Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-05-04T17:58:44Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cyndi Heleinne Pires - 2017.pdf: 2063752 bytes, checksum: 2036ddcd50484f9d6ad492b261d8b7c6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-05T12:52:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cyndi Heleinne Pires - 2017.pdf: 2063752 bytes, checksum: 2036ddcd50484f9d6ad492b261d8b7c6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T12:52:04Z (GMT). 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Isolation was performed on MacConkey agar and species identification was performed by multiplex PCR. Diffusion disc tests were performed to determine the antimicrobial susceptibility profile and phenotypic tests for the detection of resistance phenotypes. Next, monoplex PCR was performed to detect 15 genes encoding beta-lactam resistance. The PFGE of P. mirabilis, E. coli and A. baumannii isolates were also performed to verify the genetic similarity between the circulating strains. A total of 526 swabs were collected, of which 134 were patients and 392 were environment. The prevalence of BGN found was 55.3% (291/526), and of these, 219 (75.2%) were identified among the species H. alvei (36.8%), A. baumannii (26.8 %), P. mirabilis (7.6%), P. aeruginosa (2.4%) and E. coli (1.7%). Among the bacteria identified, 51 (23.3%) were resistant to beta-lactams, of which 8 (15.7%) were ESBL-producing. Of the 24 (10.9%) isolates resistant to carbapenems, 10 (41.6%) were carbapenemase producers. The most prevalent beta-lactam resistance genes in the environment samples were blaSHV and blaIMT, both with 39.3%, and blaSME (35.7%). In patients the most prevalent genes were blaSHV (43.5%), blaOXA (39.1%) and blaIMG (34.8%). The dendrograms resulting from the macrorrest profiles show an outbreak of contamination / colonization by a dominant clone of A. baumannii in the ICU in the year 2013 and in 2014 the appearance of different enterobacteria in detriment of A. baumanni revealing the predominance between species in different years. The results suggest that the prevalence of BGN, mainly of enterobacteria, is high in health institutions, mainly in ICUs. The hospital environment can be a potential source of contamination and infection to patients and health professionals, as well as acting as reservoir of resistance genes, deserving greater attention and development of educational and hygienic-sanitary measures to control the patient-environment interface. / Os bacilos Gram negativos (BGN) compreendem espécies que são fontes de infecções comunitárias e infecções associadas à assistência à saúde. São de fácil propagação entre os seres humanos e possuem capacidade de adquirir e compartilhar material genético por transferência horizontal de genes. O objetivo do estudo foi determinar a prevalência de BGN isolados de ambiente e pacientes de uma UTI de um hospital universitário do município de Goiânia-GO, determinar o perfil de suscetibilidade dos isolados, e a similaridade genética dos mesmos. As coletas foram realizadas em pacientes e ambientes da UTI Médica de um hospital universitário do município de Goiânia-GO, entre dezembro de 2012 e junho de 2014. Após a coleta, os swabs foram acondicionados em caldo infusão de cérebro coração. O isolamento foi realizado em ágar Mac Conkey e a identificação das espécies foi realizada por PCR multiplex. Foram realizados testes de disco difusão para determinação do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos e testes fenotípicos para detecção de fenótipos de resistência. Em seguida, foi realizado PCR monoplex para detecção de 15 genes que codificam resistência aos betalactâmicos. Também foi realizado o PFGE dos isolados de P. mirabilis, E. coli e A. baumannii para verificar a similaridade genética entre as cepas circulantes. Foram coletados um total de 526 swabs, sendo 134 de pacientes e 392 de ambiente. A prevalência de BGN encontrada foi de 55,3% (291/526), e, destes, 219 (75,2%) foram identificados como H. alvei (36,8%), A. baumannii (26,8%), P. mirabilis (7,5%), P. aeruginosa (2,4%) e E. coli (1,7%). Dentre as bactérias identificadas, 51 (23,3%) foram resistentes aos betalactâmicos, sendo 8 (15,7%) produtoras de ESBL. Dos 24 (10,9%) isolados resistentes aos carbapenêmicos, 10 (41,6%) foram produtores de carbapenemase. Os genes de resistência aos betalactâmicos mais prevalentes nas amostras de ambiente foram blaSHV e blaGIM, ambos com 39,3%, e blaSME (35,7%). Em pacientes, os genes mais prevalentes foram blaSHV (43,5%), blaOXA (39,1%) e blaGIM (34,8%). Os dendrogramas resultantes dos perfis de macrorrestrição mostram um surto de contaminação/colonização por um clone dominante de A. baumannii na UTI, no ano de 2013 e, em 2014, o surgimento de diferentes enterobactérias em detrimento do A. baumanni revelando a predominância entre espécies nos diferentes anos do estudo. Os resultados encontrados sugerem que a prevalência de BGN, sobretudo de enterobactérias, é elevada em instituições de saúde, principalmente em UTIs. O ambiente hospitalar pode ser fonte potencial de contaminação e infecção aos pacientes e aos profissionais de saúde, além de atuar como reservatório de genes de resistência, merecendo maior atenção e desenvolvimento de medidas educacionais e higiênico-sanitárias para o controle da interface paciente-ambiente.

Orientador: Vera Lúcia Mores Rall / Resumo: A mastite bovina é uma inflamação da glândula mamária, geralmente ocasionada por micro-organismos, que causa grandes prejuízos às fazendas leiteiras, devido ao uso de medicamentos, pagamento aos médicos veterinários, descarte de leite e até do animal e a Escherichia coli é o principal agente etiológico causador da forma clínica dessa doença. Neste trabalho, foram pesquisados genes para a classificação de E. coli diarreiogênica (DEC) ou de E. coli patogênica extra-intestinal (ExPEC), dentro dos grupos filogenéticos, além de genes que codificam fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos. Também foram realizados testes de quantificação de produção de biofilme e produção de beta-lactamase de espectro estendido (ESBL). Entre os 161 isolados, dois (1,2%) foram classificados como DEC. Considerando-se os genes pesquisados, os mais frequentes foram fimH (160 = 99,3%), traT (126 = 78,3%), ecpA (108 = 67%) e ompT (60 = 37,3%). Em relação aos grupos filogenéticos, a maioria foi classificada nos grupos B1 (52,8%) e A (36,6%). Quanto à produção de biofilme, 68 (42,2%) foram classificadas como não produtoras, 80 (49,7%) como fracas, 11 (6,8%) como moderadas e apenas duas (1,2%) foram fortes produtoras. Apenas dois (1,2%) isolados apresentaram positividade no teste fenotípico de ESBL, com a presença do gene blaCTX-M-15. Considerando-se outros genes de resistência, blaTEM foi encontrado em sete (4,3%) isolados e blaSHV em um (0,6%). Os dois (1,2%) isolados escN+ apresentaram padr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bovine mastitis is an inflammation of the mammary gland, usually caused by microorganisms, which causes great damage to dairy farms, due to the use of medicines, payment to veterinarians, disposal of milk and even the animal and Escherichia coli is the main etiologic agent that causes the clinical form of this disease. In this study, genes were searched for the classification of diarrhogenic E. coli (DEC) or extra-intestinal pathogenic E. coli (ExPEC), within the phylogenetic groups, in addition to genes that encode virulence factors and resistance to antimicrobials. Quantification tests of biofilm production and production of extended spectrum beta-lactamase (ESBL) were also performed. Among the 161 isolates, two (1.2%) were classified as DEC. Considering the researched genes, the most frequent were fimH (160 = 99.3%), traT (126 = 78.3%), ecpA (108 = 67%) and ompT (60 = 37.3%). Regarding phylogenetic groups, most were classified in groups B1 (52.8%) and A (36.6%). As for the production of biofilm, 68 (42.2%) were classified as non-producing, 80 (49.7%) as weak, 11 (6.8%) as moderate and only two (1.2%) were strong producers. Only two (1.2%) isolates were positive in the ESBL phenotypic test, with the presence of the blaCTX-M-15 gene. Considering other resistance genes, blaTEM was found in seven (4.3%) isolates and blaSHV in one (0.6%). The two (1.2%) escN+ isolates showed a “localized-like” adhesion pattern in HeLa cells and their potential to induce attaching/effacing lesio... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Environmental samples from food processing facilities and production (farms) were taken and analyzed for the presence of indicator organisms and Salmonella spp. on food contact (FC) and nonood contact (NFC) surfaces. Salmonella was isolated from both FC and NFC surfaces of a fruit and catfish-processing plant environment, but not from a dairy processing plant or from produce packaging facility environments. Scatter plots did not show a relationship between indicator organisms and the presence of Salmonella in processing environments, regardless of the facility/environment. Salmonella ser. Gaminara and Salmonella ser. Give were prevalent in the fruit processing environment. Persistence could not be determined, as Salmonella was not detected during subsequent samplings. Two modifications of the Rappaport Vassiliadis (RV) enrichment step were evaluated and compared to the standard enrichment methods for the recovery of Salmonella. Detection rates ranged from 10.2% to 21.2% and 22.3% to 31.9% for aquaculture and sweet potato farming environments, respectively. Salmonella ser. Newport and Salmonella ser. Javiana were prevalent in the sweet potato farming environment, whereas Salmonella ser. Newport and Salmonella ser. Hartford were prevalent in the aquaculture environment. PFGE analysis revealed clusters with a high degree of genetic similarity (greater than or equal to 90%) from the fruit-processing, aquaculture, and sweet potato environments, suggesting that they represented the same strain isolated from different sampling points. Molecular characterization of isolates revealed potential contamination paths to catfish and sweet potatoes.

Entre as 12 espécies do gênero Yersinia, Yersinia enterocolitica é a mais prevalente como causa de doença em humanos e animais. Sua patogenicidade é relacionada, entre outras características, a seis biotipos: o 1B e os biotipos 2 a 5 comprovadamente patogênicos e o biotipo 1A, considerado como não-patogênico. Entretanto, dados da literatura relatam linhagens do biotipo 1A como sendo os agentes causais de infecções em humanos e animais. O objetivo deste trabalho foi investigar o potencial patogênico e verificar a similaridade genômica de linhagens de Y. enterocolitica biotipo 1A, isoladas de material clínico e não-clínico. Foram estudadas 52 linhagens de Yersinia enterocolitica biotipo 1A isoladas de humanos (11), animais (11), alimentos (15) e ambiente (15), quanto a susceptibilidade a antimicrobianos, comportamento frente a testes fenotípicos relacionados à virulência, resistência a reativos intermediários do oxigênio, invasão a células HEp-2 e Caco-2, presença de genes de virulência por PCR e similaridade genômica por Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus PCR (ERIC-PCR) e Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Tanto as linhagens clínicas como as não-clínicas apresentaram resistência à ampicilina e à cefalotina. Não foi observada diferença entre linhagens de origem clínica e não-clínica frente aos testes de fermentação da salicina, hidrólise da esculina, atividade da pirazinamidase, reativos intermediários do oxigênio e invasão a células HEp-2. Entretanto, linhagens de origem não-clínica foram mais invasivas a células Caco-2 do que as de origem clínica. Oito dos 11 genes de virulência pesquisados foram encontrados. Os genes ystB, hreP e fepD foram mais freqüentemente detectados em linhagens de origem clínica. Ao contrário, os genes myfA, fepA, fes e tccC apresentaram-se mais freqüentes nas linhagens de origem não-clínica. Entretanto, a diferença na freqüência de tais genes não foi estatisticamente significativa entre linhagens clínicas e não-clínicas. O gene inv foi detectado em todas as linhagens estudadas, entretanto, os genes ail, ystA e virF não foram detectados em nenhuma das 52 linhagens. O dendrograma de similaridade genômica consenso das técnicas de ERIC-PCR e PFGE, permitiu a visualização de dois grupos (A e B). Foi observada uma alta similaridade genômica (>63%) entre quase todas as linhagens isoladas de humanos e animais, bem como uma alta similaridade genômica para a maioria das linhagens de origem clínica e não-clínica (>58%). O índice de discriminação de ERIC-PCR foi 0,98, e o de PFGE foi 0,99. Entre as linhagens do biotipo 1A estudadas, não foi observada diferença entre o potencial patogênico de linhagens de origem clínica e não-clínica frente aos testes fenotípicos realizados e prevalência de genes de virulência pesquisados. A exceção foi o teste de invasão a células Caco-2, onde as linhagens não-clínicas foram mais invasivas. As técnicas de ERIC-PCR e PFGE discriminaram similarmente as linhagens estudadas. A alta similaridade genômica entre as linhagens de origem clínica e não-clínica evidencia os animais como sendo importantes reservatórios de Y. enterocolitica biotipo 1A e sugere que isolados de ambiente e alimentos tem sido fonte de contaminação de humanos e animais. / Among the 12 species of the genus Yersinia, Yersinia enterocolitica is the most prevalent cause of illness in humans and animals. Among other characteristics, its patogenicity is related to six biotypes: 1B and 2 to 5 considered pathogenic and the 1A biotype considered non-pathogenic. Despite being defined as non-pathogenic, literature has been shown that biotype 1A strains may be the etiological agents of infections in humans and animals. The aim of this work was to investigate the pathogenic potential and to verify the genomic similarity of Y. enterocolitica biotype 1A isolated from clinical and non-clinical sources. Fifty-two strains of Y. enterocolitica biotype 1A isolated from humans (11), animals (11), food (15), and environment (15) were analyzed regarding their susceptibility to antimicrobials, behavior against phenotypic tests related to virulence, resistance to oxygen intermediate reactives, invasion to HEp-2 and Caco-2 cells, presence of virulence genes by PCR, and genomic similarity by Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus PCR (ERIC-PCR) and Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Both clinical and non-clinical strains showed resistance to ampicillin and cephalothin. It was not observed any difference in the pathogenic potential between clinical and non-clinical strains face of the following tests: salicine fermentation, esculin hydrolysis, pirazinamidase activity, oxygen intermediate reactives and HEp-2 cell invasion assay. On the other hand, the non-clinical strains were more invasive to Caco-2 cells than the clinical ones. Eight of 11 studied virulence genes were found. Genes ystB, hreP and fepD were more often detected in clinical strains. In contrast, myfA, fepA, fes and tccC were presented more frequently in non-clinical strains. However, the frequency difference of those genes was not statistically significant between clinical and non-clinical strains. The inv gene was detected in all the strains studied; but no ail, ystA, and virF genes were found in any of the 52 strains. ERIC-PCR and PFGE dendogram allowed the visualization of two groups named A and B. It was observed a high genomic similarity among almost all human and animal isolated strains (>63%), as well as a high genomic similarity between the clinical and non-clinical strains (>58%). The discriminatory index for ERIC-PCR was 0.98 and for PFGE was 0.99. Among biotype 1A strains no difference was observed between the pathogenic potential of clinical and non-clinical strains face to the phenotype tests employed, and regarding the prevalence of the studied virulence genes. The exception was the Caco-2 cells invasion assay where non-clinical strains were more invasive., ERIC-PCR and PFGE discriminated the studied strains similarly. The high genomic similarity between the clinical and non-clinical strains gives evidence that animals constitute important reservoirs of Y.enterocolitica biotype 1A and suggests that environmental and food isolates have been the source of human and animal infections.

Bordetella bronchiseptica é um agente respiratório zoonótico comumente encontrado em diversars espécies animais domésticos como cães, gatos, coelhos, suínos, aves e equinos. As infecções em humanos ocorrem ocasionalmente, sendo descritas com maior freqüência em indivíduos imunocomprometidos, mas relatos de casos de doença em adultos saudáveis e crianças têm aumentado. O presente estudo teve como objetivos determinar o perfil de resistência antimicrobiana de cepas de B. bronchiseptica isoladas de cães, gatos, coelhos e suínos, caracterizar as cepas pela eletroforese em campo pulsado (PFGE), e comparar os resultados obtidos com os dados epidemiológicos. Foram avaliadas 145 cepas e estas apresentaram 100% de resistência a ampicilina, penicilina, espectinomicina, clindamicina, tiamulina e tilosina. Taxas de resistência superiores a 95% das cepas foram observadas frente a tilmicosina, danofloxacina e ceftiofur. Os antimicrobianos com menores taxas de resistência foram enrofloxacina (2,1%) e clortetraciclina (11 %). As cepas isoladas de coelhos apresentaram menores taxas de resistência que as de suínos e de animais de companhia. A caracterização das cepas pela PFGE permitiu a separação de acordo com as espécies de origem em diferentes pulsotipos. A caracterização do agente, principalmente no que se refere à resistência a antimicrobianos, será de grande utilidade para os veterinários no controle das infecções pelo mesmo em suínos, animais de companhia e coelhos, visto que os dados sobre este agente etiológico no Brasil são escassos / Bordefella bronchisepfica is a zoonotic respiratory agent commonly found in domestic animais as dogs, cats, rabbit, swine, birds and horses, Infections in humans occur rarely and have been described more frequently in immunocompromised individuais, but reports of cases of illness in healthy adults and children have increased. This study aims to characterize the resistance profile of B. bronchiseptica strains isolated from dogs, cats, rabbits and pigs and evaluate the strains by pulsed field gel electrophoresis (PFGE), comparing the results with epidemiological data. From 145 strains tested 100% presented resistance to ampicillin, penicillin, spectinomycin, clindamycin, tiamulin and tylosin. Resistance rates higher than 95% were found against tilmicosin, danofloxacin and ceftiofur. The antimicrobials with lower resistance rates were enrofloxacin (2.1 %) and chlortetracycline (11 %). Strains isolated from rabbits presented low resistance rates when compared with swine and pet animais. The PFGE analysis separated the strains according specie of origin in different pulsotypes. The agent characterization, mainly in relation with antimicrobial resistance will be of great help to veterinarians in control of infections in swine, pets and rabbits, since data about this bacteria in Brazil are rare

<p>Salmonele su najče&scaron;ći prouzrokovači.crevnih<br />infekcija kod ljudi i životinja &Scaron;iroko su<br />rasprostranjene u prirodi a mogu kolonizovati<br />različite domaćine Poebno su značajne one<br />životinje čije se meso koristi za ishranu ljudi, a<br />koje su i glavni izvor infekcije ljudi. Inficirane<br />životinje ne ispoljavaju simptome i terapija se<br />sprovodi nalazom salmonela prilikom rutinske<br />kontrole zdravstvenog stanja. Posebno, kod ljudi i<br />životinja salmoneloze su značajne i zbog<br />klicono&scaron;tva koje može trajati veoma dugo zavisno<br />od starosti inficiranog organizma. Čest su uzrok<br />alimentarnih toksiinfekcija kod ljudi. Duž čitavog<br />lanca ishrane moguća je i sekundarna<br />kontaminacija salmonelama. Pored rutinskih<br />mikrobiolo&scaron;kih analiza u otkrivanju izvora i<br />puteva &scaron;irenja infekcije koriste se i molekularne<br />metode koje daju precizne podatke o klonalnom<br />poreklu bakterija izolovanih iz obolelih ljudi,<br />namirnica i životinja. Međunarodnom trgovinom<br />hrane isti tipovi bakterija mogu se pojaviti na<br />geografski udaljenim lokacijama. Molekularna<br />karakterizacija Salmonella je značajna zbog<br />određivanja raznolikosti sojeva. Potrebno je da se<br />izolati tipiziraju ne samo do nivoa vrste i serotipa<br />nego i preciznije. Tipizacija je bitna za utvrđivanje<br />epidemiolo&scaron;ke povezanosti izolata, a<br />genotipizacija podrazumeva direktnu analizu<br />DNK. Geni rezistencije koji se od saprofita mogu<br />preneti na patogene vrste imaju važnu ulogu u<br />pojavljivanju rezistentnih i multirezistentnih<br />sojeva. Međusobni odnos gena rezistencije i<br />upotrebe antimikrobnih sredstava određuje<br />jednačinu rezistencije na antimikrobna sredstva.<br />Rezistencija predstavlja problem iako je<br />salmoneloza samolimitirajuća infekcija zbog čega<br />se terapija antibioticima primenjuje samo kod<br />dece, starijih ljudi i u slučajevima sistemskih<br />infekcija. Navedena problematika je aktuelna i u<br />Crnoj Gori jer ne postoji stalan monitoring<br />primene antimikrobnih sredstava kod domaćih<br />životinja. Iz navedenih razloga cilj ove doktorske<br />disertacije bilo je utvrđivanje prisustva Salmonella<br />vrsta na farmama živine sa tri lokaliteta u Crnoj<br />Gori, izolacija i identifikacija primenom standardnih<br />mikrobiolo&scaron;kih metoda, serotipizacija pomoću<br />aglutinacije na predmetnom staklu (slide<br />agglutination) uz primenu anti-O i anti-H seruma<br />.(Staten Serum Institute, Danska). Primenom<br />standardnih mikrobiolo&scaron;kih metoda utvrđeno je<br />prisustvo serovarijeteta Salmonella Enteritidis i<br />Salmonella Tiphymurium. Serovarijeteti<br />Salmonella .Gallinarum biotip Gallinarum i<br />Salmonella Gallinarum biotip Pullorum nisu bile<br />serolo&scaron;ki tipizirane. Identifikacija navedenih<br />serovarijeteta je potvrđena metodom multipleks<br />PCR detekcijom amplifikovanih DNK fragmenata<br />u agaroznom gelu.. Nakon digestije 50 izolata<br />Salmonella enterica podvrste enterica odabranih<br />prema lokalitetima i zastupljenosti pomoću SpeI<br />restrikcionog enzma i njihovom analizom<br />primenom PFGE utvrđeno je 5 različitih SpeI<br />pulsotipova. Kod 10% ispitivanih sojeva<br />ustanovljena je rezistencija na tetraciklin i<br />streptomicin. Svi ispitivani serovarijeteti<br />salmonela bili su osetljivi na amoksicilin sa<br />klavulanskom kiselinom, enrofloksacin,<br />ciprofloksacin, sulfametoksazol-trimetoprim,<br />cefuroksim, ceftriakson i norfloksacin. Vrednosti<br />MIK (minimalnih inhibitornih koncentracija)<br />određenih antibiotika za odabrane sojeve<br />serovarijeteta Salmonella Enteritidis primenom<br />aparata VITEK 2 iznosile su za: piperacilin &le; 4 &ndash;<br />64 &mu;g/ml (S &ndash; R) , cefuroksim 4 &ndash; 32 &mu;g/ml (S -<br />R), cefuroksim aksetil 4 &ndash;32 &mu;g/ml (S&ndash; R),<br />cefiksim &le; 0,25 &ndash; 2 &mu;g/ml (S - I), ceftriakson &le; 1 &ndash;<br />2 &mu;g/ml (S - I) i minociklin &le; 1 &ndash; 4 &mu;g/ml (S),<br />tetraciklin &le; 1 &mu;g/ml (S), tigeciklin &le; 0,5 &ndash; 1 &mu;g/ml<br />(S), hloramfenikol &le; 2 &ndash; 8 &mu;g/ml (S), kolistin &le;<br />0,5&ndash;1 &mu;g/ml (S) i sulfametoksazol/trimetoprim &le;<br />0,5 &mu;g/ml (S).</p> / <p>Salmonella is the most common cause of alimentary<br />toxic infections among humans. They have been<br />adapted to a number of warm-blooded animals. The<br />infected animals do not exhibit symptoms and the<br />treatment performs by finding of salmonella in routine<br />health check. The secondary contamination by<br />salmonella ois possible in during entire food chain.<br />Apart from the routine microbiological analysis in<br />detection of sources and pathways of spreading the<br />infection, there are also used the molecular methods<br />that provide accurate information about the clonal<br />origin of bacteria isolated from diseased humans, food<br />and animals. During international trade of food, the<br />same types of bacteria can occur in geographically<br />remote locations. Molecular characterization of<br />Salmonella is important in determination of diversity of<br />strains. It is necessary isolates to be typified not only to<br />the level of species and serotypes but also more<br />precisely. Typification is essential to determine the<br />epidemiological connection of isolates. Genotyping<br />includes a direct analysis of DNA. The resistance genes<br />that can be transferred from saprophytes to pathogenic<br />microorganisms play an important role in the<br />emergence of resistant and multiresistant strains. The<br />above mentoned is also a current issue in our country<br />because there is a constant monitoring of using of<br />antimicrobials drugs to farm animals. For these reasons,<br />the aim of this dissertation is to examine the serovars of<br />Salmonella in Montenegro, their molecular<br />characterization using biomolecular methods based on<br />isolation of DNA and subsequent amplification of<br />serovar-specific genes.(multiplex PCR method and<br />PFGE), and testing sensitivity, or resistance to<br />antimicrobial drugs used in clinic vet practice.</p>

Para analisar cepas de Salmonella ser. Typhimurium isoladas de processos entéricos e extraintestinais humanos ocorridos no período de 1970 a 2008 de diferentes regiões do país foram selecionadas, com base nos registros contidos no banco de dados do Laboratório de Enterobactérias do IOC/FIOCRUZ, RJ, amostras do fagotipo prevalente 193, visando precipuamente o reconhecimento de clones epidêmicos. Foram selecionadas 553 cepas de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 representadas por 91, 65, 70 e 327 amostras referentes as décadas de 70, 80, 90 e ao período de 2000 a 2008, respectivamente. Na análise global da sensibilidade destas cepas, 52% apresentaram um ou mais marcadores de resistência a antibióticos incluídos no perfil ACSSuT. Este perfil de resistência completo foi verificado em 20,9% dos isolados, sendo os 21,9% restantes, sensíveis a todas as drogas testadas, especialmente no período de 2000 a 2008, representadas por 121 amostras (37,0%) em relação as 327 culturas dessa época. O maior percentual de resistência foi observado nas amostras da década de 70 (99%) sendo o perfil ACSSuT detectado em 35,2% dos isolados, ressaltando-se que todas as amostras foram isoladas de processos gastroentéricos ocorridos na cidade de São Paulo. Ao longo das quatro décadas de estudo, descreve-se um ponto de ruptura entre a prevalência de resistência e a suscetibilidade na transição entre as décadas de 80 e 90. Embora o número de isolados de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 tenha aumentado no último período considerado, o percentual de mono e multirresistência aos antimicrobianos se situou em nível elevado (63,0%). A análise do polimorfismo obtido após macrorrestrição com a enzima XbaI revelou que cepas isoladas na década de 90 apresentaram elevado percentual de similaridade (&#8805;85%) com cepas isoladas recentemente (período de 2000-2008), sendo agrupadas nos mesmos subclusters. Por outro lado, as cepas da década de 70 inserem-se em subclusters independentes, embora o percentual de similaridade entre tais subclusters e os demais seja &#8805;70%; o mesmo sendo observado para as cepas isoladas durante a década de 80. Em conclusão, este estudo mostrou que a prevalência de isolados humanos de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 no Brasil vem progredindo desde a década de 1990, enquanto a detecção do modelo R (ACSSuT) está diminuindo e a avaliação através da PFGE indicou a presença de multiplicidade de perfis de macrorrestrição no fagotipo 193, entretanto com elevados percentuais de similaridade entre si, sugerindo alguma clonalidade, tendo em vista o período entre o isolamento e a análise / To analyze strains of Salmonella ser. Typhimurium isolated from human cases of enteric and extraintestinal occurred during the period 1970 to 2008 of different regions of Brazil were selected, based on records in the database from Enterobacteria Laboratory of IOC / FIOCRUZ, RJ, samples prevalent phage type 193 in order to recognition of epidemic clones. We selected 553 strains of Salmonella ser. Typhimurium phage type 193 represented by 91, 65, 70 and 327 samples concerning the 1970s, 1980s, 1990s and the period from 2000 to 2008, respectively. In a global analysis of the sensitivity of these strains, 52% had one or more antibiotic resistance markers included in the profile ACSSuT. This resistance profile was found complete in 20.9% of isolates and the remaining 21.9%, sensitive to all drugs tested, especially in the period 2000 to 2008, represented by 121 samples (37.0%) compared the 327 cultures of that time. The highest percentage of resistance was observed in the samples of the 70 (99%) being the profile ACSSuT detected in 35.2% of isolates, emphasizing that all strains were isolated from gastrointestinal processes occurring in São Paulo city. Over the four decades of study, we describe a breaking point between the prevalence of resistance and susceptibility in the transition between the 1980s and 1990s. Although the number of isolates of Salmonella ser. Typhimurium phage type 193 has increased in the last period, the percentage of mono-and multidrug resistance to antimicrobial agents stood at high level (63.0%). The analysis of polymorphism obtained after macrorestriction with the enzyme XbaI showed that isolates in the 1990s showed a high percentage of similarity (&#8805; 85%) with strains isolated recently (2000-2008) and are grouped in the same subclusters. Moreover, the strains of the 1970s fall into subclusters independent, although the percentage of similarity between such subclusters and the other is &#8805; 70%, the same was observed for the strains isolated during the 1980s. In conclusion, this study showed that the prevalence of human isolates of Salmonella ser. Typhimurium phage type 193 in Brazil has been progressing since the 1990s, while the detection of R model (ACSSuT) is decreasing and evaluation by PFGE indicated the presence of multiple profiles macrorestriction in phage type 193, however with high percentages of similarity, suggesting some clonality in view the period between isolation and analysis

Para analisar cepas de Salmonella ser. Typhimurium isoladas de processos entéricos e extraintestinais humanos ocorridos no período de 1970 a 2008 de diferentes regiões do país foram selecionadas, com base nos registros contidos no banco de dados do Laboratório de Enterobactérias do IOC/FIOCRUZ, RJ, amostras do fagotipo prevalente 193, visando precipuamente o reconhecimento de clones epidêmicos. Foram selecionadas 553 cepas de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 representadas por 91, 65, 70 e 327 amostras referentes as décadas de 70, 80, 90 e ao período de 2000 a 2008, respectivamente. Na análise global da sensibilidade destas cepas, 52% apresentaram um ou mais marcadores de resistência a antibióticos incluídos no perfil ACSSuT. Este perfil de resistência completo foi verificado em 20,9% dos isolados, sendo os 21,9% restantes, sensíveis a todas as drogas testadas, especialmente no período de 2000 a 2008, representadas por 121 amostras (37,0%) em relação as 327 culturas dessa época. O maior percentual de resistência foi observado nas amostras da década de 70 (99%) sendo o perfil ACSSuT detectado em 35,2% dos isolados, ressaltando-se que todas as amostras foram isoladas de processos gastroentéricos ocorridos na cidade de São Paulo. Ao longo das quatro décadas de estudo, descreve-se um ponto de ruptura entre a prevalência de resistência e a suscetibilidade na transição entre as décadas de 80 e 90. Embora o número de isolados de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 tenha aumentado no último período considerado, o percentual de mono e multirresistência aos antimicrobianos se situou em nível elevado (63,0%). A análise do polimorfismo obtido após macrorrestrição com a enzima XbaI revelou que cepas isoladas na década de 90 apresentaram elevado percentual de similaridade (&#8805;85%) com cepas isoladas recentemente (período de 2000-2008), sendo agrupadas nos mesmos subclusters. Por outro lado, as cepas da década de 70 inserem-se em subclusters independentes, embora o percentual de similaridade entre tais subclusters e os demais seja &#8805;70%; o mesmo sendo observado para as cepas isoladas durante a década de 80. Em conclusão, este estudo mostrou que a prevalência de isolados humanos de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 no Brasil vem progredindo desde a década de 1990, enquanto a detecção do modelo R (ACSSuT) está diminuindo e a avaliação através da PFGE indicou a presença de multiplicidade de perfis de macrorrestrição no fagotipo 193, entretanto com elevados percentuais de similaridade entre si, sugerindo alguma clonalidade, tendo em vista o período entre o isolamento e a análise / To analyze strains of Salmonella ser. Typhimurium isolated from human cases of enteric and extraintestinal occurred during the period 1970 to 2008 of different regions of Brazil were selected, based on records in the database from Enterobacteria Laboratory of IOC / FIOCRUZ, RJ, samples prevalent phage type 193 in order to recognition of epidemic clones. We selected 553 strains of Salmonella ser. Typhimurium phage type 193 represented by 91, 65, 70 and 327 samples concerning the 1970s, 1980s, 1990s and the period from 2000 to 2008, respectively. In a global analysis of the sensitivity of these strains, 52% had one or more antibiotic resistance markers included in the profile ACSSuT. This resistance profile was found complete in 20.9% of isolates and the remaining 21.9%, sensitive to all drugs tested, especially in the period 2000 to 2008, represented by 121 samples (37.0%) compared the 327 cultures of that time. The highest percentage of resistance was observed in the samples of the 70 (99%) being the profile ACSSuT detected in 35.2% of isolates, emphasizing that all strains were isolated from gastrointestinal processes occurring in São Paulo city. Over the four decades of study, we describe a breaking point between the prevalence of resistance and susceptibility in the transition between the 1980s and 1990s. Although the number of isolates of Salmonella ser. Typhimurium phage type 193 has increased in the last period, the percentage of mono-and multidrug resistance to antimicrobial agents stood at high level (63.0%). The analysis of polymorphism obtained after macrorestriction with the enzyme XbaI showed that isolates in the 1990s showed a high percentage of similarity (&#8805; 85%) with strains isolated recently (2000-2008) and are grouped in the same subclusters. Moreover, the strains of the 1970s fall into subclusters independent, although the percentage of similarity between such subclusters and the other is &#8805; 70%, the same was observed for the strains isolated during the 1980s. In conclusion, this study showed that the prevalence of human isolates of Salmonella ser. Typhimurium phage type 193 in Brazil has been progressing since the 1990s, while the detection of R model (ACSSuT) is decreasing and evaluation by PFGE indicated the presence of multiple profiles macrorestriction in phage type 193, however with high percentages of similarity, suggesting some clonality in view the period between isolation and analysis

Staphylococcus coagulase-negativo (SCN) estão frequentemente envolvidos em infecções nosocomiais associadas com o uso de cateteres e outros procedimentos médicos invasivos. A habilidade de aderir às superfícies abióticas e de produzir biofilme tem sido reconhecida entre os principais fatores de virulência dos SCN, especialmente de S. epidermidis, a principal espécie responsável por infecções relacionadas à assistência a saúde - IRASs. Dentre as demais espécies de SCN capazes de produzir biofilme, S. haemolyticus tem sido relacionado com quadros de infecções em recém-nascidos (RNs). O presente estudo teve como objetivo principal investigar aspectos microbiológicos e epidemiológicos dos processos infecciosos invasivos relacionados com SCN em neonatos internados em unidade de terapia intensiva neonatal (UTIN) de um hospital universitário do município do Rio de Janeiro (2008-2010). A técnica de PCR multiplex-mPCR foi empregada na determinação das espécies de 40 amostras de SCN isoladas de hemoculturas de RNs fazendo uso de cateteres intravenosos e submetidos à terapia antimicrobiana empírica com vancomicina e/ou gentamicina. A fenotipagem foi realizada por três métodos distintos: Simplificado em microplaca, Vitek 2 e API-Staph. Os perfis de resistência aos antimicrobianos foram verificados através do teste de disco-difusão, determinação de CIM (Oxacilina) e presença do gene mecA. A capacidade de produção de biofilme foi investigada pelos testes do Ágar Vermelho do Congo e ensaios de aderência em superfícies abióticas (poliestireno e vidro) além da PCR para os genes icaAB, atlE e aap. O perfil genômico dos micro-organismos foi determinado pela técnica de PFGE. Os resultados demonstraram o isolamento de S. haemolyticus (77%), S. epidermidis (15%), S. captis (5%) e S. warneri (3%). A análise comparativa dos resultados obtidos pelo m-PCR com métodos fenotípicos demonstrou uma concordância de 97,5% com o esquema simplificado e de ~40% Vitek 2 e o API Staph. A maioria (82,5%) das amostras apresentou perfis variados de multiresistência aos 16 antimicrobianos testados e resistência a oxacilina, apesar de 25% destas não apresentarem o gene mecA. Apesar da maioria das amostras de SCN ter apresentado capacidade de produzir slime e/ou biofilme não foi observada total correlação com a presença dos genes mecA, icaAB, aap, atlE, enfatizando a natureza multifatorial da produção de biofilme de SCN. Diferente do observado para as demais espécies, algumas amostras de S. haemolyticus foram incapazes de aderir ao vidro e ao poliestireno e/ou apresentaram os genes aap (38,7%), atlE (42%) além de icaAB (71%). Na UTIN foi detectada a presença de seis diferentes tipos clonais da espécie prevalente, indicando a disseminação de S. haemolyticusnesta unidade hospitalar e a endemicidade em nossa comunidade. / Coagulase-negative staphylococci (CNS) are often involved in nosocomial infections associated with catheters and other invasive medical procedures. The ability to adhere to abiotic surfaces and produce biofilms has been recognized among the major virulence factors of the SCN, especially Staphylococcus epidermidis, the main species responsible for infections related to health care - IRASs.Among the other species capable of producing biofilm, Staphylococcus haemolyticus has been associated with cases of infections in neonates.Here in, we investigated the microbiological and epidemiological aspects of invasive infections related to CNS in the neonatal intensive care unit (NICU) of a university hospital located at Rio de Janeiro metropolitan area (2008-2010).PCR multiplex-mPCR was used in the determination of the species of 40 CNS strains isolated from blood cultures of neonates making use of intravenous catheters and subjected to empirical antimicrobial therapy with vancomycin and / or gentamicin.Phenotyping was performed by three different methods: Simplified scheme in microplates, Vitek 2 and API-Staph. Antimicrobial resistance profiles were verified by the disk diffusion test, oxacillin MIC determinationand PCR for mecA gene. Evaluation of biofilm production was performed by PCR for genes icaAB, atlE and aap and the tests on Congo Red Agar plates and abiotic surfaces (polystyrene and glass).Clonality was determined by PFGE technique. Data revealed the isolation of S. haemolyticus (77%), S. epidermidis (15%), S. captis (5%) and S. warneri (3%).The comparative analysis of the results obtained by mPCR and phenotypic methods showed 97.5% concordance with the simplified scheme and ~40% with the Vitek 2 and API Staph systems. Different multidrug resistance profiles to 16 antimicrobials, including resistance to oxacillin was observed for 82.5% of the CNS isolates, although the mecA gene was not detected in 25% of these strains.Although most of the CNS isolates showed the ability to produce slime and/or biofilm, a complete correlation with the presence of mecA, icaAB, aap, atlE genes was not observed, emphasizing the multifactorial nature of biofilm production of SCN.Different from other CNS species, some strains of S. haemolyticus were unable to adhere to glass and polystyrene surfaces and/or to exhibit aap (38.7%), atlE (42%), icaAB (71%) genes. PFGE analysis revealed the presence of six different clonal types of the prevalent species, indicating the dissemination in this hospital and endemicity in our community of S. haemolyticus.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 742482 bytes, checksum: 16c68ac95e43019b42c1b1b057afd7e3 (MD5) Previous issue date: 2014-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Because of the diversity of its indigenous microbiota, goat milk is considered a good source of new strains of lactic acid bacteria (LAB) with potential for exploitation as alternatives to food biopreservation. The increasing consumer demand for these alternatives justifies studies to investigate the antimicrobial potential of these microorganisms. The present study aimed to evaluate the genetic diversity and the antimicrobial action range of autochthonous strains of BAL isolated from goat milk that can be potentially used as biopreservatives in food. The bacteriocinogenic activity against Listeria monocytogenes and stability in different environmental conditions were also the target of this study. Fifty-seven isolates of BAL (33 isolates of Enterococcus spp., and 24 isolates of Lactococcus spp.), previously characterized as bacteriocinogenic by genotypic and phenotypic methods, were subjected to macrorestriction with SmaI and PFGE and their profiles were compared with the results of bacteriocinogenic genes previously searched. High genetic diversity was observed for both genders. Although PFGE showed sufficient discriminatory power, isolates with different results for bacteriocinogenic genes were grouped as identical in both genders. Twelve isolates from Lactococcus spp. and eighteen isolates of Enterococcus spp., representing different pulsotypes, were selected for evaluation of the antimicrobial activity range against 46 target microorganisms (including BAL, pathogens and spoilage microorganisms). Lactococcus strains showed a wide spectrum against the targets, especially against L. monocytogenes and Clostridium spp.. Enterococcus spp., similarly, was able to inhibit various targets, acting mainly against Listeria spp. Gram- negative microorganisms also showed sensitivity to isolates of both genders. Six isolates (four Enterococcus spp., and two Lactococcus spp.) were evaluated for bacteriocinogenic potential against L. monocytogenes strains from different serotypes and all of them were inhibited by bacteriocins produced by these LAB. Additionally, bacteriocins produced by these isolates showed a wide range of stability at different pH values and temperatures. The data showed that goat milk can contain a diverse microbiota able to inhibit microorganisms of interest to the food industry and can be potentially employed in biopreservation of foods produced at different processing conditions. / O leite de cabra, devido a diversidade de sua microbiota autóctone, é considerado uma boa fonte de novas cepas de Bactérias Ácido Láticas (BAL) com potencial para exploração como alternativas à biopreservação de alimentos. A crescente demanda dos consumidores por essas alternativas justifica estudos que investiguem o potencial antimicrobiano desses micro-organismos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a diversidade genética e o espectro de ação de cepas de BAL antagonistas autóctones de leite de cabra que podem ser potencialmente utilizadas como biopreservantes em alimentos. A atividade bacteriocinogênica contra Listeria monocytogenes e estabilidade das bacteriocinas em diferentes condições ambientais também foram alvo deste trabalho. Cinquenta e sete isolados de BAL (33 isolados de Enterococcus spp. e 24 isolados de Lactococcus spp.), previamente caracterizados como bacteriocinogênicos por metodologias genotípicas e fenotípicas, foram submetidos à macrorrestrição com a enzima SmaI e PFGE e seus perfis foram comparados aos resultados de genes bacteriocinogênicos previamente pesquisados. Alta variabilidade genética foi observada para ambos os gêneros. Embora o PFGE tenha apresentado poder discriminatório suficiente, isolados com diferentes resultados para genes de bacteriocinas foram agrupados como idênticos em ambos os gêneros. Doze isolados de Lactococcus spp. e dezoito isolados de Enterococcus spp., representativos de diferentes pulsotipos, foram selecionados para avaliação do espectro de ação antimicrobiana contra 46 micro- organismos indicadores (incluindo BAL, micro-organismos deteriorantes e patógenos). Os isolados de Lactococcus spp. demonstraram amplo espectro de ação sobre os micro-organismos alvo, com destaque para a atividade contra os patógenos L. monocytogenes e Clostridium spp.. Enterococcus spp., de modo similar, foi capaz de inibir diversos micro-organismos alvo, apresentando atividade principalmente contra Listeria spp. Cepas Gram-negativas também apresentaram sensibilidade aos isolados de ambos os gêneros. Seis isolados (quatro Enterococcus spp. e dois Lactococcus spp.) foram avaliados quanto ao potencial bacteriocinogênico contra cepas de L. monocytogenes de diferentes sorotipos e todos os sorotipos foram inibidos pelas bacteriocinas produzidas pelas BAL. Adicionalmente, as bacteriocinas produzidas por estes isolados apresentaram ampla faixa de estabilidade em diferentes valores de pH e temperaturas. Os dados obtidos demonstraram que o leite de cabra pode conter uma microbiota bacteriocinogênica diversificada, capaz de inibir micro-organismos de interesse à indústria de alimentos, podendo ser potencialmente empregadas na bioconservação de alimentos produzidos em diferentes condições de processamento.