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Expressão da p16INK4 em lesões precursoras de baixo grau do carcinoma escamoso do colo uterino : estudo prospectivo de seguimento

Godoy, Alessandra Eifler Guerra 23 June 2010 (has links)
O carcinoma escamoso do colo uterino é uma das neoplasias de maior incidência em todo o mundo, inclusive no Brasil, sendo responsável pela morte de milhares de mulheres a cada ano, grande parte delas ocorrendo em plena idade produtiva. Ao longo dos últimos cinqüenta anos, diversos pesquisadores têm estudado esta neoplasia. Sabe-se que a fase invasora do carcinoma escamoso do colo uterino é precedida por uma fase intra-epitelial, precursora (neoplasias intra-epiteliais cervicais/ NICs). As lesões precursoras podem ser divididas em dois grandes grupos: as de baixo grau e as de alto grau (Sistema de Bethesda). Se por um lado, o percentual de lesões de alto grau que evoluem para carcinoma escamoso invasor é grande, por outro lado, somente uma pequena parcela de mulheres que têm lesões precursoras de baixo grau vai desenvolver uma lesão invasora. Entretanto, ainda não somos capazes de identificar entre estas mulheres, quais são as que irão progredir para carcinoma escamoso do colo uterino. O presente estudo procurou avaliar a expressão da p16INK4 em pacientes com lesão de baixo grau do colo uterino, correlacionando com a presença de HPV-DNA e sua evolução ao longo do tempo. O estudo acompanhou 118 pacientes por um período máximo de 33 meses, examinando-as com intervalos de 6 meses. A conclusão foi que a p16INK4 se relacionada positivamente com infecção múltipla por HPV e que nestas pacientes a expressão da mesma chega a 100% de células neoplásicas coradas. Algumas pacientes evoluíram para lesão de alto em um período curto de tempo (alguns meses). / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-05-30T17:01:47Z No. of bitstreams: 1 Tese Alessandra Eifler Guerra Godoy.pdf: 1370166 bytes, checksum: 0965c1e23a9ee5918d5880f1bd52fb52 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-30T17:01:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Alessandra Eifler Guerra Godoy.pdf: 1370166 bytes, checksum: 0965c1e23a9ee5918d5880f1bd52fb52 (MD5) / The squamous carcinoma of the cervix uterine is one of the neoplasias of bigger incidence in the whole world, also in Brazil, being responsible for the death of thousand of women to each year, great part of them occurring in full productive age. Throughout last the fifty years, diverse researchers have studied this neoplasia. We know that the invading phase of the squamous carcinoma of the cervix uterine is preceded by an intra-epithelial phase, precursory (cervical intraepithelial neoplasia - CIN). The precursory injuries can be divided in two great groups: of low degree and of high degree (Bethesda System). If on the other hand, the percentage of injuries of high degree that evolve for invading squamous carcinoma is great, on the other hand, a small parcel of women whom they have precursory injuries of low degree only goes to develop an invading injury. However, not yet we are capable to identify between these women, which are the ones that will go to progress for squamous carcinoma of the cervix uterine. The present study it looked for to evaluate the expression of p16INK4 in patients with injury of low degree of the uterine col, correlating with the presence of HPV-DNA and its evolution throughout the time. The study it folloied 118 patients for a maximum period of 33 months, examining them with intervals of 6 months. The conclusion was that p16INK4 if related positively with multiple infection for HPV and that in these patients the expression of the same one arrives the 100% of neoplastic cells stained. Some patients developed high lesion in a short period of time (several months).
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Estudo de Resistência aos Antimicrobianos em Amostras de Pseudomonas Aeruginosa Isoladas em Hospitais da Cidade de Niteroi-RJ

Marcos Coelho Simões Travassos Soares 01 January 2005 (has links)
Foram estudadas 162 amostras de P. aeruginosa isoladas de pacientes atendidos em quatro hospitais localizados na cidade de Niterói, Rio de Janeiro; dois públicos: o Hospital Azevedo Lima e o Hospital Universitário Antônio Pedro, e dois privados, o Hospital Santa Cruz e a Casa de Saúde e Maternidade Santa Marta, no período de julho de 2002 até dezembro de 2003. As amostras foram isoladas a partir de diferentes espécimens clínicos: secreções (52,5%), urina (22,8%), sangue (8,6), ponta de cateter (6,2%), líquidos de punção (1,9%) e outras fontes (8%). Todas as amostras foram sensíveis a polimixina e mais da metade resistentes a cefotaxima (69,1%), ceftriaxona (65,5%), ciprofloxacina (54,9%), gentamicina (51,9%) e ticarcilina-ácido clavulânico (50,6%) e em menor proporção a imipenem (35,8 %), cefepima (33%), amicacina (32,1%), ceftazidima (30,9%), aztreonam (27,8%) e piperacilina-tazobactam (27,8%). A produção de metalo â-lactamase (M-bla) foi detectada em 9 (5,6%) amostras isoladas em três dos quatro hospitais avaliados. O estudo da diversidade genética foi efetuado analisando os perfis de fragmentação do DNA cromossômico, após tratamento com a enzima SpeI e eletroforese em campo pulsado (PFGE). De 19 amostras selecionadas, as 10 não produtoras de M-bla que apresentaram diferentes graus de multirresistência aos antimicrobianos, revelaram grande diversidade genética. Entretanto, as 9 amostras produtoras de M-bla, mostraram pertencer a um único clone, o mesmo detectado em amostras de P. aeruginosa com a mesma característica de resistência, isoladas nas cidades de Rio de Janeiro e São Paulo, sugerindo a disseminação interhospitalar do microorganismo, tanto no âmbito local como regional. / A total of 162 P. aeruginosa strains was studied. They were isolated from patients attended in four hospitals located in Niterói city, Rio de Janeiro state, two of them supported by public health system: Hospital Azevedo Lima and Hospital Universitário Antônio Pedro, and the others from privative service: Hospital Santa Cruz and Casa de Saúde Santa Marta, between July 2002 and December 2003. The isolates were recovered from different clinical sources, including: urine (22.8%); secretions (52.5%); catheter tips (6.2%); blood specimens (8.6%); fluids (1.9%) and others (8%). All strains were susceptible to polimixin B. More than half of them showed resistance to cefotaxime (69.1%); ceftriaxone (65.5%); ciprofloxacin (54.9%); gentamicin (51.9%) and ticarcillin-clavulanic acid (50.6%), and in lower percentages to imipenem (35.8%); cefepime (33%); amikacin (32.1%); ceftazidime (30.9%); aztreonam (27.8%)and piperacillin-tazobactam (27.8%). Metallo-â-lactamase (M-âla) production was detected in 9 (5.6%) strains recovered from three of the four hospitals evaluated. The genetic diversity study was performed by chromosomal DNA fragmentation, after SpeI enzymatic treatment using Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Among 19 strains selected from the study, 10 non M-âla producer multidrug-resistant strains showed a large variety of genetics profiles. However, the 9 M-âla producers were allocated in a single clonal group, the same genetic profile detected among P. aeruginosa M-âla producing strains, recovered in São Paulo city and Rio de Janeiro city, suggesting interhospital spread of strains at a local and regional level
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Perfil hematológico, hemostático e terapêutico da intoxicação experimental /

Kitamura, Eunice Akemi. January 2005 (has links)
Resumo: Na clínica de pequenos animais, rotineiramente, observam-se casos de intoxicações de cães por rodenticidas anticoagulantes. Isto é conseqüência da grande utilização deste pesticida, que é de fácil aquisição para o uso doméstico no controle de roedores. Estes animais comumente apresentam distúrbios de hemostasia secundária com quadro hemorrágico. O presente trabalho teve por objetivo avaliar as alterações hematológicas, hemostáticas e a resposta terapêutica de cães intoxicados experimentalmente por varfarina. Foram utilizados 28 cães, adultos, machos e fêmeas, que foram divididos em 2 grupos de 14 animais, sendo: Grupo I (varfarina + vitamina K1) e Grupo II (varfarina + vitamina K1 e plasma fresco congelado). Os cães foram intoxicados com a varfarina sódica (30mg/kg) por via oral e foram tratados com vitamina K1 (1mg/kg) por via subcutânea e a transfusão do plasma fresco congelado (PFC) na dose de 10mL/kg por via intravenosa. Os exames laboratoriais como hemograma, plaquetas, fibrinogênio, tempo de sangramento em mucosa oral (TSMO), tempo de coagulação (TC), tempo de protrombina (TP), tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) e tempo de trombina (TT) foram realizados em sete momentos: M0 (controle), M1 (48 horas), M2 (72 horas), M3 (78 horas), M4 (96 horas), M5 (120 horas) e M6 (168 horas) após a intoxicação. O tratamento com a vitamina K1 foi iniciado após o M2, continuando a cada 24 horas até o último momento, e a transfusão de PFC foi realizada somente uma vez imediatamente após o M2. Os resultados laboratoriais demonstraram que o TP é o mais sensível para o monitoramento da intoxicação por varfarina. TTPA e o TC também se apresentam prolongados pelo efeito anticoagulante do veneno, sendo que estes três testes devem ser utilizados conjuntamente no diagnóstico diferencial da intoxicação por varfarina. O tratamento com o PFC associado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Anticoagulant rodenticide intoxication is very common in the small animal practice. This is due to the high prevalence of its use as a domestic pesticide and its purchase availability. These animals usually present secondary hemostatic defects, with a hemorrhage. The aim of this work was to evaluate the hematological and hemostatic changes and the therapeutic response of dogs experimentally intoxicated by warfarin. Twenty eight adult dogs, males and females, were divided in two groups of 14 dogs: Group I (warfarin + vitamin K1) and Group II (warfarin + vitamin K1 and fresh frozen plasma). Dogs were intoxicated with sodium warfarin (30mg/kg) by the oral route and treated with vitamin K1 (1mg/kg) by the subcutaneous route. Fresh frozen plasma (FFP) was administrated intravenously (10mL/kg). The CBC, platelet count, fibrinogen, bucal mucosa bleeding time (BMBT), clotting time (CT), prothrombin time (PT), activated partial prothrombin time (APPT) and thrombin time (TT) were evaluated at seven moments: M0 (control), M1 (48h), M2 (72h), M3 (78h), M4 (96h), M5 (120h) and M6 (168h) pos-intoxication. Vitamina K1 administration was initiated immediately after M2 and repeated each 24 hours until the end of the experiment and the fresh frozen plasma was given only after M2. The results demonstrated that PT is the most sensible test for the follow up of warfarin toxicosis. APPT and CT also had been presented prolonged by the anticoagulation effect of the venom; therefore these three tests should be used together in the differential diagnosis of warfarin intoxication. Treatment with FFP associated to vitamin K1 promoted a considerable shortening on the time of coagulation tests, earlier than the treatment with the vitamin K1 alone. / Orientador: Regina Kiomi Takahira / Coorientador: Michiko Sakate / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Nayro Xavier de Alencar / Mestre
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Obstrução intestinal experimental em equinos : parâmetros clínicos e laboratoriais /

Di Filippo, Paula Alessandra. January 2009 (has links)
Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: José Corrêa de Lacerda Neto / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: Com o objetivo de avaliar e comparar as alterações clínicas e hematológicas de equinos submetidos a modelo experimental de obstrução intestinal, 24 animais foram distribuídos em quatro grupos, controle instrumentado (GI), obstrução do duodeno (GII), íleo (GIII) e cólon maior (GIV). O exame clínico e a colheita das amostras de sangue e de líquido peritoneal foram realizados antes da cirurgia (T0), durante as obstruções (T30ob-T180ob) e após as desobstruções (T30des-T7º). Os equino do GII e do GIII apresentaram sinais de dor abdominal, diminuição da motilidade intestinal e aumento da freqüência cardíaca e respiratória. Nestes mesmos grupos houve diminuição na contagem de leucócitos a qual posteriormente, cedeu lugar a leucocitose por neutrofilia, com desvio à esquerda. Na análise hemogasométrica apenas os animais do GIV e os do GII, nos apresentaram aumento do pH(v), da cHCO- 3(vP) e da cBase(v) que, acrescidos do aumento da pCO2(v) e da ctCO2(v), caracterizou a alcalose metabólica com compensação respiratória. No líquido peritoneal os animais do GII e do GIII apresentaram aumento na contagem global celular, bem como na concentração de proteína total, fibrinogênio, lactato e de fósforo inorgânico. Os resultados clínico-laboratoriais obtidos foram associados à distensão intestinal, resultante do modelo de obstrução e, indicam que algumas alterações laboratoriais quando analisadas em conjunto com os dados obtidos no exame clínico, podem auxiliar na identificação do segmento intestinal obstruído, na elaboração do prognóstico e no acompanhamento da evolução do processo de cura. / Abstract: This study aimed to evaluate and compare clinical and hematological alterations in horses submitted to an experimental model of intestinal obstruction. Twenty-four animals were divided in four groups: instrumented control (GI), duodenum obstruction (GII), ileum obstruction (GIII) and large colon obstruction (GIV). Clinical examination was carried out and blood and peritoneal samples were collected before surgery (T0), during the obstruction (T30ob-T180ob) and after unblocking procedures (T30des-T7º). Animals from GII and from GIII presented signs of abdominal pain, reduced gastrointestinal sounds and increased heart and respiratory rates, as well as leukopenia and neutropenia which later developed to leukocytosis, neutrophilia and left shifts. Animals from GIV and from GII presented higher values for pH(v), cHCO- 3(vP) and cBase(v) which, added to the increase of pCO2(v) and ctCO2(v), characterized the metabolic alkalosis with respiratory compensation. After unblocking procedure animals from GII and GIII presented higher global cells counts, as well as in fibrinogen, total protein concentrations, lactate and inorganic phosphorus concentrations in peritoneal fluid were also increased. The results were associated to enteric injury from the obstruction model showing that some laboratorial alterations when analyzed, including clinical examination, can be helpful at the identification of which intestinal segment is blocked, for draw up a prognosis and can be used as support in the evolution of cure process. / Doutor
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Estudo de aspectos epidemiológicos, clínicos e imunológicos da hanseníase em município hiperendêmico / Study of epidemiological, clinical and immunological aspects of leprosy in hyperendemic municipality

Maria de Fátima Lires Paiva 27 May 2013 (has links)
A epidemiologia da hanseníase tem demonstrado a utilização de ferramentas clínicas, moleculares e imunológicas, para o mapeamento dos principais focos de ocorrência da doenças e de áreas de alto risco de adoecimento. Programas de controle da hanseníase, doença de longo período de incubação, em que os contatos são os principais grupos de risco, devem estabelecer todos os procedimentos disponíveis para o controle desse agravo. Objetiva-se estudar aspectos epidemiológicos clínicos e imunológicos da hanseníase em município hiperendêmico do Maranhão. Estudo de epidemiológico descritivo, realizado com 599 contatos, entre outubro de 2009 a outubro de 2011, no Serviço de Dermatologia no ambulatório do Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão unidade Presidente Dutra São Luís - MA. Foi observado que a maioria dos contatos foi do gênero feminino com 57,17%, a faixa etária predominante acima de 15 anos, ou seja, (64,59%) com maior frequência na faixa de 20 a 59 anos, idade adulta e produtiva e o tipo de convívio predominante é o intradomiciliar com 74,95%, a forma clínica foi HT (30,00%), a classificação operacional mais frequente foi a MB com 61,90% do gênero feminino; a maioria apresentou somente uma cicatriz vacinal pela BCG, destacou-se o gênero masculino com 63,00%. O teste Elisa apresentou percentual de 63,50% e o ML-Flow 64,00%. Considerando o resultado dos testes Elisa e ML-FLOW sugere-se a utilização das técnicas imunológicas como ferramentas necessárias para o diagnóstico precoce, controle e vigilância dos contatos como forma de interromper a cadeia de transmissão da hanseníase na cidade pesquisada. / Leprosy epidemiology has demonstrated the usefulness of clinical, molecular and immunological tools for geographical identification of the main disease occurrence foci and also of high risk disease acquiring areas. Leprosy control programs must consider its long incubation period, during which nearby contacts are the main disease risk group, and should make use of all available procedures for disease control. This paper aims to study clinical, epidemiological end immunological aspects of leprosy in a hyper endemic county of Maranhão state. Its a descriptive epidemiological study made with 599 leprosy contacts from October 2009 to October 2011 in the clinic of the Dermatology service at the Presidente Dutra unit of Maranhão Federal University Hospital. Most contacts observed were female (57,17%), more than 15 years old (64,59%), mostly between ages 20-59, an adult and productive life span. Household contact was the most frequent (74,95%) as was tuberculoid leprosy (30,00%). MB operational classification was most frequent (61,90% of females), most presenting one BCG vaccine scar, with males amounting to 63,00%. ELISA test was positive in 63,5% and ML-flow in 64,00%. These two test results suggests the use of immunological techniques as necessary tools for precocious diagnosis, surveillance and control of leprosy contacts as a means of interrupting leprosy transmission chain in the analyzed county.
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Anormalidades hematológicas, bioquimicas e hemostáticas de origem paraneoplásica em fêmeas caninas com neoplasia mamária / Hematologic, biochemical and hemostatic abnormalities of paraneoplastic origin in female dogs with mammary Neoplasms

Duda, Naila Cristina Blatt January 2014 (has links)
As anormalidades hematológicas de origem paraneoplásica são identificadas em diversos tipos de neoplasias que acometem cães e gatos. Nas neoplasias mamárias em cadelas, já foram identificadas anormalidades relacionadas com a coagulação, onde verificou-se que a coagulação intravascular disseminada (CID) clínica e subclínica pode estar presente em 83% das cadelas com carcinoma mamário. Na medicina humana, é dada relevância à investigação de tais alterações uma vez que são fatores indicadores de prognóstico do câncer. Enquanto isso, na medicina veterinária, são escassos os estudos que relacionam as alterações hematológicas com o tipo tumoral, estadiamento e determinação de prognóstico. O objetivo do presente estudo foi realizar a avaliação hematológica, bioquímica e da hemostasia de cadelas acometidas por neoplasia mamária para identificar a alteração mais frequente, além de relacionar as anormalidades com o estadiamento tumoral. Para isso, foram utilizadas 25 cadelas atendidas pelo Grupo de Estudos em Oncologia em pequenos animais (ONCOVET) do Hospital de Clínicas Veterinárias da UFRGS (HCV-UFRGS) durante o período de 4 meses. Foi realizado coleta de sangue para hemograma, contagem de plaquetas, bioquímica sérica (albumina, ALT, cálcio, creatinina, FA, glicose, ureia) e teste de coagulação que constou de TP (tempo de protrombina), TTPa (tempo de tromboplastina parcial ativada), TT (tempo de trombina), fibrinogênio e mensuração do dímero-D. O estadiamento tumoral foi obtido através do exame físico e do resultado da biopsia das mamas. As anormalidades encontradas incluíram anemia, leucocitose neutrofílica, monocitose, eosinofilia, trombocitose, hipoalbuminemia, hipocalcemia, hipoglicemia e diminuição dos níveis de ureia sanguínea. Entretanto, essas alterações não foram relacionadas diretamente com a progressão tumoral, uma vez que não houve diferença entre os grupos avaliados. Apenas as variáveis RDW e ALT apresentaram relação significativa entre os grupos, contudo, sem relevância clínica. No teste de coagulação, houve diferença significativa entre os grupos apenas no TT e fibrinogênio, que foi relacionado com o estadiamento tumoral. / Hematological abnormalities of paraneoplastic origin are identified in several types of cancers that affect dogs and cats. In dogs with mammary neoplasms, abnormalities associated with coagulation have been identified, and verified that disseminated intravascular coagulation (DIC) clinical and subclinical may be present in 83% of dogs with mammary carcinoma. In human medicine, research in this field has been relevant since those factors are indicators of cancer prognosis. Meanwhile, in veterinary medicine, there are few studies that relate hematological changes with tumor type, staging and determination of prognosis. The aim of this study was to evaluate the hematological, biochemical and hemostathic abnormalities in bitches affected by mammary cancer to identify the most frequent alteration and associate with tumor staging. For this, 25 bitches attended by the Oncology Study Group in small animals (ONCOVET) of the Veterinary Hospital of UFRGS (HCV-UFRGS) for the period of 4 months were used. Blood collection for complete blood count, platelet count, serum biochemistry (albumin, ALT, calcium, creatinine, ALP, glucose, urea) and coagulation test that consisted of PT (prothrombin time), aPTT (activated partial thromboplastin time), TT (thrombin time), fibrinogen and D-dimer measurement were performed. Tumor staging was obtained by physical examination and the results of the biopsy of the breast. The abnormalities found included anemia, neutrophilic leukocytosis, monocytosis, eosinophilia, thrombocytosis, hypoalbuminemia, hypocalcemia, hypoglycemia and decreased levels of urea. However, these changes were not associated directly with tumor progression, since there was no difference among the groups. Only the RDW and ALT variables was associated significantly between the groups, however, with no clinical relevance. In the coagulation test, there was significant difference between the groups only in TT and fibrinogen, which was associated with tumor staging.
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Estudo da patogenia e desenvolvimento de métodos de Diagnóstico da pasteurelose pneumônica em suínos

Oliveira Filho, João Xavier de January 2014 (has links)
Pasteurella multocida é um dos principais patógenos envolvidos nas broncopneumonias infecciosas em suínos. Apesar de ser considerada agente secundário à pneumonia enzoótica causada pelo Mycoplasma hyopneumoniae e por agentes virais como o vírus da influenza suína, há evidências do seu envolvimento como agente primário. Neste contexto, o primeiro estudo desenvolvido teve como objetivo desenvolver um método de reprodução experimental de pneumonia por P. multocida A cepa 11246 em suínos infectados com diferentes concentrações de inóculo. Um segundo estudo foi desenvolvido com o objetivo de demonstrar diferenças fenotípicas, moleculares e patogênicas entre cepas de P. multocida A isoladas de casos clínicos de pneumonia em granjas comerciais de suínos de vários estados brasileiros. No primeiro experimento os suínos foram desafiados por gotejamento intranasal lento com inóculo de diferentes concentrações de P. multocida A cepa 11246 [Grupo (G1): 108 Unidades Formadoras de Colônias (UFC)/ml; G2: 107 UFC/ml; G3: 106 UFC/ml e G4: 105 UFC/ml]. Foram utilizados dois suínos por grupo com aproximadamente 100 dias de idade. Neste, todas as concentrações de inóculo demonstraram a capacidade da bactéria em causar doença respiratória grave e septicemia nos animais inoculados. Utilizando-se a mesma metodologia de desafio, com inóculo de 107 UFC/ml, o segundo estudo, ao desafiar 64 suínos igualmente distribuídos em oito grupos (G1 a G8) com oito diferentes cepas de P. multocida A (uma cepa por grupo), os resultados demonstraram a presença de cepas muito patogênicas (G1-11246, G2-11229, G3-16614 e G7-17044); pouco patogênicas (G4-16618 e G5-16972); e apatogênicas (G6-17034 e G8-17078), de acordo com a gravidade das alterações clinico-patológicas desenvolvidas. Na avaliação patológica dos animais desafiados, observaram-se três padrões de lesões distintas, associadas ou não entre si: 1. broncopneumonia fibrinonecrótica cranioventral com pleurite fibrinosa (G1, G3, G7); 2. pleurite difusa uni ou bilateral, associada ou não com pericardite e peritonite (G3, G5, G7) e; 3. pleuropneumonia necrossupurativa focal, geralmente no lobo cardíaco (G1, G2; G3, G4, G7). Na análise genotípica, nos padrões de PFGE obtidos após a macro-restrição com a enzima ApaI, as cepas patogênicas (Nos 11246, 11229, 16614, 16618, 16972 e 17044) foram classificadas no mesmo grupo, com homologia variando de 67,3 a 100%, diferenciando-se das cepas apatogências (Nos 17034 e 17078), que pertenceram a outro grupo, com homologia de apenas 52,7% com as demais amostras. Coletivamente, os resultados demonstraram padrões distintos de patogenicidade de diferentes cepas de P. multocida, os quais podem estar associados à características genéticas das cepas. Adicionalmente o estudo demonstrou a atuação primária de algumas cepas de P. multocida em pneumonias, pleurites e septicemias em suínos. / Pasteurella multocida is one of the main pathogens involved in infectious bronchopneumonia in swine. Although considered a secondary agent to the enzootic pneumonia caused by Mycoplasma hyopneumoniae and viral agents as the swine influenza, there are evidences related to its involvement as a primary agent. In this context, the first study undertaken aimed at developing an experimental reproduction method of pneumonia caused by P. multocida A Strain 11246 in swine infected with different inoculum concentrations. A second study was conducted aiming demonstrating phenotypic, molecular and pathogenic differences between the strains of P. multocida A isolated from clinical cases of pneumonia in commercial swine farms in several Brazilian states. In the first experiment, swine were challenged by slow intranasal drip with different inoculum concentrations of P. multocida A strain 11246 [Group (G1): 108 Colony Forming Units (CFU)/ml; G2: 107 CFU/ml; G3: 106 CFU/ml and G4: 105 CFU/ml]. Two swine per group with approximately 100 days of age were used. In these animals all inoculum concentrations demonstrated the bacteria capability to cause severe respiratory disease and septicemia in the inoculated animals. Using the same challenge methodology inoculating 107 CFU/ml at the second study when challenging 64 swine equally distributed into eight groups (G1 to G8) with eight different strains of P. multocida A (one strain per group) results showed the presence of highly pathogenic strains (G1-11246, G2- 11229, G3-16614 e G7-17044); less pathogenic (G4-16618 e G5-16972); and apathogenic (G6-17034 e G8-17078), according to the severity of the clinical and pathological alterations developed. In the pathologic evaluation of challenged animals, we observed three distinct patterns of injuries associated or not with each other: 1. Cranioventral fibrinonecrotic bronchopneumonia with fibrinous pleuritis (G1, G3, G7); 2. Difuse uni or bilateral pleuritis pleuritis, associated or not with pericarditis and peritonitis (G3, G5, G7) and; 3. Necrosuppurative focal pleuropneumonia, generally in the cardiac lobe (G1, G2, G3, G4, G7). In genotypic analysis, the PFGE patterns obtained after the macro-restriction with ApaI enzyme, the pathogenic strains (# 11246, 11229, 16614, 16618, 16972 and 17044) were classified in the same group, with homology ranging from 67.3 to 100%, differing from the apathogenic strains (# 17034 and 17078), which belonged to another group, with only 52.7% homology with the other samples. Collectively, the results showed distinct patterns in different pathogenic strains of P. multocida, which may be associated with the genetic features of the strains. Additionally, the reasearch demonstrated the primary role of some strains of P. multocida in pneumonia, pleuritis and septicemia in swine.
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Estudo das subpopulaÃÃes linfocitÃrias em sangue perifÃrico de pacientes com hansenÃase / Study of lymphocyte subpopulations in peripheral blood of patients with leprosy

VitÃria RÃgia MagalhÃes Solon 15 May 2012 (has links)
A hansenÃase à uma doenÃa infecciosa crÃnica causada pelo Mycobacterium leprae, um bacilo Ãlcool-Ãcido resistente. Tem alta infectividade, porÃm baixa patogenicidade, e quando se manifesta, apresenta-se sob uma grande diversidade de formas clÃnicas. Essa diversidade depende, em grande parte, da resposta imunolÃgica do hospedeiro, sendo os linfÃcitos, em sua plasticidade, componentes essenciais no desenvolvimento da imunidade. Assim, este trabalho teve como objetivo descrever as subpopulaÃÃes linfocitÃrias: linfÃcitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD4+), T citotÃxicos (CD8+), T CD4+CD8+, B (CD19+), Natural killers-NK (CD3- CD16+ CD56+) e T Natural killers - NKT (CD3+ CD16+ CD56+) no sangue perifÃrico de pacientes portadores de hansenÃase, antes e apÃs uso da multidrogaterapia. Os pacientes foram selecionados no Centro de Dermatologia D. LibÃnia, Fortaleza-CE, Brasil. A determinaÃÃo de linfÃcitos em cada subpopulaÃÃo foi realizada por citÃmetria de fluxo e anÃlise estatÃstica pelo programa GraphPad Prism 5.0 para Windows. A significÃncia foi estabelecida para valores de p<0,05. Um total de 133 amostras foram utilizadas para as comparaÃÃes, sendo 79 (59,4%) do gÃnero masculino e 54 (40,6%) do gÃnero feminino. A mediana da idade dos pacientes foi de 43 anos no grupo prÃ-tratamento e de 46 anos no pÃs-tratamento. Nove pacientes foram incluÃdos na forma paucibacilar e 124, na multibacilar. As medianas das contagens (cÃlulas/mm3) de linfÃcitos NK (CD3-CD16+ CD56+) nos grupos antes e apÃs tratamento foram 142,0 [15,0â463,0] e 189,5 [18,0 â 1037,0], respectivamente (p=0,0484), enquanto nÃo houve diferenÃas quando foram comparados os grupos pauci e multibacilar. As contagens de linfÃcitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD4+), T citotÃxicos (CD8+), T (CD4+CD8+), B (CD19+), e NKT(CD3+CD16+CD56+) mantiveram-se inalteradas nos grupos antes e pÃs-tratamento, assim como nos grupos pauci e multibacilar. Em conclusÃo, os resultados deste estudo apontam para uma reduÃÃo na populaÃÃo de cÃlulas NK (CD3-CD16+CD56+) em indivÃduos com hansenÃase antes de qualquer intervenÃÃo terapÃutica. ApÃs o tratamento, hà uma recuperaÃÃo na contagem desta populaÃÃo celular. / Leprosy is a chronic infectious disease caused by the Mycobacterium leprae, a resistant alcohol-acid bacillus. It has a high infectivity, although the pathogenicity is low. Clinical manifestations present a great diversity. Host immune response is an important determinant of this clinical diversity, whilst lymphocytes collaborate to it. Thus, the present study aimed to describe lymphocyte subpopulations: T lymphocytes (CD3+), T helper lymphocytes (CD4+), T cytotoxic (CD8+), T CD4+CD8+, B (CD19+), Natural killers-NK (CD3- CD16+ CD56+) and T Natural killers - NKT (CD3+CD16+ CD56+) in peripheral blood samples from patients with leprosy, before and after the treatment with multidrugtherapy. Patients were selected at the Dona Libania Dermatology Center, at Fortaleza-CE, Brazil. The determination in each subpopulation of lymphocytes was done by flow-cytometer and statistical analysis by GraphPad Prism 5.0 for Windows. Significance was established at p values of <0.05. A total of 133 samples were studied, while 79 (59,4%) were males and 54 (40,6%)females. Median age of patients was 43 years old for the group before treatment and 46 years old for the group after treatment. Nine patients presented with paucibacillary and 124 with multibacillary form. NK (CD3-CD16+ CD56+) lymphocytes medians cells/mmÂ) were 142.0 [15,0â463,0] and 189,5 [18,0 â 1037,0], respectively for the groups before and after treatment, with a p value of 0.0484. On the other hand, no differences were observed when pauci and multibacillary groups were compared. T lymphocytes (CD3+), T helper lymphocytes (CD4+), T cytotoxic lymphocytes (CD8+), T (CD4+CD8+), B lymphocytes (CD19+) and NKT lymphocytes (CD3+CD16+CD56+)were similar at the groups before and after treatment and also at pauci and multibacillary. In conclusion, data from this study shows a reduction at NK lymphocytes (CD3-CD16+CD56+) populations in leprosy before any therapeutical intervention. After leprosy treatment, a recovery of this cell population occurs.
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Estudo da relaÃÃo do Infiltrado InflamatÃrio Mononuclear e ExpressÃo de Ki-67, ColÃgeno IV e Laminina em Cistos Radiculares / Study Of The Relationship of Mononuclear Inflammatory Infiltrade and Ki-67, Laminin And Colagem Type IV expression in radicular Cysts

Renata Veras Carvalho MourÃo 19 February 2013 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os cistos dos ossos maxilares sÃo classificados como odontogÃnicos e nÃo odontogÃnicos. Dentre os odontogÃnicos inflamatÃrios, destaca-se o cisto radicular, e entre os de desenvolvimento, o dentÃgero. Estes cistos e suas variantes apresentam etiopatogÃnese e comportamento biolÃgico diferentes, mas sÃo igualmente lÃticos. A atividade proliferativa do epitÃlio de revestimento, dos componentes da membrana basal e da matriz extracelular, possivelmente, interferem nos mecanismos de crescimento, constituindo alvos de pesquisas. Este trabalho teve por objetivo avaliar a relaÃÃo do infiltrado inflamatÃrio mononuclear com a expressÃo de marcadores de proliferaÃÃo (Ki 67) e das proteÃnas da membrana basal e matriz extracelular nos cistos radiculares. Trata-se de um estudo retrospectivo e observacional tendo sido realizado um levantamento dos casos catalogados no ServiÃo de Biopsia do Departamento de Patologia e Medicina Legal (FAMED) e no LaboratÃrio de Patologia Bucal (FFOE) (UFC). ApÃs a revisÃo histolÃgica, os grupos foram divididos em cisto radicular intensamente inflamado (CRII) (n=17), cisto radicular levemente inflamado(CRLI)(n=.9) e cisto dentÃgero (CD) (n= 9). A presenÃa e intensidade do infiltrado inflamatÃrio histiolinfoplasmocitÃrio e preservaÃÃo do epitÃlio de revestimento foram os parÃmetros utilizados para seleÃÃo dos casos. Os espÃcimes foram submetidos à reaÃÃo de imuno-histoquÃmica por estreptoavidina biotina, utilizando-se os anticorpos Ki 67 (DakoÂ, 1:50), anti-colÃgeno IV (DBSÂ, 1:40) e anti-laminina (DBSÂ, 1:20). A expressÃo de Ki 67 foi mais intensa no grupo CRLI, quando comparada ao grupo CRII e CD. A expressÃo de colÃgeno tipo IV na membrana basal foi significante no grupo CRLI, quando comparada com o grupo CRII e CD. Jà a imunomarcaÃÃo de matriz extracelular variou de ausente a fraca nos grupos CRII e CRLI, enquanto no CD se exibiu de forma fraca a moderada, sendo esta diferenÃa significativa. A expressÃo de laminina em membrana basal nos grupos CRII e CD foi negativa e no grupo dos CRLI foi fraca e pontual. Concluiu-se que a presenÃa e a intensidade do conteÃdo inflamatÃrio na parede dos cistos radiculares parecem modificar a expressÃo dos fatores de proliferaÃÃo no epitÃlio de revestimento, e colÃgeno tipo IV e laminina na membrana basal, mas nÃo interferem no comportamento do colÃgeno IV da matriz extracelular nos cistos radiculares. A expressÃo de componentes da membrana basal (laminina e colÃgeno tipo IV) à maior nos cistos radiculares com leve infiltrado inflamatÃrio. / Jawbone cysts are classified as odontogenic and non-odontogenic cysts. The radicular cyst is the most common odontogenic cyst of inflammatory origin, whereas the detigerous cyst is the most common type of developmental odontogenic cyst. These cysts and their variations have different etiopathogenesis and biological behavior, but are equally lytic. The proliferation activity of the epithelial lining and the components of the basement membrane and extracellular matrix constitute targets of research. The aim of this study was to evaluate the relation between mononuclear inflammatory infiltrate and the expression of proliferative immunomarkers (Ki 67), and proteins of basement membrane and extracellular matrix in radicular cysts. In this retrospective observational study, all cases of jawbone cysts that had been recorded in the files of the Department of Pathology and Legal Medicine (FAMED), and of the Laboratory of Oral Pathology (FFOE) of the Federal University of Cearà (UFC) and reviewed. After histological revision, the groups were divided into heavily inflamed radicular cysts (HIRC) (n=17), slightly inflamed radicular cysts (SIRC) (n=9) and dentigerous cysts (DC) (n=9). The presence and intensity of the lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate and the preservation of the epithelial lining were the parameters used to select the cases. Immunohistochemical analyses were performed using the standard streptavidin-biotin-peroxidase method. The primary antibodies used in this study included Ki 67 (DakoÂ, 1:50), Anti-Collagen Type IV (DBSÂ, 1:40) and Anti- Laminin (DBSÂ, 1:20).The immunoexpression of Ki-67 was more intense in the SIRC group compared to the HIRC group and DC. Likewise, the immunoexpression of Anti-Collagem Type IV in the basement membrane of the SIRC group presented a statistically significant difference compared to the HIRC group and DC . The expression of laminin in the basement membrane and in group HIRC and DC was negative and the group of SIRC was weak and punctual. It was concluded that presence and severity of inflammatory content wall of radicular cysts appear to modify the expression of proliferation factors in the coating epithelium and collagen type IV and laminin in the basement membrane but not modific with the behavior of extracellular matrix in radicular cyst. The expression of basement membrane components (laminin and collage type IV) is higher in radicular cyst with mild inflammatory infiltrade.
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QuantificaÃÃo por PCR em tempo real de Mycobacterium leprae em amostras de secreÃÃo nasal e biÃpsias de pele em hansenianos / Real-time PCR quantification of Mycobacterium leprae in nasal and biopse skin samples from leprosy cases

LÃvia Ãrika Carlos Marques 18 February 2013 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O Mycobacterium leprae, agente etiolÃgico da hansenÃase, nÃo à cultivÃvel em meio axÃnico. A quantificaÃÃo do bacilo realizada pelo exame baciloscÃpico e histopatolÃgico à Ãtil para a classificaÃÃo da hansenÃase na escolha e monitoramento do tratamento. No entanto, esta metodologia produz resultados de especificidade e sensibilidade limitada. A PCR em tempo real (qPCR) à um ensaio sensÃvel e especÃfico que permite a quantificaÃÃo a partir de diversas amostras e pode ser utilizada no diagnÃstico diferencial de muitos patÃgenos. Atà o momento, nenhum estudo avaliou a sensibilidade e especificidade da qPCR para o diagnÃstico da hansenÃase utilizando amostras de secreÃÃo nasal. Portanto, este estudo teve como objetivo detectar e quantificar o DNA de M. leprae por qPCR em amostras de secreÃÃo nasal e biÃpsias de pacientes com hansenÃase, correlacionando com a avaliaÃÃo clÃnica e o Ãndice baciloscÃpico. Foram analisadas 61 amostras de muco nasal e 19 amostras de biÃpsia de lesÃo de pele (pareadas) de casos confirmados de hansenÃase atendidos no Centro de ReferÃncia Nacional em Dermatologia SanitÃria Dona LibÃnia. Todas as amostras foram submetidas à extraÃÃo e amplificaÃÃo de DNA por nested PCR da regiÃo de 238 pb da sequÃncia RLEP2. Posteriormente as amostras foram submetidas à quantificaÃÃo da regiÃo 16S rRNA do genoma de M. leprae pela qPCR, cuja especificidade foi verificada atravÃs da curva de dissociaÃÃo (Tm=79,5ÂC). O mÃtodo foi suficientemente sensÃvel para detectar 20 fg de DNA de M. leprae, o equivalente a quatro bacilos. Na anÃlise da secreÃÃo nasal, o ensaio foi capaz de confirmar o diagnÃstico em 89,7% dos casos multibacilares (MB), e 73,3% dos casos paucibacilares (PB). A sensibilidade foi de 100% na analise de biÃpsias de pacientes MB. O nÃmero de bacilos detectados nas amostras de secreÃÃo nasal de pacientes com hansenÃase se manteve no intervalo de 1,39 x 103 a 8,02 x 105 bacilos, enquanto a detecÃÃo em biÃpsia de pacientes MB variou de 1,87 x103 a 1,50 x 106. A PCR em tempo real à mais sensÃvel do que a PCR convencional e pode ser utilizada como uma ferramenta complementar para o diagnÃstico clÃnico e histopatolÃgico da hansenÃase. / Mycobacterium leprae, the etiologic agent of leprosy, is not cultivable in axenic medium. The quantification of bacilli performed by skin bacilloscopy and histopathology is useful for the clinical classification of leprosy and treatment monitoring. However, this methodology yields low results regards to sensitivity and specificity. On the other way, the real-time quantitative PCR (qPCR) is a sensitive and specific assay that allows quantification of a varied of samples and also can be used for differential diagnosis of many pathogens. To this date, no studies have evaluated the sensitivity and specificity of qPCR for the diagnosis of leprosy from nasal secretion samples. Therefore, this study aimed at detecting and quantifying DNA from M. leprae by qPCR from nasal secretion and biopsy samples from leprosy cases, correlating with clinical and bacteriological index. We analyzed 61 samples of nasal secretion and 19 biopsy specimens of skin lesion (paired) from confirmed leprosy cases seen at the National Reference Center for Sanitary Dermatology Dona LibÃnia. All samples were subjected to DNA extraction followed by amplification by nested PCR of a region of 238 bp which targets a RLEP2 repetitive sequence. The samples were subjected to quantification of 16S rRNA region of the genome of M. leprae by qPCR, which specificity was verified by amplicon melting temperature (Tm = 79.5  C). The method was able to detect amounts over to 20 fg of M. leprae DNA, equivalent to four bacilli units. Nasal secretion assay was able to confirm the diagnosis in 89.7% of the multibacillary cases (MB) and 73.3% of the paucibacillary cases (PB). In addition, MB patient biopsies sensitivity was 100%. The number of bacilli detected in nasal secretion samples from leprosy patients ranged from 1.39 x 10 to 8.02 x 105 bacilli, while detection in MB patient biopsy ranged from 1,87 x 103 to 1,50 x 106. The real-time PCR is more sensitive than conventional PCR and can be used as a complementary tool for the clinical and histopathological diagnosis of leprosy.

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