Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-24 / A angiostatina é um potente inibidor de angiogênese gerado a partir da hidrólise limitada do plasminogênio. Existem evidências crescentes de que as catepsinas estão envolvidas na regulação de peptídeos pró- e anti-angiogênicos. As catepsinas cisteíno-peptidases têm sido associadas a inúmeros processos fisiológicos e fisiopatológicos em tecidos oculares. Nossos resultados mostraram uma intensa expressão protéica de plasminogênio em praticamente todos os tecidos oculares cadavéricos e ainda uma diferenciada atividade de cisteíno-peptidases nestes tecidos. Verificamos também que o processamento do plasminogênio endógeno pode ocorrer pela ação de cisteíno-peptidases presentes na córnea. Recentemente nosso grupo descreveu que a catepsina V recombinante é capaz de formar fragmentos angiostáticos a partir da hidrólise do plasminogênio. Na presente tese estendemos os estudos para a catepsina S recombinante e verificamos que esta enzima hidrolisa o plasminogênio em uma única ligação (Leu469-Leu470), gerando dois fragmentos de 60 kDa e 38 kDa. No entanto, este processamento não resulta em peptídeos angiostáticos e nem em atividade de plasmina. Baseado nas ligações hidrolisadas no plasminogênio pela catepsina S (aqui descrita) e pela catepsina V (anteriormente publicada), sintetizamos peptídeos com supressão intramolecular de fluorescência que contém as seqüências que flanqueiam estas ligações clivadas. O estudo resultou no desenvolvimento do substrato Abz- VLFEKKQ-EDDnp que é altamente seletivo para a catepsina V e que não foi hidrolisado nem mesmo pela catepsina L, enzima com a alta homologia à catepsina V. Considerando ainda a restrita distribuição tecidual da catepsina V, este substrato poderá se tornar uma importante ferramenta no monitoramento da atividade desta protease. Como as catepsinas cisteíno-peptidases estão implicadas em uma ampla variedade de processos patológicos, há um crescente estímulo para a caracterização de potentes inibidores e substratos específicos. Nossas investigações demonstraram ainda que o substrato Abz-VLFEKKVYLQ-EDDnp, também derivado d plasminogenio, apresenta uma eficaz atividade inibitória para a catepsina L (Ki app = 0,2 µM). / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-02-16T17:00:17Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edilânia Gomes Araújo Chaves - 2013.pdf: 3289607 bytes, checksum: 174bfb3cce0a9109022321f4adf3368d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-02-17T16:53:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edilânia Gomes Araújo Chaves - 2013.pdf: 3289607 bytes, checksum: 174bfb3cce0a9109022321f4adf3368d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T16:53:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edilânia Gomes Araújo Chaves - 2013.pdf: 3289607 bytes, checksum: 174bfb3cce0a9109022321f4adf3368d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-03-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Paracoccicoidioides is the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a disease considered one of the main causes of mortality among systemic mycoses in Brazil. The success in establishing of the infection is related with the ability of fungus to adhere and degrade components of the extracellular matrix (ECM). Human plasminogen (hPlg) is a protein of blood plasma of the host that presents fibrinolytic activity when activated into plasmin. Many pathogens are able to subvert the plasminogen/plasmin system using linker molecules and promote the degradation of tissue barriers. In this work, we identified through Far Western and proteomic analysis, a total of 15 proteins secreted of Paracoccidioides that are plasminogen binding proteins. Those proteins are probable targets of the interaction of the fungus with the host and could contribute to the invasiveness of the fungus. The fructose 1,6-biphosphate aldolase was described in other organisms such as plasminogen binder and presentes participation in the adherence of Paracoccidioides to host cells. This protein selected for validation tests and their presence was observed on the surface and secretory vesicles of the fungus. FBA confirm the ability to convert plasminogen to plasmin in the presence of tissue plasminogen activator (tPA) and this interaction promoted the degradation of fibrin. In infection assays, the addition of antibodies blocking the FBA binding site reduced the interaction of the fungus with macrophages and the interaction of FBA with Plg increased the rate of cell invasion. These data suggest that the FBA can contribute to adhesion, invasion and spread process of the fungus. / Paracoccicoidioides é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), uma doença considerada como primeira causa de mortalidade entre as micoses sistêmicas no Brasil. O sucesso no estabelecimento da infeção está relacionado com a capacidade do fungo de aderir e degradar componentes da matriz extracelular (MEC). O plasminogênio humano (hPlg) é uma proteína presente no plasma, a qual possui atividade fibrinolítica quando é ativado em plasmina. Muitos micro-organismos patogênicos são capazes de subverter o sistema plasminogênio/plasmina através de moléculas ligantes e promovem a degradação de barreiras teciduais. Neste trabalho foram identificadas, através de Far-Western e análise proteômica, um total de 15 proteínas secretadas por Paracoccidioides com habilidade de ligação ao plasminogênio. Essas proteínas são prováveis alvos da interação do patógeno com o hospedeiro, que contribui para o potencial invasivo do fungo. A frutose 1,6-bifosfato aldolase (FBA) foi descrita em outros organismos como ligante de plasminogênio e possui participação na adesão de Paracoccidioides às células do hospedeiro. Selecionamos esta proteína para ensaios de validação e foi observada sua presença na superfície e em vesículas secretoras do fungo. Confirmamos a capacidade da FBA de converter plasminogênio em plasmina na presença do ativador tecidual de plasminogênio (tPA) e essa interação promoveu a degradação de fibrina. Em ensaios de infecção, a adição de anticorpos que bloqueiam o sítio de ligação da FBA reduziu a interação do fungo com macrófagos e a interação de FBA com Plg aumentou o índice de invasão celular. Esses dados sugerem que a FBA pode contribuir no processo de adesão, invasão e disseminação do fungo.

Orientador: Luciano Puzer / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2013

A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. A doença representa um grave problema de saúde pública nos países tropicais subdesenvolvidos. Mais de 500.000 casos graves de leptospirose são notificados a cada ano e a taxa de mortalidade excede 10% (World Health Organization, 1999). Os roedores são o principal reservatório urbano da doença, e eliminam leptospiras viáveis no meio ambiente ao longo de toda a vida. As bactérias entram no hospedeiro por abrasões na pele ou por membranas mucosas e rapidamente se espalham pelo organismo atingindo vários órgãos. A identificação de mecanismos de invasão e de evasão imune apresentados por leptospiras patogênicas é extremamente relevante e tem sido alvo de pesquisas recentes desenvolvidas por vários grupos. Nesse contexto, a caracterização funcional de proteínas de membrana externa de Leptospira, principais alvos de interação com moléculas do hospedeiro, é de grande importância. O Fator de Elongação Tu (EF-Tu), uma proteína bacteriana abundante envolvida na síntese protéica, pertence à categoria das proteínas conhecidas como \"moonlighting\". Tais moléculas possuem a capacidade de exercer mais de uma função e, normalmente, localizam-se em diferentes compartimentos da célula. Há relatos de que EF-Tu de agentes patogênicos possa atuar como um fator de virulência. No presente trabalho, demonstrou-se que EF-Tu de Leptospira está localizado na superfície da bactéria e possui funções adicionais, sendo receptor para moléculas presentes no plasma do hospedeiro. Tal proteína interage com vários componentes da matriz extracellular e também com plasminogênio, de maneira dosedependente. Resíduos de lisina são importantes para essa interação. Plasminogênio ligado a EF-Tu é convertido em sua forma ativa, plasmina, que, por sua vez, é capaz de clivar os substratos naturais C3b e fibrinogênio. EF-Tu de Leptospira também se liga a Fator H, principal regulador da via alternativa do sistema complemento, e este mantém sua atividade funcional ao agir como co-fator de Fator I na clivagem de C3b. O potencial imunoprotetor de EF-Tu em modelo animal foi avaliado, tendo em vista o alto grau de conservação da proteína em diferentes espécies de Leptospira. EF-Tu não conferiu proteção significativa e, portanto, não deve ser considerado como um candidato vacinal contra a leptospirose. Em suma, EF-Tu de Leptospira deve contribuir para o processo de invasão e evasão ao sistema imune inato do hospedeiro, inativando o sistema complemento. Tanto quanto é do nosso conhecimento, essa é a primeira descrição de uma proteína \"moonlighting\" em Leptospira. / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic bacteria from the genus Leptospira. The disease represents a serious public health problem in underdeveloped tropical countries. More than 500,000 cases of severe leptospirosis are reported each year, with mortality rates exceeding 10% (World Health Organization, 1999). Rodents are the main urban reservoir of the disease, shedding viable leptospires throughout their lives in the environment. Leptospires infect hosts through small abrasions in the skin or mucous membranes and they rapidly disseminate to target organs. The identification of invasion mechanisms and immune evasion strategies employed by pathogenic leptospires is of great relevance. In this context, functional characterization of leptospiral outer membrane proteins, which represent the main targets for interaction with host molecules, is extremely important. The elongation factor Tu (EF-Tu), an abundant bacterial protein involved in protein synthesis, has been shown to display moonlighting activities. Known to perform more than one function at different times or in different places, it is found in several subcellular locations in a single organism, and may serve as a virulence factor in a range of important human pathogens. In this work we demonstrate that Leptospira EF-Tu is surface-exposed and performs additional roles as a cell-surface receptor for host plasma proteins. It interacts with several extracellular matrix components and also binds plasminogen in a dose-dependent manner. Lysine residues are critical for this interaction. Bound plasminogen is converted to active plasmin, which, in turn, is able to cleave the natural substrates C3b and fibrinogen. Leptospira EF-Tu also acquires Factor H (FH), the main soluble regulator of the alternative pathway of the complement system. FH bound to immobilized EF-Tu displays cofactor activity, mediating C3b degradation by Factor I (FI). Given the wide distribution of EF-Tu among Leptospira species, its immunoprotective potential was evaluated in an animal model. EF-Tu was not able to afford significant immunoprotection, and might not be considered a vaccine candidate against leptospirosis. In conclusion, EF-Tu may contribute to leptospiral tissue invasion and complement inactivation. To our knowledge, this is the first description of a leptospiral protein exhibiting moonlighting activities.

A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. A doença representa um grave problema de saúde pública nos países tropicais subdesenvolvidos. Mais de 500.000 casos graves de leptospirose são notificados a cada ano e a taxa de mortalidade excede 10% (World Health Organization, 1999). Os roedores são o principal reservatório urbano da doença, e eliminam leptospiras viáveis no meio ambiente ao longo de toda a vida. As bactérias entram no hospedeiro por abrasões na pele ou por membranas mucosas e rapidamente se espalham pelo organismo atingindo vários órgãos. A identificação de mecanismos de invasão e de evasão imune apresentados por leptospiras patogênicas é extremamente relevante e tem sido alvo de pesquisas recentes desenvolvidas por vários grupos. Nesse contexto, a caracterização funcional de proteínas de membrana externa de Leptospira, principais alvos de interação com moléculas do hospedeiro, é de grande importância. O Fator de Elongação Tu (EF-Tu), uma proteína bacteriana abundante envolvida na síntese protéica, pertence à categoria das proteínas conhecidas como \"moonlighting\". Tais moléculas possuem a capacidade de exercer mais de uma função e, normalmente, localizam-se em diferentes compartimentos da célula. Há relatos de que EF-Tu de agentes patogênicos possa atuar como um fator de virulência. No presente trabalho, demonstrou-se que EF-Tu de Leptospira está localizado na superfície da bactéria e possui funções adicionais, sendo receptor para moléculas presentes no plasma do hospedeiro. Tal proteína interage com vários componentes da matriz extracellular e também com plasminogênio, de maneira dosedependente. Resíduos de lisina são importantes para essa interação. Plasminogênio ligado a EF-Tu é convertido em sua forma ativa, plasmina, que, por sua vez, é capaz de clivar os substratos naturais C3b e fibrinogênio. EF-Tu de Leptospira também se liga a Fator H, principal regulador da via alternativa do sistema complemento, e este mantém sua atividade funcional ao agir como co-fator de Fator I na clivagem de C3b. O potencial imunoprotetor de EF-Tu em modelo animal foi avaliado, tendo em vista o alto grau de conservação da proteína em diferentes espécies de Leptospira. EF-Tu não conferiu proteção significativa e, portanto, não deve ser considerado como um candidato vacinal contra a leptospirose. Em suma, EF-Tu de Leptospira deve contribuir para o processo de invasão e evasão ao sistema imune inato do hospedeiro, inativando o sistema complemento. Tanto quanto é do nosso conhecimento, essa é a primeira descrição de uma proteína \"moonlighting\" em Leptospira. / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic bacteria from the genus Leptospira. The disease represents a serious public health problem in underdeveloped tropical countries. More than 500,000 cases of severe leptospirosis are reported each year, with mortality rates exceeding 10% (World Health Organization, 1999). Rodents are the main urban reservoir of the disease, shedding viable leptospires throughout their lives in the environment. Leptospires infect hosts through small abrasions in the skin or mucous membranes and they rapidly disseminate to target organs. The identification of invasion mechanisms and immune evasion strategies employed by pathogenic leptospires is of great relevance. In this context, functional characterization of leptospiral outer membrane proteins, which represent the main targets for interaction with host molecules, is extremely important. The elongation factor Tu (EF-Tu), an abundant bacterial protein involved in protein synthesis, has been shown to display moonlighting activities. Known to perform more than one function at different times or in different places, it is found in several subcellular locations in a single organism, and may serve as a virulence factor in a range of important human pathogens. In this work we demonstrate that Leptospira EF-Tu is surface-exposed and performs additional roles as a cell-surface receptor for host plasma proteins. It interacts with several extracellular matrix components and also binds plasminogen in a dose-dependent manner. Lysine residues are critical for this interaction. Bound plasminogen is converted to active plasmin, which, in turn, is able to cleave the natural substrates C3b and fibrinogen. Leptospira EF-Tu also acquires Factor H (FH), the main soluble regulator of the alternative pathway of the complement system. FH bound to immobilized EF-Tu displays cofactor activity, mediating C3b degradation by Factor I (FI). Given the wide distribution of EF-Tu among Leptospira species, its immunoprotective potential was evaluated in an animal model. EF-Tu was not able to afford significant immunoprotection, and might not be considered a vaccine candidate against leptospirosis. In conclusion, EF-Tu may contribute to leptospiral tissue invasion and complement inactivation. To our knowledge, this is the first description of a leptospiral protein exhibiting moonlighting activities.

Submitted by Andrea Hayashi (deachan@gmail.com) on 2016-07-19T18:43:58Z No. of bitstreams: 1 richard.pdf: 1735785 bytes, checksum: 2df8fed54dbb769385bd94c07d15eefc (MD5) / Approved for entry into archive by Andrea Hayashi (deachan@gmail.com) on 2016-07-19T18:44:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 richard.pdf: 1735785 bytes, checksum: 2df8fed54dbb769385bd94c07d15eefc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-19T18:44:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 richard.pdf: 1735785 bytes, checksum: 2df8fed54dbb769385bd94c07d15eefc (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / World Health Organization (WHO) / Howard Hughes Medical Institute (HHMI) / Os agentes antifúngicos de uso corrente na medicina apresentam alta toxicidade e efeitos colaterais, tem como alvo poucos constituintes celulares, e muitos mecanismos de resistência já foram descritos. Com o objetivo de identificar potenciais novos alvos para drogas antifúngicas, duas ORFs hipotéticas de Candida albicans, potencialmente essenciais e com perfis singulares de expressão foram caracterizados. A ORF CaYlr339c é conservada em outros fungos do gênero Candida e Saccharomyces, é transcrita nas fases de levedura e hifa e a presença de seu produto protéico de aproximadamente 18 kDa foi constatada em extratos celulares de leveduras e hifas de C. albicans a partir de experimentos de western blot. A ORF CaYdr187c é conservada em poucos representantes do gênero Saccharomyces, é transcrita apenas na fase de levedura e potencialmente codifica uma proteína de superfície. Esses dados indicam que as ORFs selecionadas são genes reais e podem ser bons candidatos para a descoberta de novas funções e para o desenvolvimento futuro de novos agentes antifúngicos. Numa tentativa de testar o possível papel da proteína putativa de superfície CaYdr187cp na adesão celular, constatamos que a incubação de discos de tecido gastrointestinal com a proteína recombinante enolase, utilizada inicialmente como controle em nossos experimentos, foi capaz de inibir a adesão de C. albicans de maneira dose dependente em até 70%. O papel da enolase de superfície na adesão celular foi confirmado a partir da inibição da adesão em até 50% observada com o bloqueio da superfície de C. albicans com anticorpos anti-enolase. A capacidade de ligação da enolase de C. albicans ao plasminogênio foi confirmada a partir de experimentos de coimunoprecipitação. A pré-incubação de C. albicans com esta proteína foi capaz de inibir parcialmente sua adesão reforçando a idéia de que a enolase realmente esteja mediando à adesão deste organismo ao tecido gastrointestinal. Em contrapartida, a enolase não foi coimunoprecipitada com a fibronectina e a pré-incubação de C. albicans com esta proteína falhou em inibir sua adesão indicando que a inibição observada com a enolase recombinante não é decorrente do bloqueio da fibronectina no tecido gastrointestinal. Este trabalho é o primeiro a demonstrar que a enolase presente na superfície de C. albicans está envolvida em mecanismos de adesão, podendo ser um importante fator de virulência neste organismo. Assim, esta proteína poderia ser utilizada no desenvolvimento de vacinas ou estratégias de controles a partir da inibição da adesão de C. albicans ao tecido gastrointestinal com o intuito de prevenir sua proliferação. / Current antifungal agents in medicine presents high toxicity and collateral effects, targets limited cell constituents and different resistance mechanisms have already been described. In order to identify novel potential antifungal drug targets, two hypothetical Candida albicans genes potentially essential and with singular expression profile have been characterized. The ORF CaYlr339c is conserved among fungal species from Candida and Saccharomyces genus, is transcribed in yeast and hyphae and an approximately 18-kDa protein was identified in hyphae and yeasts C. albicans cell extracts by western blotting. The ORF CaYdr187c is conserved in a few representatives of the Saccharomyces genus, is transcribed only in yeasts and potentially codifies a surface protein. These findings indicate that the selected ORFs are real genes and could be good candidates for the discovery of new functions and the development of new antifungal agents in the future. In an attempt to test the possible role of the putative surface protein CaYdr187cp on cell adhesion, we find out that incubation of the gastrointestinal Murine disks with the recombinant protein enolase, initially employed as a control in our experiments, was able to inhibit C. albicans adhesion in a dose-dependent manner in 70%. The role of surface enolase on cell adhesin was confirmed with the 50% of the adhesion inhibition observed after blocking C. albicans surface with antibodies anti-enolase. The binding capacity of enolase to plasminogen was confirmed by co-immunoprecipitation. Preincubation of C. albicans with this protein partially inhibited the adhesion supporting the idea that enolase is really mediating the adhesion of this organism to gastrointestinal tissues. On the other hand, enolase was not co-immunoprecipitated with fibronectin and pretreatment of C. albicans with this protein failed to inhibit the adhesion, indicating that the observed inhibition with recombinant enolase was not due to the blocking of fibronectin in the gastrointestinal disks. This was the first work to demonstrate that surface C. albicans enolase is involved in cell adhesion, being a potential virulence factor in this organism. Accordingly, this protein could be useful in vaccine development and is a promising candidate for the prevention of C. albicans proliferation by the inhibition of its adhesion. Esta tese é composta de uma Introdução geral e duas partes independentes compostas de: Introdução, objetivos, materiais e métodos, resultados, discussões e conclusões específicas. A primeira parte da tese trata da caracterização parcial de genes hipotéticos de C. albicans e a segunda parte trata do papel da enolase na adesão de C. albicans ao tecido gastrointestinal.

Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-08T20:33:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Gabriela Tonini Peterle.pdf: 1720247 bytes, checksum: f69ebeacd96de38d131c0f8171f8ed62 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-17T13:49:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Gabriela Tonini Peterle.pdf: 1720247 bytes, checksum: f69ebeacd96de38d131c0f8171f8ed62 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T13:49:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Gabriela Tonini Peterle.pdf: 1720247 bytes, checksum: f69ebeacd96de38d131c0f8171f8ed62 (MD5) / CNPQ / O carcinoma epidermoide de cavidade oral (CEC oral) é uma causa significativa de mortalidade e morbidade e está relacionado, principalmente, ao uso do álcool e tabaco. Alguns marcadores genéticos de resposta ao tratamento e evolução clínica já foram identificados para esse carcinoma, como a HIF1α, a qual promove a transcrição de genes como CA-IX, PAI-1 e VEGF envolvidos na resposta celular à depleção de oxigênio. Com o intuito de observar as influências de algumas proteínas da via de hipóxia nas características clinicopatológicas e no prognóstico dos pacientes, bem como observar a atuação dos constituintes do tabaco no mecanismo de hipóxia, foi realizada uma análise semi-quantitativa de 52 pacientes com CEC oral, por meio de imuno-histoquímica, sendo os cálculos e gráficos estatísticos feitos através do software Epi Info® v3.4.3, 2007. A frequência de positividade da expressão CA-IX confirmou a existência de diferenças biológicas entre as expressões negativa e positiva da proteína (p=0,027). Desta forma, a expressão citoplasmática positiva mostrou uma relação significante com a ocorrência de linfonodos acometidos (p=0,025) e a expressão membranar negativa de CA-IX foi predominante nos casos com o infiltrado inflamatório intenso (p=0,044). Em relação às curvas de sobrevida, as expressões positivas fraca e forte de CA-IX membranar mostraram significância referente à Sobrevida Livre de Doença Local (LDL) (p=0,038); já as expressões citoplasmáticas negativa e positiva da proteína apresentaram significância para a Sobrevida Doença Específica (DE) (p=0,022). A análise multivariada confirmou a expressão citoplasmática de CA-IX como um fator de risco para a ocorrência de óbito doença específica, aumentando esse risco em aproximadamente 3x (HR=2,84; IC= 1,02-7,87). Em relação ao PAI-1, o nível da expressão citoplasmática da proteína mostrou relação significante com o grau de diferenciação tumoral (p=0,027) e as expressões citoplasmáticas e membranares positivas apresentaram associação com o infiltrado inflamatório moderado (p=0,013; p=0,033, respectivamente). Já para o prognóstico, as expressões membranares negativa e positiva de PAI-1 apresentaram uma associação significante com a recidiva local (p=0,027) e a análise multivariada confirmou a expressão membranar positiva da proteína como um fator de risco para a ocorrência de tal recidiva, aumentando esse risco em aproximadamente 14x (OR=14,49; IC= 1,40-150,01). O grau de diferenciação tumoral também foi significantemente associado com as expressões citoplasmáticas negativa e positiva de VEGF (p=0,035) e foi observada uma relação entre a presença do infiltrado inflamatório e as expressões positivas fraca e forte da proteína (p=0,038). Por fim, não foram encontradas significâncias estatísticas entre o hábito tabagista e as expressões de CA-IX, PAI-1 e VEGF, no entanto, acredita-se que este resultado seja decorrente da composição da casuística do trabalho. Assim, a busca de biomarcadores para o CEC oral é um desafio que deve ser assumido por grupos de pesquisas que trabalham com a doença, com o intuito de elucidar mecanismos da gênese tumoral que ainda não foram compreendidos. / Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) is a significant cause of mortality and morbidity and is mainly related to the use of alcohol and tobacco. Some genetic markers of treatment response and clinical evolution have been identified for this carcinoma, such as HIF1α, which promotes transcription of more than 100 genes involved in cell hypoxia response, among these: CA IX, PAI-1 and VEGF. In order to observe the influence of these proteins in tumor clinicopathological and prognostic features, as well as observe the activity of the constituents of tobacco in hypoxic mechanism, a semi-quantitative analysis of 52 patients with oral cancer was performed, by means of immunohistochemistry, being the statistical calculations and graphics performed by Epi Info® v3.4.3, 2007. The frequency of CA-IX positive expression confirmed the existence of biological differences between the negative and positive expressions of protein (p=0.027). Furthermore, the cytoplasmic positive expression showed a significant relationship with the occurrence of regional lymph node metastases (p=0.025) and CA-IX membrane negative expression was predominant in cases with intense inflammatory infiltrate (p=0.044). Regarding to the survival curves, the CA-IX weak and strong expression of membrane showed significance with respect to the Local Disease-Free Survival (p=0.038), whereas positive and negative cytoplasmic protein expressions were significant for Disease Specific Survival (p=0.022). Multivariate analysis confirmed the cytoplasmic CA-IX expression as a risk factor for the occurrence of disease specific death, with approximately 3-fold increased risk (HR=2.84, CI=1.02-7.87). The cytoplasmic expression level of PAI-1 showed significant correlation with the degree of tumor differentiation (p=0.027) and both the cytoplasmic expressions and positive membrane were associated with mild infiltration (p=0.013, p=0.033, respectively). Concerning to prognostic characteristics, PAI-1 positive and negative membrane expression showed a significant association with local relapse (p=0.027). Moreover, multivariate analysis confirmed the PAI-1 positive membrane expression of as a risk factor for the occurrence of this recurrence, with approximately 14-fold increased risk (OR=14.4, CI=1.40-150.01). The degree of tumor differentiation was also significantly associated with VEGF negative and positive cytoplasmic expression (p=0.035) and a relationship between the presence of inflammatory infiltrate and the weak and strong positive expression of the protein (p=0.038) was observed. Finally, statistical significance between the smoking habit and the CA-IX, PAI-1 and VEGF expression of were not found, but, it is believed that this result was due to the composition of the work casuistry. Thus, the search for biomarkers for OSCC is a challenge which must be faced by research groups, in order to elucidate mechanisms of tumorigenesis that are not yet understood.

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Débora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Flavio Augusto Naoum / Resumo: A Anemia Falciforme (AF) é caracterizada pela presença da hemoglobina S em homozigose (Hb SS). As pessoas com AF frequentemente apresentam manifestações clínicas relacionadas a processos de vaso-oclusão como o acidente vascular encefálico (AVE) e síndrome torácica aguda (STA). A regulação da vasoconstrição e vasodilatação é um fator importante na modulação destas manifestações clínicas, sendo alvo de estudos. Neste trabalho, os polimorfismos nos genes de duas enzimas - enzima conversora de angiotensina 1 e 2 (ECA1 e ECA2) e o polimorfismo do inibidor do ativador do plasminogênio tipo 1, relacionado com a fibrinólise, foram avaliados. O Sistema Renina-Angiotensina-Aldosterona atua na manutenção da pressão arterial e do volume sanguíneo por meio do equilíbrio hídrico e eletrolítico e regulação do tônus vascular. A ECA 1 é a principal enzima desse sistema, e cliva a Angiotensina I em Angiotensina II, um potente vasoconstritor. Uma enzima homóloga, a ECA 2, é capaz de clivar a Angiotensina II em Angiotensina 1-7, uma vasodilatadora. Os polimorfismos I/D no gene ECA1 (rs1799752) e A/G (rs2106809) no gene ECA2 foram estudados neste trabalho. Além disso, a regulação fibrinolítica também está relacionada às manifestações clínicas na AF. O inibidor do ativador do plasminogênio tipo 1 (PAI-1) é um regulador da fibrinólise, inibindo os ativadores do plasminogênio e a formação de plasmina, responsável pela degradação do coágulo. O polimorfismo mais estudado no gene PAI1, de inserção de... / Abstract: Sickle cell anemia (SCA) is characterized by the presence of hemoglobin S in homozygous (Hb SS). People with AF frequently presents clinical manifestations related to vasoocclusion processes such as stroke and acute chest syndrome (ACS). The regulation of vasoconstriction and vasodilation is an important factor in the modulation of these complications, being the object of many studies. In this work, the polymorphisms in the genes of two enzymes - angiotensin-converting enzyme 1 and 2 (ACE1 and ACE2) - and fibrinolysis-related plasminogen activator inhibitor type 1 polymorphism were evaluated. The Renin-Angiotensin-Aldosterone System acts in the maintenance of blood pressure and blood volume through fluid and electrolyte balance and vasodilation and vasoconstriction. ACE 1 is the main enzyme in this system, and cleaves Angiotensin I in Angiotensin II, a potent vasoconstrictor. A homologous enzyme, ACE 2, is capable of cleaving Angiotensin II in Angiotensin I-7, a vasodilator. The I/D polymorphisms in the ACE1 gene (rs1799752) and A/G (rs2106809) in the ACE2 gene are studied in this paper. In addition, fibrinolytic regulation is also related to clinical complications in SCD. The plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1) is a regulator of fibrinolysis, inhibiting plasminogen activators and the formation of plasmin, responsible for clot degradation. The most studied polymorphism in the PAI1 gene, of insertion of a guanine (4G/5G) in the promoter region of the gene, increases the enzyme activity and decreases the fibrinolytic action. To verify if these polymorphisms are related to the presence of the clinical manifestations, stroke and ACS, we genotyped 392 people with SCA. The samples were characterized according to their hemoglobin profile, subjected to DNA extraction, and used for the detection of polymorphisms by PCR-RFLP. The frequencies of the polymorphisms were analyzed ... / Mestre

A obesidade tem sido apontada como fator de risco para desenvolvimento de carcinoma de mama em mulheres pós-menopáusicas e está associada a pior prognóstico. O objetivo deste estudo foi investigar a relação entre o perfil antropométrico (índice de massa corporal e razão cintura/quadril), frequência e quantidade calórica de consumo alimentar, perfil lipídico e glicemia de jejum com os níveis séricos de adipocinas (Adiponectina e PAI-1) e moléculas de adesão (ICAM-1 e VCAM-1) em uma coorte de mulheres em rastreamento mamográfico sem câncer de mama do Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). O NMPOA é um projeto de pesquisa público-privado financiado pela Associação Hospitalar Moinhos de Vento em parceria com a Secretaria Municipal de Saúde de Porto Alegre, que tem como objetivo reduzir em 20% a incidência de câncer de mama. Cento e quarenta e cinco mulheres sem câncer de mama participaram deste estudo. Todas foram submetidas à avaliação antropométrica, questionário alimentar e dosagens séricas de adipocinas e moléculas de adesão. Encontramos uma alta prevalência de fatores de risco, incluindo: 39,3% das mulheres com IMC superior a 30 kg/m2; 46,9% com hipertensão arterial; 14,5% com Diabetes Mellitus tipo 2; 31,7% com dislipidemia e 88,3% apresentaram razão cintura/quadril (RCQ) ≥ 0,8. Foi encontrada correlação linear entre os níveis séricos de PAI- 1 e triglicerídeos, entre níveis de séricos de PAI-1 e RCQ, e também correlação linear entre níveis séricos de VCAM-1 e IMC. Em resumo, a amostra de pacientes controle da coorte de prevenção de câncer de Mama do NMPA apresenta perfil de alto risco para doenças relacionadas à obesidade (76% excesso de peso) e níveis séricos dos biomarcadores (PAI-1 e VCAM-1) correlacionados com os indicadores de obesidade e sobrepeso (triglicerídeos, IMC e RCQ). / Obesity has been identified as a risk factor for developing of breast carcinoma in postmenopausal women and is associated with worse prognosis. The study aims to investigate the relationship between anthropometric profile (body mass index and waist/hip ratio), food intake frequency, lipid profile and fasting glycemia with serum levels of adipokines (Apn and PAI-1) and adhesion molecules (ICAM-1 and VCAM-1) in a cohort of women in mammographic screening without breast cancer from the Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). The NMPOA is a public-private research project funded by the Associação Hospitalar Moinhos de Vento in partnership with the Porto Alegre City Health Department, which aims to reduce by 20% the incidence of breast cancer. One hundred and forty-five women without breast cancer participated in this study. All underwent anthropometric assessment, dietary questionnaire and serum adipokines and adhesion molecules. We found a high prevalence of risk factors in our sample, including 39.3% of women with a BMI above 30 kg/m2; 46.9% had hypertension; 14.5% had type 2 diabetes mellitus, 31.7% had dyslipidemia and 88.3% of women had waist/hip ratio (WHR) an index ≥ 0,8. Linear correlation was found between serum of PAI-1 and triglycerides between levels of serum of PAI-1 and WHR and also linear correlation between serum of VCAM-1 and BMI. In short, the control sample of the NMPA breast cancer prevention cohort presents a high risk profile for obesity-related diseases (76% of overweight or obesity) and serum biomarcadores (PAI-1 e VCAM-1) correlated with indicators of obesity and overweight (triglycerides, BMI, WHR).

A obesidade tem sido apontada como fator de risco para desenvolvimento de carcinoma de mama em mulheres pós-menopáusicas e está associada a pior prognóstico. O objetivo deste estudo foi investigar a relação entre o perfil antropométrico (índice de massa corporal e razão cintura/quadril), frequência e quantidade calórica de consumo alimentar, perfil lipídico e glicemia de jejum com os níveis séricos de adipocinas (Adiponectina e PAI-1) e moléculas de adesão (ICAM-1 e VCAM-1) em uma coorte de mulheres em rastreamento mamográfico sem câncer de mama do Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). O NMPOA é um projeto de pesquisa público-privado financiado pela Associação Hospitalar Moinhos de Vento em parceria com a Secretaria Municipal de Saúde de Porto Alegre, que tem como objetivo reduzir em 20% a incidência de câncer de mama. Cento e quarenta e cinco mulheres sem câncer de mama participaram deste estudo. Todas foram submetidas à avaliação antropométrica, questionário alimentar e dosagens séricas de adipocinas e moléculas de adesão. Encontramos uma alta prevalência de fatores de risco, incluindo: 39,3% das mulheres com IMC superior a 30 kg/m2; 46,9% com hipertensão arterial; 14,5% com Diabetes Mellitus tipo 2; 31,7% com dislipidemia e 88,3% apresentaram razão cintura/quadril (RCQ) ≥ 0,8. Foi encontrada correlação linear entre os níveis séricos de PAI- 1 e triglicerídeos, entre níveis de séricos de PAI-1 e RCQ, e também correlação linear entre níveis séricos de VCAM-1 e IMC. Em resumo, a amostra de pacientes controle da coorte de prevenção de câncer de Mama do NMPA apresenta perfil de alto risco para doenças relacionadas à obesidade (76% excesso de peso) e níveis séricos dos biomarcadores (PAI-1 e VCAM-1) correlacionados com os indicadores de obesidade e sobrepeso (triglicerídeos, IMC e RCQ). / Obesity has been identified as a risk factor for developing of breast carcinoma in postmenopausal women and is associated with worse prognosis. The study aims to investigate the relationship between anthropometric profile (body mass index and waist/hip ratio), food intake frequency, lipid profile and fasting glycemia with serum levels of adipokines (Apn and PAI-1) and adhesion molecules (ICAM-1 and VCAM-1) in a cohort of women in mammographic screening without breast cancer from the Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). The NMPOA is a public-private research project funded by the Associação Hospitalar Moinhos de Vento in partnership with the Porto Alegre City Health Department, which aims to reduce by 20% the incidence of breast cancer. One hundred and forty-five women without breast cancer participated in this study. All underwent anthropometric assessment, dietary questionnaire and serum adipokines and adhesion molecules. We found a high prevalence of risk factors in our sample, including 39.3% of women with a BMI above 30 kg/m2; 46.9% had hypertension; 14.5% had type 2 diabetes mellitus, 31.7% had dyslipidemia and 88.3% of women had waist/hip ratio (WHR) an index ≥ 0,8. Linear correlation was found between serum of PAI-1 and triglycerides between levels of serum of PAI-1 and WHR and also linear correlation between serum of VCAM-1 and BMI. In short, the control sample of the NMPA breast cancer prevention cohort presents a high risk profile for obesity-related diseases (76% of overweight or obesity) and serum biomarcadores (PAI-1 e VCAM-1) correlated with indicators of obesity and overweight (triglycerides, BMI, WHR).