Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4575.pdf: 8449634 bytes, checksum: ba1e1613fcddc5df7c92aac17ceb58cc (MD5) Previous issue date: 2011-07-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / Chemical characterization by liquid chromatography and chemometric analysis of Bauhinia species (popularly known as pata-de-vaca ) with applications in quality control of commercial samples. The infusion of leaves from Bauhinia species, is commonly used in the treatment to combat various diseases, among them diabetes. Studies show that B. forficata species possesses the most hypoglycemic activity among the species of the genus. However, due to the extreme morphological similarity between its leaves in comparison to other species , occasionally the popular use in the decoction of leaves is improper. Thus, it is necessary to develop methods of quality control of herbal drugs, in order to certify the authenticity of them. The chemical profiles (fingerprints) obtained by chromatographic analysis of plant extracts, brings a large amount of information, providing multivariable systems that can be used as a good parameter for quality control. The present study reports the separation optimization of the constituents obtained from aqueous extract on Bauhinia species by gradient elution on reverse phase. The chromatograms were first aligned using the MatLab® software and the COW algorithm (Correlation Optimized Warping) and after, the chromatograms were subjected on exploratory chemometric analysis Principal Component Analysis (PCA) and Hierarchical Cluster Analysis (HCA) and used to create models for supervised chemometric classification (KNN, SIMCA and PLS-DA) performed using the Pirouette® software. 170 chromatograms of extracts obtained from leaves of botanically identified trees from three different species - B. forficata, B. longifolia and B. variegata - were used on analysis by PCA and HCA, which allowed the visualization of the distribution of 15 commercial samples of "pata-de-vaca". Those samples were also analyzed using the supervised classification models, and among them, 3 were classified as B. forficata, 6 were classified as B. longifolia and 5 of them were classified as B. variegata. For one of the samples it was not possible to classify its species due to large difference among the determinations obtained from the three distinct analytic tools / Caracterização Química por Cromatografia Líquida e Análise Quimiométrica de espécies vegetais de Bauhinia com aplicação em controle de qualidade de amostras comerciais de pata-de-vaca . A infusão de folhas de espécies de Bauhinia, conhecida popularmente como pata-de-vaca , é comumente utilizada no tratamento a várias enfermidades, dentre elas o diabetes. Estudos demonstram que a espécie Bauhinia forficata é a que apresenta maior atividade hipoglicemiante dentre as espécies do gênero. Porém, devido à grande semelhança morfológica das folhas desta com as de outras espécies, ocasionalmente seu uso popular na decocção de suas folhas é feita de maneira inadequada. Desta forma, faz-se necessário o desenvolvimento de métodos para o controle de qualidade das drogas vegetais, com o objetivo de atestar a autenticidade destas. Os perfis químicos (fingerprints) obtidos por análises cromatográficas de extratos vegetais, trazem uma quantidade grande de informações, constituindo sistemas multivariados que podem ser utilizados como parâmetro de controle químico de qualidade. O presente trabalho relata a otimização da separação dos constituintes do extrato aquoso de espécies de Bauhinia por eluição gradiente no modo reverso. Posteriormente os cromatogramas foram alinhados utilizando-se o software MatLab® com o algoritmo COW (Correlation Optimized Warping) e, logo após, os cromatogramas foram submetidos a análises quimiométricas exploratórias (PCA e HCA) e usados para a criação de modelos quimiométricos supervisionados de classificação (KNN, SIMCA e PLS-DA) utilizando-se o software Pirouette®. Cento e setenta cromatogramas de extratos obtidos a partir das folhas de árvores identificadas botanicamente de três diferentes espécies - B. forficata, B. longifolia e B. variegata - foram utilizados para as Análise de Componentes Principais (PCA) e Análise de Agrupamento Hierárquico (HCA), que permitiram a visualização da distribuição nos eixos das PC s de 15 amostras comerciais de pata-de-vaca . Estas foram também analisadas utilizando-se os modelos supervisionados de classificação, onde de todas elas 3 foram classificadas como B. forficata, 6 delas classificadas como B. longifolia e 5 classificadas com B. variegata. Apenas para uma das amostras não foi possível a classificação de sua espécie devido a uma grande diferença entre as determinações dos três modelos distintos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-24Bitstream added on 2014-06-13T21:06:42Z : No. of bitstreams: 1 mazzini_rb_dr_jabo.pdf: 553447 bytes, checksum: 9c6222f701669fffbf029f7f1f092b0d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Espécies de Bauhinia têm sido muito cultivadas em jardins, parques e ruas. Como Bauhinia x blakeana (Bauhinia purpurea x Bauhinia variegata) não produz sementes, é essencial que seja multiplicado vegetativamente. O primeiro objetivo deste trabalho foi verificar a viabilidade da estaquia e da enxertia na propagação desse híbrido. Estacas semilenhosas foram coletadas nas quatro estações do ano e tratadas com diferentes concentrações de AIB. Para a enxertia, mudas de B. variegata e B. variegata var. candida foram usadas como porta-enxerto e os métodos de garfagem tipo inglês simples e borbulhia tipo “T” invertido foram testados. Os resultados desses experimentos indicaram que B. x blakeana pode ser multiplicado por estacas semilenhosas coletadas na primavera, sem o uso do fitorregulador AIB; no verão, dentre as concentrações avaliadas, recomenda-se a aplicação de 3.000 mg L-1 de AIB. Os métodos de enxertia, no entanto, não foram viáveis para a multiplicação desse híbrido. O segundo objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de telas de diferentes cores e condições de luminosidade sobre o desenvolvimento inicial de B. variegata e B. variegata var. candida. Plantas de B. variegata e de B. variegata var. candida apresentaram maior eficiência no uso de fotoassimilados quando foram cultivadas sob sol pleno, sendo essa a condição mais adequada para a formação de mudas dessas espécies / Bauhinia species have been much cultivated in gardens, parks and streets. As Bauhinia x blakeana (Bauhinia purpurea x Bauhinia variegata) does not produce seeds, it must be vegetatively propagated. The first objective of this work was to verify the viability of the cutting and grafting methods on the propagation of this hybrid. Semi-woody cuttings were collected in the four seasons and submitted to different IBA concentrations. For the grafting experiment, B. variegata and B. variegata var. candida plants were used as rootstocks and the splice-graft and T-budding methods were tested. The results indicated that B. x blakeana can be propagated by semi-woody cuttings collected in spring, without an IBA application; in summer, among the tested concentrations, the application of 3,000 mg L-1 of IBA is recommended. Both the splice graft and T-budding methods were not efficient for the propagation of this hybrid. The second objective of this work was to evaluate the influence of different color shade nets and light conditions on the initial development of B. variegata and B. variegata var. candida seedlings. B. variegata and B. variegata var. candida plants showed more efficiency in the use of their photo-assimilated compounds when they were cultivated under full sun, which is the most suitable condition for the seedling production of these species

Bauhinia forficata, Leguminosae, é conhecida popularmente como pata-devaca e seus principais constituintes químicos são flavonóides. Ë comumente usada como antidiabética, mas existem relatos a respeito de suas atividades antioxidante e antiedematogênica. A fim de avaliar-se o comportamento de seus constituintes químicos frente a variações de temperatura e umidade, realizou-se estudo de estabilidade acelerada (50 ºC ± 2 oC e 90% ± 5% U.R.), onde a substância química majoritária (SQM) serviu como marcador para os devidos cálculos e, portanto, o seu isolamento prévio tornou-se imprescindível. Um método devidamente validado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) foi utilizado para as análises e através das mesmas pode-se predizer uma reação de segunda ordem e, por conseguinte, um tempo de vida útil de 2,63 dias e um tempo de meia-vida de 23,65 dias. Avaliou-se, ainda, as atividades antioxidante (DPPH), antiedematogênica (edema em pata de ratos induzido pela carragenina) e anticolinesterásica (autobiografia). Para a atividade antioxidante, dos extratos testados, o butanólico foi o que demonstrou maior ação (54,73 µl/ml) sendo, no entanto, inferior ao padrão Ginkgo biloba (42,51 µl/ml). Na avaliação da atividade antiedematogênica, o extrato aquoso testado demonstrou um máximo de inibição de 76,5%. Ao testar-se a atividade anticolinesterásica de produtos isolados obtidos a partir de B. forficata, nenhuma ação significativa foi observada exigindo estudos complementares.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DayseCSC_DISSERT.pdf: 507696 bytes, checksum: 782930a6c60b8e6d0073baa1386c82e5 (MD5) Previous issue date: 2010-10-08 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / A 140,0 kDa lectin was purified and characterized from the mushroom Clavaria cristata. The purification procedures from the crude extract of the mushroom comprised gel filtration chromatography on Sephacryl s200 and ion exchange on Resource Q column. The purified lectin agglutinated all types of human erythrocytes with preference for trypsinized type O erythrocytes. The haemagglutinating activity is dependent of Ca 2+ ions and was strongly inhibited by the glycoprotein bovine submaxillary mucin (BSM) up to the concentration of 0, 125 mg/mL. The C. cristata lectin (CcL) was stable in the pH range of 2,5-11,5 and termostable up to 80 ?C. CcL molecular mass determined by gel filtration on a Superose 6 10 300 column was approximately 140,3 kDa. SDS polyacrilamide gel electrophoresis revealed a single band with a molecular mass of approximately 14,5 kDa, when the lectin was heated at 100 ?C in the presence or absence of ?-mercaptoethanol. CcL induced activation of murine peritoneal macrophages in vitro resulting in the release of nitric oxide (NO), reaching the maximum production at 24 h. In experimental paw oedema model in mice, CcL showed proinflammatory activity being able to induce oedema formation. Cell viability of HepG2, MDA 435 e 3T3 cell lines was examined after 72 h of incubation with CcL in different concentrations (0,5-50 ?g/mL). CcL inhibited HepG2 cells growth with an IC50 value of 50 ?g/mL. In the present work, the observed immunomodulatory and antiproliferative effects indicate CcL as a possible immunomodulator compound, interfering in the macrophages immune response, taking possible anti-parasitic, anti-tumoral effects or diagnostic and/or therapeutic / Uma lectina de 140,0 kDa foi purificada e caracterizada a partir do extrato prot?ico do fungo Clavaria cristata. O processo de purifica??o a partir do extrato bruto do fungo compreendeu uma cromatografia de gel filtra??o SEPHACRYL S200 e uma cromatografia de troca i?nica Resource Q em sistema FPLC-AKTA (Fast Protein Liquid Chromatography). A lectina de C. cristata (CcL) aglutinou todos os tipos de eritr?citos humanos com prefer?ncia pelos do tipo O tratados com tripsina. A atividade hemaglutinante de CcL se mostrou dependente do ?on c?lcio e foi fortemente inibida pela glicoprote?na mucina bovina (BSM) at? a concentra??o m?nima de 0,125 mg/mL. CcL foi est?vel numa ampla faixa de pH, que variou entre 2,5-11,5 e termoest?vel at? 80?C por uma hora. A massa molecular da CcL, determ inada por cromatografia de gel filtra??o Superose 6 10 300 GL em sistema de FPLC-AKTA foi de aproximadamente 140,3 kDa e uma eletroforese SDS-PAGE revelou uma ?nica banda com massa molecular de aproximadamente 14,5 kDa quando a lectina foi aquecida ? temperatura de 100 ?C. CcL induziu a ativa??o de macr?fagos murinos in vitro com conseq?ente libera??o de ?xido n?trico atingindo a m?xima produ??o de ?xido n?trico no tempo de 24 h. Em modelo experimental de edema de pata em camundongos, a lectina do fungo apresentou atividade pr?-inflamat?ria sendo capaz de induzir a forma??o do edema. A viabilidade celular das linhagens celulares HepG2, MDA 435 e 3T3 foi analisada ap?s incuba??o por 72 h com concentra??es de CcL (0,5-50 ?g/mL). O valor do IC50 foi obtido com a concentra??o de CcL de 50 ?g/mL para linhagem de c?lulas HepG2. No presente trabalho, os efeitos imunomodulat?rios e antiproliferativos foram observados apontando a CcL como um poss?vel imunomodulador, interferindo na resposta imune de macr?fagos levando a poss?veis efeitos anti-parasit?rios, anti-tumorais ou agente diagn?stico e/ou terap?utico

Bauhinia forficata, Leguminosae, é conhecida popularmente como pata-devaca e seus principais constituintes químicos são flavonóides. Ë comumente usada como antidiabética, mas existem relatos a respeito de suas atividades antioxidante e antiedematogênica. A fim de avaliar-se o comportamento de seus constituintes químicos frente a variações de temperatura e umidade, realizou-se estudo de estabilidade acelerada (50 ºC ± 2 oC e 90% ± 5% U.R.), onde a substância química majoritária (SQM) serviu como marcador para os devidos cálculos e, portanto, o seu isolamento prévio tornou-se imprescindível. Um método devidamente validado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) foi utilizado para as análises e através das mesmas pode-se predizer uma reação de segunda ordem e, por conseguinte, um tempo de vida útil de 2,63 dias e um tempo de meia-vida de 23,65 dias. Avaliou-se, ainda, as atividades antioxidante (DPPH), antiedematogênica (edema em pata de ratos induzido pela carragenina) e anticolinesterásica (autobiografia). Para a atividade antioxidante, dos extratos testados, o butanólico foi o que demonstrou maior ação (54,73 µl/ml) sendo, no entanto, inferior ao padrão Ginkgo biloba (42,51 µl/ml). Na avaliação da atividade antiedematogênica, o extrato aquoso testado demonstrou um máximo de inibição de 76,5%. Ao testar-se a atividade anticolinesterásica de produtos isolados obtidos a partir de B. forficata, nenhuma ação significativa foi observada exigindo estudos complementares.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-31T13:42:09Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Elga de Fátima Almeida - 2014.pdf: 1529680 bytes, checksum: ee90611c2799a2036aadcc8089f3bef6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-01T10:46:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Elga de Fátima Almeida - 2014.pdf: 1529680 bytes, checksum: ee90611c2799a2036aadcc8089f3bef6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-01T10:46:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Elga de Fátima Almeida - 2014.pdf: 1529680 bytes, checksum: ee90611c2799a2036aadcc8089f3bef6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-04-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The plant reproductive biology involves all the features (morphological, anatomical or physiological) of a species that participate in the reproduction of its individuals. The Fabaceae family is one of the most important of the Cerrado, the genus Bauhinia being one of the most diversified. Several studies with species of Bauhinia L. showed diversity in floral shapes, reproductive phenology, reproductive system and interactions with different groups of pollinators. In general, the Bauhinia species are outcrossing and have low reproductive efficiency. Bauhinia brevipes is common in the municipality of Goiás-GO and has floral features compatible with the syndrome chiropterophily: white flowers that release a strong odour overnight, producing large amounts of nectar with low sugar concentration. Flowers of B. brevipes may have reduced ovaries or anthers with low production of viable pollen, indicating that this species moves towards sexual separation in some flowers. Although the visit the bats to flowers were not seen, their flights over the plants were observed. A test of exclusion of diurnal pollinators showed the efficiency of nocturnal pollinators in B. brevipes. The flowers of B. brevipes not have herkogamy as the main factor to avoid inbreeding, but some flowers positioned above the anthers stigma were observed. The species present gametophytic selfincompatibility and therefore requires the pollinators visit to ensure pollinating pollen exchange among different and unrelated plants. Bauhinia brevipes has an average 20% of reproductive efficiency. In general, the species showed a high level of pollen limitation (0.73). The largest fruit production occurs in the middle position of the inflorescence. Most of fruit produced occurs in the median position of the inflorescence, when possibly the availability of pollen in the system is higher and resources are available for their development. / A biologia reprodutiva de plantas trata de diversos aspectos relacionados a mecanismos como o de polinização (e.g., morfologia e biologia floral, interação plantapolinizador), do sistema de reprodução (sistema sexual, de incompatibilidade, modos de reprodução – sexuada e assexuado-vegetativa), eficiência reprodutiva, dentre outros. A família Fabaceae é uma das mais importantes do Cerrado, sendo o gênero Bauhinia um dos mais diversificados. Diversos estudos realizados com espécies de Bauhinia L. mostraram a diversidade na fenologia, formas florais, sistema reprodutivo e interações com diferentes grupos de polinizadores. Embora aconteça autopolinização em algumas espécies do gênero, a xenogamia é a forma mais frequente de reprodução, e espécies autoincompatíveis são muito comuns. Bauhinia brevipes é comum no Cerrado da região do Município de Goiás-GO e possui características florais compatíveis com a síndrome da quiropterofilia: flores brancas que liberam odor forte durante a noite, produção de grande volume de néctar com baixa concentração de açúcar. Flores de B. brevipes podem apresentar ovário reduzido ou anteras com baixa produção de pólen viável, indicando que esta espécie caminha para separação sexual em algumas flores. Apesar de não serem visualizadas as visita dos morcegos às flores, que foram observados em sobrevoo na população, um teste de exclusão de polinizadores diurnos mostrou a eficiência dos polinizadores noturnos. As flores de B. brevipes não possuem hercogamia como principal fator para evitar a endogamia, porém existe na população uma porcentagem de flores com estigma posicionado acima do conjunto das anteras. A espécie apresenta autoincompatibilidade gametofítica e, portanto, necessita da visita de polinizadores para garantir a troca de pólen entre plantas diferentes e não aparentadas. Bauhinia brevipes apresenta uma eficiência reprodutiva em média de 20% das flores produzidas. De forma geral, a espécie apresentou um elevado índice de limitação polínica (0,73). A maior produção de fruto ocorre na posição mediana da inflorescência. As flores abertas nesta posição estão expostas, possivelmente, a uma alta disponibilidade de pólen no sistema, e os recursos maternos estão disponíveis em maior quantidade para o desenvolvimento de seus frutos.

O déficit hídrico decorrente da seca se estabelece quando a absorção de água pelas raízes não consegue atender as demandas da planta, entre as quais estão a fotossíntese e transpiração, essenciais ao crescimento vegetal. Para avaliar a influência de déficits hídricos de diferentes intensidades nas relações hídricas, trocas gasosas, crescimento e acúmulo de carboidratos de Bauhinia forficata Link, plantas foram cultivadas em casa de vegetação durante três meses em vasos de 20 L e submetidas aos seguintes regimes: regas diária (controle) e regas a cada 7 (7D) e 15 dias (15D) retornando as regas diárias nos regimes 7D e 15D aos 75 dias de experimento. Em intervalos quinzenais (15, 30, 45, 60, 75, 90 dias) foram avaliados a umidade do solo (Usolo), potencial hídrico foliar (wf), a fotossíntese em resposta a radiação fotossinteticamente ativa (AxPAR) para obtenção da assimilação liquida máxima (Amax) e do ponto de saturação luminoso (PARsat), área foliar total (AFT) e massas secas (MS) de folhas (MSf), caules (MSc) e raízes (MSr). Foi também coletado material vegetal para as análises bioquímicas quantitativas dos teores de açúcares solúveis totais (AST), redutores (AR), amido (S) e prolina (Pro) por métodos colorimétricos e qualitativos da composição de carboidratos solúveis neutros por HPAEC/PAD e análise de açúcares alcoóis por GC/MS. O déficit hídrico afetou as relações hídricas, fotossíntese e crescimento das plantas, sendo que os menores valores de Usolo observados nos tratamentos 7D e 15D respectivamente, coincidiram com os menores wf, Amax e acúmulo de MS. Alterações nos PARsat em resposta ao déficit hídrico foram observadas apresentando valores médios de 665, 275 e 254 mol fótons m-2 s-1 no Controle, 7D e 15D respectivamente. O retorno das regas diárias após 75 dias de experimento, promoveu a recuperação de Amax (7,8 e 9,6 mol CO2 m-2 s-1) e dos PARsat (588 e 643 mol fótons m-2 s-1) das plantas 7D e 15D respectivamente aos 90 dias, com valores maiores daqueles observados nas plantas controle (4,7 mol CO2 m-2 s-1 e 631 mol fótons m- 2 s-1), sugerindo forte dependência da fotossíntese de B. forficata à disponibilidade hídrica no solo. Os baixos teores de amido em folhas nos tratamentos 7D e 15D podem explicar a manutenção dos teores de AST semelhante ao controle, bem como, o aumento dos ASTs após o retorno das regas diárias, os quais poderiam ser prontamente utilizados na osmorregulação e concomitante retomada do crescimento das plantas. A alta detecção de mio-inositol nas análises de HPAEC/PAD sugerem que os açúcares alcoóis podem constituir grande parte dos ASTs não redutores em folhas e raízes de B. forficata. Nas raízes, os aumentos na concentração de glicerol, galactinol e galactosilglicerol detectados por GC/MS seguem o gradiente de disponibilidade hídrica dos tratamentos, indicando uma função osmorreguladora destes açúcares em B. forficata. / The water deficit caused by drought occurs when root water uptake cannot attend plant demands to maintain photosynthesis and transpiration, two essential processes for plant growth. Aiming to evaluate the influence of water deficits of different intensities on water relations, gas exchange, growth, and carbohydrate accumulation, potted plants of Bauhinia forficata Link were grown under greenhouse conditions during three months and submitted to the following water regimes: daily irrigated (control) and irrigated every 7 (7D) or 15 days (15D), recovering the daily irrigations after 75 days of the beginning of the experiment. At fortnightly intervals (15, 30, 45, 60, 75, 90 days) we evaluated soil moisture (Usolo), leaf water potential (wf), photosynthesis in response to photosynthetically active radiation (AxPAR) to obtain the maximum net assimilation (Amax) and light saturation point (PARsat), total leaf area (AFT) and dry mass (MS) of leaves (MSf), stems (MSc) and roots (MSr). Leaves and roots were also sampled for analyses of total soluble sugars (AST), reducing sugars (AR), starch (S), and free proline (Pro) by colorimetric methods. The analyses of the soluble sugar composition were carried out by HPAEC/PAD and GC/MS. The imposed water stress affected the water relations, photosynthesis, and plant growth. Decreases in Usolo values observed in the treatments 7D and 15D, respectively, coincided with the lowest wf, Amax and accumulation of MS. Changes in PARsat in response to water deficit showed mean values of 665, 275, and 254 mol photons m-2 s-1 in control, 7D, and 15D, respectively. The re-watering after 75 days led to the recovery of Amax (7.8 and 9.6 mol CO2 m-2 s-1) and PARsat (588 and 643 mol photons m-2 s-1) of plants 7D and 15D, respectively, at 90 days, with higher values than those observed in the control plants (4.7 mol CO2 m-2 s-1 e 631 mol photons m-2 s-1), suggesting a strong dependence of the photosynthesis of B. forficata of the soil water availability. The low leaf starch contents in the 7D and 15D treatments could explain the maintenance of the concentration of AST similar to control, as well as the increase in AST contents after re-watering. These sugars could be promptly used for osmoregulation and concomitant re-start of plant growth. The presence of high amounts of of myo-inositol detected by HPAEC/PAD analysis suggests that sugar alcohols can constitute the major part of non-reducing ASTs in leaves and roots of B. forficata. In roots, increases in the contents of glycerol, galactinol, and galactoglycerol detected by GC/MS indicating that these sugars can play a role in the osmoregulation of B. forficata.

Espécies do gênero Copaifera (Leguminosae) são nativas de regiões tropicais da América Latina e África. No Brasil, seu óleo-resina é amplamente utilizado em medicina popular como antiinflamatório, antisséptico e cicatrizante. No presente trabalho, avaliou-se, em uma primeira fase, a atividade antiinflamatória em modelo experimental agudo das seguintes amostras de óleo-resina: comercial, gentilmente cedida pela empresa Pronatus, Copaifera reticulata, C. multijuga e C. paupera. As amostras foram administradas pela via oral, sendo selecionada, das amostras identificadas botanicamente, a C. reticulata por apresentarem maior atividade. A amostra comercial também foi ensaiada no modelo experimental acima. Os óleo-resinas foram analisados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas tendo revelado a presença de sesquiterpenos e diterpenos. Foram identificados vinte e dois compostos na amostra comercial e vinte seis na amostra de C. reticulata. Deste total, seis substâncias foram comuns a ambas as amostras. A seguir, os óleos-resinas foram destilados e separadas suas respectivas frações sesqui e diterpênicas. Tanto os óleos-resinas quanto suas frações foram avaliados farmacologicamente. As atividades farmacológicas testadas foram: atividade antiinflamatória aguda, subcrônica, crônica e ensaios de toxicidade aguda, subcrônica e citotoxicidade. A atividade antiinflamatória foi testada em cinco modelos: edema de pata induzido pela carragenina, nistatina e miconazol; indução de formação de tecido granulomatoso e dermatite induzida pelo óleo de cróton. Nos modelos utilizados as doses testadas foram de 2,47 ml/kg (DE50 no modelo da carragenina) para a amostra comercial e suas frações sesqui e diterpênicas e 2,02 ml/kg (Dose equipotente no modelo da carragenina) para a amostra de C. reticulata e suas frações sesqui e diterpênicas). Em todos os ensaios realizados com as amostras, evidenciaram-se intensa atividade antiflogística, com exceção da C. reticulata que apresentou elevada toxicidade no modelo de indução do tecido granulomatoso. Nos ensaios de toxicidade aguda, a amostra C. reticulata (DL50 = 4,48 ml/kg) apresentou toxicidade maior que a amostra comercial (DL50 > 12,35 ml/kg). Suas frações sesquiterpênicas foram bem menos tóxicas que seus correspondentes óleos-resinas com DL50 maiores que 9,14 e 20 ml/kg, respectivamente para C. reticulata e amostra comercial: Por outro lado, a fração resinosa (diterpênica) apresentou alta toxicidade com DL50 superiores a 2,85 e 1,29 ml/kg, respectivamente para a amostra comercial e C. reticulata. Nos ensaios de toxicidade subcrônica confirmou-se a toxicidade menor para a fração sesquiterpênica da amostra de C. reticulata. O óleo-resina de C. reticulata apresentou toxicidade renal e alterações hepáticas indicando que pode haver um comprometimento hepático. / Species of the genus Copaifera (Leguminosae) are native of tropical regions in Latin America and Africa. In Brazil, its oil-resin is widely utilized in popular medicine as anti-inflammatory, antiseptic and cicatrizing medicine. In the present work, we initially evaluated the acute anti-inflammatory activity of the following samples: commercial, Copaifera reticulata, C. multijuga and C. paupera. All the samples were administered by oral route. This initial pharmacological evaluation revealed that the C. reticulata was clearly more effective. In the second part of this work, the C. reticulata and the commercial samples, kindly provided by Pronatus-Manaus, were investigated. The oil-resins of the selected samples were analyzed by gas chromatography connected with mass spectrometry, revealing the presence of sesquiterpens and diterpens. Twenty two compounds in the commercial sample and twenty six in the C. reticulata were identified. Then after, the oil-resins were distilled and separated in their respective sesqui and diterpens fractions. Both oil-resins and their fractions were pharmacologically evaluated. The pharmacological evaluations were: acute, sub-chronic and chronic anti-inflammatory activities and acute, sub-chronic toxicities and cito-toxicities assays. The anti-inflammatory activity was studied in five experimental models: carrageenan, nistatin and miconazole paw oedema; induction of granulomatous tissue formation and croton oil dermatitis. The administered doses by oral route were 2.47 ml/kg (EQ50 for carrageenan model) to commercial sample and its sesqui and diterpens fractions, and 2.02 ml/kg to C. reticulata sample and its sesqui and diterpens fractions. All the assays carried out with the selected samples showed intense anti-flogistic activity, except for C. reticulata that exhibited high toxicity in the granulomatous tissue model. In the acute toxicity studies, C. reticulata (LD50 = 4.48 ml/kg) revealed greater toxicity in comparison with the commercial sample (LD50 > 12.35 ml/kg). Its sesquiterpens fractions were less toxic that its correspondent oil-resins with LD50 higher than 9.14 and 20 m1/kg, for C. reticulata and commercial sample, respectively. On the other hand, resin fraction (diterpenic) presented high toxicity with LD50 higher than 2.85 and 1.29 ml/kg for commercial and C. reticulata samples, respectively. The sub-chronic assays, confirmed the less toxicity for the C. reticulta sesquiterpenic fraction. The C. reticulata oil-resin presented renal toxicity and hepatics alterations.

Tempol (4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil piperidina-1-oxil) e outros nitróxidos cíclicos reduzem a injúria tecidual em modelos animais de inflamação por mecanismos que não são completamente entendidos. A mieloperoxidase (MPO) tem um papel fundamental na produção de oxidantes por neutrófilos e, portanto, é um importante alvo para anti-inflamatórios. Ao amplificar o potencial oxidativo do H2O2, a MPO produz HOCl e radicais livres através de seus intermediários oxidantes MPO-I [MPO-porfirina•+-Fe(IV)=O] e MPO-II [MPO-porfirina-Fe(IV)=O]. Esses fatos nos levaram a sintetizar e avaliar a capacidade inibitória sobre a atividade clorinante da MPO in vitro e in vivo do tempol e de três derivados hidrofóbicos substituídos na posição 4 do anel piperidina [(4-azido, 4-benzenosulfonil e 4-(4-fenil-1H-1,2,3-triazol-1-il)]. In vitro, todos os nitróxidos inibiram a clorinação da taurina mediada pela MPO a pH 7,4 com valores similares de IC50 (1,5-1,8 µM). As constantes cinéticas das reações do tempol com MPO-I (k = 3,5 x 105 M-1 s-1) e MPO-II, cuja cinética indicou um comportamento de saturação (K= 2,0 x 10-5 M; k = 3,6 x 10-2 s-1), foram determinadas. Modelagens cinéticas indicaram que, em presença de taurina, MPO não produz HOCl livre. Tomados conjuntamente, os resultados indicaram que o tempol age principalmente como um inibidor reversível da MPO por levar ao acúmulo de MPO-II e de complexo [MPO-II-tempol] que não participam do ciclo clorinante. Para examinar se nitróxidos inibem a atividade da MPO in vivo selecionamos como modelo a inflamação aguda induzida pela carragenina na pata de ratos. A atenuação da inflamação na pata mostrou correlação com a lipofilicidade do nitróxido em tempos iniciais, mas as diferenças nos efeitos foram pequenas (menor que 2 vezes) quando comparadas com as diferenças de lipofilicidade (maior que 200 vezes). Nenhuma inibição da atividade da MPO foi evidente in vivo porque os níveis de atividade nas patas dos ratos correlacionaram com os níveis de MPO. Do mesmo modo, em animais não-tratados ou tratados com nitróxidos, todos os parâmetros empregados para monitorar a inflamação (edema, níveis de proteínas oxidadas e nitradas e exsudação plasmática) correlacionaram com os níveis de MPO. Os efeitos dos nitróxidos in vivo foram também comparados com aqueles da hidrazida do ácido 4-aminobenzóico (ABAH) e da colchicina. Tomados conjuntamente, os estudos in vivo indicaram que os nitróxidos atenuam a inflamação induzida pela carragenina principalmente por inibirem a migração celular. De acordo com essa conclusão, estudos in vivo, mostraram que tempol diminuiu a migração de neutrófilos humanos e de cultura (HL-60 diferenciadas em neutrófilos) ativados com PMA ou fMLP com IC50 25 µM. Nesse caso, a polimerização da actina é inibida apenas quando as células são pré-incubadas com tempol por 30 min. Nesse intervalo de tempo, o tratamento com tempol promove a formação de O2•- via flavoenzimas de maneira dependente da concentração. Subsequente ativação dos neutrófilos de cultura com PMA resulta também em produção intracelular de O2•- e H2O2 que é inibida pelo pré-tratamento com tempol (IC50 = 38 µM). Esses estudos preliminares sugerem que o tempol interfere na migração celular de neutrófilos por atenuar a formação intracelular de ROS. A importância da atividade peroxidásica da superóxido dismutase (hSOD1) in vivo é certamente muito mais restrita do que a da MPO em processos inflamatórios no geral. Todavia, essa atividade peroxidásica da hSOD1 pode ter um papel na na patogenia da esclerose lateral amiotrófica (ELA). Por essa razão, os efeitos do tempol sobre as consequências da atividade peroxidásica da hSOD1 (oxidação, dimerização, desenovelamento e agregação da enzima) também foram examinadas. Foi demonstrado que o tempol não interfere no ciclo catalítico da hSOD1, porém, inibe a dimerização da enzima, protegendo-a de desenovelamento e agregação. O nitróxido foi consumido no processo reagindo com o radical triptofanila no peptídeo 31VWGSIK36 como comprovado por MS. No conjunto, nossos estudos contribuem para esclarecer os múltiplos mecanismos pelos quais nitróxidos podem inibir processos oxidativos e inflamatórios. / Tempol (4-hydroxy-2 ,2,6,6-tetramethyl piperidine-1-oxyl) and other cyclic nitroxides reduce tissue injury in animal models of inflammation by mechanisms that are not fully understood. Myeloperoxidase (MPO) plays a key role in the production of oxidants by neutrophils and therefore is an important target for anti-inflammatory drugs. By amplifying the oxidative potential of H2O2, MPO produces HOCl and free radicals through its oxidizing intermediates MPO-I [MPO-porphyrin•+-Fe (IV)=O] and MPO-II [MPO-porphyrin-Fe (IV)=O]. In this context, we synthesized tempol and three more hydrophobic derivatives substituted in position 4 of the piperidine ring [(4-azido-4 benzenesulfonyl and 4-(4-phenyl-1H-1,2,3-triazol-1-yl)] and evaluated their ability to inhibit the chlorinating activity of MPO in vitro and in vivo. In vitro, all the nitroxides inhibited the chlorination of taurine mediated by MPO at pH 7.4 with similar IC50 values (1.5 to 1.8 µM). The kinetic constants of the reactions of tempol with MPO-I (k = 3.5 x 105 M-1 s-1) and MPO-II, whose kinetic indicated a saturation behavior (K = 2.0 x 10-5 M; k = 3.6 x 10-2 s-1), were determined. Kinetic modeling indicated that in the presence of taurine, MPO does not produce free HOCl. Taken together, the results indicated that tempol acts primarily as a reversible inhibitor of MPO leading to accumulation of MPO-II and of the complex [MPO-II-tempol], which do not participate within chlorinating cycle. To examine whether nitroxides inhibit the activity of MPO in vivo, the acute inflammation induced by carrageenan in the rat paw was selected as model. The attenuation of inflammation in paws was correlated with the lipophilicity of the nitroxide in early times, but the differences in effects were small (less than 2-fold) when compared to the differences in lipophilicity (higher than 200 times). No inhibition of MPO activity was evident because the levels of activity in rat paws correlated with the levels of MPO. Similarly, in animals not treated or treated with nitroxides, all parameters used to monitor inflammation (swelling, levels of oxidized and nitrated proteins and plasma exudation) correlated with the levels of MPO. The effects of nitroxides in vitro were also compared with those of 4-aminobenzoic acid hydrazide (ABAH) and colchicine. Taken together, the in vivo studies indicated that nitroxides attenuate carrageenan-induced inflammation mainly by inhibiting cell migration. According to this conclusion, in vitro studies showed that tempol decreased migration of human and culture neutrophils (HL-60 differentiation to neutrophils) activated with PMA or fMLP with IC50 = 25 µM. In this case, actin polymerization is inhibited only when cells are preincubated with tempol for 30 min. During this time interval, treatment with tempol promotes the formation of O2•- via flavoenzymes in a concentration-dependent manner. Subsequent activation of culture neutrophils with PMA also results in intracellular production of O2•- and H2O2, which is inhibited by pretreatment with tempol (IC50 = 38 µM). These preliminary studies suggest that tempol interfere in neutrophil chemotaxis by attenuating the formation of intracellular ROS. The relevance of the peroxidase activity of superoxide dismutase (hSOD1) in vitro is certainly much narrower than that of MPO. Nevertheless, this peroxidase activity may have a role in the pathogenesis of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Therefore, the effects of tempol on the consequences of the hSOD1 peroxidase activity (oxidation, dimerization, unfolding and aggregation of the enzyme) were also examined. Tempol inhibited the dimerization of hSOD1, protecting it from unfolding and aggregation, but not interfered in its catalytic cycle. The nitroxide was consumed in the process by reacting with the tryptophanyl radical of the segment 31VWGSIK36 as evidenced by MS. Overall, our studies contribute to clarify the multiple mechanisms by which nitroxides can inhibit oxidative and inflammatory processes.

Espécies do gênero Copaifera (Leguminosae) são nativas de regiões tropicais da América Latina e África. No Brasil, seu óleo-resina é amplamente utilizado em medicina popular como antiinflamatório, antisséptico e cicatrizante. No presente trabalho, avaliou-se, em uma primeira fase, a atividade antiinflamatória em modelo experimental agudo das seguintes amostras de óleo-resina: comercial, gentilmente cedida pela empresa Pronatus, Copaifera reticulata, C. multijuga e C. paupera. As amostras foram administradas pela via oral, sendo selecionada, das amostras identificadas botanicamente, a C. reticulata por apresentarem maior atividade. A amostra comercial também foi ensaiada no modelo experimental acima. Os óleo-resinas foram analisados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas tendo revelado a presença de sesquiterpenos e diterpenos. Foram identificados vinte e dois compostos na amostra comercial e vinte seis na amostra de C. reticulata. Deste total, seis substâncias foram comuns a ambas as amostras. A seguir, os óleos-resinas foram destilados e separadas suas respectivas frações sesqui e diterpênicas. Tanto os óleos-resinas quanto suas frações foram avaliados farmacologicamente. As atividades farmacológicas testadas foram: atividade antiinflamatória aguda, subcrônica, crônica e ensaios de toxicidade aguda, subcrônica e citotoxicidade. A atividade antiinflamatória foi testada em cinco modelos: edema de pata induzido pela carragenina, nistatina e miconazol; indução de formação de tecido granulomatoso e dermatite induzida pelo óleo de cróton. Nos modelos utilizados as doses testadas foram de 2,47 ml/kg (DE50 no modelo da carragenina) para a amostra comercial e suas frações sesqui e diterpênicas e 2,02 ml/kg (Dose equipotente no modelo da carragenina) para a amostra de C. reticulata e suas frações sesqui e diterpênicas). Em todos os ensaios realizados com as amostras, evidenciaram-se intensa atividade antiflogística, com exceção da C. reticulata que apresentou elevada toxicidade no modelo de indução do tecido granulomatoso. Nos ensaios de toxicidade aguda, a amostra C. reticulata (DL50 = 4,48 ml/kg) apresentou toxicidade maior que a amostra comercial (DL50 > 12,35 ml/kg). Suas frações sesquiterpênicas foram bem menos tóxicas que seus correspondentes óleos-resinas com DL50 maiores que 9,14 e 20 ml/kg, respectivamente para C. reticulata e amostra comercial: Por outro lado, a fração resinosa (diterpênica) apresentou alta toxicidade com DL50 superiores a 2,85 e 1,29 ml/kg, respectivamente para a amostra comercial e C. reticulata. Nos ensaios de toxicidade subcrônica confirmou-se a toxicidade menor para a fração sesquiterpênica da amostra de C. reticulata. O óleo-resina de C. reticulata apresentou toxicidade renal e alterações hepáticas indicando que pode haver um comprometimento hepático. / Species of the genus Copaifera (Leguminosae) are native of tropical regions in Latin America and Africa. In Brazil, its oil-resin is widely utilized in popular medicine as anti-inflammatory, antiseptic and cicatrizing medicine. In the present work, we initially evaluated the acute anti-inflammatory activity of the following samples: commercial, Copaifera reticulata, C. multijuga and C. paupera. All the samples were administered by oral route. This initial pharmacological evaluation revealed that the C. reticulata was clearly more effective. In the second part of this work, the C. reticulata and the commercial samples, kindly provided by Pronatus-Manaus, were investigated. The oil-resins of the selected samples were analyzed by gas chromatography connected with mass spectrometry, revealing the presence of sesquiterpens and diterpens. Twenty two compounds in the commercial sample and twenty six in the C. reticulata were identified. Then after, the oil-resins were distilled and separated in their respective sesqui and diterpens fractions. Both oil-resins and their fractions were pharmacologically evaluated. The pharmacological evaluations were: acute, sub-chronic and chronic anti-inflammatory activities and acute, sub-chronic toxicities and cito-toxicities assays. The anti-inflammatory activity was studied in five experimental models: carrageenan, nistatin and miconazole paw oedema; induction of granulomatous tissue formation and croton oil dermatitis. The administered doses by oral route were 2.47 ml/kg (EQ50 for carrageenan model) to commercial sample and its sesqui and diterpens fractions, and 2.02 ml/kg to C. reticulata sample and its sesqui and diterpens fractions. All the assays carried out with the selected samples showed intense anti-flogistic activity, except for C. reticulata that exhibited high toxicity in the granulomatous tissue model. In the acute toxicity studies, C. reticulata (LD50 = 4.48 ml/kg) revealed greater toxicity in comparison with the commercial sample (LD50 > 12.35 ml/kg). Its sesquiterpens fractions were less toxic that its correspondent oil-resins with LD50 higher than 9.14 and 20 m1/kg, for C. reticulata and commercial sample, respectively. On the other hand, resin fraction (diterpenic) presented high toxicity with LD50 higher than 2.85 and 1.29 ml/kg for commercial and C. reticulata samples, respectively. The sub-chronic assays, confirmed the less toxicity for the C. reticulta sesquiterpenic fraction. The C. reticulata oil-resin presented renal toxicity and hepatics alterations.