La compréhension de la régulation de l’AMH et de son récepteur spécifique, l’AMHR2, par les BMPs a amené un éclairage nouveau sur leur rôle dans le développement folliculaire et la régulation du taux d’ovulation. Nos résultats se basent sur l’étude de 4 modèles ovins porteurs de mutations Fec, mutations qui affectent des membres de la famille des BMPs, à savoir leur ligand BMP15 ou leur récepteur. Ces mutations se traduisent phénotypiquement par une baisse de l’expression de l’AMH ou de son récepteur dans les cellules folliculaires, et des ovulations multiples chez les brebis porteuses. D’un point de vue mécanistique, nos résultats ont mis en évidence une régulation de l’AMH et de l’AMHR2 par les BMPs in vivo et in vitro, passant par le récepteur BMPR1B, et s’exerçant sur l’activité transcriptionnelle du promoteur de l’AMH via SMAD1 et SF1. Cette régulation a également été en partie mise en évidence dans l’espèce porcine avec une observation supplémentaire dans ce modèle : un taux d’ovulation naturellement très élevé est associé à une faible production ovarienne d’AMH. Ces observations mettent en exergue le rôle possible de l’AMH dans la régulation du taux d’ovulation. / The understanding of the regulation of AMH and its specific receptor, AMHR2, by the BMPs, brought a new highlight on their role in the regulation of follicular development and the control of ovulation rate. Our results are based on the study of 4 sheep models carrying Fec mutations which affect different members of the BMPs family, namely their ligand BMP15 or their receptor, Mutations result phenotypically in a low expression of AMH or AMHR2 in the granulosa cells of ovarian follicles, and multiple ovulations in carrier ewes.. From a mechanistic point of view, the results demonstrated the in vivo and in vitro regulation of AMH and AMHR2 by BMPs, acting through the BMPR1B receptor and enhancing the transcriptional activity of the AMH promoter via SMAD1 and SF1. This regulation has also been partially demonstrated in swine with an additional observation in this model: a naturally high ovulation rate is associated with a low ovarian production of AMH. In conclusion, these observations show a possible role of the AMH in the regulation of ovulation rate.

Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) is a complex endocrine disorder that increases a woman’s risk of developing cardiovascular disease and diabetes. Women with PCOS have extremely high rates of obesity, insulin resistance, cardiovascular morbidity and mortality. Obese women with PCOS also tend to have elevated sympathetic nerve activity and systemic markers of inflammation, which likely contribute to cardiometabolic risk and PCOS pathogenesis. While few medication or lifestyle intervention options for women with PCOS target elevated sympathetic nerve activity, inflammation, and insulin resistance, passive heat exposure shows promise as a novel intervention for improving cardiovascular and metabolic health in this population. Therefore, the purpose of this study was to examine changes in inflammation, cardiovascular, autonomic, and metabolic health in obese women with PCOS following a 30-session, 8-10 week chronic passive heat intervention (termed ‘heat therapy’). Eighteen obese women with PCOS (Age: 27±1y, BMI 41.3±1.1 kg·m2) were matched for age and body mass index (BMI), then divided into heat therapy (HT) or time control (CON). At the beginning (Pre), middle (Mid), and end (Post) of 8-10 weeks, subjects participated in study days to assess vascular, autonomic, and metabolic function, and additionally underwent a subcutaneous fat biopsy in Pre and Post. HT subjects took part in 30 one-hour hot tub sessions over 8-10 weeks (3-4 per week) in 40.5˚C water, while CON subjects completed all other testing but were not exposed to heat. No change in BMI was observed over the study in HT or CON; however; HT subjects exhibited dramatically improved vascular and metabolic function, as well as reduced sympathetic nerve activity and circulating inflammatory markers. In fat biopsies, insulin signaling was improved in HT subjects, while CON subjects remained stable over time. These findings show promise for HT as a treatment option for obese women with PCOS to improve cardiovascular and metabolic risk profiles. This dissertation includes previously published co-authored material.

abstract: A notable feature of advanced eusocial insect groups is a division of labor within the sterile worker caste. However, the physiological aspects underlying the differentiation of behavioral phenotypes are poorly understood in one of the most successful social taxa, the ants. By starting to understand the foundations on which social behaviors are built, it also becomes possible to better evaluate hypothetical explanations regarding the mechanisms behind the evolution of insect eusociality, such as the argument that the reproductive regulatory infrastructure of solitary ancestors was co-opted and modified to produce distinct castes. This dissertation provides new information regarding the internal factors that could underlie the division of labor observed in both founding queens and workers of Pogonomyrmex californicus ants, and shows that changes in task performance are correlated with differences in reproductive physiology in both castes. In queens and workers, foraging behavior is linked to elevated levels of the reproductively-associated juvenile hormone (JH), and, in workers, this behavioral change is accompanied by depressed levels of ecdysteroid hormones. In both castes, the transition to foraging is also associated with reduced ovarian activity. Further investigation shows that queens remain behaviorally plastic, even after worker emergence, but the association between JH and behavioral bias remains the same, suggesting that this hormone is an important component of behavioral development in these ants. In addition to these reproductive factors, treatment with an inhibitor of the nutrient-sensing pathway Target of Rapamycin (TOR) also causes queens to become biased towards foraging, suggesting an additional sensory component that could play an important role in division of labor. Overall, this work provides novel identification of the possible regulators behind ant division of labor, and suggests how reproductive physiology could play an important role in the evolution and regulation of non-reproductive social behaviors. / Dissertation/Thesis / Ph.D. Biology 2012

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MurielMLP_DISSERT.pdf: 1862535 bytes, checksum: aed8498c7a83748a04e6fa895aa1fc9d (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study was aimed at evaluating the viability of xenografting of ovarian tissue from heifers under renal capsule of two different murine models of hormone-treated renal-encapsulated bovine ovarian tissue xenotransplantation. Thus, animals of BALB/c Nude (n=9) and C57BL6 SCID (n=12) received ovarian cortical fragments from seven heifers. The ovarian cortices were processed for histology (control) or grafted under the renal capsules of recipient mice, evaluated by vaginal washing until 60th day post-grafting and divided in three groups, each one with three BALB/c Nude and four C57BL6 SCID, as: control group; treated with equine chorionic gonadotrophin hormone, eCG or a combination of follicle stimulating hormone and luteinizing hormone (FSH + LH). Infrared thermography was performed at different times in donor ovaries and recipients: at collection at slaughterhouse, at the time of xenografting procedure and at time of xenografts collection, grafted tissues were also recovered for histology and blood was collected for hepatorenal biochemistry. The average duration of the phases of the estrous cycle, the results of thermographic evaluation, and hepatorenal biochemistry were compared by ANOVA followed by Tukey s test (p<0,05) The average time of xenografting did not exceeded 18 minutes in both models. The C57BL6 SCID showed a more elastic renal capsule, facilitating the grafting procedure whem compared to BALB/c NUDE. Among the strains, 83% of C57BL6 SCID and 77% of BALB/c Nude mice showed development and vascularization of the transplanted tissue, which acquired cyclicity at 19 and 9 days post-transplantation, respectively. Hemorrhagic follicles in xenografts induced with FSH + LH were found in the C57BL6 SCID strain. The thermography did not allows clearly distinction between donor and recipient tissue by xenografting. Our integration of these parameters revealed no significant difference between treatments for both strains studied, with the exception of urea levels, which were lower in the grafted mice than in non-grafted control mice. In conclusion, histological evaluation allow the monitoring of graft reperfusion and follicular development; new hormonal protocols are needed for obtaining oocytes for in vitro fertilization; infrared thermography provided minimum accuracy for monitoring donor ovaries and the kidney recipient, not highlighting transplants; C57BL6 SCID strain appears to be the best host for ovarian xenografts, since the transplants in these mice were viable and showed robust follicular development and xenotransplantation under the kidney capsule does not compromise the renal and hepatic function of the recipient animal / O objetivo desse trabalho foi de avaliar a viabilidade do xenotransplante de tecido ovariano de novilhas sob a cápsula renal de dois modelos de camundongas imunodeficientes e posteriormente estimuladas hormonalmente. Para tanto, animais das linhagens BALB/c Nude n = 9 e C57BL6 SCID n = 12 receberam fragmentos de sete ovários de novilhas. Os tecidos corticais ovarianos foram levados diretamente para histologia clássica (controle) ou transplantados sob a cápsula renal das receptoras, e permaneceram por 60 dias. Após cinco dias da cirurgia, foi iniciado o lavado vaginal, a cada 12 horas, durante 55 dias e divididas em três grupos, cada um com três BALB/c Nude e quatro C57BL6 SCID, onde o grupo um foi o controle, o grupo 2 estimulado hormonalmente com eCG e o grupo três, com uma associação de FSH+LH. O uso de termografia infravermelha para avaliação do tecido ovariano se deu no momento da coleta do ovário no abatedouro, logo após o transplante e no momento da retirada do mesmo. Amostras de tecidos e sangue foram colhidos e encaminhados para histologia clássica e bioquímica hepática e renal. As durações das fases do ciclo estral, os dados termográficos e bioquímicos foram avaliados por ANOVA seguidos de teste de Tukey (p<0,05). O tempo cirúrgico médio em ambos os modelos não excedeu 18 minutos. Os animais C57BL6 SCID possuíam uma capsula renal mais elástica, facilitando a inserção dos fragmentos quando comparado às BALB/c Nude, o desenvolvimento e vascularização foi constatado em 83% das C57BL6 SCID e 77% das receptoras BALB/c Nude, com retorno da atividade ovariana 19 e 9 dias após o transplante, respectivamente. Observou-se ainda a presença de corpo hemorrágico nos transplantes induzidos com a associação FSH+LH na linhagem C57BL6 SCID. A termografia não permitiu a distinção entre os tecidos doador e receptor por ocasião do xenotransplante. Na avaliação das funções renais e hepáticas da bioquímica plasmática, apenas a ureia apresentou valores menores para animais transplantados quando comparados aos seus respectivos modelos controles. Conclui-se neste estudo que: a análise histológica permitiu o monitoramento da reperfusão e desenvolvimento folicular do transplante; novos protocolos hormonais devem ser testados para a obtenção de oócitos aptos para fertilização; a termografia infravermelha forneceu precisão para o monitoramento dos ovários doadores e o rim dos receptores, não evidenciando os transplantes; os animais C57BL6 SCID são mais indicados para o procedimento cirúrgico quando comparados aos BALB/c Nude e que o xenotransplante sob a cápsula renal não compromete as funções renal e hepática do animal receptor

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-08-21T14:18:25Z No. of bitstreams: 1 KatiaRFL_TESE.pdf: 11131110 bytes, checksum: 4a75d7853dd30ba6006c604e3f17426d (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-08-21T16:39:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KatiaRFL_TESE.pdf: 11131110 bytes, checksum: 4a75d7853dd30ba6006c604e3f17426d (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-08-21T16:39:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KatiaRFL_TESE.pdf: 11131110 bytes, checksum: 4a75d7853dd30ba6006c604e3f17426d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-21T16:39:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KatiaRFL_TESE.pdf: 11131110 bytes, checksum: 4a75d7853dd30ba6006c604e3f17426d (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The donkeys (Equus asinus) are individuals historically relevant for the occupation of inhospitable areas around the world, but they have been losing importance due to the modernization of urban centers and the creation of traction and cultivation technologies. Due to this fact, many donkey breeds are already extinct or passing through a rapid process of population decrease. Among these breeds, the Northeast donkey, an endemic breed in Brazil, is highlighted. One of the strategies for conservation is the use of biotechnologies that facilitate reproduction, such as the manipulation of oocytes enclosed in preantral follicles (MOEPF) that maximize the availability of oocytes for in vitro fertilization. The starting point for the use of this and other techniques are known reproductive physiology details of this breed as the characteristics of their gametes. The objective of this study was to estimate and to characterize the population of ovarian PFs derived from Northeast breed donkeys. Twenty females aging 5.1 ± 3.2 years and weighing 105.2 ± 18.6 kg were used. Animals were subjected to an ovariectomy procedure guided by laparoscopy for ovary collection. As the equines, donkey ovaries presented a kidney form and their parenchymal zone were extracted, taking the ovulation fossa as basis. Fragments of ovary were fixed in Carnoy, dehydrated in increasing Ethanol concentrations (70 to 99%), clarified using xylene and finally included in histological paraffin wax blocks. These blocks were serially sectioned on 7 μm slices at using a microtome. Every 120th slice was mounted on glass slides, stained with hematoxylin–eosin and read in inverted optical microscope. PFs presenting visible oocyte nuclei were measured at using an ocular micrometer and classified as primordial, primary or secondary. PFs were also classified and counted as morphologically normal, when containing an oocyte with regular shape and uniform cytoplasm, and organized layers of granulosa cells; or as degenerated, when the oocyte exhibited pycnotic nucleus and/or ooplasm shrinkage, and occasionally, granulosa cell layers became disorganized, detached from the basement membrane and/or included enlarged cells. The PF population was estimated by using the formula: (number of follicles × number of sections × thickness of sections)/(number of sections observed × range of oocyte nuclei diameter). The results allowed us to estimate a total population of 21,135.3 ± 10,646.1 PFs per animal. From this population, 91.3% PFs were classified as primordial, 8.2% PFs as primary, and 0.3% as secondary. multioocyte PFs were observed in all animals, and they were more frequently present in primordial follicles, representing 0.99% of total PFs counted. The estimated population was distributed between the right and left ovaries, at 54.6% and 45.4%, respectively. Most PFs were considered morphologically normal (90.2%) and the smallest, degenerate (9.8%). An inversely proportional relationship between age and follicular population was identified, similarly to the relation between weight and follicular population. In the second experiment, the ovarian tissue of animals from the same group was subjected to a vitrification procedure using dimethylsulfoxide (DMSO) and ethylene glycol (EG) as cryoprotectants in separate and associated. When comparing treatments, the use of DMSO 3M (81.7 ± 37.5%), EG 3M (83.7 ± 27.4%) and the combination of both DMSO 3M + EG 3M (81.8 ± 46.8%) allowed a greater percentage of follicular survival. When vitrified using the DMSO + EG combination, a higher percentage (62.5 ± 29.1%) of viable follicles was observed in relation to the other vitrification treatments (P <0.05). The TUNEL technique identified that all treatments tested showed DNA fragmentation in the follicular cells, except in the case of the DMSO 3M plus EG 3M treatment. When evaluating the presence of NORs, no significant differences were observed in the amount of NORs between the fresh and vitrified groups using DMSO 3M plus EG 3M (P >0.05). Thus, we concluded that the combination DMSO 3M plus EG was more efficient for the vitrification of ovarian tissue taken from Equus asinus, allowing adequate preservation of PAFS morphology, viability, DNA integrity and cell proliferative capacity. This work presented for the first time the estimate of ovarian preantral follicles in donkeys of the Northeastern breed and successful vitrification / Os jumentos (Equus asinus) são animais historicamente relevantes para a ocupação de áreas inóspitas em todo o mundo, mas tem perdido espaço devido à modernização dos centros urbanos e a mecanização agrícola e transporte motorizado. Assim, muitas raças de jumentos já foram extintas ou encontram-se em rápido processo de queda populacional, e dentre elas está a raça Nordestina, endêmica do Brasil. Uma das estratégias de conservação é o uso de biotecnologias que favoreçam a reprodução assistida, como a manipulação de oócitos inclusos em folículos pré-antrais (MOIFOPA) que maximiza a disponibilidade de oócitos para outras biotécnicas. O ponto de partida para o uso desta e outras biotécnicas é conhecer detalhes da fisiologia reprodutiva e dos gametas da espécie ou raça que se deseja manipular. O objetivo desta tese é caracterizar e conservar por meio da vitrificação a população de folículos ovarinos pré-antrais (FP) em fêmeas asininas da raça Nordestina. No primeiro experimento, dez fêmeas com idade média de 5,1 ± 3,2 anos e peso médio de 105,2 ± 18,6 kg, constituíram o grupo de estudo. As mesmas foram submetidas a procedimento de ovariectomia guiada por laparoscopia para coleta dos ovários. Assim como nos demais equídeos, os ovários das jumentas apresentam formato reniforme e suas zonas parenquimatosa, incluindo a fossa ovariana, foram extraídas. Fragmentos do ovário foram fixados com carnoy, desidratados com etanol em concentrações crescentes (70 a 99%), clarificados usando xilol e finalmente inclusos em blocos de parafina histológica. Estes blocos foram sequencialmente seccionados em micrótomo em frações de 7μm. Uma a cada 120 frações foi montada em lâminas de vidro e corada com hematoxilina-eosina e lida em microscópio ótico. Os FPs que apresentaram núcleo visível foram fotografados, mensurados com uso de software e classificados como primordiais, primários e secundários. Os FPs classificados e contados foram identificados como normais ou degenerados. A população de FPs foi estimada usando a fórmula: (número de PF observados × número total de secções × espessura das secções) dividido pelo (número de secções observadas × diâmetro médio do núcleo dos oócitos). A população média estimada foi de 21.135,3 ± 10.646,1 FPs por animal. Destes, 91,3% foram identificados como primordiais, 8,2% como folículos primários e 0,4% como secundários. Folículos com múltiplos oócitos foram observados em todos os animais, todos classificados como primordiais, representando 0,99% do total de folículos. A população de PF estimada estava distribuída entre os ovários direito e esquerdo, em 54,6% e 45,4% respectivamente. A maior parte dos PFs foi considerada morfologicamente normal (90,2%) e a menor parcela, degenerados (9,8%). Foi identificada uma relação inversamente proporcional entre a idade e a população folicular, semelhante à relação entre peso e população folicular. No segundo experimento, o tecido ovariano de jumentas foram submetidos a procedimento de vitrificação em superfície sólida usando dimetil sulfóxido (DMSO) e etileno glicol (EG), isoladamente em diferentes concentrações (3M e 6M) e associados, como agentes crioprotetores. Quando comparados aos tratamentos o uso do DMSO 3M (81,7 ± 37,5%), EG 3M (83,7 ± 27,4%) e a combinação de DMSO 3M + EG 3M (81,8 ± 46,8%) apresentaram um grande percentual de folículos morfologicamente normais. O uso do DMSO 3M + EG 3M, apresentou o maior percentual (62,5 ± 29,1%) de folículos viáveis em relação aos demais tratamentos (P <0,05). Pela técnica TUNEL, todos os tratamentos apresentaram fragmentação de DNA nas células foliculares, exceto no caso do DMSO 3M + EG 3M. Quando avaliada a presença de NORs, não foi verificada diferenças significativas entre o número de NORs no grupo controle e no tratamento DMSO 3M + EG 3M (P < 0,05). A combinação DMSO 3M e EG 3M mostrou-se mais eficiente para a vitrificação de tecido ovariano de jumentas, apresentando-se de forma adequada para a preservação da morfologia e viabilidade de folículos pré antrais, bem como a integridade do DNA e a capacidade de proliferação celular. Este trabalho apresentou de forma inédita a estimativa de folículos pré-antrais ovarianos em jumentas da raça nordestina bem como uma estratégia de criopreservação com resultados positivos / 2017-08-21

CAVALLANTE, Andréa Pighinelli. Estimativa populacional de folículos pré-antrais in situ de Sotalia fluviatilis (Cetacea, Delphinidae). 2000. 67 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Engenharia de Pesca, Fortaleza-CE, 2000 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-11T11:44:33Z No. of bitstreams: 1 2000_dis_apcavallante.pdf: 777240 bytes, checksum: 39a347ed2388e4b8a3cbc5c7aa377fe0 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-11T11:45:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2000_dis_apcavallante.pdf: 777240 bytes, checksum: 39a347ed2388e4b8a3cbc5c7aa377fe0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-11T11:45:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2000_dis_apcavallante.pdf: 777240 bytes, checksum: 39a347ed2388e4b8a3cbc5c7aa377fe0 (MD5) Previous issue date: 2000 / Tucuxi, Sotalia fluviatilis, a coastal cetacean species threatened by artisanal fishing, needs a reproductive biology study in order to manage and preserve the populations subject to mortality for antropic action. A in situ of the preantral follicles allows a better understanding of the preantral phase of the folliculogenesis, little known in cetaceans and totally unknown in S. fluviatilis. Quantitative analysis of the preantral follicle was made in ovarian of S. fluviatilis recovered on the Ceara coast between 1997-1999. The age of the studied sample varied from 0 to 23 years, being sexual maturation above 6 years. The population preantral follicular analysed, was completely degenerate, possibly because of “pos-morten” time. Even so, significant difference were observed among sexual maturation stage, whwere immature animals showed na averege of 1.162.460 follicles, while in matures animals the averege was 66.270 follicles. Due to anatomic position of the ovarian, it was observed that the left ovarian had a higher number of follicles when compared to the right one. This difference was significant only for immature animals. There wasn’t a significant difference related to weight of right and left ovarian of mature and imature sample. Number of follicles showed a negative relation with age and weight of the ovarian, although weight had a positive relation with age. These results indicate that the population follicular fo S. fluviatilis may be affected by many factors such as: reproductive stage, age, ovarian weight and anatomical position of the ovary. Quantitative data of the foliculogenisis described can be used as a parameter for future studies in vitro or in vivo of the folliculogenisis of S. fluviatilis. From this, new information about preantral follicles of S. fluviatilis can be acquired, leading to new reserch to explain the folliculogenese of preantral follicles phase of the species, contributing to a better utilization of oociterio potencial. / O boto cinza, Sotalia fluviatilis, é uma espécie de cetáceo costeira ameaçada pela pesca artesanal, sendo necessário um estudo da biologia reprodutiva, para a administração e conservação das populações que estão sujeitas à mortalidade por ação antrópica. O estudo de folículos pré-antrais in situ permite uma melhor compreensão da fase pré-antral da foliculogênese, pouco conhecida nos cetáceos em geral, e totalmente desconhecida em S. fluviatilis. A análise quantitativa de folículos pré-antrais foi realizada enm ovários de S. fluviatilis recuperados na costa do Ceará entre 1997-1999. A idade dos exemplares em estudo variou de 0 a 23 anos, com idade de maturação sexual acima de 6 anos. A população folicular pré-antral analisada, apresentou-se totalmente degenerada, possivelmente em decorrência do tempo “pós-mortem”. Ainda assim, foram observadas diferenças significativas entre os estágios de maturação sexual, onde animais imaturos apresentaram uma média de 1.162.460 folículos, enquanto os exemplares maturos apresentaram em média 66.270 folículos. Em relação a posição anatômica do ovário foi observado que, em média, o ovário esquerdo apresentou um número mais elevado de folículos quando comparado ao lado direito. Essa diferença foi significativa somente para animais imaturos. Não houve uma diferença significativa com relação ao peso do ovário direito e esquerdo dos exemplares imaturos e maturos. O número de folículos apresentou uma relação uma relação negativa com a idade e peso do ovário, embora o peso tenha apresentado uma relação positiva com a idade. Tais resultados mostraram que a população folicular de S. fluviatillis pode ser afetada por diversos fatores, entre eles estágio reprodutivo, idade, peso ovariano e posição anatômica do ovário. Os dados quantitativos da foliculogênese descrito neste trabalho poderão servir como parâmetro para futuros estudos in vivo ou in vitro da foliculogênese em S. fluviatilis. Desta forma, novas informações acerca dos folículos pré-antrais de S. fluviatilis poderão ser obtidos, gerando oportunidade para a realização de novas pesquisas, visando a elucidação da foliculogênese da fase pré-antral na espécie, o que contribuirá no futuro para um melhor aproveitamento do seu potencial oocitário.

Submitted by Sandro Camargo (sandro.camargo@unipampa.edu.br) on 2015-03-08T23:12:00Z No. of bitstreams: 1 126110006.pdf: 1402473 bytes, checksum: aed1fe94c57f7ab83538a36308f58174 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-08T23:12:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 126110006.pdf: 1402473 bytes, checksum: aed1fe94c57f7ab83538a36308f58174 (MD5) Previous issue date: 2014-02-22 / A δ-Aminolevulinato desidratase (δ-ALA-D) é uma enzima tiólica que catalisa uma das reações iniciais da biossíntese do heme. Essa enzima é considerada um marcador proteico de intoxicação com metais. O cádmio é um dos poluentes tóxicos, amplamente distribuído no meio ambiente, sendo que a exposição humana resulta principalmente da fumaça do cigarro, da poluição do ar e do consumo de alimentos e água contaminados pelo metal. O cádmio apresenta uma baixa taxa de excreção no organismo e um elevado tempo de meia- vida biológico e por esta razão, se acumula no sangue, rins e fígado, bem como nos órgãos reprodutivos, incluindo o ovário. A patogênese do dano ovariano e a redução da viabilidade folicular após exposição ao cádmio tem sido associada a danos oxidativos. Assim, compostos antioxidantes poderiam ser uma terapia alternativa frente a toxicidade do cádmio. O presente estudo avalia o efeito protetor da Camellia sinensis (chás verde, branco e vermelho) sobre a inibição da atividade da δ-ALA-D ovariana induzida pelo cádmio in vitro (ovário bovino) e ex vivo (ovário de camundonga). O efeito do cloreto de cádmio (IC 50 , 20μM), das infusões de chás (0,07 – 10 mg/mL) e das catequinas isoladamente –epicatequina (EC), epigalocatequina (EGC), epicatequina galato (ECG), epigalocatequina galato (EGCG) - foram avaliadas sobre a atividade da δ-ALA-D de ovário bovino (in vitro). Além disso, a composição das infusões de chá foi avaliada por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência) em um ensaio quantitativo de catequinas, alcalóides purina e ácido gálico, bem como o conteúdo de polifenóis totais. Os chás verde e branco nas maiores concentrações estudadas restauraram a atividade da δ-ALA-D inibida pelo cádmio enquanto o chá vermelho não apresentou efeito in vitro. O chá verde apresenta maior quantidadede conteúdo fenólico (757,24 μg EAG/mL) bem como de catequinas (EGCG = 205,64 μg/mL, EC = 84,59 μg/mL, EGC = 75,53 μg/mL, ECG = 64,73 μg/mL) comparado com o chá branco (499,37 μg EAG/mL) (EGCG = 105,57 μg/mL, EC = 54,73 μg/mL, EGC = 81,96 μg/mL, ECG = 34,25 μg/mL) e com o chá vermelho (272,39 μg EAG/mL) (só foi detectado ECG= 1,36 μg/mL). Nenhuma das catequinas testadas isoladamente foi eficaz em restaurar a atividade da enzima inibida pelo cádmio. Para os experimentos ex vivo, camundongas receberam uma única administração nas doses de 2,5 mg/kg e 5 mg/kg de CdCl 2 por via intraperitoneal e chá verde (250 mg/kg) administrado via oral. Verificou-se que a exposição aguda ao cádmio nas doses de 2,5 e 5 mg/Kg inibiu (cerca de 26% e 33%, respectivamente) a atividade da enzima δ-ALA-D de ovário de camundongas e o chá verde foi capaz de restaurar essa inibição. O maior efeito do chá verde observado in vitro, bem como o papel protetor apresentado no estudo ex vivo, poderia ser atribuído ao maior teor de fenóis, mas não de catequinas. Na verdade, as catequinas não foram capazes de restaurar a atividade da enzima inibida por cádmio, demonstrando que estes compostos não são os principais componentes responsáveis pelo efeito benéfico do chá verde observada neste estudo. Esse estudo demonstrou a eficácia do chá verde em restaurar a atividade da δ-ALA-D inibida pelo cádmio em tecido ovariano. / δ-aminolevulinate dehydratase (δ-ALA-D) is a thiol enzyme that catalyzes one of the initial reactions of heme biosynthesis. This enzyme is considered a marker protein for metal poisoning. Cadmium is a toxic pollutant, widely distributed in the environment, and human exposure results mainly from cigarette smoke, air pollution and consumption of food and water contaminated by the metal. Cadmium has a low excretion rate of the organism and high biological ha lf- life and for this reason it accumulates in the blood, kidney and liver as well as on reproductive organs including the ovaries. The pathogenesis of ovarian follicular damage and reduction of viability after exposure to cadmium has been associated with o xidative damage. Thus, antioxidant compounds may be an alternative therapy against cadmium toxicity. The present study evaluates the protective effect of Camellia sinensis (green, white and red teas) on the inhibition of ovarian δ-ALA-D activity induced by cadmium in vitro and ex vivo. The effect of cadmium chloride (IC 50 20μM), tea infusions (0.07 to 10 mg/ml) and individual catechins – epicatechin (EC), epigallocatechin (EGC), epicatechin gallate (ECG), epigallocatechin gallate (EGCG) - were evaluated on bovine ovaries δ-ALA-D activity (in vitro). Furthermore, the composition of tea infusions was measured on a HPLC quantitative assay of catechins, gallic acid and purine alkaloids, and the content of total polyphenols was measured by Folin–Ciocalteu method. The green and white teas, at the highest concentrations studied, restored the δ-ALA-D activity inhibited by cadmium while red tea had no effect in vitro. Green tea has higher amount of phenolic content ( 757.24 mg GAE/mL ) and catechins (EGCG = 205.64 μg/mL; EC = 84.59 μg/mL; EGC = 75.53 μg/mL; ECG = 64.73 μg/mL) compared with white tea ( 499.37 mg GAE/mL ) (EGCG = 105.57 μg/mL; EC = 54.73 μg/mL; EGC = 81.96 μg/mL; ECG = 34.25 μg/mL) and red tea (272.39 mg GAE/mL) ( only detected ECG = 1.36 μg/mL). None of the tested catechins alone was effective in restoring the enzyme activity inhibited by cadmium. For the ex vivo experiments, mice received a single administration of CdCl 2 , at doses of 2.5 mg/kg and 5 mg/kg intraperitoneally, and green tea (250 mg/kg) administered orally. We found that acute exposure to cadmium at doses of 2.5 and 5 mg/kg inhibited (about 26% and 33%, respectively) δ-ALA-D activity of mice ovaries, and green tea was able to restore this inhibition. The greater effect observed in vitro by green tea as well as the protective role presented at the ex vivo study, could be attributed to the higher phenols content, but not catechins. In fact, the catechins were not able to restore the enzyme activity inhibited by cadmium, demonstrating that these compounds are not the key components responsible for the beneficial effect of green tea observed in this study. This study demonstrated the effectiveness of green tea in restoring the δ-ALA-D activity inhibited by cadmium in ovarian tissue.

O período compreendido da emergência, desenvolvimento folicular até a formação de um folículo dominante, requer um grande remodelamento tecidual. A ação de enzimas que promovem a lise do colágeno como as metaloproteinases de matriz (MMPs) são fundamentais para o desenrolar deste processo. É sugerido que a produção destas enzimas seja desencadeada pelo aumento na concentração de LH circulante, que atua sobre o epitélio superficial ovariano (ESO). O objetivo deste estudo foi aprofundar o conhecimento da expressão do RNAm das MMP-1 e MMP-2, durante o desenvolvimento folicular em éguas. A técnica de reação em cadeia da polimerase em tempo real (real-time PCR) foi utilizada, para relacionar à expressão do RNAm do receptor de hormônio luteinizante (RLH) e a imunolocalização deste RLH nas células que compõe o ESO da região da fossa de ovulação. Foram selecionadas diferentes porções de ovários de éguas cíclicas. As éguas foram distribuídas em dois grupos. Grupo 1: animais onde os folículos foram < 28mm de diâmetro (crescimento); Grupo 2: animais com folículos foram ≥28mm de diâmetro (dominância folicular). Os resultados mostraram que o RNAm para as MMP-1, MMP-2 e RLH, está presente no ovário equino durante todo o período de desenvolvimento folicular e nas diferentes porções do ovário analisadas. No Grupo 2, a MMP-1 e o RLH apresentaram uma concentração significativamente maior (p<0,05), de RNAm no ovário com folículo dominante do que no ovário contra-lateral. No Grupo 2, quando analisadas somente as diferentes porções do ovário com folículo dominante, evidenciou-se que a MMP-1, MMP-2 e RLH tiveram uma concentração maior (p<0,05), na região do estroma ovariano do que na região da fossa de ovulação. As éguas do Grupo 2, apresentaram uma concentração significativamente menor (p<0,05) do que as éguas do grupo 1 na quantidade de RNAm para RLH. Através da imunohistoquímica observou-se que as células da ESO na região da fossa de ovulação expressaram o RLH com diferença nas intensidades médias. As éguas com folículos dominantes tiveram maior intensidade média quando comparadas as éguas sem folículos dominantes (p<0,05). Os resultados sugerem que a MMP-1 e MMP-2 têm uma atividade importante em todo o processo de remodelamento tecidual, que ocorre durante o desenvolvimento folicular e que RLH presente no ovário e no ESO podem ter um papel fundamental para o mecanismo de sinalização para a produção das MMPs, visto que os ovários que apresentaram maiores concentrações de RLH tiveram maior expressão genica das MMPs. / The period extending from the follicular emergence and development to the formation of a dominant follicle requires a remarkable tissue reshaping. The action of enzymes that promote collagen lysis, such as matrix metalloproteinases (MMP), is fundamental to this process. It has been suggested that the production of those enzymes is triggered by an increased concentration of circling LH, which acts on the ovarian surface epithelium (OSE). The aim of this study was to deepen knowledge about the action of mRNA of MMP-1 and MMP-2 along the follicular development in mares by using the technique of real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) to relate the luteinizing hormone receptor (LHR) mRNA expression and the immunolocalization of LHR in the cells that compose OSE in the region of the ovulation fossa. Were selected different portions of ovaries of 12 cyclic mares. The mares were distribuited into two groups. Group 1 was composed of animals whose follicles were up to 28 millimiter wide (growth); Group 2 consisted of animals whose follicles were wider than 28 millimeters (follicular dominance).The results showed that mRNA for MMP-1, MMP-2 and LHR was present in the equine ovary during the whole period of follicular development and in the different portions of ovaries analyzed. Within Group 2, MMP-1 and LHR evidenced a significantly higher concentration of mRNA (p<0.05) in the ovary with dominant follicle than in the contralateral ovary. In Group 2, in which only the different portions of the ovary with dominant follicle were analyzed, MMP-1, MMP-2 and LHR showed a higher concentration (p<0.05) in the region of ovarian stroma than in the ovulation fossa. Mares from Group 2 presented a significantly lower concentration (p<0.05) than mare from Group 1 in terms of mRNA for LHR. Through immunohistochemistry, it was observed that OSE cells in the region of the ovulation fossa expressed LHR with different mean intensity. Mares with dominant follicles (Group 2) evidenced higher mean intensity in comparison to mares without dominant follicles (Group 1). The results have suggested that MMP-1 and MMP-2 participate in the whole tissue reshaping process, and LHR present in OSE may play a central role in the signaling mechanism for MMP production, as the ovaries presenting higher LHR concentrations had higher MMP gene expression.

This thesis considers various roles of circadian clock genes in insect physiology. Application of molecular-biology methods in Pyrrhocoris apterus, non-model insect species, enable us to investigate involvement of circadian clock genes in photoperiod induced physiological responses. We discover involvement of neuroendocrine cells, and a role of Juvenile hormone (JH) signalization in transduction of photoperiodic signalization to peripheral tissues. We found new principles of JH signal diversification in tissue specific manner, and in addition described molecular mechanism of photoperiod induced changes in gut physiology. Comparison of gut and fat body tissue reveals that mechanism observed in the gut is tissue specific, and that circadian clock genes exhibit tissue specific functional pleiotropic effect.

Submitted by Dianelli Lisboa Caun null (dianellicaun@gmail.com) on 2016-03-31T03:58:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado _ Dianelli Lisboa Caun!.pdf: 3828104 bytes, checksum: 90229c28752bb69884ad8a4a0b1595eb (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-04-01T12:25:24Z (GMT) / Submitted by Dianelli Lisboa Caun null (dianellicaun@gmail.com) on 2016-04-01T13:56:46Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado _ Dianelli Lisboa Caun!.pdf: 3828104 bytes, checksum: 90229c28752bb69884ad8a4a0b1595eb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-05T14:39:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 caun_dl_me_sjrp.pdf: 3828104 bytes, checksum: 90229c28752bb69884ad8a4a0b1595eb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T14:39:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 caun_dl_me_sjrp.pdf: 3828104 bytes, checksum: 90229c28752bb69884ad8a4a0b1595eb (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Apesar das diferentes estratégias reprodutivas apresentadas pelos morcegos, relativamente pouca atenção tem sido dada aos estudos morfológicos das estruturas reprodutivas nesses animais. Com o intuito de gerar informações que propiciem uma descrição mais detalhada dos aspectos reprodutivos em Chiroptera, o objetivo do presente estudo foi descrever a morfologia dos órgãos reprodutivos (útero e ovários) das fêmeas de Artibeus planirostris (Phyllostomidae) durante quatro fases do ciclo reprodutivo e analisar o processo de foliculogênese. As fêmeas de A. planirostris possuem um útero simples de histologia semelhante ao padrão geral dos mamíferos, com a parede uterina sendo composta por três camadas, na qual a mais interna, o endométrio, demonstrou um processo de descamação e necrose, que ao ser associada com sangramento, caracteriza a menstruação. Artibeus planirostris produz apenas um filhote por gestação e exibe um padrão poliéstrico, evidenciado pela captura de fêmeas concomitantemente grávidas e lactantes, demonstrando a existência de um estro pós-parto. Os ovários de A. planirostris, apresentaram uma polaridade aparente, com os folículos primordiais restritos a uma zona localizada em apenas um lado do ovário, a partir da qual os folículos são recrutados para posterior crescimento e desenvolvimento. Ambos os ovários são funcionais, confirmados pela presença do corpo lúteo, mas constatamos que eles não podem ser considerados bilateralmente simétricos, uma vez que o corpo lúteo foi encontrado preferencialmente no ovário esquerdo (76,2%). Os ovários durante a gravidez apresentam diferenças significativas entre si, evidenciando um processo de regressão por parte do ovário sem corpo lúteo, que apresenta grandes quantidades de folículos atrésicos, e valores de diâmetro, área e volume significativamente menores do que o ovário que ovulou (com corpo lúteo). Quanto ao processo de foliculogênese, A. planirostris segue o padrão básico dos mamíferos e outros morcegos, tendo início com o recrutamento de folículos primordiais, visando seu crescimento e desenvolvimento, podendo se tornar um folículo maduro (de Graaf) ou morrer por um processo de atresia. Com esses resultados, fornecemos detalhes sobre o ciclo reprodutivo de A. planirostris, evidenciando características reprodutivas típicas dessa espécie. / Despite the many reproductive strategies employed by bats, there is not enough attention being given to the morphological studies of reproductive structures of the Chiroptera. Aiming to generate informations that enable a more detailed explanation of the reproductive aspects of Chiroptera, the purpose of this study is to describe the morphology of the reproductive organs (uterus and ovaries) of female Artibeus planirostris (Phyllostomidae) during four phases of the reproductive cycle and analyse the folliculogenesis. The A. planirostis female has a simple uterus, histologically similar to the mammalian general pattern, uterine wall formed by three layers, of which, the inner layer, the endometrium, has showed process of necrosis and scaling that, when combined with bleeding, typifies menstruation. Artibeus planirostis produces only one offspring per gestation and presents a poliestric pattern, corroborated by the capture of females concomitantly pregnant and lactating, desmonstrating the existence of a postpartum estrus. The ovaries of A. planirostis showed an apparent polarity, with the primary follicles restricted to an area located in only one side of the ovary, from which the follicles are recruited to the consequent growth and development. Both ovaries are functional, confirmed by the presence of the corpus luteum and it was found, however, that they can not be considered bilaterally simetrical, for the corpus luteum was predominantly found in the left ovary (76,2%). The ovaries, during pregnancy, showed significant differences among each other, evincing a regression process of the ovary that did not present corpus luteum and showing great quantity of atretic follicles, and with diameter, area and volume significantly smaller than the ovary which presented corpus luteum, i.e., which has ovulated. As for the folliculogenesis process, A. planirostis follows the basic mammalian pattern as well as other bats, starting with primary follicle recruiting, growing and developing it, and enabling it to become a mature follicle (graafian foliclle) or dying of a process of atresia. With such results, we provide details on the reproductive cycle of A. planirostis, evincing typical reproductive characteristics for this species.