A hepatectomia de 90% em murinos é um modelo de insuficiência hepática aguda. Recentemente, tem sido demonstrado que as plaquetas possuem um efeito importante na regeneração hepática. As plaquetas promovem a regeneração de tecidos através da liberação de fatores de crescimento tais como o Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas (PDGF) e a Serotonina. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do plasma rico em plaquetas (PRP) em modelo de hepatectomia de 90% em ratos. Para isso, PRP ou medula óssea total (WBM) foram imobilizados em microcápsulas de alginato de sódio implantadas no peritônio de ratos imediatamente após a hepatectomia. O grupo controle recebeu cápsulas vazias (EC). Os animais foram sacrificados às 6, 12, 24, 48, 72 horas pós-hepatectomia (n=5-8/grupo/tempo) para avaliar a taxa de regeneração hepática, o índice mitótico, o índice de marcação com 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU), HGF sérico, e a expressão no fígado remanescente de 5Ht2b e Pdgf. A taxa de sobrevida em 10 dias foi avaliada em outro grupo de animais (n=20/grupo). Foi observado que o grupo PRP apresentou a maior taxa de sobrevida aos 10 dias apesar da menor taxa de regeneração hepática em todos os tempos. Já o grupo EC mostrou uma taxa de regeneração maior nas primeiras 72 horas. O índice mitótico foi maior para o grupo PRP às 48 horas, porém o índice de BrdU não foi diferente entre os grupos em nenhum tempo. A expressão de 5Ht2b e Pdgf foi elevada no grupo PRP às 72 horas, entretanto o HGF sérico não apresentou diferenças entre os grupos. Estes resultados sugerem que o efeito benéfico do PRP pode ser mediado pelo incremento gradual e uniforme da taxa de regeneração e por uma resposta a fatores mitogênicos como a serotonina e o PDGF. / Ninety percent hepatectomy in rodents is a model for acute liver failure. Recently, it has been reported that platelet has a strong effect enhancing liver regeneration, due to its several growth factors such as Platelet Derived Growth Factor (PDGF) and serotonin. The aim of this study was to investigate the role of Platelet-Rich Plasma on 90% hepatectomy in rats. Platelet rich-plasma (PRP) or Whole Bone Marrow (WBM) were microencapsulated in sodium alginate and implanted in the peritoneum of rats immediately after 90% hepatectomy. Control group received empty capsules (EC). Animals were sacrificed at 6, 12, 24, 48, and 72 hours post hepatectomy (n=5-8/group/time) to evaluate liver regeneration rate, mitotic index, 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) labeling index, serum HGF, and 5Ht2b and Pdgf expression in liver. Survival rate in 10 days was also evaluated in a different set of animals (n=20/group). PRP group showed the highest survival rate at 10 days despite the lowest liver regeneration rate at any time point. EC group showed the highest regeneration rate in the first 72 hours. Mitotic index was highest in PRP group at 48 hours although BrdU index did not show any difference among groups. Gene expression of 5Ht2b and Pdgf was both up-regulated at 72 hours in PRP group, whereas serum HGF did not show any differences among groups. These results suggest that the beneficial effect of PRP may be mediated by a gradual increase in the regeneration rate and a response to mitogenic factors such as serotonin and PDGF.

A insuficiência hepática aguda é caracterizada por morte celular maciça de hepatócitos. As primeiras células que se ativam após uma lesão hepática são as células de Kupffer. Estas células secretam citocinas e produzem espécies reativas de oxigénio, causando a apoptose de hepatócitos. Em um estudo anterior, mostramos que plaquetas encapsuladas aumentam a sobrevida de animais em um modelo de insuficiência hepática aguda em 10 dias. Aqui investigamos como as plaquetas exercem o seu efeito benéfico precoce nesse modelo. Para isso, plaquetas encapsuladas ou cápsulas vazias foram implantadas em ratos submetidos a hepatectomia parcial de 90%. Os animais foram eutanasiados 1, 3, 6, 12, 24, 48 e 72 horas (n=6/grupo/hora) após hepatectomia. O fígado remanescente foi coletado para avaliar o estresse oxidativo, a atividade da caspase 3 e a expressão de genes relacionados ao estresse oxidativo ou função hepática. Além disso, os níveis de lipopolissacarideos no soro e no tecido foram medidos. O número de células de Kupffer do fígado remanescente foi avaliado. A interação de plaquetas encapsuladas e células de Kupffer foi investigada utilizando um sistema de co-cultura. Foi observado que os níveis de lipopolissacarideos foram semelhantes em ambos os grupos, assim como a expressão do gene de Tlr4 e Myd88, mas o Lbp foi maior no grupo plaquetas. O número de células de Kupffer no grupo plaquetas estava aumentado 1 hora após hepatectomia, voltando a níveis normais em seguida. No grupo controle estava aumentado às 6 até 72 horas. Além disso, as plaquetas modulam a expressão de interleucina-6 e interleucina-10 em células de Kupffer após 24 horas de co-cultura. Além disso, as plaquetas aumentam a atividade de superóxido dismutase e catalase e reduzem a peroxidação lipídica. Além disso, a atividade da caspase 3 também foi reduzida em animais que receberam plaquetas encapsuladas às 48 e 72 horas. A expressão da óxido nítrico sintase endotelial, do fator nuclear kappa B e interleucina-6 estavam elevados no grupo de plaquetas. A expressão do gene de albumina e do fator V também estavam aumentados no grupo plaquetas. Estes resultados indicam que as plaquetas interagem com as células de Kupffer e exercem o seu efeito benéfico através de redução do estresse oxidativo no fígado o que resulta em hepatócitos saudáveis e diminuição da apoptose. Além disso, estes efeitos são mediados por fatores parácrinos imediatamente após a lesão hepática. / Acute liver failure is characterized by massive hepatocyte cell death. Kupffer cells are the first cells to be activated after liver injury. They secrete cytokines and produce reactive oxygen species, leading to apoptosis of hepatocytes. In a previous study, we showed that encapsulated platelets increase survival in a model of acute liver failure. Here we investigate how platelets exert their early beneficial effect in this model. For that, encapsulated platelets or empty capsules were implanted in rats submitted to 90% partial hepatectomy. Animals were euthanized at 1, 3, 6, 12, 24, 48 and 72 hours (n = 6/group/time) after hepatectomy. Liver was collected to assess oxidative stress, caspase activity, and gene expression related to oxidative stress or liver function. Also, lipopolysaccharide (LPS) levels in serum and tissue were assessed. The number of Kupffer cells in the remnant liver was evaluated. Interaction of encapsulated platelets and Kupffer cells was investigated using a co-culture system. It was observed that LPS levels were similar in both groups, as well as gene expression of Tlr4 and Myd88, but Lbp was higher in platelet group. The number of Kupffer cells in platelet group was increased at 1 hour and then returned to normal levels; in control group it was increased from 6 to 72 hours. Platelets modulate Interleukin-6 and Interleukinl-10 expression in Kupffer cells after 24 hours of co-culture. In addition, platelets increase superoxide dismutase and catalase activity and reduce lipid peroxidation. Moreover, caspase 3 activity was also reduced in animals receiving encapsulated platelets at 48 and 72 hours. Gene expression of endothelial nitric oxide synthase, nuclear factor kappa B and Interleukin-6 were elevated in platelet group. Gene expression of albumin and factor V were also increased in platelet group. These results indicate that platelets interact with Kupffer cells in this model and exert their beneficial effect through reduction of oxidative stress that results in healthier hepatocytes and decreased apoptosis. Furthermore, these effects are mediated by paracrine factors immediately after liver injury.

A hepatectomia de 90% em murinos é um modelo de insuficiência hepática aguda. Recentemente, tem sido demonstrado que as plaquetas possuem um efeito importante na regeneração hepática. As plaquetas promovem a regeneração de tecidos através da liberação de fatores de crescimento tais como o Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas (PDGF) e a Serotonina. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do plasma rico em plaquetas (PRP) em modelo de hepatectomia de 90% em ratos. Para isso, PRP ou medula óssea total (WBM) foram imobilizados em microcápsulas de alginato de sódio implantadas no peritônio de ratos imediatamente após a hepatectomia. O grupo controle recebeu cápsulas vazias (EC). Os animais foram sacrificados às 6, 12, 24, 48, 72 horas pós-hepatectomia (n=5-8/grupo/tempo) para avaliar a taxa de regeneração hepática, o índice mitótico, o índice de marcação com 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU), HGF sérico, e a expressão no fígado remanescente de 5Ht2b e Pdgf. A taxa de sobrevida em 10 dias foi avaliada em outro grupo de animais (n=20/grupo). Foi observado que o grupo PRP apresentou a maior taxa de sobrevida aos 10 dias apesar da menor taxa de regeneração hepática em todos os tempos. Já o grupo EC mostrou uma taxa de regeneração maior nas primeiras 72 horas. O índice mitótico foi maior para o grupo PRP às 48 horas, porém o índice de BrdU não foi diferente entre os grupos em nenhum tempo. A expressão de 5Ht2b e Pdgf foi elevada no grupo PRP às 72 horas, entretanto o HGF sérico não apresentou diferenças entre os grupos. Estes resultados sugerem que o efeito benéfico do PRP pode ser mediado pelo incremento gradual e uniforme da taxa de regeneração e por uma resposta a fatores mitogênicos como a serotonina e o PDGF. / Ninety percent hepatectomy in rodents is a model for acute liver failure. Recently, it has been reported that platelet has a strong effect enhancing liver regeneration, due to its several growth factors such as Platelet Derived Growth Factor (PDGF) and serotonin. The aim of this study was to investigate the role of Platelet-Rich Plasma on 90% hepatectomy in rats. Platelet rich-plasma (PRP) or Whole Bone Marrow (WBM) were microencapsulated in sodium alginate and implanted in the peritoneum of rats immediately after 90% hepatectomy. Control group received empty capsules (EC). Animals were sacrificed at 6, 12, 24, 48, and 72 hours post hepatectomy (n=5-8/group/time) to evaluate liver regeneration rate, mitotic index, 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) labeling index, serum HGF, and 5Ht2b and Pdgf expression in liver. Survival rate in 10 days was also evaluated in a different set of animals (n=20/group). PRP group showed the highest survival rate at 10 days despite the lowest liver regeneration rate at any time point. EC group showed the highest regeneration rate in the first 72 hours. Mitotic index was highest in PRP group at 48 hours although BrdU index did not show any difference among groups. Gene expression of 5Ht2b and Pdgf was both up-regulated at 72 hours in PRP group, whereas serum HGF did not show any differences among groups. These results suggest that the beneficial effect of PRP may be mediated by a gradual increase in the regeneration rate and a response to mitogenic factors such as serotonin and PDGF.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4860_1.pdf: 2101436 bytes, checksum: 2a1f4e0a8307b77f15bc84782fc1e8a1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Em Pernambuco, onde a esquistossomose é historicamente considerada endêmica na região rural, novos focos de infecção aguda têm sido evidenciados em áreas litorâneas. Um episódio epidêmico incomum de esquistossomose aguda em Porto de Galinhas, Pernambuco, Brasil, permitiu-nos estudar alguns aspectos imunológicos, hematológicos e parasitológicos em 36 pacientes antes e após o tratamento com oxamniquine. O sangue foi coletado e diluído em meio RPMI 1640 suplementado com penicilina (100U/ml) e estreptomicina (100&#956;g/ml), e as culturas de sangue total foram realizadas em 14 pacientes sob estimulação antigênica com antígeno solúvel de ovo (SEA) e antígeno solúvel de verme adulto (SWAP) e mitogênica com acetato de forbol miristato/Ionomicina (PMA/Iono) por 96 horas em atmosfera úmida com 5% de CO2. Os sobrenadantes foram coletados para determinação das citocinas Th1 (IFN-&#947;) e Th2 (IL-4) através de ELISA. Análises estatísticas foram realizadas através do teste não paramétrico de Wilcoxon para amostras emparelhadas e p<0,05 foi considerado significativo. A infecção com Schistosoma mansoni foi predominante na faixa etária de 5-15 anos (69,44%) e nos indivíduos do sexo masculino (63,89%). A carga parasitária, avaliada pelo método semi-quantitativo Kato-Katz, variou entre 24 a 1.656 ovos/g de fezes antes do tratamento e apenas 3 pacientes permaneceram positivos após o tratamento. Leucocitose e eosinofilia foram evidenciadas antes e após o tratamento. Os níveis de IgE mostraram-se elevados antes do tratamento, ocorrendo uma redução significativa após o tratamento (p=0,0119). Os níveis de IFN-&#947; dos pacientes agudos elevaram-se significativamente após o tratamento, sob estimulação com SEA (p=0,019), SWAP (p=0,019), PMA/Iono (p=0,0029) e sem estimulação (p=0,0088). Níveis da citocina IL-4, após tratamento, apresentaram-se significativamente elevados apenas sob estimulação com SEA (p=0,0277) e sem estimulação (p=0,043). Ambas as respostas Th1 e Th2 foram exacerbadas após o tratamento. Os resultados encontrados sugerem que a resposta imune na esquistossomose é modificada pelo tratamento, provavelmente devido à destruição dos parasitas e liberação de antígenos

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:58:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Landi_EvaldoPasquini_M.pdf: 7173102 bytes, checksum: d1e09c6e1cc9c87e2ca89c418ae6b1fd (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Introdução. A criopreservação dos concentrados de plaquetas pode ser de grande importância para a manutenção dos estoques de concentrados de plaquetas. No entanto, a criopreservação exige a adição e remoção do crioprotetor, o que toma a técnica trabalhosa e de custo elevado. Os concentrados de plaquetas "secas" se caracterizam por apresentarem pequeno conteúdo plasmático. A criopreservação destes concentrados eliminaria a necessidade de centrifugação para remoção do plasma excedente antes da adição do crioprotetor. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da coleta por aférese e da criopreservação dos concentrados de plaquetas "secas" e a atividade do dimetilsulfóxido (DMSO) 5% e 2% com inibidores da segunda resposta celular (ThromboSol@)como substâncias crioprotetoras para os concentrados de plaquetas "secas". Material e Métodos. Foram coletadas 28 unidades de concentrados de plaquetas convencionais e "secas", utilizando o mesmo procedimento de aférese para cada coleta. Amostras dos respectivos concentrados foram obtidas para análise microbiológica, contagem de leucócitos, contagem plaquetária, detenninação do volume plaquetário médio, do pH e dos níveis de glicose e DHL. Para avaliar a ocorrência de ativação plaquetária, foram estudados por citometria de fluxo, o complexo GPlb (CD42b), a integrina allbf33 (CD41), a p-selectina (CD62p) e a ligação da anexina V. A avaliação funcional foi realizada por meio da agregação plaquetária com difosfato de adenosina (ADP), epinefrina, colágeno e ácido aracdônico. Após o descongelamento, foram colhidas amostras para realização dos mesmos testes acima descritos. Os concentrados de plaquetas "secas" foram comparados aos concentrados de plaquetas convencionais por aférese e aos concentrados de plaquetas "secas" criopreservados, assim como o grupo de concentrados de plaquetas "secas" criopreservado com DMSO 5% foi comparado ao grupo criopreservado com ThromboSol@. Para análise estatística foi utilizado o teste de Wilcoxon pareado na comparação de bolsas do mesmo indivíduo,e não pareado, quando se tratava de indivíduos diferentes.Os resultados foram consideradossignificativos se p< 0,05. Resultados. Os concentrados de plaquetas "secas" apresentaram menor pH (p<0,001) e conteúdo de glicose (p<0,001), maiores níveis de DHL (p<0,001), maior porcentagem de plaquetas pselectina positivas (p<0,001) e menor resposta agregatória com ADP (p<0,001) e epinefrina (p<0,001). A criopreservação ocasionou alterações morfológicas nas plaquetas e foi associada à maior ocorrência de lise, ativação e diminuição da resposta funcional. A criopreservação com ThromboSol@foi associada a maiores níveis de DHL (p<0,001) e à maior ligação da anexina V (p=0,005), além de menor porcentagem de plaquetas CD42 positivas (p=0,01) e menor resposta agregatória ao colágeno (p=0,005). Conclusão. Este estudo sugere que os concentrados de plaquetas "secas" devem ser prontamente criopreservados após a coleta para evitar a redução do pH e a ocorrência de ativação plaquetária. A utilização de DMSO 5% ofereceu um efeito crioprotetor melhor ao do ThromboSol@ / Abstract: Introduction. Longterm cryopreservationand banking of platelet concentrates (PCs) would provide a better storage management. Howeve r, cryopreservation requires the addition and posterior removal of a cryoprotective, making the procedure cumbersome and expensive. Ory PCs would provide a plasma reduced component and fresh dry PCs could be cryopreserved in a dry condition, avoiding the centrifugation required to remove excess plasma before adding the cryoprotective. The purpose of this study was to evaluate the effects of collecting and cryopreserving dry PCs and the activityof dymethyl sulfoxide (OMSO)5% and of OMSO2% plus second-messenger effector (ThromboSofTM)as cryopreserving solution for dry PCs. Material and Methods. 80th standard and dry PCs were collected in the same apheresis procedure and samples were obtained for microbiologic control, leukocyte and platelet counts and mean platelet volume (MPV),pH, glucose and LOHlevels determination.Activationwas examined by flow cytometry using monoclonal antibodies directed against GPlb complex (CO42), allb~3 integrin (CO41) and pselectin (CO62p),alongwith annexin binding assay. Plateletfunction was assessed by aggregation using adenosine diphosphate (AOP), collagen and arachidonic acid as agonists. Ory PCs were compared to apheresis standard PCs and to cryopreserved dry PCs. The cryoprotective effect of OMSO 5% was also compared to ThromboSolTM.Statistical analysis was performed by using a Wilcoxon signed rank test to test for significant differences between samplesfrom the same donor and a . Wilcoxon ranksum test between samples from distinct donors. A p value < 0.05 was considered significant. Results. Ory PCs presented a significantly reduced>pH (p<O.OO1) and glucose (p<O.OO1), increased LDH levels (p<O.OO1) and CD62p expression (p<O.OO1),and diminished aggregation response to ADP (p<O.OO1)and epinephrine (p<O.OO1).Platelet cryopreservation was associated to platelet Iyses, activation and loss of function. Dry PCs cryopreserved with ThramboSolTM were associated to higher LDH levels (p<O.OO1)and annexin biding (p=O,OO5),and to lower CD42 positive platelets (p=O.O1)and aggregation response to collagen as agonist (p=O.OO5).Conclusion. This study suggest that dry PCs should be rapidly frazen after collection to avoid pH fali and platelet activation. In addition, it was observed that DMSO 5% demonstrated better performance than ThromboSolTM cryopreserving dry PCs / Mestrado / Clinica Medica / Clinica Medica

O reparo de tecidos lesionados pode se dar por regeneração ou cicatrização, sendo que o início desse processo de cura ocorre pela ação de fatores de crescimento que atuam no sítio da lesão estimulando a quimiotaxia, fibroplasia e angiogênese tecidual. A utilização do Plasma Rico em Plaquetas (PRP) em lesões teciduais possui grande potencial terapêutico, pois estimula a cicatrização e a regeneração, desenvolve a neovascularização, reduz o processo inflamatório e o risco de infecções, além de fornecer uma rápida hemostasia ao local. Por meio da indução de feridas na região dorsal dos ratos, o presente trabalho avaliou o efeito do PRP na cicatrização de feridas cutâneas, mediante avaliação histológica. Foram utilizados 36 ratos albinos Wistar, no qual duas feridas foram feitas, no mesmo animal, na região mediana dorsal. Nada foi aplicado a uma ferida e a mesma foi preenchida apenas com o coágulo (Grupo Controle), enquanto que na outra aplicou-se o PRP (Grupo Experimental). Os animais foram eutanasiados no 2º dia (nove animais), no 4º dia (nove animais), no 7º dia (nove animais) e no 14º dia (nove animais) após o procedimento cirúrgico, e os espécimes foram processados para analise microscópica. Os resultados mostraram que nos períodos avaliados não houve diferenças histomorfológicas relevantes entre as feridas tratadas com o PRP e as controle e não houve diferenças estatísticas em relação às variáveis estudadas nos dois grupos. / The repair of injured tissues can occur by regeneration or healing, and the beginning of this healing process takes place by the activity of growth factors at the injury site stimulating chemotaxis, angiogenesis and tissue fibroplasia. The use of Platelet Rich Plasma (PRP) in tissue lesions has great therapeutic potential because it stimulates healing and regeneration, promotes neovascularization, reduce inflammation and the risk of infection, as well as to provide rapid hemostasis at the injury site. Through the induction of wounds on the dorsal region of rats, we evaluated, by histological approaches, the effect of PRP on wound healing. We used 36 albino Wistar rats in which two incisions were made on the dorsal medial region. Nothing was applied to one of the wounds, and thus, it was only filled with the blood clot (Control Group); while the other wound received PRP (Experimental Group). Animals were euthanized on day 2 (nine animals), 4 (nine animals), 7 (nine animals), and 14 (nine animals) after the surgery procedure, and tissue samples were processed for macroscopic and microscopic analyses. Results failed to show significant morphometric differences between PRP-treated and control wounds.

Orientador: Andrigo Barboza De Nardi / Banca: Jorge Luiz Costa Castro / Banca: Rafael Ricardo Huppes / Banca: Pamela Rodrigues Reina Moreira / Banca: Luis Gustavo Gosuen Gonçalves Dias / Resumo: A cirurgia reconstrutiva em pequenos animais é especialidade que vem ganhando importância nas últimas duas décadas devido ao manejo das feridas traumáticas. Uma variedade de procedimentos da cirurgia reconstrutiva estão disponíveis para prevenir complicações e evitar custos desnecessários. Grandes defeitos podem exigir que o tecido seja mobilizado a partir de outros locais, retalhos pediculados ou enxertos. O plasma rico em plaquetas (PRP) é tido como produto adjuvante no processo cicatricial de cirurgias reconstrutivas, devido ao seu potencial auxílio nos processos de hemostasia e estimulação da formação de novos vasos sanguíneos. Neste estudo, objetivou-se avaliar os resultados da aplicação de diferentes protocolos de PRP nos enxertos cutâneos de coelhos. Foram utilizados 32 coelhos da raça Nova Zelândia branco, distribuídos em quatro grupos de 8 animais, sendo: grupo controle (GC) no enxerto foi adicionado soro fisiológico, grupo PRP adicionado Gluconato de cálcio (PRP-G), grupo PRP adicionado 100µL de zona nevoa e hemácias (PRP-ZN) e grupo PRP sem adição de nenhuma substância (PRP-L). Coletou-se sangue de cada animal e centrifugou-se conforme cada protocolo proposto. A avaliação macroscópica foi feita no 3o, 7o, e 14o dia do procedimento cirúrgico. Na sequência, com 14 dias do procedimento cirúrgico os animais foram submetidos à eutanásia para coleta do material e confecção das lâminas histológicas para posterior análise microscópica. Na análise macroscópica demostrou que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Reconstructive surgery in small animals is a specialty that has gained importance in the last two decades due to the management of traumatic wounds. Varieties of reconstructive surgery procedures are available to prevent complications and avoid unnecessary costs. Large defects may require tissue to be mobilized from other sites, pedicle flaps, or grafts. Platelet rich plasma (PRP) is seen as an adjunct in the healing process of reconstructive surgeries, due to its potential aid in the processes of hemostasis and stimulation of the formation of new blood vessels. The objective of this study was to evaluate the results of the application of different PRP protocols in rabbit skin grafts. A total of 32 white New Zealand rabbits were distributed in four groups of 8 animals, the control group (GC) in the graft was added physiological saline, PRP group added calcium gluconate (PRP-G), PRP group added 100μL zone (PRP-ZN) and PRP group without addition of any substance (PRP-L). Blood was collected from each animal and centrifuged according to each proposed protocol. Macroscopic evaluation was performed on the 3rd, 7th, and 14th day of the surgical procedure. After 14 days of the surgical procedure, the animals were submitted to euthanasia for collection of the material and preparation of the histological slides for later microscopic analysis. In the macroscopic analysis it was shown that the PRP-G group had a lower inflammatory reaction than the CG and the PRP-ZN and PRP-L groups. In ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

BRAGA, Marcus Davis Machado. Avaliação dos efeitos renais e vasculares do veneno da Bothrops insularis e de frações isoladas. 2006. 240 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-14T13:50:37Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_mdmbraga.pdf: 4080070 bytes, checksum: 509ef8d3bd5cea21bb7e061583220e8c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-14T16:35:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_mdmbraga.pdf: 4080070 bytes, checksum: 509ef8d3bd5cea21bb7e061583220e8c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-14T16:35:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_mdmbraga.pdf: 4080070 bytes, checksum: 509ef8d3bd5cea21bb7e061583220e8c (MD5) Previous issue date: 2006 / We investigated the biochemical and biological effects of the whole venom from Bothrops insularis (popularly known as “golden lancet”), and four of its fractions, a thrombin-like enzyme, a lectin-like substance, an L-amino acid oxidase and a phospholipase A2, in perfused rat kidneys and vascular sistem. The fractions were purified by a combination of Sephadex gel filtration in HPLC columns, and ion-exchange chromatography on DEAE-Sephadex in reverse phase, low-pressure affinity columns. We used a modified isolated perfused rat kidney assay, with Krebs-Henseleit solution as the perfusion fluid (Bowman, 1970; Fonteles et al., 1998). Selected parameters of renal function during stable experimental conditions were evaluated before and at 60, 90, and 120 minutes after infusion of venom and its fractions, with the first 30 minutes interval constituting the paired control. In the systemic vascular bed (Ferreira, 1965), the arterial pressure was evaluated by a manometer connected through a canule to carotid common artery and the venom was injected into the jugular vein, with registers made at every 10 minutes after administration in increasing doses, until an infusion of 300mcg was reached at 60 minutes. In the isolated rat mesenteric blood vessels method (McGregor, 1965), the perfusions were done with Krebs-Henseleit solution, at a constant flow rate of 4mL/minute. The perfusion pressure was measured manometrically. Statistical evaluations were performed by analysis of variance (ANOVA) and Bonferroni test, at the 5% significance level. In perfused kidney studies, the group treated with the whole venom showed a fall in all physiological parameters, except in potassium transport. With the lectin-like fraction, the perfusion pressure rose initially, followed by a fall, along with urinary flow and glomerular filtration rate. Sodium and potassium tubular reabsorption increased, with a fall in the osmotic clearance. The thrombin-like fraction promoted an initial rise followed by a fall in the end, in almost all parameters except in the renal vascular resistance. The sodium and chloride tubular reabsorption fell. There was an initial rise in the potassium transport, and an initial rise followed by a fall in the osmotic clearance. With the L-amino acid oxidase fraction, there was a fall in all the parameters studied. The Phospholipase A2 fraction induced a rise in the physiological and vascular parameters, as also in the potassium transport and osmotic clearance; accompanied by a fall in sodium and chloride reabsorption. With the exception of the thrombin-like fraction, all the substances tested induced acute tubular necrosis in perfused kidneys in the end. Protein extravasation into the Bowman space was evidenced in all perfused kidneys except in those treated with the whole venom; but was more intense with the thrombin-like fraction. In the systemic arterial bed, the whole venom raised arterial pressure in a dose-dependant manner, except at the concentration of 10mcg; in addition to causing intense pulmonary hemorrhage with neutrophils and alveolar lymphocyte proliferation, renal hemorrhage, and generalized vascular dilatation and congestion. In the isolated mesenteric artery, there was a marked fall in perfusion pressure when the whole venom was infused into the vessel pre-contracted with phenillephrine, as also in the isolated vessel without phenillephrine. We conclude that Bothrops insularis venom shows vasodilatation and hemorrhagic potential, like other venoms of the genus; but, different from other Bothrops venoms, it also reveals a significant necrotic activity when perfused into isolated rat kidney, causing acute tubular necrosis. / Foram investigados os efeitos do veneno da serpente Bothrops insularis e de suas frações, lectina, L-aminoácido oxidase, trombina símile e fosfolipase A2, no rim isolado e sistema vascular de rato. As frações foram purificadas a partir de uma combinação de procedimentos cromatográficos, usando colunas de HPLC de exclusão molecular, troca iônica, fase reversa e colunas de baixa pressão de afinidade. Foi utilizada a perfusão de rim isolado de rato e a solução de Krebs-Henseleit modificada (Bowman, 1970; Fonteles et al. 1998). Parâmetros selecionados da função renal foram avaliados durante as condições experimentais, com a infusão do veneno e suas frações, aos 60, 90, e 120 minutos. Os primeiros 30 minutos serviram de controle interno. No leito arterial sistêmico de rato (Ferreira, 1965) a pressão arterial foi avaliada por manômetro conectado por cânula à artéria carótida comum, e o veneno injetado na veia jugular. Os registros foram realizados a cada 10 minutos após a administração de doses crescentes do veneno, até a infusão da dose de 300mcg, aos 60 minutos. Na Perfusão do leito arterial mesentérico isolado de rato (McGregor, 1965), utilizou-se a solução de Krebs-Henseleit em fluxo constante de 4mL/minuto. A pressão de perfusão foi registrada manometricamente. A avaliação estatística foi determinada por análise de variância (ANOVA) e teste de Bonferroni, com nível de significância menor de 5%. No rim, o grupo tratado com o veneno apresentou redução em todos os parâmetros avaliados, com exceção da absorção de potássio. Com a lectina a pressão de perfusão aumentou inicialmente e caiu em seguida, juntamente com o fluxo urinário e o ritmo de filtração glomerular. Houve aumento na reabsorção de sódio e potássio, com redução no clearance osmótico. Com a trombina-símile, ocorreu aumento inicial seguido de queda no final em quase todos os parâmetros, com exceção da resistência vascular renal. A reabsorção tubular do sódio e do cloro caiu; houve elevação inicial do transporte de potássio; com aumento seguido de queda do clearance osmótico. Com a L-aminoacido oxidase houve queda em todos os parâmetros avaliados. Com a fosfolipase A2 houve elevação nos parâmetros fisiológicos e vasculares; no transporte tubular de potássio e no clearance osmótico; com queda na reabsorção de sódio e cloro. Todos os rins mostraram, no final, sinais de necrose tubular aguda, com exceção dos perfundidos com a trombina-símile. Excetuando os tratados com veneno, todos os rins apresentaram, ao final, extravasamento protéico para o espaço de Bowman. No leito arterial sistêmico o veneno produziu redução na pressão arterial sistêmica diretamente proporcional à quantidade de veneno administrada, excetuando a dose de 10mcg, além de intensa hemorragia pulmonar com proliferação de neutrófilos e linfócitos nos alvéolos, hemorragia no rim e congestão generalizada. No leito arterial mesentérico se observou uma redução na presão quando o veneno foi administrado em leito arterial pré-contraído com fenilefrina, como também isoladamente, na ausência de fenilefrina. O veneno da Bothrops insularis mostrou potencial hemorrágico e vasodilatador semelhante aos outros venenos de serpentes do gênero, com atividade necrotizante superior nos rins, onde provocou necrose tubular aguda, ao contrario do observado com outros venenos do mesmo gênero, em experimentos no rim isolado de rato.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-13Bitstream added on 2014-06-13T18:45:13Z : No. of bitstreams: 1 deliberador_tm_dr_araca.pdf: 1826350 bytes, checksum: c9b70744658285e53b20a4d8f21b9cf5 (MD5) / O objetivo do presente estudo foi avaliar, histologicamente, o processo de cicatrização de defeitos de furca Classe II, criados cirurgicamente e tratados com a associação do Plasma Rico em Plaquetas (PRP), partículas esféricas de Novo Vidro Bioativo (NVB) e Sulfato de Cálcio (SC). Os segundos e quartos prémolares mandibulares de 8 cães foram usados neste estudo. Defeitos de furca Classe II (5 mm de altura x 2 mm de profundidade) foram criados cirurgicamente e imediatamente tratados. Usando o modelo de boca dividida, os dentes foram aleatoriamente divididos em 2 grupos: Grupo C (controle): o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo e Grupo T (teste): o defeito foi preenchido com a associação de PRP, NVB e SC. Os retalhos foram reposicionados para cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada aos 90 dias pósoperatórios. Foram obtidos cortes histológicos seriados mésio-distais, corados com Hematoxilina e Eosina. Foram realizadas análises histométrica, usando um software analisador de imagens, e histológica. Foram avaliadas medidas lineares e de área da cicatrização periodontal, calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados percentuais foram transformados em arcoseno para análise estatística (análise de variância, p < 0,05). A regeneração óssea e de tecido conjuntivo nos defeitos de furca foi incompleta na maioria dos espécimes. O Grupo C apresentou quantidade de neoformação óssea e regeneração periodontal significativamente maior que o Grupo T. Quantidade considerável de partículas remanescentes de NVB foi observada na maioria dos espécimes do Grupo T. Dentro dos limites do presente estudo, pode-se concluir que a associação do PRP, NVB e SC não foi mais efetiva que o debridamento cirúrgico somente no tratamento de defeitos de furca Classe II. / The purpose of this study was to histologically evaluate the healing of surgically created Class II furcation defects treated using a combination of platelet-rich plasma (PRP), new spherical bioactive glass (NBG) particles and calcium sulfate (CS). The second and fourth mandibular premolars of eight mongrel dogs were used in this study. Class II furcation defects (5 mm in height x 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Using a split-mouth design, teeth were randomly divided into two groups: group C (control) - defect filled with blood clot only; and group T (test) - defect filled with a combination of PRP, NBG and CS. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized 90 days post-surgery. Mesio-distal serial sections were obtained and stained with either hematoxylin and eosin. Histometric, using image-analysis software, and histologic analyses were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (analysis of variance; P<0.05). Regeneration of bone and connective tissue in the furcation defects was incomplete in most of the specimens. Group C had significantly more bone formation and periodontal regeneration than group T. A considerable amount of remaining NBG particles was observed in most specimens of group T. Within the limits of this study, it can be concluded that the combination of PRP, NBG and CS was not more effective than the surgical debridement alone in the treatment of Class II furcation defects.

Ureases (3.5.1.5), enzimas níquel dependentes que catalisam a reação de hidrólise da uréia em amônia e dióxido de carbono, apresentam ampla distribuição em plantas, fungos e bactérias. A espiroqueta Helicobacter pylori causa úlceras pépticas e câncer gástrico por mecanismos ainda não totalmente conhecidos. H. pylori produz grande quantidade de urease, que neutraliza o meio ácido e permite sua sobrevivência no estômago. Nosso grupo demonstrou que as ureases de Canavalia ensiformis, soja e Bacillus pasteurii induzem agregação plaquetária independentemente de sua atividade ureolítica, por uma rota que requer ativação de canais de cálcio. ativação da rota do ácido araquidônico e secreção plaquetária. Estudos prévios mostraram ainda que a canatoxina, uma isoforma da urease de C.ensiformis, possui atividade pró-inflamatória, induzindo edema de pata em ratos. Neste trabalho, caracterizamos as propriedades ativadora de plaquetas e pró-inflamatória da urease recombinante de H. pylori (HPU). Em plaquetas, estudamos as vias recrutadas pela proteína na agregação plaquetária e comparamos com dados prévios para a canatoxina e a urease de Bacillus pasteurii. Em neutrófilos, demonstramos que a HPU, em doses nanomolares, induz quimiotaxia e produção de espécie reativas de oxigênio. A taxa de apoptose de neutrófilos ativados por HPU foi inibida, acompanhando alterações dos níveis de proteínas pró- e antiapoptóticas. Por último, mostramos que a resposta dos neutrófilos a HPU envolve aumento dos níveis de lipoxigenase(s), sem, contudo, haver alterações das ciclooxigenase( s). Concluímos que as propriedades não enzimáticas aqui descritas para a HPU podem potencialmente contribuir para o processo inflamatório promovido por H. pylori. / Ureases (EC 3.5.1.5), nickel-dependent enzymes that hydrolyze urea into ammonia and carbon dioxide, are widespread among plants, bacteria and fungi. The spirochete Helicobacter pylori is the etiological agent of gastric ulcers and gastric adenocarcinoma by mechanisms not yet fully understood. H. pylori produces high amounts of urease, which enables the bacterium to survive in the acidic medium of the stomach. We have previously reported that ureases from jackbean, soybean or Bacillus pasteurii induce blood platelet aggregation independently of their enzyme activity by a pathway requiring activation of calcium channels, lipoxigenase-derived eicosanoids and platelet secretion. We also showed that canatoxin, an isoform of C. ensiformis urease, presents pro-inflammatory property demonstrated by rat paw oedema. In this work we characterized the platelet aggregating and pro-inflammatory properties of the recombinant H. pylori urease (HPU). In platelets we studied the pathways recruited by the protein to induce platelet aggregation and compared the data to those previously reported for the plant urease canatoxin and for Bacillus pasteurii urease. Using neutrophils we demonstrated that nanomolar doses of HPU induce chemotaxis and production of oxygen reactive species in human neutrophils. The rate of apoptosis was decreased in HPU-treated neutrophils, accompanied by alterations in the levels of proand anti-apoptotic proteins. Moreover, we showed that the response of neutrophils to HPU requires increased levels of lipoxygenase(s) with no alterations of cyclooxygenase( s). We concluded that the non-enzymatic properties of HPU here described potentially contribute to the inflammatory process that underlies H. pylori infection.