Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-06T20:02:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Graziella Silvestre Marques.pdf: 3975532 bytes, checksum: 1b756abaf186360d3a5ed7df54a0ebc3 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T17:39:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Graziella Silvestre Marques.pdf: 3975532 bytes, checksum: 1b756abaf186360d3a5ed7df54a0ebc3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T17:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Graziella Silvestre Marques.pdf: 3975532 bytes, checksum: 1b756abaf186360d3a5ed7df54a0ebc3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-09 / FACEPE / Nos últimos anos, os estudos sobre plantas medicinais e extratos vegetais ricos em polissacarídeos tem despertado grande interesse científico em virtude de suas promissoras ações farmacológicas, a exemplo de Thuja occidentalis Linn. Assim, o objetivo deste trabalho foi obter o extrato seco e a fração polissacarídica de T. occidentalis para avaliação de suas propriedades imunomoduladora, antioxidante e anti-inflamatória e realização de estudo de pré-formulação. O material vegetal foi obtido e caracterizado conforme Farmacopeia Brasileira (5 ed), seguida das etapas de otimização e validação do método de doseamento dos polissacarídeos; otimização de extração por planejamento fatorial 3²; obtenção e caracterização da solução extrativa, extrato seco e fração polissacarídica; avaliação da composição de monossacarídeos do extrato seco e fração; avaliação in vitro da atividade imunomoduladora pela determinação de Interleucinas (ILs) -6, -17A, -22 e -10, em esplenócitos de camundongos e de Interferon-gama (INF-γ) e ILs-2, -1β e -6 em Células Mononucleares do Sangue Periférico (PBMCs) humanas; avaliação in vitro da atividade antioxidante pelo sequestro dos radicais 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPHº), 2,2'-azino-bis-(ácido-3-etilbenztiazoline-6-sulfonico) (ABTSº⁺), hidroxila (OHº) e óxido nítrico (NO); e determinação de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS); avaliação in vivo da atividade anti-inflamatória pelos testes de edema de pata induzido por carragenina, dextrana, composto 48/78, histamina, serotonina e bradicinina, e de peritonite induzida por carragenina; e por fim estudo de compatibilidade por Análise Térmica do extrato seco com excipientes empregados no desenvolvimento de formas farmacêuticas sólidas (Aerosil®, Talco, Estearato de Magnésio, Starch 1500®, Tabletose® 70, Flowlac®, Compremix®, Polivinilpirrolidona K30 e Solutab®). O método de doseamento dos polissacarídeos foi otimizado com redução do tempo da análise de ~40 h para ~4 h, sendo utilizado nos demais ensaios. Inicialmente selecionou-se a proporção de droga vegetal: água (4 g: 30 mL) e melhores condições de temperatura (85-95°C) e tempo (4,0-5,0 h) de extração. Em seguida, os efeitos e interações da temperatura e tempo sobre o teor de polissacarídeos foram estudados pelo planejamento fatorial, sendo as condições ótimas para extração 95°C e 4 h. O extrato seco obtido mostrou-se como pó fino, higroscópico e com baixa capacidade de fluxo, demonstrando a necessidade da adição de excipientes que viabilizem sua utilização farmacêutica. A análise da composição dos monossacarídeos revelou a presença predominante de glicose (extrato) e manose (fração). Nos ensaios farmacológicos foi verificado que tanto o extrato seco como a fração aumentaram a expressão das ILs-1β e -6, enquanto as demais se mantiveram em nível basal, evidenciando sua ação imunomoduladora; além de ter sido demonstrado seu potencial antioxidante e anti-inflamatório em todos os modelos analisados, com atividade superior do extrato na maioria dos testes, demonstrando a importância do fitocomplexo e do emprego terapêutico dos extratos vegetais. Por fim, foi comprovada compatibilidade do extrato seco com praticamente todos os excipientes avaliados, exceto Estearato de Magnésio e Tabletose®70, sendo necessário estudos complementares para essa confirmação. O conjunto destes resultados demonstra o potencial farmacêutico do extrato seco de T. occidentalis padronizado em polissacarídeos, podendo ser utilizado como base no desenvolvimento de fitoterápicos e na realização de estudos farmacológicos mais avançados, sobretudo no que diz respeito à avaliação imunomoduladora. / In recent years, studies about medicinal plants and plant extracts rich in polysaccharides has awakened great scientific interest because of their promising pharmacological actions, like Thuja occidentalis Linn.The objective of this study was to obtain the dry extract and the polysaccharide fraction of T. occidentalis to evaluate your immunomodulatory, antioxidante, and anti-inflammatory activities and to perform the pre-formulation study. The plant material was obtained and characterized as recommended by Brazilian Pharmacopoeia (5 ed), followed by optimization and validation of the assay method of polysaccharides; extraction optimization by factorial design 3²; obtention and characterization of extractive solution, dry extract and polysaccharide fraction; evaluation of the monosaccharide composition of dry extract and fraction; in vitro evaluation of immunomodulatory activity by determination of the interleukins (ILs) -6, -17a, -22 and -10 in splenocytes from mice, and interferon-gamma (IFN-γ) and ILs-2, -1β e -6 in Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs) Human; in vitro evaluation of the antioxidant activity by sequestering of the radical 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl (DPPHº), 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiazoline acid-6-sulfonic acid) (ABTSº⁺), hydroxyl (OHº) and nitric oxide (NO); and determination of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS); evaluation of in vivo anti-inflammatory activity by the rat paw edema test induced by carrageenan, dextran, compound 48/78, histamine, serotonin and bradykinin, and carrageenan-induced peritonitis; and finally Thermal Analysis for compatibility study of dry extract with excipients used in the development of solid dosage forms (Aerosil®, Talc, Magnesium Stearate, Starch 1500®, Tabletose® 70, Flowlac®, Compremix®, Polivinilpirrolidona K30 e Solutab®). The polysaccharide assay method was optimized to reduce of the analysis time from ~ 40 h to ~ 4 h; being used in other tests. Initially was selected the proportion of plant drug: water (4 g; 30 ml) and the best temperature conditions (85-95°C) and time extraction (4-5 h). Then the effects and interactions of temperature and time on polysaccharide content were studied by factorial design, with the best conditions for the extraction 95°C and 4 h. The dry extract obtained showed to be fine, hygroscopic and low flowability powder, demonstrating the need for the addition of excipients to allow your pharmaceutical use. The monosaccharide composition analysis of the extract and fraction showed predominant presence, respectively, of glucose and mannose. In pharmacological testing was found that both, dry extract and the fraction, increased the expression of ILs-1β and -6, while the other remained at baseline, showing their immunomodulatory action; besides it has been shown your potential antioxidant and anti-inflammatory in all models tested, with higher activity to the extract in most tests, showing the importance of phytocomplex and the therapeutic use of plant extracts. Finally, it was demonstrated that the dry extract is compatible with practically all evaluated excipients, except magnesium stearate and Tabletose®70, requiring further studies for confirmation. This set of results demonstrates the pharmaceutical potential of dry extract of T. occidentalis standardized in polysaccharides, which can be used as a basis in the development of phytotherapeutic and performing more advanced pharmacological studies, particularly regarding the immunomodulatory evaluation.

Orientador: Roberto H. Moretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T11:09:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Koblitz_MariaGabrielaBello_M.pdf: 3823728 bytes, checksum: a1622fca3e4007b0e73f7e18050a31a9 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Este trabalho teve por objetivo estudar o uso de coagulação-floculação-filtração, no tratamento de xarope de sacarose, para evitar a formação de flocos em aguardentes de cana adoçadas com açúcar cristal superior. Para tanto foram testados diferentes tratamentos usando policloreto de alumínio, polieletrólitos negativamente carregados a diferentes valores de pH de acordo com ensaios estabelecidos pelo planejamento experimental de superfície de resposta. Esperava-se também determinar um método rápido para avaliação da eficiência dos tratamentos. Com uso destes reagentes, de acordo com a tecnologia estabelecida no trabalho, foi possível prolongar por até 48 horas a estabilidade em álcool a 85% dos xaropes produzidos com os açúcares utilizados. No entanto, não foi possível estabelecer relações diretas entre esta estabilidade e os métodos utilizados para estimá-la / Abstract: The goal of this work was to study the use of coagulation-flocculation-filtration for the treatment of sucrose syrups in order to avoid haze formation in sugarcane spirits sweetened by crystal superior type sugar. With this objective different treatments using aluminium polychloride, negatively charged polyelectrolytes, by different pH values were tested, using the assays determined by the experimental plan of the response surface methodology. We also hoped to determine a rapid method to evaluate the treatment efficiency. Using these reagents and according to the technology established in this work, it was possible to increase the stability of the syrups produced in 85% alcohol with the sugars used by up to 48 hours. However, it was not possible to establish a direct relationship between this stability and the methods used for its estimation / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Telma Teixeira Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T08:22:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_AnaPauladosSantos_M.pdf: 2171899 bytes, checksum: 7cac906a30aa8e097dcc2c5be3d20c69 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Enzimas quitinolíticas, como as quitinases, presentes nos reinos animal, vegetal e fúngico, constituem um importante grupo de enzimas associadas com o metabolismo e degradação de substratos insolúveis como a quitina. Neste trabalho foi realizado um estudo para a verificação da influência da fonte de carbono livre (glicose e lactose) e das condições de cultivo (agitação e pH) na produção de quitinase da linhagem de Trichoderma sp. T 6. As fermentações foram realizadas a 27°C, retirando-se amostras a cada 12 horas ao longo de 72 horas de fermentação para determinação da atividade quitinolítica, proteolítica, açúcares redutores e pH. Foi avaliado o efeito das três variáveis sobre a produção de quitinase por Trichoderma sp. T6. As melhores condições encontradas para o meio contendo glicose, foram agitação de 200 rprn, pH 6,0,0,3% de glicose atingindo uma média de produção de enzima de 1,92 U/rnL. Para os meios de cultura contendo lactose, a máxima produção de quitinase se deu nos ensaios 5,6 e 7 (0,5% lactose) com 0,76,0,75 e 0,85 U/rnL, respectivamente. Foi observada formação de proteases desde o início da fermentação nos ensaios contendo lactose. A hidrólise enzimática com o caldo bruto do ensaio de máxima produção quitinolítica foi acompanhada por 8 horas produzindo dois oligossacarídeos predominantes, o mono e o di-acetilquitobiose / Abstract: Chitynolytics enzymes, as chitinases, constitute an important group of enzymes related with metabolism and degradation of insoluble substract as chitin present in animal, plants and fungi. In this work studies of carbon source (glucose and lactose) and cultivation conditions (agitation and pH) to produce chitinase by Trichoderma sp. T6 were carried out. The effect of carbon source, agitation and pH upon chitinase production by Trichockrma sp. T6 was investigated. Fermentations were performed at 27°C, and samples were withdraw every 12 hours during 72 hours of fermentation in order to assay both chitinolytic and proteolytic activity, as well as reducing sugar and pH. The optimal conditions for chitinase production found in glucose medium were 200 rpm (agitation), 6,0 (pH) and 0,3% (glucose) achieving an average value of 1,92 V/roL. Liquid culture medium with lactose showed maximum production of chitinase at 5th, 6th and 7th experiments (0,5% lactose) with 0,76, 0,75 and 0,85 V/roL, respectively. lt was observed that proteases were formed at beginning of fermentation in the experiments using lactose. Chitin hydrolysis by the raw broth of maximum chitinolytic activity was followed for 8 hours and the two predominant oligosaccharides, were mono and di-acetylchitobiose, respectively / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Mestre em Engenharia Química

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:15:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341245.pdf: 2747887 bytes, checksum: 6fe987257f6914eabbfab94a92be7d12 (MD5) Previous issue date: 2016 / Os produtos naturais são uma grande fonte de moléculas bioativas, entre elas destacam-se os polissacarídeos que apresentam efeitos imunomoduladores, anti-inflamatórios e analgésicos. O polissacarídeo glucomanana (GM) obtido do líquen Heterodermia obscurata já demonstrou ter efeito antinociceptivo (analgésico), indicando ser uma molécula interessante. Assim, o presente trabalho pretende avançar na caraterização do efeito antinociceptivo da GM, bem como na compreensão do seu mecanismo de ação neurobiológico e segurança em camundongos. Neste trabalho, foi confirmado que a administração sistêmica da GM (100 mg/kg, ip.) é capaz de reduzir a nocicepção espontânea de origem inflamatória induzida por formalina ou PGE2. Ademais, a redução da nocicepção induzida por PGE2 causada pela GM (92+15%) foi semelhante à produzida pela indometacina (93+12%), inibidora não seletiva da COX. Além disso, a administração periférica (local, intraplantar) da GM (10 µg/pata) também reduziu a nocicepção causada pela PGE2 de maneira similar à indometacina e ao KT5720 (inibidor não seletivo da PKA). A GM (100 mg/kg) também reduziu significativamente a hiperalgesia térmica ao calor, mas não a alodinia mecânica causada pela injeção intraplantar de PGE2 e CFA (Adjuvante Completo de Freund), bem como aquela causada pela incisão plantar (modelo de dor pós-operatória). Por outro lado, a GM (10 µg/pata) promoveu redução da nocicepção espontânea e hiperalgesia térmica ao calor induzida pela forscolina (FSK, ativadora da adenililciclase). Quando administrado perifericamente (intraplantar), a GM (10 µg/pata) também reduziu a nocicepção espontânea induzida por FSK, assim como o KT5720 (10 nmol/pata). Além disso, a GM (100 mg/kg) foi capaz de reduzir o aumento da fosforilação da PKA (p-PKA) induzida por FSK, na pata de camundongos. A nocicepção espontânea induzida pelo ativador de PKC, o 13- acetato12-miristato de forbol (PMA), foi completamente inibida pela GM (100 mg/kg). Quando avaliado frente à ativação de termo-receptores, a GM (30 e 100 mg/kg, ip.) reduziu a nocicepção espontânea induzida pela capsacina (agonista TRPV1), cinamaldeído (agonista TRPA1), mentol (agonista TRPM8) e pela salina acidificada (agonista ASICs). No entanto, a administração periférica (local, intraplantar) da GM (30 µg/pata) reduziu (70±4%) somente a nocicepção causada pelo cinamaldeído. A nocicepção observada no modelo de PGE2 foi completamente dependente das fibras aferentes TRPV1+. Ainda, a GM, na dose que promove importante efeito analgésico, não causou efeitos sedativos e tampouco alterou o peso corpóreo dos animais. Contudo, a administração prolongada (11 dias) promoveu aumento do peso do baço, mas não alterou o peso do coração, pulmões, fígado e rins. Ademais, a GM não promoveu alterações hematológicas e bioquímicas importantes. Em conjunto, os dados deste trabalho demonstram que a GM é capaz de reduzir a nocicepção (dor) aguda e persistente, principalmente a de origem inflamatória, por um mecanismo dependente da inibição da via de sinalização ativada por PGE2 (AMPc/PKA) e dos canais TRPs, principalmente o TRPV1 e o TRPA1. Assim, a GM é uma molécula com potencialidade para o desenvolvimento de fármacos de interesse terapêutico no controle da dor.<br> / Abstract : Natural products are a wide source of bioactive molecules, which include the polysaccharides with analgesic, anti-inflammatory and immunomodulatory properties. It was already demonstrated that the polysaccharide Glucomannan (GM) obtained from the lichen Heterodermia obscurata has antinociceptive (analgesic) effect, making it an interesting molecule for further studies. Thus, the present work intends to advance in the characterization of GM antinociceptive effect, as well as in the comprehension of its neurobiological mechanism of action in mice. In this study, it was demonstrated that systemic administration of GM (100 mg/kg, ip.) is able to reduce spontaneous nociception of inflammatory origin induced by formalin or PGE2. Besides, the reduction of PGE2-induced nociception caused by GM (93±15%) was similar to that produced by indometacin (93±12%), a non-selective COX inhibitor. Peripheral (intraplantar) administration of GM (10 µg/paw) also reduced PGE2-induced nociception similarly to indometacin and KT5720 (non-selective PKA inhibitor). GM (100 mg/kg, ip.) also reduced significantly the thermal hyperalgesia to heat, but not the mechanical allodynia induced by intraplantar injection of PGE2 and CFA (Complete Freund s Adjuvant), as well as that caused by plantar incision (post operatory model of pain). On the other hand, GM (10 µg/paw) reduced both spontaneous nociception and thermal hyperalgesia to heat induced by forskolin (FSK, adenylyl cyclase activator). When peripherically administrated (intraplantar), GM (10 µg/paw) also reduced spontaneous nociception induced by FSK, as well as KT5720 (10 nmol/paw). Moreover, GM (100 mg/kg, ip) was able to reduce the increase on PKA phosphorylation (p-PKA) induced by FSK in mice paw. Spontaneous nociception induced by PKC activator phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) was completely inhibited by GM (100 mg/kg, ip). When evaluated against thermal receptor activators, intraperitoneal administration of GM (30 and 100 mg/kg) reduced the spontaneous nociception induced by capsaicin (TRPV1 agonist), cinnamaldehyde (TRPA1 agonist), menthol (TRPM8 agonist) and acidified saline (ASICs agonist). However, peripheral (intraplantar) administration of GM (30 µg/paw) reduced only the cinnamaldehyde-induced nociception (70±4%). The nociception observed in PGE2 model was completely dependent on TRPV1+ afferent fibers. Furthermore, at the doses that promote antinociceptive effect, GM caused no sedative effect and did not alter mice body weight. However, daily administration (11 days) of GM promoted an increase in spleen weight, with no effect on the weight of heart, lungs, liver and kidneys. Also, GM did not promote any significant hematologic or biochemical alteration. Together, the data presented in this study demonstrate that GM is able to reduce acute and persistent nociception (pain), mainly of inflammatory origin, by a mechanism that is dependent on inhibition of signaling pathways activated by PGE2 (cAMP/PKA) and TRP channels, mainly TRPV1 and TRPA1. Thus, GM is a molecule with great potential for further development of drugs with therapeutic interest for pain control.

Orientador: Francisco Maugeri Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T02:17:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Queiroz_JoseHumbertode_M.pdf: 4196465 bytes, checksum: 529b826d83699307ea049ccd311aea8e (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: A produção de dextrana-sacarase, pelo Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512(F), foi estudada para fermentações em frascos agitados e mini-fermentadores em batelada e batelada alimentada. Foram testados meios de cultura utilizando melaço, água de maceração de milho, extrato de levedura e sacarose. Na fermentação em frascos agitados, verificou-se uma baixa produção de enzima, não havendo diferenças significativas para os meios com melaço ou sacarose pura. Em mini-fermentadores o controle de pH promoveu um aumento de aproximadamente 60% para o meio padrão e 40% para os meios com melaço. Com fermentações em batelada alimentada produção de dextrana-sacarase foi aumentada de 3-4 vezes. Ds melhores resultados foram conseguidos em meio padrão, chegando no final de 10 horas com 35 UDS/ ml. Nos meios com melaço e água de maceração de milho (AMM) os melhores resultados foram conseguidos com alimentação contínua de melaço. Nessas condições a atividade máxima ficou em torno de 80 UDS/ ml / Abstract: The production of dextransucrase by Leuconostoc mesenteroides in batch and feed batch fermentation was studied. A culture medium containing molasses, corn steep water, yeast-extract and sucrose was tested. In the batch fermentation system the enzyme production was low, and was not significantly affected by the culturel medium. The pH control in the mini-ferm increased the dextransucrase production by c. 60% for the standard medium and 40% for the molasses medium. With feed batch fermentation, the enzyme production increased 3-4 fold. The best results were obtained when the standard medium was used and the maximum enzyme activity was 95 DSU/ml after 10 hs. Of fermentation. When the medium with molasses and corn steep liquor medium was used, the best result was c. 80 DSU/ml with continous feeding with molasses / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador : Yoko Bomura Rosato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T13:08:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Destefano_SuzeteAparecidaLanza_D.pdf: 5050042 bytes, checksum: 16a5906c40d7f06ef7de53d88e073e1a (MD5) Previous issue date: 1994 / Doutorado / Doutor em Genetica

Com o objetivo de demonstrar a existência de substâncias extracelulares em urediniosporos de Hemileia vastatrix , capazes de desencadear a formação de fitoalexinas, foram utilizados bioensaios com cotilédones de soja. Para tanto foi inicialmente selecionada, através de bioensaios, a variedade de soja IAC-8, entre as variedades IAC-7, IAC-8, IAC-11, IAC-12 e Cristalina, por ser a mais adequada quanto à capacidade de sintetizar a fitoalexina gliceolina e quanto à uniformidade de resposta em presença de um elicitor ativo nestes tecidos, proveniente de extrato comercial de células autolisadas da levedura Saccharomyces ceresiviae Meyen. Foi possível verificar que substâncias presentes no filtrado de suspensão aquosa de urediniosporos autoclavados de H. Vastatrix são capazes de desencadear a síntese da fitoalexina gliceolina em cotilédones de soja, variedade IAC-8. Objetivando o isolamento da substância elicitora extracelular, mais ativa, proveniente de urediniosporos de H. vastatrix, o filtrado aquoso foi submetido à purificação através de precipitação etanólica fracionada, seguida de cromatografias em colunas de Concanavalina-A Sepharose 4B, DEAE-celulose e Bio-Gel P-60, sendo estas etapas intercaladas por diálise. Pôde-se verificar que a atividade elicitora relativa aumentou gradativamente durante o processo de purificação, sendo que a fração elicitora mais pura apresentou uma atividade relativa 16,7 vezes maior do que aquela detecta- da para o filtrado aquoso bruto. O elicitor extracelular mostrou-se ativo mesmo quando concentrações equivalentes a 0,92 &#181;g de carboidratos foram aplicadas por cotilédone. A atividade elicitora aumentou quando foram utilizadas concentrações crescentes do elicitor, atingindo um máximo à concentrações equivalentes a 10 &#181;g de carboidratos por cotilédone. Foi possível observar que o elicitor, extracelular de H. vastatrix, solúvel em água e termoestável, e precipitado com etanol a 80% (v/v), não apresenta afinidade pela lectina Concanavalina-A e nem tampouco pelo trocador aniônico dietilaminoetil-celulose e possui um peso molecular menor que 60.000 e maior que 6.000 daltons. Visando elucidar a natureza química do elicitor extracelular de H. vastatrix, frações ativas foram submetidas a testes químicos para quantificação de carboidratos e proteínas, análise por cromatografia em fase gasosa e a tratamentos com metaperiodato de sódio e com as enzimas pronase, &#945;-manosidase, &#946;-galactosidase e &#946;-glucosidase. O elicitor extracelular é oxidado pelo metaperiodato de sódio, o que acarreta a perda de sua atividade elicitora (94,63%), sendo esta parcialmente recuperada (56,20%) por redução com borohidreto de sódio e posterior hidrólise ácida fraca. Entretanto, a atividade elicitora não é alterada pelos tratamentos com as referidas enzimas. Os resultados ,obtidos evidenciam que o elicitor extracelular de H. vastatrix possui natureza polissacarídica, apresentando como principal componente a manose (88,77%), seguida pela glucose (6,67%) e a galactose (4,56%), sendo que os monossacarídeos componentes das moléculas dos polissacarídeos estão unidos entre si por ligações do tipo &#946;.O polissacarídeo extracelular isolado de urediniosporos de H. vastatrix possui uma atividade biológica inespecífica, pois é capaz de desencadear a formação de fitoalexinas em uma planta não-hospedeira a H. vastatrix como a soja. / In order to demonstrate the presence of extracellular substances from uredionospores of Hemileia vastatrix, able to elicit the accumulation of phytoalexins, bioassays on soybean cotyledons were employed. Firstof all, among the soybean cultivars IAC-7, IAC-8, IAC-11, IAC-12 and Cristalina, the IAC-8 cultivar was selected through the cotyledon bioassays for further experiments, since it exhibited a more suitable and uniform response to an active glyceollin elicitor, isolated from a commercially available extract of the yeast Saccharomyces cerevisiae Meyen. It was possible to verify that substances present in the filtrate of water-washes from autoclaved urediniospores of H. vastatrix were able to stimulate the synthesis of the phytoalexin glyceollin in IAC-8 soybean cotyledons. In order to isolate the extracellular elicitor from H. vastatrix, filtrates of water-washes of the autoclaved urediniospores, were purified through fractionated ethanolic precipitation, followed by column chromatography on Concanavalin-A Sepharose 4B, DEAE-cellulose and Bio-Gel P-60, intercalated with dialysis. It was possible to verify that the relative elicitor activity gradually increased throughout the purification steps and that the purest elicitor fraction showed a relative elicitor activity 16.7 times greater than that exhibited by the crude filtrate. The purified extracellular elicitor was active even when concentration equivalent to 0.92 &#956;g of carbohydrate were applied per cotyledon. It was observed that the water-soluble extracellular elicitor from H. vastatrix was heat-stable, precipitated with 80% ethanol (v/v), had no affinity neither for the Concanavalin-A lectin nor for the anion exchanger diethyl aminoethyl-cellulose. The elicitor showed a molecular weight lower than 60,000 and greater than 6,000 daltons. In order to elucidate the chemical nature of the extracellular elícitor from H. vastatrix, active fractions were submitted to chemical tests, analysis through gas-liquid chromatography and treatments with sodium metaperiodate and a150 with pronase, &#945;-mannosidase, &#946;-galactosidase and &#946;-glucosidase. The extracellular elicitor was sensitive to the sodium metaperiodate, that caused the elimination of its elicitor activity (94.63%). The biological activity was partially regained (56.20%) when the periodate-degraded polymers were reduced with sodium borohydride, followed by a mild acid hydrolysis. However, the elicitor activity was not affected by the mentioned enzyme treatments. Yet, the results showed that the extracellular elicitor from H. vastatrix was a &#946;-linked polysaccharide that presented mannose the major component (88.77%), followed by glucose (6.67%) and galactose (4.56%). The extracellular polysaccharide isolated from urediniospores of H. vastatrix showed an unspecific biological activity, due to its ability to elicit phyto alexin accumulation on a non-host plant to H. vastatric as the soybean.

Made available in DSpace on 2019-03-30T00:18:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2017-07-14 / Seaweed polysaccharides are increasingly important in the biochemical and medical fields. Previous work has already demonstrated the antinociceptive effect of polysaccharides of the red marine macroalga Hypnea pseudomusciformis. This study aimed to evaluate the antinociceptive effect of sulfated polysaccharides from seaweed Hypnea pseudomusciformis (PLS) on experimental models of orofacial pain. The algae were collected, identified and deposited in the Herbarium of the Institute of Marine Sciences - Labomar. The algae PLS were extracted and submitted to chemical characterization by FTIR and RNM H1 and C13. Toxicity tests were performed against A. salina and Vero cells, as well as preliminary antioxidant activity test. Afterwards, formalin-induced acute orofacial nociception, capsaicin, cinnamaldehyde, acid saline or glutamate (cutaneous models) tests were performed. Using the glutamate model, the antinociceptive mechanisms of neuromodulation were investigated by treating the animals with the antagonists red rutinium (TRPV1), glibenclamide (K + ATP), naloxone (opioid), L-NAME (nitric oxide) or blue Of methylene (guanylate cyclase). The test of hypertonic saline induced acute corneal nociception was performed, as well as the tests of temporomandibular and craniofacial nociception induced by formalin and mustard oil, respectively. The motor activity of the PLS treated animals was evaluated with the open field test. The spectrometric data confirmed the structural determination of PLS as being in a higher proportion of ¿-carrageenan, in the infrared spectrum typical absorption bands of PLS were observed with peaks of 811, 875 and 900 cm-1. PLS did not demonstrate cytotoxic potential and had antioxidant activity reducing chelating ions. Pretreatment of animals with PLS significantly reduced nociceptive behavior associated with acute pain. Antinociception was effectively reduced but not inhibited by ruthenium red and ketamine. L-NAME and glibenclamide increased the effect of PLS. The antinociception of PLS was resistant to methylene blue, naloxone and heating - included in the methodology. Our results confirm the potential pharmacological relevance of PLS as an inhibitor of orofacial nociception in acute pain, probably mediated by the glutamatergic and nitrergic systems, and by TRPs and K + -ATP channels. Keywords: Hypnea pseudomusciformis; Sulphated polysaccharides; Orofacial Antinociception. / Os polissacarídeos de algas marinhas são cada vez mais importantes nas áreas bioquímica e médica. Trabalhos anteriores já demonstraram o efeito antinociceptivo de polissacarídeos da macroalga marinha vermelha Hypnea pseudomusciformis. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito antinociceptivo dos polissacarídeos sulfatados da alga marinha Hypnea pseudomusciformis (PLS) em modelos experimentais de dor orofacial. A alga foi coletada, identificada e depositada no Herbário do Instituto de Ciências do Mar - Labomar. Os PLS da alga foram extraídos e submetidos à caracterização química por FTIR e RNM H1 e C13. Foram realizados testes de toxicidade frente a A. salina e células Vero, bem como teste de atividade antioxidante preliminar. Em seguida, foram realizados os testes de nocicepção orofacial aguda induzida por formalina, capsaicina, cinamaldeído, salina ácida ou glutamato (modelos cutâneos). Empregando-se o modelo do glutamato, foram investigados os mecanismos antinociceptivos de neuromodulação tratando-se os animais com os antagonistas vermelho rutêndio (TRPV1), glibenclamida (K+ATP), naloxona (opióide), L-NAME (óxido nítrico) ou azul de metileno (guanilato ciclase). Foi realizado o teste de nociceção corneal aguda induzida por salina hipertônica, bem como os testes de nocicepção temporomandibular e craniofacial induzida por formalina e óleo de mostarda, respectivamente. A atividade motora dos animais tratados com PLS foi avaliada com o teste em campo aberto. Os dados espectrométricos confirmaram determinação estrutural dos PLS como sendo em maior proporção de ¿-carragenana, no espectro de infravermelho foi observado bandas de absorção típica do PLS com picos de 811, 875 e 900 cm-1. PLS não demonstrou potencial citotóxico e apresentou atividade antioxidante redutora de íons quelantes. O pré-tratamento dos animais com PLS reduziu significativamente o comportamento nociceptivo associado à dor aguda. A antinocicepção foi efetivamente reduzida, mas não inibida, pelo vermelho de rutênio e pela cetamina. L-NAME e glibenclamida aumentaram o efeito do PLS. A antinocicepção do PLS foi resistente ao azul de metileno, à naloxona e ao aquecimento ¿ incluir na metodologia. Nossos resultados confirmam a potencial relevância farmacológica dos PLS como inibidor da nocicepção orofacial em dor aguda, provavelmente mediada pelos sistemas glutamatérgico e nitrérgico, e por canais TRPs e K+-ATP. Palavras-chave: Hypnea pseudomusciformis; Polissacarídeos sulfatados; Antinocicepção Orofacial.

RODRIGUES, José Ariévilo Gurgel. Atividade Anticoagulante de Galactanas Sulfatadas de Algas Marinhas Vermelhas do Gênero Halymenia C. Agardh (Gigartinales, Rhodophyta) e seu Efeito Imunoestimulante no Camarão Marinho Litopenaeus vannamei (Boone, 1931). 2006. 77 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Engenharia de Pesca, Fortaleza-CE, 2006 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-15T15:54:46Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_jagrodrigues.pdf: 405850 bytes, checksum: 5c6779f7e9650670b7c3c241f2a16fd2 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-15T15:55:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_jagrodrigues.pdf: 405850 bytes, checksum: 5c6779f7e9650670b7c3c241f2a16fd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-15T15:55:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_jagrodrigues.pdf: 405850 bytes, checksum: 5c6779f7e9650670b7c3c241f2a16fd2 (MD5) Previous issue date: 2006 / Many substances have been shown to possess anticoagulant and immunostimulant activities, including sulfated polysaccharides (SP) of marine algae. They also exhibit antithrombotic and antiviral activities. It is important to describe new substances capable of preventing known adverse effects of heparin such as hemorrhages and thrombocytopenia. Moreover, the use of immunostimulants can also lessen cultivated aquatic organism stress. The aim of this work was to evaluate both the anticoagulant activity of sulfated galactans present in two species of red marine seaweed belonging to genus Halymenia and their immunostimulant effects on white Pacific shrimp Litopenaeus vannamei. SP were extracted from marine seaweed collected in Praia de Fleixeiras-CE. Following the extraction, crude extracts were fractioned in DEAEcellulose column and fractions were eluted with different concentrations of NaCl solution. Fraction purification grade was evaluated by electrophoresis. Anticoagulant activity was analyzed by aPTT’s test using rabbit plasma and the clotting time was measured in a coagulometer. Three different amount of SP (0.5 and 1.5 μg.L-1 and 1.0 mg.L-1) were used twice a day (9 and 17h) to evaluate immunostimulant activity on L. vannamei through immersion baths, after changing tank water and before feeding the animals. The control group was maintained without SP addition. The experiment lasted 20 days. Shrimps were treated by immersion in SP for the first 15 days, and in the last 5 days they were submitted to stress when no water was renewed. There was no significant difference on mortality among the treatments. After the stress, the mortality of shrimps treated with 1.0 mg.L-1 was lower than the others (control group, 0.5 and 1.5 μg.L-1). Anticoagulant activity was detected in fractions obtained from H. pseudofloresia, the highest being in that eluted with 1.25 M NaCl from the first extraction procedure. Thus, it was possible to obtain SP from red marine seaweed H. pseudofloresia which showed higher anticoagulant activity than heparin and was capable of lowering mortality of L. vannamei under stress conditions. / Muitos compostos têm sido descritos como anticoagulantese imunoestimulantes, dentre essas os polissacarídeos sulfatados (PS) de algas marinhas que também são conhecidos por apresentar outras atividades biológicas, tais como antitrombótica e antiviral. A descoberta de novas drogas anticoagulantes é importante para prevenir os efeitos adversos do uso da heparina, como hemorragias e trombocitopenia. Além disso, o uso de imunoestimulantes também pode reduzir o impacto do estresse no cultivo intensivo de organismos aquáticos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade anticoagulante de galactanas sulfatadas de duas espécies de algas marinhas vermelhas do gênero Halymenia e o seu efeito imunoestimulante no camarão branco Litopenaeus vannamei. Os PS foram extraídos, através de digestão enzimática, a partir de algas marinhas coletadas na Praia de Fleixeiras/CE. Em seguida, os extratos brutos foram fracionados em coluna de DEAE-celulose, sendo as frações eluídas com soluções de diferentes concentrações de NaCl e o grau de purificação analisado por eletroforese. A atividade anticoagulante das frações foi avaliada pelo teste do aPTT, utilizando plasma de coelho citratado, sendo o tempo de coagulação registrado em um coagulômetro. Para avaliar efeito imunoestimulante, três doses diferentes de PS foram administradas, através de banhos de imersão, no camarão L. vannamei. Os tratamentos, com três repetições cada, foram 0,5 μg.L-1; 1,5 μg.L-1 e 1,0 mg.L-1, e um controle, sem polissacarídeos. O experimento teve duração de 20 dias, dos quais 15 dias foram para a aplicação das soluções de PS e 5 dias de indução de estresse, através da ausência de renovação de água do cultivo. A administração das doses foi realizada, duas vezes por dia (09:00 e 17:00 h), após as trocas de água e antes da alimentação doa animais. Depois de 15 dias de imersão, não houve diferenças significativas entre as taxas de mortalidade dos tratamentos. Entretanto, depois do período do estresse, o tratamento com 1,0 mg.L-1 apresentou uma mortalidade significativamente menor do que as observadas nos tratamentos s/PS e 0,5 μg.L-1. Com relação à atividadeanticoagulante, as frações obtidas da espécie H. pseudofloresia apresentaram uma maior atividade, sendo a mais ativa aquela eluída com 1,25 Mde NaCl da coluna de troca iônica, obtida da 1ª extração. Assim, com a realização deste trabalho, foi possível obter PS da alga marinha vermelha H. pseudofloresia com atividade anticoagulante superior à heparina e capaz de reduzir a mortalidade do camarão L. vannamei submetidos à condições de estresse.

SILVA, Luana Maria Castelo Melo. Efeito da lectina da alga marinha vermelha Pterocladiella capillace em feridas limpas induzidas em ratos. 2012. 135 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T16:16:36Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_lmcmsilva.pdf: 10225620 bytes, checksum: 67dadb7130fbee0f6137beb9f3cec43e (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T18:10:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_lmcmsilva.pdf: 10225620 bytes, checksum: 67dadb7130fbee0f6137beb9f3cec43e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T18:10:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_lmcmsilva.pdf: 10225620 bytes, checksum: 67dadb7130fbee0f6137beb9f3cec43e (MD5) Previous issue date: 2012 / Based on the need for new formulations that are more efficient and on the properties provided by molecules derived from seaweed, it is believed that these can be effective in healing process. The lectin from the red seaweed Pterocladiella capillacea (PcL) and the polysaccharides of red algae Solieria filiformis (SfP) were initially analyzed in toxicity testing. PcL was applied to the paw edema test followed by measurement of myeloperoxidase (MPO). We evaluated the effect of the seaweed Pterocladiella capillacea lectin (PcL) and algal polysaccharides Solieria filiformis (SfP) in healing wounds in rats induced. Both molecules were submitted to microbiological tests and assayed for the effect on wound healing in wounds clean induced on the back of rats. SfP was used as a possible vehicle for the administration of PcL and compared to Carbopol 940 (C). The gels (0.9%) were analyzed rheological and then applied to the lesions during a treatment period of 10 days, using kollagenase ® as control. The healing process was evaluated on the size of the wounds, levels of MPO and histological analysis. The molecule SfP and PcL is not toxic for the parameters of body weight, organ and biochemical measurements. However, the histological analysis showed minor changes in liver and kidney. PcL (1, 3 and 9 mg / kg, i.v) reduced the edema induced by carrageenan and its inhibitor when administered with mucin was not possible to check the reduction of edema which was confirmed by measurement of MPO. The two molecules were used in microbiological assays and not inhibit growth of any microorganism tested and unable to use SfP as carbon source. The rheological analysis showed that the SfP used in the formulation of the gels (PcL+SfP and SfP) had the characteristic of a pseudoplastic. Macroscopic analysis of wounds showed a reduction in lesion area in the animals treated with PCL, PCL+SfP, PCL+C (53.5 and 60% respectively) on the sixth day of administration. In histological analysis, there was no severe inflammatory infiltrate in the tissues obtained until 4th day of administration of the gels (PcL and PcL+SfP, PcL+C) and Kollagenase® (positive control). On day 6, the untreated animals and those treated only with SfP showed inflammatory infiltrate. The measurement of MPO showed a reduction in the inflammatory process in the samples containing PcL, whose results corroborate the histological analysis. In conclusion, PcL aid in wound repair, suggesting its use as a possible future tool for the treatment of lesions. The biological and pharmacological role of lectins and polysaccharides of seaweed is part of a study area little explored, where a lot of knowledge should be invested since these biomolecules can be promising for the pharmaceutical industry. / Com base na necessidade de obter novas formulações mais eficientes e diante das propriedades apresentadas pelas moléculas oriundas de algas marinhas, acredita-se que estas possam ser eficazes no processo de cicatrização. A lectina da alga marinha vermelha Pterocladiella capillacea (PcL) e os polissacarídeos da alga vermelha Solieria filiformis (SfP) inicialmente foram analisados em ensaio de toxicidade. PcL foi aplicada no ensaio do edema de pata seguido da dosagem de mieloperoxidase (MPO). Avaliou-se o efeito da lectina da alga Pterocladiella capillacea (PcL) e os polissacarídeos das algas Solieria filiformis (SfP) na cicatrização de feridas induzidas em ratos. Ambas as moléculas foram submetidas a ensaios microbiológicos e analisadas quanto ao efeito no processo de cicatrização em feridas limpas induzidas no dorso de ratos. SfP foi utilizado como um possível veículo para a administração de PcL e comparado ao Carbopol 940 (C). Os géis (0,9%) foram submetidos a análise reológica e então aplicados nas lesões durante um período de tratamento de 10 (dez) dias, utilizando kollagenase® como controle. O processo de cicatrização foi avaliado quanto ao tamanho das feridas, dosagem de MPO e análise histológica. PcL e SfP não demonstraram toxicidade quanto aos parâmetros de peso corpóreo, órgãos e dosagens bioquímicas. Entretanto a análise histológica mostrou pequenas alterações no fígado e rim. PcL (1, 3 e 9 mg/kg, i.v.) reduziu o edema induzido por carragenana e quando administrada com seu inibidor mucina não foi possível verificar a redução do edema o qual foi confirmado pela dosagem de MPO. As duas moléculas foram aplicadas em ensaios microbiológicos e não inibiram o crescimento de nenhum micro-organismo testado, os quais também não foram capazes de utilizar SfP como fonte de carbono. A análise reológica mostrou que os SfP utilizados na formulação dos géis (PcL+SfP e SfP) apresentaram a característica de um pseudoplástico. A análise macroscópica das feridas mostrou uma redução da área da lesão nos animais tratados com PcL+SfP e PcL+C (53,5 e 60%, respectivamente) no sexto dia de administração. Na análise histológica, não foi observado infiltrado inflamatório acentuado nos tecidos obtidos até o 4º dia da administração dos géis (PcL+SfP e PcL+C) e Kollagenase® (controle positivo). No 6º dia, os animais não tratados e os tratados apenas com SfP mostraram infiltrado inflamatório. A dosagem de MPO demonstrou redução no processo inflamatório nas amostras contendo PcL, cujo resultado corrobora com a análise histológica. Em conclusão, PcL auxiliou no reparo de feridas, sugerindo seu uso futuro como uma possível ferramenta para o tratamento de lesões. O papel biológico e farmacológico das lectinas e polissacarídeos de algas marinhas faz parte de uma área de estudos ainda pouco explorada, onde muito conhecimento deverá ser investido visto que estas biomoléculas podem ser promissoras para a indústria farmacêutica.