Depuis quelques décennies, le syndrome d'immunodéficience acquise a causé la mort de millions de personnes. La recherche des dernières années a permis de caractériser l'agent causal, le virus de l'immunodéficience humaine, d'identifier des cibles thérapeutiques ainsi que de développer des drogues permettant de contrôler la réplication de ce virus. Toutefois, nous constatons l'émergence de souches virales résistantes à un ou plusieurs des médicaments disponibles. De plus, bien qu'elle permette de bien contrôler la réplication du virus, la thérapie actuelle ne permet pas son éradication et il n'existe aucun vaccin efficace pour la prévention de l'infection. Le virus persiste ainsi dans certaines cellules infectées, lesquelles formeront un réservoir viral. Les monocytes représentent une population cellulaire favorable à la formation d'un tel réservoir viral. Leur dissémination et leur accumulation dans les ganglions lymphatiques constitueraient une étape critique dans la persistance du virus. Les mécanismes menant à la migration des monocytes vers les ganglions lymphatiques sont actuellement méconnus. Les travaux réalisés dans le cadre de cette thèse avaient pour objectif de mieux comprendre les évènements immunologiques et moléculaires contrôlant la migration des monocytes vers les ganglions lymphatiques. Dans un premier temps, nous avons démontré le rôle de la prostaglandine E[indice inférieur 2], une cytokine produite massivement au cours de l'infection, dans le contrôle de l'expression du récepteur de chimiokine CCR7 chez les monocytes. Ce récepteur est responsable de la migration des leucocytes vers les ganglions lymphatiques sous l'action chimiotactique des chimiokines CCL19 et CCL21. Nous avons démontré qu'une exposition des monocytes à la prostaglandine E[indice inférieur 2] entraînait une augmentation de leur migration vers ces chimiokines. Nous avons caractérisé les voies de signalisation intracellulaire activées par la prostaglandine E[indice inférieur 2] menant à l'expression de CCR7 chez les monocytes. Nous avons ainsi établi que la synthèse d'AMPc résultant de l'activation des récepteurs EP[indice inférieur 2] et EP[indice inférieur 4] entraînait l'expression de CCR7 chez les monocytes. Nous avons ensuite démontré l'implication des kinases PKA, ERK et p38 dans ce processus. Dans un second temps, nous avons vérifié l'effet de l'infection par le virus de l'immunodéficience humaine sur l'expression et la fonctionnalité du récepteur CCR7 chez les monocytes exposés à la prostaglandine E[indice inférieur 2]. Notre modèle expérimental démontre que l'exposition des monocytes au virus de l'immunodéficience humaine diminue le niveau de surface ainsi que la fonctionnalité du récepteur CCR7. Toutefois, la prostaglandine E[indice inférieur 2] augmente l'expression de CCR7 à la surface des monocytes exposés au virus, ce qui résulte en une augmentation de la sensibilité des monocytes pour la chimiokine CCL19. Nos résultats suggèrent que lors de la transmission mucosale du virus de l'immunodéficience humaine, l'exposition des monocytes au virus ainsi qu'à la prostaglandine E[indice inférieur 2] pourrait favoriser la dissémination du virus vers les ganglions lymphatiques. Une meilleure compréhension de la pathogenèse du virus ainsi que des mécanismes menant à la dissémination virale pourrait conduire à l'amélioration de l'approche thérapeutique actuelle.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

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Les analgésiques tel que le paracétamol, ou acétaminophène (ACE), et les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) comme l’aspirine et l’ibuprofène, sont largement utilisés dans le monde pour soulager douleur, fièvre ou inflammation. Ces médicaments, vendus sans ordonnance et souvent pris en automédication, sont de plus en plus utilisés par les femmes enceintes depuis les années 1990, notamment aux États-Unis et en Europe. De nombreuses études de cohorte ont mis en avant l’association entre la prise de ces molécules par les femmes durant le premier et deuxième trimestre de grossesse, et l’apparition de malformations congénitales des organes reproducteurs des garçons nouveau-nés, comme la cryptorchidie ou l’hypospadias. Ces analgésiques inhibent l’activité enzymatique des cyclooxygénases (Cox), qui catalysent l’étape clef de la voie de biosynthèse des prostaglandines (PGs), dont la prostaglandine D2 (PGD2), impliquée dans la détermination sexuelle des lignées somatique et germinale de la gonade mâle chez la souris. Afin d’étudier si la gonade embryonnaire peut constituer une cible de ces molécules, l’objectif principal de cette thèse a été d’analyser l’impact de l’exposition in utero à l’ACE, l’aspirine et l’ibuprofène seuls ou en combinaison, pendant la période de détermination sexuelle (de 10,5 à 13,5 jours post coitum (jpc) chez la souris). Des doses « thérapeutiques » similaires à celles utilisées chez l’Homme ont été administrées par voie orale. Mon travail a permis de démontrer que l’exposition in utero à la combinaison des deux drogues ACE et ibuprofène induisait, dans le testicule embryonnaire, une accélération de la différenciation de la lignée germinale du testicule embryonnaire, précurseurs des gamètes à l’âge adulte, par le biais d’une reprogrammation épigénétique avancée, ainsi qu’une augmentation du stockage du glycogène dans les cordons testiculaires, via l’activation de l’expression des gènes de la matrice extracellulaire. De plus, ce projet a permis d’identifier pour la première fois le profil d’expression des prostaglandines dans le testicule embryonnaire de souris. Dans un deuxième temps, l’impact de l’exposition in utero à ces drogues sur la stéroïdogenèse a été étudié, en parallèle avec l’étude sur le rôle de la PGD2 dans les cellules stéroïdogènes (cellules de Leydig) dans le testicule fœtal de souris à 17,5 jpc. Ces résultats pourraient conduire à modifier l’utilisation de ces médicaments chez la femme, au cours des deux premiers trimestres de grossesse. / Mild analgesics such as paracetamol, or acetaminophen (ACE), and nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) such as aspirin and ibuprofen, are widely used worldwide for relieving pain, fever or inflammation. These over-the-counter drugs are often taken as self-medication, and are increasingly used by pregnant women since the 1990s, particularly in the United States and Europe. Many cohort studies have highlighted the association between intake of these molecules by women during the first and second trimester of pregnancy, and the occurrence of birth defects of the reproductive organs of newborn boys, such as cryptorchidism or hypospadias. These analgesics inhibit the enzymatic activity of cyclooxygenases (Cox), which catalyze key step in the biosynthetic pathway of prostaglandins (PGs), whose prostaglandin D2 (PGD2), involved in the male sex determination of both somatic and germinal lineages in mice. To investigate whether the embryonic gonad can be a target of these molecules, the main objective of this thesis was to analyze the impact of in utero exposure to ACE, aspirin and ibuprofen alone or in combination, during the period of sex determination (10.5 to 13.5 days post coitum (dpc) in mice). "Therapeutic" doses similar to those used in humans were orally administered. My work has shown that in utero exposure to the combination of both ACE and ibuprofen drugs induced acceleration of the differentiation of the embryonic testis germline, the precursors of gametes in adulthood, through an advanced epigenetic reprogramming, and an increase of glycogen storage in the testicular cords, via activation of extracellular matrix gene expression. In addition, this project has identified for the first time the profile of prostaglandins expression in mouse embryonic testis. Secondly, the impact of in utero exposure to these drugs on steroidogenesis was evaluated, in parallel with the study on the role of PGD2 in steroidogenic cells (Leydig cells) in mouse fetal 17.5 dpc testis. These results could lead to change the use of these drugs in women, during the first two trimesters of pregnancy.

Reproduction de : Thèse de doctorat : Qualité et sécurité des aliments : Toulouse, INPT : 2004. / Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. 174 réf.

Résumé: La prostaglandine D? (PGD?) est un médiateur lipidique qui active directement deux récepteurs spécifiques, DP et CRTH2, régulant ainsi des processus inflammatoires, immunitaires et apoptotiques. Les ostéoclastes (OC) sont de larges cellules multinucléées participant au métabolisme et remodelage de l’os, ainsi qu’à la réparation de fracture osseuse. Nos travaux ont mis en évidence l’expression des récepteurs DP et CRTH2 chez des OCs humains. Cependant, les effets de la PGD? sur l’apoptose des OCs sont inconnus. L’objectif de la présente étude a été de déterminer si la PGD? induit l’apoptose et les mécanismes qui en découlent dans les OC humains. Les OCs humains différenciés ont été traités avec la PGD?, les agonistes et antagonistes de ses récepteurs. Le traitement des OCs avec la PGD?, en présence de naproxène, qui permet d’inhiber la production endogène de prostaglandines, augmente de façon dépendante de la dose et en fonction du temps le pourcentage d'OCs apoptotiques. Ceci a également été observé lors du traitement des OCs avec l’agoniste spécifique DK-PGD? du récepteur CRTH2, mais pas avec le traitement du composé BW 245C, antagoniste du récepteur DP. En absence de naproxène, l’antagoniste CAY10471 du récepteur CRTH2 réduit le taux d’apoptose des OCs tandis que le composé BW A868C, antagoniste du récepteur DP, n'a aucun effet. L'apoptose des OCs par la PGD? via CRTH2 est associée à l’activation de la caspase-9, et non pas la caspase-8, ce qui entraîne le clivage de la caspase-3. Afin de déterminer plus précisément les mécanismes menant à ces résultats, les OCs ont été traités avec les inhibiteurs de MEK-1/2, PI3K et IKK2/NF-?B. Le traitement des OCs avec la PGD? et l’agoniste de CRTH2 diminue la phosphorylation des protéines ERK1/2 et Akt, tandis que la phosphorylation de ?-arrestine-1 est augmentée. Par ailleurs, les niveaux de phosphorylation d'ERK1/2 et Akt ont été augmentés alors que le taux de protéines ?-arrestine-1 phosphorylees a été diminué par l’antagoniste de CRTH2. En outre, le traitement des OCs avec l’inhibiteur de MEK-1/2 augmente l’apoptose des OCs induite par PGD? et l’agoniste de CRTH2. Cependant, l’antagoniste de CRTH2 diminue l'activité de la caspase-3 induite par l’inhibiteur de MEK1/2. Le traitement des OCs avec l’inhibiteur de la PI3K diminue la phosphorylation d’ERK l/2, tandis que la phosphorylation d'ERK1/2 augmentée par l’antagoniste de CRTH2 a été atténuée par l’inhibiteur de PI3K. Les agonistes et antagonistes du récepteurs DP n'ont pas d’effet sur la phosphorylation d'ERK1/2, Akt, ?-arrestine-1 ni sur l’activité de la caspase-3 chez les OCs. Le traitement des OCs avec PGD? et les ligands de ses récepteurs ne modifie pas la phosphorylation de Re1A/p65. De plus, l’activité de la caspase-3 n'est pas altérée dans les OCs traités avec l’inhibiteur d’IKK2. En conclusion, PGD?, en se liant à CRTH2, induit l’apoptose des OCs via la voie apoptotique intrinsèque qui est associée à la régulation des voies de signalisation des protéines ?-arrestine-1, ERK1/2, et Akt, mais pas celle du IKK2/NF-?B. // Abstract: Prostaglandin D2 (PGD2) is a lipid mediator that directly activates two specific receptors, DP and CRTH2, thereby regulating inflammation, immune response and apoptosis. Osteoclasts (OCs) are large multinucleated cells that participate in bone metabolism, remodeling, and fracture repair. Our previous data show the expression of DP and CRTH2 in human OCs. However, it is unknown whether PGD2 affects OC apoptosis. The objective of the thesis was to determine whether PGD2 induces human OC apoptosis and the underlying mechanisms implicated in this effect. The differentiated human OCs were treated with PGD2, and its receptors agonists/antagonists. Treatment with PGD2 in the presence of naproxen to inhibit endogenous prostaglandins production increased OC apoptosis in a dose- and time-dependent manner, as did the specific CRTH2 agonist compound DK-PGD2 but not the DP agonist compound 13W 245C. In the absence of naproxen, the CRTH2 antagonist compound CAY 10471 reduced OC apoptosis whereas the DP antagonist BW A868C had no such effect. PGD2/CRTH2-induced OC apoptosis was associated with the activation of caspase-9 (an intrinsic apoptosis pathway-initiator caspase), but not caspase-8 (an extrinsic apoptosis pathway-initiator caspase), leading to caspase-3 cleavage. To further determine the mechanisms underlying these findings, human OCs were treated with the inhibitors of MEK-1/2, P13K and IKK2/NF-KB. Treatments with PGD2 and a CRTH2 agonist decreased ERKI/2 and Akt phosphorylation, whereas both treatments increased 13-arrestin- I phosphorylation. Both ERK1/2 and Akt phosphorylation were augmented, whereas the phosphorylated 13-arrestin-1 was reduced by a CRTH2 antagonist. Furthermore, treatment of OCs with a MEK-1/2 inhibitor increased OC apoptosis induced by PGD2 and by a CRTH2 agonist. However, a CRTH2 antagonist diminished the MEK- I /2 inhibitor-induced increase in caspase-3 activity. In addition, treatment of OCs with a PI3K inhibitor decreased ERK I /2 phosphorylation, whereas increased ERK1/2 phosphorylation by CRTH2 antagonist was attenuated by a P13K inhibitor. Both DP receptor agonist and antagonist did not affect either Akt, ERK1/2, 13-arrestin-1 phosphorylation or a specific MEK-1/2 inhibitor-induced increase in caspase-3 activity in OCs. Treatment of OCs with PGD2 and its receptor ligands did not alter ReIA/p65 phosphorylation (ser536). Moreover, the caspase-3 activity was not altered in OCs treated with an IKK2/NF-KB inhibitor. In summary, PGD2 induces human OC apoptosis through a CRTH2-dependent intrinsic apoptosis pathway, which is associated with regulation of the 13-affestin-1, ERK1/2, and Akt, but not with 1KK2/NF-KB, signaling pathways. [symboles non conformes]

Les prostaglandines sont de petites molécules qui jouent d'importants rôles immunomodulateurs au niveau du système immunitaire. Elles contribuent notamment à l'établissement de l'inflammation et à la résolution de celle-ci. La prostaglandine J 2 (15d-PGJ2 ) est d'ailleurs l'une des prostaglandines les plus étudiées en vertu de ses activités anti-inflammatoires. En effet, il a été démontré que celle-ci peut inhiber plusieurs molécules dont plusieurs cytokines et le facteur de transcription NF-?B. D'un autre côté, l'effet de la 15d-PGJ 2 sur l'interleukine-13 (IL-13) est encore inconnu à ce jour. L'IL-13 est une cytokine produite principalement par les cellules T et qui module plusieurs types de cellules immunitaires, tant au niveau de leur différentiation que de leur activation. De plus, cette cytokine contribue à l'établissement de certaines pathologies telles que l'asthme et la colite ulcéreuse lorsqu'elle est surexprimée. L'objectif principal de ce mémoire est de vérifier l'effet de la 15d-PGJ 2 sur l'expression et la production de l'IL-13 par les cellules T. Les résultats obtenus dans ce projet démontrent que la I 5d-PGJ2 inhibe la production de l'IL-13 par les cellules T. En effet, autant la lignée cellulaire de lymphocytes T CD4+ Jurkat E6.1 que les cellules mononucléaires circulant dans le sang (de l'anglais PBMCs ) stimulés par des agents mimant l'activation des cellules T tels que le PMA et la ionomycine, puis traités à la 15d-PGJ 2 ont montré une inhibition dans l'expression et la production de l'IL-13. Les résultats ont également révélé un effet similaire lorsque les cellules étaient pré-traitées à I 5d-PGJ2 , puis stimulées avec PMA/ionomycine. Par ailleurs, plusieurs éléments sont essentiels pour activer la transcription de l'IL-13, dont le facteur de transcription NF-?B. D'un autre côté, il est connu que la 15d-PGJ2 inhibe la cascade de signalisation de NF-?B. Ainsi, nous avons voulu vérifier si NF-?B était impliqué dans le mécanisme d'inhibition de l'IL-13 par la 15d-PGJ2 . Pour ce faire, des extraits nucléaires ont été réalisés avec les Jurkat E6.1 et les PBMCs traitées à la 15dPGJ2 puis un essai de retard sur gel (de l'anglais EMSA, Electromobility shift assay ) a été fait avec une sonde NF-?B consensus ou une sonde d'un site de liaison putatif de NF-?B dans le promoteur IL-13. Les résultats ont révélé que le facteur de transcription NF-?B était effectivement activé lors de la transcription de l'IL-13 et inhibé lors d'un traitement à la 15d-PGJ 2 . Par la suite, puisqu'il a déjà été démontré que la 15d-PGJ2 active le récepteur nucléaire PPAR-?, nous avons voulu vérifier si le mécanisme d'inhibition de l'IL-13 dépendait ou non de ce dernier. Un antagoniste irréversible de PPAR-? a donc été utilisé dans les expériences, et l'essai a permis d'établir que le mécanisme d'inhibition de l'IL-13 parla 15d-PGJ 2 était indépendant de PPAR-?. Finalement, ces résultats dévoilent que la 15d-PGJ 2 inhibe l'expression et la production de l'IL-13, que cet effet serait indépendant de PPAR-?, et qu'il impliquerait probablement une inhibition du facteur de transcription NF-xB. Ces résultats pourraient avoir des implications cliniques où l'IL-13 joue un rôle d'importance, tels que l'asthme et la colite ulcéreuse. L'utilisation de cette prostaglandine en combinaison avec les traitements habituels, par exemple les corticostéroïdes, pourrait être envisagée.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-27Bitstream added on 2014-06-13T20:50:58Z : No. of bitstreams: 1 motta_fr_me_jabo.pdf: 324398 bytes, checksum: 0a58132feb5b43d46206a69734b439dc (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Pensando na contribuição ao estudo da oncologia humana e no aumento da sobrevida de cadelas com câncer de mama o objetivo deste trabalho foi de investigar a imunorreatividade da prostaglandina E2 (PGE2) no diagnóstico e prognóstico das neoplasias mamárias. O estudo foi realizado com 60 amostras de neoplasias de mama de cadelas que foram atendidas nos anos de 2002 a 2004. Este material foi dividido em seis grupos de 10 amostras. Nos grupos adenoma, carcinoma com prognóstico bom e carcinoma com prognóstico ruim a seleção dos casos se deu pela classificação histológica e evolução clínica do tumor. Os outros 30 tumores foram representados por 10 amostras de carcinoma primário metastático, 10 amostras de metástase pulmonar e 10 de carcinoma inflamatório. O Grupo Controle tinha 5 amostras de tecido mamário sem alterações patológicas. A avaliação da imunorreatividade da PGE2 foi realizada através do exame imunoistoquímico, utilizando o anticorpo primário anti- PGE2 , clone PG 31, Oxford Biomedical Research. Avaliou-se também a incidência das neoplasias mamárias relacionadas à idade dos animais, o estadiamento clínico de acordo com a classificação histopatológica do tumor e a sobrevida dos animais que foram submetidos à cirurgia. O número de células imunomarcadas pelo anticorpo não apresentou variação significativa e não houve diferença estatística (P = 0,239) entre os grupos (adenoma, carcinoma com prognóstico bom, carcinoma com prognóstico ruim, carcinoma primário metastático, metástase pulmonar e carcinoma inflamatório), no grupo controle observou-se uma diferença estatística (P < 0,014) com relação aos demais grupos. / Considering the contribution to researches in human oncology and the increasing surveillance of bitches with mammary neoplasm, the main purpose of this paper was to investigate the immunoreactivity of prostaglandine E2 (PGE2) in the diagnosis and prognosis of mammary neoplasm. The research was performed in 60 samples of mammary neoplasm in bitches attempted between 2002 and 2004. The material was separated into six groups of 10 samples each. In the group consisting of adenoma, carcinoma with good prognosis and carcinoma with poor prognosis, the cases were chosen according to the histological grade and clinical behavior of the tumor. The other 30 tumours consisted of 10 samples of primary metastatic carcinoma, 10 samples of pulmonary metastasis and 10 samples of inflammatory carcinoma. The control group consisted in 5 samples of mammary tissue without pathological changes. The immunoreactivity of PGE2 was evaluated by immunohistochemistry, using the primary antibody anti-PGE2, clone PG31, Oxford Biomedical Research. The incidence of mammary neoplasm was also analyzed according to the age of animals, clinical stage following the histopathologic grade of tumor and surveillance of bitches that underwent surgery. The number of positive cells for the antibody did not showed a significant range and there was no statistical difference (P = 0,239) between the groups (adenoma, carcinoma with good prognosis, carcinoma with poor prognosis, primary metastatic carcinoma, pulmonary metastasis and inflammatory carcinoma), regarding the control group it was observed a statistical difference (p < 0,014) when compared to other groups.