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Utilização de preparações antigênicas de cisticercos de Taenia crassiceps para pesquisa de anticorpos na neurocisticercose (Taenia solium) / The use of antigenic preparation of Taenia crassiceps cysticercus detect antibodies in neurocysticercosis (Taenia solium)

Alessandra Xavier Pardini 02 August 2000 (has links)
O complexo teníase-cisticercose humana representa importante problema sócio-econômico e de Saúde Pública em países em desenvolvimento, incluindo nosso país. A forma mais grave da doença decorre da localização de cisticercos no Sistema Nervoso Central, a neurocisticercose. Devido à dificuldade de obtenção de parasitas a partir de suínos naturalmente infectados estudamos como fonte alternativa, preparações antigênicas de cisticercos de Taenia crassiceps (antígeno heterólogo), para pesquisa de anticorpos anti-cisticercos em líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose. Foram estudados os extratos antigênicos de líquido vesicular de cisticercos de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e as frações purificadas por Concanavalina A (ConA-Tcra) obtida por coluna de afinidade com lectina e glicoprotéico fracionado (GP-Tcra) obtida a partir do antígeno LV-Tcra em eletroforese preparativa. Os antígenos LV-Tcra, ConA-Tcra e GP-Tcra para a detecção de anticorpos IgG anti-T. solium, foram ensaiados por ELISA em amostras de LCR e por imunoblot em amostras de LCR e soro. Foi utilizado também, kit comercial ELISA com antígeno de T. solium. A sensibilidade e a especificidade obtidas para os antígenos LV-Tcra, ConA-Tcra e GP-Tcra no teste ELISA foram de 100%, com boa reprodutibilidade. Os peptídeos em ordem de freqüência de reatividade para o antígeno LV-Tcra foram: 14-11kD (100%), 62kD (100%), 68kD (100%), 91kD (76%), 25kD (70%), 46KD (64%), 18kD (58%), 43kD (23%), 9-8kD (17%), 56kD (11%) e 32kD (11%). Para o antígeno ConA-Tcra foram identificados os peptídeos, por ordem de freqüência, 14kD (100%), 28kD (66%), 18kD (55%), 46kD (44%), 43kD (22%), 94kD (22%), 103kD (22%). Para o antígeno GP-Tcra, foram identificados somente os peptídeos de 14 - 18kD. Amostras de LCR de pacientes com esquistossomose não apresentaram reatividade com os extratos antigênicos e uma amostra de LCR de paciente com neurossífilis, apresentou forte reatividade eom os peptfdeos de baixo peso molecular≤20kD, para os três antígenos, inclusive no teste ELISA comercial com antígeno de T. solium. Os resultados confirmam que os antígenos de T. crassiceps são importantes fontes alternativas de extratos antigênieos. As frações glicoprotéicas mostraram-se eficientes na detecção de anticorpos anti-T. solium em amostras de LCR e soro de pacientes com neurocisticercose. / The human taeniasis-cysticercosis complex represents an important socioeconomic and Public Health problem in developing countries, including Brazil. The most severe form of the disease is due to the localization of cysticerci in the Central Nervous System, i.e. neurocysticercosis. Due to the difficulty in obtaining parasites from naturally infected swine, we studied an alternative source consisting of Taenia crassiceps cysticerci (heterologous antigen) for the search of anti-cysticercus antibodies in cerebrospinal fluid (CSF) from patients with neurocysticercosis. We studied the antigenic extracts of vesicular fluid of Taenia crassiceps cysticerci (VF-Tcra) and the purified fractions Concanavalin A (ConA-Tcra) obtained from an affinity column with lectin and fractionated glycoprotein (GP-Tcra) obtained from the VF-Tcra antigen by preparative electrophoresis. The VF-Tcra, ConA-Tcra and GP-Tcra antigens for the detection of IgG antibodies were assayed by ELISA in CSF samples and by immunoblot in CSF and serum samples. A commercial ELISA kit with T. solium antigen was also used. The sensitivity and specificity obtained for the VF-Tcra, ConA-Tcra and GP-Tcra were 100% in the ELISA test, with good reproducibility. The peptides in order of frequency of reactivity with the VF-Tcra antigen were: 14-11kD (100%), 62kD (100%), 68kD (100%), 91kD (76%), 25kD (70%), 46KD (64%), 18kD (58%), 43kD (23%), 9-8kD (17%), 56kD (11%), and 32kD (11%). The following peptides, in order of frequency were identified for the ConA-Tcra antigen: 14kD (100%), 28kD (66%), 18kD (55%), 46kD (44%), 43kD (22%), 94kD (22%), and 103kD (22%). Only peptides of 14-18kD were identified for the GP-Tcra antigen. CSF samples from patients with schistosomiasis did not show reactivity with the antigenic extracts and a CSF sample from a patient with neurosyphilis presented strong reactivity with low molecular weight (≤20kD) peptides for the three antigens also in the commercial ELISA with the T. solium antigen. The results confirm that T. crassicepsantigens are important alternative sources of antigenic extracts. The glycoprotein fractions proved to be efficient in detecting anti-T solium antibodies in CSF and serum samples trom patients with neurocysticercosis.
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AglutinaÃÃo de Leishmania amazonensis induzida por lectinas como mÃtodo para purificaÃÃo de promastigotas metacÃclicas / Agglutination of Leishmania amazonensis induced lectins as a method for purification of metacyclic promastigotes

Juliana Montezuma Barbosa 16 February 2012 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Nas infecÃÃes experimentais, estudos utilizando inÃculo purificado de Leishmania, com populaÃÃes metacÃclicas mais homogÃneas, tem sido importantes por se aproximarem mais da condiÃÃo de infecÃÃo natural e por eliminar uma possÃvel resposta inflamatÃria induzida por restos parasitÃrios. A superfÃcie dos vÃrios parasitos reveste-se por diversos glicoconjugados. Estes, por sua vez, podem ser reconhecidos especifica e reversivelmente por lectinas, proteÃnas que possuem afinidade a carboidratos. Por conta disso, tem-se tentado purificar promastigotas metacÃclicas de culturas de Leishmania atravÃs de aglutinaÃÃo mediada por lectinas. Com esse intuito, buscou-se avaliar se lectinas de diferentes especificidades seriam capazes de aglutinar promastigotas de L. amazonensis em diferentes estÃgios evolutivos. Para isso, foi utilizado um painel de 7 lectinas, e a especificidade de ligaÃÃo aos carboidratos de superfÃcie foi analisada atravÃs de ensaios de aglutinaÃÃo, sendo a lectina de Dioclea violacea (DVL) selecionada para a realizaÃÃo dos ensaios in vivo. A DVL foi capaz de aglutinar L. amazonensis num percentual de 78% em cultura de fase logarÃtmica e 52% em fase estacionÃria. Em seguida, promastigotas de fase estacionÃria foram incubadas com DVL para avaliar se a aglutinaÃÃo era estÃgio-especifica. Posteriormente, realizou-se infecÃÃo experimental em hamsters dourados (106 promastigotas/animal) para avaliar a infectividade das fraÃÃes purificadas. Os animais foram divididos em 3 grupos: FraÃÃo aglutinada (FA) (n=8); FraÃÃo nÃo aglutinada (FNA) (n=9); Controle positivo (CT) (n=8). A evoluÃÃo da infecÃÃo foi acompanhada pelo tamanho da lesÃo, nas 6 semanas pÃs-infecÃÃo e pela quantificaÃÃo da carga parasitÃria no linfonodo regional, por diluiÃÃo limitante, bem como pela anÃlise anatomopatolÃgica das lesÃes. Em todos os grupos as lesÃes iniciaram na 3 semana. O tamanho da lesÃo foi muito semelhante em todos os grupos, com exceÃÃo da 4 e 5 semanas, onde FNA apresentou uma variaÃÃo transitÃria (p<0,01). Quanto à carga parasitÃria e Ãs alteraÃÃes histopatolÃgicas nÃo houve diferenÃa entre os grupos avaliados. Esses dados sugerem que, embora a DVL seja capaz de se ligar especificamente aos glicoconjugados de superfÃcie das promastigotas, induzindo importante poder de aglutinaÃÃo nas duas fases de crescimento, ela nÃo foi capaz de selecionar formas infectantes de L. amazonensis. / In experimental leishmaniasis infections, the use of metacyclic enriched inoculum is very important because it can simulate the natural infection and avoids the inflamatory response induced by the high density parasite inoculum. The surface of different evolutionary forms of Leishmania is coated by several glycoconjugates that can be recognized specifically and reversibly by lectins, proteins that have affinity with carbohydrates. This being the case, one could use lectins in order to purify metacyclic Leishmania. The aim of the current study was to evaluate whether lectins of different specificities would agglutinate L. amazonensis promastigotes of different evolutionary forms. A panel of 7 lectins were used. The binding specificity was analyzed by agglutination tests. DVL agglutinated 78% of L. amazonensis promastigotes from logarithmic phase culture and 52% from stationary phase, and therefore was selected for in vivo tests. Stationary phase promastigotes were incubated with DVL to evaluate if the agglutination was stage-specific and it was purified the agglutinated and non agglutinated fractions. Golden hamsters were infected with 106 promastigotes and grouped as: Agglutinated fraction (FA) (n=8); Non agglutinated fraction (FNA) (n=9); Control (CT) (n=8). The lesion size was measured over the course of 6 weeks. The parasite load of regional lymph node was quantified by limiting dilution and histopathological analysis of the lesions were performed on their paws. The lesions began at the third week in all groups. The lesionâs size was similar in all of them, except at the fourth and fifth weeks that FNA presented a transitory reduction (p<0,01). There were no significant differences concerning the parasite load and histopathologic changes among the groups. These data suggest that DVL did not select effectivelly infective forms of L. amazonensis, although it agglutinates promastigotes from the two culture growth phases.
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Níveis séricos de interleucina-12 e fator de necrose tumoral-a em diferentes apresentações clínicas de toxoplasmose

Flores, Rodrigo Echeverria January 2005 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000345941-Texto+Completo-0.pdf: 176784 bytes, checksum: 22cc77de71d7c9f7cda426596a11ac55 (MD5) Previous issue date: 2005 / Toxoplasmosis is an universal zoonosis, transmitted so much through oral contamination, as well by congenital route. The protozoan, Toxoplasma gondii, provokes a strong cellular immune response, pattern Th1, that do not overcome the infection but that takes most of the patients to an asymptomatic chronic stage. In some areas of the south of the country, there is a high prevalence of ocular lesions, caused by toxoplasmosis, most of them acquired cases. In this study was determined the variability of the seric levels of two important citokynes in the immune response to the Toxoplasma, Interleukin 12 (IL-12) and Tumor Necrosis Factor- a (TNF-a). The analisis were performed in 106 patients' sera with different clinical forms of the disease (scarred ocular lesion, lesion ocular reactivated, recent disease and chronic toxoplasmosis) and in 31 healthy controls. Significantly higher levels of IL-12 were observed in individuals with scarred ocular lesions, when compared with all groups of pacients and controls (p<0,005). There was no significant diference in the TNF-a seric levels beetwen the groups. The results shows the viability of new studies, in order to obtain a possible application of the seric determination of IL-12 in medical routine, as a prognostic test, mainly in the cases of ocular toxoplasmosis. / A Toxoplasmose é uma zoonose universal, transmitida tanto através de contaminação oral, quanto de maneira congênita. O protozoário causador, Toxoplasma gondii, provoca no organismo uma forte resposta imune celular, padrão Th1, que não resolve a infecção mas que leva a maioria das pessoas a um estágio crônico assintomático. Em algumas regiões do sul do país, há uma elevada prevalência de lesões oculares, causadas por toxoplasmose, a maioria delas adquiridas. Nesse estudo determinou-se a variabilidade dos níveis séricos de duas citocinas importantes na resposta imune ao Toxoplasma, a Interleucina 12 (IL-12) ) e o Fator de Necrose Tumoral-α (TNF-α). Foram analisados soros de 106 pacientes com diferentes apresentações clínicas da doença (lesão ocular cicatrizada, lesão ocular recidivante, doença recente e toxoplasmose crônica assintomática) e de 31 controles sadios, obtendo-se valores significativamente mais elevados de IL-12 nos indivíduos que apresentavam lesões oculares cicatrizadas, quando comparados com todos os outros grupos de pacientes e controles (p<0,005). Os valores de TNF-α não apresentaram diferenças entre os grupos. Os resultados apontam para a viabilidade de novos estudos, visando a uma possível aplicação da determinação de IL-12 sérica na prática clínica, como teste prognóstico nos casos de toxoplasmose ocular.
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Dinâmica do Panstrongylus megistus nos ciclos de transmissão de Trypanosoma cruzi em áreas de cerrado e mata atlântica no estado de Minas Gerais, Brasil

Santos Júnior, José Eloy dos January 2011 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T13:05:22Z No. of bitstreams: 1 Tese FINAL - JES-JR.pdf: 11026421 bytes, checksum: 44858784d660b994db2117a2bcfb8820 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T13:05:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese FINAL - JES-JR.pdf: 11026421 bytes, checksum: 44858784d660b994db2117a2bcfb8820 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T13:05:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese FINAL - JES-JR.pdf: 11026421 bytes, checksum: 44858784d660b994db2117a2bcfb8820 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T13:05:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese FINAL - JES-JR.pdf: 11026421 bytes, checksum: 44858784d660b994db2117a2bcfb8820 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil. / O triatomíneo Panstrongylus megistus pode ser encontrado ao longo do Brasil em um diversificado número de hábitats, tanto silvestres como artificiais. Este trabalho teve como objetivo estudar a dinâmica populacional de P. megistus nos ciclos de transmissão do Trypanosoma cruzi em áreas de Cerrado e Mata Atlântica no Estado de Minas Gerais/ Brasil. Os municípios estudados foram Bambuí (Cerrado) e Piracema (Mata Atlântica). Foram realizadas coletas nos ambientes natural e artificial, com objetivo de identificar a dinâmica populacional, as fontes alimentares (FA) e os ecótopos naturais utilizados por P. megistus, bem como caracterizar a interrelação dos ciclos de transmissão do T. cruzi a partir dos reservatórios e vetores associados. As amostragens de campo foram realizadas em locais de maior presença do barbeiro e proximidade de áreas naturais. A partir dos dados avaliados foi observado o sucesso das atividades de controle vetorial, alcançadas em momentos diferentes em cada município. Através da análise por morfometria geométrica, foi possível identificar uma semelhança entre as populações doméstica e silvestre de P. megistus, sugerindo o ambiente natural como principal foco de infestação triatomínica nos municípios. As análises de FA revelaram uma grande mobilidade da espécie no ambiente domiciliar, destacando as aves (49%) e os cães (22%) como principais recursos utilizados. A investigação do ambiente natural levou ao encontro do primeiro foco silvestre de P. megistus em Bambuí, após 69 anos de pesquisas, demonstrando a baixa densidade da espécie no meio silvestre. Foram identificados os gambás (Didelphis sp.) e os cães domésticos como principais reservatórios de T. cruzi nos ambientes natural e artificial, respectivamente. Os dados mostram que as infestações domiciliares por P. megistus, embora reduzidas, se mantêm permanentes na última década avaliada, mesmo com poucos focos silvestres, como detectado em Bambuí. Ficou evidenciado também a ocorrência de um progressivo declínio das densidades triatomínico-tripanossômicas nas áreas estudadas, o que se deve provavelmente à fatores relacionados com a permanente vigilância epidemiológica, à redução da população rural, a melhoria das habitações rurais e redução das áreas naturais associada à expansão agropecuária / The triatomine Panstrongylus megistus can be found throughout the country in a diverse number of habitats, both silvatic and artificial. This work aimed to study the dynamics of P. megistus in the Trypanosoma cruzi transmission cycles in areas of Cerrado and Atlantic Forest in Minas Gerais, Brazil. The municipalities studied were Bambuí (Cerrado) and Piracema (Atlantic Forest). Colects were conduced in natural and artificial environments, in order to identify the population dynamics, food sources and the natural ecotope used by P. megistus, and to characterize the interrelationship of T. cruzi transmission cycles from the reservoirs and vectors involved. The field surveys were conducted in sites with high presence of the triatomine and proximity to natural areas. From the data evaluated was observed the success of vector control activities reached at different times, in each municipality. A geometric morphometric analysis showed no difference between domestic and silvatic populations, suggesting the natural environment as the main focus of infestation triatomine rates in the municipalities. The food sources analysis revealed a highly mobility of the specie in the domiciliar environment highlighting the birds (49%) and dogs (22%) as the main resources used. The investigation of the natural environment led to the meeting of the first focus of silvatic P. megistus in Bambuí, after 69 years of research, demonstrating the low density of the specie in the silvatic environment. It was identified the opossums (Didelphis sp.) and dogs as the main reservoirs of T. cruzi in natural and artificial environments, respectively. The data shows that household infestation by P. megistus, although reduced, remain persistent in the last decade evaluated, even with a few silvatic foci, as detected in Bambuí. It also demonstrates the occurrence of a progressive decline of T.cruzi/Triatomine-density in the studied areas, which is probably due to factors related to the permanent epidemiological surveillance, reduction of rural population, the improvement of rural housing and reduction of natural areas associated with the expansion of agriculture and livestock.
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Proteômica comparativa de linhagens de Leishmania V. braziliensis e de Leishmania L. infantum sensíveis e resistentes aos antimoniais

Matrangolo, Fabiana da Silva Vieira January 2013 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:07:48Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:07:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:08:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T16:08:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A emergência de espécies de Leishmania resistentes ao antimonial é um grave problema em vários países. A quimioterapia é a medida mais importante para o controle das leishmanioses, visto que não existe ainda uma vacina eficiente para uso em humanos. Além disso, o controle vetorial é difícil em razão das características ambientais muito diversas e da existência de um grande número de reservatórios domésticos e silvestres dificulta também o controle. Os antimoniais pentavalentes, SbV, são os medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de leishmaniose em vários países. Apesar de serem amplamente utilizados na quimioterapia das leishmanioses por mais de setenta anos, apresentam alta toxicidade no tratamento clínico. Também, alguns pacientes são resistentes ao tratamento clínico com esses compostos. Neste trabalho, realizou-se uma análise proteômica comparativa entre linhagens de L. braziliensis e L. infantum sensíveis e resistentes ao SbIII mediante a utilização da metodologia 2-DE, seguida por espectrometria de massas (LC/MS/MS). Nesta tese utiliza-se a nomenclatura L. infantum (syn. L. chagasi). A análise comparativa dos perfis proteômicos entre as linhagens de Leishmania analisadas revelou que 192 spots foram únicos e/ou mais abundantes. Dos 132 spots proteicos submetidos à análise por MS, 80 foram identificados correspondendo a 57 proteínas distintas. A análise comparativa dos dados mostrou que a maioria das proteínas com abundância diferencial em ambas as espécies está envolvida na defesa antioxidante, na resposta geral ao estresse, no metabolismo de glicose e de aminoácidos e na organização do citoesqueleto. Cinco proteínas foram mais abundantes em ambas as linhagens de Leishmania resistentes ao SbIII: triparedoxina peroxidase, alfa-tubulina, HSP83, HSP70 e HSP60. Os ensaios de Western blotting 1-DE e 2-DE confirmaram os dados da análise proteômica. Estes ensaios revelaram que a ciclofilina-A é menos expressa em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. De outro lado, a pteridina redutase é mais expressa na linhagem resistente LbSbR e apresenta nível de expressão similar entre as linhagens sensíveis e resistentes de L. infantum. A triparedoxina peroxidase é mais abundante em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. Estes resultados sugerem que o aumento da expressão de enzimas da defesa antioxidante pode desempenhar papel significativo na resistência dos parasitos aos antimoniais. Em conjunto, os dados mostram que o mecanismo de resistência de Leishmania spp. ao antimônio é complexo e multifatorial. É importante ressaltar que entre as 57 proteínas identificadas como diferencialmente adundantes entre as linhagens de Leishmania spp. sensíveis e resistentes ao antimonial 17 foram identificadas anteriormente por outros autores e que as outras 40 foram observadas apenas em nossa análise proteômica de linhagens de Leishmania spp. Resistentes ao SbIII. Acreditamos que algumas dessas proteínas estejam associadas com a resposta geral ao estresse e que outras podem estar associadas ao mecanismo de resistência ao antimônio em Leishmania spp. Neste contexto, a futura análise funcional será muito importante para determinar a possível associação destas proteínas com o fenótipo de resistência de Leishmania aos antimoniais. / The emergence of drug-resistant Leishmania species is a significant problem in several countries. Chemotherapy is the most important alternative for controlling leishmaniases, since there is no effective vaccine for using in humans. Furthermore, the vector control is difficult due to different environmental characteristics and the existence of a large number of domestic and wild reservoirs. Pentavalent antimonials, Sb V, are the first-choice drugs in the treatment of all forms of leishmaniases in several Countries. Although they are widely used in the chemotherapy of leishmaniases for more than 60 years, they have high toxicity and some patients are resistant to clinical treatment with these compounds. In this study, we carried out a comparative proteomic analysis of antimony-susceptible and antimony-resistant Leishmania braziliensis (LbSbR) and Leishmania infantum (syn. L. chagasi) (LcSbR) lines using twodimensional gel electrophoresis (2-DE) followed by mass spectrometry (LC/MS/MS) for protein identification. Comparative analysis of proteomic profiles between the Leishmania lines analyzed showed that 192 spots were unique and/or most abundant. Out of 132 protein spots submitted to MS, we identified 80 that corresponded to 57 distinct proteins. Comparative analysis showed that most of the protein spots with differential abundance in both species are involved in antioxidant defense, general stress response, glucose and amino acid metabolism, and cytoskeleton organization. Five proteins were more abundant in both SbIII-resistant Leishmania lines: tryparedoxin peroxidase, alpha-tubulin, HSP83, HSP70, and HSP60. Analysis of protein abundance by Western blotting assays 1-DE e 2-DE confirmed our proteomic data. These assays revealed that cyclophilin-A is less expressed in both LbSbR and LcSbR lines. On the other hand, the expression of pteridine reductase is higher in the LbSbR line, and it has similar expression level between SbIII-susceptible and -resistant L. infantum lines. The tryparedoxin peroxidase is overexpressed in both LbSbR and LcSbR lines. These results suggest that an increased in expression of anti-oxidant defense enzymes may play a significant role in the antimonial resistance in these parasites. Together, these results showed that the mechanism of antimony-resistance in Leishmania spp. is complex and multifactorial. Interestingly, among the 17out of 57 proteins identified as differentially abundant between SbIII-susceptible and -resistant lines, were also previously identified by others authors and the other 40 proteins were observed only in our proteomic analysis of SbIII-resistant Leishmania spp. lines. We believe that some of them are associated with the general stress response and others may be associated with the mechanism of resistance of Leishmania spp. to antimony. In this context, functional analysis will be very important to determine a possible association of these proteins with the antimony-resistance phenotype in Leishmania.
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A infecção malárica pelo Plasmodium simium/Plasmodium vivax em primatas não humanos de três regiões da Mata Atlântica brasileira.

Costa, Daniela Camargos January 2014 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T13:24:29Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_DanielaCamargosCosta.pdf: 7549515 bytes, checksum: 6b70f7b5c83b5461482f80c7c7b76f8a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T13:34:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_DanielaCamargosCosta.pdf: 7549515 bytes, checksum: 6b70f7b5c83b5461482f80c7c7b76f8a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T13:34:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_DanielaCamargosCosta.pdf: 7549515 bytes, checksum: 6b70f7b5c83b5461482f80c7c7b76f8a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T13:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_DanielaCamargosCosta.pdf: 7549515 bytes, checksum: 6b70f7b5c83b5461482f80c7c7b76f8a (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, os casos de malária humana concentram-se na região amazônica. Entretanto, casos autóctones da doença têm sido relatados em diferentes regiões de Mata Atlântica. Sugere-se que a manutenção destes casos envolva a presença de macacos infectados. Nas regiões sul e sudeste do país circula o parasito de primatas Plasmodium simium, semelhante ao parasito de humanos P. vivax. No entanto, pouco se conhece sobre o parasito simiano e a sua proximidade morfológica, imunológica e genética com o P. vivax dificulta sua caracterização. Diante da necessidade de uma melhor compreensão da malária simiana, propôs-se neste trabalho realizar um levantamento da doença do ponto de vista clínico, molecular e imunológico em primatas de Mata Atlântica, dos estados Santa Catarina, Paraná e Mato Grosso do Sul. Em SC, foi observada uma taxa de infecção malárica pelo PCR de 35% em animais de vida livre e 4% em animais de cativeiro. Todos os animais do PR e MS foram negativos. Entretanto, em todos os estados foi identificado por meio do ELISA, uma reatividade de anticorpos contra as proteínas recombinantes PvDBPII, PvMSP-119 e PvAMA-1. Ainda, anticorpos presentes no soro de bugios foram capazes de bloquear a interação PvDBP-DARC, com uma relação positiva entre a reatividade no ELISA e presença de anticorpos bloqueadores. Além disso, a interação específica PvDBP-DARC em amostras de bugios ruivos sugere que o parasito P. simium possui uma proteína ortóloga a PvDBP e dessa forma, compartilhe a mesma via de invasão que o P. vivax. A análise de microssatélites demonstrou alelos novos e exclusivos, trazendo perspectivas para a diferenciação das populações do parasito. Através da análise da diversidade genética das sequências obtidas de P. simium foi possível caracterizar polimorfismos conservados, sendo alguns deles nunca descritos em P. vivax. Contudo, apesar destes polimorfismos, a reconstrução da filogenia baseada nos genes DBP, MSP-1 e 18S não permitiu a separação das espécies, o que reforça a proximidade genética entre os parasitos e aponta para uma transferência de hospedeiros recente. Finalmente, a presença de símios infectados em áreas de Mata Atlântica sugere que os primatas possam atuar como reservatórios da doença, uma vez que casos humanos já foram descritos nas cidades estudadas. / In Brazil, human malaria is concentrated in the Amazon region. However, autochthonous cases of the disease have been reported in the Atlantic Forest region. It has been hypothesized that these cases occurs due to accidental transmission from infected primates. Plasmodium simium is a parasite that circulates amongst primates in the southern and southeastern regions of Brazil. Critically, due to morphological, immunological and genetic similarities, it has not been possible to differentiate them. Faced with the need to obtain a deeper understanding of the relationship between human and simian Plasmodia, in this study we conducted a survey of plasmodia infection in the primates of regions of rainforest in Santa Catarina, Paraná and Mato Grosso do Sul states. In SC we identified plasmodia infection in 35% of wild animals, and in 4% of animals in captivity. However, for animals from all states, we successfully identified antibodies against the recombinant proteins PvDBPII, PvAMA-1 and PvMSP119 using ELISA. Moreover, antibodies in the serum of red howler monkeys blocked the interaction of PvDBP and its receptor DARC, with a correlation between a positive ELISA result and the presence of blocking antibodies. Furthermore, the specific interaction between DARC-PvDBP suggested that the simian parasite protein, an ortholog of PvDBP, was able to bind to the DARC receptor and thus, probably shares the same route of invasion as the P vivax merozoite in the human reticulocyte. The genotyping analysis of the simian parasites uncovered new and unique alleles for each host, furthering prospects for differentiation between populations of the human and simian parasites. By analyzing the genetic diversity between the P. vivax and P. simium variants of this protein and also MSP-1, it was possible to characterize conserved polymorphisms in P. simium, some of them never described for P. vivax. However, despite these polymorphisms, the reconstruction of phylogeny based on DBP, MSP-1 and 18S genes did not allow for separation between the two species, confirming the high degree of genetic similarity between the parasites and also suggesting a recent host transfer, as previously hypothesized. Finally, the presence of infected primates in the Atlantic Forest highlights the likelihood that these animals could act as a reservoir for malaria, as human cases have been reported in the cities studies during this work.
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Efeito dos parasitos Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli em aspectos do fitness de Rhodnius prolixus

Belinato, Maria Raquel Fellet January 2014 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:24:52Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_MariaRaquelFelletBelinato.pdf: 5060346 bytes, checksum: e8bef8e25cdc2e123cfed86f1bc3fac5 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:25:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_MariaRaquelFelletBelinato.pdf: 5060346 bytes, checksum: e8bef8e25cdc2e123cfed86f1bc3fac5 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:25:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_MariaRaquelFelletBelinato.pdf: 5060346 bytes, checksum: e8bef8e25cdc2e123cfed86f1bc3fac5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T14:25:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_MariaRaquelFelletBelinato.pdf: 5060346 bytes, checksum: e8bef8e25cdc2e123cfed86f1bc3fac5 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Os triatomíneos são insetos hematófagos capazes de transmitir Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas. Existem poucos estudos sobre a virulência do parasito ao inseto vetor e, com isso, o parasito tem sido considerado por diversos autores como não-patogênico nesse sentido. Trypanosoma rangeli, outro protozoário transmitido por triatomíneos, não é patogênico ao homem, mas apesar de vários efeitos negativos ao vetor serem conhecidos, seu papel sobre o comportamento e a biologia reprodutiva do inseto ainda não foi investigado. Essa tese avaliou o efeito da infecção por T. cruzi (em duas temperaturas de criação: 25-25ºC - os insetos foram mantidos em 25ºC durante as fases ninfal e adulta e 30-25ºC - os insetos foram mantidos a 30ºC durante a fase ninfal e transferidos para 25ºC após a muda imaginal) e por T. rangeli - somente em 25-25ºC, em aspectos reprodutivos e no comportamento de cópula e voo de R. prolixus. Inicialmente, foi demonstrado que tanto T. cruzi 30-25ºC quanto T. rangeli causaram uma diminuição na fecundidade e fertilidade dos triatomíneos, sendo os efeitos decorrentes da infecção por T. rangeli mais evidentes. Além disso, foi observado para os mesmos grupos que a presença dos parasitos diminuiu o tamanho, o peso e o conteúdo proteico de ovos postos por pares infectados. O comportamento sexual dos insetos também foi afetado pelas infecções por T. rangeli e T. cruzi (30-25ºC). A frequência e duração da cópula em ensaios sem escolha de parceiro somente foram alteradas na infecção por T. rangeli. Interessantemente, quando foi permitido a insetos não infectados escolherem entre um parceiro infectado e um não infectado, um número significativamente maior escolheu parceiros não infectados, em infecções por T. cruzi e T. rangeli. O comportamento de início de voo também foi alterado em decorrência das infecções. Ambos os parasitos diminuíram a frequência de início de voo dos insetos. Adicionalmente, um maior número de fracassos nas tentativas de início de voo foi visto nos insetos infectados em comparação aos sem infecção. De maneira geral, as infecções por T. cruzi e T. rangeli produziram efeitos negativos no fitness de R. prolixus. No caso de T. cruzi a temperatura de criação dos insetos parece ser relevante para a ocorrência dos efeitos. Será importante investigar ainda se os insetos são capazes de controlar comportamentalmente as populações de parasitos, escolhendo, por exemplo, temperaturas ambientais adequadas ou se os tripanosomas podem manipular ativamente o comportamento dos triatomíneos para seu próprio benefício. / Triatomine bugs are bloodsucking insects capable of transmitting Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease. There are few studies on the virulence of this parasite to its vector and thereby, T. cruzi has been considered by several authors as non-pathogenic in this sense. Trypanosoma rangeli, another protozoan transmitted by triatomine bugs, is not pathogenic to humans, but despite several negative effects to the vector being known, their role on the behavior and reproductive biology of this insect has not been investigated yet. This thesis evaluated the effect of T. cruzi (at two rearing temperatures: 25-25ºC – the insects were kept at 25ºC both during ninfal and adult phases and 30-25ºC - the insects were kept at 30°C and transferred to 25°C after the imaginal molt) and T. rangeli (25-25ºC) infections on reproductive, mating and flight behavior of R. prolixus. First we have shown that both T. cruzi 30-25ºC and T. rangeli caused a decrease in fecundity and fertility of triatomines and these effects were more evident on T. rangeli infection. Furthermore, it was observed for the same groups that the presence of parasites decreased size, weight and protein content of eggs laid by infected pairs. The sexual behavior of insects was also affected by both T. rangeli and T. cruzi (30-25ºC) infection. The frequency and duration of matings in assays without mating choice were only altered by T. rangeli infection. Interestingly, when uninfected insects were allowed to choose between uninfected and infected partners, significantly more individuals chose uninfected partners in both T. cruzi and T. rangeli infections. The behavior of flight initiation was also altered as a result of infections. Both parasites decreased the frequency of flight initiation of insects. Additionally, an increased number of failures on flight initiation was observed in infected insects when compared to uninfected ones. Generally, infection by T. cruzi and T. rangeli resulted in negative effects on fitness of R. prolixus. In the case of T. cruzi, the rearing temperature of insects seems to be important for the occurrence of effects. It will be important to further investigate whether triatomines present behavioral responses that may control trypanosome growth through actively choosing, for example, appropriate environmental temperatures or whether trypanosomes actively manipulate the insect behavior to their own benefit.
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Atividade locomotora, uso de abrigos e predação em Rhodnius prolixus: alterações induzidas pelainfecção por tripanosomatídeos

Marliére, Newmar Pinto January 2015 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T12:39:35Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_DIP_NewmarPintoMarliere.pdf: 955219 bytes, checksum: 062701a2ea1b04c3ce8ef829141cb40f (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T12:39:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_DIP_NewmarPintoMarliere.pdf: 955219 bytes, checksum: 062701a2ea1b04c3ce8ef829141cb40f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T12:39:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_DIP_NewmarPintoMarliere.pdf: 955219 bytes, checksum: 062701a2ea1b04c3ce8ef829141cb40f (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Rhodnius prolixus é um inseto hematófago considerado principal transmissor do Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, na Colômbia e Venezuela. Além do T. cruzi, ele pode transmitir o Trypanosoma rangeli a várias espécies de mamíferos, incluindo o homem. Durante o dia, estes insetos são encontrados no interior de abrigos, agregados com seus co-específicos em um estado de imobilidade denominado acinese. Durante a noite, estes insetos apresentam um perfil de atividade locomotora com dois picos característicos: um na primeira metade da escotofase, relacionado com a procura por hospedeiros e parceiros sexuais, e outro, na interfase entre o fim da fase escura e a fotofase, direcionado à procura de refúgios. Como seus hospedeiros são comumente vertebrados predadores de insetos, os triatomíneos podem ser mortos durante sua busca e o subsequente processo de alimentação. Desta maneira, o presente estudo avaliou se a infecção pelos tripanosomas acima citados altera o nível de atividade locomotora, os padrões de uso de abrigos e as taxas de predação sofridas por ninfas de R. prolixus. Além disso, avaliou-se a possibilidade de camundongos se infectarem ao ingerir ninfas infectadas com T. rangeli. Inicialmente, demonstrou-se que insetos infectados com T. cruzi apresentam uma diminuição nos níveis de atividade locomotora durante as primeiras horas da escotofase. Em contraste, a infecção por T. rangeli induziu a um aumento no nível de atividade locomotora durante praticamente todo o ciclo diário. Os padrões de uso de abrigos por ninfas infectadas com T. cruzi praticamente não foram alterados, porém esses insetos foram significativamente mais predados que insetos sadios. Trypanosoma rangeli modificou todos os parâmetros avaliados relacionados com o uso de abrigo. A infecção por este parasito aumentou a porcentagem de insetos que permaneceram fora dos abrigos, a exposição ao hospedeiro e consequentemente suas taxas de predação. Por fim, demonstrou-se que camundongos não se infectam com T. rangeli pela via oral. As alterações observadas, principalmente aquelas das taxas de predação, podem ter importantes implicações na transmissão de ambos os tripanosomatídeos na natureza, e são discutidas no presente trabalho. / The hematophagous insect Rhodnius prolixus is considered the main vector of Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease, in Colombia and Venezuela. In addition to T. cruzi, these insects can transmit Trypanosoma rangeli to different mammals, including humans. During daylight hours, triatomines remain hidden in shelters, aggregated with co-specifics in an immobility state called akinesis. During night time, these insects become active, presenting two locomotory peaks: cone during the first half of the scotophase, related to host and sexual partner search, and another at the scotophase/photophase transition, when they return to their refuges. Triatomines can be eaten during host seeking and feeding because triatomine hosts are frequently insect predators. In this study, we evaluated whether infection by T. cruzi or T. rangeli influences the locomotor activity, the use of shelters and the predation rates suffered by R. prolixus nymphs. In addition, we evaluated whether mice can become infected with T. rangeli by ingestion of infected R. prolixus nymphs. T. cruzi infected insects exhibited a decreased locomotor activity level during the first hours of the scotophase. In contrast, T. rangeli infected insects showed increased locomotor activity during most daylight hours. T. cruzi infected nymphs did not show alterations in their patterns of shelter use. However, they suffered a significantly higher predation rate than healthy bugs. On the other hand, T. rangeli infected insects presented an altered pattern of shelter use. Specifically, these insects tended to remain out of their shelters, being exposed to their hosts and suffering higher predation rates. Finally, mice did not become infected by predating on T. rangeli infected insects. These behavioral changes, and especially the higher predation rates observed for infected insects, may have important implications for the transmission of both trypanosomatids in nature.
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Monitoramento da inserção do patrimônio genético de Biomphalaria tenagophila do Taim (RS), linhagem resistente ao Schistosoma mansoni, após a sua introdução em uma área endêmica para esquistossomose no Município de Bananal/SP, com transmissão mantida por B. tenagophila

Marques, Daisymara Priscila de Almeida January 2012 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-09-11T16:58:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL 08 09 12.pdf: 2298162 bytes, checksum: 6e2f996852589f87fd2d6180f0571f3e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-11T16:58:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL 08 09 12.pdf: 2298162 bytes, checksum: 6e2f996852589f87fd2d6180f0571f3e (MD5) / FIOCRUZ, FUNDEP, CNPq, CAPES / O córrego Herivelton Martins foi escolhido para dar continuidade aos estudos com a introdução da linhagem Biomphalaria tenagophila do Taim/RS, resistente ao Schistosoma mansoni, em coleções hídricas do Município de Bananal/SP, iniciados em 2008. Oitocentos exemplares B. tenagophila adultos da linhagem Taim/RS foram marcados e introduzidos. Pelo método de marcação da concha foi estimada a densidade populacional da linhagem introduzida em relação à local. Após 15 dias da introdução 37,5% dos caramujos coletados estavam marcados. Após 4, 11 e 14 meses da introdução, caramujos jovens (≤ 5 mm de diâmetro) foram coletados e submetidos a técnica de PCR_RFLP para identificação do marcador molecular de 350pb, típico da linhagem do Taim e com caráter dominante. A proporção do marcador molecular nestes caramujos foi 37,1%, 35,7 e 60% respectivamente. Foram realizados três testes de infecção com a cepa SJ de S. mansoni com os descendentes F1 de caramujos coletados nos diferentes períodos após a introdução. Os sobreviventes foram submetidos à técnica de PCR_RFLP para verificar se havia alguma correlação entre a resistência e a presença do marcador de 350pb. No primeiro desafio com o S. mansoni 38,6% dos exemplares provenientes dos caramujos locais, coletados antes da introdução, estavam positivos, bem como 14,9% dos descendentes coletados após 4 meses da introdução. A análise molecular realizada com os caramujos positivos para S. mansoni, oriundos de exemplares pós-introdução, demonstraram que apenas 10% apresentaram o marcador de 350 pb, sendo que este marcador estava presente em 60,8% dos caramujos negativos. No segundo desafio, os descendentes de caramujos coletados antes, após 4 e 11 meses da introdução apresentaram taxas de infecção de 25%, 4,1%, 17%, respectivamente. Os caramujos positivos para S. mansoni não apresentaram o marcador molecular. A percentagem do marcador molecular nos caramujos negativos, coletados após 4 e 11 meses da introdução, foi de 66,6% e 56,2%, respectivamente. No terceiro desafio, as taxas de infecção dos descendentes foram de 26,5% antes da introdução, 6,8% após 11 meses e 2,1% após 14 meses. A análise molecular dos descendentes neste desafio está em andamento. Os dados apontam para uma significativa diminuição da suscetibilidade dos caramujos coletados após a intervenção. O marcador molecular de 350pb típico da linhagem do Taim foi detectado em proporções muito maiores nos caramujos negativos. Os resultados parciais obtidos permitem a inferência que o patrimônio genético da linhagem resistente B. tenagophila do Taim está sendo transmitido com êxito aos descendentes após intervenção tendo como consequência uma maior resistência à infecção por S. mansoni. / The stream Herivelton Martins was chosen to continue the studies on introduction of Biomphalaria tenagophila from Taim/RS, resistant to Schistosoma mansoni, in hydric collections of Bananal/SP, initiated in 2008. Eight hundred adult specimens of B. tenagophila belonging to the lineage of Taim/RS were labeled and introduced. The populational density of the introduced lineage in relation to the local one was estimated using the labeling method of the shell. Fifteen days post-introduction, 37.5% of the collected snails were labeled. After 4, 11 and 14 months of the introduction, juvenile snails (≤ 5 mm diameter) were collected and submitted to PCR-RFLP technique for identification of the molecular marker 350 pb, typical of the Taim lineage and with dominant character. The proportions of the molecular marker in these snails were 37.1%, 35.7% and 60%, respectively. Three infection tests were carried out with the SJ strain of S. mansoni, using the descendants F1 of the snails collected on different periods after introduction. The surviving snails were submitted to the PCR-RFLP technique, in order to verify if there was any correlation between resistance and the presence of the marker 350 pb. In the first challenge with S. mansoni, 38.6% of the specimens belonging to the local population, and collected before introduction, were found to be positive, as well as 14.9% of the offsprings collected 4 months post-introduction. The molecular analysis performed with positive snails to S. mansoni, related to specimens after introduction, demonstrated that only 10% presented the molecular marker 350 pb, and this marker was present in 60.8% of the negative snails. In the second challenge, the offsprings of the snails collected before or 4 and 11 months post-introduction presented infection rates of 25%, 4.1% and 17%, respectively. The positive snails for S. mansoni did not present the molecular marker. The proportions of the molecular marker in the negative snails, collected 4 and 11 months after introduction, were 66.6% and 56.2%, respectively. In the third challenge, the infection rates of the descendants were 26.5% before introduction, 6.8% after 11 months and 2.1% after 14 months. The molecular analysis of the descendants related to this challenge is in progress. Data point out to a significant decrease in the susceptibility of the snails collected after intervention. The molecular marker 350 pb, typical of the Taim lineage, was detected in higher proportions in the negative snails. The partial results obtained allow to infer that the genetic heritage of the resistant B. tenagophila strain from Taim is being successfully transmitted to the descendants after intervention, showing as a result a higher resistance to S. mansoni infection.
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Cultivo primário e caracterização de células derivadas de diferentes tecidos de Biomphalaria tenagophila (Orbigny, 1835)

Silva Neto, Aristeu January 2012 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-07T16:25:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Aristeu.pdf: 6273421 bytes, checksum: b5f821ad263486462653b244d6c6ecbb (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-07T16:25:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Aristeu.pdf: 6273421 bytes, checksum: b5f821ad263486462653b244d6c6ecbb (MD5) / Schistosoma mansoni, agente etiológico causador da esquistossomose no Brasil, necessita de passagem obrigatória em moluscos do gênero Biomphalaria como hospedeiros intermedíarios, para fechamento do ciclo da doença. Os mecanismos envolvidos na relação parasito-hospedeiro ainda não foram completamente elucidados e culturas celulares tem-se mostrado úteis para responder questões específicas. Dessa forma, nosso estudo teve como objetivo o estabelecimento de culturas celulares de diferentes tecidos de Biomphalaria tenagophila Taim, linhagem completamente resistente ao S. mansoni. Todos os tecidos selecionados estão suposta ou comprovadamente envolvidos no sistema interno de defesa desses moluscos. As culturas foram mantidas em dois meios distintos e a viabilidade celular foi avaliada nos dois casos. As células cultivadas foram caracterizadas através de microscopia óptica invertida e microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Foram obtidas, com sucesso, culturas celulares em dez dos doze tecidos dissecados a partir da B. tenagophila. Sob microscopia ótica, a maioria das células apresentou formato esférico, sem aderência, sem pseudópodes ou filapódios. Através da microscopia eletrônica de transmissão identificamos dez subtipos celulares na cultura do manto e quinze na cultura de porção sacular e tubular do túbulo renal. Nas culturas de glândula digestiva e piloro identificamos seis tipos celulares, além de cinco originadas de glândulas nidamental e prostática, quatro de ovotesti e papo, e três de glândula de albúmen. Em quatro dessas culturas (manto, ovotesti, porção renal e sacular) analisamos a complexidade celular e o perfil de açúcares de membrana através de citometria de fluxo com conjugados lectina-Alexa Fluor 488, em busca de marcadores específicos para tipos celulares. Com exceção de WGA (wheat germ agglutinin), que se ligou a todos os tipos celulares estudados, todas as outras lectinas podem ser consideradas potenciais marcadores de tipos celulares. Estudos mais detalhados estão em andamento visando a seleção das lectinas mais adequadas como marcadores de tipos celulares nesse modelo experimental de culturas celulares de Biomphalaria. / Schistosoma mansoni, the etiological agent for schistosomiasis in Brazil, has an obligatory passage through Biomphalaria snails as intermediate hosts to complete the disease cycle. The mechanisms involved in the interaction mollusk-parasite have not been totally clarified yet and cell culture models appear as potential tools to help clarify specific issues. With that in mind, we devoted our study to develop primary cell cultures from different tissues of Biomphalaria tenagophila belonging to Taim strain, which is completely resistant to S. mansoni infection. Those tissues were selected based on their known or putative importance to the internal defense system of the mollusk. The cultures were maintained at two different media and cell viability was evaluated for each condition. The cells in culture were characterized by optical inverted and transmission electronic microscopy. Primary cultures from ten out of twelve tissues of B. tenagophila were successfully obtained. Most of the cell subsets were round, mostly non-adherent, without pseudopodia or filapodia by optical microscopy. Under electronic microscopy we identified ten cell subsets in mantle culture and fifteen cell subsets in both saccular and tubular kidney sections. In digestive gland and pylorus six differents cell subsets could be identified against five cell subsets in nidamental and prostatic gland, four in ovotestis and crop and three in albumen gland. Cell complexity and membrane sugar patterns of four different tissue-derived cultures (mantle, ovotesti, saccular and tubular kidney) were also analyzed by flow cytometry using different Alexa Fluor 488-lectin conjugates looking for subset-specific markers. Besides WGA (wheat germ agglutinin), which was found to bind to all kinds of mollusk cells, all the other lectins tested could be considered potential subset markers. Further studies are in progress to select the most suitable lectin to be used as subset marker in those cell culture-based experimental model for Biomphalaria.

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