselho Escolar fez uma incursão na legislação educacional e foram analisadas diversas concepções de gestão e de conselhos Destaca-se pesquisas do Programa de Pós-Graduação e Gestão da Educação da Universidade de Brasília sobre o tema participação na gestão escolar. O terceiro capítulo discutiu conceitos de comunidade e comunidade local. É observado as orientações e resoluções do Banco Mundial referentes à educação. A investigação revela, que apesar da comunidade ter uma participação consagrada como princípio democrático em toda legislação educacional é quase unânime o desconhecimento por parte dela sobre a mesma. O estudo conclui mostrando que é possível criar novos espaços para a participação da comunidade local e que oferecendo-lhe condições, ela se mostra interessada em participar. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This research aims to identify and analyze the form of participation of the local community in the management of school two schools of the Network of Public Education of the Federal District. The methodology chosen for the development of this research is located in a qualitative approach. In the analysis of the data found sought is a "dialectical look" on the reality and objective, and the contradiction of the major categories of analysis of the methodology dialectic. The study is divided into three sections: the first deals with democracy, redemocratization of Brazilian society and of participation. It made a critical analysis of democracy releases and its limitations. We examined the relationship between civil society and the State, through the democratization of education. He worked with the elitist concept of democracy and participatory democracy defined by Macpherson, based on Schumpeter. Understanding participation as a central element in the achievement of a democratic process, the subject was in the same chapter. The second chapter entitled "Democratization of Education, Management and Democratic Elementary School Board made an incursion in legislation and education were analyzed diverse management and advice. The third chapter discussed concepts of community and the local community. We observed the guidelines and resolutions of the World Bank regarding education. It is the research program of Post-Graduate Education and Management at the University of Brasilia on the theme participation in school management. The research reveals that despite the community to have an established democratic principle as across educational legislation is almost unanimous by the ignorance about the same. The study concludes showing that it is possible to create new spaces for the participation of the local community and that offering him conditions, it shows interested in participating.

Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Ministerio de Planificación de Chile (MIDEPLAN) / Em nosso laboratório foi isolado um clone recombinante de T. cruzi, denominado H49, que codifica repetições de 68 aminoácidos (aa) dispostas em tandem. Estas repetições são encontradas em um antígeno imunodominante de aproximadamente 240 kDa que está envolvido na ligação do flagelo ao corpo do parasita, conhecida como zona FAZ. Este trabalho relata a caracterização da estrutura do gene e da proteína H49. Buscas no banco de dados de T. cruzi utilizando o algoritmo BLAST revelaram que as repetições de 68 aa são encontradas em uma região central de oito calpaínas-like cisteínas peptidases. Em duas dessas, as repetições H49 são altamente conservadas e organizadas em tandem. Nas outras seis calpaínas-like encontradas, as repetições eram degeneradas e podem ser separadas por pequenas seqüências não repetitivas. Essas proteínas apresentaram domínios característicos de cisteínas proteinases cálciodependente, como Cys-Pc e Calpain_III. A associação entre as seqüências H49 e calpaína foi confirmada por amplificação por PCR e análises de clones de YAC utilizando oligonucleotídeos específicos para amplificar regiões especificas de calpaína e repetições H49. O locus H49 foi mapeado no clone CL Brener utilizando uma sobreposição de clones de YAC. A associação da repetição H49 e calpaínas nos YACs foi demonstrada por PCR e por análise de restrição. Corroborando com dados obtidos, a análise por “chromoblot” revelou que as sondas H49 e calpaína hibridizam com as mesmas bandas cromossômicas. Nossos dados indicam que as repetições H49 fazem parte de um subgrupo de genes da calpaína e, portanto, denominados H49/calpaína. Recentemente uma nova família de proteínas associadas ao citoesqueleto foi descrita em Trypanosoma brucei e Leishmania. Estas proteínas são caracterizadas por sua similaridade com a região catalítica da calpaína, assim como pela presença de seqüências de aminoácidos repetidas em tandem que apresentam similaridade de 30-40% com a repetição H49. Esses resultados sugerem que a aquisição da calpaína, contendo repetições pelos tripanossomatídeos (talvez por fusão de genes) foi um evento tardio na evolução dessa família de proteínas. Para avaliar a ocorrência e a distribuição subcelular da proteína H49/calpaína em epimastigotas, diferentes domínios da calpaína e da repetição de 68 aa foram expressas em bactérias, as proteínas foram purificadas e utilizadas na imunização de coelhos e camundongos. Os anticorpos policlonais purificados foram utilizados para estudar a organização e distribuição subcelular das repetiçãos de 68 aa e calpaína em T. cruzi. Em “immunoblotting”, anticorpos contra o domínio calpaína e contra as repetições de 68 aa reagiram com uma proteína de 240 kDa presente no extrato total de epimastigotas. Anticorpos anti-calpaína reagiram com bandas adicionais de aproximadamente 170, 60 e 56 kDa que correspondem a calpaínas sem as repetições de 68 aa. Análise de imunofluorescência revelou que a proteína H49/calpaína está localizada apenas na região de adesão entre o corpo celular e o flagelo. A calpaína, além de ser encontrada no flagelo, também é encontrada no citoplasma. Além disso, a H49/calpaína associada ao citoesqueleto colocalizou com marcadores da zona de adesão flagelar (FAZ). Domínios repetitivos da H49/calpaína contem alfa hélices (“helix-turn-helix”) que poderiam estar organizadas em uma estrutura enovelada em uma estrutura “coiled-coil”. Sugerimos que as proteínas H49/calpaína formariam um homodímero que poderia ligar a membrana do flagelo à membrana do corpo celular na zona de adesão flagelar. / We have previously isolated a T. cruzi recombinant clone, termed H49, that encodes tandemly arranged repeats of 68-amino acids (aa). The repeats are found in an immunodominant antigen (~240 kDa) which is involved in the attachment of the flagellum to the cell body in the FAZ region of the parasite. Here we present further characterization of the structure of H49 gene and protein. Blast search of T. cruzi databases showed that the 68-aa repeats can be found in the central domain of 8 calpain-like cysteine peptidases. In two of them, the H49 repeats are highly conserved and arranged in tandem arrays, whereas in other calpains the repeats are degenerated and can be separated by short nonrepeat sequences. These proteins show the domains Cys-Pc and calpain_III, characteristics of calcium-dependent cysteine proteinases. The association between H49 and calpain sequences was further confirmed by PCR amplification and analysis of YAC clones using primers designed to amplify specific regions of calpain and H49 repeat. We mapped the H49 locus in clone CL Brener using YAC overlapping clones. The association of H49 and calpain in these YACs was demonstrated by PCR and restriction analysis. Consistent with this, chromoblot analysis revealed that H49 and calpain probes hybridized with the same chromosomal bands. Our data indicate that the H49 repeats are part of a subset of calpain genes, and they were termed H49/calpains. Recently, a novel family of cytoskeleton-associated proteins was described in Trypanosoma brucei and Leishmania. These proteins are characterized by their similarity to the catalytic region of calpain, and also by the presence of tandemly arranged amino acid repeats that share 30-40% similarity with H49. These results suggest that the acquisition by trypanosomatids of calpain containing repeats (maybe by gene fusion) was a relatively late event in the evolution of this family of proteins. To study the occurrence and subcellular distribution of H49/calpain protein in epimastigotes, we have expressed different domains of the calpain and the 68-aa repeats in bacteria, purified the proteins, and employed them to immunize rabbits and mice. The affinity purified polyclonal antibodies were used as probes to study the organization and subcellular distribution of 68-aa repeats and calpain in T. cruzi. Antibodies raised against the calpain domains and 68-aa repeats reacted, by immunoblot analysis, with a ~240 kDa protein in the whole epimastigote extracts. Anti-calpain antibodies reacted with additional bands of ~170, 60 and ~56 kDa which correspond to the calpain proteins without 68-aa repeats. Immunofluorescence analysis showed that H49/calpain-like protein is only localized in the region of adhesion between the cell body and flagellum. Calpain was present not only in the flagella, but it was also localized in the cytoplasm. Further, the cytoskeleton-associated H49/calpain was colocalized with markers of the flagellar attachment zone (FAZ). Repetitive domain of H49/calpains contain alpha-helices (helix-turn-helix) that could be arranged in a coiled-coil rope-like structure. We suggest that H49/calpain proteins form a homodimer that could link the flagellar membrane to the cell body membrane at the flagellar attachment zone. / BV UNIFESP: Teses e dissertações