Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / El Sistema Nacional de Áreas Silvestres Protegidas del Estado de Chile (SNASPE), administrado por la Corporación Nacional Forestal (CONAF), representa el 20% de la superficie de Chile y cobija al 87% de las especies de fauna vertebrada del país, asumiendo gran importancia en el ámbito de la conservación in situ de fauna endémica y nativa del territorio nacional. Una de las amenazas de importancia para la fauna silvestre es la presencia de enfermedades transmisibles y transmisión de patógenos, los cuales provienen posiblemente de la interacción con animales domésticos y/o introducción de especies exóticas invasoras a las Áreas Silvestres Protegidas (ASP), entre otros factores. Existen diversas investigaciones científicas que dan cuenta de patógenos presentes en fauna silvestre, sin embargo, ninguna que reúna todos estos reportes en un sólo documento. Es por esto que el objetivo del presente estudio es generar un catastro y registro de la distribución de patógenos identificados en mamíferos nativos amenazados de Chile, asociándolos al Sistema Nacional de Áreas Silvestres Protegidas del Estado. La metodología se llevó a cabo en cuatro etapas: 1) Selección de especies de mamíferos nativos presentes en ASP, que presenten algún grado de amenaza, según su categoría de conservación e importantes dentro de la conservación de la fauna chilena al ser también consideras especies icónicas, 2) Catastro y sistematización de los patógenos identificados en los mamíferos nativos seleccionados, según criterios específicos, 3) Georreferenciación de los patógenos identificados en mamíferos nativos seleccionados, asociando cada registro a la ASP más cercana, y 4) Generación de mapas cartográficos de la presencia de los patógenos identificados por especie. Se recopilaron un total de 135 reportes de patógenos en 10 especies de mamíferos, registrando 41 tipos diferentes de patógenos, asociados a 21 ASP. Los patógenos de mayor relevancia en las especies estudiadas fueron: Corynebacterium pseudotuberculosis en Hippocamelus bisulcus, Mycobacterium avium, susp. paratuberculosis en Pudu pudu y Lama guanicoe, Parvovirus Canino y Virus Distémper Canino en Lycalopex sp., Sarcoptes scabiei en Vicugna vicugna y Virus de la leucemia felina y Virus de la inmunodeficiencia felina en Leopardus guigna, entre otros. La mayoría de los patógenos registrados también se encuentran en animales domésticos, pudiendo sugerir que estos cumplen un rol importante en la persistencia de estos patógenos en las poblaciones de animales silvestres. Se concluye que más estudios son necesarios para comprender mejor la epidemiologia de los patógenos presentes en fauna silvestre y el real efecto e influencia de los animales domésticos sobre la salud en los espacios naturales, pudiendo ser potentes factores que están alterando paulatinamente el normal equilibrio de los ecosistemas y, en consecuencia, la salud y conservación de especies animales silvestres nativas del país / The National System of Protected Wild Areas of the State of Chile (SNASPE), administered by the National Forestry Corporation (CONAF), represents 20% of the The National System of Protected Wild Areas of the State of Chile (SNASPE), the administrator of the National Forestry Corporation (CONAF), represents 20% of the surface of Chile and 87% of the species of vertebrate fauna of the country, assuming great importance in the field of in situ conservation of the endemic and native fauna of the national territory. One of the threats of importance to wildlife is the presence of transmissible diseases and transmission of pathogens, information on the relationships of animals and/or the introduction of invasive exotic species to the Protected Wildlife Areas (ASP), among others. Factors There are numerous scientific investigations that account for pathogens present in wildlife, however, not all of these reports are gathered in a single document. The objective of this study is to generate a cadastre and a register of the distribution of pathogens in the threatened native animals of Chile, associating them with the National System of Protected Wild Areas of the State. The methodology was carried out in four stages: 1) Selection of species of native animals present in ASP, which will be presented in some degree of threat, according to their category of life care services, 2) Cadastre and systematization of the pathogens in the selected native mammals, according to the specific criteria, 3) Georeferencing of the pathogens in the selected native mammals, associating each record in the closest ASP, and 4) Generation of cartographic maps of the presence of pathogens by species. A total of 135 reports of pathogens in 10 mammal species will be collected, recording 41 different types of pathogens, associated with 21 ASPs. The most relevant pathogens in the species studied were: Corynebacterium pseudotuberculosis in Hippocamelus bisulcus, Mycobacterium avium, susp. paratuberculosis in Pudu pudu and Lama guanicoe, Canine Parvovirus and Canine Distemper Virus in Lycalopex sp., Sarcoptes scabiei in Vicugna vicugna and Feline Leukemia Virus and Feline Immunodeficiency Virus in Leopardus guigna, among others. Most of the registered pathogens are also found in domestic animals, which may suggest that they play an important role in the persistence of these pathogens in wild animal populations. It is concluded that more studies are necessary to better understand the epidemiology of pathogens present in wildlife and the real effect and influence of domestic animals on health in natural spaces, being able to be powerful factors that are gradually altering the normal equilibrium of the ecosystems and, consequently, the health and conservation of wild animal species native to the country / Financiamiento: Convenio Favet-Conaf

O Brasil é um país megadiverso em herpetofauna, e do total da diversidade brasileira, aproximadamente 30% das espécies de répteis e 27% das espécies de anfíbios ocorrem no estado de São Paulo. A grande urbanização e o desmatamento acentuado têm ocasionado o aumento de encontros entre a herpetofauna e a população da capital e das outras cidades do estado. Esse fato faz com que algumas espécies, antes florestais, sejam atualmente consideradas sinántropicas. Répteis e anfíbios são amplificadores e reservatórios conhecidos de vários patógenos, mas o papel destes animais no ciclo de doenças e o potencial vetorial dos ácaros ectoparasitas desses vertebrados são ainda pouco conhecidos. Répteis e anfíbios são parasitados por ácaros da ordem Trombidiformes, pertencentes a 5 famílias (Cloacaridae, Pterygosomatidae, Harpirhynchidae, Trombiculidae e Leeuwenhoekiidae). Com exeção de Cloacaridae, as outras ocorrem na América do Sul. Dessa forma, a situação fragmentária dos registros de Trombidiformes no estado de São Paulo, sua complexidade taxonômica e a escassês de informações sobre sua participação na epidemiologia de doenças, foram os principais motivos que levaram à proposição do presente estudo. Os ácaros Trombidiformes de répteis e anfíbios, que estão depositados na coleção acarológica de Instituto Butantan (IBSP) foram revisados e alguns identificados. Igualmente, aqueles ácaros obtidos na recepção de animais do Instituto Butantan e de coletas em campo foram também identificados. Parte do material foi preparada para estudos moleculares e inferência filogenética, usando genes ribossomais e mitrocondriais, e parte foi investigada para a presença de Rickettsia spp., Coxiella spp. e Hepatozoon spp. As seguintes espécies de ácaros foram identificadas, Geckobia hemidactyli, Ophioptes parkeri, O. brevipilis, O. longipilis, Eutrombicula alfreddugesi, Fonsecia ewingi, Hannemania hepatica, H. minor e H. yungicola. Foi descrita uma espécie nova de Ophioptes, sendo a primeira deste gênero parasitando viperídeos. Todos os registros de hospedeiro são novos, assim como, algumas localidades são novos registros de ocorrência para as espécies G. hemidactyli, H. minor e H. yungicola. Foi proposta uma filogenia utilizando-se o gene 18S V4 rRNA da ordem Trombidiformes. As sequências obtidas foram analisadas juntamente com aquelas depositadas no GenBank. Não foi detectada a presença de patógenos nos ácaros e nem nos hospedeiros investigados / Brazil is a megadiverse country in herpetofauna, and appoximately 30% of the reptile species, and 27% of the amphibian species ocurr in the state of São Paulo. The high urbanization and the marked deforestation have increase the amount of human-herpetofauna encounters in the capital city and in the enviroment. This fact made some species to be considered currently as sinantropic. Reptiles and amphibians are known amplifiers and reservoirs of several pathogens, yet the role of these animals in the cycle of diseases and the vector potencial of the ectoparasitic mites of these vertebrates are poorly known. Reptiles and amphibians are parasitized by mites of the Trombidiformes order of 5 families (Cloacaridae, Pterygosomatidae, Harpirhynchidae, Trombiculidae e Leeuwenhoekiidae). These families ocurre in South America, except for Cloacaridae. Thereby, the fragmentary records of Trombidiformes in the state of São Paulo, their taxonomic complexity and the scarce information regarding their role in the epidemiology of diseases, were the main reasons to pursue the proposition of the present study. Trombidiformes mites of reptiles and ambhibians deposited in the acarological collection of the Instituto Butantan (IBSP) were reviewed and some of them were identified. In the same way, mites obtained at the animal reception site of the instituto Butantan, and from field collections were also identified. Part of this material was prepared for molecular studies and phylogenetic inference using ribosomal and mithocondrial genes, and another part of the material was used to assess the presence of Rickettsia spp., Coxiella spp. and Hepatozoon spp. The following species were identified: Geckobia hemidactyli, Ophioptes parkeri, O. brevipilis, O. longipilis, Eutrombicula alfreddugesi, Fonsecia ewingi, Hannemania hepatica, H. minor and H. yungicola. A new species of Ophioptes was described, being the first of this genu parasitizing viper snakes. All the hosts records are new, as well as, some of the localities are new records in the state for G. hemidactyli, H. minor e H. yungicola. A phylogeny using the 18S V4 rRNA gene was proposed. The obtained sequences and the sequences retrieved from the Genbank database were analized together. Pathogens were not detected in the mites nor in their hosts

A produção de pólen apícola vem experimentando uma rápida e empolgante expansão desde o final da década de 1990. Tal crescimento pode ser explicado pelo aumento do interesse popular em alimentos de alto valor nutricional, bem como outras inúmeras aplicações desse produto na produção animal. Atualmente em torno de 1.500 toneladas de pólen são produzidas anualmente em todo o mundo. Apesar da importância econômica, social e ecológica assumida por esse setor da cadeia produtiva apícola, poucos estudos vêm abordando o tema, desde o fim da década de 1960. Tal desinteresse científico fez com que diversos aspectos relacionados às técnicas de manejo mais adequadas permanecessem pouco entendidos ou até mesmo nunca validados. Como agravante, um acentuado declínio populacional vem sendo percebido nas espécies de polinizadores, em especial A. mellifera. Apesar da gravidade e recorrência, tal fenômeno ainda é pouco entendido. Inúmeros agentes parecem exercer algum tipo de influencia negativa na biologia e fisiologia das abelhas melíferas (pesticidas, patógenos, ectoparasitas e perda de habitat), porém nenhum desses fatores foi comprovadamente identificado como desencadeador. Hoje a hipótese emergente, mais aceita entre os pesquisadores da área, trata do possível efeito sinergístico desses fatores como possível desencadeador dessa síndrome. É nesse contexto que estudos relativos à sanidade dessas abelhas se tornaram essenciais para a conservação da espécie e de seus serviços ecológicos. O pólen como imunoefetor e mitigador do estresse oxidativo se tornou, portanto, uma das mais proeminentes alternativas para proteção das abelhas A. mellifera. A pesquisa teve como principal objetivo a obtenção de informações que propiciassem o melhoramento das práticas vigentes de produção de pólen apícola, além do melhor entendimento do efeito do pólen no sistema imunológico de abelhas melíferas (analisado através do estudo da prevalência de patógenos) e no sistema de defesa antioxidante desses insetos. Este estudo traz informações importantes sobre o desenvolvimento de um sistema produtivo de pólen apícola mais eficaz. A utilização de populações coloniais de tamanhos médios (entre 19.000 e 30.000 indivíduos), combinada com suplementação de carboidrato, foi capaz de produzir resultados produtivos vantajosos. Também concluímos que apiários de produção devem ser prioritariamente instalados em regiões de temperaturas tropicais (com menores amplitudes térmicas), cujo ponto de orvalho também é elevado (alta umidade média) e com períodos moderados de precipitação (porém com frequência regular). Também concluimos que o uso de rainhas inseminadas deve ser considerado pelos apicultores com o objetivo de melhorar a suas produções, uma vez que tal técnica é capaz de produzir resultados mais rápidos e potencialmente mais duradouros do que as técnicas de seleção unilaterais mais comumente usadas nos sistemas produtivos de pólen no Brasil. Os dados obtidos nessa pesquisa também nos mostram indícios de que a expressão relativa dos genes PRX5, SOD2 e GSTS4 respondem significativamente à exposição ao herbicida Paraquat. Por este motivo, novos estudos são necessários para elucidar a real possibilidade dos mesmos serem utilizados como marcadores biológicos para a intoxicação causada por esse herbicida. Modificações significativas também foram observadas na prevalência de patógenos como Nosema, DWV e SBV (quando abelhas foram expostas ao Paraquat). Essa pesquisa destaca os efeitos mitigativos do pólen na redução do estresse oxidativo causado pela exposição ao Paraquat. As taxas de sobrevivência, promovidas por dietas ricas em pólen, parecem também estar ligadas à regulação positiva de genes antioxidantes como os CYPs, SODs, VG e GSTs assim como a menores cargas de IAPV, Nosema sp, e espécies tripanosomatídeas. Este é um indicativo da eficácia do pólen como antioxidante e imunoefetor, assim como uma possível alternativa para a manutenção da saúde das abelhas no mundo todo. / The demand for bee pollen has significantly increased in the last two decades. This growing consuption can be explained by the increasing incorporation of this product into human diets, as well as the efficiency of this product in improving livestock production. Currently around 1,500 tonnes of pollen are produced annually worldwide. Despite the economic, social and ecological importance assumed by this sector of the beekeeping industry chain, few studies have approached the subject since 1960. As a consequence of such scientific negligency, several aspects related to productive management remain poorly understood or even never validated. To make matters worse, a sharp population decline has been noticed in pollinator species, especially A. mellifera, since 2006. No single cause has been identified for these dramatic losses, but rather multiple interacting factors are likely responsible (such as pesticides, malnutrition, habitat loss, and pathogens). In this context, studies addressing the health of honey bees have become essential for the conservation of this pollinator as well as its ecological services. Thus, Pollen as imunoefetor and potencial source of antioxidants has became one of the most prominent alternatives for honey bees protection. This research aimed to obtain information able to foster the improvement of pollen production. We also tested the effects of a widely used herbicide on the physiology of honey bees, specifically focusing the effects of Paraquat on the expression of antioxidant-related genes. In doing so, we simultaneously identify the dynamics of pathogen prevalence when bees are exposed to different concentrations of Paraquat. Finally, we investigate the effect of pollen (added to the diet of tested bees) on both oxidative stress and pathogen loads. This study provides important information for the development of a more eficiente pollen productive system. The use of mid-sized swarms (e.g. 19,000 to 30,000 individuals) combined with carbohydrate supplementation is able to provide advantageous productive results. We also concluded that apiaries should prioritarily be settled in regions which present tropical weather (narrow temperature range), the humidity is high and the precipitation is frequent. We were able to conclude that the use of inseminated queens must be considered by beekeepers in order to improve their production, once this technique is able to produce result improvement faster than other unilateral breeding techniques. The data obtained in this study also showed us evidences that the relative expression of genes such PRX5, SOD2 and GSTS4 respond to exposure to the herbicide Paraquat. Therefore, further studies are required to better elucidate the real possibility of those antioxidante related genes to be applied as biological markers for intoxication produced by this herbicide. Significant changes were also observed in the found levels of pathogens such as Nosema, DWV and SBV (when bees were exposed to Paraquat). This research highlights the mitigating effects of pollen on reducing the oxidative stress caused by Paraquat exposure. Survival rates promoted by pollen-rich diets also seems to be linked to upregulation of genes such as CYPs, SODs, VG and GSTs, as well as reduced prevalence of IAPV, Nosema sp and tripanosomatyd species. This research sheds light into the antioxidant and imunoefetor effects of pollen as well as the promising use of those pollerich diets as alternative for improving honey bee\'s health.

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O Brasil é um país megadiverso em herpetofauna, e do total da diversidade brasileira, aproximadamente 30% das espécies de répteis e 27% das espécies de anfíbios ocorrem no estado de São Paulo. A grande urbanização e o desmatamento acentuado têm ocasionado o aumento de encontros entre a herpetofauna e a população da capital e das outras cidades do estado. Esse fato faz com que algumas espécies, antes florestais, sejam atualmente consideradas sinántropicas. Répteis e anfíbios são amplificadores e reservatórios conhecidos de vários patógenos, mas o papel destes animais no ciclo de doenças e o potencial vetorial dos ácaros ectoparasitas desses vertebrados são ainda pouco conhecidos. Répteis e anfíbios são parasitados por ácaros da ordem Trombidiformes, pertencentes a 5 famílias (Cloacaridae, Pterygosomatidae, Harpirhynchidae, Trombiculidae e Leeuwenhoekiidae). Com exeção de Cloacaridae, as outras ocorrem na América do Sul. Dessa forma, a situação fragmentária dos registros de Trombidiformes no estado de São Paulo, sua complexidade taxonômica e a escassês de informações sobre sua participação na epidemiologia de doenças, foram os principais motivos que levaram à proposição do presente estudo. Os ácaros Trombidiformes de répteis e anfíbios, que estão depositados na coleção acarológica de Instituto Butantan (IBSP) foram revisados e alguns identificados. Igualmente, aqueles ácaros obtidos na recepção de animais do Instituto Butantan e de coletas em campo foram também identificados. Parte do material foi preparada para estudos moleculares e inferência filogenética, usando genes ribossomais e mitrocondriais, e parte foi investigada para a presença de Rickettsia spp., Coxiella spp. e Hepatozoon spp. As seguintes espécies de ácaros foram identificadas, Geckobia hemidactyli, Ophioptes parkeri, O. brevipilis, O. longipilis, Eutrombicula alfreddugesi, Fonsecia ewingi, Hannemania hepatica, H. minor e H. yungicola. Foi descrita uma espécie nova de Ophioptes, sendo a primeira deste gênero parasitando viperídeos. Todos os registros de hospedeiro são novos, assim como, algumas localidades são novos registros de ocorrência para as espécies G. hemidactyli, H. minor e H. yungicola. Foi proposta uma filogenia utilizando-se o gene 18S V4 rRNA da ordem Trombidiformes. As sequências obtidas foram analisadas juntamente com aquelas depositadas no GenBank. Não foi detectada a presença de patógenos nos ácaros e nem nos hospedeiros investigados / Brazil is a megadiverse country in herpetofauna, and appoximately 30% of the reptile species, and 27% of the amphibian species ocurr in the state of São Paulo. The high urbanization and the marked deforestation have increase the amount of human-herpetofauna encounters in the capital city and in the enviroment. This fact made some species to be considered currently as sinantropic. Reptiles and amphibians are known amplifiers and reservoirs of several pathogens, yet the role of these animals in the cycle of diseases and the vector potencial of the ectoparasitic mites of these vertebrates are poorly known. Reptiles and amphibians are parasitized by mites of the Trombidiformes order of 5 families (Cloacaridae, Pterygosomatidae, Harpirhynchidae, Trombiculidae e Leeuwenhoekiidae). These families ocurre in South America, except for Cloacaridae. Thereby, the fragmentary records of Trombidiformes in the state of São Paulo, their taxonomic complexity and the scarce information regarding their role in the epidemiology of diseases, were the main reasons to pursue the proposition of the present study. Trombidiformes mites of reptiles and ambhibians deposited in the acarological collection of the Instituto Butantan (IBSP) were reviewed and some of them were identified. In the same way, mites obtained at the animal reception site of the instituto Butantan, and from field collections were also identified. Part of this material was prepared for molecular studies and phylogenetic inference using ribosomal and mithocondrial genes, and another part of the material was used to assess the presence of Rickettsia spp., Coxiella spp. and Hepatozoon spp. The following species were identified: Geckobia hemidactyli, Ophioptes parkeri, O. brevipilis, O. longipilis, Eutrombicula alfreddugesi, Fonsecia ewingi, Hannemania hepatica, H. minor and H. yungicola. A new species of Ophioptes was described, being the first of this genu parasitizing viper snakes. All the hosts records are new, as well as, some of the localities are new records in the state for G. hemidactyli, H. minor e H. yungicola. A phylogeny using the 18S V4 rRNA gene was proposed. The obtained sequences and the sequences retrieved from the Genbank database were analized together. Pathogens were not detected in the mites nor in their hosts

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-21T14:16:54Z No. of bitstreams: 1 Cintia de Sousa Bezerra.pdf: 529172 bytes, checksum: 3f8bd6778995572053eaacf5a2bbb510 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T14:16:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cintia de Sousa Bezerra.pdf: 529172 bytes, checksum: 3f8bd6778995572053eaacf5a2bbb510 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Vine decline of melons caused by Monosporascus cannonballus is a destructive disease worldwide. To implement a meaningful management of plantation diseases, it is important to have an understanding of the population diversity of the pathogen. The aims of this study were assay de genetic structure of M. cannonballus isolates from Brazil and compare this isolates with isolates form Spain. The population genetic structure of M. cannonballus was examined by applying ISSR and mycelial compatibility tests. Based on the frequencies of MCGs, and ISSR were estimated the genotype diversity indexes, as well as its richness and evenness components. All analyses were performed by R, NTSYS and PopGen software. The isolate were from 7 plantations in Mossoró in state of Rio Grande do Norte, Quixeré and Icapuí in state of Ceará. The seven plantations showed low genetic distance between them (GST 0.004 to 0.068), when grouped into two subpopulations CE and RN genetic diversity (GST 0.105) between them was also low, reflecting a high amount of gene flow (Nm = 31), genetic diversity within subpopulations (Hs = 0.2277) was 98% of the total genetic diversity of the population (HT = 0.2314). The genotypic diversity estimated by Sttodart and Taylor was 10% of the maximum possible. Four MC groups were found amongst 58 isolates from Brazil, whereas in Spain 6 MC were found in only 11 isolates. None Brazilian isolates was compatible with Spanish isolates. Genetic variability was low and similar in the subpopulations (Icapuí, Quixeré and Mossoró) from Brazil. The genotypic diversity for Brazilian population was lower compared with the Spanish population. Based on these data, the Spanish population was more diverse than the Brazilian population. No significant difference in diversity exists between Icapui, Quixere and Mossoró subpopulations. But significant difference in diversity exists between the Brazilian and Spanish populations of M. cannonballus. / O declínio das ramas do meloeiro causado pelo fungo Monosporascus cannonballus, vem causando prejuízos nas áreas de cultivo de melão em todo o mundo. Para o desenvolvimento de estratégias de manejo é essencial conhecer a estrutura genética da população do patógeno. Os objetivos deste estudo foram descrever a estrutura genética e as forças evolutivas que atuam sobre a população de M. cannonballus, e comparar a população Brasileira a isolados coletados na Espanha. Os isolados utilizados foram coletados em sete áreas de plantio comercial nos municípios de Mossoró no Rio Grande do Norte, Quixeré e Icapuí no Ceará. Foi feita a extração do DNA genômico, seguida de uma reação ISSR para a análise genética da população. Testes de incompatibilidade micelial foram realizados em meio BDA pareando os isolados consigo e com os demais para formar grupos. Com base nas freqüências de MCGs foram calculados índices de diversidade genotípica e seus componentes de riqueza e equitabilidade. Os dados obtidos foram análisados nos programas R, NTSYS e PopGen. As sete areas coletadas apresentaram baixa distancia genética entre si (GST 0,004-0,068), quando agrupadas em duas subpopulações CE e RN a diversidade genétia (GST 0,105) entre elas ainda foi baixa refletindo num alto valor de fluxo gênico (Nm=31) e a diversidade genética dentro das sub-populações (HS = 0,2277) representou 98% da diversidade genética total da população estudada (HT = 0,2314). A diversidade genotípica estimada pelo índice G foi 10% do máximo possível. Foram formados 4 MCG entre os 58 isolados do Brasil, enquanto na Espanha 6 grupos foram formados entre apenas 11 isolados. Os isolados do Brasil não foram compatíveis com os da Espanha. Houve uma diferença significativa na diversidade entre as populações da Espanha e Brasil, enquanto que entre as subpopulações brasileiras não houve diferença.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-22T12:20:46Z No. of bitstreams: 1 Maria Geane Fontes.pdf: 821903 bytes, checksum: 4445cab0572746ea891f8154c542c186 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T12:20:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Geane Fontes.pdf: 821903 bytes, checksum: 4445cab0572746ea891f8154c542c186 (MD5) Previous issue date: 2013-02-21 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The fusarium wilt is a major disease in tomato and cause reduction in productivity and product quality. This study aimed to evaluate the efficiency of Trichoderma species and yeasts as agents biocontrollers of fusarium wilt in tomato caused by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici race 3. For this, tomato seedlings at 21 days were transplanted to pots containing soil infested with 50 g of substrate colonized with F. oxysporum f. sp. lycopersici and with Trichoderma (8g/vaso). In the experiment aiming at the selection of yeast inoculation was performed by the method of root pruning where tomato seedlings at 21 days were immersed in cell suspension (1.5 x107 cells/mL) of yeast and transplanted to pots, previously infested structures with the pathogen. We also assessed the effect of different dosages of inoculum of Trichoderma (2, 4, 6, 8 and 10g) and different concentrations of yeast (104, 105, 106, 107, 108 cells/mL). The antagonistic activity of Trichoderma in vitro was assessed by base pairing in culture. Antagonism of yeast was performed by means of continuous groove, the center of the Petri dish and two discs culture medium pathogen positioned 0.2 cm from opposite ends of the plate. Of the 48 isolates of Trichoderma tested four (T25, LCB72, LCB80 and LCB 48Te) were the most effective in reducing disease severity, and the isolate T25 promoted the highest level of disease control (71.2%). The values of the effective dose for 50% reduction in disease severity (ED50), the lowest values were presented by isolated LCB 48Te (6.8 g) and LCB80 (7.2 g), indicating that they are more effective in controlling of the disease. Of the 45 tested yeasts, four (Hanseniaspora opuntia, Pichia kluyveri, P. caribbica and P. fermentans) decreased by 100% severity of fusarium wilt. The values of the effective concentration for 50% reduction in disease severity (EC50), the lowest values were presented by isolated 28FR (2.1x106 cells/mL) and 32FR (2.3x106 cells/mL), indicating they are the most effective in controlling the disease. With regard to the production of the four yeast killer phenotype presented as positive. In in vitro tests, Trichoderma T25, LCB72, LCB80 and LCB 48Te completely inhibited the pathogen, and the isolated yeast 39F2B was the most effective in inhibiting the mycelial growth of the pathogen. / A murcha-de-fusário é uma das principais doenças na cultura do tomateiro e causa redução na produtividade e qualidade do produto. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência de espécies de Trichoderma e de leveduras como agentes biocontroladores da murcha-de-fusário em tomateiro causada por Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, raça 3. Para isto, plântulas de tomateiro aos 21 dias foram transplantadas para vasos contendo solo, infestado com 50 g de substrato colonizado com F. oxysporum f. sp. lycopersici e com os isolados de Trichoderma (8g/vaso). No experimento visando à seleção de leveduras, a inoculação foi efetuada pelo método do corte de raízes, onde plântulas de tomateiro, aos 21 dias foram imersas na suspensão de células (1,5x107 células/mL) de leveduras e transplantadas para vasos, previamente infestado com as estruturas do patógeno. Também foi avaliado o efeito de diferentes dosagens de inóculo de Trichoderma (2, 4, 6, 8 e 10g) e diferentes concentrações de leveduras (104, 105, 106, 107, 108 células/mL). A atividade antagônica de Trichoderma in vitro foi avaliada através do pareamento de cultura. O antagonismo de leveduras foi realizado, por meio de estria contínua, no centro da placa de Petri e dois discos de meio de cultura do patógeno posicionados a 0,2 cm das extremidades opostas da placa. Dos 48 isolados de Trichoderma testados quatro (T25, LCB72, LCB80 e LCB 48Te) foram os mais eficientes na redução da severidade da doença, sendo o isolado T25 o que proporcionou maior nível de controle da doença (71,2%). Quanto aos valores da dose efetiva para reduzir em 50% a severidade da doença (DE50), os menores valores foram apresentados pelos isolados LCB 48Te (6,8 g) e LCB 80 (7,2 g), indicando serem mais efetivos no controle da doença. Das 45 leveduras testadas, quatro (Hanseniaspora opuntia, Pichia kluyveri, P. caribbica e P. fermentans) reduziu em 100% a severidade da murcha-de-fusário. Quanto aos valores da concentração efetiva para reduzir em 50% a severidade da doença (CE50), os menores valores foram apresentados pelos isolados 28FR (2,1x106 células/mL) e 32FR (2,3x106 células/mL), indicando serem os mais efetivas no controle da doença. Com relação à produção do fenótipo killer as quatro leveduras se apresentaram como positivas. Nos testes in vitro os isolados de Trichoderma T25, LCB72, LCB80 e LCB 48 Te inibiram completamente o fitopatógeno, e o isolado de levedura 39F2B foi o mais eficiente na inibição do crescimento micelial do fitopatógeno

A produção de pólen apícola vem experimentando uma rápida e empolgante expansão desde o final da década de 1990. Tal crescimento pode ser explicado pelo aumento do interesse popular em alimentos de alto valor nutricional, bem como outras inúmeras aplicações desse produto na produção animal. Atualmente em torno de 1.500 toneladas de pólen são produzidas anualmente em todo o mundo. Apesar da importância econômica, social e ecológica assumida por esse setor da cadeia produtiva apícola, poucos estudos vêm abordando o tema, desde o fim da década de 1960. Tal desinteresse científico fez com que diversos aspectos relacionados às técnicas de manejo mais adequadas permanecessem pouco entendidos ou até mesmo nunca validados. Como agravante, um acentuado declínio populacional vem sendo percebido nas espécies de polinizadores, em especial A. mellifera. Apesar da gravidade e recorrência, tal fenômeno ainda é pouco entendido. Inúmeros agentes parecem exercer algum tipo de influencia negativa na biologia e fisiologia das abelhas melíferas (pesticidas, patógenos, ectoparasitas e perda de habitat), porém nenhum desses fatores foi comprovadamente identificado como desencadeador. Hoje a hipótese emergente, mais aceita entre os pesquisadores da área, trata do possível efeito sinergístico desses fatores como possível desencadeador dessa síndrome. É nesse contexto que estudos relativos à sanidade dessas abelhas se tornaram essenciais para a conservação da espécie e de seus serviços ecológicos. O pólen como imunoefetor e mitigador do estresse oxidativo se tornou, portanto, uma das mais proeminentes alternativas para proteção das abelhas A. mellifera. A pesquisa teve como principal objetivo a obtenção de informações que propiciassem o melhoramento das práticas vigentes de produção de pólen apícola, além do melhor entendimento do efeito do pólen no sistema imunológico de abelhas melíferas (analisado através do estudo da prevalência de patógenos) e no sistema de defesa antioxidante desses insetos. Este estudo traz informações importantes sobre o desenvolvimento de um sistema produtivo de pólen apícola mais eficaz. A utilização de populações coloniais de tamanhos médios (entre 19.000 e 30.000 indivíduos), combinada com suplementação de carboidrato, foi capaz de produzir resultados produtivos vantajosos. Também concluímos que apiários de produção devem ser prioritariamente instalados em regiões de temperaturas tropicais (com menores amplitudes térmicas), cujo ponto de orvalho também é elevado (alta umidade média) e com períodos moderados de precipitação (porém com frequência regular). Também concluimos que o uso de rainhas inseminadas deve ser considerado pelos apicultores com o objetivo de melhorar a suas produções, uma vez que tal técnica é capaz de produzir resultados mais rápidos e potencialmente mais duradouros do que as técnicas de seleção unilaterais mais comumente usadas nos sistemas produtivos de pólen no Brasil. Os dados obtidos nessa pesquisa também nos mostram indícios de que a expressão relativa dos genes PRX5, SOD2 e GSTS4 respondem significativamente à exposição ao herbicida Paraquat. Por este motivo, novos estudos são necessários para elucidar a real possibilidade dos mesmos serem utilizados como marcadores biológicos para a intoxicação causada por esse herbicida. Modificações significativas também foram observadas na prevalência de patógenos como Nosema, DWV e SBV (quando abelhas foram expostas ao Paraquat). Essa pesquisa destaca os efeitos mitigativos do pólen na redução do estresse oxidativo causado pela exposição ao Paraquat. As taxas de sobrevivência, promovidas por dietas ricas em pólen, parecem também estar ligadas à regulação positiva de genes antioxidantes como os CYPs, SODs, VG e GSTs assim como a menores cargas de IAPV, Nosema sp, e espécies tripanosomatídeas. Este é um indicativo da eficácia do pólen como antioxidante e imunoefetor, assim como uma possível alternativa para a manutenção da saúde das abelhas no mundo todo. / The demand for bee pollen has significantly increased in the last two decades. This growing consuption can be explained by the increasing incorporation of this product into human diets, as well as the efficiency of this product in improving livestock production. Currently around 1,500 tonnes of pollen are produced annually worldwide. Despite the economic, social and ecological importance assumed by this sector of the beekeeping industry chain, few studies have approached the subject since 1960. As a consequence of such scientific negligency, several aspects related to productive management remain poorly understood or even never validated. To make matters worse, a sharp population decline has been noticed in pollinator species, especially A. mellifera, since 2006. No single cause has been identified for these dramatic losses, but rather multiple interacting factors are likely responsible (such as pesticides, malnutrition, habitat loss, and pathogens). In this context, studies addressing the health of honey bees have become essential for the conservation of this pollinator as well as its ecological services. Thus, Pollen as imunoefetor and potencial source of antioxidants has became one of the most prominent alternatives for honey bees protection. This research aimed to obtain information able to foster the improvement of pollen production. We also tested the effects of a widely used herbicide on the physiology of honey bees, specifically focusing the effects of Paraquat on the expression of antioxidant-related genes. In doing so, we simultaneously identify the dynamics of pathogen prevalence when bees are exposed to different concentrations of Paraquat. Finally, we investigate the effect of pollen (added to the diet of tested bees) on both oxidative stress and pathogen loads. This study provides important information for the development of a more eficiente pollen productive system. The use of mid-sized swarms (e.g. 19,000 to 30,000 individuals) combined with carbohydrate supplementation is able to provide advantageous productive results. We also concluded that apiaries should prioritarily be settled in regions which present tropical weather (narrow temperature range), the humidity is high and the precipitation is frequent. We were able to conclude that the use of inseminated queens must be considered by beekeepers in order to improve their production, once this technique is able to produce result improvement faster than other unilateral breeding techniques. The data obtained in this study also showed us evidences that the relative expression of genes such PRX5, SOD2 and GSTS4 respond to exposure to the herbicide Paraquat. Therefore, further studies are required to better elucidate the real possibility of those antioxidante related genes to be applied as biological markers for intoxication produced by this herbicide. Significant changes were also observed in the found levels of pathogens such as Nosema, DWV and SBV (when bees were exposed to Paraquat). This research highlights the mitigating effects of pollen on reducing the oxidative stress caused by Paraquat exposure. Survival rates promoted by pollen-rich diets also seems to be linked to upregulation of genes such as CYPs, SODs, VG and GSTs, as well as reduced prevalence of IAPV, Nosema sp and tripanosomatyd species. This research sheds light into the antioxidant and imunoefetor effects of pollen as well as the promising use of those pollerich diets as alternative for improving honey bee\'s health.

Las especies de hongos entomopatógenos nativos presentan en general mayor especificidad para los hospedadores de los cuales fueron aislados originalmente y además se adaptan mejor a las condiciones ambientales del lugar de origen, que los hongos patógenos procedentes de hospedantes y lugares diferentes. El objetivo general de esta tesis es estudiar la diversidad y patogenicidad de hongos patógenos de insectos plaga de la yerba mate en la región del Noreste Argentino. Los objetivos específicos son: 1) Relevar, aislar e identificar los hongos entomopatógenos de insectos plaga en cultivos de yerba mate y suelos de importancia en la región del NEA (Misiones). 2) Estimar la patogenicidad de los hongos entomopatógenos aislados e identificados en condiciones controladas de laboratorio. 3) Preservar los cultivos fúngicos obtenidos en una colección de cultivos de referencia. 4) Caracterizar los hongos entomopatógenos mediante técnicas de biología molecular

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:15:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaAFP_DISSERT.pdf: 1443517 bytes, checksum: e637327b3212fa22033a29f0e0c82333 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The occurrence of root diseases is one of the main reasons of yield loss in melon crop, especially the pathogens that causes root and collar rot, as the fungi Fusarium solani (Mart.) Sacc., Macrophomina phaseolina (Tassi) Gold. and Rhizoctonia solani Kuhn, being observed in muskmelon either alone or associated. The use of crop residues and plant materil, besides the improvement in the physical properties of the soil, also favors microbial activity of the species presents in this environment and affects negatively onpathogens population. Therefore, the objective of this work was to evaluate the associations of F. solani, M. phaseolina and R. solani in the incidence and severity of root rot and fresh and dry weight of muskmelon and verify the effect of green manure in root rot caused by these pathogens alone or associated. The experiment was conducted in two stages, in a greenhouse. The first stage evaluated the association of F. solani, M. phaseolina and R. solani causing root rot in melon, using a randomized block design with 8 treatments (F. solani; M. phaseolina, R. solani, F. solani + M. phaseolina, F. solani + R. solani; M. phaseolina + R. solani, F. solani + M. phaseolina + R. solani; non-infested soil) and 8 repetitions with experimental unit of one pot (3.5 L) with 2 plants. The characteristics evaluated were the incidence of root rot in melon plants at the end of the cycle; disease severity based on a scale notes, and the fresh and dry weight of muskmelon. At the second stage, evaluated the effects of green manure in the association of these pathogens in muskmelon, which was conducted one experiment with Jack beans (Canavalia ensiformis L. DC) and another with Pearl millet (Pennisetum glaucum (L.) R. BR.). The experiments were performed simultaneously in a randomized block design with 8 x 4 factorial {8 types of fungi / association (M. phaseolina, R. solani, F. solani, M. phaseolina + R. solani; M. phaseolina + F. solani, R. solani + F. solani; M. phaseolina + R. solani + F. solani; non-infested soil), 4 forms of management [incorporated, in coverage, polyethylene film (mulching) and without managment]} and 4 repetitions. The characteristics evaluated were the incidence of root rot of melon plants at the end of the cycle, and the fresh and dry weight of muskmelon. The results of disease incidence were submitted to the non-parametric test of Kruskal-Wallis and the fresh and dry weight of muskmelon were analyzed by the Scott-Knott test, both with significance level of 5% of probability (α = 0.05%). At stage 1, the treatment with the three pathogens F. solani, M. phaseolina and R. solani associated resulted in lower incidence of plants with symptoms and was not statistically different from the control. The pathogen R. solani was the least prevalent in the associations. The lowest accumulation of fresh and dry matter happened when the soil was infested with Fusarium solani alone. At stage 2, Jack beans in coverage provided lower incidence of root rot in muskmelon with Fusarium solani alone and in triple association (F. solani +M. phaseolina and R. solani). The use of Pearl millet had no effect on root rot incidence in most treatments. In both experiments (Jack beans andPearl millet), Macrophomina phaseolina was the fungus that prevailed in almost all associations. Jack beans and millet did not increase the fresh and dry weight of muskmelon in most treatments / A ocorrência de doenças radiculares representa uma das principais causas de perda de rendimento na cultura do melão, com destaque para os patógenos causadores das podridões de raízes e colos, como os fungos Fusarium solani (Mart.) Sacc., Macrophomina phaseolina (Tassi) Gold. e Rhizoctonia solani Kuhn, sendo observados no meloeiro tanto de forma isolada quanto associada. A utilização de restos de cultura e material vegetal, além de melhorar as propriedades físicas do solo, favorece a atividade microbiana das espécies presentes neste ambiente e interfere negativamente sobre a população de patógenos. Portanto, objetiva-se com este trabalho avaliar as associações dos patógenos F. solani, M. phaseolina e R. solani na incidência e severidade de podridão radicular e na massa da matéria fresca e seca do meloeiro e verificar o efeito de materiais vegetais na podridão radicular causada por estes patógenos isolados ou associados. O experimento foi conduzido em duas etapas, em casa de vegetação, sendo que na primeira avaliou-se a associação de F. solani, M. phaseolina e R. solani causando podridão radicular em meloeiro, quando foi utilizado o delineamento em blocos casualizados com 8 tratamentos (F. solani; M. phaseolina; R. solani; F. solani + M. phaseolina; F. solani + R. solani; M. phaseolina + R. solani; F. solani + M. phaseolina + R. solani; solo não infestado) e 8 repetições, com unidade experimental de 1 vaso (3,5 L) com duas plantas. As características avaliadas foram: incidência de podridão radicular nas plantas de melão no fim do ciclo, severidade da doença com base em escala de notas, além da matéria fresca e seca das plantas de melão. Na segunda etapa, foi avaliado o efeito de materiais vegetais na associação desses patógenos, também em meloeiro, onde foi realizado um experimento com Feijão-de-porco (Canavalia ensiformis L. DC) e outro com Milheto (Pennisetum glaucum (L.) R. BR.). Os experimentos foram conduzidos simultaneamente, em delineamento experimental de blocos casualizados, com esquema fatorial 8 x 4, sendo 8 tipos de fungos/associação (M. phaseolina; R. solani; F. solani; M. phaseolina + R. solani; M. phaseolina + F. solani; R. solani + F. solani; M. phaseolina + R. solani + F. solani; solo sem inoculação), 4 formas de manejo (incorporado, cobertura, mulching e sem manejo) e 4 repetições. As características avaliadas foram: incidência de podridão radicular nas plantas de melão no fim do ciclo, a massa da matéria fresca e seca das plantas de melão. Os resultados de incidência de doença obtidos foram submetidos ao teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e a massa damatéria fresca e seca foram analisados pelo teste de Scott-Knott, ambos com nível de significância a 5% de probabilidade (α = 0,05%). Na etapa 1, o tratamento no qual foram associados três patógenos F. solani, M. phaseolina e R. solani propiciou menor porcentagem de plantas com sintomas da doença e não diferiu estatisticamente da testemunha. O fitopatógeno R. solani foi o que menos prevaleceu nas associações. Quando o solo foi infestado com Fusarium solani, isoladamente, o melão obteve baixo acúmulo de matéria fresca e seca. Na etapa II, o feijão-de-porco em cobertura proporcionoiu menor incidência de podridão radicular do meloeiro quando o Fusarium solani estava sozinho e em associação tripla (F. solani +M. phaseolina e R. solani). A utilização do milheto não apresentou efeito na incidência de podridão radicular na maioria dos tratamentos. Tanto na utilização do feijão-de-porco quanto do milheto, M. phaseolina foi o fungo que prevaleceu na maioria das associações nas quais estava presente. O feijão-de-porco e o milheto não proporcionaram aumento na massa da matéria fresca e seca do meloeiro na maioria dos tratamentos