Orientador: Ana Carolina de Souza Chagas / Coorientador: Cintia Hiromi Okino / Banca: Maria Cristina de Sena Oliveira / Banca: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Resumo: Tendo em vista o impacto da infecção por Haemonchus contortus na ovinocultura, é crescente o número de estudos acerca da resistência a esse parasita, sendo essencial a compreensão dos mecanismos imunes diretamente relacionados. A resposta a infecções por helmintos é predominantemente de perfil Th2, embora o conjunto de mecanismos imunes que conferem resistência aos ovinos não sejam completamente elucidado. O presente estudo objetivou avaliar as respostas imunes locais (abomaso) associados à resistência à infecção por H. contortus em cordeiros Morada Nova, raça considerada resistente. Um rebanho composto por 287 ovinos foi fenotipado, por meio de contagens de ovos nas fezes, volume globular e peso corporal, após dois desafios parasitários com 4000 L3. Os 20 extremos de infecção (10 mais resistentes e 10 mais susceptíveis) foram submetidos a um terceiro desafio e abatidos sete dias após. Foram quantificados, por RT-qPCR, os níveis de expressão de 22 genes associados às respostas imunes, em abomaso e linfonodos abomasais. Além disso, eosinófilos e mastócitos foram quantificados, e os níveis de IgG e IgA no muco abomasal mensurados. Genes relacionados à resposta inata (TLR2 e CFI) foram superiormente expressos na região pilórica dos animais resistentes. Esses animais também apresentaram, na região fúndica, IL33 (promotor da polarização Th2) e MS4A2 (receptor de IgE) em níveis superiores aos verificados nos susceptíveis. Marcadores pró-infl... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Considering the impact of Haemonchus contortus infection on sheep breeding, there is an increasing number of studies addressing host resistance against to this parasite, and the understanding of directly related immune mechanisms is essential. The response to helminth infections is predominantly Th2- polarized, although the immune mechanisms that confer resistance to sheep are not fully elucidated. The present study aimed to evaluate the local immune responses (abomasum) associated with resistance to H. contortus infection in Morada Nova lambs, a breed considered resistant. A 287 sheep flock was phenotyped, by means of fecal egg counts, packed cell volume and body weight, after two parasitic challenges with 4000 L3. The 20 extremes of infection (10 most resistant and 10 most susceptible) were submitted to a third challenge and slaughtered seven days later. 22 immune-related genes were quantified (RT-qPCR) in abomasum and abomasal lymph nodes. In addition, abomasal eosinophils and mast cells were quantified, and IgG and IgA levels were measured (ELISA) in abomasal mucus. Genes related to innate response (TLR2 and CFI) were superiorly expressed in the pyloric region of the resistant animals. IL33 (Th2 polarization promoter) and MS4A2 (IgE receptor) were also at higher levels in this group. Proinflammatory cytokines (TNFα and IL1β) were superiorly expressed in the fundic region of the susceptible group, which also had IL4 (Th2 response) superiorly expressed in their abomasal lym... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Se diseñaron 2 exp. con ovejas Lacaune (LC) y Manchega (MN), para comparar la ingestión de MS (MSI), la digestibilidad, la cinética de tránsito y el contenido digestivo, con el fin de explicar las posibles diferencias de ingestión. En el exp. 1, 10 ovejas MN y 10 LC gestantes, se estabularon durante las últimas 10 semanas de gestación. La MSI y MS digestible fueron superiores en las ovejas LC que en las MN. La raza no afectó a la digestibilidad, ni a la cinética de tránsito ni al contenido del tracto digestivo. Los cambios de peso vivo (PV) y condición corporal fueron similares. Por el contrario, los corderos LC tendieron a pesar menos que los MN, lo que sugiere diferencias genéticas entre razas en la utilización de la energía. La mayor ingestión observada en las LC podría estar relacionada con la mayor demanda energética para el desarrollo de la glándula mamaria. En el exp. 2, 16 ovejas MN y 16 LC se estabularon las 12 primeras semanas de lactación. La producción de leche, el contenido de grasa y proteína, así como la MSI y MS digestible fueron superiores en las ovejas LC que en las MN. Al avanzar la lactación la MSI se mantuvo constante en las ovejas LC, mientras que en las MN disminuyó. A lo largo de este periodo las LC perdieron 0.5 kg de PV mientras que las MN ganaron 4.4 kg. La raza no afectó ni la digestibilidad, ni la cinética de tránsito. El contenido total del tracto digestivo fue superior en las LC que en las MN. Los resultados sugieren que el esquema de selección de la raza LC, ha incrementado la producción de leche junto con la ingestión voluntaria, estando ésta última asociada a un incremento de la capacidad ruminal. La mayor producción de leche de las LC no pueden atribuirse únicamente a la mayor MSI y otros factores son necesarios para soportar esta mayor producción. Finalmente, se compararon 6 modelos matemáticos con el fin de seleccionar el que mejor describía el tiempo de retención de dos marcadores, Cr2O3 y Co-EDTA. Se utilizaron los datos de los experimentos 1 y 2. Las curvas de excreción de cromo y cobalto se ajustaron a un modelo compartimental (M1), dos modelos bicompartimentales tiempo independientes con tiempos de retención distribuidos exponencialmente (M2 y M3), y tres modelos bicompartimentales tiempo dependientes con órdenes crecientes de gamma dependencia (M4, M5 y M6). Los modelos M1, M5 y M6 fueron los mejores ajustes para describir la cinética de tránsito digestivo. Con el fin de averiguar si las estimaciones obtenidas utilizando marcadores son una buena expresión de los parámetros reales, 8 ovejas se sacrificaron en la semana 5 y otras 8 en la semana 12 de lactación. Antes del sacrificio, se les administraron 2 marcadores, Cr2O3 y Co-EDTA, para estimar los ritmos de paso en los compartimentos digestivos. Los ritmos de paso estimados con las curvas de excreción fecal de Cr2O3 no representaron la cinética digestiva del marcador obtenida con los datos de sacrificio, aunque la predicción mejoró cuando se utilizó el Co-EDTA. / Two experiments were carried out with pregnant and lactating dairy ewes, to compare dry matter intake (DMI), and total tract apparent digestibility, digesta kinetics and digestive tract content between Lacaune (LC) and Manchega (MN) sheep, to explain possible differences between both breeds in voluntary feed intake. In experiment 1, 10 MN and 10 LC single-bearing pregnant ewes, were permanently housed for the last 10 weeks of pregnancy. DMI and digestible DMI were higher in LC than in MN sheep. Breed did not affect total tract apparent digestibility, digesta kinetics or digestive content. Changes in body weight and body condition score were similar between breeds. In contrast, LC lambs tended to weigh less than MN lambs, suggesting genetic differences in the energy utilization between breeds in late pregnancy. Higher DMI observed in LC sheep could be related to higher energy demand for mammary development. In experiment 2, 16 MN and 16 LC lactating multiparous ewes, were permanently housed during the first 12 weeks of lactation. Milk, fat and protein yield as well as DMI and digestible DMI in LC ewes was higher than in MN ewes. DMI was constant in LC sheep with advancing lactation, while in MN sheep decreased. Throughout this period LC ewes lost 0.5 kg of body weight while MN gained 4.4 kg. Breed did not affect either apparent digestibility or digesta kinetics. The total tract digestive content was higher in LC than in MN sheep, particularly due to the reticulo-rumen. Results suggest that the scheme of selection in LC dairy sheep has increased milk yield together with voluntary feed intake, the latter being associated with an increase in the rumen fill capacity. Finally, the aim of the third study was to take a mathematical approach to select the best modelling method to estimate the outflow rates from external marker excretion curves in dairy sheep. Data from previous experiments were used as a source of marker excretion curves. Six mathematical models were compared. Faecal chromium and cobalt concentration curves were fitted with a multicompartmental model (M1), 2 two-compartment age-independent models with exponential distributed residences times (M2 and M3), and 3 two-compartment models with increasing order of gamma age dependency (M4, M5 and M6). The models M1, M5 and M6 proved to be the best fits for describing digesta kinetics in pregnant and lactating ewes. To ascertain whether the estimates obtained through the markers are a good expression of the real parameters, 8 lactating ewes were slaughtered at week 5 and 8 more at week 12 of lactation, Prior to slaughtering, two external markers were administered in order to estimate rates of passage of the reticulo-rumen and large intestine. Outflow rates estimated from faecal chromium excretion did not represent marker kinetics in the gut compartments obtained from slaughter data, but the prediction improved when the marker was Co-EDTA.

En la presente tesis doctoral se evaluo la posibilidad de modificar los sistemas y métodos de ordeño mecánico utilizados habitualmente, con el fin de modificar su rutina y hacerlo lo mas eficaz posible. En una primera experiencia se suprimieron, durante una lactación, los repasos manuales en el ordeño mecánico diario. Como resultado de la supresión, la producción media diaria de leche, y la total ordeñada, se vio disminuida, con lactaciones más cortas. La composición química de la leche y estado sanitario de la ubre, valorado por el indice cmt, no se vieron afectados por la supresión de repasos manuales. El valor de la fracción de "leche de repaso manual" fue semejante a las pérdidas de producción observadas, lo que indica una ausencia de inhibicion de la producción de leche por la supresión de repasos. Las ovejas de 2 picos soportaron mejor la supresion del repaso manual, con una menor perdida de produccion que las de 1 pico y con un fraccionamiento de leche mas favorable al ordeño a maquina. En una segunda experiencia, se comparo el efecto de 2 pulsadores comerciales. La producción de leche, su fraccionamiento y composición quimica no se vieron afectadas por el tipo de pulsador empleado, asi como tampoco la caida de pezoneras y la sanidad de la ubre. Sin embargo, el pulsador de 120 p/mn-50% mantuvo mas tiempo, a lo largo de la lactación, el reflejo de eyección en las ovejas de 2 picos, que fraccionaron la leche a maquina de un modo mas adecuado. Durante la lactación disminuyeron, fundamentalmente, los valores del volumen y caudal del 2 pico. En una tercera experiencia, se utilizaron 3 manguitos de pezonera de distinto diámetro de embocadura. No se encontraron efectos del diámetro del manguito sobre la producción y composicion de leche. Las dimensiones del pezón de las ovejas, la longitud más que la anchura, presentaron correlaciones positivas y significativas con la "leche de repaso manual". Por tanto, parece conveniente el empleo de manguitos de pezonera de mayor longitud.

Se utilizaron 79 ovejas Manchega y 56 ovejas Lacaune en 4 experimentos para estudiar los efectos del intervalo entre ordeños y de la supresión de ordeños sobre la producción, la composición de la leche, los compartimentos de la ubre y la permeabilidad de las uniones estancas. En el Exp. 1 y 2, 12 Manchegas y 12 Lacaunes fueron ordeñadas a diferentes intervalos entre ordeños (4, 8, 12, 16, 20 y 24 h), a mitad de lactación. La leche total y cisternal aumentaron linealmente hasta las 24 h, mientras que la alveolar lo hizo hasta las 16 h en Manchega y 20 h en Lacaune, mostrándose el papel relevante de la cisterna mamaria para acumular leche y favorecer el aumento de la producción. Las Lacaune siempre presentaron mayores volúmenes y porcentajes cisternales que las Manchega. El área cisternal aumentó hasta las 20 h en Manchega y 16 h en Lacaune, debido a la limitada profundidad de la sonda. A las 8 h, se obtuvieron las mejores correlaciones entre el área y la leche cisternal (Manchega: r = 0.70; Lacaune, r = 0.56). La grasa disminuyó en la leche total y cisternal al incrementarse el intervalo entre ordeños, y aumentó en la alveolar hasta las 12 h en Manchega y las 20 h en Lacaune. La proteína láctea sólo aumentó en la leche alveolar al hacerlo el intervalo. El contenido en lactosa no varió en las Lacaune pero disminuyó en las Manchega a las 24 h. La lactosa plasmática aumentó marcadamente tras 20 h de acumulación de leche en la ubre, por tanto, las uniones estancas se abrieron en ambas razas, aunque en mayor medida en Manchega. En el Exp. 3, 27 Manchegas y 26 Lacaune se ordeñaron 1 (1X) o 2 veces al día (2X) al inicio (sem. 6-14) o mitad (sem. 14-22) de lactación. 1X al inicio de lactación, redujo un 37% la producción en Manchega pero menos de un 11% en Lacaune. Las ovejas con cisternas pequeñas mostraron pérdidas superiores. A mitad de lactación, 1X no produjo pérdidas productivas. La composición y el RCS no se afectaron negativamente por 1X, pero la permeabilidad de las uniones estancas aumentó al pasar de 2X a 1X, especialmente al inicio de la lactación y en las Manchega. En el Exp. 4, se utilizaron 40 Manchegas y 18 Lacaune para estudiar la respuesta productiva a la supresión de 2 ordeños semanales (12X) con respecto a la no supresión de ordeños (14X), al inicio (sem. 7-15) y a mitad de lactación (sem. 15-22). Al inicio de la lactación, 12X tendió a reducir un 16% la producción de leche en Manchega, pero no la afectó a partir de mitad de lactación. En las Lacaune, 12X no afectó a la producción de leche. La supresión de ordeños no afectó negativamente la composición ni los RCS de la leche. El día de la supresión, la producción, el contenido en grasa y en lactosa de la leche disminuyeron en ambas razas, siendo más marcada la pérdida productiva al inicio que a mitad de lactación. Al recuperar la rutina normal de ordeño, la producción de leche aumentó marcadamente, tanto más cuanto mayor fue el tamaño cisternal. El porcentaje graso mejoró desde el segundo día de supresión, recuperando los valores de referencia 48 horas después de la última supresión. La proteína no varió a lo largo de la semana y los RCS de la leche no se vieron afectados negativamente por las supresiones. Las uniones estancas se debilitaron en ambas razas, pero el epitelio mamario pareció adaptarse a las supresiones al aplicarse de forma sucesiva. / Seventy-nine Manchega and 56 Lacaune dairy ewes were used in 4 experiments to study the effects of milking intervals and milking omissions on lactational performance, udder compartments and TJ leakiness. In Exp. 1 and 2, 12 Manchega and 12 Lacaune were milked at different milking intervals (4-, 8-, 12-, 16-, 20-, and 24-h) in a 2-wk experiment performed in mid-lactation. Total and cisternal milk increased linearly for up to 24-h, whereas alveolar milk increased until reaching a plateau at 16-h in Manchega and 20-h in Lacaune ewes, demonstrating the ability of the cistern to dilate as a result of milk transfer from the alveolar to the cisternal compartment. Lacaune ewes accumulated greater cisternal volumes and showed greater cisternal percentages than Manchega ewes for all the milking intervals. Cisternal area measured by ultrasonography increased with milking interval until 20 h in Manchega and 16 h in Lacaune ewes, being conditioned by probe depth capability. The greatest correlation between cisternal area and cisternal milk was observed at 8-h milking interval (Manchega, r = 0.70; Lacaune, r = 0.56). Milking interval affected markedly milk fat content, which decreased in total and cisternal milk from 4- to 24-h in both breeds, but increased in alveolar milk (until 12 h in Manchega; and 20 h in Lacaune). Total and cisternal milk protein content did not vary, but protein content increased in alveolar milk with milking interval. Lactose milk content was stable in Lacaune and decreased at 24 h in Manchega ewes. Plasma lactose increased dramatically after 20 h of milk accumulation, indicating an enhanced permeability of mammary TJ in both breeds, despite being more pronounced in Manchega than in Lacaune ewes. In Exp. 3, 27 Manchega and 26 Lacaune were milked 1X or 2X in early- and mid-lactation. Once-daily milking, when performed in early-lactation, reduced milk yield by 37% in Manchega and by less than 11% in Lacaune, those with small mammary cisterns being more affected. Milk yield was not affected by 1X when started in mid-lactation in either breeds. No negative effects on milk composition and SCC were observed. TJ permeability increased after switching from 2X to 1X, especially in early lactation and in Manchega ewes. In Exp. 4, 40 Manchega and 18 Lacaune were used to study the response to omitting 2 milkings weekly (12X) in early- (wk 7 to 15) and mid- lactation (wk 15 to 22) comparing to milking twice-daily every day (14X). Omitting 2 milkings weekly tended to reduce milk yield by 16% in Manchega ewes when applied in early-lactation, but no effects were observed in mid-lactation. Milk yield did not decrease as a result of 12X in Lacaune ewes, either in early- or in mid-lactation. Milk composition and SCC were not negatively affected by milking omissions throughout lactation. Milking omission decreased milk yield, milk fat and lactose content on the 1st omission day of the week in both breed, losses being more noticeable in early- than in mid-lactation. A compensatory increase was noticed in milk yield after recovering the twice-daily milking routine, being greater in large- than in small-cisterned ewes. Milk fat content increased after the 1st milking omission, reestablishing reference values 48 h after the 2nd milking omission, and this should be taken into account for milk recording. Milk protein did not vary and SCC was not negatively affected by milking omissions. Milking omissions caused TJ leakiness in both breeds, but mammary epithelium adapted to extended milking intervals when applied successively.

La present Tesi es centra en la caracterització y avaluació dels cuatre gens candidats BMPR1B, BMP15, GDF9 i MTNR1A, a la raça ovina Rasa Aragonesa (RAA) per ser utilitzats en selecció assistida per marcadors (MAS) en el decurs del programa de millora genètica dut a terme per la cooperativa UPRA Oviaragón SCL. El tres primers gens han demostrat tenir influencia sobre el caràcter prolificitat en altres races ovines, mentres que l’últim sembla estar associat a estacionalitat reproductiva. El resultat més rellevant ha estat la troballa d’una nova variant gènica natural en el gen BMP15, anomenada FecX R què, en heterozigosi, produeix un increment promig de 0.32 xais més per part. Contràriament, les famelles portadores homozigótiques són estèrils per infantilisme gonadal. L'estudi de lligament per mitjà de genotipat selectiu, evidencià una associació altament significativa (P<0.001) entre presència de l’al∙lel FecX R en heterozigosi i alts valors genètics estimats (VGEs) per al caràcter prolificitat en un grup selecte de femelles del programa, que a més pertanyien a la cua alta de la distribució de valors per a aquest caràcter. Molecularment, el nou al∙lel es caracteritza per la presència d'una deleció de 17 parells de bases localitzada a la regió preproteïna de l'exó 2 del gen BMP15. Aqueta produeix un canvi en la pauta de lectura i, introdueix posteriorment un codó "stop" prematur impedint la síntesi completa de la preproteïna. Els estudis sobre freqüències gèniques i genotípiques duts a terme a la població de RAA en selecció, han servit per veure l'estat actual de la mutació en les ramaderies i per aportar la informació necessària en la reestructuració del programa d'encreuaments i IAs. A més, els estudis sobre el tipus de part i l'efecte freemartin ofereixen noves dades per a la presa de decisions en la futura selecció per prolificitat deguda al al∙lel FecX R i la seva particular modèl d'herència lligat al sexe. La resta de gens caracteritzats no apareixen associats a prolificitat en RAA. Els SNPs silents 606 i 612 del gen MNTR1A que en algunes races està associat a estacionalitat reproductiva, també són presents en la raça RAA. La mutació 606 és més rellevant que la 612 degut a que l’hem associat significativament a ciclicitat reproductiva a contra estació, en un diseny familiar filla, indicant que el polimorfisme 606 es troba en desequilibri de lligament amb una altra mutació propera al gen MNTR1A, doncs altres mutacions detectades tant a la regió codant del gen com a al seu promotor no han presentat associació amb el caràcter ciclicitat fòra de l’estació reproductiva. / La presente Tesis se centra en la caracterización y evaluación de los cuatro genes candidatos BMPR1B, BMP15, GDF9 y MTNR1A en la raza ovina Rasa Aragonesa (RAA) para ser utilizados como marcadores moleculares en la selección de reproductores dentro del esquema de mejora genética llevado a cabo por la cooperativa UPRA Oviaragón SCL. De estos, los tres primeros han demostrado tener una influencia clara sobre el carácter prolificidad en otras razas ovinas, mientras que MTNR1A se ha presentado como marcador interesante en la selección de caracteres relacionados con estacionalidad reproductiva. El resultado más destacable ha sido el aislamiento y caracterización de una nueva variante natural del gen BMP15 en RAA, denominada FecX R, que produce un promedio de 0.32 corderos más por parto en aquellas hembras portadoras del nuevo alelo en heterocigosis, mientras que las hembras portadoras en homocigosis son estériles por tener órganos sexuales inmaduros. El estudio de asociación mediante genotipado selectivo evidenció una asociación altamente significativa (P<0.001) entre la presencia del alelo FecX R en heterocigosis y valores genéticos estimados (VGEs) de prolificidad elevados en un grupo selecto de hembras del programa, confirmando la importancia directa del gen BMP15 en la prolificidad de esta raza. Molecularmente, el alelo FecX R se caracteriza por la presencia de una deleción de 17 pares de bases en la secuencia nucleotídica del segundo exón, en la región de preproteína, que produce un cambio en la pauta de lectura e introduce un codón "STOP" prematuro, impidiendo así la síntesis completa de la preproteína. El particular modo de herencia ligado al sexo, los estudios sobre el tipo de parto y freemartinismo o los estudios sobre frecuencias génicas y genotípicas llevados a cabo en la población han contribuido a valorar el estado actual de la mutación en las ganaderías aportando la información necesaria para la reestructuración del programa de cruzamientos e IA de interés para la cooperativa. El resto de genes caracterizados (BMPR1B, GDF9 y MNTR1A) no tienen efecto sobre la prolificidad en RAA. Los marcadores silentes de tipo SNP 606 y 612 del gen MNTR1A que en algunas razas ganaderas se han considerado asociados a estacionalidad reproductiva también están presentes en RAA. La mutación 606, resultó más relevante en esta raza por presentar asociación con ciclicidad reproductiva fuera de estación en un diseño familiar hija, indicando que el SNP606 está en desequilibrio de ligamiento con una mutación responsable cercana al gen MTNR1A, ya que otras mutaciones localizadas tanto en su zona codante como en su promotor, no parecen presentar asociación significativa con el carácter estacionalidad. / This Thesis focuses on the characterization and evaluation of four candidate genes (BMP15, GDF9, BMPR1B and MTNR1A) related to prolificacy and reproductive seasonality traits in the Rasa Aragonesa (RAA) sheep breed. BMP15, GDF9 and BMPR1B have shown influence on prolificacy in other breeds while MTNR1A can influence reproductive seasonality. The most relevant result was the discovery of a new naturally occurring mutation in the BMP15 gene in the ovine Rasa Aragonesa breed. This mutation is a deletion of 17 base pairs that leads to an altered amino‐acid sequence which introduces a premature stop codon in the protein. Highly significant associations (p < 0.0001) were found between high and low estimated breeding values (EBVs) for prolificacy and the genotypes (XR/ X+) of the BMP15 gene in RAA animals. As with other mutations found in BMP15 gene, this one is associated with both increased prolificacy and sterility in heterozygous and homozygous ewes, respectively. Furthermore, statistical analysis showed that the FecXR allele increases prolificacy by 0.3243+0.0448 lambs per sheep per parturition. An accurate, reliable and quick method was developed by duplex PCR for genetic sex determination and freemartin detection, amplifying the ovine‐specific Y chromosome repetitive fragment and FecX alleles of BMP15 gene in replacement ewes. This is important as it will decrease the number of infertile ewes with non‐functioning ovaries sterilized in the womb by hormones from a male twin. New mutations discovered in the GDF9, BMPR1B and MTNR1A genes have not been shown to influence prolificacy in the RAA as they do in other sheep breeds. However, a significant effect was found between SNP606 of the MTNR1A gene and spontaneous ovulation out of the reproductive season. The T allele was associated with cyclicity in Rasa Aragonesa sheep while in other breeds, this was the C allele. This finding, along with the fact that this polymorphism does not result in an amino‐acid substitution, suggest that SNP606 may act in linkage equilibrium with a mutation in other genes responsible for breeding out of season. In this sense, new polymorphims in the promotor and coding region of the gene MTNR1A did not show any association for breeding out of season in the RAA breed.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-23Bitstream added on 2014-06-13T19:03:34Z : No. of bitstreams: 1 antunes_jmap_dr_botfmvz.pdf: 459822 bytes, checksum: 49113c35cf13816409ac1cccdd0ec4f8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Mundialmente a brucelose continua sendo um problema econômico e de saúde pública. A brucelose ovina é reconhecida como a mais importante causa de epididimite, sendo uma das principais causadoras de infertilidade em ovinos. Os mecanismos imunes envolvidos na defesa e eventualmente na persistência e manutenção do agente são desconhecidos. Brucellas spp. geram somente uma resposta inflamatória moderada e os estudos da patogenia da brucelose ovina são escassos. Recentes avanços demonstram que a resposta inflamatória induzida pelas Brucellas spp. representam provavelmente o resultado de uma tentativa de evasão e supressão da resposta imune hospedeira. Utilizando as tecnologias de RT-PCR em tempo real (q) e microarranjos este trabalho avaliou a expressão gênica da resposta imune e inflamatória na brucelose experimental ovina. O estudo apresenta a primeira análise do perfil de expressão gênica de citocinas através de RT-qPCR em tecidos reprodutivos e não reprodutivos de carneiros experimentalmente infectados com cepa de B. ovis PA até 240 dias pós infecção (dpi). O estudo também demonstra a primeira análise geral da expressão gênica por meio de microarranjos em tecidos reprodutivos e pool de linfonodos de carneiros experimentalmente infectados com cepa de B. ovis PA até 240 dpi. Neste trabalho demonstrou a persistência da B. ovis e o perfil inflamatório da resposta imune gerado pela infecção. Com este estudo espera-se aumentar o conhecimento da patogênese da B. ovis em carneiros infectados / Globally, brucellosis remains an economic problem and public health threat. The ovine brucellosis is recognized as the most important cause of epididymitis, one of the main causes of infertility in sheep. The mechanisms involved in immune defense and possibly the persistence and maintenance of the agent are unknown. Brucellas spp. generate only a moderate inflammatory response, and studies of the pathogenesis of ovine brucellosis are scarce. Recent developments have shown that Brucella spp. induces a moderate inflammatory response probably the result of an attempt to escape and to suppress the host immune response. Through real time (q) RT-PCR and microarrays the purpose this study evaluated the gene expression of immune and inflammatory response in experimental ovine brucellosis. The study demonstrated for the first time the gene expression profile of cytokines by RT-qPCR in reproductive and non reproductive tissues of rams experimentally infected with B. ovis PA strain up to 240 days post infection (dpi). The research also showed the first overall analysis of gene expression using microarrays in reproductive tissues and pool of lymph nodes of rams experimentally infected with B. ovis PA strain up to 240 dpi. The study demonstrated the persistence of B. ovis and the inflammatory profile of immune response occasioned due the infection. These results are expected to increase the knowledge of the pathogenesis of B. ovis in sheep

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-09Bitstream added on 2014-06-13T19:22:49Z : No. of bitstreams: 1 silva_mgb_dr_botfmvz.pdf: 627637 bytes, checksum: 227238a9a642c9cce2bdea54b3a4fccc (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Objetivou-se avaliar os efeitos das associações dos grãos de milho e de sorgo, secos e ensilados úmidos sobre o desempenho cordeiros mestiços Suffolk x Santa Inês e recuperação de amido fecal das dietas. O delineamento experimental foi em blocos casualizados com quatro tratamentos, três repetições e cinco cordeiros por repetições. Foram utilizados 60 cordeiros machos não castrados, mestiços Suffolk x Santa Inês, com média de 15,5 kg de peso corporal (PC) e 60 dias de idade. Quatro associações de grãos na dieta foram avaliadas: sorgo seco triturado + silagem de grãos úmidos de sorgo (SS:SU); milho seco triturado + silagem de grãos úmidos de sorgo (MS:SU); milho seco triturado + silagem de grãos úmidos de milho (MS:MU); sorgo seco triturado + silagem de grãos úmidos de milho (SS:MU). Houve diferença para peso final e ganho de peso médio diário. Os cordeiros alimentados com associações de silagem de grãos úmidos de sorgo SS:SU e MS:SU, apresentaram melhores resultados para peso final 26,18 e 29,46 kg e ganho de peso médio diário 139 e 162,4 g, respectivamente. Não observou diferença entre as associações de grãos para os consumos de matéria seca. Não houve diferença para recuperação dos teores de amido fecal (16,47% em média). A inclusão de sorgo associado na forma seca e ensilada em rações para cordeiros permite resultados semelhantes ao proporcionado pelo milho no desempenho sem influenciar o desempenho e a recuperação de amido fecal / This study aimed to evaluate the effect of associations of dry grains and wet corn and sorghum on the performance of Suffolk x Santa Ines lambs and recovery of diets fecal starch. The experimental design was a randomized block with four treatments, three replicates and five lambs for repetitions. Sixty non castrated male lambs with initial average weight (BW) of 15.5 kg and 60 days old were used in this experiment. Four associations of grain in the diet were evaluated: dry ground sorghum + high moisture grain sorghum silage (SS:SU); dry ground corn + high moisture grain sorghum silage (MS: SU); dry ground corn + high moisture corn silage (MS: MU), dry ground sorghum + high moisture corn silage (SS: MU). There were differences in final weight and average daily weight gain. The associations of lambs fed high moisture corn silage sorghum SS: MS E SU: SU, showed better results for final weight of 26.18 and 29.46 kg and average daily weight gain of 139 and 162.4 g, respectively. No difference was observed between the associations for grain dry matter intake. There was no difference in recovery of fecal starch content (16.47% on average). The inclusion of sorghum silage associated with dry grain in rations for lambs provides results similar to corn without affecting animal performance and recovery of fecal starch

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-24Bitstream added on 2014-06-13T19:43:51Z : No. of bitstreams: 1 rocha_ra_dr_botfmvz.pdf: 361805 bytes, checksum: 5c55d3f7c6f6c5d5c1f2a2ed98259327 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O experimento teve como objetivo avaliar a sobrevivência de larvas infectantes (L3) de Trichostrongylus colubriformis em três espécies forrageiras. Para tal, foram utilizados módulos experimentais constituídos por seis canteiros de 32,4 m2 cada, estabelecidos com as seguintes gramíneas forrageiras: Brachiaria decumbens cv. Australiana, Cynodon dactilon cv. Coast-cross e Panicum maximum cv. Aruana, perfazendo dois canteiros por espécie. Cada canteiro foi dividido em 36 parcelas, de 30 x 30 cm, de forma a permitir seis repetições por espécie e por altura em cada semana de colheita de material. A sobrevivência larval foi avaliada nas quatro estações do ano, sob o efeito de duas alturas de poda das forragens (baixa, 5 cm e alta, 30 cm). A poda foi realizada imediatamente antes da deposição das fezes. Ocorreram quatro deposições de fezes, uma a cada estação do ano. A colheita das fezes e da forragem foi realizada uma, duas, quatro, oito, 12 e 16 semanas após cada deposição de fezes nos canteiros experimentais. A altura da forragem foi medida em cada uma das subdivisões imediatamente antes das colheitas. A forragem foi cortada com uma tesoura de poda, rente ao solo, de uma área delimitada com o auxílio de um círculo de 10 cm de raio. As fezes foram recolhidas manualmente dos canteiros. A recuperação de L3 das amostras fecais foi maior quando as fezes foram depositadas em meio ao capim alto (com 30 cm - P<0,05). Porém, a recuperação de L3 nas forragens foi similar em ambos os cortes. Em relação à concentração de L3, o corte baixo propiciou maior quantidade de L3 por quilo de matéria seca (P<0,05). As maiores recuperações de L3, nas fezes e nas forragens, ocorreram quando as fezes foram depositadas no outono e na primavera. Dentre as espécies forrageiras, o capim aruana foi o que no geral apresentou maiores concentrações de larvas infectantes de T. colubriformis. / The purpose of the experiment was to evaluate infective Trichostrongylus colubriformis larvae (L3) survival in three forage species. Experimental modules formed by six 32.4-m2 plot, established with the following forage grass species, were used in the study: Australian Brachiaria decumbens cv., Cynodon dactilon cv. Coast-cross, and Panicum maximum cv. Aruana, totaling two plots for each species. Each plot was divided into 36 30 x 30 cm parts in order to allow six replicates per species and per height in each week of material collection. Larval survival was evaluated in the four seasons of the year under the effect of two forage paring heights (low, 5 cm, and high, 30 cm). The paring was carried out immediately before the feces were deposited. Four feces deposits were made, one in each season of the year. Feces and forage collection was performed one, two, four, eight, 12 and 16 weeks after each feces deposition in the experimental plots. Forage grass height was measured in each subdivision immediately before the collections. The forage was cut using pairing scissors, close to the soil, from an area delimited with a circle with a 10-cm radius. The feces were collected manually from the plots. L3 recovery rates from fecal samples were bigger when the feces were deposited in high grass (measuring 30 cm - P<0,05). However, L3 recovery in the forages was similar for both cuts. So far as the L3 concentration is concerned, the low cut resulted in a bigger number of L3 per kilogram of dry matter (P<0,05). The higher L3 recovery in the feces and in the forage grass occurred when the feces were deposited in the autumn and in the spring. Among the forage species, the aruana grass was the one that, in general, harbored the biggest concentrations of infecting T. colubriformis larvae.

Orientador: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Resumo: Dois experimentos foram realizados no período de 2013 a 2015, em cordeiros da raça Suffolk, com objetivo de avaliar a dinâmica da infecção mista por Haemonchus contortus e Haemonchus placei em ovinos, bem como a competição e o cruzamento interespecífico com a formação de híbridos. Um cordeiro doador, livre de infecções helmínticas, recebeu infecção artificial oral única com 25.000 larvas infectantes (L3) de H. contortus, isolado de laboratório SpHco2, com múltipla resistência aos anti-helmínticos, enquanto um bezerro doador foi infectado via oral, em dose única, com 25.000 L3 de H. placei, isolado de laboratório SpHpl1, susceptível à ação do levamisol. No primeiro experimento, realizado no ano de 2013, cordeiros mantidos confinados e livres de infecções helmínticas foram inicialmente infectados com 2.000 L3 de H. placei no dia zero e 11 dias depois, os mesmos animais receberam 2.000 L3 de H. contortus (grupo parental, n=6). Coproculturas individuais dos animais do grupo parental foram utilizadas para a produção de L3, as quais foram destinadas à infecção dos animais dos grupos F1 (primeira geração filial), grupos F1-42 DPI (n=6) e F1-84 DPI (n=6), o que permitiu avaliar a produção de híbridos. Todos os animais pertencentes aos grupos: parental, F1-42 DPI e F1-84 DPI, foram eutanasiados aos 50, 42 e 84 dias pós-infecção (DPI), respectivamente, para a identificação e quantificação dos parasitas, a fim de determinar a competição interespecífica e a hibridização. ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador:Mario Jefferson Quirino Louzada / Co-orientador:Paulo Cesar Ciarlini / Banca:Tatiana de Sousa Barbosa / Banca:Suely Regina Mogami Bomfim / Resumo:A determinação da capacidade antioxidante total (TAC) tem importância fundamental na avaliação do estresse oxidativo, tanto em humanos como em animais. Cada vez mais tem se tornado relevante o estudo de metodologias para determinar a TAC em várias áreas como em tecnologia e ciência de alimentos, laboratórios clínicos, nutrição animal e humana. Na espécie ovina esta determinação ainda não foi validada. Antes de iniciar qualquer tipo de análise da TAC, o método utilizado deve ser validado, pois a validação de métodos é um aspecto primordial da garantia da qualidade analítica. A validação é um processo dinâmico e constante, que se inicia na fase de seleção, desenvolvimento e otimização do método, qualidade dos instrumentos, materiais e analistas, permanecendo na fase de experimentos. Um processo de validação bem definido deve obedecer às características investigadas no processo de validação a fim de demonstrar o desempenho do método como: linearidade, limite de detecção, limite de quantificação, precisão, exatidão, recuperação analítica e robustez. O método mais comumente utilizado para determinar a TAC é o método espectrofotométrico-colorimétrico que usa (ABTS˙+) 2,2'-azinobis (3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato). Apesar da existência de muitas técnicas modernas, o método espectrofotométrico tem demonstrado ser eficaz, além do baixo custo e de fácil manuseio. O método foi desenvolvido, padronizado e validado / Abstract:The determination of total antioxidant capacity (TAC) is important to evaluation of oxidative stress, in both humans and animals. The study of methodologies to the determination of TAC has become relevant in several areas such as technology and food science, clinical laboratory, animal and human nutrition. In sheep, this determination has not yet been validated. Before starting any type of analysis, the method used for TAC measurement must be validated, since method validation is a key aspect of analytical quality assurance. Validation is a dynamic and ongoing process that begins at the stage of selection, development and optimization of the method, the quality of the tools, materials and analysts, remaining in the experimental phase. A well defined process of validation must have the characteristics investigated in the validation process to demonstrate the performance of the method as: linearity, limit of detection, limit of quantification, accuracy, precision, analytical recovery and robustness. The most commonly used method used to determine the TAC is the spectrophotometric-colorimetry assay using the (ABTS˙+) 2,2'-azinobis (3- ethylbenzthiazoline-6-sulfonate). Despite the existence of many modern techniques, the spectrophotometric method has shown to be effective, in addition to lower cost and easy handling. The method was developed, validated and standardized / Mestre