Resumo: Os resultados da presença do papilomavírus humano (HPV) em relação ao câncer das vias aerodigestivas superiores são muito controversos. Destas vias, a orofaringe tem sido a localização com maior prevalência de HPV, o que desperta grande interesse dos pesquisadores sobre a real participação do vírus na carcinogênese desta região. Este trabalho teve como objetivo verificar a prevalência de HPV em pacientes com carcinoma espinocelular de orofaringe, através da reação em cadeia polimerase (PCR) e correlacioná-la com dados demográficos, clínico-patológicos e de sobrevida. O estudo foi realizado através da análise de 27 peças oriundas de blocos de parafina obtidos de pacientes portadores de carcinoma espinocelular de orofaringe diagnosticados e tratados no Centro de Oncologia Bucal da Faculdade de Odontologia de Araçatuba - UNESP. Foram realizadas extrações do DNA com o QIAamp DNA minikit, conforme instrução do fabricante. Após confirmar a presença e integridade do DNA, foi realizada a nPCR para detecção do HPV. Dois grupos foram formados considerando-se a presença ou ausência do HPV. Foram amplificadas 26 amostras para o gene -globina sendo que o HPV foi detectado em 50% dos casos estudados. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos em relação as variáveis clínico-patológicas e a sobrevida. / Abstract: Reports on the presence of human papillomavirus (HPV) in upper aerodigestive tract are very controversial. In this tract, the oropharynx has been the site with the highest prevalence of HPV, which encourage the great interest of researchers for the real role of the virus in the carcinogenesis of this area. This study had the objective of verifying the HPV prevalence in patients with oropharyngeal squamous cell carcinoma using polymerase chain reaction (PCR) and its correlation with demographic data, clinicopathological aspects and survival. This study was accomplished by the analysis of embedded paraffin tissues of oropharyngeal squamous cell carcinoma from 27 patients diagnosed and treated in São Paulo State University, Dentistry College of Araçatuba - UNESP. DNA extraction was accomplished with QIAamp DNA minikit, according to the manufacturer's protocol. After confirming the presence and integrity of DNA, nPCR for HPV was performed. Two groups were formed, considering patients with HPV and without HPV. -globin gene was PCR amplified in 26 samples and the HPV detected in 50% of the studied cases. There was no statistically significant difference between the groups in relation of clinicopathological variables and survival. / Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: Eder Ricardo Biasoli / Banca: José Fernando Garcia / Banca: Elaine Maria Sgavioli Massucato / Banca: Denise Tostes Oliveira / Banca: Norberto Nobuo Sugaya / Doutor

O propósito do presente estudo foi analisar as células epiteliais odontogênicas procurando um entendimento maior sobre a natureza e conseqüentemente o comportamento de algumas lesões odontogênicas. A expressão imunoistoquímica de p53 e PCNA foi analisada em cisto radicular, cisto dentígero, ceratocisto odontogênico e cisto odontogênico calcificante (Cisto de Gorlin) onde verificou-se que no cisto radicular e cisto dentígero a expressão dos marcadores está relacionado com proliferação e stress celular causado pelo estímulo inflamatório e em ceratocisto odontogênico e Cisto de Gorlin a expressão dos marcadores corresponde a proliferação celular não descartando também a presença de mutação no gene TP53. Também foi observada a expressão de Ki-67, EGFR e Survivin em folículo pericoronário, ceratocisto odontogênico e cisto dentígero que mostrou que as células epiteliais dos folículos pericoronários têm potencial proliferativo para formar lesões odontogênicas e que a proliferação das células do cisto dentígero é relacionada com o estímulo inflamatório. Todos os marcadores estudados comprovaram a natureza neoplásica do ceratocisto odontogênico. / The purpose of this study was to analyze odontogenic epithelial cells to contribute to the knowledge about their nature and, consequently, about the behavior of certain odontogenic lesions. Immunohistochemical expressions of p53 and PCNA were analyzed in radicular cysts, dentigerous cysts, odontogenic keratocysts and calcifying odontogenic cysts (Gorlin cyst). In radicular and dentigerous cysts, the expression of these markers was associated with cell proliferation and stress caused by an inflammatory stimulus. In keratocysts and Gorlin cysts, the expression of markers corresponded to cell proliferation. Results also showed possible mutation in TP53 gene. Also, Ki-67, EGFR and Survivin were expressed in pericoronal follicles, odontogenic keratocysts and dentigerous cysts, which demonstrated that epithelial cells of pericoronal follicles may proliferate to form odontogenic lesions and that cell proliferation in dentigerous cysts was associated with an inflammatory stimulus. The analysis of all markers under study confirmed the neoplastic nature of odontogenic keratocysts.

Inúmeros fatores estão relacionados ao desenvolvimento do câncer, no caso das neoplasias de boca, o tecido epitelial esta constantemente em contato com diversos carcinógenos. O objetivo deste estudo é avaliar as alterações citopatológicas de três sítios anatômicos da mucosa bucal normal com maior risco para o desenvolvimento do câncer de boca e expostas aos agentes carcinógenos presentes no fumo e no álcool. Foram considerados 3 sítios anatômicos de maior prevalência de câncer bucal. A amostra foi constituída de 68 indivíduos, sendo 21 do grupo controle, 28 do grupo fumo e 19 do grupo fumo/álcool. A avaliação qualitativa através da classificação de Papanicolaou, bem como o Sistema de Bethesda, 2001 Modificado não apresentaram sensibilidade suficiente para detectar alterações incipientes na mucosa bucal, nos sítios anatômicos estudados expostos ao fumo, ao álcool, ou ambos. Na avaliação do padrão de maturação celular, apesar da constatação de alteração na borda da língua de fumantes e no lábio inferior e assoalho de boca de indivíduos que fumam e consomem bebidas alcoólicas diariamente, a variação do padrão de maturação celular foi aleatória não sendo os resultados conclusivos para a detecção de alterações incipientes nos sítios anatômicos estudados da mucosa bucal normal de indivíduos expostos ao álcool e ao fumo. A técnica de micronúcleos foi capaz de detectar uma tendência no aumento de micronúcleos nos indivíduos expostos ao fumo e/ou álcool na mucosa bucal de todos os sítios anatômicos.

O desenvolvimento e a progressão do câncer bucal envolvem processos complexos de múltiplas etapas levando a modificações fenotípicas nas células epiteliais, aumento da proliferação e invasão dos tecidos subjacentes. Diversos fatores vem sendo associados à carcinogênese, dentre eles os mecanismos epigenéticos como a acetilação de histonas, que promovem mudanças na expressão de genes independente de mutações. O objetivo do presente estudo observacional transversal foi analisar a relação entre acetilação da histona 3 (acetil Histona H3) com proliferação celular e transição epitélio-mesênquima na mucosa bucal normal (MBN), leucoplasias bucais (LB) e carcinomas espinocelulares (CEC) de boca, bem como correlacioná-los com dados clínico-demográficos, graduação histopatológica e o comportamento das lesões. Foram analisados 10 casos de mucosa bucal normal (MBN), 20 casos de LB e 75 casos de CEC de boca. Todos os casos foram submetidas a análise imunoistoquímica utilizando anticorpos anti-acetil Histona H3, Ki67, vimentina e TGF-β1. A imunomarcação da acetil histona H3 foi significativamente menor nos casos de CEC quando comparados a LB (p=0.03). Não foi encontrado diferença entre os casos de MBN e LB. Paralelamente, foi observado um aumento estatisticamente significativo na proliferação durante o processo de carcinogênese (p<0.00) e o mesmo foi observado quando avaliados os marcadores da transição epitélio-mesênquima, vimentina (p=0.03) e TGF-β1 (p<0.00). A análise da associação dos marcadores com fatores clínicos-demográficos não mostrou diferença significativa. Entretanto, maior média de acetil histona H3 foi associada ao bom prognóstico (p=0.01) e também, foi observado uma tendência de uma melhor taxa de sobrevida (p=0.06). Conclui-se que os CEC de boca são hipoacetilados, exibem maior perfil proliferativo e de transição epitélio-mesênquima. Além disso, a acetil histona H3 pode ser considerada um marcador prognostico nestas lesões. / The development and progression of oral cancer involve multi-step processes leading phenotypic changes in epithelial cells, proliferation increase and invasion of adjacent tissue. Several factors have been associated with carcinogenesis, including epigenetic mechanisms such as histone acetylation, which promote changes in the expression independent of gene mutations. The aim of the present study was to analyze the association of acetylation of histone 3 (acetyl-histone H3) with cell proliferation and epithelial-mesenchymal transition in oral leukoplakia (OL) and oral squamous cell carcinoma (OSCC) and correlate them with data clinic-demographic, histopathological grading and the behavior of these lesions. We analyzed 10 cases of normal oral mucosa (NOM), 20 cases of OL and 75 cases of OSCC. All samples were submitted to immunohistochemical analysis using anti-acetyl histone H3, Ki67, vimentin and TGF-β1. Acetyl-histone H3 labeling was significantly lower in cases of OSCC compared to LB (p=0.03). It was not found difference between NOM and OL. In parallel, the proliferation analysis revealed a gradual increase on Ki67 labeling (p<0.00) during oral carcinogenesis with highest value detected in OSCC Also, an increase on EMT markers, vimentin (p=0.03) and TGF-β1 (p<0.00) were noted. A higher mean acetyl-histone H3 was associated with good prognosis (p= 0.01) and similarly a tendency to improved survival rate was observed (p=0.06). As conclusion, OSCC are hypoacetylated, exhibit higher proliferative profile and epithelial-mesenchymal transition characteristics. Furthermore, acetyl histone H3 can be considered a prognostic marker in OSCC.

Leucoplasia bucal (LB) é uma desordem potencialmente maligna, com risco de transformação maligna que varia de 0,13% a 17,5%. Muitos estudos vêm buscando estabelecer biomarcadores capazes de predizer o potencial de transformação maligna dessa lesão. O Ki-67 é uma proteína não-histônica nuclear que tem sido amplamente utilizada para avaliar proliferação celular. O BMI-1 é uma proteína considerada um marcador essencial para a manutenção das propriedades de autorrenovação e da tumorigenicidade do carcinoma espinocelular. O objetivo principal desse estudo observacional transversal foi avaliar proliferação e imortalização celulares em LB a partir da marcação imunoistoquímica do Ki-67 e do BMI-1, comparando lesões displásicas com não displásicas. Casos de LB não displásica - LBND (n=28), LB displásica - LBD (n=33) foram selecionados a partir de prontuários de pacientes e comparados com mucosa clinicamente normal - MN (n=9), hiperplasia inflamatória - HI (n=17) e carcinoma espinocelular - CEC (n=19). Os diagnósticos histopatológicos foram confirmados a partir da revisão de cortes histológicos corados por hematoxilina e eosina. Adicionalmente, cortes histológicos foram submetidos à técnica imunoistoquímica para avaliação de Ki-67 e BMI-1. Para a quantificação foi considerado o percentual de células positivas por 1000 células para o CEC e 1500 células para os demais grupos. O percentual de imunomarcação de Ki-67 e de BMI-1, quando avaliadas todas as camadas epiteliais em conjunto, foi mais alto no CEC quando comparado aos demais grupos (Kruskal-Wallis, p<0.05). A expressão de Ki-67 foi maior em LBND, LBD e HI quando comparada com MN (Kruskal-Wallis, p<0.05). Além disso, a imunomarcação de BMI-1 foi maior em LBD quando comparada com MN, quando analisadas todas as camadas em conjunto (Kruskal-Wallis, p<0.05). A partir da avaliação das camadas epiteliais separadamente, observou-se aumento da expressão de BMI-1 na camada parabasal e suprabasal em LBND quando comparada com MN. Houve correlação positiva entre Ki-67 e BMI-1 (Correlação de Spearman, R=0.37, p<0.05). Conclui-se que a proliferação e as alterações na transição epitélio-mesênquima são eventos relacionados e que estão presentes desde estágios precoces e se acentuam nos estágios mais tardios da carcinogênese. / Oral leukoplakia (OL) is potentially malignant disorder, with a risk of malignant transformation that ranges from 0.13% to 17.5%. Many biological markers have been used as an attempt to predict malignant transformation, but no reliable markers have been established so far. The Ki-67 is a nuclear non-histone regarded as reliable marker of proliferating cells .BMI-1 is a protein considered as an essential marker for maintenance of properties self-renewability and tumorigenicity of squamous cell carcinoma. The main aim this cross-sectional observational study was to evaluate cell proliferation and immortalization in oral leukoplakia, comparing non-dysplastic and dysplastic lesions. Cases of non-dysplastic – Non-dys OL (n=28), dysplastic – Dys OL (n=33) records were selected and compared with normal oral mucosa – NOM (n=9), inflammatory hyperplasia –IH (n=17), and oral squamous cell carcinoma - OSCC (n=19). The histopathological diagnosis was confirmed by the revision of Hematoxilin and Eosin stained slides. Additionally, histological sections were submitted to immunohistochemical technique for evaluation of Ki-67 and BMI-1. The labeling index was determined by counting the labeled nuclei of 1000 cells for OSCC cases and 1500 for the others comparison groups. Ki-67 and BMI-1 immunolabeling percentage were higher in OSCC in comparison of others groups when all epithelial layers were evaluated together (Kruskal-Wallis, p<0.05). Ki-67 immunolabeling increased in Non-dys OL, Dys OL and IH when compared to NOM (Kruskal-Wallis, p<0.05). Furthermore, BMI-1 immunolabeling was higher in Dys OL relation to NOM in the analysis of all epithelial layers together (Kruskal-Wallis, p<0.05). When the evaluation considered the epithelial layer separately, an increased BMI1 expression was observed in the parabasal and suprabasal layers of Non-dys OL when compared to NOM. A significant positive correlation was found between Ki-67 and BMI-1 (Spearman correlation coefficient, R=0.37, p<0.01). In conclusion, the present findings support that proliferation and changes toward epithelial-to-mesenchymal transition increase gradually since early stages of oral carcinogenesis.

Inúmeros fatores estão relacionados ao desenvolvimento do câncer, no caso das neoplasias de boca, o tecido epitelial esta constantemente em contato com diversos carcinógenos. O objetivo deste estudo é avaliar as alterações citopatológicas de três sítios anatômicos da mucosa bucal normal com maior risco para o desenvolvimento do câncer de boca e expostas aos agentes carcinógenos presentes no fumo e no álcool. Foram considerados 3 sítios anatômicos de maior prevalência de câncer bucal. A amostra foi constituída de 68 indivíduos, sendo 21 do grupo controle, 28 do grupo fumo e 19 do grupo fumo/álcool. A avaliação qualitativa através da classificação de Papanicolaou, bem como o Sistema de Bethesda, 2001 Modificado não apresentaram sensibilidade suficiente para detectar alterações incipientes na mucosa bucal, nos sítios anatômicos estudados expostos ao fumo, ao álcool, ou ambos. Na avaliação do padrão de maturação celular, apesar da constatação de alteração na borda da língua de fumantes e no lábio inferior e assoalho de boca de indivíduos que fumam e consomem bebidas alcoólicas diariamente, a variação do padrão de maturação celular foi aleatória não sendo os resultados conclusivos para a detecção de alterações incipientes nos sítios anatômicos estudados da mucosa bucal normal de indivíduos expostos ao álcool e ao fumo. A técnica de micronúcleos foi capaz de detectar uma tendência no aumento de micronúcleos nos indivíduos expostos ao fumo e/ou álcool na mucosa bucal de todos os sítios anatômicos.

A fototerapia laser (FTL) tem sido usada clinicamente para auxiliar na cicatrização de inúmeras doenças bucais, especialmente no tratamento de lesões ulceradas. Os mecanismos celulares através dos quais o laser é capaz de promover a bioestimulação não são completamente compreendidos. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito da FTL no comportamento de queratinócitos bucais no processo de cicatrização. Células epiteliais bucais (NOK-SI) foram cultivadas sob duas condições nutricionais: suplementadas com 10% de soro fetal bovino (FBS) e sob déficit nutricional (2% FBS) seguido de irradiação com laser de diodo InGaAlP (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s), através da técnica pontual e em contato. Foram realizados ensaio de viabilidade celular (MTT), migração celular (cicatrização) e análise proteica (Western Blotting e Fluorescência). Os resultados obtidos indicaram que a FTL influencia diretamente a migração epitelial evidenciado pelo fechamento acelerado das feridas irradiadas e polarização do citoesqueleto celular (F-actina). Conclui-se que os efeitos clínicos da FTL estão associados, entre outros fatores, ao aumento da migração epitelial. / Laser phototherapy (LPT) has been used clinically to accelerate wound healing in a variety of oral diseases. The cell mechanisms by which LPT can promote biostimulation have not yet been fully elucidated. Epithelial cells play an important role in the reparative process since it proliferation and migration from the wound margin is crucial for restore epithelial continuity. It is unclear whether LPT has an effect on epithelial cell migration. Based on this, the aim of this study was to investigate the effect of LPT in oral wound healing process using oral keratinocytes. Oral keratinocytes were maintained under two nutritional conditions supplemented with 10% of fetal bovine serum (FBS) and in nutritional deficit (2% FBS). Laser irradiation was delivered with InGaAlP laser (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s). Irradiations were performed in contact, using the punctual irradiation mode. The following tests were performed cell viability, cell migration and protein analysis. Results obtained suggest that LPT influences epithelial migration and cytoskeleton polarization. Interestingly, LPT effect under epithelial cell migration occurs independently of cell viability. In conclusion, clinical LPT effects are associated with an increase in epithelial cell migration.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-06Bitstream added on 2014-06-13T20:03:02Z : No. of bitstreams: 1 kawata_lt_dr_araca.pdf: 1246612 bytes, checksum: 16cc6433f58bd5e31123db2601352d36 (MD5) / Os resultados da presença do papilomavírus humano (HPV) em relação ao câncer das vias aerodigestivas superiores são muito controversos. Destas vias, a orofaringe tem sido a localização com maior prevalência de HPV, o que desperta grande interesse dos pesquisadores sobre a real participação do vírus na carcinogênese desta região. Este trabalho teve como objetivo verificar a prevalência de HPV em pacientes com carcinoma espinocelular de orofaringe, através da reação em cadeia polimerase (PCR) e correlacioná-la com dados demográficos, clínico-patológicos e de sobrevida. O estudo foi realizado através da análise de 27 peças oriundas de blocos de parafina obtidos de pacientes portadores de carcinoma espinocelular de orofaringe diagnosticados e tratados no Centro de Oncologia Bucal da Faculdade de Odontologia de Araçatuba - UNESP. Foram realizadas extrações do DNA com o QIAamp DNA minikit, conforme instrução do fabricante. Após confirmar a presença e integridade do DNA, foi realizada a nPCR para detecção do HPV. Dois grupos foram formados considerando-se a presença ou ausência do HPV. Foram amplificadas 26 amostras para o gene -globina sendo que o HPV foi detectado em 50% dos casos estudados. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos em relação as variáveis clínico-patológicas e a sobrevida. / Reports on the presence of human papillomavirus (HPV) in upper aerodigestive tract are very controversial. In this tract, the oropharynx has been the site with the highest prevalence of HPV, which encourage the great interest of researchers for the real role of the virus in the carcinogenesis of this area. This study had the objective of verifying the HPV prevalence in patients with oropharyngeal squamous cell carcinoma using polymerase chain reaction (PCR) and its correlation with demographic data, clinicopathological aspects and survival. This study was accomplished by the analysis of embedded paraffin tissues of oropharyngeal squamous cell carcinoma from 27 patients diagnosed and treated in São Paulo State University, Dentistry College of Araçatuba – UNESP. DNA extraction was accomplished with QIAamp DNA minikit, according to the manufacturer´s protocol. After confirming the presence and integrity of DNA, nPCR for HPV was performed. Two groups were formed, considering patients with HPV and without HPV. -globin gene was PCR amplified in 26 samples and the HPV detected in 50% of the studied cases. There was no statistically significant difference between the groups in relation of clinicopathological variables and survival.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:34:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-06-13T20:05:57Z : No. of bitstreams: 1 000732454.pdf: 4504195 bytes, checksum: c662b6284869940dac7e921c17f20ab1 (MD5) / Esse trabalho teve como objetivos desenvolver um método diagnóstico inédito opcional aos já existentes no tratamento das DTMs, gerar um banco de dados referentes à patologia em estudo e propor um procedimento de análise do sistema côndilo-disco e fossa da ATM, visando identificar e classificar individualmente tal sistema por meio de sinais elétricos provenientes dos ruídos articulares, auxiliar nos procedimentos clínicos, agregar dados para o prontuário do paciente e oferecer uma fonte de consulta para futuras pesquisas. Foi utilizado um sistema devidamente calibrado para a coleta de dados composto por um conjunto estetoscópio/microfone e equipamentos para processamento e armazenamento dos dados; adicionalmente, foram obtidas imagens por meio de Ressonância Magnética Nuclear das ATMs esquerda e direita de cada voluntário para uma confirmação do comportamento da articulação em análise e suas patologias. Para os cálculos dos parâmetros no domínio do tempo e da frequência foram utilizados os aplicativos Microsoft Excel 2010 e Origin Pro, versão 8.5.1 SR2. Pelos sinais acústicos, evidenciaram-se os instantes de início e término de cada ciclo de abertura e fechamento com os seus respectivos Níveis de Pressão Sonora. A técnica desenvolvida neste trabalho de caráter não invasivo e de relativa praticidade pode ser aplicável sem grandes dificuldades por profissionais da área da saúde / This work aims to develop a diagnostic option to the existing treatment of TMD, generate a database concerning the pathology under study and propose a procedure for analyzing the system disc and condyle - fossa TMJ , to identify and classify such a system by means of electrical signals from the joint noises , assist in clinical procedures , aggregate data for the patient's records and provide a source of information for future researches . A properly calibrated system for data collection comprising a set with stethoscope / microphone and equipment for processing and storage of data was utilized; in addition, images were obtained through left and right NMR of ATMs of each volunteer to confirm the behavior of the articulation analysis and its pathologies. For the calculations of the parameters in the time domain and frequency applications, Microsoft Excel 2010 and Origin Pro version 8.5.1 SR2 were utilized. By means of acoustic signals, the moments of beginning and end of each cycle of opening and closing with their respective NPS became evident. The technique developed in this study of noninvasive nature and relative practicality can be applied with no major difficulties by health professionals

Inúmeros fatores estão relacionados ao desenvolvimento do câncer, no caso das neoplasias de boca, o tecido epitelial esta constantemente em contato com diversos carcinógenos. O objetivo deste estudo é avaliar as alterações citopatológicas de três sítios anatômicos da mucosa bucal normal com maior risco para o desenvolvimento do câncer de boca e expostas aos agentes carcinógenos presentes no fumo e no álcool. Foram considerados 3 sítios anatômicos de maior prevalência de câncer bucal. A amostra foi constituída de 68 indivíduos, sendo 21 do grupo controle, 28 do grupo fumo e 19 do grupo fumo/álcool. A avaliação qualitativa através da classificação de Papanicolaou, bem como o Sistema de Bethesda, 2001 Modificado não apresentaram sensibilidade suficiente para detectar alterações incipientes na mucosa bucal, nos sítios anatômicos estudados expostos ao fumo, ao álcool, ou ambos. Na avaliação do padrão de maturação celular, apesar da constatação de alteração na borda da língua de fumantes e no lábio inferior e assoalho de boca de indivíduos que fumam e consomem bebidas alcoólicas diariamente, a variação do padrão de maturação celular foi aleatória não sendo os resultados conclusivos para a detecção de alterações incipientes nos sítios anatômicos estudados da mucosa bucal normal de indivíduos expostos ao álcool e ao fumo. A técnica de micronúcleos foi capaz de detectar uma tendência no aumento de micronúcleos nos indivíduos expostos ao fumo e/ou álcool na mucosa bucal de todos os sítios anatômicos.