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Respostas vasculares mediadas pelo óxido nítrico

Terluk, Márcia Ribeiro January 2005 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226452.pdf: 1463507 bytes, checksum: cc42c141dca74c9111dd2a5cc17a5db8 (MD5) / O choque séptico é uma síndrome caracterizada pela presença de hipotensão, hiporeatividade a vasoconstritores e hipoperfusão. Em parte, estes eventos vasculares estão associados a vários mecanismos moleculares que envolvem a expressão da óxido nítrico (NO) sintase induzida (iNOS), síntese de NO, ativação da enzima guanilato ciclase solúvel e canais de K+ e, a formação de S-nitrosotióis. O presente estudo demonstra que a exposição in vitro de anéis de aorta torácica de rato à doadores de NO, S-nitroso-N-acetil-DL-penicilamina (SNAP) e trinitrato de glicerila, induziu hiporeatividade à fenilefrina de longa duração. Em vasos com e sem endotélio, o aumento da intensidade da hiporeatividade à fenilefrina foi dependente do aumento da concentração do SNAP. A ausência da camada endotelial potencializa a hiporeatividade à fenilefrina produzida pelo NO, caracterizando um efeito protetor vascular do endotélio, não associado à produção de ânion superóxido (O2-), angiotensina II, endotelina (via receptores ET-A), produtos derivados das enzimas ciclooxigenase (COX), lipooxigenase, citocromo P-450 e NO sintase endotelial (eNOS). O ácido 5,5'-ditio-bis-(2-nitrobenzóico), DTNB (um agente oxidante que não permeia a membrana celular), previne e reverte a hiporeatividade à fenilefrina de longa duração mediada pelo SNAP e, na ausência do endotélio, o DTNB demonstrou maior eficácia em prevenir o efeito do NO. Estes achados evidenciam a participação de específicos grupamentos sulfidrilas presentes nas proteínas das membranas celulares, e em especial na musculatura lisa vascular. Em vasos com endotélio, a prevenção da hiporeatividade à fenilefrina causada pelo SNAP também foi verificada com outro agente oxidante, a diamida, mas não com o uso de agente redutor como o ditiotreitol (DTT) em anéis sem endotélio. A adição de L-cisteína e N-acetilcisteína, tióis de baixo peso molecular, promoveu marcante relaxamento de longa duração em vasos pré-incubados com SNAP, sugerindo que a hiporeatividade e o vasorelaxamento são eventos relacionados a S-nitrosação de resíduos de cisteína e a mobilização de NO. As várias adições de L-cisteína reverteram a hiporeatividade à fenilefrina em vasos com endotélio pré-incubados com SNAP. O efeito oxidante do DTNB bloqueou o relaxamento promovido pela ativação de canais de K+ sensíveis ao Ca2+ de alta condutância (BKCa) mediado pelo NS1619, sugerindo que o DTNB inibe os eventos vasculares causados pelo NO, hiporeatividade e relaxamento, em parte, via BKCa. Entretanto, o DTNB não foi capaz de modificar o vasorelaxamento causado pelo 8-bromoguanosina 3',5'-monofosfato cíclico (8-Br-GMPc, um análogo de GMPc) e pela acetilcolina, e ainda, não promoveu relaxamento em vasos pré-incubados com SNAP. Em vasos pré-contraídos com endotelina-1 (ET-1), o relaxamento para L-cisteína associado ao SNAP foi prevenido através da exposição vascular ao DTNB. Em contraste, o SNAP não foi eficaz de causar hiporeatividade endotelinérgica de longa duração. Em experimentos ex vivo, o DTNB foi eficiente em reverter a hiporeatividade à fenilefrina em vasos de animais tratados com LPS. Além disso, o co-tratamento de animais com LPS e DTNB, 4 e 6 horas após a endotoxina, também aboliu totalmente a hiporeatividade à fenilefrina, em vasos sem endotélio. O DTNB previne e reverte a hiporeatividade à fenilefrina induzida pelo SNAP in vivo. Em camundongos, a administração de Escherichia coli (E. coli) causou mortalidade na ordem de 60 %, e o DTNB administrado 30 min antes da E. coli ou, a cada 12 horas após a administração da bactéria, reduziu a mortalidade em 20 e 30 %, respectivamente. O vasorelaxamento mediado pela L-cisteína, em anéis de aorta pré-incubados com o SNAP, depende da ativação da guanilato ciclase solúvel e da abertura de subtipos de canais de K+, sensíveis a alta concentração de K+, mas insensíveis ao tetraetilamônio (TEA), 4-aminopiridina, glibenclamina, clotrimazol e caribdotoxina.
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Envolvimento da via L-Arginina/NO/GMPc medular no efeito anti-edematogênico da morfina administrada por via intratecal

Brock, Sara Comelli January 2006 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências / Made available in DSpace on 2012-10-22T15:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 232340.pdf: 511463 bytes, checksum: adeaeaaa7688a3b001be3ca373b08c04 (MD5) / Avaliação do edema inflamatório induzido por carragenina em ratos, ressaltando a influência do reflexo da raiz dorsal. Estuda o efeito da administração intratecal de morfina e um possível envolvimento da via do óxido nítrico/ GMPc medular neste mecanismo.
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Perfil inflamatório local e sistêmico de ratos wistar com múltiplas infecções endodônticas /

Samuel, Renata Oliveira. January 2016 (has links)
Orientador: Luciano Tavares Angelo Cintra / Banca: Eloi Dezan Junior / Banca: Gustavo Sivieri de Araújo / Banca: Carla Renata Sipert / Banca: Frederico Canato Martinho / Resumo: O objetivo deste trabalho foi colaborar com o entendimento dos mecanismos que envolvem a relação entre as infeções de origem endodôntica e o estado de homeostasia corpórea. Para isso investigamos o perfil inflamatório local da periodontite apical induzida e relacionamos com alterações no perfil sistêmico em ratos portadores de uma ou múltiplas infecções de origem endodôntica. Foram utilizados 30 ratos da linhagem Wistar distribuídos em 3 grupos de 10 animais: ratos saudáveis; 1AP - ratos com infecção endodôntica em um elemento dentário; 4AP ratos com infecções endodônticas em 4 elementos dentários. Após 30 dias, foi coletado sangue por punção cardíaca para a realização do hemograma (hemácias, volume globular, hemoglobina, VCM, CHCM, leucócitos, neutrófilos, linfócito, monócito, eosinófilo, basófilo e plaquetas); da quantificação sérica das citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17, IL-23) por ELISA e da quantificação de óxido nítrico (NO). Após coleta sanguínea, os animais foram sacrificados, as maxilas e mandíbulas foram processadas para análise em microscopia de luz em coloração de H.E. e para marcação imunoistoquímica dos mediadores inflamatórios supracitados. Os resultados das diferentes análises e a relação entre os achados locais e sistêmicos foram analisados por testes estatísticos específicos para cada caso (p<0,05). Nas análises histológicas, foi confirmada a presença de periodontites apicais no 1AP e 4AP, com infiltrado inflamatório moderado. Além disso, foi observado aumento de todos os mediadores supracitados nas lesões quando comparado aos tecidos saudáveis (p<0.05). Nas análises séricas, foi observado aumento linfócitos, leucócitos, TNF-α, IL-6, IL-17 e IL-23 no 4AP quando comparado aos ratos... / Abstract: The aim of this work will contribute to understanding of the mechanisms that involve the relationship between infections of endodontic origin and state of bodily homeostasis. Thus, we propose to investigate the profile of local inflammatory induced apical periodontitis and correlate with changes in the profile systemic model with a onlyl or multiple endodontic infections. It were used 30 Wistar rats divided into three groups of 10 animals each: healthy rats; 1AP - rats with only endodontic infection; 4AP rats with multiple endodontic infections. After 30 days, blood was collected by cardiac puncture for complete blood count (RBCs, packed cell volume, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin concentration, leukocytes, neutrophil, lymphocyte, monocyte, eosinophil, basophil and platelets), serum quantification of proinflammatory cytokines (IL-17, IL-23, IL-6, TNF-α, IFN-γ) by ELISA and nitric oxide. After blood collection, the animals were killed, the jaws were processed for light microscopy in HE staining and immunohistochemical staining of inflammatory mediators above. The results of the different analyzes and the correlation between the local and systemic findings were analyzed by statistical tests specific to each case (p<0,05). Histological analysis confirmed the presence of apical periodontitis in 1AP and 4AP, with moderate inflammatory infiltrate. Furthermore, it was observed increase of all above mediators in lesions when compared to healthy tissue (p <0.05). In serum analysis, 4AP showed lymphocytes, leukocytes, TNF-α, IL-6, IL-17 and IL-23 increase when compared to healthy rats (p <0.05). Furthermore, there was a decrease of NO in 4AP and 1AP when compared to healthy rats (p <0.05). IFN-γ level was not different between the groups (p>0.05). It is concluded that the presence of apical periodontitis... / Doutor
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El Nitrito como posible donador de óxido nítrico para prevenir la presentación de casos de ascitis en pollos Broiler en altura

Vidalón Romo, Dante Ricardo January 2007 (has links)
En la zonas altas del territorio Peruano, los pollos comerciales de carne presentan dificultades de aclimatación en las condiciones climatológicas de las alturas, en donde existe una menor presión parcial de oxigeno que provoca una menor captación de oxigeno, provocando una serie de procesos fisiopatológicos que conllevan al desarrollo del Síndrome Ascítico (ASC), generando muchas veces la muerte de los pollos. En el presente trabajo se propone una terapia con Nitrito (NIT) que aporta oxido nítrico (NO) al organismo. El NO es un radical libre que participa en diversos procesos fisiológicos y fisiopatológicos, jugando un papel importante como vasodilatador. A nivel pulmonar esta vasodilatación permite que más oxigeno sea captado y pueda distribuirse a los tejidos que lo necesiten, evitando un esfuerzo cardiaco y de manera indirecta la presentación de ASC. Se ha demostrado que la enzima xantino oxidasa (XO) puede producir NO a partir del NIT en condiciones de hipoxia. En la altura, la administración de NIT provocó una presentación de casos de ascitis control/tratado de 2 a 1. En el trabajo se realizó 2 experimentos con pollos de carne de la linea Cobb – Vantress, una crianza a nivel del mar (Lima) y la otra en altura (IVITA-MANTARO), en ambos lugares se dividió en 2 grupos, uno tratado (NIT 0.1% en agua de bebida) y otro control. Los resultados a nivel del mar muestran una elevada concentración de NIT plasmático en el grupo tratado con respecto a su control, además no se encontró ningún caso de ascitis. Los resultados en altura fueron determinantes, ya que el grupo control presentó 48 casos ascíticos de 100 animales, versus 25 casos de 100 encontrados en el grupo tratado, demostrando que el NIT administrado en el agua ejerció un papel preventivo en el desarrollo del ASC, pero al parecer este efecto se consiguió por la depresión en la ganancia de peso que ejerció el NITRITO. Se concluyó que el NIT administrado al 0.1% en el agua de bebida desde el primer día de edad produjo un efecto depresor en la ganancia de peso y ocasionó menor número de pollos con casos de ascítis, observándose una proporción de presentación de casos de ascitis de 2 a 1 en los grupos control versus el grupo tratado respectivamente. Palabras Claves: NIT = Nitrito, NO = Oxido Nítrico, XO = Xantino Oxidasa ASC = Síndrome Ascítico. / In the highlands of Perú, commercial chickens show difficulties in how to acclimatize in the hard conditions of the highlands, where there is low oxygen partial pressure, causing less oxygen capture and developing several physiopathological processes which finish in Ascitic Syndrome in Chicken (ASC) and in the most of the cases with the death of the chickens. In the current project is proposed a therapy with Nitrite (NIT), which gives Nitric Oxide (NO) to the organism. NO is a free radical that participate in different physiological process and physiopathological, playing an important role as a vasodilator. In the lungs this vasodilatation helps in the capture of more oxygen, avoiding a heart effort and indirectly the presentation of ASC. It is demonstrated that the enzyme Xantine Oxidase (XO) can produce NO from Nitrite under hypoxic conditions. In the highlands, the administration of NIT had an effect in the presentation of ASC in a proportion control/treated of 2 to 1. In this project 2 experiments were done with chickens of Cob-Vantress line, one experiment was in the coast (Lima), and the other one was in a 3,200 meters high above the sea ( IVITA- MANTARO), in both places were divided in two groups, one with the therapy (NIT 0.1% in water for consume) and other group as a control. The results in the coast show a high concentration of plasmatic NIT in the group with the therapy against the control group, beside any ascitic case was found. The results in the highlands were deciding because in the control group 48 ascitic cases were found from 100 chickens, against 25 ascitic cases from 100 chickens in the group with the therapy, demonstrating that the therapy with NIT played a preventive role in the development of ASC acting as depressor of weight. The reduction of weight in the groups with the therapy was maybe caused for the experimental dose of NIT in the water for consume. The conclusion is that the therapy with NIT in a concentration of 0.1% in water for consume produced, in the highlands, a depressor effect of weight in the treated group and showed a proportion of 2 to 1 in the presentation of ascitic cases in the group control against the group with the therapy respectively. Key Words: NIT= nitrite, NO= Nitric Oxide, XO= Xantine Oxidase, ASC= Ascitic Syndrome in Chickens.
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Determinación de la concentración plasmática de nitrito en equinos fina sangre de carrera (FSC) con diferente rendimiento

Vega Cornejo, Cristian Alexis January 2015 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El óxido nítrico (NO) es un gas soluble sintetizado en diversas células a partir de Larginina, a través de una reacción de oxidación catalizada por las enzimas óxido nítrico sintasas (NOS). Se sintetiza en el endotelio vascular, y posee una potente acción vasodilatadora, que permite mantener una respuesta vascular adecuada a las crecientes demandas de flujo de sangre durante el ejercicio. En la sangre es oxidado a nitrito, que permanece estable en el plasma sanguíneo. Al mismo tiempo, el nitrito puede ser reducido a óxido nítrico en condiciones de hipoxia. El objetivo de este trabajo es describir la concentración plasmática de nitrito como metabolito estable del óxido nítrico en equinos FSC con diferente rendimiento hípico. Se utilizaron tres grupos de equinos FSC con diferente rendimiento. La muestra de sangre se obtuvo en la mañana, en condición de ayuno y reposo. Luego se centrifugó para obtener el plasma, y la concentración de nitrito se determinó por la prueba de Griess. Los resultados se expresan como μM de nitrito, indicándose valor promedio ± desviación estándar para cada grupo. El mayor valor se obtuvo en el grupo intermedio (226,96 ± 28,17), el cual difiere significativamente (p<0,05) respecto al grupo de bajo rendimiento (190,36 ± 26,81) y de alto rendimiento (157,94 ± 31,59). Este resultado se explica debido a que los grupos de rendimiento bajo e intermedio tienen un régimen de competencia similar (14,1 y 12,0 promedio de carreras corridas en últimos 6 meses respectivamente), en tanto para el grupo de alto rendimiento este promedio es de 6,7. A su vez, en el presente estudio la concentración de nitrito se correlacionó positivamente con el valor del VGA (ρ = 0,44). Estos hallazgos sugieren que la concentración de nitrito plasmática como indicador de actividad de NOS endotelial, no constituiría un biomarcador de rendimiento hípico en ejemplares con diferente régimen de training, pero podría representar una adaptación al ejercicio. / Nitric Oxide (NO) is a soluble gas synthesized in various cells from L-arginine through a oxidation reaction catalyzed by NO synthase (NOS). Nitric Oxide is synthesized in the vascular endothelium, and has potent vasodilating action, which enables to maintain adequate vascular response to growing demands of blood flow during exercise. In blood is oxidized to nitrite, that remains stable in blood plasma. At the same time nitrite can be reduced to NO under hypoxia. The objective of the study is to describe the plasma concentration of nitrite as a stable metabolite of nitric oxide in thoroughbreds with different performance. Three groups of thoroughbreds with different performance were used. The blood sample was obtained in the morning, at fasting condition and rest. Then centrifuged to obtain plasma, and the concentration of nitrite was determined by the Griess assay. Results are expressed as μM of nitrite, indicating average value ± standard deviation for each group. The highest value was obtained in the intermediate group (226,96 ± 28,17), which differed significantly (p <0,05) compared to the low performance group (190,36 ± 26,81) and high performance group (157,94 ± 31,59). This result is explained because the low and intermediate groups have a similar competition regime (14,1 and 12,0 average of races in last 6 months, respectively), while for high performance group this average is 6,7. In turn, the nitrite concentration was positively correlated with PCV (ρ = 0,44). These findings suggest that plasma nitrite concentration as an indicator of endothelial NOS activity, would not constitute a biomarker of performance in thoroughbreds with different training regime, but could represent an adaptation to exercise.
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Efecto del óxido nítrico sobre el contenido de clorofila y de proteínas tipo ELIPS en hojas jóvenes de Vitis vinifera L

Álvarez Gálvez, Pamela A. January 2011 (has links)
Memoria presentada para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo. Mención en Producción Frutícola / Numerosos estudios plantean que el óxido nítrico (NO) cumple una función fundamental en las plantas. Se ha informado que esta molécula actúa en la inhibición de la vía degradativa de la clorofila y que favorece el proceso de síntesis de este pigmento; así también se le atribuye la capacidad de emular algunos efectos dependientes de la luz en las plantas. Debido a esto y los antecedentes sobre el NO donde se demuestra un efectivo aumento en la acumulación de complejos de proteínas en la membrana del tilacoide; se sugiere la posibilidad de que dicha biomolécula se encuentra, directa o indirectamente, formando parte de la vía de inducción de la síntesis de proteínas tempranamente inducidas por luz (ELIPs). El objetivo del presente estudio es evaluar el efecto de aplicaciones exógenas de óxido nítrico sobre hojas jóvenes etioladas de vid. La información existente sobre el efecto del NO comprende sólo plantas anuales, sin embargo, se espera que actúe como molécula señal en un proceso mediado por luz generando un aumento en el contenido de clorofilas y junto a ello, un aumento en la expresión de proteínas ELIPs en plantas perennes como la vid. Para cumplir este objetivo se realizaron una serie de ensayos para estandarizar las respuestas de la vid, además se realizó un primer ensayo en trigo para corroborar resultados previamente obtenidos en este cereal ante la aplicación exógena de NO. Brotes de vid de la variedad Sultanina fueron mantenidos en oscuridad hasta contar con el material vegetal necesario. Las hojas jóvenes etioladas obtenidas fueron sometidas a los distintos tratamientos según la aplicación de NO, asperjando directamente una solución que genera óxido nítrico (S-nitroso-N-acetilpenicilamina, SNAP) en concentración 100 μM o agua destilada sobre las hojas control sin aplicación de NO. Cada ensayo fue sometido adicional y diferencialmente a un tratamiento de luz. La variación del contenido de clorofila total en el tiempo se midió mediante el método de Arnon (1949) y para medir la expresión de las proteínas ELIPs se realizaron Western Blots. Los resultados obtenidos indican que la aplicación exógena de NO afecta positivamente la acumulación de clorofila total y no tan claramente la expresión de proteínas tipo ELIPs en hojas jóvenes etioladas de vid y en plántulas etioladas de trigo, sin embargo, dicho efecto se encuentra condicionado a la presencia de luz. / Numerous studies show that nitric oxide (NO) has a fundamental function in plants. It has been informed that this molecule acts in the inhibition of the degrading of chlorophyll and contributing to its synthesis, as well as emulating some light depending effects in plants. According to this background, were an effect of significant increases in the accumulation of protein complexes in the thylakoid membrane, suggest the possibility that this biomolecule forms part, directly or indirectly, in the induction of early light inducible proteins synthesis (ELIPs). The objective of the present study is to evaluate the effect of exogenous applications of nitric oxide on young leaves of etiolated vines. Existing information on NO effect only considers annual plants; however, it is expected to perform as a signal molecule in a light induced process, generating an increase in the chlorophyll content and together with this, an increase in the ELIPs protein expression in perennial plants like vines. To fulfill this objective, a series of trials were performed to standardize the responses of the vine, also a first trial was done on wheat to corroborate results previously obtained in this cereal to the exogenous application of NO. The results indicate that the exogenous application of NO positively affects the accumulation of total chlorophyll and not so clearly the expression of ELIPs proteins in etiolated young leaves of grapevine and etiolated wheat seedlings, however, this effect is conditional on the presence of light.
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El Nitrito como posible donador de óxido nítrico para prevenir la presentación de casos de ascitis en pollos Broiler en altura

Vidalón Romo, Dante Ricardo January 2007 (has links)
En la zonas altas del territorio Peruano, los pollos comerciales de carne presentan dificultades de aclimatación en las condiciones climatológicas de las alturas, en donde existe una menor presión parcial de oxigeno que provoca una menor captación de oxigeno, provocando una serie de procesos fisiopatológicos que conllevan al desarrollo del Síndrome Ascítico (ASC), generando muchas veces la muerte de los pollos. En el presente trabajo se propone una terapia con Nitrito (NIT) que aporta oxido nítrico (NO) al organismo. El NO es un radical libre que participa en diversos procesos fisiológicos y fisiopatológicos, jugando un papel importante como vasodilatador. A nivel pulmonar esta vasodilatación permite que más oxigeno sea captado y pueda distribuirse a los tejidos que lo necesiten, evitando un esfuerzo cardiaco y de manera indirecta la presentación de ASC. Se ha demostrado que la enzima xantino oxidasa (XO) puede producir NO a partir del NIT en condiciones de hipoxia. En la altura, la administración de NIT provocó una presentación de casos de ascitis control/tratado de 2 a 1. En el trabajo se realizó 2 experimentos con pollos de carne de la linea Cobb – Vantress, una crianza a nivel del mar (Lima) y la otra en altura (IVITA-MANTARO), en ambos lugares se dividió en 2 grupos, uno tratado (NIT 0.1% en agua de bebida) y otro control. Los resultados a nivel del mar muestran una elevada concentración de NIT plasmático en el grupo tratado con respecto a su control, además no se encontró ningún caso de ascitis. Los resultados en altura fueron determinantes, ya que el grupo control presentó 48 casos ascíticos de 100 animales, versus 25 casos de 100 encontrados en el grupo tratado, demostrando que el NIT administrado en el agua ejerció un papel preventivo en el desarrollo del ASC, pero al parecer este efecto se consiguió por la depresión en la ganancia de peso que ejerció el NITRITO. Se concluyó que el NIT administrado al 0.1% en el agua de bebida desde el primer día de edad produjo un efecto depresor en la ganancia de peso y ocasionó menor número de pollos con casos de ascítis, observándose una proporción de presentación de casos de ascitis de 2 a 1 en los grupos control versus el grupo tratado respectivamente. Palabras Claves: NIT = Nitrito, NO = Oxido Nítrico, XO = Xantino Oxidasa ASC = Síndrome Ascítico. / --- In the highlands of Perú, commercial chickens show difficulties in how to acclimatize in the hard conditions of the highlands, where there is low oxygen partial pressure, causing less oxygen capture and developing several physiopathological processes which finish in Ascitic Syndrome in Chicken (ASC) and in the most of the cases with the death of the chickens. In the current project is proposed a therapy with Nitrite (NIT), which gives Nitric Oxide (NO) to the organism. NO is a free radical that participate in different physiological process and physiopathological, playing an important role as a vasodilator. In the lungs this vasodilatation helps in the capture of more oxygen, avoiding a heart effort and indirectly the presentation of ASC. It is demonstrated that the enzyme Xantine Oxidase (XO) can produce NO from Nitrite under hypoxic conditions. In the highlands, the administration of NIT had an effect in the presentation of ASC in a proportion control/treated of 2 to 1. In this project 2 experiments were done with chickens of Cob-Vantress line, one experiment was in the coast (Lima), and the other one was in a 3,200 meters high above the sea ( IVITA- MANTARO), in both places were divided in two groups, one with the therapy (NIT 0.1% in water for consume) and other group as a control. The results in the coast show a high concentration of plasmatic NIT in the group with the therapy against the control group, beside any ascitic case was found. The results in the highlands were deciding because in the control group 48 ascitic cases were found from 100 chickens, against 25 ascitic cases from 100 chickens in the group with the therapy, demonstrating that the therapy with NIT played a preventive role in the development of ASC acting as depressor of weight. The reduction of weight in the groups with the therapy was maybe caused for the experimental dose of NIT in the water for consume. The conclusion is that the therapy with NIT in a concentration of 0.1% in water for consume produced, in the highlands, a depressor effect of weight in the treated group and showed a proportion of 2 to 1 in the presentation of ascitic cases in the group control against the group with the therapy respectively. Key Words: NIT= nitrite, NO= Nitric Oxide, XO= Xantine Oxidase, ASC= Ascitic Syndrome in Chickens.
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Efeito da S-nitrosilação sobre a estrutura de PtpA, e clonagem e caracterização inicial de PtkA e SapM de Mycobacterium tuberculosis

Matiollo, Camila January 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biolólogicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-06-26T00:12:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 314078.pdf: 10245292 bytes, checksum: 7c929eea613abee45aaedc328628ac4e (MD5) / A S-nitrosilação de PtpA de Mycobacterium tuberculosis diminui sua atividade fosfatase. O objetivo deste trabalho é investigar o efeito da S-nitrosilação nos parâmetros cinéticos e na estabilidade térmica de PtpA. Por meio de ensaios de biotin switch observou-se que a substituição do resíduo Cys53 por um resíduo de alanina em mutantes resultou em proteínas incapazes de se ligar a biotina após tratamento com doador de NO. Observou-se também que a KM da PtpA nitrosilada foi semelhante à sua forma não modificada, mas a Vmax foi reduzida pela metade. Em contraste, a mutante C53A tratada com GSNO mostrou KM e Vmax semelhantes à forma não tratada. Na desnaturação térmica de PtpA S-nitrosilada, a TM diminuiu consideravelmente na proteína selvagem, C11A e C16A, porém as mutantes C53A, C11A/C53A e C16A/C53A não tiveram mudanças significativas. Esses resultados sugerem que a S-nitrosilação ocorre especificamente na C53 não catalítica, essa alteração não afeta a afinidade pelo substrato e a S-nitrosilação da Cys53 afeta a estabilidade térmica da proteína. Por outro lado, outras duas proteínas de M tuberculosis foram estudadas, PtkA e SapM. A tirosina cinase PtkA fosforila a PtpA em dois resíduos de tirosina situados no PDYY-loop e se autofosforila na Tyr262. Neste trabalho, a PtkA recombinante foi expressa em bactérias E. coli BL21(DE3) e purificada por IMAC. Ensaios de CD revelaram que a proteína apresenta 42% de ?-hélice e 7% de folha-?, o que sugere que a proteína recombinante está corretamente enovelada. Por pertencer a família de proteínas HAD, a PtkA requer Mg2+ para a hidrólise do ATP. Foi observado que a TM da proteína aumenta consideravelmente na presença do metal, de 31 °C para 43 °C. Assim pode-se dizer que a ligação do metal ao sítio ativo estabiliza a estrutura terciária da proteína. A PtkA também é S-nitrosilada, porém o efeito dessa modificação pós-traducional sobre a atividade e estrutura da proteína ainda é desconhecido. A sequência de DNA que codifica SapM também foi inserida no vetor de expressão pET-14b. Diversas condições de expressão foram testadas sendo que se obteve maior rendimento em bactérias E. coli BL21 (DE3) pLysS na temperatura e tempo de indução de 15 °C por 20 horas. Como a proteína permaneceu na fração insolúvel do lisado bacteriano, essa teve que ser solubilizada pela adição de ureia 8M e posteriormente purificada por IMAC. As condições para o correto re-enovelamento ainda devem ser otimizadas para dar sequência à caracterização de SapM.<br> / Abstract : The S-nitrosylation of Mycobacterium tuberculosis PtpA decreases its phosphatase activity. The aim of this work is to investigate the effect of S-nitrosylation in PtpA kinetic parameters and thermal stability. By biotin switch assays it was observed that the substitution of Cys53 residue by an alanine residue in mutants C53A, C53A/C11A, C53A/C16A and C53A/C11A/C16A resulted in proteins unable to bind biotin upon NO donor treatment. It was also observed that the KM of nitrosylated PtpA was similar to its unmodified form, but the Vmax was reduced to half. In contrast, C53A treated with GSNO showed KM and Vmax similar to the untreated form. Thermal denaturation of Snitrosylated PtpA was evaluated by CD spectroscopy. When GSNO was added to PtpA, the TM decreased in wild type, C11A and C16A, while significant differences in C53A, C11A/C53A and C16A/C53A mutants were not observed. These results suggest that S-nitrosylation occurs specifically in the non-catalytic Cys53, this modification does not affect substrate affinity, and S-nitrosylated Cys53 affects protein thermal stability. Moreover, two other M. tuberculosis proteins are studied, PtkA and SapM. Tyrosine kinase PtkA phosphorylates PtpA in two tyrosine residues located in PDYY-loop and autophosphorylates at Tyr262. In this work, recombinant PtkA was expressed in E. coli BL21 (DE3), and purified by IMAC. CD experiments reveal that the protein has 42% á- helix and 7% â-sheet, which suggest that the recombinant protein is properly coiled. Like other proteins belonging to HAD family, PtkA requires Mg2+ for ATP hydrolysis. It was observed that the TM of this protein greatly increases in the presence of metal, from 31 °C to 43 °C. Thus, it can be said that the metal binding to the active site of this enzyme stabilizes the tertiary structure of the protein. It was observed that PtkA is also S-nitrosylated, but the effect of this post-translational modification on the structure and activity of the protein is still unknown. The DNA sequence encoding SapM was also inserted into the expression vector pET-14b. Various expression conditions were tested. The higher yield was obtained in E. coli BL21 (DE3) pLysS during 20 hours of induction at 15 °C. As the protein remained in the insoluble fraction of the bacterial lysate, it had to be solubilized by addition of 8M urea, and further purified by IMAC. The conditions for proper refolding still have to be optimized in order to be able to continue SapM characterization
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Curso temporal de alterações fisiopatológicas em um modelo de sepse experimental em camundongos

Heckert, Bettina Tomio January 2008 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T20:18:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 250181.pdf: 409505 bytes, checksum: 6930834143e19c4869af242832120a08 (MD5)
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Óxido nítrico e alterações na reatividade vascular

Benedet, Patrícia de Oliveira January 2013 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:25:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317916.pdf: 1258675 bytes, checksum: bca79daba9e5f6b05b6c9d073a3d532b (MD5) Previous issue date: 2013 / A produção excessiva de óxido nítrico (NO) durante a sepse está relacionada com a disfunção vascular caracterizada por hipotensão e hiporreatividade a vasoconstritores. NO reage rapidamente com resíduos de tiol (-SH) levando à formação de nitrosotióis (R-SNO). Não obstante a sua natureza reversível, a formação de R-SNO em proteínas pode resultar em efeitos duradouros para a sua função. Outra característica importante dos R-SNO é que eles podem transferir NO na presença de tióis livres (mas não com a eficácia de 100%) através da reação conhecida como transnitrosilação Um modelo já descrito pelo nosso laboratório para estudos de S-nitrosilação e disfunção vascular consiste na infusão de doadores de NO que induzem uma redução substancial da função vasoconstritora de forma semelhante ao que ocorre no quadro da sepse. No que se refere ao mecanismo, doadores de NO transferem parte do seu conteúdo de NO para resíduos de tióis de proteínas endógenas. Considerando todas estas informações, neste trabalho investigamos a participação do NO e R-SNO sobre a hiporreatividade vascular à fenilefrina em animais infundidos com nitroprussiato de sódio (SNP) e animais sépticos. Nossos resultados mostram que animais infundidos com SNP apresentam redução substancial e persistente da resposta contrátil à fenilefrina, apesar da pressão arterial média estar dentro de valores normais. Observou-se também que a administração de L-cisteína induz a hipotensão em animais infundidos com SNP. Esta hipotensão é decorrente, pelo menos em parte, da ativação da guanilato ciclase solúvel. Adicionalmente, injeções sucessivas de L-cisteína atenuam a hiporreatividade à fenilefrina. A oxidação prévia de tióis com DTNB previne e reverte a diminuição da resposta pressórica à fenilefrina em animais infundidos com SNP. A oxidação de tióis com DTNB é revertida por DTT restituindo o estado hiporreativo resultante da infusão com SNP. Em animais sépticos, o DTNB também preveniu a hiporreatividade à fenilefrina. Levando em consideração que DTNB não atravessa a membrana plasmática, é provável que os resultados do efeito da oxidação de resíduos de tiol sejam em proteínas localizadas na face externa da membrana. Nossos resultados mostram que a S-nitrosilação de resíduos de tiol e a formação consequente de R-SNO tem papel fundamental na função vascular, contribuindo para a hiporreatividade a vasconstritores. Por conseguinte, a interferência em R-SNO formados na sepse pode ter impacto substancial na melhora da disfunção cardiovascular desta condição.<br> / Abstract : The excessive production of nitric oxide (NO) during sepsis is related to vascular dysfunction characterized by hypotension and hyporesponsiveness to vasoconstrictors. NO reacts fast to thiol (-SH) residues leading to the formation of nitrosothiols (R-SNO). Notwithstanding its reversible nature, formation of R-SNO in proteins may cause long-lasting consequences to their function. Another important characteristic of R-SNO is that they can exchange (but not with 100% efficacy) NO when in the presence of free thiols by a reaction known as transnitrosylation. A model has been described by our laboratory for studies of vascular dysfunction similar to those that takes place in sepsis. The model consists of the infusion of NO donors leading to a substantial reduction of vasoconstrictor functionality, similarly to what occurs in the context of sepsis. As for the mechanism, we suggest that the infused NO donor will transfer to thiol residues in endogenous proteins. Considering all this information we have investigated the role of NO and R-SNO on vascular hyporeactivity to phenylephrine in rats infused with sodium nitroprusside (SNP) and in septic animals. Our results show that animals infused with SNP show a substantial and persistent reduction in the contractile response to phenylephrine, despite the blood pressure being within normal values. We also observed that administration of L-cysteine induces hypotension in animals infused with SNP. This hypotension is due, at least in part, to the activation of soluble guanylatecyclase. Successive injections of L-cysteine attenuate the hyporeactivity to phenylephrine in SNP infused rats. Previous oxidation of thiols with DTNB prevents and post-infusion reverts the hyporeactivity to phenylephrine in SNP infused animals. The relevance of the availability of reduced thiols was shown by the demonstration that reduction of DTNB oxidized thiols with DTT promptly recovered the hyporeactivity to phenylephrine caused by SNP infusion. In septic animals, DTNB also prevented the hyporeactivity to vasocontritors. Taking into account that DTNB does not cross the plasma membrane, it is likely that its effect results from the oxidation of thiol residues in proteins located at the external face of the membrane. Our results show that possibly S-nitrosylation of thiol residues in proteins and the consequent formation of R-SNO have a critical role in the vascular function, contributing to the hyporeactivity to vasoconstrictors. Therefore, interference with R-SNO formed in sepsis may have a substantial impact on improving cardiovascular dysfunction in this condition.

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