Introdução: A periodontite é uma doença inflamatória crônica, de alta prevalência na população, que causa perda dentária. A progressão da doença ocorre por meio de surtos, com períodos de remissão e exacerbação. A análise da expressão gênica de lesões ativas na progressão das doenças periodontais pode demonstrar diferenças na resposta do hospedeiro e indicar processos relacionados à atividade destrutiva da doença. Metodologia: Foram selecionados 54 pacientes, sendo 18 com Doença Periodontal Agressiva (DPA), 25 com Doença Periodontal Crônica (DPC) e 11 com ausência de Doença Periodontal (Controle). Medidas clínicas de profundidade de sondagem (PS), nível de inserção relativo (NIR), sangramento à sondagem (SS) e índice de placa (IP) foram obtidas em dois tempos: inicial e após tratamento na reavaliação com dois meses. Nos pacientes com Doença Periodontal (DP), os sítios que apresentaram perda de inserção de um ou mais milímetros foram considerados ativos e os demais, não ativos. O perfil de expressão gênica, de sítios ativos e não ativos, foi obtido pela análise de biópsias gengivais com o Real Time PCR Array. Resultados: Após o tratamento periodontal não cirúrgico, houve melhora significante em todos os parâmetros clínicos (PS, SS, IP; p<0,05) exceto para o NIR (p>0,05). Dos 5112 sítios tratados, aproximadamente 4% apresentam perda de inserção mesmo após o tratamento com ou sem uso de antibiótico. As doenças DPA e DPC demonstraram diferentes perfis de expressão gênica, com sítios ativos apresentando um padrão significantemente up-regulated em relação aos sítios não ativos. Conclusão: A DPA e a DPC são condições clínicas que apresentam diferenças na resposta imune e a atividade destrutiva da lesão periodontal ativa pode ser reconhecida por um padrão inflamatório up-regulated de resposta. Considerando-se as diferenças observadas, abordagens terapêuticas individualizadas e capazes de modular a resposta poderiam potencializar o efeito benéfico da terapia anti-infecciosa e reduzir o número de sítios ativos da DP progressiva. / Aim: Evaluate the gene expression profile under healthy and periodontal disease conditions; identify possible differences in the gene expression profile between chronic and aggressive periodontal diseases; seek evidences of immune regulation differences in active and non active sites during periodontal destruction. Methods: Clinical parameters of probing depth, relative attachment level, bleeding on probing and plaque index were obtained in two stages: initial and two months. The sites that showed attachment loss 1mm were considered active and others non-active. The gene expression profile of active and non-active sites, was obtained by gingival biopsies analysis with Real Time PCR Array. Results: After non-surgical periodontal treatment, significant improvement in all clinical parameters were achieved (P <0.05), except for the relative attachment level (p> 0.05). The disease showed different gene expression profiles with active sites showing a pattern significantly up-regulated compared to non-active sites. Conclusion: Aggressive and Chronic Periodontitis are clinical conditions that showed differences in the immune response profile and that the progressive periodontal lesion can be recognized by an up-regulated inflammatory response. Considering the observed differences, it is possible that individualized therapeutic approaches that modulate the inflammatory response might enhance the efficacy of the anti-infective therapy and reduce active sites number after treatment.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-09-15T16:06:05Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Soraya Castro Trindade.pdf: 1012276 bytes, checksum: e039010222f6877bd5937655b190d8e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T16:06:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Soraya Castro Trindade.pdf: 1012276 bytes, checksum: e039010222f6877bd5937655b190d8e2 (MD5) / A periodontite é uma doença inflamatória bucal causada por agentes multifatoriais intrínsecos e extrínsecos, incluindo bactérias Gram-negativas, como Porphyromonas gingivalis. Este estudo foi realizado para avaliar os níveis séricos de IgA, IgG e subclasses de IgG reativos a Porphyromonas gingivalis ATCC33277. Foram examinados 89 pacientes, divididos em quatro grupos: 29 com periodontite crônica (PC), 12 com periodontite agressiva (PA), 22 com gengivite ou periodontite leve (GP), e 26 com periosonto clinicamente sadio (PS). A resposta imune humoral foi avaliada por testes de ELISA, para verificar os níveis séricos de IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 e IgA reativos ao extrato sonicado bruto de P. gingivalis ATCC 33277 e à fração IV obtida por cromatografia. Os níveis de IgA, IgG (p<0,01), IgG2, IgG3 and IgG4 à fração IV foram maiores no grupo PC que no grupo SP. O grupo PC apresentou níveis mais altos de IgG and IgG4 reativas a ambos os antígenos que o grupo GP e níveis mais altos de IgG and IgG4 reativas ao extrato sonicado bruto que o grupo PA. Foram encontradas diferenças estatisticamente significantes nos níveis de IgG reativa às duas preparações de Pg (p<0,01), IgG2 reativa à fração IV (p<0,01), IgG3 reativa à fração IV (p<0,05) e IgG4 reativa ao extrato bruto e à fração IV (p<0,05) entre os grupos PA e SP. Os níveis de IgG1 ao extrato sonicado bruto foram maiores no grupo GP que no grupo AP (p<0,05). Os resultados sugerem que o ELISA indireto para a detecção de IgG total e IgG4 reativas aos dois antígenos e IgG3 reativa à fração IV permitiram as melhores condições de discriminação entre os grupos, com a IgG4 reativa à fração IV apresentando o melhor desempenho. A produção de anticorpos na periodontite agressiva não apresentou um padrão definido em relação aos isotipos estudados.

Orientador: Márcio Zaffalon Casati / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T14:43:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taiete_Tiago_M.pdf: 1582293 bytes, checksum: ce2ee2281211fd103a94c527cfce02ab (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A periodontite agressiva é caraterizada por apresentar início precoce, rápida progressão e pobre resposta as abordagens terapêuticas quando comparado a periodontite crônica. Entretanto, os mecanismos responsáveis por essas diferenças ainda não são completamente compreendidos. Ferramentas como a genômica, proteômica ou transcriptômica podem esclarecer esses aspectos, gerando importantes informações a respeito da patogênese das doenças periodontais. Portanto, os objetivos do presente estudo foram: i) Apresentar uma revisão de literatura focada na aplicação da genômica, transcriptômica, proteômica e metabolômica no estudo das doenças periodontais. ii) Avaliar as diferenças no perfil de expressão gênica da mucosa mastigatória, sem a influência do biofilme subgengival, em indivíduos com histórico de periodontite agressiva e crônica, comparando-os entre si e também com o perfil de expressão de indivíduos sem histórico de periodontite visando à identificação de possíveis alterações constitutivas na expressão de genes que podem estar relacionadas com as diferenças entre as duas formas de periodontite. Para o primeiro objetivo, foi realizada uma revisão dos artigos que empregaram as tecnologias ômicas no estudo das doenças periodontais. Os estudos presentes na literatura indicaram que essas tecnologias podem levar a um melhor entendimento dos eventos moleculares envolvidos na patogênese das doenças periodontais. Para o segundo objetivo, foram obtidas amostras teciduais da mucosa mastigatória de 4 pacientes com histórico de periodontite crônica, 4 com periodontite agressiva generalizada e 4 indivíduos sem histórico de periodontite. As amostras foram manipuladas para a extração de RNA total, síntese de cDNA de fita dupla e a hibridização por microarranjo de DNA, avaliando a expressão de 45033 genes. Os programas R e Bioconductor foram empregados para realizar a análise de RMA (Robust-Multi-Array), calcular o valor de expressão (fold-change) e o valor de p para comparações múltiplas através do método de Benjamini-Hochberg. O enriquecimento dos dados, através de ontologia gênica e análise de via, foi realizado com o programa de bioinformática DAVID (Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery). Três comparações foram realizadas: comparação 1 (periodontite agressiva x indivíduos sem histórico de periodontite); comparação 2 (periodontite crônica x indivíduos sem histórico de periodontite); e comparação 3 (periodontite crônica x periodontite agressiva). A comparação entre os grupos identificou: 192 genes e 50 grupos diferencialmente expressos na comparação 1, 43 genes e 27 grupos na comparação 2 e 168 genes e 75 grupos na comparação 3. Genes com funções no sistema imune, entre os quais receptores de linfócitos natural killer, foram mais expressos em periodontite agressiva; em contraste, genes envolvidos na proliferação e diferenciação de queratinócitos, assim como genes com função em processos neurais foram menos expressos. Já os indivíduos com periodontite crônica se caracterizaram por um aumento na expressão de genes com função na resposta a estímulos externos, e uma diminuição na expressão dos genes relacionados ao sistema imune. Dentro dos limites desse estudo, pode-se concluir que existem diferenças nos perfis de expressão gênica da mucosa mastigatória de indivíduos com histórico de periodontite agressiva e crônica, quando comparadas entre si e com indivíduos sem histórico de periodontite, que podem estar associadas às diferenças em suas patogêneses / Abstract: Aggressive periodontitis is characterized by early onset, rapid progression and poor response to treatment compared to chronic periodontitis. However, mechanisms responsible for these differences are not fully understood. Tools such as genomics, proteomics and transcriptomics can clarify these aspects, producing important information about the pathogenesis of periodontal diseases. Therefore, the aims of this study were: i) Provide a literature review focused on the application of genomics, transcriptomics, proteomics, and metabolomics in the study of periodontal diseases. ii) Evaluate the gene expression profile of tissue from masticatory mucosa, without the influence of biofilm, in patients with a history of generalized aggressive and chronic periodontitis, and also with gene expression profile of individuals without periodontitis, with the aim to identify possible constitutive alterations in gene expression, which may be related to the differences between both forms of periodontitis. For the first objective, it was performed a review of articles that employed omics technologies in the study of periodontal diseases. The studies in the literature indicated that these technologies can lead to a better understanding of molecular events involved in the pathogenesis of periodontal diseases. For the second objective, masticatory mucosa tissue samples were obtained from 4 patients with a history of chronic periodontitis, 4 with generalized aggressive periodontitis, and 4 from subjects without history of periodontitis. Tissue samples were processed for total RNA extraction, double-strand cDNA synthesis for subsequent hybridization reaction on microarrays, which assessed the expression of 45033 genes. R and Bioconductor softwares used to perform the RMA analysis (Robust Multi-Array), calculate the value of expression (fold-change) and the p-value for multiple comparisons through Benjamini-Hochberg method. Enrichment analysis, through gene ontology (GO) and pathway analysis, was performed with DAVID (Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery). Three comparisons were performed: comparison 1 (aggressive periodontitis x healthy subjects); comparison 2 (chronic periodontitis x healthy subjects); and comparison 3 (chronic periodontitis x aggressive periodontitis). Comparisons analysis found 192 genes and 50 groups differentially expressed in comparison 1, 43 genes and 27 groups in comparison 2, and 168 genes and 75 groups in comparison 3. Genes with function in the immune system, including natural killer cells receptors, were higher expressed in aggressive periodontitis; in contrast, genes involved in proliferation and differentiation of keratinocytes, as well as genes with function in neural process were lower expressed. Chronic periodontitis subjects were characterized by increased expression of genes related to response to external stimuli, and a decrease in the expression of genes related to the immune system. Within the limits of this study, it can be concluded that there are differences in the gene expression profile of masticatory mucosa of patients with a history of chonic and aggressive periodontitis, when compared among them and with healthy group, which may be associated with differences in their pathogenesis / Mestrado / Periodontia / Mestre em Clínica Odontológica

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do probiótico Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019 (HN019) na periodontite (PE) induzida por ligadura em ratos com artrite reumatoide (AR) experimental. Foram utilizados 28 ratos, divididos em 4 grupos (n=7): AR (controle), AR/PROB (probiótico), AR/PE (periodontite experimental) e AR/PE/PROB. A partir do dia 0, HN019 foi adicionado diariamente à água dos animais dos grupos PROB, na concentração de 1,5x 109 unidades formadoras de colônia por mililitro, até o final do experimento. No dia 7, AR foi induzida por injeções subcutâneas de colágeno bovino tipo II (CII) emulsionado em Adjuvante Incompleto de Freund (IFA) em múltiplos locais na base da cauda dos animais. No dia 14, foi realizada uma dose de reforço de CII com IFA. No dia 21, aplicações locais de Adjuvante Completo de Freund foram realizadas na superfície plantar das patas traseiras direitas e intra-articularmente nos joelhos direitos dos animais. No dia 28, nos grupos PE, foram posicionadas ligaduras ao redor dos primeiros molares inferiores, as quais permaneceram em posição durante 11 dias. Os animais foram submetidos à eutanásia no 39º dia. Foram realizadas análises microtomográficas, histomorfométrica, imunoenzimáticas (anticorpo anti-proteína citrulinada, TNF-&alpha;, IL-6, IL-17 e IL-10) e microbiológica. Os dados foram estatisticamente analisados (p<0,05). O grupo AR/PE/PROB apresentou perda óssea alveolar reduzida quando comparado com o grupo AR/PE. Não houve diferença significativa em relação ao nível de inserção conjuntiva quando os animais com PE tratados e não tratados com PROB foram comparados. Os animais do grupo AR/PROB apresentaram níveis de anticorpo anti-proteína citrulinada diminuídos quando comparados com os animais dos grupos AR e AR/PE. Os animais com PE tratados com PROB apresentaram níveis de TNF-&alpha; e IL-6 reduzidos e níveis de IL-17 aumentados quando comparados com os animais com PE não tratados. Não houve diferença significativa em relação aos níveis de IL-10 entre os grupos AR/PE e AR/PE/PROB. O grupo AR/PE apresentou maior taxa de bactérias anaeróbias sobre aeróbias do que o grupo AR/PE/PROB. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que a administração de HN019 promoveu um efeito protetor contra a destruição tecidual em ratos com AR e PE experimentais / The purpose of this study was to evaluate the effects of the probiotic Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019 (HN019) on ligature-induced periodontitis in rats with experimental rheumatoid arthritis (RA). 28 rats were divided into 4 groups (n = 7): RA (control), RA/PROB (probiotic), RA/EP (experimental periodontitis) and RA/EP/PROB. Starting from day 0, HN019 was added daily to the water of the animals of PROB groups (1.5x109 colony forming units per milliliter), until the end of the experiment. On day 7, RA was induced by subcutaneous injections of bovine collagen type II (CII) emulsified in Incomplete Freund\'s Adjuvant (IFA) at multiple sites at the base of the animals tail. On day 14, a booster dose of CII was performed with IFA. On day 21, local applications of Complete Freund\'s Adjuvant were performed in the plantar surface of the right hind paws and intra-articularly in the right knees of the animals. On day 28, in EP groups, ligatures were positioned around mandibular first molars and remained in position for 11 days. The animals were euthanized on day 39. Microtomographic, histomorphometric, immunoenzymatic (anti-citrullinated protein antibodies, TNF-&alpha;, IL-6, IL-17 and IL-10) and microbiological analyses were performed. Data were statistically analyzed (p <0.05). The RA/EP/PROB group presented reduced alveolar bone loss when compared to the RA/EP group. There was no significant difference regarding connective tissue attachment level when the treated and untreated EP animals were compared. Animals of the RA/PROB group showed decreased levels of anti-citrullinated protein antibodies when compared with the animals of RA and RA/EP groups. EP animals treated with PROB presented reduced levels of TNF-&alpha; and IL-6 and increased levels of IL-17 when compared with animals with untreated EP. There was no significant difference in IL-10 levels between RA/EP and RA/EP/PROB groups. Group RA/EP presented a higher rate of anaerobic/aerobic bacteria than group RA/EP/PROB. Within the limits of this study, it can be concluded that the administration of HN019 promoted a protective effect against tissue destruction in rats with experimental RA and EP

A Periodontite é uma doença de etiologia multifatorial que acomete os tecidos de suporte dentário resultando em perda progressiva de inserção e perda óssea. Este estudo clínico controlado, aleatorizado e duplo-cego avaliou a eficácia da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa), em aplicações múltiplas, como terapia adjuvante ao tratamento periodontal cirúrgico em pacientes com Periodontite Crônica Avançada (PCA). Dezesseis voluntários foram submetidos ao modelo de estudo do tipo boca dividida, recebendo tratamento de acesso cirúrgico associado a raspagem e alisamento radicular (RAR) adjunto à TFDa em protocolo de aplicação nos períodos de 0, 2, 7 e 14 dias pós-operatórios (Grupo Teste - GT), ou apenas tratamento de acesso cirúrgico associado a RAR (Grupo Controle - GC). Todos os pacientes receberam orientação de higiene oral e acompanhamento por 90 dias pós-cirúrgicos. Os seguintes parâmetros clínicos e microbiológicos foram avaliados: Nível clínico de inserção (NCI), Profundidade de sondagem (PS), Recessão gengival (RG), Sangramento à sondagem (SS), Índice de placa (IP) e contagem de 40 espécies microbianas subgengivais (checkerboard DNA-DNA hybridization). Os dados foram coletados nos períodos baseline (pré-terapia básica), 60 dias (30 dias após terapia não cirúrgica) e 150 dias (90 dias pós-cirurgia). Uma redução significativa na PS foi observada aos 150 dias para o GT, quando comparado ao GC no mesmo período (p &lt; 0,05). O ganho do NCI foi significativamente maior no GT entre os tempos de 60 e 150 dias (p &lt; 0,05). As mudanças da microbiota subgengival foram similares entre os grupos (p &gt; 0,05), mas o Grupo Teste apresentou quantidades mais elevadas de bactérias compatíveis com saúde periodontal no período final do experimento em relação ao GC (p &lt; 0,05). Concluiu-se que a utilização da TFDa em aplicações múltiplas, como terapia adjuvante ao tratamento cirúrgico periodontal, produziu melhoras significativas nos parâmetros clínicos no período de 90 dias de avaliação / Chronic Periodontitis is a multifactorial disease which results in tooth supporting tissues loss. This double-blind randomized controlled clinical trial assessed the efficacy of multiple sessions of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) as an adjunct to surgical periodontal treatment in patients with severe chronic periodontitis (SCP). Sixteen volunteers were selected into this Split-mouth study. They were subjected to scaling and root planning in open flaps (SRP) combined with aPDT at 0, 2, 7, and 14 postoperative days (Test Group - TG), or only SRP (Control Group CG). All patients were instructed about oral hygiene and were followed up for 90 days after surgery. The following clinical and microbiological parameters were assessed: clinical assessment level (CAL), probing depth (PD), gingival recession (GR), bleeding on probing (BOP), plaque index (PI). Levels of 40 subgingival species were measured by checkerboard DNA-DNA hybridization at baseline, 60 (30 days after non-surgical therapy) and 150 days (90 days post-surgery). Data were collected at baseline (pre-intervention), at 60 days (30 days after the end of nonsurgical therapy), and at 150 days (90 days after surgery). A significant reduction in PD was observed at 150 days for the TG, when compared to the CG (p &lt; 0.05). CAL gain was significantly higher in the TG at 60 and 150 days (p &lt; 0.05). Changes in the subgingival microbiota were similar between the groups (p &gt; 0.05), but the TG revealed a larger number of bacteria associated with periodontal disease at the end of the experiment compared to the CG (p &lt; 0.05). In conclusion, multiple sessions of aPDT as an adjunct to surgical periodontal treatment significantly improved clinical parameters at 90 postoperative days

O propósito deste estudo foi avaliar o efeito adjuvante da terapia probiótica (TProb) no tratamento periodontal não cirúrgico em pacientes com Periodontite Crônica generalizada (PCg). Em um estudo clínico aleatorizado, duplo-cego e placebo-controle, 41 pacientes com PCg foram tratados com TProb associada à raspagem e alisamento radicular (RAR Grupo Teste) ou apenas RAR (Grupo Controle). Os pacientes do Grupo Teste consumiram pastilhas contendo Bifidobacterium animalis subsp. lactis (B. lactis) HN019 durante 4 semanas. Os pacientes do Grupo Controle receberam pastilhas placebo (sem probiótico). Parâmetros clínicos periodontais foram avaliados no baseline (período pré-intervenção) e em 30 e 90 dias após a RAR. Nestes mesmos períodos foram coletadas amostras de placa subgengival para contagem de 40 espécies bacterianas (checkerboard DNA-DNA hybridization) e detecção do genoma de B. lactis HN019 (Reação em cadeia da polimerase em tempo real - q-PRC), amostras do fluido crevicular gengival para avaliação dos níveis de Interleucina (IL)-1beta, IL-8 e IL-10 (Imunoensaios multiplex) e amostras de saliva para avaliação dos níveis de Imunoglobulina A (IgA) (Nefelometria). Foram realizadas, também, biópsias de tecido gengival para determinação da expressão de beta-defensina (BD)-3 e receptores do tipo Toll (TLR)-4 (reações imunohistoquímicas - estreptavidina-biotina-peroxidase). Os dados obtidos foram estatisticamente analisados (p<0,05). O Grupo Teste apresentou, aos 90 dias, redução de profundidade de sondagem (PS) e ganho de inserção clínica significativamente maiores que aqueles do Grupo Controle. O Grupo Teste também apresentou menor quantidade de bolsas periodontais moderadas (aos 30 e 90 dias) e profundas (aos 90 dias) que o Grupo Controle (p<0,05), bem como menor quantidade de pacientes (p<0,05) apresentando 3 ou mais sítios com PS &ge; 6 mm ou PS = 5mm e sangramento à sondagem (SS) positivo. O Grupo Teste apresentou menor SS (aos 30 e 90 dias) e menor IP (aos 30 dias) quando comparado ao Grupo Controle (p<0,05). Na análise microbiológica, o Grupo Teste apresentou proporções significativamente menores de espécies microbianas dos complexos vermelho (ao 30 e 90 dias) e do complexo laranja (aos 30 dias), bem como maiores proporções de espécies do complexo azul (aos 90 dias) quando comparado ao Grupo Controle. A análise por meio de q-PCR mostrou que o Grupo Teste apresentou um aumento no número de cópias/&mu;L do genoma da cepa probiótica B. lactis HN019 no biofilme subgengival aos 30 e 90 dias (p<0,05). Na análise imunológica, o Grupo Teste apresentou menor razão (valores ajustados ao baseline) de IL-1&beta; (aos 30 e 90 dias) e de IL-8 (aos 30 dias) do que o Grupo Controle (p<0,05). Apenas o Grupo Teste apresentou valores de IL-10 significativamente maiores que aqueles do baseline aos 30 dias. Não foram observadas diferenças entres os grupos nas razões de IgA aos 30 e 90 dias. Na análise imunohistoquímica, o Grupo Teste apresentou expressões significativamente maiores de BD-3 e TLR-4 em sítios doentes quando comparado ao Grupo Controle aos 30 dias. Pode-se concluir que a utilização do probiótico B. lactis HN019 como recurso adjuvante à RAR promove benefícios clínicos, microbiológicos e imunológicos adicionais no tratamento de pacientes com PCg / The purpose of this study was to evaluate the adjuvant effect of probiotic therapy (ProbT) in non-surgical periodontal treatment in patients with generalized chronic periodontitis (GCP). In this randomized, double-blind, placebo-control, 41 patients with GCP were treated with ProbT associated with scaling and root planing (SRP - Test Group) or SRP only (Control Group). The patients in the Test Group consumed lozenges containing Bifidobacterium animalis subsp. lactis (B. lactis) HN019 during 4 weeks. The patients in the Control Group received placebo (lozenges without probiotic). Periodontal clinical parameters were evaluated at baseline (pre-intervention) and at 30 and 90 days after SRP. Samples of subgingival plaque were collected to count 40 bacterial species (checkerboard DNA-DNA hybridization) and detection of genome of B. lactis HN019 (polymerase chain reaction in real time - q-PCR). Gingival crevicular fluid samples were collected for assessing levels of interleukin (IL)-1beta, IL-8 and IL-10 (multiplex immunoassays). Saliva samples were collected to measure levels of immunoglobulin A (IgA) (nephelometry). Also, biopsies of gingival tissues were performed to determine the expression of beta-defensina (BD)-3 and Toll-Like receptors (TLR)-4 (immunohistochemical reactions - streptavidin-biotin-peroxidase). The data obtained were statistically analyzed (p < 0.05). The Test Group presented, at 90 days, reduction of probing pocket depth (PPD) and clinical attachment gain significantly higher when compared to the Control Group. The Test Group also presented a lower number of moderate (at 30 and 90 days) and deep (90 days) periodontal pockets than the Control Group (p < 0.05), as well as a lower number of subjects (p < 0.05) with 3 or more sites with PPD &ge;6 mm or PPD = 5mm and bleeding on probing (BOP) positive. The Test Group presented lower BOP (at 30 and 90 days) and lower PI (at 30 days) when compared to the Control Group (p<0.05). In the microbiological analysis, the Test Group showed significantly lower proportions of microbial species of red (at 30 and 90 days) and the orange (at 30 days) complexes, as well as higher proportions of species of blue complex (at 90 days) when compared to the Control Group. q-PCR analysis showed that the Test Group presented an increase in the number of copies/&mu;L of the genome of the probiotic strain B. lactis HN019 in subgingival biofilm at 30 and 90 days (p < 0.05). In the immunological analysis, the Test Group presented a lower ratio of IL-&beta;1 (at 30 and 90 days) and IL-8 (30 days) than the Control Group (p < 0.05). Only the Test Group presented values of IL-10 significantly higher than those of the baseline at 30 days. No differences were observed between the groups on the ratios of IgA at 30 and 90 days. In the immunohistochemical analysis, the Test Group showed significantly higher expression of BD-3 and TLR-4 in sites with periodontitis when compared to the Control Group at 30 days. It can be concluded that the use of probiotic B. lactis HN019 as an adjuvant to SRP promotes clinical, microbiological and immunological additional benefits in the treatment of patients with GCP

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da administração tópica de bactérias probióticas do gênero Bifidobacterium na doença periodontal experimental em ratos. Foram utilizados 32 ratos divididos nos seguintes grupos: CT (controle), DPT (doença periodontal), CT-HN019 (controle + probiótico) e DPT-HN019 (doença periodontal + probiótico). No dia 0 do experimento, a doença periodontal foi induzida nos animais dos grupos DPT e DPT-HN019 por meio da colocação de ligaduras ao redor dos primeiros molares inferiores. Nos Grupos CT-HN019 e DPT-HN019, 2 mL de uma suspensão contendo 109 unidades formadoras de colônia/mL de Bifidobacterium animalis subsp lactis (B. lactis) HN019 foram administrados topicamente na região subgengival dos primeiros molares inferiores nos dias 0, 3 e 7 do experimento. Nos grupos CT e DPT, as administrações tópicas foram realizadas com uma suspensão sham (sem probiótico). Todos os animais foram submetidos à eutanásia 14 dias após o início do experimento. Foram coletados tecido gengival, hemi-mandíbulas e biofilme bucal para avaliação dos seguintes parâmetros: i) microbiota bacteriana (checkerboard DNA-DNA hybridization; ii) expressão de citocinas pró e anti-inflamatórias (análise Multiplex); iii) imunorreatividade de peptídeos antimicrobianos (reações imunohistoquímicas - estreptavidina-biotina-peroxidase); iv) níveis inserção conjuntiva (análise histomorfométrica) e v) microarquitetura e volume ósseos (microtomografia computadorizada por transmissão de raios X). Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (p < 0,05). O grupo DPT apresentou maiores valores de porosidade óssea, espaçamento de trabéculas ósseas e nível de inserção conjuntiva, bem como menor número de trabéculas e volume ósseos quando comparado a todos os outros grupos (p < 0,05). No Grupo DPT-HN019, foram observados maiores percentuais de bactérias dos complexos amarelo e azul, bem como maiores expressões de Osteoprotegerina (OPG), Beta-defensina (BD)-1, BD-2 e BD-3 quando comparados àqueles do Grupo DPT (p < 0,05). O Grupo DPT apresentou níveis de Interleucina (IL)-1&beta; Receptor Ativador do Fator Nuclear Kappa-beta (RANKL) maiores que aqueles do Grupo DPT-HN019 (p < 0,05). As razões RANKL/OPG e IL-1&beta;/IL-10 foram mais elevadas no grupo DPT do que no Grupo DPT-HN019 (p < 0,05). Dentro dos limites deste estudo pode-se concluir que o uso tópico de B. lactis HN019 promove um efeito protetor contra a perda óssea e de inserção conjuntiva decorrentes da periodontite experimental em ratos. / The purpose of this study was to evaluate the effects of topical administration of probiotic bacteria of the genus Bifidobacterium on experimental periodontal disease in rats. 32 rats were divided into groups C (control), EP (experimental periodontitis), C-HN019 (control + probiotic) and EP-HN019 (EP+ probiotic). On day 0 of the experiment, periodontitis was induced in the animals of groups EP and EP-HN019 through the placement of ligatures around mandibular first molars. In groups C-HN019 and EP-HN019, 2 mL of suspensions containing 109 colony-forming units/mL of Bifidobacterium animalis subsp lactis (B. lactis) HN019 were topically administered in the subgingival region of mandibular first molars on days 0, 3 and 7 of the experiment. In groups C and EP, topical administrations were performed using a sham suspension (without probiotic). All animals were euthanized 14 days after the beginning of the experiment. Gingival tissue, hemi-mandibles and oral biofilm were collected for evaluation of the following parameters: i) bacterial microbiota (checkerboard DNA-DNA hybridization), ii) expression of pro- and anti-inflammatory cytokines (Multiplex analysis), iii) immunoreactivityof antimicrobial peptides (immunohistochemical reactions - streptavidin-biotin-peroxydase); iV) connective tissue attachment levels (histomorphometric analysis) and v) bone microarchitecture and volume (microtomographic analysis). Data were statistically analyzed (p < 0.05). Group EP presented greater values of bone porosity, trabecular separation and connective tissue attachment loss as well as reduced trabecular number and bone volume when compared with all the other groups (p < 0.05). In group EP-HN019, there were greater percentages of bacteria of the yellow and blue complexes and greater expressions of Osteoprotegerin (OPG) and beta-defensins (BD)-1, BD-2 and BD-3 when compared with group EP (p < 0.05). Group EP presented greater levels of Interleukin (IL)-1&beta; and Receptor Activator of Nuclear Factor-Kappa B ligand (RANKL) than group EP-HN019 (p < 0.05). The increase in the ratios RANKL/OPG and IL-1&beta;/IL-10 was greater in group EP than in group EP-HN019 (p < 0.05). Within the limits of the present study, it can be concluded that the topical use of B. lactis HN019 promotes a protective effect against alveolar bone and connective tissue attachment losses attributable to experimental periodontitis in rats.

A síndrome de Sjögren primária (SSp) é uma doença crônica autoimune sistêmica que pode levar à hipossalivação e afetar negativamente o ambiente oral. Os objetivos deste estudo foram detectar a influência da SSp nos níveis de biomarcadores inflamatórios na saliva e no fluido gengival nas amostras de pacientes com periodontite crônica, avaliar o efeito do tratamento periodontal não cirúrgico sobre os valores do índice clínico de avaliação da atividade sistêmica de pacientes com SSp e do índice reportado pelo paciente com SSp. Amostras de fluido gengival, saliva e os parâmetros clínicos periodontais que consistiram de medida da profundidade de sondagem (PS), nível clínico de inserção (NCI), sangramento à sondagem (SS) e índice de placa (IP) foram coletadas no início do estudo e 45 dias após a terapia periodontal não-cirúrgica de pacientes sistemicamente saudáveis com periodontite crônica (PC, n = 7) e pacientes com SSp e periodontite crônica (SP, n = 7). Pacientes periodontalmente saudáveis com SSp (SC, n = 7) e sistemicamente saudáveis (C, n = 7) também foram avaliados no início do estudo. Os grupos C, PC e SC foram pareados em gênero, idade e critério socioeconômico com o grupo SP. Os níveis de interleucina-8 (IL-8), IL-10 e IL-1ß foram avaliados por ensaio multiplex. Os níveis de atividade da doença foram medidos usando o Gold Standard da literatura chamado Índice Eular de atividade da síndrome de Sjögren (ESSDAI). Já para avaliação dos sintomas reportados pelo paciente com SSp foi utilizado o Índice Eular reportado pelo paciente com Sjögren (ESSPRI). Os parâmetros clínicos melhoraram após a terapia periodontal (p <0,05). No entanto, o NCI em pacientes com SSp não melhorou significativamente após a terapia (p> 0,05). Houve um aumento nos níveis de IL-1ß, IL-8 e diminuição dos níveis de IL-10 nas amostras de saliva de pacientes do grupo SC em comparação ao grupo C (p <0,05). Já em relação ao fluido gengival, pacientes do grupo SC tiveram maiores níveis de IL-1ß em comparação com o grupo C (p<0,05). Além disso, o tratamento periodontal não cirúrgico resultou num aumento dos níveis de IL-10 no fluido gengival no grupo SP e grupo PC em relação ao valor basal (p <0,05). O fluxo salivar foi significativamente aumentado após o tratamento periodontal apenas em pacientes do grupo SP (p = 0,039). Além disso, o tratamento periodontal não influenciou o índice ESSDAI (p = 0,35) e levou a uma diminuição significativa no índice ESSPRI (p = 0,03). Os presentes dados demonstraram que a SSp influencia os níveis salivares e de fluido gengival de biomarcadores inflamatórios em favor de um perfil próinflamatório, no entanto, este perfil parece não aumentar susceptibilidade dos indivíduos SSp à destruição periodontal. Além disso, os presentes dados demonstraram que o tratamento periodontal não-cirúrgico tem um impacto positivo sobre o fluxo salivar e sobre o índice ESSPRI de pacientes com SSp. Sugere-se assim que o tratamento periodontal pode melhorar a qualidade de vida de indivíduos com SSp. / Primary Sjögren\'s syndrome (pSS) is a chronic systemic autoimmune disease that might lead to hyposalivation and negatively affect the oral environment. The aims of this study were to detect the influence of pSS on the levels of inflammatory biomarkers in salivary and gingival crevicular fluid (GCF) samples of patients with chronic periodontitis and to evaluate the effect of non-surgical periodontal treatment on the disease activity index of patients with pSS, and on the reported index of patients with pSS. GCF and salivary samples and clinical parameters consisting of measuring probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), bleeding on probing (BOP) and plaque index (PI) were collected at baseline and 45 days after non-surgical periodontal therapy from systemically healthy patients with chronic periodontitis (PC, n=7) and patients with pSS with chronic periodontitis (SP, n=7). Periodontally healthy patients with pSS (SC, n=7) and systemically healthy (C, n=7) were also evaluated at baseline. The groups C, PC and SC were pared on gender, years and socioeconomic status with the SP group. The levels of interleukin-8 (IL-8), IL-10, and IL-1ß were measured by using multiplex immunoassays. Disease activity levels were measured by using the Gold Standard called Eular Sjögren\'s syndrome disease activity index (ESSDAI). Also to evaluate the symptoms reported by the pacients with pSS we used the Eular Sjögren\'s syndrome patient reported index (ESSPRI). The clinical parameters improved significantly after periodontal therapy (p<0.05). However, CAL in pSS patients was not statistically improved after therapy (p>0.05). There was an increased expression of IL-1ß, IL-8 and decreased levels of IL-10 in the salivary samples of patients in the group SC compared to the group C (p<0.05). The GCF, patients in the group SC had bigger levels of IL-1ß in comparation with the C group (p<0.05). Moreover, nonsurgical periodontal treatment resulted in increased levels of IL-10 on GCF in the groups SP and PC in relation to the baseline (p<0.05). Salivary flow was significantly increased post-treatment only in the SP\'s group patients (p=0.039). In addition, periodontal treatment did not influence ESSDAI index (p=0.35) and led to a statistically significant decrease on the ESSPRI index (p=0.03). The present data demonstrated that pSS influences the salivary and GCF levels of inflammatory biomarkers in favour of a proinflammatory profile, however, this profile might doesn\'t increase the susceptibility of pSS subjects to periodontal breakdown. In addition, the present data demonstrated that non-surgical periodontal treatment has a positive impact on the salivary flow and ESSPRI index of pSS patients. Thus suggesting that periodontal treatment may improve the quality of life of pSS subjects.

O objetivo deste estudo foi avaliar os parâmetros clínicos periodontais: profundidade clínica de sondagem, nível clínico de inserção e sangramento a sondagem e os níveis de IL-17, M-CSF, GM-CSF, MCP-1, ICAM-1 IL-8, IL-10, IL-1?, TNF-?, IL-4 no fluido gengival de pacientes portadores de periodontite agressiva, comparando esses valores aos dados obtidos de sujeitos periodontalmente saudáveis, além de comparar os dados clínicos e imunológicos iniciais aos obtidos após um ano de tratamento nos pacientes com periodontite agressiva. Foram selecionados 37 pacientes portadores de periodontite agressiva e oito pacientes periodontalmente saudáveis, utilizados como grupo controle. Após a realização do exame clínico periodontal em todos os dentes, foi escolhido um sítio profundo de cada paciente com paeriodontite e um sítio raso dos pacientes saudáveis para coleta do fluido gengival. Todos os pacientes receberam tratamento periodontal que consistiu de orientação de higiene bucal, raspagens, remoção de fatores de retenção do biofilme bacteriano, polimento e uso de antibióticos. As amostras obtidas foram processadas e analisadas com um painel de 10 citocinas através de um ensaio multiplex. As análises estatísticas mostraram que não houve diferença estatisticamente significante entre os doentes e os saudáveis em relação a GM-CSF, IL-4, IL-8 e MCP-1. Quando foi feita a comparação longitudinal dos pacientes com periodontite agressiva, houve aumento após o tratamento para GM-CSF, ICAM-1, IL-4, IL-10, IL-17, MCP-1 e TNF-?. Com isso, pode-se concluir que mesmo após o tratamento periodontal com consultas trimestrais de manutenção e melhora dos parâmetros clínicos nos pacientes com PA que tinham um baseline mais inflamado, foi observado que alguns biomarcadores continuaram elevados, o que pode significar que esses pacientes continuam a apresentar atividade de doença ou que alguns desses biomarcadores não têm significância clínica para esses pacientes. / The aim of this study was to evaluate the periodontal clinical parameters: clinical probing depth, clinical attachment level and bleeding on probing and the IL-17, M-CSF, GM-CSF, MCP-1, ICAM-1, IL-8, IL-10, IL-1?, TNF-? and IL-4 levels in gingival crevicular fluid of aggressive periodontitis subjects, comparing these values with some data obtained from periodontal healthy patients, and also comparing clinic and immunologic initial data with the obtained after one year of treatment of aggressive periodontitis. The sample had 37 patients with aggressive periodontitis and 8 subjects clinically healthy, as control group. After the full periodontal examination, each patient with periodontitis had a deep site chosen, and a shallow site of the healthy ones, for collecting gingival fluid. All patients received periodontal treatment with oral hygiene, scaling, removal of retention factors, polishing and antibiotics. The obtained samples were processed and analyzed with a panel of 10 cytokines through a multiplex test. The statistical analyzes showed that there was no significant statistical difference between subjects with PA and healthy subjects with regard to GM-CSF, IL-4, IL-8 and MCP-1 levels.When longitudinal comparison of the subjects was made, it was noted some increase for GM-CSF, ICAM-1, IL-4, IL-10, IL-17, MCP-1 and TNF-?. Then, it can be concluded that, even after the periodontal treatment with trimestral maintenance and improvement on the clinical parameters, some biomarkers are still elevated, what can mean one of those possibilities: or the patients are still presenting some activity of the disease, or that some of these biomarkers don\'t have any clinical significance for this patients.

O ligamento periodontal e o tecido gengival são formados por tecido conjuntivo frouxo, sendo constituídos por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório, e com a produção de componentes da matriz extracelular fundamentais para o reparo, como por exemplo, o colágeno. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo: Avaliar e comparar a expressão e a produção de prócolágeno tipo I, IL6, MIP1 e SDF1 por fibroblastos humanos, cultivados de ligamento periodontal e de tecido gengival, estimulados por lipopolissacarídeo (LPS) de Porphyromonas gingivalis. Foram coletados ligamentos periodontais de terceiros molares não irrompidos e biópsias de gengiva de um mesmo indivíduo (n=3). Estes tecidos foram picotados e mantidos em meio de cultura adequado para fibroblastos, que foram utilizados na quarta passagem. Após adesão dos fibroblastos a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo 0,1 10 g/mL de LPS de P. gingivalis foi adicionado às placas em duplicata. O sobrenadante e as células foram coletados após 1, 6 e 24 horas e analisados por ELISA e PCR em tempo real, respectivamente. A análise estatística foi realizada por meio do programa GraphPad Prism, aplicandose o teste ANOVA a 1 critério com nível de significância de 5%. A expressão de prócolágeno tipo I mostrouse - ligeiramente diferente entre fibroblastos de ligamento periodontal e de gengiva. A produção de IL6, MIP1 e SDF1 foi significativamente maior em fibroblastos gengivais. A citocina IL6 foi produzida de maneira tempodependente com LPS de P gingivalis, principalmente por fibroblastos gengivais. Para MIP1, os fibroblastos gengivais mostraram maior produção com a menor concentração de estímulo (0,1g/ml). Para SDF1, foi detectada produção constitutiva que foi inibida com o aumento da concentração de LPS ao longo do tempo nestas mesmas células. Já para fibroblastos de ligamento periodontal, não foi observado um padrão homogêneo e linear, apesar de a produção basal de SDF1 também existir, porém em níveis bem mais discretos, como aquele observado para a produção de MIP1. A capacidade dos fibroblastos modificarem o padrão de produção dessas citocinas frente ao estímulo com LPS de P. gingivalis reforça a importância dessas células no contexto da resposta imune do indivíduo frente à doença periodontal. / The fibroblast is considered an important cell in periodontitis because it is the predominant cell type in the periodontal connective tissue. When challenged by different agents, fibroblasts respond through the release of substances, such as cytokines and chemokines that participate in an active way in the inflammatory process as well as the production of basic components of the extracellular matrix for repair, like collagen. The aim of this study was to: to evaluate and to compare the expression and production of type I procollagen, IL6, MIP1 and SDF1 by cultured human periodontal ligament and gingival fibroblasts challenged with lipopolyssacharide from Porphyromonas gingivalis. Human periodontal ligament and gingival fibroblasts were cultured from biopsies of the same donor and were used on the fourth passage. After confluence in 24well plates, the culture medium alone (control) or with 0,1 10 ug/mL of LPS from P. gingivalis were added and after 1, 6 and 24 hours, the supernatant and the cells were collected and analysed by ELISA and Real time PCR, respectively. Data were analysed by GraphPad Prism Program (1 way ANOVA test) and a significance level of 5% was adopted. Procollagen type I expression by Real Time PCR differ between periodontal ligament and gingival fibroblasts. In vitro experiments revealed that IL6, MIP 1 and SDF1 production were significantly greater in gingival fibroblasts when compared to periodontal ligament. In addition, IL6 was upregulated in a timedependent manner, mainly by the gingival fibroblasts. On one hand, MIP1 was stimulated with a low concentration (0,1ugml) of LPS by gingival fibroblasts. On the other hand, SDF1 was constitutively secreted by the same cells but its production was inhibited when challenged by a higher concentration of LPS from P gingivalis. In general, periodontal ligament fibroblasts did not show a pattern of production of these cytokines under the challenge with LPS, despite of the basal production of SDF1 in lower levels than gingival cells and the low production of MIP1 over time. The differential ability of the gingival and periodontal ligament fibroblasts to secrete these cytokines emphasizes their crucial role in the inflammatory microenvironment and in the host immune response to periodontal disease.