Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Nutrição / Made available in DSpace on 2012-10-22T08:04:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 260125.pdf: 988917 bytes, checksum: e90a506cd15ac46c40554a18d75bf2f1 (MD5) / O zinco é um mineral essencial para várias funções orgânicas e está amplamente distribuído no corpo humano. Sua deficiência pode causar anorexia, cicatrização lenta, disfunções imunológicas, desordens de comportamento, entre outras conseqüências. Os alimentos diferem no seu conteúdo de zinco, sendo as ostras consideradas entre as melhores fontes. Este trabalho tem como objetivo avaliar a biodisponibilidade de zinco de dieta contendo ostras Crassostrea gigas cultivadas em região de Florianópolis, SC, em ratas (Rattus norvegicus). As ostras foram coletadas na Fazenda Marinha Atlântico Sul localizada no Ribeirão da Ilha, Baía Sul da Ilha de Santa Catarina. O ensaio biológico durou 49 dias, sendo os animais, com idade média de 50 dias, distribuídos em três grupos: G1: dieta controle (AIN-93M), G2: dieta isenta de zinco (AIN-93M modificada); G3: dieta isenta de zinco e acrescida de ostras. Ao final do experimento foram coletados os fêmures dos animais para análise do teor de zinco. Com as análises das ostras in natura, verificamos 85,21g% de umidade; 1,6g% de cinzas, 6,37g% de proteínas, 1,54g% de lipídeos; 5,28g% de carboidratos, 60,56kcal e 4,38mg% de zinco. Quanto ao teor de zinco no fêmur, os grupos G1 e G3 apresentaram elevadas concentrações (p < 0,05) quando comparados ao grupo G2, sendo em média 246,62; 221,41 e 110,12 µg/g osso, respectivamente. Estes resultados demonstram uma importante correlação entre consumo de zinco e teor de zinco no fêmur e que as ostras Crassostrea gigas, cultivadas em Florianópolis, apresentam alta biodisponibilidade de zinco.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-10-13T04:00:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334829.pdf: 1141175 bytes, checksum: 790483c51ee9852c13a77edb288beefe (MD5) Previous issue date: 2014 / Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) estão entre os principais contaminantes nos ambientes aquáticos. Dentre os HPAs, o fenantreno é um dos mais abundantes nos ambientes marinhos. Além dos danos causados ao ecossistema, a bioacumulação deste xenobiótico pelos animais pode alterar sua homeostase, através da indução de várias respostas para sua eliminação. Entre estas, está a indução de genes que codificam proteínas envolvidas com a biotransformação, defesas antioxidantes e apoptose. Mecanismos de defesas contra xenobióticos são amplamente estudados em animais vertebrados principalmente mamíferos, no entanto em invertebrados ainda existem poucas informações, comparativamente. A compreensão dos mecanismos moleculares de defesas desses animais auxiliará na sua utilização como biomarcadores de contaminação ambiental. Para esses estudos são necessários organismos modelos, como a ostra do mangue Crassostrea brasiliana, que se apresenta como um organismo sentinela adequado para avaliação e monitoramento de ambientes contaminados. Este trabalho analisa a transcrição de genes relacionados a vias de biotransformação e de defesa celular contra xenobióticos no manto desta espécie. O xenobiótico utilizado foi o HPA fenantreno, sendo realizada a exposição dos animais em duas concentrações subletais (100 µg.L-1 e 1000 µg.L-1), e três tempos de exposição (1, 5 e 10 dias). Foi observada uma indução na transcrição de genes da biotransformação de fase I (CYP2AU1, CYP2C8-like, CYP17A1-like e CYP3A-like) e genes envolvidos com a apoptose (Caspases 7, 8 e a p53), principalmente nos animais expostos na concentração de 1000 µg.L-1 de fenantreno. Os resultados observados mostram que a exposição desses animais ao fenantreno, desencadeia uma série de respostas transcricionais, evidenciando estratégias de proteção do organismo frente a uma agressão química, de forma semelhante ao que ocorre em mamíferos. Os resultados demonstram ainda que o manto apresenta respostas destes sistemas de transcrição mais tardias em relação à brânquia e a glândula.<br> / Abstract : Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are among the main contaminants in aquatic environments. Among the PAHs phenanthrene is one of the most abundant in marine environments. In addition to the damage to the ecosystem, bioaccumulation of xenobiotic by animals can change its homeostasis, by inducing several defense systems to its elimination. Among these is the induction of genes that encode proteins involved in biotransformation, antioxidant defenses and apoptosis. Defense mechanisms against xenobiotic exposure are widely studied in mammals mainly vertebrates, however in invertebrates there is little information, comparatively. Understanding the molecular mechanisms of defense of these animals will aid in their use as biomarkers of environmental contamination. Model organisms are required to run these studies, such as the mangrove oyster Crassostrea brasiliana, which is a suitable sentinel organism for evaluation and monitoring of contaminated environments. This work analyzes the transcription of genes related to biotransformation pathways and cellular defense against xenobiotics in the mantle of this species. Phenanthrene, a model PAH, was used in the exposure of the animals. Experiments were carried out using two sublethal concentrations (100 and 1000 ?g.L-1), and three exposure times (1, 5 and 10 days). Induction was observed in the transcription of genes Phase I biotransformation (CYP2AU1, CYP2C8-like CYP17A1-like and CYP3A-like), and genes involved in apoptosis (Caspases 7, 8 and p53), especially in animals exposed to the concentration 1000 ?g.L-1 phenanthrene. Our results show that exposure of these animals to phenanthrene, triggers a cascade of transcriptional responses, indicating protection strategies of the organism to a chemical aggression, similarly to what occurs in mammals. The results further demonstrate that the mantle shows later transcriptional responses than the gill and the gland when exposed to this chemical.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-09-05T04:11:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348188.pdf: 2173569 bytes, checksum: 5bc8653fa9016ac5fc0c8946e5ce7ee7 (MD5) Previous issue date: 2017 / Nrf2 (do inglês Nuclear factor erythroid 2-related factor 2) é um fator de transcrição essencial para a indução coordenada dos genes que codi-ficam enzimas de resposta ao estresse oxidativo, incluindo várias defe-sas antioxidantes e enzimas de biotransformação. Sua ação é dependente da ligação ao elemento de resposta antioxidante (ARE) na região promotora dos genes-alvo. A indução da via Nrf2/ARE oferece enorme potencial para a proteção antioxidante, no entanto, não há pesquisa sobre a ativação desta via em bivalves. Desta forma, o presente trabalho investigou a resposta antioxidante nas brânquias e glândula digestiva de ostras do Pacífico, Crassostrea gigas, tratadas com indutores da via Nrf2/ARE (curcumina ou tert-butilhidroquinona, tBHQ). Com a anotação do genoma da ostra Crassostrea gigas analisamos as regiões conservadas do gene do Nrf2 que revelou um domínio típico, a região cap 'n' colar. Os dados indicam que vários domínios, pertencentes ao modulador negativo do Nrf2 (Keap1, do inglês Kelch-like ECH-associated protein 1), também estão conservados em moluscos. Nossos estudos indicam que Nrf2 e Keap1 são conservados em ostras, pois o Keap1 apresentou um alto grau de homologia nas espécies selecionadas de moluscos e vertebrados, incluindo a presença de cisteínas redox-sensíveis que são cruciais para sua função. A análise filogenética agrupou tanto o Nrf2 quanto o Keap1 de C. gigas juntamente com outras sequências de moluscos, mas separadas de vertebrados e artrópodes. As ostras C. gigas foram expostas a 10 ou 30 µM de curcumina ou tBHQ, ativadores clássicos da via Nrf2/ARE, porém o número de cópias de mRNA de Nrf2 e Keap1 não foram modulados na brânquia. Estes dados indicam que estes compostos não modularam transcricionalmente Nrf2 ou Keap1. Apesar deste resultado negativo, a principal forma de ativação do Nrf2 envolve a oxidação das cisteínas sensíveis de seu modulador negativo (Keap1), permitindo seu acúmulo e translocação para o núcleo. Desta forma, ao analisarmos a resposta antioxidante, pode ser observada uma clara indução de defesas antioxidantes nas brânquias, as quais são sabidamente controladas pelo Nrf2. Noventa e seis horas após o início do tratamento, os animais expostos à curcumina (10 e 30 µM), tiveram um aumento nos níveis de ?-glutamil-L-cisteinilglicina (GSH), e na atividade glutationa redutase (GR), glutationa peroxidase (GPx), e glutationa S-transferase (GST). Por outro lado, a glândula digestiva não apresentou amplificação antio-xidante. Os níveis relativos de mRNA que codificam para a enzima glutamato-cisteína ligase, GR, MDR3 e GSTpi foram claramente indu-zidos pelo tratamento com curcumina (30 µM, 24 h). O pré-tratamento com curcumina durante 96 h aumentou a sobrevivência das ostras ao hidroperóxido de cumeno. Da mesma forma, ostras expostas à tBHQ por 96 h apresentaram um claro aumento nas defesas antioxidantes na brânquia e em menor intensidade na glândula digestiva. Esta resposta incluí aumento nos níveis de GSH, e na atividade GST, GPx e GR. Aumento na expressão do mRNA e proteína GR, também foram observadas após tratamento com tBHQ. Interessantemente, a diminuição na atividade GST, GPx e GR no início do tratamento (24 h) pode ser explicada pelo efeito inibitório da tBHQ ou de seus metabólitos. Esta conclusão é baseada na forte inibição in vitro da atividade GR, e em menor intensidade das atividades de GST e GPx. Apesar da ausência de aumento no mRNA do Nrf2, verificamos que: a) tanto o Nrf2 quanto o Keap1 são conservados filogeneticamente em bivalves; b) houve um aumento de defesas antioxidantes dependentes do Nrf2 após o tratamento com dois indutores clássicos do Nrf2 (curcumina ou tBHQ); c) houve uma clara modulação nos níveis de mRNA de vários genes alvos do Nrf2, e d) o tratamento com curcumina aumenta a resistência de ostras desafiadas com um oxidante. Em conjunto, estes dados indicam pela primeira vez a funcionalidade de Nrf2 em bivalves. Este trabalho apresenta novas informação sobre a via Nrf2/ARE em bivalves, as quais permitirão estudos mecanísticos relacionados as defesas antioxidantes e processos de biotransformação.<br> / Abstract : Nrf2 (Nuclear factor erythroid 2-related factor 2) is an essential transcription factor for the coordinated induction of genes encoding oxidative stress response enzymes, including several antioxidant defenses and biotransformation enzymes. Its action is dependent on the binding to the antioxidant response element (ARE) in the promoter region of the target genes. Induction of the Nrf2/ARE pathway offers enormous potential for antioxidant protection, however, there is no research on the activation of this pathway in bivalves. Thus, the present work investigated the antioxidant response in the gills and digestive gland of Pacific oysters, Crassostrea gigas, treated with inducers of the Nrf2/ARE pathway (curcumin or tert-butylhydroquinone, tBHQ). With the annotation of the genome of the Crassostrea gigas oyster we analyzed the conserved regions of the Nrf2 gene that revealed a typical domain, the cap 'n' colar region. The data indicate that several domains, belonging to the negative modulator of Nrf2 (Keap1), are also conserved in mollusks. Our studies indicate that Nrf2 and Keap1 are conserved in oysters because Keap1 presented a high degree of homology to selected species of molluscs and vertebrates, including the presence of redox-sensitive cysteines that are crucial for their function. Phylogenetic analysis grouped both the Nrf2 and Keap1 of C. gigas along with other mollusc sequences but separated from vertebrates and arthropods. C. gigas oysters were exposed to 10 or 30 µM curcumin or tBHQ, classical activators of the Nrf2 / ARE pathway, but the number of mRNA copies of Nrf2 and Keap1 were not modulated in the gill. These data indicate that these compounds do not transcriptally modulate Nrf2 or Keap1. Despite this negative result, the main form of activation of Nrf2 involves the oxidation of the sensitive cysteines of its negative modulator (Keap1), allowing its accumulation and translocation to the nucleus. Thus, when analyzing the antioxidant response, a clear induction of antioxidant defenses can be observed in the gills, which are known to be controlled by Nrf2. Ninety-six hours after initiation of treatment, animals exposed to curcumin (10 and 30 µM) had an increase in ?-glutamyl-L-cysteinyl glycine levels (GSH), and glutathione reductase (GR) activity, glutathione peroxidase (GPx), and glutathione S-transferase (GST). On the other hand, the digestive gland did not present antioxidant amplification. The relative levels of mRNA encoding glutamate-cysteine ligase, GR, MDR3 and GSTpi were clearly induced by curcumin treatment (30 µM, 24 h). Curcumin pre-treatment for 96 h increased oyster survival to cumene hydroperoxide. Likewise, oysters exposed to tBHQ for 96 h showed a clear increase in antioxidant defenses in the gill and lower intensity in the digestive gland. This response included increase in GSH levels, and in GST, GPx and GR activity. Increased mRNA and GR protein expression were also observed after treatment with tBHQ. Interestingly, the decrease in GST, GPx and GR activity at the start of treatment (24 h) may be explained by the inhibitory effect of tBHQ or its metabolites. This conclusion is based on the strong in vitro inhibition of GR activity, and on lower intensity of GST and GPx activity. Despite the lack of increase in the Nrf2 mRNA, we verified that: a) both Nrf2 and Keap1 are conserved phylogenetically in bivalves; B) there was a clear increase of Nrf2-dependent antioxidant defenses following treatment with two classic Nrf2 inducers (curcumin or tBHQ); C) there was a clear amplification at the mRNA level of various target genes of Nrf2, and d) curcumin treatment increased the resistance of oysters challenged with an oxidant. Together, these data indicate for the first time the functionality of Nrf2 in bivalves. This work presents new information about the Nrf2/ARE pathway in bivalves, which will allow mechanistic studies related to the antioxidant defenses and biotransformation processes.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-11-21T03:20:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348718.pdf: 4417703 bytes, checksum: 9a54503b0a8f2c00ba306220a1d48e10 (MD5) Previous issue date: 2017 / Ostras (Crassostrea gigas) são ricas em compostos orgânicos voláteis, que compõem o aroma característico do produto, e quando processadas parte desses compostos aromáticos são transferidos para água de cozimento. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o processo de pervaporação para recuperar os compostos orgânicos voláteis da água de cozimento de ostras. Bateladas de 7 kg de ostras frescas foram limpas em água corrente, em seguida cozidas a 100 °C por 10 minutos, para a abertura das conchas. A água do cozimento foi resfriada à temperatura ambiente, e congelada a 18 °C até a determinação dos compostos orgânicos voláteis por microextração em fase sólida do headspace (HS-SPME) e dos ensaios de pervaporação. Para o HS-SPME foi avaliado o melhor recobrimento da fibra e foram otimizadas, a partir de um planejamento experimental fatorial rotacional completo 2³ e quadruplicata no ponto central, a temperatura de extração, o tempo de extração e o tempo de dessorção. A fibra recoberta com polidimetilsiloxano e carboxeno (PDMS/CAR) apresentou o melhor desempenho com relação a área total dos compostos extraídos. A temperatura de extração e tempo de dessorção apresentaram efeito significativo negativo (p<0,05), o tempo de absorção não apresentou efeito neste mesmo nível de significância e foi determinado que os componentes estudados no processo de pervaporação seriam o triclorometano, hexanal, benzaldeído e 1-octen-3-ol..Em seguida, foi realizada pervaporação, em estado estacionário dos compostos orgânicos voláteis da solução real de água de cozimento de ostras, e em regime transiente de solução modelo contendo 10 mg mL-1 de triclorometano, hexanal, benzaldeído e 1-octen-3-ol. Para a solução real de água de cozimento de ostras, os componetes triclorometano e hexanal sofreram pouca influência da temperatura de alimentação, enquanto o benzaldeído e o 1-octen-3-ol apresentaram maiores fatores de enriquecimento em temperaturas de 30 °C e 40 °C. Os componentes estudados apresentaram maiores fatores de enriquecimento em pressões de permeado intermediárias, dentre as estudadas. Sendo assim, o processo de pervaporação apresentou-se como uma alternativa para a recuperação de compostos orgânicos voláteis na indústria de alimentos. / Abstract : Oysters (Cassostrea gigas) are rich in volatile organic compounds, which compose the characteristic aroma of the product, and when processed part of these aromatic compounds are transferred to boling water. Therefore, the aim of this work was to evaluate to recover the volatile organic compounds by pervaporation process from boiling water of oyster. 7 kg fresh oysters were cleaned in water, then cooked at 100 °C for 10 minutes, to shucked shells. Boiling water was cooled to room temperature, and frozen at 18 °C until determination of the volatile organic compounds by solid phase microextraction of the headspace (HS/SPME) and the pervaporation tests. For the HS/SPME the best coating of the fiber was evaluated and were optimized, from a complete experimental rotational factorial design 2³ and quadruplicate at the central point, the extraction temperature, the extraction time and the desorption time. Fiber coated with polydimethylsiloxane and carboxene (PDMS/CAR) presented the best performance in relation to the total area of the extracted compounds. The extraction temperature and the desorption time had a significant negative effect (p <0.05), the extraction time had no effect at this same level of significance and it was determined that the components studied in the pervaporation process would be trichloromethane, hexanal, benzaldehyde and 1-octen-3-ol. Then, the steady-state pervaporation of the volatile organic compounds of the actual boiling water of oysters solution was carried out and, in a transient solution of the model solution containing 10 mg mL-1 of trichloromethane, hexanal, benzaldehyde and 1-octen-3-ol. For the actual solution of oyster cooking water, trichloromethane and hexanal components had low influence on feed temperature, while benzaldehyde and 1-octen-3-ol showed higher enrichment factors at temperatures of 30 °C and 40 °C. The components studied presented higher enrichment factors at intermediate permeate pressures, among those studiedThus, the pervaporation process was presented as an alternative for the recovery of volatile organic compounds in the food industry.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-04-19T04:16:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337925.pdf: 2300419 bytes, checksum: 10ad6cf518af92ccb7f43f109538a3a5 (MD5) Previous issue date: 2015 / Com o objetivo de contribuir para o desenvolvimento do cultivo da ostra nativa, Crassostrea gasar, o presente estudo avaliou: na larvicultura, a influência da salinidade para o desenvolvimento embrionário e larval em laboratório; no ciclo reprodutivo, os estágios de desenvolvimento de indivíduos cultivados em clima tropical da Região Nordeste e em clima temperado na Região Sul; no desempenho zootécnico, o crescimento (peso e altura) e a sobrevivência de exemplares cultivados nos estados do Maranhão e de Santa Catarina. Na larvicultura, os melhores resultados na fertilização, desenvolvimento embrionário e desenvolvimento larval, foram obtidos na salinidade 28. O ciclo reprodutivo da espécie apresentou padrões distintos no clima tropical do Nordeste e no clima temperado do Sul, atribuído aos padrões distintos de temperatura. Os indivíduos cultivados no Nordeste apresentaram ciclo reprodutivo intermitente, com desovas ao longo do ano e com raros indivíduos em estágio de repouso. Nos indivíduos cultivados no Sul, o período de desova foi associado ao aumento da temperatura da água e ocorreu ao final da primavera e durante o verão. No Sul, o estágio de repouso foi bem evidente nos meses mais frios, quando mais de 75% dos exemplares amostrados encontrava-se neste estágio. Em relação ao desempenho zootécnico, o crescimento dos indivíduos cultivados em Santa Catarina foi superior ao observado no Maranhão e foi atribuído às condições ambientais e as estruturas de cultivo. A sobrevivência observada nos dois estados foi adequada para o cultivo de moluscos bivalves e o tempo de cultivo considerado ideal foi de 8 meses, quando ocorreu a maior porcentagem de animais em tamanho comercial mínimo nos pontos considerados adequados para o cultivo.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339434.pdf: 2719509 bytes, checksum: bd400b01d68d5565370890e234a8a6e0 (MD5) Previous issue date: 2016 / Ostras são organismos de ampla relevância econômica e ecológica. Contudo, mortalidades massivas de ostras têm aumentado em frequência e distribuição geográfica ao redor do mundo. Desta forma, estudos básicos a respeito da biologia desses animais, incluindo seus sistemas de defesa, são de fundamental importância. O presente trabalho investigou a presença de patógenos de bivalves em ostras cultivadas em Santa Catarina, os quais têm sido associados a mortalidades de ostras em outros países (Estudo 1). Além disso, buscou-se compreender melhor a respeito da relação entre os sistemas antioxidante e imune de ostras (Estudos 2 e 3). No Estudo 1, ostras do Pacífico Crassostrea gigas e nativas C. gasar (= C. brasiliana)foram coletadas ao longo da costa de Santa Catarina e avaliadas quanto à presença do vírus Ostreid herpesvirus 1 (OsHV-1) e das bactérias Vibrio aestuarianus e V. splendidus. Análises moleculares revelaram amostras positivas para V. splendidus (15 %) e OsHV-1 (28 %), sendo confirmadas por análises de sequenciamento. Este foi o primeiro trabalho demonstrando a presença de bactérias e vírus potencialmente patogênicos em ostras na costa brasileira, servindo de alerta para que medidas preventivas sejam adotadas para evitar o surgimento de mortalidades massivas de ostras no país. No Estudo 2, hemócitos de ostras C. gigas foram expostos ao agente eletrofílico 1-cloro-2,4-dinitrobenzeno (CDNB). O CDNB não afetou a viabilidade mitocondrial, entretanto, diminuiu a estabilidade da membrana lisossomal dos hemócitos (= 12,5 µM). O CDNB causou um forte distúrbio no sistema antioxidante, promovendo depleção da glutationa (= 0,1 µM) e inibição das enzimas glutationa redutase (2,5 e 50 µM) e tioredoxina redutase (50 µM). Importantes funções desempenhadas pelos hemócitos (adesão, fagocitose e produção de espécies reativas de oxigênio após imunoestimulação) foram comprometidas somente por 50 µM de CDNB. Os resultados indicam que a depleção total de glutationa não afeta a imunocompetência dos hemócitos, porém ocorre mediante uma inibição adicional de tiol redutases. No Estudo 3, a importância da glutationa para o sistema imune das ostras foi avaliada utilizando-se butionina sulfoximina (BSO), inibidor da síntese de glutationa. Ostras C. gigas foram expostas via intramuscular ao BSO (15 µmol/animal) por 1, 2 3 ou 6 dias, sendo observados menores níveis de glutationa (21-46 %) nas brânquias, glândula digestiva e hemócitos. O tratamento de 3 dias não afetou o hemograma das ostras, nem a viabilidade e capacidade de adesão e fagocitose dos hemócitos. Contudo, aumentou significativamente a susceptibilidade das ostras ao patógeno V. anguillarum (33 %), e de forma marginalmente significativa às espécies V. alginolyticus e V. harveyi. A depleção parcial da glutationa também aumentou a susceptibilidade das ostras ao peróxido de hidrogênio e hidroperóxidode cumeno. Os Estudos 2 e 3 sugerem que a glutationa não é indispensável para a função dos hemócitos, porém, quando outros componentes do sistema antioxidante são afetados, ou quando um segundo fator de estresse é aplicado, a homeostase destas células ou do organismo é comprometida. De forma geral, estes estudos básicos abrem caminho para vários outros nas áreas de aquicultura e ecotoxicologia, e contribuem para uma melhor compreensão dos mecanismos envolvendo respostas imunes e antioxidantes de bivalves. <br> / Abstract: Oysters are organisms that play important role economically andfor the natural ecosystems. However, oyster massive mortalities have increased in intensity and geographic distribution worldwide. Therefore, studies aiming basic knowledge regarding the biology of oysters are pivotal, especially regarding their defense mechanisms.Thus, the aim of this study was to investigate the presence of oyster pathogens in Santa Catarina, Brazil, which have been associated to oyster massive mortalities in other countries (study 1). Moreover, another aim was tocontribute to basic knowledge regarding the interrelationship of the immune and antioxidant system in oysters (studies 2 and 3). For the 1st study, Pacific oysters Crassostrea gigas and native oysters C. gasar (=C. brasiliana) were collected throughout the coast of Santa Catarina, and the presence of the virus Ostreid herpesvirus (OsHV-1), and the bacteria Vibrio aestuarianus and V. splendidus were evaluated. PCR analyses revealed positive samples for V. splendidus (15 %) and OsHV-1 (28 %), which was confirmed by sequencing analyses. This was the first study to investigate viral and bacterial pathogens to oysters in Brazil, and enlightens the need of preventive measures to be undertaken in order to avoid oyster massive mortalities in Santa Catarina. For the 2nd study, C. gigas hemocytes were in vitro exposed to the electrophilic agent 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB). CDNB did not affect hemocyte mitochondrial viability, however decreased lysosomal membrane stability (=12.5 µM).CDNB strongly affected hemocyte antioxidant system by depleting glutathione (=0.1 µM) and by decreasing the activity of the enzymes glutathione reductase (2.5 and 50 µM) and thioredoxin reductase (50 µM). Hemocyte function (adhesion, phagocytosis, and reactive oxygen species production upon immunostimulation) were jeopardized only with CDNB 50 µM. These results revealed that total glutathione depletion does not affect hemocyte immunocompetence, however this may occur upon inhibition of thiol reductases. For the 3rd study, the importance of glutathione to the immune system of oysters was investigated by using butionine sulfoximine (BSO), an inhibitor of the glutathione synthesis.Oysters C. gigas were exposed to BSO through intramuscular injections (15 µmol/animal/day) for 1, 2, 3 or 6 days, which promoted reduced glutathione levels (21-46 %) in the gills, digestive gland and hemocytes. The injection protocol of 3 days did not affect oyster hemogram, hemocyte viability, adhesion and phagocytosis. Nevertheless, it significantly increased oyster susceptibility to the pathogenV. anguillarum (33 %), while only a trend was observed for thespeciesV. alginolyticusandV. harveyi. Glutathione partial depletions also increased oyster susceptibility to cumene and hydrogen peroxides. Studies 2 and 3 suggest that glutathione is not imperative for hemocyte function, however when other components associated to the antioxidant system are affected, or when a second stress challenge is applied, these cells or the whole organism homeostasis is impaired.Overall, these basic studies can make way for many others in the field of aquaculture and ecotoxicology, and contribute to a better understanding of the mechanisms guiding the immune and antioxidant responses of bivalves.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-01-03T03:16:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 343104.pdf: 1046670 bytes, checksum: e9b58b4bd161b934fec770a523f5127f (MD5) Previous issue date: 2016 / O objetivo deste trabalho foi isolar cepas de bactérias da gônada e da parte final do intestino de Crassostrea gigas e avaliar sua utilização como probiótico na Crassostrea gasar desafiada com Vibrio parahaemolyticus a fim de melhorar a resposta imune de ostras adultas e a sobrevivência das larvas após desafio experimental. Apenas duas cepas de bactérias foram isoladas, uma a partir da gônada (Enterococcus faecium) e outra do intestino (Enterococcus durans), que seguiram para testes in vitro de antagonismo, taxa de crescimento, tempo de duplicação e contagem de células viáveis. Quanto a eventuais melhorias nos parâmetros imunológicos, microbiológicos e histológicos, as cepas de E. faecium e de E. durans foram aplicadas na água na concentração de 105 UFC ? mL-1 durante 15 dias para ostras adultas da espécie C. gasar, alimentadas com Chaetoceros muelleri. Enterococcus durans foi a única cepa utilizada para a sobrevivência das larvas "D". As larvas foram divididas em quatro grupos, Controle, tratado com E. durans, Controle desafiado com Vibrio parahemolyticus e E. durans desafiado com V. parahemolyticus. E. durans apresentou melhores resultados in vitro. Análises imunológicas das ostras demonstraram que a aplicação das cepas de E. durans mostrou maior título aglutinante e atividade de fenoloxidase após 15 dias de tratamento do que o grupo controle e o grupo tratado com E. faecium. A aplicação de E. faecium e Enterococcus durans promoveu o aumento do número de bactérias heterotróficas totais e ácido-láctica totais. A sobrevivência das larvas tratadas com o E. durans mostrou-se maior do que dos demais grupos. Tendo isso em vista, a cepa probiótica com o maior potencial para a cultura de C. gasar é a E. durans.<br> / Abtsract : The aim of this work was to isolate strains of bacteria from the gonad and final part of the intestine of Crassostrea gigas and evaluate its use as probiotic on Crassostrea gasar challenged with Vibrio parahaemolyticus, in order to improve the immune response of adult oysters and larval survival after experimental challenge. Only two bacterial strains were isolated, one from the gonad (Enterococcus faecium) and the other from the intestine (Enterococcus durans), which were followed by in vitro tests of antagonism, growth rate, doubling time and viable cell count. Towards possible improvements in the immune, microbiological and histological parameters, E. faecium (TG) and E. durans (TI) strains were enforced in water at a concentration of 105 CFU ? mL-1 during 15 days for adult oysters of the specie C. gasar which were fed with Chaetoceros muelleri. E. durans was the only strain used for larval survival "D". The larvae were divided into four groups, Control, treated with E. durans, Control challenged with Vibrio parahemolyticus and E. durans challenged with V. parahemolyticus. The strain that showed best in vitro results was E. durans bacteria. Immunological analyzes of oysters demonstrated that the application of E. durans strain showed higher binding capacity and phenoloxidase activity after 15 days of treatment than control groups and the one treated with E. faecium. The application of E. faecium and E. durans increased the numbers of total heterotrophic bacteria and the total lactic acid. The survival of the larvae treated with E. durans showed higher than that of other groups. In view of this, the probiotic strain with the highest potential for the cultivation of C. gasar is E. durans.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-03-21T04:16:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344616.pdf: 1331771 bytes, checksum: 5d1aa9c3e16128f0ff047cc162a8399b (MD5) Previous issue date: 2016 / Na lista das doenças de declaração obrigatória da Organização Internacional de Epizootias, da Organização Mundial de Saúde Animal, duas enfermidades são causadas pelo protozoário do gênero Perkinsus: Perkinsus olseni e Perkinsus marinus, que causam grande mortalidade em ostras. Os primeiros registros de Perkinsus na costa brasileira foram em ostras nativas no litoral da Bahia, Ceará e Paraíba, estados do Nordeste do Brasil. O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de Perkinsus em ostras Crassostrea gigas e Crassostrea gasar do litoral de Santa Catarina. Foram escolhidos ao longo do litoral catarinense seis pontos de coleta e realizadas sete amostras de 30 animais para cada espécie, no período de janeiro 2013 a dezembro de 2014. A metodologia de diagnóstico incluiu exames macro e microscópicos, com tecidos fixados em solução de Davidson, inclusão em parafina, cortes de 5 µm e coloração HHE. Foi realizada cultura de amostras de brânquias e reto em meio fluido tioglicolato (RFTM) e confirmação de resultados por amplificação de 16s RNA. Os resultados de RFTM mostraram Perkinsus spp. infectando Crassostrea gasar em Balneário Barra do Sul, com prevalência variando de 26,7 a 70,0% e 96,6% em São Francisco do Sul. Também houve diagnóstico positivo em Crassostrea gigas, com prevalência de 43,3%, em ostras coletadas em São Francisco do Sul. Os resultados moleculares confirmaram Perkinsus marinus infectando Crassostrea gigas e Crassostrea gasar dessa última localidade e Perkinsus beihaiensis em Crassostrea gasar de Balneário Barra do Sul. Este resultado é o primeiro relato do protozoário Perkinsus marinus infectando Crassostrea gigas na América do Sul.<br> / Abstract : Among the mandatory reporting diseases from the list of International Organisation of Epizootics, by World Organisation for Animal Health (OIE) for mollusks, two are caused by the protozoan of the genus Perkinsus: Perkinsus olseni and Perkinsus marinus, protozoan that causes massive oyster mortality. The first reports of Perkinsus in the Brazilian coast were related to native oysters from Brazilian Northeast coast, Bahia, Ceará and Paraíba states. This study aimed to verify the occurrence of Perkinsus in oyster species Crassostrea gigas and Crassostrea gasar, present in Santa Catarina's coast. Those species were chosen in six collection points along the coast of Santa Catarina. Seven samples of 30 animals for each species were collected from January 2013 to December 2014. The diagnostic methodology includes macro and microscopic examinations, using tissues fixed in Davidson solution, embedded in paraffin, with 5 µm cuts, and HHE coloring. The culture of gills and rectum samples was performed inside thioglycolate fluid (RFTM), and results were confirmed by amplification of 16S RNA. The RTFM results demonstrated prevalence of Perkinsus spp. infecting Crassostrea gasar ranging from 26,7% to 70,0% for Balneário Barra do Sul and 96,6% from São Francisco do Sul. Positive diagnoses were detected on the Crassostrea gigas, with the prevalence of 43,3%, for animals collected from São Francisco do Sul. The molecular results also detected Perkinsus marinus infecting Crassostrea gigas and Crassostrea gasar from São Francisco do Sul samples and Perkinsus beihaiensis infecting Grassostrea gasar from Balneário Barra do Sul samples. Those results are the first report of protozoa Perkinsus marinus infecting Crassostrea gigas at South America.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Gradução em Aquicultura, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-03-28T04:12:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344615.pdf: 1498770 bytes, checksum: 7371a9ece4e97dafc112339e40b45180 (MD5) Previous issue date: 2016 / O estudo teve como objetivos a produção de ostras do Pacífico (Crassostrea gigas) tetraploides, utilizando choques de indução com 6-dimetilamino-purina (6-DMAP) e térmico (25-36º C), em substituição à citocalasina-B (CB), em embriões diploides, no momento da saída do primeiro corpúsculo polar. Além disso, o estudo buscou um melhor entendimento sobre o desempenho zootécnico obtido com o cultivo de ostras triploides em diferentes locais nas Baías Norte e Sul da ilha de Santa Catarina, avaliando parâmetros como peso fresco total, altura e sobrevivência (experimentos I, II e III) e ainda aspectos reprodutivos, como índice de condição e histologia desses organismos quando expostos às condições de cultivo no sul do Brasil. Os resultados obtidos com a indução a tetraploidia em ostras do Pacífico foram promissores, obtendo-se larvas tetraploides em todos os tratamentos testados, sendo indicada a substituição da CB pelos outros tratamentos (6-DMAP e temperatura). Na análise de desempenho zootécnico de ostras triploides, em ambos os experimentos as ostras triploides mostraram melhores resultados que às ostras diploides em peso fresco total e altura no período de verão. Quanto a sobrevivência, as ostras triploides foram superiores às ostras diploides apenas no experimento I, não havendo diferença estatística ao final dos experimentos II e III. Já as análises dos índices de condição de ostras triploides apresentaram um padrão semelhante ao encontrado para ostras diploides, apresentando os maiores valores durante o mês de agosto de 2015 e os menores em fevereiro de 2016 para ostras 2N e 3N em ambos locais de cultivo. Já na histologia, as ostras 3N apresentaram um padrão semelhante às ostras 2N quanto ao ciclo reprodutivo, indicando que as potenciais melhorias encontradas para ostras 3N no Brasil não estão ligadas apenas à diminuição da atividade reprodutiva desses organismos e sim a outros fatores que precisam ser avaliados em posteriores estudos.<br> / Abstract : The study aimed to the production of Pacific oysters (Crassostrea gigas) tetraploid, using induction shocks with 6-dimethylamino-purine (6-DMAP) and heat (25-36º C), replacing cytochalasin-B (CB) in diploid embryos, the output of the first polar body. In addition, the study sought a better understanding of the growth performance achieved by growing triploid oysters at different locations in the bays north and south of the island of Santa Catarina, evaluating parameters such as the total fresh weight, height and survival (experiment I, II and III), and even reproductive aspects, as a condition index and histology of these organisms when exposed to growing conditions in southern Brazil. The results obtained with the induction tetraploidy in Pacific oysters were promising, yielding tetraploid larvae in all treatments, with the substitution indicated by CB other treatments (6-DMAP and temperature). In the production performance analysis of triploid oysters, in both experiments triploid oysters were higher than diploid oysters in the total fresh weight and height in the summer period. As for survival, the triploid oysters were higher than diploid oysters only in experiment I, with no statistical difference at the end of the experiments II and III. As for the analysis of the index condition of triploid oysters showed a pattern similar to that for diploid oysters, with higher rates during the month of August 2015 and the lowest in February 2016 for 2N and 3N oysters in both cultivation sites. As for histology, the 3N oysters showed a pattern similar to 2N oysters on the reproductive cycle, indicating that potential improvements found for 3N oysters in Brazil are not linked just to decreased reproduction of these organisms but the other factors that need to be evaluated in later studies.

Resumo: A sucessão da carcinofauna vágil foi estudada nas lanternas de ostreicultura localizada no estuário do Rio Pinheiros, Baía de Guaratuba, PR. Adicionalmente, foi descrito o crescimento relativo do caranguejo mais abundante desta fauna, Acantholobulus schmitti (Rathbun, 1930). Para tal, foi analisado um total de 11 lanternas, com durações sazonal (1, 5 e 9 meses) e quinzenal de inverno e verão (15, 30 e 45 dias). Os crustáceos foram obtidos manualmente (de maior porte) e por lavagem das lanternas e das ostras (de menor porte) com jatos de baixa pressão. Os caranguejos Petrolisthes armatus e Acantholobulus chmitti, o camarão-de-estalo Alpheus bouvieri e o anfípodo Corophium acherusicum foram os mais abundantes nas lanternas sazonais. Já para as lanternas quinzenais de inverno e verão, A. schmitti e os anfípodos C. acherusicum e Stenothoe sp. foram os mais abundantes. Estas espécies, também, foram as pioneiras e a colonização das lanternas pelas mesmas foi rápida, num período de menos de 15 dias. Em ambas as durações, sem manejo, houve um aumento na abundância e na diversidade de espécies com o passar do tempo. Embora a participação destes animais no peso total das lanternas tenha sido insignificante, a presença de caranguejos de porte médio como P. armatus e A. schmitti pode afetar na produtividade das ostras. Para o crescimento relativo de A. schmitti foi mensurado um total de 1.070 exemplares de A. schmitti registrados nas lanternas de ostreicultura, dos quais, 532 foram machos, 308 fêmeas e 230 fêmeas ovígeras. A largura da carapaça (LC) média para machos adultos foi de 7,06 ± 1,96 mm, enquanto para as fêmeas foi de 5,95 ± 1,13 mm. A heteroquelia ocorreu em ambos os sexos, sendo o quelípodo direito maior que o esquerdo. Esta diferença pode estar relacionada à maior probabilidade de erda de quelípodos em machos, em função da maior quantidade de interações agonísticas a que estes últimos estão submetidos. A população de A. schmitti, da Baía de Guaratuba amadurece sexualmente mais cedo do que as do litoral de São Paulo e encontra nas lanternas de ostreicultura um hábitat seguro para viver integralmente a fase bentônica de seu ciclo de vida.