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Transtornos da hemostasia em cães azotêmicos / Hemostatic disorders in azotemic dogs

Ventura, Fernanda Voll Costa January 2011 (has links)
A uremia é uma desordem sistêmica que pode estar associada à disfunção plaquetária adquirida, levando a alterações na hemostasia primária. Vários modelos de interferência entre a uremia e a falha na hemostasia já foram propostos, porém o mecanismo exato é desconhecido, e a tendência ao sangramento parece ser de origem multifatorial. O teste do tempo de sangramento da mucosa oral (TSMO) pode ser utilizado na avaliação da hemostasia primária em animais. O fator de von Willebrand (FvW:Ag) normal ou aumentado, observado na maioria dos cães urêmicos, contribui para o diagnóstico de uma alteração plaquetária adquirida. A contagem de plaquetas e os testes de coagulação normais associados a um aumento no TSMO dão suporte à suspeita de um defeito qualitativo. O objetivo deste trabalho foi investigar possíveis anormalidades na hemostasia, buscando estabelecer uma relação entre os resultados de exames laboratoriais e alterações no tempo de sangramento. A hemostasia foi avaliada em quarenta cães azotêmicos, urêmicos ou não. O aumento no TSMO foi observado em 35% dos cães azotêmicos. O teste de Spearman demonstrou haver correlação entre o TSMO e os valores de creatinina, uréia e hematócrito, porém, o ajuste pela Regressão Linear Múltipla evidenciou o hematócrito como única variável associada com o TSMO. Valores de hematócrito abaixo do intervalo de referência para a espécie foram observados em 92,86% dos pacientes que apresentaram aumento no TSMO. Esses valores reduzidos parecem contribuir para a tendência ao sangramento, embora não possam ser considerados como fator determinante preditivo, uma vez que sua ocorrência nem sempre se associou com interferências no TSMO. / Uremia is a systemic disorder that may be associated with acquired platelet dysfunction, leading to changes in primary hemostasis. Several interference models between uremia and hemostasis failure have been proposed, but the exact mechanism is unknown, and bleeding tendencies seem to have a multifactorial origin. The buccal mucosal bleeding time (BMBT) test can be used in the assessment of primary hemostasis in animals. Normal or increased von Willebrand factor (vWF:Ag), observed in most uremic dogs, contributes to the diagnosis of an acquired platelet alteration. Normal platelet counts and coagulation tests associated with BMBT raises support the suspicion of a qualitative defect. The aim of this study was to investigate possible hemostasis abnormalities, trying to establish a relation between the results of laboratory tests and changes in bleeding times. Hemostasis was evaluated in forty azotemic dogs, uremic or not. Increase in BMBTs was observed in 35% of the azotemic dogs. Spearman’s test showed a correlation between BMBT and the values of creatinine, urea and hematocrit; however, adjusting for Multiple Linear Regression showed hematocrit as the only variable associated with BMBT. Hematocrit values below reference range for the species was observed in 92,86% of the patients showed an increase in BMBT. These low values appear to contribute to the tendency to bleed, although they cannot be considered as a preditive determining factor, since their occurrence is not always associated with interference in BMBT.
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Estudo sobre o processo de incorporação de enxertos ósseos na mandíbula de coelhos

Andrade, Miguel Gustavo Setúbal 05 June 2007 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-04-25T13:49:16Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Miguel Gustavo Setúbal Andrade.pdf: 2741651 bytes, checksum: 408525066d9971f7289fcce0e1d3ae7e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T13:49:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Miguel Gustavo Setúbal Andrade.pdf: 2741651 bytes, checksum: 408525066d9971f7289fcce0e1d3ae7e (MD5) / CAPES;FAPESB / A enxertia dos maxilares com osso córtico-medular aposicionado condiciona o rebordo para receber implantes de titânio. O osso alógeno congelado tem conquistado espaço por eliminar a necessidade de área doadora. Clinicamente, os enxertos aposicionados sofrem absorção, e o plasma rico em plaquetas (PRP) poderia minimizar esse fenômeno. Nesta tese, foram realizadas três pesquisas. A principal delas estudou a incorporação de enxertos autógenos e alógenos aposicionados à mandíbula de coelho em associação ou não com PRP. As alterações que o congelamento promoveu no osso e o processo de preparação do PRP também foram investigados. Utilizaram-se 54 coelhos. Enxertos córtico-medulares foram removidos do osso ilíaco e aposicionados bilateralmente à cortical externa da mandíbula. Parte dos animais recebeu osso autógeno fresco e outra parte recebeu osso alógeno congelado a -70°C por 120 dias. Em um lado da mandíbula, foi colocado PRP. A eutanásia ocorreu após 3, 7, 14, 28 e 56 dias. A diferença entre os grupos foi ponderada pelo teste de Bonferroni. O osso alógeno foi menos absorvido, mais osteogênico e fibrogênico que o osso autógeno. Sua cortical estava mais espessa e ele induziu maior quimiotaxia de macrófagos e osteoclastos. O PRP, apesar de melhorar, não interferiu significativamente nessas variáveis. Não houve reação de células T e B contra os enxertos. O efeito da criopreservação foi analisado no osso congelado a -20°C e -70°C por 30, 60, 90 e 120 dias e foi comparado ao osso fresco. A diferença foi estimada pelo teste de Tukey. O congelamento aumentou a área das células e dos núcleos na medular e diminuiu a área dos núcleos da cortical. O colágeno da cortical desnaturou com a diminuição da temperatura e o aumento do tempo de congelamento. Essas alterações só comprometeram a morfologia do tecido após 90 ou 120 dias na temperatura de -70°C. O sangue total e o PRP foram comparados pelo teste de correlação de Pearson. A plaquetometria do PRP não dependeu dos eritrócitos e do plasma pobre em plaquetas removidos, mas do hematócrito e da plaquetometria do sangue total. O hematócrito do PRP não interferiu na sua plaquetometria e leucometria, que foi dependente da leucometria inicial. Concluiu-se que o osso alógeno congelado foi bom material para enxertia aposicionada dos maxilares e não induz uma rejeição imunológica. O PRP apresentou apenas uma tendência em melhorar o reparo de enxertos aposicionados, e o congelamento foi eficaz em diminuir a antigenicidade do osso.
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Estudo das alterações morfológicas e funcionais das plaquetas na infecção pelo vírus dengue

Oliveira, Débora Batista de January 2012 (has links)
Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T11:44:16Z No. of bitstreams: 1 Debora Batista de Oliveira.pdf: 2887120 bytes, checksum: 263a4a9265044107d6caf01ffb4095e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T11:44:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Debora Batista de Oliveira.pdf: 2887120 bytes, checksum: 263a4a9265044107d6caf01ffb4095e0 (MD5) Previous issue date: 2012-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As plaquetas são fragmentos celulares derivados do precursor hematopoiético megacariócito, que desempenham um importante papel na hemostasia, inflamação e resposta imune. Na dengue, as plaquetas constituem uma das populações celulares mais afetadas por mecanismos diretos ou indiretos da infecção. Desta forma, estudos que possam contribuir na compreensão da plaquetopenia, assim como nas alterações funcionais das plaquetas na dengue são de extrema importância para o entendimento da patogenia e no avanço de esquemas terapêuticos durante a infecção humana pelo dengue. O objetivo deste trabalho foi avaliar alterações nas plaquetas durante a infecção humana e ex vivo pelo DENV, observando sua morfologia, perfil de ativação e expressão de receptores do tipo Toll TLR2 e TLR4, interação com o vírus e relação com proteínas plasmáticas associadas à sua ativação e funcionalidade. Para isto, foram utilizados metodologias de citometria de fluxo, microscopia eletrônica de transmissão e ensaios imunoenzimáticos. Utilizando modelo in vitro de ativação em que plaquetas de doadores foram estimuladas com trombina, confirmamos a ativação dessas subpopulações celulares, sem detectar alteração da expressão dos TLR2 e TLR4. Ao avaliarmos o efeito da interação do DENV-2 com plaquetas de doadores, demonstramos evidências morfológicas de ativação e detectamos partículas virais em vesículas citoplasmáticas por microscopia eletrônica. Contudo, nas mesmas condições acima, não detectamos modulação da expressão de marcadores de ativação plaquetária, como CD62P e fibrinogênio, nem de TLR2 ou TLR4 por citometria de fluxo. A análise das plaquetas isoladas de pacientes DENV+ demonstrou maior expressão de CD62P e menor expressão de TLR4 comparado a pacientes com outras doenças febris e controles saudáveis por citometria de fluxo. Não detectamos diferença na expressão de CD40L e TLR2. Morfologicamente, a ativação das plaquetas de pacientes DENV+ foi confirmada. Brevemente, a quantificação de mediadores plasmáticos por ensaios imunoenzimáticos relacionados direta ou indiretamente com a ativação e função plaquetária indicou: (i) níveis aumentados da relação sCD62P/contagem de plaquetas com a gravidade da doença; (ii) envolvimento menor da quantidade de NOx plasmático nos pacientes; (iii) diminuição dos níveis do vasoconstritor TXB2 em pacientes com FD Sem SA comparado aos controles e pacientes Graves; (iv) níveis aumentados de TFPI com a gravidade da doença; (v) níveis diminuídos de CCL5 mas (vi) aumentados de CCL2 com a gravidade da doença. As análises de correlação demonstraram que enquanto os níveis de CCL5 estavam diretamente relacionados com a quantidade de plaquetas, a correlação foi inversa entre TFPI e plaquetas. De forma interessante, níveis aumentados de TXB2 foram vistos em pacientes com extravasamento plasmático comparados aos pacientes sem extravasamento. Nossos resultados confirmaram a capacidade de interação in vitro do DENV e plaquetas, com subsequentes modificações morfológicas. Na infecção natural, plaquetas de pacientes DENV+ são ativadas, inclusive com confirmação do perfil morfológico de ativação. Nós supomos que a diminuição da expressão de TLR4 nas plaquetas da nossa coorte de pacientes poderia estar (i) diretamente relacionado a ativação das plaquetas e/ou (ii) a uma coorte de pacientes clinicamente branda, caracterizada por uma evolução clínica e plaquetopenia pouco agravantes. A relação entre sCD62P/contagem de plaquetas e os níveis de TFPI confirmam a ativação plaquetária e seriam bons marcadores de prognóstico da doença. Além disso, CCL5 e TFPI participariam direta ou indiretamente da plaquetopenia ou da funcionalidade plaquetária. / Platelets are cell fragments derived from the hematopoietic precursor megacaryocyte, which play an important role in hemostasis, inflammation and immune response. In dengue, platelets constitute one of the cell populations most affected by direct or indirect mechanisms of infection. Therefore, studies that may contribute to the understanding of thrombocytopenia, as well as functional changes of platelets in dengue are extremely important for the understanding of the pathogenesis and progress of therapeutics during human infection by dengue. The aim of this study was to evaluate changes in platelets during human and ex vivo infection by DENV, observing its morphology, activation profile and expression of Toll-like receptors TLR2 and TLR4, interaction with the virus and relation with plasma proteins associated to its activation and functionality. To do so, flow cytometry methods, transmission electron microscopy and immunoassays were used. Using in vitro model of platelet activation in which platelets from donors were stimulated with thrombin, we confirmed the activation of these cellular subpopulations without detecting altered expression of TLR2 and TLR4. When evaluating the effect of the interaction of DENV-2 with donor platelets, we demonstrated morphological evidences of activation and detected viral particles in cytoplasmic vesicles by electron microscopy. However, under the same conditions above, we have not detected modulation of the expression of platelet activation markers such as fibrinogen and CD62P or TLR2 or TLR4 by flow cytometry. Analysis of platelets isolated from patients DENV+ demonstrated greater expression of CD62P and lower TLR4 expression compared to patients with other febrile illness and healthy controls by flow cytometry. We did not detect differences in the expression of CD40L and TLR2. Morphologically, the activation of platelet from patients DENV+ was confirmed. Briefly, quantification of plasma mediators by immunoassays related directly or indirectly with activation and platelet function indicated: (i) Increased levels of the relation sCD62P/platelet count in the severity of the disease, (ii) lesser involvement of plasmatic NOx in patients, (iii) decreased levels of vasoconstrictor TXB2 in patients with DF without WS compared to controls and severe patients, (iv) increased levels of TFPI according to the severity of the disease, (v) reduced levels of CCL5 (vi) but increased levels of CCL2 with increased disease severity. Correlation analysis showed that while the CCL5 levels were directly related to the platelet count, inverse correlation between TFPI and platelets occurred. Interestingly, increased levels of TXB2 were seen in patients with plasma leakage compared to patients without leakage. Our results confirmed the ability of in vitro interaction of DENV and platelets, with subsequent morphological changes. In natural infection, platelets from patients DENV+ are activated, even confirming the profile of morphological activation. We hypothesize that the decreased expression of TLR4 in platelets from our cohort of patients could be (i) directly related to platelet activation and/or (ii) to a cohort of patients clinically mild, characterized by clinical progression and thrombocytopenia not aggravated. The relationship between sCD62P/platelet count and levels of TFPI confirm platelet activation and would be good prognostic markers of the disease. Furthermore, CCL5 and TFPI could participate directly or indirectly in thrombocytopenia or in platelet function.
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Avaliação dos escores MELD, Child-Turcotte-Pugh, APRI, contagem de plaquetas e testes hepáticos como indicadores da presença de varizes de esôfago com ou sem necessidade de profilaxia para sangramento / MELD, Child-Turcotte-Pugh, APRI, platelets count and liver tests as predictive models for the presence of esophageal varices and variceal bleeding

Tafarel, Jean Rodrigo [UNIFESP] 29 October 2010 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-29 / Objetivo: Determinar se o escore MELD (Model for end-stage liver disease), classificação de Child-Turcotte-Pugh (CTP), APRI (AST to platelet ratio index), testes hepáticos e contagem de plaquetas são preditores da presença de varizes esofágicas (VE) ou de VE com necessidade de profilaxia para sangramento varicoso (VNP). Métodos: Trezentos pacientes cirróticos (193 homens; média etária de 53,10 anos; hepatite C crônica como etiologia predominante da cirrose) foram analisados prospectivamente. Considerou-se como VE de fino calibre aquelas que desapareciam com a insuflação do órgão; médio calibre aquelas que ocupavam até 1/3 da luz esofágica e de grosso calibre aquelas que ocupavam mais do que 1/3 da luz. Varizes de médio e grosso calibre foram consideradas VNP. Realizaram-se análises uni e multivariada para estabelecer a relação entre a presença de varizes (qualquer calibre e VNP) e as características destes pacientes (MELD, classificação CTP, APRI, exames de bioquímica hepática e contagem de plaquetas). Resultados: Cento e setenta e um pacientes (57%) possuíam VE, dos quais 35% (n = 105) possuíam VNP. A distribuição das VE de acordo com a classificação de CTP foi: A, 49%; B, 75,30% e C, 80% (p < 0,01). Em análise univariada os preditores independentes da presença de VE foram: MELD > 8 (p = 0,02); APRI > 1,64 (p = 0,01); contagem plaquetária inferior a 93.000/mm3 (p < 0,01); AST > 1,34xLSN (p = 0,01) e bilirrubina total > 1mg/dl (p = 0,04). Escore MELD acima de 8 teve o maior valor discriminante para a presença de VE, com sensibilidade de 80,10% e especificidade de 51,20%. Fatores independentemente associados à VNP foram: trombocitopenia (< 92.000/mm3; p < 0,01) e AST > 1,47xLSN (p = 0,03). Contagem plaquetária < 92.000/mm3 possui sensibilidade de 65,70% e especificidade de 57,90% para a presença de VNP. Conclusões: Escore MELD elevado foi o melhor preditor isolado da presença de VE de qualquer calibre e plaquetopenia < 92.000/mm3, foi o melhor preditor para varizes com necessidade de profilaxia. No entanto, nenhum destes concilia altos valores de sensibilidade e especificidade. / Purpose: The aim of this study was to determine whether MELD, Child-Turcotte-Pugh (CTP) class, APRI and laboratory tests could predict the presence of EV or varices which need prophylactic therapy (EV with medium or large size). Methods: Three hundred cirrhotic patients (193 men; mean age 53,1 years; majority with cirrhosis from chronic C hepatitis) were prospective analyzed. Uni and multivariate analysis were used to evaluate associations between the presence of EV (any size and medium or large EV) and patients’ characteristics (MELD, CTP class, APRI, platelets count and liver tests). Small varices were regarded as those which flatten with insufflation; medium varices those which protruded less than 1/3 of the lumen and large ones those which protruded more than 1/3. Results: One hundred seventy one patients (57%) had EV, of whom 35% (105) had varices which need prophylactic therapy. The distribution of EV according to the CTP class was as follows: A, 49%; B, 75,3% and C, 80%. Independent predictors of the presence of EV were: MELD > 8 (p = 0,02); APRI > 1,64 (p = 0,01); a platelet count < 93.000/mm3 (p < 0,01); AST > 1,34xUNL (p = 0,01) and total bilirubin > 1 mg/dl (p = 0,04). MELD > 8 had the highest discriminative value for presence of EV with sensitivity of 80,1% and specificity of 51,2%. Factors independently associated with EV which need prophylactic therapy were: thrombocytopenia (< 92.000/mm3; p < 0,01) and AST > 1,47xUNL (p = 0,03). A platelet count < 92.000/mm3 had sensitivity of 65,7% and specificity of 57,9% for the presence of varices which need prophylactic therapy. Conclusions: High values on MELD are associated with EV and thrombocytopenia (< 92.000/mm3), with varices which need prophylactic therapy. Considering their low sensitivity and specificity, it is suggested to maintain the recommendation of upper gastrointestinal endoscopy for all cirrhotic patients. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Avaliação do papel da fibrina rica em plaquetas em defeito crítico cirurgicamente criado em calota de ratos induzidos à hipercolesterolemia tratados ou não com atorvastatina / Evaluation of the role of Platelet Rich Fibrin in surgical critical-size calvarial defect in rats with diet-induced hypercholesterolemia treated or not with atorvastatin

Oliva, André Hergesel de [UNESP] 06 February 2018 (has links)
Submitted by André Hergesel de Oliva null (holivaandre@gmail.com) on 2018-02-19T13:16:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_MestradoCORRIGIDO.pdf: 2514302 bytes, checksum: 2de51633e693041838c21d79e951b406 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-02-19T14:23:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliva_ah_me_araca_int.pdf: 2514302 bytes, checksum: 2de51633e693041838c21d79e951b406 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-19T14:23:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliva_ah_me_araca_int.pdf: 2514302 bytes, checksum: 2de51633e693041838c21d79e951b406 (MD5) Previous issue date: 2018-02-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Esse estudo objetivou-se em avaliar o papel da membrana de fibrina rica em plaquetas na reparação óssea em defeito crítico de calota de ratos induzidos à hipercolesterolemia, bem como a atuação do tratamento de atorvastatina nesse processo. Quarenta defeitos críticos de 6 mm de diâmetro foram criados em calotas cranianas de ratos. Cada defeito foi aleatoriamente dividido em 8 grupos experimentais (GC, GCPRF, GCA, GCH, GHA, GPRFA, GPRFH, GPRFHA), avaliados aos 28 dias pós-operatórios com análises histológica e microtomográfica. Os resultados mostraram que houve formação óssea em todos os grupos analisados. O grupo GPRFH apresentou formação óssea mais acentuada com relação aos demais grupos. Dos grupos em que foi administrado atorvastatina, o GPRFHA apresentou maior taxa de formação óssea (p < 0,05). Com a metodologia utilizada, a fibrina rica em plaquetas, quando associada à condição de hipercolesterolemia, induziu ao aumento da formação óssea. / Objectives: The aim of this study was to evaluate the efficacy of Platelet Rich Fibrin (PRF) in the healing process of surgically created critical-size defects in rat calvarial induced to hypercholesterolemia treated or not with atorvastatin. Materials and method: 40 critical defects were created with 6 mm diameter calvaria of rats. Each defect was randomly divided into eight experimental groups (GC, GCPRF, GCA, GCH, GHA, GPRFA, GPRFH, GPRFHA), evaluated at 28 postoperative days for histomorphometry and microtomography. Results: The results showed new bone formation in all groups. The GPRFH group just did differ from all groups in the new bone formation (p < 0.05). Among the groups treated with atorvastatin, the GPRFHA group showed the highest bone formation rate. Conclusion: With the methodology used, the platelet-rich fibrin associated with the hypercholesterolemia induced to new bone formation. Clinical relevance: Based on these results, it is necessary to unveil the mechanisms of the association of platelet-rich fibrin with hypercholesterolemia and how it interferes in PRF microstructure and bone regeneration, to confer clinical predictability in patients in this condition who will undergo bone reconstruction and implant rehabilitation.
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Papel do fator de ativação de plaquetas na infecção de macrófagos por Leishmania infantum e identificação de uma Paf-acetilhidrolase no parasita.

Ferreira, Vinicius Costa Souza January 2014 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:31:37Z No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:32:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T16:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose visceral é causada pelo parasita Leishmania infantum. A infecção ocorre quando flebótomos infectados se alimentam na derme do hospedeiro vertebrado, inoculando o parasita. A infecção produz uma resposta com diversas moléculas inflamatórias, como os mediadores lipídicos. O fator de ativação de plaquetas (PAF) é um potente mediador lipídico derivado de um lisofosfolipídio. PAF participa da fisiologia normal da célula e possui um perfil pró-inflamatório. A participação de mediadores lipídicos, como eicosanóides e PAF, já foi identificada na imunopatogênese das leishmanioses. PAF gerado pelo hospedeiro tem efeito leishmanicida e de controle da infecção por L. amazonensis. PAF-acetilhidrolases (PAF-AH) são fosfolipases A2 que hidrolisam PAF e foi demonstrado que PAF-AH podem ser um fator de virulência devido a essa habilidade. O objetivo desse estudo foi avaliar o papel do PAF e de uma PAF-AH na infecção de macrófagos por L. infantum. Foi observado que PAF 1μM, quando adicionado durante e após a infecção, foi capaz de diminuir 50% da infecção após 72 horas, bem como a viabilidade dos parasitas dentro dos macrófagos num mecanismos independente do seu receptor PAFR e da produção de óxido nítrico. PAF 10μM interrompeu o crescimento de promastigotas de L. infantum em cultura axênica. Uma PAFAH, com elevada identidade e semelhança com PLA2/PAF-AH de outros tripanossomatídeos, foi identificada no genoma de L. infantum. A clonagem e expressão recombinante produziu uma proteína de cerca de 69kDa, com atividade PAF-AH. Frações celulares do parasita, enriquecidas com estruturas de membrana também apresentaram atividade PAF-AH. Os resultados indicam que PAF é capaz de diminuir a infecção de macrófagos por L. infantum e que o parasita possui uma PAF-AH funcional possivelmente envolvida com sua virulência. / Visceral leishmaniasis is caused by Leishmania infantum parasites. Infection occurs when infected sandflies feed on vertebrate host skin delivering the parasite which survive, multiply and spread on the parasitophorous vacuoles of macrophages. The inflammatory response during the infection leads to the production of diverse bioactive molecules, as lipid mediators. The platelet activating factor (PAF) is a lipid mediator derived from a lysophospholipid. PAF has a role in normal cellular physiology, acting as proinflamatory molecule. The participation of some lipid mediators, as eicosanoids and PAF has been identified in leishmaniasis. PAF produced by the host is able to kill the parasite and control the infection by L. amazonensis. PAF-acetylhydrolases (PAF-AH) are phospholipases A2 (PLA2) that hydrolyse PAF, and possibly involved in pathogen virulence. The aim of this study was to evaluate the role of PAF on macrophages infection by L. infantum and identify a PAF-AH expressed by the parasite. PAF 1μM, added during and after the infection, was able to reduce approximately 50% of infection, as well as, the viability of parasites inside macrophages. Apparently this reduction occurs by an classical PAF receptor and nitric oxide production independent mechanism. PAF 10μM inhibited L. infantum promastigotes growing in axenic culture. A PAF-AH with high identity to PLA2/PAF-AH of others trypanosomatids was identified in L. infantum genome. The cloning and recombinant expression produced a 69kDa protein with PAF-AH activity. Cellular fractions from parasites, with membrane structures also presented PAF-AH activity. The results suggest that PAF is able to decrease machophage infection by L. infantum witch has a functional PAFAH possibly related to its virulence
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Quantificação de subpopulações linfocitárias em doadores de repetição de plaquetaférese

Vargas, Luciana do Nascimento January 2016 (has links)
Introdução: A doação de plaquetas por aférese é um método de coleta que vem aumentando em relevância. Sabe-se que esta técnica apresenta inúmeras vantagens em comparação à doação de sangue total. Observamos que há uma preocupação na qualidade dos hemocomponentes enviados ao paciente, no entanto, não se observam muitas pesquisas em busca do cuidado com o doador. Órgãos como o Food and Drug Administration (FDA) já publicaram normas mais restritivas em relação à doação de plaquetas por aférese, pois pesquisas apontaram uma diminuição de algumas células e proteínas do sistema imunológico em doadores de repetição. Objetivos: Analisar doadores de plaquetas de repetição quanto a parâmetros hematimétricos e quantificação de subpopulações linfocitárias comparando-os com um grupo controle composto por doadores de sangue total que não doam há no mínimo um ano ou doando pela primeira vez e, ainda avaliar se a frequência de doações, o tempo de procedimento e o número de plaquetas doadas influenciam na contagem de leucócitos totais e nas subpopulações de linfócitos. Metodologia: Foram analisados 88 indivíduos em um estudo caso-controle, sendo que o grupo controle (CO) incluído foi de doadores de sangue total que haviam doado pela primeira vez ou haviam doado sangue total há mais de um ano. Os casos (CA) incluídos foram os doadores de repetição de plaquetaférese (quatro ou mais doações no último ano). O pareamento foi feito por sexo e idade. As amostras de sangue periférico foram coletadas em tubos contendo EDTA e analisadas em até 6 horas por citometria de fluxo, através da utilização de anticorpos monoclonais anti-CD3, CD4, CD8, HLADR, CD19 e CD56. Resultados: Foram avaliados 44 pares de doadores (caso vs controle). Destes, 81,8% eram homens, a média de idade dos grupos foi de 46 ±13 anos nos casos e 47 ±11 nos controles. Comparando os dois grupos, observou-se diferença estatisticamente significativa (p<0,05) na média de quantificação de leucócitos absolutos CA= 6476,6/μL vs CO=7115,4/μL (p=0,017), na média de linfócitos absolutos CA= 1862,6/μL vs CO= 2239,2/μL (p=0,007) e nos marcadores: CD3+/CD8+ (absoluto) CA= 437/μL vs CO= 597/μL (p=0,01), CD3+/CD4+(%) CA= 47,3/μL vs CO= 42,77/μL (p=0,007). Conclusões: Neste estudo foi possível observar que há uma diminuição em algumas células linfoides dos doadores de repetição em relação aos doadores convencionais, no entanto essa diferença não tem relevância clínica, demonstrando que os intervalos de doações que estes doadores estão sendo submetidos é adequado. A contagem de plaquetas dos doadores de repetição se mantiveram no decorrer do ano, este dado nos auxilia para mantermos um banco de dados de doadores de repetição com uma quantificação de plaquetas adequada, podendo ser convocado sem risco de ser bloqueado por contagem inferior ao preconizado. / Introduction: The donation of platelets by apheresis as a collection method has lately grown in relevance. This technique presents several advantages when compared to total blood donation. We understand there is a concern about the quality of the hemocomponents that are administered to the patients; however, there are not many researches concerned with caring for the donor. Entities such as the Food and Drug Administration (FDA) have published more restricting regulations regarding the donation of platelets by apheresis, since researches indicate a decrease in some cells and proteins present in the immunological systems of repeat donors. Objectives: To analyze repeat donors of platelets with regards to hematimetric parameters and quantification of lymphocyte sub-populations by comparing them with a control group consisting of total blood donors that have not donated blood for the past year at least or that are donating for the first time. Additionally, to evaluate if the frequency of donations, the duration of the procedure, and the donated platelet counts influence in the total leukocyte counts and in the sub-populations of lymphocytes. Methodology: We analyzed 88 individuals in a control case study. The control group (CG) consisted of total blood donors in their first donation or that had donated for the last time more than a year before. The cases (CA) included were the repeat donors by platelet apheresis (four or more donations in the past year). We matched the individuals by gender and age. Peripheral blood samples were collected in tubes containing EDTA and analyzed up until 6 hours later by flow cytometry, through monoclonal antibodies anti-CD3, CD4, CD8, HLADR, CD19, and CD56. Results: 44 pairs of donor were evaluated (case vs control). Among them, 81.8% were men, the average age of the groups was 46 (±13) years in the cases and 47 (±11) in the controls. When comparing the two groups, we observed a statistically significant difference (p<0,05) in the average of the quantification of absolute leukocytes CA= 6476.6/μL vs CG=7115.4/μL (p=0.017), in the average of absolute lymphocytes CA= 1862.6/μL vs CG= 2239.2/μL (p=0.007), and in the markers: CD3+/CD8+ (absolute) CA= 437/μL vs CG= 597/μL (p=0,01), CD3+/CD4+(%) CA= 47.3/μL vs CG= 42.77/μL (p=0.007). Conclusions: We were able to note in this study that there is a significant decrease in some lymphoid cells of repeat donors when compared to conventional donors. This difference, however, is not clinically relevant, which demonstrates that the donation intervals to which the donors are subject are appropriate. Platelet numbers of repeat donors remained the same throughout the year. This piece of data helps us keep a database of repeat donors with an adequate platelet number. These donors can be called for without risking of their being blocked in the screening for a number lower than the recommended.
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Reparo do nervo ciático do rato com enxerto venoso ao avesso "inside-out" (veia de dentro para fora) e preenchido com plasma rico em plaquetas

Hockmuller, Marjeane Cristina Jaques January 2011 (has links)
As lesões de nervos periféricos são comuns, resultando em comprometimento motor, sensorial e autonômico. Nas lesões em que ocorre grande perda de tecido neural, a reparação através de sutura primária não é permitida, sendo a auto-enxertia de nervo o tratamento de escolha. A utilização de um enxerto venoso autólogo utilizado como tubo condutor entre os cotos nervosos lesados preenchidos com substâncias que estimulem a regeneração nervosa apresenta-se como uma técnica alternativa. O Plasma Rico em Plaquetas é um produto derivado do sangue autógeno por processo laboratorial, rico em fatores de crescimento originados dos grânulos α- plaquetários. O objetivo deste trabalho experimental foi estudar a influência do Plasma Rico em Plaquetas na regeneração do nervo periférico seccionado e reparado com veia ao avesso, comparado ao uso da veia ao avesso vazia e à sutura direta das extremidades nervosas. A avaliação foi obtida com a interposição de veia jugular externa ao avesso vazia (Grupo 3) e preenchida com plasma rico em plaquetas (Grupo 4) em defeitos de 10 mm de nervo ciático de ratos Wistar, comparados à sutura direta (Grupo 2) das extremidades seccionadas, utilizando técnica histológica para identificação da coaptação ou não dos cotos nervosos. Os grupos 2 e 4 apresentaram coaptação dos cotos nervosos, concluindo-se que a veia ao avesso preenchida como Plasma Rico em Plaquetas é uma alternativa vantajosa no tratamento de lesões nervosas periféricas. / The peripheral nerve injuries are common, resulting in motor, sensorial and autonomic impairment. In lesions occurring heavy loss of neural tissue, repair by primary suture is not allowed, being the nerve autograft treatment the choice. The use of autologous vein grafts used as a conductor pipe between injured nerve stumps filled with substances stimulating nerve regeneration is presented as an alternative technique. The platelet rich plasma is an autologous blood product for the laboratorial process, rich in growth factors originated from α-granules of platelet. The aim of this study was to study the influence of platelet rich plasma in the regeneration of peripheral nerve transected and repaired with an inside-out vein, compared to the utilization of inside-out empty vein and the direct suture of the nerve endings. The evaluation was performed by interposing a jugular inside out empty vein (Group 3) filled with platelet-rich plasma (Group 4)in 10-mm defects in a sciatic nerve of rats, in comparison to the direct suture (Group 2) of divided ends, using histological technique for the identification of coaptation of nerve stumps or not. Groups 2 and 4 showed coaptation of the nerve stumps, being concluded that the inside-out vein completed as platelet rich plasma is an attractive alternative for the treatment of peripheral nerve injuries.
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Genotipagem do sistema de antígenos plaquetários humanos (HPA) em doadores de plaquetas do sul do Brasil

Merzoni, Jóice January 2015 (has links)
Os antígenos plaquetários humanos são estruturas imunogênicas resultantes de alterações pontuais (SNP) que levam a substituição de um aminoácido a nível proteico. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência alélica e genotípica do sistema HPA-1 a -5 e -15 em doadores de plaquetas do Estado do RS e comparar as frequências alélicas encontradas com as observadas em outras populações. A genotipagem HPA foi realizada através do método de PCR-SSP. Um total de 201 doadores de plaquetas foram incluídos no estudo sendo 167 caucasoides e 34 não caucasoides. O alelo “a” foi o mais frequente nos sistemas HPA-1 a -5 em ambos grupos. O genótipo HPA-15AB foi predominante sobre os genótipos homozigotos para este sistema. O teste exato de Fisher revelou diferença estatisticamente significativa para o sistema HPA-5. Houve maior prevalência do alelo HPA-5B no grupo não caucasoide. Para o grupo caucasoide, o método de neighbor-joining e a PCA revelaram proximidade genética entre este grupo e as populações europeias. De um modo geral, concluímos que as frequências alélicas para os sistemas HPA-1 a -5 e -15 encontradas em nosso grupo caucasoide são similares às descritas em populações europeias. Estes dados corroboram a formação étnica da população do RS. A maior frequência do alelo HPA-5b encontrada no grupo não caucasoide de nosso estudo indica a possibilidade de alosensibilização para pacientes que recebem transfusões de plaquetas não compatibilizadas geneticamente. / Human platelet antigens are immunogenic structures that result from single nucleotide polymorphisms (SNPs) leading to single amino acid substitutions. The present study sought to determine the allele and genotype frequencies of HPA-1 through 5 and HPA-15 in platelet donors from the state of Rio Grande do Sul, Brazil, and compare their allele frequencies to those observed in other populations. HPA genotyping was performed via the single specific primer-polymerase chain reaction (PCR-SSP) method. The study sample comprised 201 platelet donors (167 Caucasians and 34 non-Caucasians). Allele “a” was that most commonly found for HPA-1 through 5 in both groups. The HPA-15AB genotype predominated over homozygous genotypes of this system. Fisher’s exact test revealed statistically significant differences for the HPA-5 system, with a greater prevalence of the HPA- 5B allele in non-Caucasians. The neighbor-joining method and principal components analysis (PCA) revealed genetic proximity between the Caucasian group and European populations. We conclude that the allele frequencies of HPA-1 through 5 and HPA-15 found in our Caucasian sample are similar to those reported for European populations. These findings corroborate the ethnic makeup of the population of Rio Grande do Sul. The higher frequency of the HPA-5b allele found in the non-Caucasian group of our sample suggests the possibility of allosensitization in patients who receive platelet transfusions from genetically incompatible donors.
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Doenças cardiovasculares em pacientes bipolares: uma investigação da biodisponibilidade do óxido nítrico / Cardiovascular disease in bipolar patients: an investigation of of nitric oxide bioavailability

Paula Fontoura Coelho de Souza 24 February 2015 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os transtornos psiquiátricos são um problema de saúde pública, ocupando cinco das dez principais causas de incapacitação no mundo. O transtorno bipolar (TB) é um transtorno de humor, segundo o DSM-IV (manual diagnóstico e estatístico de doenças mentais), o qual afeta cerca de 1% da população mundial. O TB do tipo I (TBI) é o mais frequente entre os TBs e é caracterizado pela presença de episódios maníacos ou mistos acompanhados por episódios depressivos. Assim como outros transtornos psiquiátricos, como a depressão, ansiedade e esquizofrenia, o TB representa um importante fator de risco cardiovascular, e pacientes com este transtorno apresentam mortalidade cardiovascular duas vezes maior que a população em geral. No entanto, os exatos mecanismos envolvidos nesta relação permanecem desconhecidos. Estudos sugerem o envolvimento da via L-arginina-óxido nitrico (NO) na patofisiologia do TB. O NO é responsável por diversas funções fisiológicas, incluindo a inibição da função plaquetária. A L-arginina, sua precursora, é transportada em plaquetas pelo carreador y+L, ativando a enzima NO sintase (NOS), a qual produz NO e e L-citrulina. Uma vez produzido, o NO ativa a enzima guanilato ciclase (GC), levando ao aumento dos níveis de guanosina monofosfato cíclica (GMPc). Adicionalmente, a L-arginina não é exclusivamente utilizada pela NOS, ela também pode ser metabolizada pela arginase e produzir L-ornitina e uréia. A biodisponibilidade do NO depende tanto de sua síntese como de sua degradação pelo estresse oxidativo ou pela inflamação. O objetivo deste estudo foi investigar detalhadamente a via L-arginina-NO-GMPc em plaquetas de pacientes com TBI, a expressão da arginase e outros marcadores de estresse oxidativo e inflamação. Vinte e oito pacientes com TB e dez indivíduos saudáveis foram incluídos no estudo. Nossos estudos mostraram uma redução da atividade da NOS em todos os grupos de pacientes bipolares (fases de eutimia, depressão e mania), quando comparados aos controles. Isto ocorreu na presença de concentrações normais do substrato e de seu transporte, e da expressão inalterada das isoformas eNOS e iNOS. A expressão da arginase II não diferiu entre os grupos estudados, indicando que a disponibilidade da L-arginina não está sendo desviada para o ciclo de uréia em plaquetas. A produção reduzida de GMPc foi observada mesmo com a expressão inalterada da GC. A atividade e marcadores de estresse oxidativo, avaliada através da quantificação da oxidação de proteínas e atividade da catalase, não foram modificadas em plaquetas de pacientes com TB, enquanto que a atividade da SOD estava aumentada em todas as fases. Os níveis séricos da proteína C-reativa (PCR), um marcador inflamatório, estão aumentados em pacientes maníacos, comparados aos controles. A reduzida produção de NO observada em plaquetas de pacientes bipolares pode ser um elo entre esta complexa associação entre TB e a doença cardiovascular. / Psychiatric disorders are public health problems, ocuppying five of ten major causes of incapacitation in the world. Bipolar disorder (BD) is a mood disorder, according to DMS-IV (Diagnostic and Statistic Manual of Mental Disease), which affects about 1% of world population. Bipolar I disorder (BDI) is the most frequent among the BDs and is characterized by the presence of manic or mixed episodes accompanied by depressive episodes. Similarly to other psychiatric disorders, such as depression, anxiety and schizophrenia, BD represents an important cardiovascular risk factor, and patients with this disorder have twice the cardiovascular mortality expected from general population. However, the exact mechanisms underlying this relationship remain unknown. Studies suggest the involvement of L-arginine-nitric oxide (NO) pathway on the pathogenesis of BD. NO is responsible for several physiological functions, including platelet function inhibition. L-arginine, its precursor, is transported into platelets by y+L carrier, and activates the enzyme NO synthase (NOS), which produces NO and L-citrulline. Once produced, NO activates the enzyme guanilyl cyclase (GC), increasing cyclic guanosine monophosphate (cGMP) levels. Additionally, L-arginine is not exclusively used by NOS, it can also be metabolized by arginase and produce L-ornithine and urea. NO bioavailability depends on both its synthesis and its degradation by oxidative stress and inflammation. The aim of this study was to investigate in detail L-arginine-NO-cGMP pathway in platelets of BDI patients, arginase expression and other markers that can affect NO bioavailability, such as oxidative stress and inflammation. Twenty eight patients with BD and ten healthy volunteers were included in this study. Our results showed decreased NOS activity in all groups of BDI patients (euthymic, depressive and manic episodes), when compared with controls. This occurred in the presence of normal substrate concentrations and unchanged expressions of eNOS and iNOS isoforms. Arginase II expression was not different between studied groups, indicating that L-arginine availability is not shifted to urea cycle in platelets. Decreased GMPc production was observed even in inalthered expression of GC. Activity and oxidative stress markers, evaluated through protein oxidation quantification and SOD and catalase activity, were not modified in platelets of BD patients while SOD activity was increased in all groups. Serum C-reactive protein (CRP) levels, an inflammatory marker, were higher in manic patients, compared with controls. The reduced production of NO observed in platelets of bipolar patients can be a link in this complex association between BD and cardiovascular disease.

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