FERREIRA, L. P. Diagnóstico e infecção experimental por Perkinsus beihaiensis em anomalocardia brasiliana (MOLLUSCA:BIVALVIA) no Estado do Ceará.. 2013. 61 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Marinhas Tropicais) - Instituto de Ciências do Mar, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013 . / Submitted by Geovane Uchoa (geovane@ufc.br) on 2016-04-07T14:38:54Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lpferreira.pdf: 1374005 bytes, checksum: 80f9e7531dfa6f2d25a1fb94f33ff1a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid (nadsa@ufc.br) on 2016-04-18T18:45:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lpferreira.pdf: 1374005 bytes, checksum: 80f9e7531dfa6f2d25a1fb94f33ff1a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T18:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lpferreira.pdf: 1374005 bytes, checksum: 80f9e7531dfa6f2d25a1fb94f33ff1a2 (MD5) Previous issue date: 2013 / Perkinsiosis is a disease caused by protozoa of the genus Perkinsus and causes massive mortality in several species of commercial bivalve mollusks, mainly in Europe and United States. Thus, the present study aimed to verify the occurrence of Perkinsus in the cockle Anomalocardia brasiliana (Veneridae) from a natural population and evaluate the impact of an experimental challenge with Perkinsus beihaiensis in this host. Specimens of A. brasiliana were collected in the Timonha River estuary (West coast of Ceará) in March 2012 (n= 150) and submitted to the diagnosis of Perkinsus spp. by tissues incubation of gills and rectum in Ray’s Fluid Thioglicollate Medium (RFTM). The confirmation of the genus Perkinsus was done by PCR analyzes (ITS) and subsequent sequencing. The RFTM showed the presence of hypnospores of Perkinsus infecting the tissues of the animals, with a prevalence of 14.7% (22/150) and intensity of infection ranging from very mild (n= 18) to mild (n= 4). Analyzes of PCR and sequencing confirmed that this species is Perkinsus beiahiensis. So this is the first record of this species in A. brasiliana. In order to assess the impact of an experimental challenge with P. beiahiensis in cockles from the Jaguaribe River estuary (east coast of Ceará), animals (n= 6) were distributed in 12 tanks (6 controls and 6 treatments). A cell suspension of hypnospores of P. beihaiensis was prepared from tissues of Crassostrea rhizophorae naturally infected. The tissues were incubated in RFTM to obtain a suspension of hypnospores. The animals of the treatment group were challenged by injection of 100μl of cell suspension of the parasite (125 cells) into the paleal cavity and the control animals received 100μl of sterile filtered seawater (AMFE). The challenge lasted 30 days and samples of cockles were collected in the 15th (n= 25) and 30th (n= 41) day after injection for pathological analyzes (RFTM, histology and PCR). The mortality of the animals was recorded daily. Mortalities occurred only during the first 15 days of the experiment (n = 6, of the treatment group), but it was not detected Perkinsus sp. in these animals. From the animals collected in the 15th day, 8 of 17 (control group, 47%) and 2 of 14 (treatment group, 14.3%) had hypnospores of Perkinsus sp. (RFTM) with intensities of infection ranging from very mild to mild, greater in the treatment group than in the control group. From the animals collected in the 30th day, 4 of 19 (control group, 21%) and 4 of 22 (treatment group, 18.2%) were diagnosed as infected with Perkinsus sp., with intensities of infection ranging from very mild to mild, higher in the treatment group than in the control group. The histopathological analyzes confirmed the presence of cells of Perkinsus sp. infecting the organs of the cockles in the two groups, but the treatment group was the only one with cells being phagocytosed The proliferating cells of Perkinsus sp. occurred in both groups. PCR analyzes confirmed the presence of Perkinsus sp. in 4 of 6 animals analyzed (66.7%). This work revealed that the cockle A. brasiliana already is a natural host of Perkinsus beihaiensis, and a challenge with cells isolated from P. beihaiensis causes induction to infection, but the host recovers itself quickly and efficiently activating defense mechanisms. / A perkinsiose é causada por protozoários do gênero Perkinsus e causa mortalidades massivas em diversos moluscos bivalves comerciais, principalmente na Europa e nos Estados Unidos. O presente trabalho teve como primeiro objetivo verificar a ocorrência de Perkinsus em Anomalocardia brasiliana (Veneridae) de uma população natural do Rio Timonha, litral oeste do Ceará. Os espécimes (n=150) foram coletados em março de 2012 e submetidos ao diagnóstico de Perkinsus spp. por incubação de tecidos das brânquias e do reto em meio líquido de tioglicolato de Ray (RFTM). A confirmação do gênero foi feita por análises de PCR (ITS) e posterior sequenciamento. A RFTM mostrou a presença de hipnósporos de Perkinsus infectando os tecidos de A. brasiliana, com uma prevalência de 14,7% e com intensidades de infecção variando de Muito Leve (n = 18) a Leve (n = 4). As análises da PCR e do sequenciamento confirmaram tratar-se de Perkinsus beiahiensis. Este é o primeiro registro desta espécie em A. brasiliana. O segundo objetivo do estudo foi avaliar o impacto de um desafio experimental com P. beiahiensis neste hospedeiro. Para tal, foram coletados 72 exemplares no Estuário do Rio Jaguaribe (litoral leste do Ceará), que foram distribuídos em 12 tanques (6 controles e 6 tratamentos). Uma suspensão celular de hipnóporos de P. beihaiensis foi preparada a partir de tecidos de ostras Crassostrea rhizophorae naturalmente infectadas, a partir de incubação em RFTM. Os animais do grupo tratamento foram desafiados por injeção na cavidade palial de 100 μl da suspensão celular do parasita (125 células) e os animais controle receberam 100 μl de água do mar filtrada estéril (AMFE). O desafio durou 30 dias e amostras de búzios foram coletadas no 15º (n = 25) e 30º (n = 41) dias após injeção, para análises patológicas (RFTM, histologia e PCR). Mortalidades ocorreram somente em 16,7% dos animais do tratamento, mas não foi detectado Perkinsus sp. nestes animais. Dos animais coletados para RFTM no 15º dia, 47% do controle e 14,3% do tratamento apresentaram hipnósporos de Perkinsus sp., com intensidades de infecção variando de muito leve a leve. Dos animais coletados no 30° dia, 21% do controle e 18,2% do tratamento estavam infectados por Perkinsus sp., com intensidades de infecção variando de muito leve a leve. As análises histopatológicas confirmaram a presença de Perkinsus sp. infectando os órgãos de A. brasiliana nos dois grupos, no entanto somente o grupo tratamento apresentou células sendo fagocitados, ao passo que células em proliferação de Perkinsus sp. ocorreram nos dois grupos. As análises de PCR confirmaram a presença de Perkinsus sp. em 66,7% dos animais analisados (n = 6). Este estudo é o primeiro registro de P. beiahiensis em A. brasiliana. A etapa experimental evidenciou que este já é um hospedeiro natural deste patógeno e que um desafio com celulas isoladas de P. beihaiensis induz a infecção, no entanto o hospedeiro se recupera de forma rápida e eficiente mediante a ativação de mecanismos de defesa.

DANTAS NETO, M.P. Patógenos na ostra Crassostrea rhizophorae de estuários da costa setentrional do Nordeste Brasileiro. Fortaleza, 2015. 115 f. Tese (Doutorado em Ciências Marinhas Tropicais) - Instituto de Ciências do Mar, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza 2015. / Submitted by Geovane Uchoa (geovane@ufc.br) on 2016-05-11T13:53:34Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_mpdantasneto.pdf: 1775467 bytes, checksum: f86d0072bf76b81a183fbcbaeb691e67 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid (nadsa@ufc.br) on 2016-06-10T15:08:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_mpdantasneto.pdf: 1775467 bytes, checksum: f86d0072bf76b81a183fbcbaeb691e67 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-10T15:08:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_mpdantasneto.pdf: 1775467 bytes, checksum: f86d0072bf76b81a183fbcbaeb691e67 (MD5) Previous issue date: 2015 / Bivalve mollusks, including oysters, can be affected by a wide variety of pathogens which may be causative agents of diseases. Among these etiological agents are viruses, bacteria, protozoa and metazoa. In Northeastern Brazil, the oyster Crassostrea rhizophorae is an estuarine resource often exploited by coastal communities and therefore studies that evaluate the health status of this mollusk are important. This study aimed to investigate the occurrence of parasites in three significant estuaries of Northeastern Brazil: Jaguaribe (Ceará), Camurupim (Piauí) and Carnaubeiras (Maranhão). The collections of C. rhizophorae in each estuary were held in August and September of 2011 (dry season; N= 450); March, April (rainy season; N= 450), October and November (dry season; N= 450) of 2012 and May and June (rainy season; N= 450) of 2013, totaling 1800 animals. The techniques used for pathogens detection were culture in Ray’s fluid thioglycollate medium (RFTM), polymerase chain reaction, (PCR), sequencing and histology. The first analyses were held with oysters collected in 2011. The RFTM assays revealed Perkinsus with the follow prevalences: Jaguaribe= 17.3%, Camurupim= 5.3%, Carnaubeiras= 10.6%. The intensity of infection ranged from very light to severe in the three estuaries. PCR analyzes confirmed Perkinsus sp. in 6 oysters and histology confirmed 21 cases. Histological analyses of oysters in all collection periods (2011, 2012 and 2013) evidenced hypertrophy of male gametes, Rickettsia-type bacteria and protozoa of genera Sphenophrya, Ancistrocoma, Steinhausia and Nematopsis and metazoa of genera Urastoma, Tylocephalum and Bucephalus, and yet an unidentified metazoa. Hypertrophy of gametes occurred in Carnaubeiras (3.3%). Bacteria Rickettsia were present in the three estuaries (rainy and dry season) with prevalences ranging from 30 to 80%. The prevalences of Sphenophrya sp., Ancistrocoma sp., and Steinhausia sp. were generally low. Two oysters presented cellular hypertrophy (xenoma) caused by Sphenophrya sp. Nematopsis sp. prevalences were high (up to 100%) and low in metazoa (3.3 to 10%). The intensities of infection were low to all found pathogens. In oysters collected in 2012 and 2013, the highest prevalence observed in RFTM was 34% in the estuary of Carnaubeiras River during the rainy season of 2013. PCR assays confirmed 29.89% (87/291) of positive results in RFTM. The sequencing of the amplified fragments from the ITS region of Perkinsus confirmed the presence of three species infecting C. rhizophorae in the region: P. beihaiensis, P. marinus and P. chesapeaki. Phylogenetic analyzes place the species P. chesapeaki identified in this study in a well-defined grouping with other isolates from the USA and the Mediterranean. This is the first record of P. chesapeaki infecting C. rhizophorae in South America. Considering these findings, it is recommended a constant monitoring of the health status of populations of oysters from this and other regions of Northeastern Brazil. / Os moluscos bivalves, incluindo as ostras, podem ser afetados por uma grande diversidade de patógenos, os quais podem vir a causar enfermidades. Entre estes agentes etiológicos, estão os vírus, bactérias, protozoários e metazoários. Na região nordeste do Brasil, a ostra Crassostrea rhizophorae é um recurso estuarino bastante explotado pelas comunidades ribeirinhas e, portanto, estudos que avaliem o estado de saúde desse molusco são importantes. Este trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de parasitas em três importantes estuários do nordeste brasileiro: Jaguaribe (Ceará), Camurupim (Piauí) e Carnaubeiras (Maranhão). As coletas de C. rhizophorae em cada estuário foram realizadas nos meses de agosto e setembro de 2011 (período seco; N=450); março, abril (período chuvoso; N=450), outubro e novembro (período seco; N=450) de 2012 e maio e junho (período chuvoso; N= 450) de 2013, totalizando 1.800 animais. As técnicas utilizadas para a detecção dos patógenos foram: cultivo em meio fluido de tioglicolato de Ray (RFTM), reação em cadeia da polimerase (PCR), sequenciamento e histologia. As primeiras análises foram realizadas com as ostras coletadas em 2011. Os ensaios de RFTM revelaram Perkinsus sp. com as seguintes prevalências: Jaguaribe = 17,3%, Camurupim = 5,3% e Carnaubeiras = 10,6%. A intensidade de infecção variou de muito leve a severa nos três estuários. As análises de PCR confirmaram Perkinsus sp. em 6 ostras e a histologia confirmou 21 casos. As análises histológicas das ostras de todo o período de coletas (2011, 2012 e 2013) evidenciaram hipertrofia dos gametas masculinos, bactérias do tipo Rickettsia, protozoários dos gêneros Sphenophrya, Ancistrocoma, Steinhausia e Nematopsis e metazoários dos gêneros Urastoma, Tylocephalum e Bucephalus, além de um metazoário não identificado. A hipertrofia de gametas ocorreu em Carnaubeiras (3,3%). Bactérias Rickettsia estiveram presentes nos três estuários (período chuvoso e seco), com prevalências variando de 30 a 80%. As prevalências de Sphenophrya sp., Ancistrocoma sp. e Steinhausia sp. foram geralmente baixas. Duas ostras apresentaram hipertrofia celular (xenoma), causada por Sphenophrya sp. As prevalências de Nematopsis sp. foram elevadas (até 100%) e dos metazoários baixas (3,3% a 10%). As intensidades de infecção foram baixas para todos os patógenos encontrados. Nas ostras coletadas em 2012 e 2013, a maior prevalência de Perkinsus spp. observada em RFTM foi de 34%, no estuário do Rio Carnaubeiras, durante o período chuvoso de 2013. Os ensaios por PCR confirmaram 29,89% (87/291) dos resultados positivos em RFTM. O sequenciamento dos fragmentos amplificados da região ITS de Perkinsus confirmou a presença de três espécies do patógeno infectando C. rhizophorae na região: P. beihaiensis, P. marinus e P. chesapeaki. Análises filogenéticas colocam a espécie P. chesapeaki identificada neste estudo em um grupamento bem definido com outros isolados dos EUA e do Mediterrâneo. Este é o primeiro registro de P. chesapeaki infectando C. rhizophorae na América do Sul. Considerando os resultados obtidos, é aconselhável um monitoramento constante sobre o estado de saúde de populações de ostras desta e de outras regiões do Nordeste brasileiro.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-04-11T04:14:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344834.pdf: 2411870 bytes, checksum: f88c5e95c25f9cfc02d5ceb61ce261b4 (MD5) Previous issue date: 2016 / A ostra perlífera Pteria hirundo possui um grande potencial para a aquicultura nacional, pois além de apresentar potencialidade para o consumo, essa espécie possui a capacidade de produzir pérolas. Apesar do seu potencial para cultivo, pouco ainda se conhece a respeito da sua fisiologia e sistema imune. O presente estudo teve por objetivo identificar e caracterizar morfológica e ultraestruturalmente os hemócitos de P. hirundo, bem como identificar as populações hemocitárias e avaliar algumas respostas celulares e humorais de defesa frente a uma infecção bacteriana. Três populações de hemócitos foram encontradas: hemócitos hialinos (HH), hemócitos granulares (HG) e células blásticas (CB). A população mais abundante na circulação foi a de HH (88,2%), que se caracterizaram pela presença de poucos a nenhum grânulo em seu citoplasma, seguida pelos HG (9,4%) com muitos grânulos grandes e elétron-lúcidos no citosol, e as CB (2,4%) que foram os menores hemócitos e se caracterizaram por possuir forma esférica e uma alta razão núcleo-citoplasma. Três diferentes subpopulações de HH foram identificadas (HH-1, HH-2 e HH-3), apresentando diferenças quanto ao tamanho celular e à complexidade interna. Os hemócitos apresentaram uma elevada capacidade fagocítica ex vivo de partículas inertes (38,5% dos hemócitos avaliados). Além disso, essas células mostraram-se aptas a produzir moléculas microbicidas como as espécies reativas de oxigênio (ERO), porém esta produção não foi induzida por lipopolissacarídeos (LPS) bacterianos. Os principais produtores deste composto microbicida foram os HH-1, HG e HH-3. A presença de moléculas aglutinantes na hemolinfa de ostras previamente desafiadas com a Vibrio alginolyticus foi demonstrada por meio da aglutinação in vitro de bactérias marinhas Vibrio harveyi e V. alginolyticus (título aglutinante 256× e 1024×, respectivamente). Contudo, as bactérias marinhas Gram-positivas, Mycobacterium maritypicum e Corynebacterium stationis não foram aglutinadas. O número total de hemócitos circulantes (THC) nas ostras sadias foi de 8,53 ± 4,27×106 células/mL, no entanto 24 h após infecção com V. alginolyticus (ou injeção com salina), o hemograma caiu pela metade. A caracterização ultraestrutural e funcional dos hemócitos de P. hirundo abre perspectivas para estudos visando à prevenção e ao controle de enfermidades em pterídeos com interesse aquícola.<br> / Abstract : The pearl oyster Pteria hirundo (Pteridae family) has a great potential in national aquaculture due to its gastronomic appeal and to its capacity to produce pearls. Despite of its economic importance, little is known about its physiology and immune system. Thus, the aim of the present study was to identify and characterize at morphological and ultrastructural levels the hemocytes of P. hirundo, as well to identify its hemocyte populations and evaluate some cellular and humoral defenses in response to a bacterial infection. Three main hemocyte populations were recognized, represented by hyaline hemocytes (HH), granular hemocytes (GH) and blast cells (BC). The most abundant population comprised the hyaline hemocytes (88.2%) which were characterized by the presence few or no granules in the cytoplasm, followed by the granular hemocytes (9.4%) which have a great number of large electron lucid granules, and blast cells (2.4%) which were the smallest hemocytes, showing a spherical format and a high nucleus/cytoplasm ratio. Three different subpopulations of HH were identified (HH-1, HH-2 and HH-3), showing differences in terms of cellular volume and internal complexity. The hemocytes showed an elevated phagocytic capacity ex-vivo for inert particles (38.5% of the evaluated hemocytes). Besides, these cells are able to produce microbicidal molecules, such as reactive oxygen species (ROS), but the production of these molecules were not induced by bacterial lipopolysaccharides (LPS). The main ROS-producing cells were the HH-1, GH and HH-3. The presence of agglutinating molecules in the hemolymph of pearl oysters pre-challenged with the Gram-negative Vibrio alginolyticus was demonstrated by the in vitro agglutination of marine Vibrio species, V. harveyi and V. alginolyticus (agglutinating title of 256× and 1024×, respectively). However, the marine Gram-positive bacteria Mycobacterium maritypicum and Corynebacterium stationis were not agglutinated by the oyster hemolymph. The total count of circulating hemocytes in apparently healthy animals was 8.53 ± 4.27×106 cells/mL, but after an experimental injection of a bacterial solution (V. alginolyticus) or saline, the number of hemocytes significantly dropped (2×). In conclusion, the hemolymph of P. hirundo contains the typical hemocyte types found in bivalves and the ultrastructural and functional characterization of these cells represents a pioneering study that opens new perspectives for a better understanding of the immune reactions of this pearl oyster, aiming the prevention and control of infectious diseases in pteridean species of aquaculture importance.

ROCHA, V. P. Filogenia morfológica e molecular e aspectos biogeográficos da subfamília chioninae (Bivalvia: veneridae). 2016. 121 f. Tese (Doutorado em Ciências Marinhas Tropicais) - Instituto de Ciências do Mar, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Geovane Uchoa (geovane@ufc.br) on 2016-06-24T15:32:56Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_vprocha.pdf: 5549832 bytes, checksum: 086e4291a3c9cb6ab828911520b7e337 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid (nadsa@ufc.br) on 2016-06-24T16:04:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_vprocha.pdf: 5549832 bytes, checksum: 086e4291a3c9cb6ab828911520b7e337 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-24T16:04:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_vprocha.pdf: 5549832 bytes, checksum: 086e4291a3c9cb6ab828911520b7e337 (MD5) Previous issue date: 2016

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339434.pdf: 2719509 bytes, checksum: bd400b01d68d5565370890e234a8a6e0 (MD5) Previous issue date: 2016 / Ostras são organismos de ampla relevância econômica e ecológica. Contudo, mortalidades massivas de ostras têm aumentado em frequência e distribuição geográfica ao redor do mundo. Desta forma, estudos básicos a respeito da biologia desses animais, incluindo seus sistemas de defesa, são de fundamental importância. O presente trabalho investigou a presença de patógenos de bivalves em ostras cultivadas em Santa Catarina, os quais têm sido associados a mortalidades de ostras em outros países (Estudo 1). Além disso, buscou-se compreender melhor a respeito da relação entre os sistemas antioxidante e imune de ostras (Estudos 2 e 3). No Estudo 1, ostras do Pacífico Crassostrea gigas e nativas C. gasar (= C. brasiliana)foram coletadas ao longo da costa de Santa Catarina e avaliadas quanto à presença do vírus Ostreid herpesvirus 1 (OsHV-1) e das bactérias Vibrio aestuarianus e V. splendidus. Análises moleculares revelaram amostras positivas para V. splendidus (15 %) e OsHV-1 (28 %), sendo confirmadas por análises de sequenciamento. Este foi o primeiro trabalho demonstrando a presença de bactérias e vírus potencialmente patogênicos em ostras na costa brasileira, servindo de alerta para que medidas preventivas sejam adotadas para evitar o surgimento de mortalidades massivas de ostras no país. No Estudo 2, hemócitos de ostras C. gigas foram expostos ao agente eletrofílico 1-cloro-2,4-dinitrobenzeno (CDNB). O CDNB não afetou a viabilidade mitocondrial, entretanto, diminuiu a estabilidade da membrana lisossomal dos hemócitos (= 12,5 µM). O CDNB causou um forte distúrbio no sistema antioxidante, promovendo depleção da glutationa (= 0,1 µM) e inibição das enzimas glutationa redutase (2,5 e 50 µM) e tioredoxina redutase (50 µM). Importantes funções desempenhadas pelos hemócitos (adesão, fagocitose e produção de espécies reativas de oxigênio após imunoestimulação) foram comprometidas somente por 50 µM de CDNB. Os resultados indicam que a depleção total de glutationa não afeta a imunocompetência dos hemócitos, porém ocorre mediante uma inibição adicional de tiol redutases. No Estudo 3, a importância da glutationa para o sistema imune das ostras foi avaliada utilizando-se butionina sulfoximina (BSO), inibidor da síntese de glutationa. Ostras C. gigas foram expostas via intramuscular ao BSO (15 µmol/animal) por 1, 2 3 ou 6 dias, sendo observados menores níveis de glutationa (21-46 %) nas brânquias, glândula digestiva e hemócitos. O tratamento de 3 dias não afetou o hemograma das ostras, nem a viabilidade e capacidade de adesão e fagocitose dos hemócitos. Contudo, aumentou significativamente a susceptibilidade das ostras ao patógeno V. anguillarum (33 %), e de forma marginalmente significativa às espécies V. alginolyticus e V. harveyi. A depleção parcial da glutationa também aumentou a susceptibilidade das ostras ao peróxido de hidrogênio e hidroperóxidode cumeno. Os Estudos 2 e 3 sugerem que a glutationa não é indispensável para a função dos hemócitos, porém, quando outros componentes do sistema antioxidante são afetados, ou quando um segundo fator de estresse é aplicado, a homeostase destas células ou do organismo é comprometida. De forma geral, estes estudos básicos abrem caminho para vários outros nas áreas de aquicultura e ecotoxicologia, e contribuem para uma melhor compreensão dos mecanismos envolvendo respostas imunes e antioxidantes de bivalves. <br> / Abstract: Oysters are organisms that play important role economically andfor the natural ecosystems. However, oyster massive mortalities have increased in intensity and geographic distribution worldwide. Therefore, studies aiming basic knowledge regarding the biology of oysters are pivotal, especially regarding their defense mechanisms.Thus, the aim of this study was to investigate the presence of oyster pathogens in Santa Catarina, Brazil, which have been associated to oyster massive mortalities in other countries (study 1). Moreover, another aim was tocontribute to basic knowledge regarding the interrelationship of the immune and antioxidant system in oysters (studies 2 and 3). For the 1st study, Pacific oysters Crassostrea gigas and native oysters C. gasar (=C. brasiliana) were collected throughout the coast of Santa Catarina, and the presence of the virus Ostreid herpesvirus (OsHV-1), and the bacteria Vibrio aestuarianus and V. splendidus were evaluated. PCR analyses revealed positive samples for V. splendidus (15 %) and OsHV-1 (28 %), which was confirmed by sequencing analyses. This was the first study to investigate viral and bacterial pathogens to oysters in Brazil, and enlightens the need of preventive measures to be undertaken in order to avoid oyster massive mortalities in Santa Catarina. For the 2nd study, C. gigas hemocytes were in vitro exposed to the electrophilic agent 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB). CDNB did not affect hemocyte mitochondrial viability, however decreased lysosomal membrane stability (=12.5 µM).CDNB strongly affected hemocyte antioxidant system by depleting glutathione (=0.1 µM) and by decreasing the activity of the enzymes glutathione reductase (2.5 and 50 µM) and thioredoxin reductase (50 µM). Hemocyte function (adhesion, phagocytosis, and reactive oxygen species production upon immunostimulation) were jeopardized only with CDNB 50 µM. These results revealed that total glutathione depletion does not affect hemocyte immunocompetence, however this may occur upon inhibition of thiol reductases. For the 3rd study, the importance of glutathione to the immune system of oysters was investigated by using butionine sulfoximine (BSO), an inhibitor of the glutathione synthesis.Oysters C. gigas were exposed to BSO through intramuscular injections (15 µmol/animal/day) for 1, 2, 3 or 6 days, which promoted reduced glutathione levels (21-46 %) in the gills, digestive gland and hemocytes. The injection protocol of 3 days did not affect oyster hemogram, hemocyte viability, adhesion and phagocytosis. Nevertheless, it significantly increased oyster susceptibility to the pathogenV. anguillarum (33 %), while only a trend was observed for thespeciesV. alginolyticusandV. harveyi. Glutathione partial depletions also increased oyster susceptibility to cumene and hydrogen peroxides. Studies 2 and 3 suggest that glutathione is not imperative for hemocyte function, however when other components associated to the antioxidant system are affected, or when a second stress challenge is applied, these cells or the whole organism homeostasis is impaired.Overall, these basic studies can make way for many others in the field of aquaculture and ecotoxicology, and contribute to a better understanding of the mechanisms guiding the immune and antioxidant responses of bivalves.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2017-05-23T04:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345790.pdf: 1742590 bytes, checksum: 0f2aeca994d2558dfae1076df3728c91 (MD5) Previous issue date: 2016 / O crescimento demográfico, assim como a expansão tecnológica e industrial, tem causado sérias ameaças ao ambiente aquático, principalmente nas áreas costeiras. O lançamento de dejetos provenientes das mais variadas ações antrópicas, como os provenientes da indústria do petróleo e esgoto sanitário, provoca danos aos animais aquáticos, colocam em risco a atividade de aquicultura e afeta, consequentemente, a população humana. Os dejetos lançados no ambiente, possuem uma das mais variadas e complexas misturas, rica em nutrientes e compostos químicos, podendo formar subprodutos ainda mais tóxicos ao entrarem em contato entre si. Estes compostos químicos podem provocar alterações iniciais a nível fisiológico, celular e molecular nos organismos, e desta forma, estas respostas perante aos contaminantes podem ser utilizadas como biomarcadores de contaminação aquática. Espécies de moluscos bivalves são comumente utilizados como organismos biondicadores de contaminação aquática. A vieira Nodipecten nodosus é uma espécie de importância econômica, principalmente para as regiões Sul e Sudeste do Brasil e possui características importantes como movimentação lenta e capacidade de bioacumular contaminantes em seus tecidos rapidamente. Análises enzimáticas e moleculares são empregadas para elucidação de respostas dos organismos frente à exposição aos contaminantes. O presente estudo teve como objetivo (i) avaliar a capacidade de bioacumulação e depuração das vieiras; (ii) avaliar as respostas de biomarcadores bioquímicos clássicos; (iii) analisar genes conhecidos por atuarem na biotransformação de xenobióticos e potenciais genes candidatos a novos biomarcadores de contaminação aquática em vieiras N. nodosus. Para tanto, os exemplares de vieiras foram expostos ao fenantreno e ao óleo cru. Os resultados dos biomarcadores bioquímicos e moleculares foram analisados nas brânquias, 24 e 96 h após a exposição à duas concentrações de fenantreno e 96 h após a depuração; assim, como a análise química dos tecidos, verificou a bioacumulação e eliminação da substância, após 96 h de exposição e depuração. Os resultados indicam que N. nodosus é capaz de induzir uma resposta antioxidante relacionada com a biotransformação de fenantreno, e a depuração pode ser um protocolo eficaz para bivalves após a contaminação. Além disso, os resultados referentes à exposição ao óleo cru mostraram um conjunto de 14 genes biomarcadores de contaminação aquática por hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs), e o uso de brânquias e glândula digestiva como tecidos-alvo. Estes ensaios poderiam seraplicados como parâmetros adicionais em programas de biomonitoramento em áreas como as de produção de petróleo ou gás natural, especialmente offshore. Isto poderia ajudar a caracterizar a possível contaminação por HPAs em tais áreas, e monitorar a persistência, o destino e os efeitos destas substâncias químicas durante e após os eventos de derramamento de óleo.<br> / Abstract : Population growth, as well as the technological and industrial expansion, has caused serious threats to the aquatic environment, especially in coastal areas. Waste release from human activities, such as oil industry and sewage treatment/discharge, causes damage to aquatic animals, put at risk aquaculture activities and affects the human population. The waste released into the environment is one of the most varied and complex mixtures, rich in nutrients and chemicals, which can form even more toxic by-products when in contact with each other. These chemicals can cause physiological, cellular and molecular changes in the organisms which can be used as biomarkers of water pollution. Bivalve mollusc species are commonly used as biondicator of water contamination. Scallops Nodipecten nodosus is a species of economic importance, especially to the south and southeast Brazil and has important features, such as low mobility and high ability to quickly bioaccumulate contaminants. Enzymatic and molecular analyses are employed to elucidate responses of organisms upon exposure to contaminants. This study aimed to (i) evaluate the bioaccumulation capacity and depuration of scallops; (ii) evaluate the responses of classical biochemical biomarkers; (iii) analyze genes known to work in the biotransformation of xenobiotics and potential candidate genes as new biomarkers of water pollution in scallops N. nodosus. Therefore, scallops were exposed to phenanthrene and crude oil. The results of biochemical and molecular biomarkers were analyzed in the gills, after 24 and 96 h of exposure to two phenanthrene concentrations and after 96 h of depuration, as well as chemical analysis of the tissues found to bioaccumulate and removal of the substance after 96 h exposure and depuration. These results indicate that N. nodosus is capable of inducing an antioxidant response related to the biotransformation of phenanthrene, and depuration can be an effective protocol for bivalve after contamination. Moreover, the results for exposure to crude oil pointed to a set of 14 genes from N. nodosus as biomarkers of aquatic contamination to polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), and the use of gills and digestive gland as target tissues. These assays could be applied as additional parameters in biomonitoring programs in areas with oil and gas production or contamination, especially offshore ones. This could help to characterize possible PAHs contamination in suchareas, and monitor the persistence, fate and effects of these chemical during and after oil spill events.

Submitted by Alberto Vieira (martins_vieira@ibest.com.br) on 2017-09-18T23:40:31Z No. of bitstreams: 1 200527.pdf: 12876596 bytes, checksum: dc6c904a46d07b6363cc9a5b23cd8313 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-18T23:40:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 200527.pdf: 12876596 bytes, checksum: dc6c904a46d07b6363cc9a5b23cd8313 (MD5) Previous issue date: 1982-05-07 / Apresenta um estudo sobre os moluscos bivalves marinhosdo gênero Mactra Linnaeus, 1767, pertencentes à família Mactridae, assinalados para o Rio de Janeiro. São apresentadas caracterizações de subclasses a subgênero e, para as espécies Mactra (Mactra) isabelleana Orbigny, Mactra (Mactra) patagonia Orbigny, Mactra (Mactra) marplatensis Doello - Jurado, Mactra (Micromactra) Janeiroensis Smith, Mactra (Mactrotoma) petiti Orbigny e Mactra (Mactrotoma) fragilis: Gmelin, além das caracterizações, são tecidas considerações taxonômicas, morfológicas, ecológicas e de distribuições geológica e geográfica. / The main objective of this essay is the study of marine bivalves mollusks of the genus Mactra Linnaeus, 1767, which belongs to the Mactridae family, found in the coastal area of the state of Rio de Janeiro. The characteristics from subclass to subgenus are presented in this study. Besides, there are discussions related to taxonomics, morphologics and ecologics characteristics Connected with geological and geographical distribuitions for the following species: Mactra (Mactra) isabelleana Orbigny, Mactra (Mactra) patagonia Orbigny, Mactra (Mactra) marplatensis Doello - Jurado, Mactra (Micromactra) Janeiroensis Smith, Mactra (Mactrotoma) petiti Orbigny e Mactra (Mactrotoma) fragilis: Gmelin.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2014-09-05T14:43:24Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado Gabriel Luiz dos Santos.pdf: 1820652 bytes, checksum: 813a41cbb9ae01d5c374c54cce45816c (MD5) / Approved for entry into archive by Fatima Cleômenis Botelho Maria (botelho@ufba.br) on 2014-09-05T16:01:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado Gabriel Luiz dos Santos.pdf: 1820652 bytes, checksum: 813a41cbb9ae01d5c374c54cce45816c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-05T16:01:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado Gabriel Luiz dos Santos.pdf: 1820652 bytes, checksum: 813a41cbb9ae01d5c374c54cce45816c (MD5) / CNPq / O presente trabalho realizado em amostras coletadas na Baía de Todos os Santos, Bahia, Brasil, propõe estratégias para determinação multielementar e análise de especiação de vanádio em amostras de moluscos bivalves e sedimentos, empregando ICP OES e ICP-MS. Na primeira parte da tese, foram avaliadas as potencialidades de dois espectrômetros de massa com plasma indutivamente acoplado para determinação de As, Cr, Ni, Se e V em amostras de moluscos bivalves. Para efeito de comparação, três materiais de referência certificados (CRM) foram analisados: NIST 1566b SRM Oyster tissue, NRCC TORT-2 Lobster Hepatopancreas e NIST 2977 SRM Mussel tissue. A condição recomendada, que consistiu na determinação no modo padrão com adição de padrão interno, foi aplicada na determinação dos analitos em amostras de Macoma constricta coletadas em diferentes regiões da BTS. Os resultados apontaram que a maioria dos níveis de As, Cr, Ni, Se e V presentes na espécie Macoma constricta apresentaram valores acima dos níveis estabelecidos pela legislação vigente brasileira que são: 1,0 (As); 0,1 (Cr); 5,0 (Ni); 0,3 (Se) e 0,77 (V) g g-1 (peso úmido), o que representa risco à população e ao ecossistema. Na segunda parte da tese, foram investigadas as condições para a análise de especiação de vanádio em amostras de sedimentos, empregando extração alcalina e determinação por ICP OES. A concentração de V(IV) foi determinada por diferença, considerando a determinação de vanádio total, também realizada por ICP OES, após digestão das amostras com ácido nítrico em forno de micro- ondas com cavidade, usando o procedimento EPA 3051A. O procedimento foi validado através de testes de adição e recuperação e de análise do seguinte material de referência certificado: NIST 2702 (Inorganics in marine sediment). Pelos resultados obtidos pode-se concluir que os compostos contendo V(IV) são mais dominantes nas amostras dos sedimentos analisados. / The present work conducted on samples collected in Todos os Santos Bay, Bahia, Brasil, proposes strategies for multielement determination and speciation analysis of vanadium in bivalve molluscs and sediments samples, using ICP OES and ICP-MS. In the first part of the thesis, the potential of two inductively coupled plasma mass spectrometers for determination of As, Cr, Ni, Se and V in bivalve molluscs samples were evaluated. For comparison, three certified reference materials (CRM) were analyzed: NIST 1566b SRM Oyster tissue, NRCC TORT-2 Lobster Hepatopancreas e NIST 2977 SRM Mussel tissue. The recommended condition, which consisted in determining the standard mode with addition of internal standard, was applied in the determination of analytes in samples of Macoma constricta collected in different regions of the BTS. The results showed that most levels of As, Cr, Ni, Se and V present in the species Macoma constricta have values above the levels established by the Brazilian legislation, that are: 1.0 (As); 0.1 (Cr); 5.0 (Ni); 0.3 (Se) and 0.77 (V) g g-1 (wet weight), which represents risk to the population and the ecosystem. In the second part of the thesis, the conditions for speciation analysis of vanadium in soil and sediment samples were investigated, using alkaline extraction and determining by ICP OES. The V (IV) concentration was determined by difference, considering the total vanadium determination, also performed by ICP OES, after the samples digestion with nitric acid in cavity microwave oven, using the procedure EPA 3051A. The procedure was validated through addition and recovery tests and analysis of the following certified reference material: NIST 2702 (Inorganics in marine sediment). From the obtained results it can be concluded that compounds containing V (IV) are majority in the sediment samples analyzed.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:59:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341761.pdf: 1110760 bytes, checksum: 51e6b1236971a78dc36852eb6e4aef42 (MD5) Previous issue date: 2016 / Vibrio parahaemolyticus é um patógeno veiculado por alimento e sua infecção humana é regularmente associada com o consumo de frutos do mar crus ou mal cozidos e água contaminada. Esta pesquisa teve como objetivo identificar e quantificar Vibrio parahaemolyticus em ostras frescas (Crassostrea gigas), mexilhões (Perna perna) e água do mar provenientes de diferentes regiões de cultivo de moluscos bivalves no litoral de Santa Catarina, Brasil e otimização de um ensaio rápido de qPCR utilizando tecnologia de sondas TaqMan MGB, visando o gene da hemolisina termolábil (tl) de V. parahaemolyticus para a detecção e quantificação desta bactéria a partir de frutos do mar e amostras ambientais. As amostras foram coletadas entre outubro de 2012 e Dezembro de 2013. Foram coletadas 130 amostras de ostras (Crassostrea gigas), 215 amostras de mexilhões (Perna perna) e 222 amostras de água do mar. A ocorrência de V. parahaemolyticus em ostras e mexilhões foi baixa, 10,76% e 11,62% das amostras analisadas. Maior incidência de V. parahaemolyticus foram observados na água do mar, 18,%. A densidade de V. parahaemolyticus no verão (dezembro a março) foi significativamente maior do que nas outras 3 estações do ano (P <0,01). O ensaio qPCR e os iniciadores utilizados são altamente específicos, quando testado contra outras bactérias. O ensaio também é altamente sensível, e, é capaz de detectar V. parahaemolyticus com altos valores de coeficiente em concentrações tão baixas como 10 2 cópias / reacção de soluções puras de ADN genômico e 30 células / ml em suspensão de células diluída em série e adicionadas em amostras de tecido de ostras e mexilhões. Recomendamos que medidas de controle devem ser consideradas, incluindo o estabelecimento de uma vigilância intensiva e contínua de V. parahaemolyticus potencialmente patogênicos em todas as áreas de cultivo de moluscos bivalves, avaliação dos parâmetros ambientais, bem como a avaliação do risco para a saúde humana associado a ao consumo desses moluscos que é específica de cada região.<br> / Abstract : Vibrio parahaemolyticus is a food borne pathogen and their human infection is regularly associated with the consumption of raw or undercooked seafood and contaminated water supplies. This research aimed to identify and quantify Vibrio parahaemolyticus in fresh oysters (Crassostrea gigas), mussels (Perna perna) and seawater coming from different regions of cultivation of bivalve shellfishes in the seacoast of Santa Catarina, Brazil and the otimization of a rapid qPCR assay using TaqMan MGB probe technology, targeting the thermo labile (tl) gene of V. parahaemolyticus for the detection and enumeration of this bacterium from seafood and environmental samples. Samples were collected between October 2012 and December 2013 and there were collected 130 oysters samples (Crassostrea gigas), 215 mussels samples (Perna perna) and 222 seawater. The occurrence of V. parahaemolyticus in oysters and mussels was low, 10,76% and 11,62% of samples tested. Higher incidences of V. parahaemolyticus were observed in seawater, 18,%. The density of V. parahaemolyticus in summer (December to March) was significantly greater than those in the other 3 seasons (P < 0.01). The occurrence of pathogenic V. parahaemolyticus in oyster, mussels and seawater was very low (<10%). The qPCR assay and the primers used are highly specific, and only generated the desired amplicons with V. parahaemolyticus DNA samples against other bacteria. The assay is also highly sensitive, and, is able to detect V. parahaemolyticus with high coefficient values in concentrations as low as 102 copies/reaction for pure genomic DNA solutions and 30 cells/ml in serially diluted cell suspension and spiked samples. We recommend that control measures should be considered, including the establishment of an intensive and continuous monitoring of potentially pathogenic V. parahaemolyticus from all oyster-growing areas, the environmental parameters, and the assessment of the region-specific human health risk due to consumption of oyster.

Submitted by Alberto Vieira (martins_vieira@ibest.com.br) on 2017-10-18T22:18:16Z No. of bitstreams: 1 0618287.pdf: 12179068 bytes, checksum: 13e44b49049afe8bbb9eb34c82a01b25 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T22:18:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 0618287.pdf: 12179068 bytes, checksum: 13e44b49049afe8bbb9eb34c82a01b25 (MD5) Previous issue date: 2004-03 / PETROBRÁS / O bivalve invasor Isognomon bicolor vem ocupando uma ampla faixa em costões rochosos do litoral do estado do Rio de Janeiro e tem aparentemente causado alterações nas comunidades nativas. Este trabalho determina a distribuição geográfica de I. bicolor no litoral do estado do Rio de Janeiro, comparar a sua estrutura populacional entre três áreas e relacionar a sua abundância relativa à estrutura das comunidades em cada área. Também investiga a variação temporal da abundância relativa, da distribuição vertical e da estrutura populacional de I. bicolor. As coletas foram realizadas no inverno de 2002 e no verão de 2003 na Ilha do Brandão (Angra dos Reis), na Ponta da Fortaleza (Arraial do Cabo) e na Praia Vermelha (Rio de Janeiro). Nesta última, também foi realizada uma coleta no inverno de 2003. Os indivíduos coletados na Praia Vermelha são os que possuem o maior tamanho máximo e médio, sendo os indivíduos da Ilha do Brandão, os que possuem o menor tamanho máximo e médio. Nestas duas áreas, foram encontrados menos recrutas em comparação com a Ilha do Brandão, onde a moda ficou nas classes de tamanho menores. A hipótese mais provável para explicar o maior número de recrutas na Ilha do Brandão é que Petaloconchus sp fornece um substrato que favorece o assentamento de larvas e a fixação dos indivíduos impede que estes se desprendam. Entretanto, Petaloconchus sp. parece funcionar como uma armadilha, porque apesar de mais indivíduos de I. bicolor recrutarem, poucos conseguem crescer e se desenvolver. / The exotic bivalve Jsognomon bicolor is found in large densities on the rocky shores of the Rio de Janeiro state and is apparently altering the native community. The aim of this study was to establish the geographic distribution of I. bicolor on the coast of Rio de Janeiro state, to compare population structure among three different areas and to verify the relationship of its relative abundance with the community structure in each area The temporal variation of relative abundance, vertical distribution and population structure of I. bicolor were also investigated. Samples were taken in winter (2002) and summer (2002-03) at Ilha do Brandão (Angra dos Reis), Ponta da Fortaleza (Arraial do Cabo) and Praia Vermelha (Rio de Janeiro). ln Praia Vermelha, samples were also taken in the following winter (2003). The individuals sampled at Praia Vermelha presented the highest maximum and medium sizes, whereas the individuals collected at Ilha do Brandão presented the lowest maximum and medium size. There was a lower number of recruits of L bicolor in these areas than in Ilha do Brandão, where a mode was found in the lower size classes. The most reasonable hypothesis to explain the highest number of recruits in Ilha do Brandão is that Petaloconchus sp. provides a substrate that enhances settlement of larvae and the attachment of individuals. Although Petaloconchus sp. acts as a trap. It enhances recruitment of more individuals but only a few can grow and develop within it.