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Estudo da ação de extrato de Punica granatum sobre o metabolismo e morfologia celular de ovários e útero de ratas wistarde Lemos Bezerra, Andrezza January 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006 / Punica granatum L. é popularmente conhecida como romã e pertence à família Punicaceae.
É um arbusto denso, de coloração verde brilhante, folhas ovais, flores vermelhas ou
laranjas e frutos caracterizados pela presença de pericarpo carnoso-coriáceo, polpa
suculenta e sementes irregularmente facetadas, sendo largamente utilizada na medicina
popular com diversos propósitos terapêuticos. Este estudo teve o objetivo de avaliar os
efeitos biológicos do extrato aquoso de romã sobre a regulação do metabolismo e
morfologia do sistema reprodutor em ratas Wistar jovens e adultas. Para preparação do
extrato aquoso de romã, foram pesadas 50g da casca do fruto, cortadas em pequenos
pedaços e fervidos por 10 minutos em 500mL de água destilada, produzindo uma solução
final com concentração comum de 0,1g/mL e que foi injetada por via IP nos animais. Após
o tempo de administração de 0 (zero), 2 (duas), 4 (quatro) e 8 (oito) horas, os animais
foram sacrificados, para obtenção do sangue, do qual foi obtido o soro, a fim de avaliar as
concentrações metabólicas de: insulina pelo método de radioimunoensaio; glicose e cálcio
pelo método fotocolorimétrico. Para avaliar a regulação do extrato aquoso de romã sobre as
gônadas, foram utilizadas ratas de linhagem Wistar, saudáveis, com um mês de idade e
peso médio de 128,5g. Os animais foram divididos em 3 grupos: controle (C, tratadas com
salina a 0,9%); experimentais G1 e G2 (sendo G1=10mg/mL e G2=20mg/mL do extrato).
Os animais foram submetidos a um tratamento crônico de 10 dias, por via oral, após este
período foram sacrificados para retirada, dissecação e pesagem dos ovários e úteros para
análise histomorfológica. O extrato de romã induziu uma alteração significativa na
concentração de insulina após 4 horas de tratamento, sendo verificado um aumento de
1563,06% com relação ao percentual controle, e após 8 horas de tratamento com o extrato,
verifica-se uma redução da concentração de insulina. Por outro lado, observando a
concentração sérica de glicose, verifica-se que após 4 horas de tratamento ocorre uma
redução de 35.65% e que o cálcio sérico aumenta de 10% quando comparado ao controle.
Outros resultados mostram que o extrato de romã não só modifica a concentração de
insulina, mas também altera a morfologia de células foliculares. Nos animais tratados com
o extrato de romã na concentração de 20mg/mL a análise histomorfológica identificou um
aumento na produção folicular e grande quantidade de corpos lúteos quando comparado
com os animais controle. No entanto, não foi observada alteração histomorfológica nos
úteros dos animais. Conclui-se que o extrato aquoso de romã modifica o processo
metabólico liberando grandes quantidades de insulina e reduzindo a concentração de
glicose. No entanto, o tratamento crônico com o extrato, na concentração de 20mg/mL,
durante dez dias, provavelmente, aumenta a quantidade de folículos ovarianos e corpos
lúteos, indicando uma ativação do eixo hipotalâmico-hipofisário e/ou que a insulina
liberada pode modificar a atividade gonadal
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Atividade antinociceptiva, antipirética, anti-inflamatória, antimicrobiana e antioxidante de extratos e substâncias isoladas de Cleome spinosa Jacq.SILVA, Ana Paula Sant'Anna da 30 June 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-06-30 / FACEPE / As plantas utilizadas na medicina tradicional são promissores recursos no tratamento de diversas doenças, cabe a pesquisa científica confirmar estas propriedades terapêuticas. Devido ao uso de Cleome spinosa Jacq. na medicina popular contra processos inflamatórios, febre e infecções microbiológicas, este estudo tem como objetivo avaliar a atividade antinociceptiva, antipirética, anti-inflamatória, antimicrobiana e antioxidante de extrato e substâncias isoladas de C. spinosa Jacq. A partir de folhas (L) e raízes (R) de C. spinosa diferentes extratos foram obtidos (ciclo-hexano: ChL e ChR; clorofórmio: CL e CR; acetato de etila: EAL e EAR, metanol: ML e MR). A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo de forma a obter as concentrações inibitória mínima (MIC) e microbicida (MMC). A atividade anti-inflamatória foi avaliada através do teste de peritonite em camundongos. Atividade antioxidante através dos métodos de 2,2-Azino-Bis-(3-etilbenzotiazolina)-6-sulfónico (ABTS), ensaio de sequestro radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) e a capacidade antioxidante total por fosfomolibdênio. A atividade antipirética dos flavonoides isolados de C. spinosa Jacq foi investigada pela pirexia induzida por levedura em camundongos albinos e atividade analgésica em camundongos utilizando a contorção induzida por ácido acético. O exame de toxicidade aguda realizado com os extratos de plantas não revelou qualquer sinal de toxicidade. Na atividade antimicrobiana, os extratos CHL e CL foram os mais ativos, com MIC inferior a 1 mg/mL contra Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Micrococcus luteus e. É importante notar que estas concentrações são muito mais baixas do que a sua concentração de 50% de hemólise (HC50). Foram encontradas fortes correlações entre o teor de compostos fenólico (ρ = -0,89) e teor de flavonoides (ρ = -0,87), reforçando o possível papel destas classes de metabólitos sobre a atividade antimicrobiana de C. spinosa derivado extratos. Além disso, CL e CR mostrou a melhor atividade inibitória contra isolados clínicos de S. aureus, eles também mostraram ação sinérgica com oxacilina contra todas as cepas. Na atividade anti-inflamatórias dos extratos ML e MR, todas as concentrações testadaas causaram uma redução significativa no número de leucócitos em camundongos com peritonite. Os extratos ML e MR mostrou atividade antioxidante Pará nos três métodos testados, ABTS, DPPH e fosfomolibdênio. Os compostos quercetina 3-glicose, rhramnose e 5-Hidróxi-7,4 '-dimethoxyflavone isolado em doses de 10 e 20 mg / kg, mostraram uma redução significativa da febre e apresentaram atividade analgésica. O estudo mostrou-se promissor para o desenvolvimento com C. spinosa. / The plants used in folk medicine are promising resources in the treatment of several pathologies, combined with research confirming these therapeutic properties. Due to the use of Cleome spinosa Jacq. in folk medicine against inflammatory processes, fever and microbiological infections, this study aims to evaluate the antinociceptive activity, antipyretic, anti-inflammatory, antimicrobial and antioxidant extract and isolated substances of Cleome spinosa jacq. From leaves (L) and roots (R) of C. spinosa different extracts were obtained (cyclohexane: ChL and ChR; chloroform: CL and CR; ethyl acetate: EAL and EAR, methanol: ML and MR). Antibacterial activity was evaluated by the broth microdilution method to obtain the minimum inhibitory (MIC) and microbicidal (MMC). Anti-inflammatory activity was evaluated through peritonitis test in mice. Antioxidant Activity through the methods of 2,2-Azino-Bis-(3 Ethylbenzothiazoline)-6-Sulfonic Acid (ABTS), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) Radical Scavenging Assay and Capacity Total Antioxidant by Phosphomolybdenum Assay. The antipyretic activity of flavonoids isolated from Cleome spinosa Jaqc. was investigated for its, on normal body temperature and yeast-induced pyrexia in albino rats and analgesic activity in mice using the acetic acid induced writhing. According The acute toxicity performed the plant extracts did not reveal any toxic signs. In the antimicrobial activity the ChL and CL extracts were the most actives, with MIC less than 1 mg/mL against S. aureus, Bacillus subtilis and Micrococcus luteus. It is important to note that these concentrations are much lower than their 50% hemolysis concentration (HC50) values. Strong correlations were found between the average MIC against S. aureus and their phenolic (ρ = -0.89) and flavonoid content (ρ = -0.87), reinforcing the possible role of these metabolite classes on the antimicrobial activity of C. spinosa derived extracts. Moreover, CL and CR showed the best inhibitory activity against S. aureus clinical isolates, they also showed synergistic action with oxacilin against all strains (at least at one combined proportion). In the activity antiinflamatory methanolic extracts of leaf and root at all concentrations tested caused a significant reduction in the number of leukocytes in mice with peritonitis. The ML and MR extracts showed antioxidant activity para the three methods tested, ABTS, DPPH and Fosfomolibidenium. The compounds Quercetin 3-glucose, rhramnose and 5-hidroxi-7,4 '-dimethoxyflavone isolated at doses of 10 and 20mg/kg, showed significant reduction in normal body temperature no dose-dependent manner and showed analgesic activity. The study showed promising. The study of the C. spinosa showed promising.
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Bioprospecção de metabólitos secundários de fungos endofíticos associados à planta medicinal Plantago major L. de interesse ao Sistema Único de Saúde (SUS)VIEIRA, Paula Danielle de Souza 21 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-02-21 / FACEPE / A bioprospecção de metabólitos secundários produzidos por fungos endofíticos constitui uma atividade promissora na pesquisa e detecção de novas espécies capazes de produzir compostos com atividades biológicas de interesse na área de saúde e na agronômica. O objetivo deste estudo foi isolar e determinar a frequência de colonização de fungos endofíticos associados a folhas, pecíolos, raízes e sementes da planta medicinal Plantago major, avaliar sua capacidade para produzir metabólitos secundários com ação antibacteriana e antifúngica frente a micro-organismos patogênicos, bem como analisar a eficiência da utilização de resíduos agroindustriais como meios de cultivo alternativos para endofíticos, visando à produção de esporos e de compostos bioativos. As espécies mais frequentemente isoladas foram Phoma eupyrena, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporium e Pestalotiopsis maculans. Os resultados obtidos apontam os fungos endofíticos associados a P. major como uma fonte promissora de metabólitos secundários bioativos, onde esses compostos podem ser obtidos a baixo custo por fermentação em resíduos agroindustriais de arroz e maracujá. / Bioprospecting of secondary metabolites produced by endophytes is a promising activity in research and detection of new species capable of producing compounds with biological activities of interest in the area of health and agronomy. The aim of this study was to isolate and determine the frequency of colonization of endophytic fungi associated with leaves, petioles, roots and seeds of medicinal plant Plantago major, assess its ability to produce secondary metabolites with antibacterial and antifungal against pathogenic to humans and plants share microrganisms, as well as analyze the efficiency of the use of agroindustrial wastes as alternative means of cultivation for endophytic, aimed at producing spores and bioactive compounds. The most frequently isolated species were Phoma eupyrena, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporium and Pestalotiopsis maculans. The results obtained indicate the endophytic fungi associated with P. Major as a promising source of bioactive secondary metabolites, where these compounds can be obtained at low cost by fermentation of agroindustrial waste rice and passion fruit.
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Avaliação e validação de metodologias analíticas por UV-VIS e CLAE-DAD para quantificação de antraquinonas nos frutos de Senna angustifolia Vahl (FABACEAE)LEÃO, Waleska de Figueirêdo 25 February 2015 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-28T19:17:20Z
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Previous issue date: 2015-02-25 / FACEPE / Para que as plantas medicinais e os fitoterápicos apresentem parâmetros que conduzam a resultados confiáveis e adequados à qualidade exigida para os medicamentos, é imprescindível a validação dos métodos de análise desses produtos, conforme estabelecido pelos órgãos sanitários. Baseando-se neste fato, o presente estudo visou avaliar metodologias analíticas para quantificação de Derivados Hidroxiantracênicos (DH) nos frutos de Senna angustifolia Vahl, por espectrofotometria de absorção no visível (UV-VIS) e por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Adicionalmente, objetivou-se estabelecer especificações de qualidade para os frutos desta espécie através da sua caracterização físico-química (granulometria, perda por dessecação, teor de cinzas totais e insolúveis em ácido). A droga vegetal seca e triturada, após caracterização farmacognóstica, foi empregada no desenvolvimento e avaliação de método espectrofotométrico mais simples e de mais fácil execução para quantificação de DH totais baseado na reação de Bornträeger. Para o método cromatográfico adotou-se como ponto de partida procedimento descrito na Farmacopeia Brasileira 5ª Ed. para separação e quantificação simultânea dos senosídeos A e B. Ambos os métodos foram validados quanto aos parâmetros preconizados pela RE nº899/2003 da ANVISA. Os métodos analíticos propostos apresentaram especificidade, seletividade e linearidade adequadas, baixos valores de Limites de Detecção (LD) e Limites de Quantificação (LQ), precisão nos dois níveis analisados (repetibilidade e precisão intermediária), exatidão e robustez. Por fim, os procedimentos analíticos estudados mostraram-se apropriados à quantificação dos derivados hidroxiantracênicos totais e dos senosídeos A e B nos frutos de S. angustifolia Vahl. / For medicinal plants and phytopharmaceutical present parameters that lead to reliable results and the appropriate quality required for medicines, validation of analytical methods such products is essential, as established by the health authorities. Based on this fact, the present study aimed at evaluating analytical methodologies for the quantification of hydroxyanthracene derivatives (HD) in the fruits of Senna angustifolia Vahl, by the visible absorption spectrophotometry and by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Additionally, It aimed to establish quality specifications for the fruits this species through the physicochemical characterization (particle size, loss on drying, content of total ash and acid-insoluble). The dried and crushed plant drug, after characterization Pharmacognostic, It was used in the development and evaluation of simpler and easiest spectrophotometric method to apply for quantification of total hydroxyanthracene derivatives based on the Bornträger reaction. For the chromatographic method was adopted as a starting point procedure described in the Brazilian Pharmacopoeia 5th Ed. for simultaneous separation and quantification of sennosides A and B. Both methods were validated as to the parameters recommended by the RE nº899/2003 from ANVISA. The proposed analytical methods have specificity, selectivity and adequate linearity, low values of Detection Limits (DL) and Quantification Limits (QL), precision in the two analyzed levels (repeatability and intermediate precision), accuracy and robustness. Finally, the analytical procedures studied showed to be appropriate for the quantification of total hydroxyanthracene derivatives and sennosides A and B in the fruits of S. angustifolia Vahl.
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Variação da composição química e da atividade antifitopatogênica dos óleos essenciais das folhas e frutos de Hymenaea courbaril L. var. courbaril (Fabaceae) coletadas em área de extrema importância biológica para a conservaçãoMERCÊS, Paula Fernanda Figueiredo das 28 July 2015 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-05-24T15:03:10Z
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Previous issue date: 2015-07-28 / FACEPE / A formação de uma consciência ecológica a fim de preservar o meio ambiente tem gerado a necessidade de testar produtos naturais, visando um controle alternativo de pragas e fitopatógenos. Hymenaea courbaril L. var. courbaril, conhecida popularmente como Jatobá é uma planta de grande ocorrência na região semiárida brasileira e bastante utilizada pelas populações locais para fins medicinais. Levando isso em consideração, o objetivo desse trabalho foi comparar a caracterização química, verificar o potencial antimicrobiano e inseticida dos óleos essenciais das folhas do jatobá, coletados em quatro distintas fitofisionomias do Parque Nacional Vale do Catimbau (PARNA do Catimbau), reserva da Caatinga localizada no município de Buíque, Pernambuco. As amostras (I, II, III e IV) foram submetidas ao processo de hidrodestilação, e a caracterização química foi analisada por (CG/MS). A atividade biológica, foi determinada pelo método de microdiluição em caldo, para o ensaio bacteriana foram utilizadas seis fitopatógenos Acidovorax citrulli (DEPA 1.12), Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (DEPA 31), Ralstonia solanacearum (DEPA CRM 10), Xanthomonas campestris pv. campestris (DEPA 53), Xanthomonas campestris pv. malvacearum (DEPA 11.2.1), Xanthomonas campestris pv. viticola (DEPA 137). Cinco fungos fitopatógenicos foram testados: Fusarium oxysporum, Fusarium moniliforme, Fusarium solani, Verticillium lecanii, Rhizopus stolonifer e Aspergillus flavus. Análises do solo e fatores abióticos dos locais de coleta também foram averiguados, afim de avaliar a influencia dos mesmos sobre os resultado das amostras coletadas. Os bioensaios inseticidas com as duas pragas de interesse agrícola o Sitophilus zeamais (gorgulho-do-milho) e Tetranychus urticae (ácaro-rajado), foram realizados com uma amostra do óleo. Para avaliar a interferência do óleo essencial na fisiologia nutricional do gorgulho do milho, foram testadas quatro concentrações de 10, 30, 40 e 50 μl/g. Nos testes de fumigação para com o ácaro-rajado, a CL50 foi de 35,57 μL L-1 de ar, foram testadas concentrações 2,0 á 100,0 μL. Os óleos essenciais obtidos, apresentaram rendimento de 0,86%, 0,87%, 1,32% e 1,45% para as quatro amostras coletados, respectivamente, registrando a presença de monoterpenos e sesquiterpenos obtendo-se 96,68% da identificação da composição química dos óleos. m todas as amostras, os principais compostos identificados foram Óxido de cariofileno (I: 20,55%; II: 20,50%; III: 20,83%; IV: 21,77%), beta-cariofileno (I: 16,97%; II: 17,20%; III: 16,18%; IV: 17,32%) e Junipene (I: 13,58%; II: 13,07%; III: 13,72%; IV: 14,26%).Todos os óleos apresentaram atividade antimicrobiana frente a bactérias e fungos, a concentração inibitória mínima (CMI) e concentração bactericida/fungicida mínima (CMB/CFM). O óleo causou mortalidade significativa (p<0.05), promovendo dano fisiológico aos insetos, em todas as concentrações testadas. Ainda no mesmo teste, pode-se observar que a oviposição também foi suscetível ao óleo essencial. A comparação do perfil químico dos óleos de H. courbaril L. var. courbaril evidenciou que as quatro amostras pertencem à mesma via biosintética, o cariofileno. A variação geográfica teve efeito significativo sobre as caraterísticas do óleo do jatobá coletado em diferentes fitofisionomias da região. Para os testes in vitro os óleos apresentaram atividade antimicrobiana positiva frente a bactérias e fungos. O óleo também foi tóxicos ao T. Urticae e a S. zeamais, à medida que a concentração e o período de exposição era aumentada. / The formation of ecological awareness in order to preserve the environment has generated the need to test natural products, seeking an alternative pest control and plant pathogens. Hymenaea L. var. courbaril, popularly known as Jatoba is a high occurrence of plant in the Brazilian semiarid region and widely used by local people for medicinal purposes. Taking this into consideration, the aim of this study was to compare the chemical, check the antimicrobial potential and insecticide essential oils of locust tree leaves, collected in four distinct faces of Catimbau Valley National Park (PARNA the Catimbau), reserve located Caatinga in the municipality of Buíque, Pernambuco. The samples (I, II, III and IV) were subjected to hydrodistillation process and chemical characterization was analyzed (GC / MS). The biological activity was determined by the microdilution broth method for the assay were used six bacterial pathogens Acidovorax citrulli (DEPA 1.12), Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (31 DEPA), Ralstonia solanacearum (DEPA CRM 10), Xanthomonas campestris pv. campestris (53 DEPA), Xanthomonas campestris pv. malvacearum (DEPA 11.2.1), Xanthomonas campestris pv. viticola (DEPA 137). Five pathogenic fungi were tested: Fusarium oxysporum, Fusarium moniliforme, Fusarium solani, Verticillium lecanii, stolonifer Rhizopus and Aspergillus flavus. Soil analyzes and abiotic factors of the collection sites were also investigated in order to assess the influence of these on the results of samples collected. Bioassays with two insecticides pest Sitophilus zeamais the agricultural interest (maize weevil) and Tetranychus urticae (spider mite Brindle), were performed with a sample of the oil. To evaluate the effect of the essential oil in nutritional physiology maize weevil, four concentrations were tested 10, 30, 40 and 50 l / g. In tests for fumigation with striped mite, LC50 was 35.57 U-1 μL of air concentrations tested were 2.0 100.0 μL. Essential oils obtained showed yield of 0.86%, 0.87%, 1.32% and 1.45% for the four collected samples, respectively, registering the presence of monoterpenes and sesquiterpenes obtaining 96.68% of the identification of the chemical composition of the oils. m all the samples, the major compounds identified were caryophyllene oxide (I: 20.55%, II: 20.50%; III: 20.83%; IR: 21.77%), beta-caryophyllene (I: 16 97%; II: 17.20%; III: 16.18%; IR: 17.32%) and Junipene (I: 13.58%; II: 13.07%; III: 13.72%; IR: 14.26%) All oils presented antimicrobial activity against bacteria and fungi, the minimum inhibitory concentration (MIC) and bactericidal / minimum fungicidal concentration (CMB / CFM). The oil caused significant mortality (p <0.05), promoting physiological damage to insects, in all tested concentrations. In the same test, it can be seen that the eggs were also susceptible to the essential oil. The comparison of the chemical profile of the oils of H. courbaril L. var. courbaril showed that four samples belong to the same biosynthetic pathway, caryophyllene. Geographic variation had a significant effect on jatobá oil characteristics collected in different faces of the region. For the in vitro tests positive oils exhibited antimicrobial activity against bacteria and fungi. The oil was also toxic to T. urticae and S. zeamais, as the concentration and the exposure time was increased.
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Avaliação das atividades biológicas de compostos fenólicos: naturais (cumarina) e derivados comerciais (3-hidroxicumarina e 4-hidroxicumarina)OLIVEIRA, Erwelly Barros de 19 February 2016 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-05T17:58:21Z
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Previous issue date: 2016-02-19 / FACEPE / As plantas usadas na medicina popular têm sido alvo constante pela indústria farmacêutica na busca de novos protótipos úteis para a fabricação de fármacos direcionados ao tratamento de variadas doenças. Isso tem levado ao ressurgimento do interesse por metabólitos secundários produzidos por vegetais como os compostos fenólicos, dentre os quais ressaltam as cumarinas. Essas substâncias purificadas exibem atividades biológicas potentes e relevantes, além de apresentarem baixa toxicidade nos mamíferos. Esse conjunto de benefícios mantém as cumarinas como alvo de investigação nas pesquisas atuais e fomenta o interesse farmacêutico a nível mundial. O objetivo deste trabalho foi estudar as atividades biológicas de compostos fenólicos: cumarina (1,2-benzopirona) e derivados comerciais (3-hidroxicumarina e 4-hidroxicumarina). As formas promastigotas de Leishmania (L.) amazonensis (105 parasitas/mL) foram testadas nas concentrações de 1,56 a 400 μg/mL para obtenção da IC50 através do método colorimétrico do MTT. A anfotericina B foi utilizada como controle positivo e o DMSO como controle negativo. A morfologia das formas promastigotas da L.(L.) amazonensis, sob efeito da 3-hidroxicumarina, foi analisada através da microscopia eletrônica de varredura, em função da melhor atividade leishmanicida (IC50 = 6,25 μg/mL), quando comparada a cumarina e a 4-hidroxicumarina (200 μg/mL e 400 μg/mL, respectivamente). A citotoxicidade foi realizada em macrófagos de linhagem J774 (2x105 células/mL), células Vero (1x105 células/mL) e células HeLa (2x105 células/mL) sob efeito da 3-hidroxicumarina nas concentrações de 0,78 a 400 μg/mL. A atividade citotóxica das três linhagens de células foi estatisticamente significativa para as maiores concentrações de 100 a 400 μg/mL (p<0,05) e o estudo morfológico revelou alterações como decréscimo da densidade celular, com presença de células arredondadas ou retraídas. Os compostos testados mostraram um padrão concentração-dependente em relação as atividade antioxidante (DPPH) e hemolítica. Os resultados obtidos neste trabalho colocam os compostos fenólicos (cumarina, 3-hidroxicumarina e 4-hidroxicumarina) em evidência para investigações futuras visando o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos contra leishmanioses. / The plant used in folk medicine have been targeted by the pharmaceutical industry constantly in search of new prototypes useful for the manufacture of drugs directed to the treatment of various diseases. This has led to a resurgence of interest in secondary metabolites produced by plants as phenolic compounds, among which highlight the coumarin. These purified substances exhibit potent and relevant biological activities, besides having low toxicity in mammals. This set of benefits keeps coumarins as research target on current research and promotes pharmaceutical interest worldwide. The objective of this work is to study the biological activity of phenolic compounds: coumarin (1,2-benzopyrone) and commercial derivatives (3-hydroxycoumarin and 4-hydroxycoumarin). Leishmania (Leishmania) amazonensis promastigotes (105 parasites/mL) were treated with 1.56 to 400 μg/mL to obtain IC50 values using the MTT bioassay. Amphotericin B was used as a control drug (0.19 to 100 μg/mL) and LIT-DMSO, negative control. The morphological changes of promastigotes L. (L.) amazonensis were analysed in scanning electron microscopy, in the best activity antileishmanial (IC50 = 6,25 μg/mL) when compared with coumarin and 4-hydroxycoumarin (200 μg/mL e 400 μg/mL, respectively). Cytotoxicity was determined using the MTT colorimetric method. The cells were added at a concentration of 1 x 105 cells / mL (Vero cells) and 2 x 105 cells / mL (HeLa cells and J774 macrophages) in 96 well plates where the 3-hydroxycoumarin was at concentrations from 0.78 to 400 μg / mL. The morphology of the cells was evaluated with the aid of an inverted phase contrast microscope and photographic records performed for each concentration tested. The 3-hydroxycoumarin was not cytotoxic to J774, Vero and Hela cells in lower concentrations and morphological changes in Vero, Hela and J774 cells were viewed from the concentration of 100 μg/mL of 3-hydroxycoumarin. The data of the antioxidant and hemolytic activities showed clearly that the data indicate the concentration-dependent activities of compounds. This study showed that coumarin and its derivatives (3-hydroxycoumarin and 4-hydroxycoumarin) can be considered in interesting candidate for future studies regarding as a prototype drug for the treatment of leishmaniasis, but more studies should be conducted to discovery of the possible mechanisms involved in the biological activities studied.
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Bioprospecção de actinobactérias endofíticas de folhas de Moiringa oleifera Lam. em três localidades do Estado de Pernambuco e avaliação dos metabólitos secundários produzidos por esses micro-organismosSOUZA, Igor Felipe Andrade Costa de 26 February 2016 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-13T16:44:02Z
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Previous issue date: 2016-02-26 / CNPQ / Moringa oleifera Lamarck é uma planta pertencente à Família das Moringaceae, caracterizada como uma planta arbórea. Os vegetais possuem uma microbiota característica que tem importância para a sua sanidade e manutenção. Sendo esses micro-organismos denominados de endofíticos. Destaca-se a presença das actinobactérias, como produtores de metabólitos bioativos. O presente trabalho teve por objetivo a bioprospecção, através do isolamento, da identificação e da avaliação de actinobactérias endofíticas isoladas de folhas da M. oleifera. As folhas foram coletadas no campus Recife da Universidade Federal de Pernambuco, no Jardim Botânico do Recife do Recife e na cidade de Caruaru no Estado de Pernambuco, Brasil. Sendo processadas no prazo de 24 horas, através da metodologia de desinfecção. O isolamento foi realizado por maceração. A observação macroscópica foi realizada através da observação de características das colônias. A caracterização micromorfológica foi realizada através da técnica de microcultivo em placa. Testes fenotípicos para classificação taxonômica foram realizados. A análise do potencial de produção de metabólitos com atividade antimicrobiana foi realizada através de uma seleção primária em meio sólido, pela técnica do ―Teste em Bloco de Gelose‖. A actinobactéria endofítica selecionada no ensaio primário como melhor produtora do composto bioativo, foi cultivada em meios líquidos e testada contra micro-organismos testes. A Atividade antimicrobiana durante a fermentação foi avaliada através do teste de Difusão em Ágar. Foram isolados 33 actinobactérias endofíticas, sendo 21 (63,6%) linhagens provenientes das folhas coletadas da M. oleifera no Jardim Botânico do Recife; 8 (24,2%), no campus Recife da UFPE; e 4 (12,2%), na Cidade de Caruaru. A análise macroscópica verificou-se que não houve diversidade em relação aos aspectos observados. A análise microscópica permitiu inferir que em apenas 13 (39,4%) isolados foi possível determinar o gênero, sendo eles: Streptomyces e Actinomadura. Os ensaios fenotípicos foram inconclusivo diante da diversidade de gêneros pertencentes ao Filo Actinobacteria. Das 33 actinobactérias, 21(62,6%) apresentaram atividade inibitória sobre o fungo filamentoso. Apenas 5(15,2%) isolados apresentaram atividade sobre os micro-organismos testes Gram-negativos. Os micro-organismos testes Gram-positivos foram bastante sensíveis quando do teste de inibição, apresentando halos médio de até 35mm. A ação sobre o Mycobaterium smegmatis foi observada em representantes de todos os grupos isolados. Sobre as leveduras, observa-se que 5(12,2%) actinobactérias endofíticas apresentaram atividade insignificante frente a esses micro-organismos testes. No ensaio primário, não houve produção de compostos bioativos nos meios de cultivo: ISP-1, ISP-4, Meio Khanna, ALA, AVP, BDA, CAA, GAA, YCED, pelo Strptomyces sp. CC4. Através da análise estatística, observou-se que os meios K e MPE são os melhores estatisticamente. Durante o processo de extração do principio ativo, observou-se que este encontra-se na biomassa, sendo o metanol o melhor solvente extrator. A análise qualitativa da atividade antimicrobiana demonstrou que as actinobactérias isoladas das folhas de M. oleifera possuem potencial biotecnológico na produção de compostos bioativos com ação farmacológica. / Moringa oleifera Lamarck is a plant belonging to the family of Moringaceae characterized as a woody plant. Plants have a characteristic microbiota that is important for your health and maintenance. And these micro-organisms called endophytes. There is the presence of actinomycetes as producers of bioactive metabolites. This study aimed to bioprospecting, through the isolation, identification and evaluation of endophytic actinomycetes isolated from leaves of M. oleifera. The leaves were collected in Recife campus of the Federal University of Pernambuco, in the Botanical Garden of Recife Recife and the city of Caruaru in Pernambuco State, Brazil. Being processed within 24 hours methodology by disinfection. The isolation was carried out by maceration. Macroscopic observation was performed by observing the characteristics of the colonies. The micromorphological characterization was performed by microculture plate technique. phenotypic tests for taxonomic classification were performed. The analysis of metabolites with antimicrobial activity production potential was performed by a primary selection in solid medium, the technique of "Test agar block." The endophytic actinobacteria selected in the primary test as the best producer of the bioactive compound, was cultured in liquid media and tested against microorganisms tests. The antimicrobial activity during fermentation was evaluated using the diffusion test in agar. 33 endophytic actinomycetes were isolated, 21 (63.6%) strains collected from the leaves of M. oleifera in the Botanical Garden of Recife; 8 (24.2%) in Recife UFPE campus; and 4 (12.2%) in the city of Caruaru. Macroscopic analysis showed that there was no diversity with respect to observed aspects. Microscopic analysis allowed to infer that in only 13(39.4%) isolates were unable to determine the genre, namely: Streptomyces and Actinomadura. Phenotypic tests were inconclusive given the diversity of genres belonging to the phylum Actinobacteria. Of the 33 actinomycetes, 21(62.6%) had inhibitory activity against the filamentous fungus. Only 5(15.2%) isolates showed activity against microorganisms Gram-negative tests. Microorganisms Gram-positive tests were sensitive enough when the inhibition test, showing halos average of up to 35mm. Action on Mycobacterium smegmatis was observed in representatives of all isolated groups. On the yeast, it is observed that 5(12.2%) endophytic actinomycetes showed negligible activity against these microorganisms tests. In the primary test, there was no production of bioactive compounds in culture media: ISP-1, ISP-4, Khanna, ALA, AVP, BDA, CAA, GAA, YCED by Streptomyces sp. CC4. The statistical analysis showed that media K and MPE are the best statistically. During the extraction process the active ingredient, it was observed that this is the biomass, methanol being the best extraction solvent. Qualitative analysis of antimicrobial activity showed that the isolated actinomycetes of M. oleifera leaves have biotechnological potential in the production of bioactive compounds with pharmacological action.
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Embriogênese Somática Indireta e Poliploidia no Gênero Coffea: Base e AplicaçãoSANGLARD, N. A. 14 July 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-07-14 / A embriogênese somática indireta (ESI) é uma das aplicações da cultura de tecidos que permite a manutenção, a propagação e a geração de novos germoplasmas. Assim, a partir do estabelecimento da ESI em quatro Coffea com diferentes níveis de ploidia (diploides Coffea canephora Pierre ex Froehner, Coffea eugenioides Moore, alotriploide Híbrido de Timor HT, alotetraploide Coffea arabica L.), os objetivos do presente estudo foram: (a) verificar a influência das características cariotípicas (número de cromossomos, nível de ploidia e conteúdo de DNA nuclear) na ESI; e (b) duplicar o número de cromossomos do Coffea alotriploide HT CIFC 4106 . Sob as mesmas condições in vitro, os quatro Coffea diferiram entre si durante todas as etapas da ESI. Os alopoliploides apresentaram maior número médio de calos embriogênicos friáveis (CEF), em tempo relativamente curto, e exibiram visualmente proliferação celular mais pronunciada. CEF de C. arabica resultaram em maior número médio de embriões somáticos cotiledonares maduros, seguido de HT e C. eugenioides com mesmo número médio, e C. canephora com o menor. A partir dos dados de ESI, análise do cariótipo e mensuramento do valor 2C nuclear dos diferentes germoplasmas, as respostas de ESI em Coffea foram relacionadas com o nível de ploidia. Com a ESI estabelecida, a duplicação cromossômica do alotriploide HT CIFC 4106 , o anortoploide com 2n = 3x = 33 cromossomos, foi conduzida associando esse sistema in vitro com o tratamento envolvendo a colchicina. Um total de 65 plântulas foram regeneradas a partir dos CEF
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tratados com colchicina (0,5; 1,5 ou 2,5 mM) por 96 horas. Independentemente da concentração de colchicina empregada, 49,3% de hexaploides (2n = 6x = 66 cromossomos, 2C = 4,20 pg) foram obtidos. Além disso, a estratégia estabelecida (ESI/colchicina) resolveu os principais gargalos da duplicação cromossômica in vitro: baixa taxa de poliploides, alto número de mixoploides e alta taxa de mortalidade. Esse estudo gerou novos dados acerca das bases do entendimento da ESI e contribuiu com uma nova estratégia de duplicação cromossômica. Além disso, um novo germoplasma de Coffea, os hexaploides do HT CIFC 4106 , foi gerado.
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Aspectos ecofisiológicos de espécies lenhosas nativas da Caatinga associadas a fungos micorrízicos arbusculares sob condições de seca e salinidadeFARIA, Gabriella Frosi Albuquerque Figueiroa 17 February 2017 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-05-23T18:11:33Z
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Previous issue date: 2017-02-17 / CNPQ / FACEPE / A seca e salinidade são os principais estresses abióticos causadores de perda de produtividade nas plantas, comuns em áreas áridas e semiáridas, como o Nordeste brasileiro. Duas ferramentas que podem mitigar os efeitos deletérios desses estresses nas plantas são os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) e suprimento de fósforo inorgânico foliar (Pi), aumentando as chances de recuperação dessas áreas. O presente estudo analisou a simbiose com FMA de duas espécies lenhosas nativas da região, Poincianella pyramidalis e Cnidoscolus quercifolius, em diferentes níveis de fósforo no solo, além de aspectos ecofisiológicos de uma dessas espécies associada com FMA e aplicação de Pi foliar sob seca e salinidade em casa de vegetação. Foram avaliadas a colonização micorrízica, trocas gasosas, solutos orgânicos, pigmentos fotossintéticos, biomassa e nutrientes. Ambas espécies realizaram associação com FMA e foram beneficiadas no crescimento. Para P. pyramidallis e C. quercifolius, os níveis de 33 e 15 mg dm-3 de fósforo no solo, respectivamente, promoveram maior crescimento nas plantas micorrizadas. P. pyramidalis foi selecionada para os demais experimentos devido aos ganhos mais representativos. Nos experimentos de seca e salinidade, essa espécie na condição hidratada foi mais beneficiada com FMA isolado, com maior fotossíntese e biomassa. Quando submetidas à seca, plantas com FMA, Pi ou ambos não tiveram reduções da biomassa aérea e acumularam prolina; plantas com FMA isolado tiveram maiores concentrações de açúcares e clorofilas. Após reidratação, plantas com FMA, Pi ou ambos tiveram recuperação das trocas gasosas, enquanto plantas sem FMA e Pi apresentaram recuperação parcial comparado ao Controle. Entretanto, plantas com FMA isolado submetidas à seca tiveram fotossíntese superior ao Controle após reidratação. Sob condição salina, plantas com FMA, Pi ou FMA+Pi foram beneficiadas, apresentando menores reduções nas trocas gasosas e sem redução na biomassa da parte aérea. As plantas com FMA isolado sob salinidade tiveram menor acúmulo de Na+ e Cl- nas folhas e raízes, enquanto plantas com Pi e FMA+Pi tiveram maiores concentrações de Cl- nas folhas. Já plantas sem FMA e Pi na condição salina apresentaram maior concentração de Cl- na raiz. Portanto, a aplicação de Pi, FMA ou ambos promoveram maior tolerância de P. pyramidalis à seca e salinidade. Entretanto, a resposta superior foi observada nas plantas com FMA isolado. / Drought and salinity are the main abiotic stresses that cause loss in plant productivity,
common in arid and semiarid areas, such the Brazilian Northeast. Two tools that can to
mitigate the deleterious effects of these stresses are arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) and leaf inorganic phosphorus supply (Pi), increasing the chances of recovery of these areas. The present study analyzed the symbiosis with AMF of two native woody species in the region, Poincianella pyramidalis and Cnidoscolus quercifolius, at different phosphorus levels in the soil, in addition to ecophysiological aspects of one these species associated with AFM and leaf Pi in a greenhouse. Were evaluated the mycorrhizal colonization, gas exchange, organic solutes, photosynthetic pigments, biomass and nutrients. Both species perform associations with AMF and were benefited in growth. For P. pyramidalis and C. quercifolius, the phosphorus levels of 33 e 15 mg dm-3, respectively, promoted the higher growth in mycorrhizal plants. P. pyramidalis was selected for the other experiments by presenting more representative gains. In drought and salt experiments, this species under well-watered condition was more benefited with AMF isolated, with higher photosynthesis and biomass. When submitted to drought, plants with AMF, Pi or both did not have reductions in shoot biomass and had a proline accumulation; plants with AMF isolated had higher concentrations of sugars and chlorophyll. After rehydration, plants with AMF, Pi or both had a recovery in gas exchange, while plants without AMF and Pi showed a partial recovery compared to Control plants. However, plants with AMF isolated submitted to drought had a higher photosynthesis compared to Control after rehydration. Under saline condition, plants with AMF, Pi or both were benefited, showed lower reductions in gas exchange and no reduction in shoot biomass. Plants with AMF isolated under salt had less accumulation of Na+ and Cl- in leaves and roots, while plants with Pi and AMF+Pi had higher accumulation of Cl- in leaves. Plants without AMF and Pi showed a higher concentration of Cl- in roots. Therefore, the leaf Pi supply, AMF or both promoted a higher tolerance in P. pyramidalis to drought and salt. However, the superior response was observed in plants with isolated AMF.
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Reconhecimento, sinalização e indução de resposta no tomateiro infectado com Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici: uma abordagem proteômicaSILVA, Tulio Diego da 23 February 2016 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-06-07T18:21:24Z
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Previous issue date: 2016-02-23 / A fusariose é uma das doenças mais importantes do tomateiro (Solanum lycopersicum L.). Ela é causada pelo fungo de solo Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) e causa elevadas perdas na agricultura, pois o controle químico não é eficiente. Entender a interação planta-patógeno é a chave para o manejo da doença e o melhor guia para os programas de melhoramento. A maior parte da interação entre o patógeno e o hospedeiro ocorre através de proteínas de reconhecimento, sinalização ou das respostas desencadeadas. Assim, este estudo propôs avaliar as alterações no proteoma da raiz do tomateiro infectado com Fol, através da eletroforese bidimensional (2-DE), marcação com iTRAQ e espectrometria de massas. Foram utilizadas a cultivar BHRS 2,3 (resistente) e Viradouro (suscetível), além de um isolado da raça 3 de Fol, introduzido recentemente no país, tendo assim, poucas cultivares resistentes. Após 21 dias de crescimento, raízes foram cortadas, inoculadas com suspensão de esporos do patógeno e coletadas nos tempos um, quatro e sete dias após a inoculação. As proteínas foram extraídas, quantificadas, separadas por 2-DE, analisadas por espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF/TOF e identificadas com a ferramenta MASCOT. Os extratos protéicos também foram digeridos com tripsina, marcados com iTRAQ, fracionados e dessalinizados. A LC-MS/MS foi feita através do cromatógrado UPLC Dyonex 3000 com aquisição dos espectros realizada através do Orbitrap Elite. Quatro dias após a inoculação, 21 proteínas separadas por 2-DE mostraram-se diferencialmente reguladas na cultivar BHRS 2,3. 12 com aumento de expressão e nove sub reguladas. Após sete dias de inoculação, a cultivar Viradouro apresentou 204 proteínas com expressão diferencial, 93 proteínas reguladas positivamente e 111 proteínas reguladas negativamente. Além disso, foi possível identificar 41 proteínas do fungo. Não houveram proteínas reguladas com consistência estatística na cultivar resistente. Com 24 horas após a inoculação houve a regulação de seis proteínas na cultivar BHRS 2,3. Das proteínas reguladas após 24h, destaca-se a proteína de membrana remorina, relacionada à percepção de patógenos e nunca relatada no patossistema tomateiro/Fol. Após quatro dias, várias proteínas de defesa apresentaram aumento de expressão na cultivar resistente. Com sete dias de infecção, proteínas relacionadas com a defesa da cultivar Viradouro apresentaram diminuição na expressão, proteínas de reconhecimento de fungos, de sinalização e relacionadas a patogenicidade são exemplos. Além disso, várias proteínas ribossomais também estavam reguladas negativamente, prejudicando a síntese global de proteínas. Entre as proteínas com aumento de expressão, destacam-se proteínas relacionadas com explosão oxidativa, evento da reação de hipersensibilidade, um mecanismo de defesa da planta. Em relação às proteínas do fungo observadas, a maior parte está relacionada ao desenvolvimento e proteínas estruturais. Entretanto, a enzima 4-coumarate-ligase-like 9, relacionada a síntese do ácido jasmônico, pode indicar influência do fungo na biologia da planta. Os resultados evidenciaram diversas proteínas ativadas e desativadas durante a interação do tomateiro com o Fol, onde pode-se observar a dinâmica entre o ataque do fungo e as defesas da planta. Além disso, o aumento da expressão da remorina, nunca antes descrita nesse patossistema, pode contribuir com futuros estudos de manejo da fusariose. / The Fusarium wilt is one of the most important diseases in tomato cultivation (Solanum lycopersicum L.) around the world. It is caused by soil fungus Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) and annually causes great losses to agriculture since chemical control is inefficient. Understanding the plant-pathogen interaction is the key to better handling the infection and it’s the best guide for genetic enhancement programs. The greater part of the host-pathogen interaction is done through proteins, those being recognizing, signaling or triggered responses. Therefore, this paper proposes to evaluate the alterations to Fol-infected tomato root proteome through two-dimensional electrophoresis (2-DE), iTRAQ marking and mass spectrometry. BHRS 2,3 (resistant) and Viradouro (susceptible) cultivars were used, as well as an isolate of Fol race 3 for being recently introduced in the country, thus having few resistant tomato cultivars. After 21 days of growth, roots were cut, inoculated with a pathogen spore suspension and collected after one, four and seven days of inoculation. Proteins were extracted, quantified, separated by 2-DE, analyzed by MALDI-TOF/TOF mass spectrometry and identified by MASCOT tool. Protein extracts were also digested with trypsin, marked with iTRAQ, fractioned and desalinized. LC-MS/MS was done through UPLC Dyonex 3000 chromatograph and specter acquisition was done via Orbitrap Elite. Four days after inoculation, 21 proteins separated by 2-DE turned up to be differentially regulated in cultivar BHRS 2,3, 12 with increased expression and nine sub regulated. After seven days of inoculation, cultivar Viradouro showed 204 proteins with differential expression, 93 of which positively regulated and 111 negatively. In addition, it was possible to identify 41 fungus proteins. There were no regulated proteins with statistic consistence in cultivar BHRS 2,3. After 24h of inoculation there was regulation of six proteins in cultivar BHRS 2,3. From the proteins regulated after 24h, remorin membrane protein stands out, since it is related to pathogen perception and had never been reported in tomato/Fol pathosystem. After four days, several defense proteins showed increased expression in the resistant cultivar. With seven days of infection, several defense related proteins from cultivar Viradouro showed a decrease in expression, with fungus recognition proteins, signaling proteins and proteins related to pathogenicity as examples. Furthermore, numerous ribosomal proteins were also negatively regulated, impairing global protein synthesis. Standing out between the proteins with increased expression were proteins related to oxidative explosion, an event component to the hypersensitivity reaction, which is one of the plant’s main defense mechanisms. With regard to fungus proteins observed in the susceptible cultivar, most of those are related to growth and structural proteins. But enzyme 4-coumarate-ligase-like 9 related to jasmonic acid synthesis may suggest fungal influence in the plant’s biology. Results revealed several active and deactivated proteins during the tomato plant’s interaction with Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici fungus, where the dynamic between the fungus attack and plant defenses can be seen. Moreover, the increase in expression of remorin, never before described in the pathosystem, may contribute to future studies in handling Fusarium wilt.
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