FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A leucemia linfocÃtica crÃnica (LLC) à a leucemia mais freqÃente nos paÃses ocidentais, ocorrendo em cerca de 30% de todas as leucemias do adulto, acometendo principalmente a populaÃÃo acima de 65 anos de idade. à caracterizada pela proliferaÃÃo clonal de linfÃcitos tipo B CD5 positivos. Do ponto de vista epidemiolÃgico, raramente à vista entre os orientais e a sua incidÃncia nÃo sofre influÃncia de agentes ambientais como substÃncias tÃxicas ou radiaÃÃes ionizantes. Os pacientes com LLC podem apresentar evoluÃÃo clÃnica variÃvel desde indolente a forma mais agressiva e rapidamente fatal. Na Ãltima dÃcada, houve um grande avanÃo no conhecimento da fisiopatologia desta doenÃa e fatores de prognÃstico de maior impacto foram estabelecidos e, do ponto de vista terapÃutico, novos medicamentos com maior eficÃcia surgiram. Desta forma à interessante conhecer a real situaÃÃo desta doenÃa com caracterÃsticas epidemiolÃgicas, clÃnicas e de prognÃstico muito peculiares. Nesse trabalho traÃamos o perfil (demogrÃfico, clÃnico e laboratorial) dos pacientes com LLC atendidos no serviÃo de Hematologia e Hemoterapia do Cearà (HEMOCE) do HUWC, correlacionando a expressÃo dos marcadores de prognÃstico (CD38 e ZAP-70) com algumas variÃveis e com o tratamento farmacolÃgico. Foram utilizadas amostras de sangue de 55 pacientes com LLC confirmados atravÃs de imunofenotipagem, em tratamento ou nÃo. Os marcadores CD38 e ZAP-70 foram analisados por citometria de fluxo e a dosagem de β2-microglobulina obtida atravÃs de mÃtodo imunoenzimÃtico (ELISA). Os dados obtidos foram analisados atravÃs de programa estatÃstico. Observamos um leve predomÃnio de pacientes do sexo masculino (1,4:1), 78% acima de 65 anos de idade e 60% eram procedentes da capital. Quanto ao estadiamento, 50,9% pacientes foram classificados como de baixo risco, segundo classificaÃÃo de Rai. Quanto a evoluÃÃo clÃnica, mais de 30% dos pacientes nÃo apresentavam sinais clÃnicos, nem no momento do diagnÃstico nem no final do estudo. Em relaÃÃo aos marcadores, 22,2% dos pacientes apresentavam expressÃo do ZAP-70 e 24,13% do CD38. NÃo houve diferenÃa estatÃsticamente significante entre os marcadores ZAP-70 e CD38 e as variÃveis hematolÃgicas (Hb, Ht e Plaquetas). Houve correlaÃÃo entre o estadiamento clÃnico de Rai e o tratamento farmacolÃgico e com os marcadores de prognÃstico (ZAP-70 e CD38). O perfil foi caracterizado por pacientes em estÃgios clÃnicos, segundo Rai, de baixo risco, com ausÃncia da expressÃo dos marcadores de prognÃstico (ZAP-70 e CD38) e com ausÃncia de tratamento especÃfico. / Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) is the most frequent leukemia on western countries, responding for 30% off all leukemia cases, reaching, specially, the under 65 years old population. It is characterized by accumulation of neoplasic mature B lymphocytes positives CD5. Concerning epidemiology, it is barely seen among eastern people, and its incidence is not influenced by environmental agents, such as toxic substances or ionizing radiation. CLL-B patients may present a variable clinical evolution, which goes from indolent to aggressive and rapidly fast cases. On last decade, there have been great advance on biology knowledge of this disease, and greater impact prognostic factors have been established. In relation to treatment, new medication, with better efficacy, appeared. Therefore, it is interesting to know the real situation of this disease, which has singular epidemiological, clinical and prognostic characteristics. In this work we trace the demographical, clinical and laboratorial profile of patients with CLL-B, at a state hemocenter (HEMOCE). We correlate prognostic markers expression (CD38 e ZAP-70) with some variable and with pharmacological treatment. We used 55 blood samples from patients CLL-B confirmed by their immunophenotypes; these patients may or may not be in treatment. CD38 and ZAP-70 were analyzed by flow cytometry and β2-microglobulin dosage, obtained through ELISA. Results were treated by statistic program. We see a discrete prevalence of male patients (1,4:1), 78% are under 65 years old and 60% live at CearÃâs capital. In relation to Rai staging system, 50,9% were classified as low risk patients. Concerning clinical evolution, more than 30% of the patients did not show clinical signs, neither at diagnose moment nor at the end of this study. In relation to the markers, 22,2% of the patients show ZAP-70 expression, and 24,13% show CD38 expression. There was no significant statistic difference between ZAP-70 and CD38 markers and hematological variable (Hb, Ht and platelets). There was correlation between Raiâs staging and pharmacological treatment and with prognostic markers. CONCLUSION: The profile was characterized by low risk patients, according Raiâs staging, it lacks prognostic markers expression and it also lacks specific treatment.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Objetivou-se com o presente estudo caracterizar as fraÃÃes de carboidratos e proteÃna e estimar o valor energÃtico e a digestibilidade intestinal da proteÃna nÃo-degradada no rÃmen de alimentos por intermÃdio da tÃcnica de trÃs estÃgios da algaroba (Prosopis juliflora), da canafÃstula (Pithecellobium multiflorum), da flor-de-seda (Calotropis procera), da jitirana (Ipomea sp.), do juazeiro (Zizyphus joazeiro), do mata-pasto (Senna obtusifolia), do sabià (Mimosa caesalpiniaefolia), da palma gigante (Opuntia fÃcus indica) e do xique-xique (Cereus gounellei) e dos subprodutos do abacaxi (Ananas comosus), da acerola (Malpighia emarginata), do caju (Anacardium occidentale), do coco (Cocos nucifera), do melÃo (Cucumis melo), do maracujà (Passiflora eduli), da uva (Vitis labrusca) e do urucum (Bixa orellana). Para obtenÃÃo do fracionamento dos carboidratos, de acordo com o sistema CNCPS, foram calculados os carboidratos totais, as suas fraÃÃes B2, C e os componentes solÃveis em detergente neutro. Foram determinadas as fraÃÃes potencialmente degradÃvel (B2) e nÃo-degradÃvel (C) da fibra em detergente neutro, corrigida para cinzas e proteÃna. Para determinaÃÃo das fraÃÃes nitrogenadas, foram analisados os compostos nitrogenados nÃo-protÃicos, nitrogÃnio solÃvel e insolÃvel em tampÃo borato-fosfato e nitrogÃnio protÃico insolÃvel em detergente neutro e em detergente Ãcido. Para a estimaÃÃo dos Nutrientes DigestÃveis Totais (NDT) foram utilizadas as equaÃÃes propostas pelo NRC (2001). Para a determinaÃÃo da digestibilidade intestinal da proteÃna nÃo-degradada no rÃmen, os alimentos foram inicialmente incubados no rÃmen de fÃmea bovina fistulada, por 16 horas para determinaÃÃo da ProteÃna nÃo-degradada no rÃmen (PNDR), sendo o resÃduo submetido à digestÃo com soluÃÃo de pepsina durante 1 hora, e soluÃÃo de pancreatina a 38ÂC durante 24 horas, cujos resÃduos foram analisados para nitrogÃnio total. Acerola e melÃo apresentaram substancial conteÃdo nitrogenado na fraÃÃo C o que reduziria a disponibilidade de N tanto para microrganismos do rÃmen quanto para o hospedeiro. As forrageiras estudadas apresentaram maiores proporÃÃes do nitrogÃnio nas fraÃÃes A e B2, consequentemente disponibilizando nitrogÃnio para bactÃrias fermentadoras de carboidratos fibrosos. O percentual de fraÃÃo C na acerola e no melÃo em detrimento da fraÃÃo B2 acarretaria maior efeito de repleÃÃo ruminal e diminuiÃÃo da disponibilidade energÃtica, por sua caracterÃstica de indigestibilidade ao longo do trato gastrointestinal, quando submetidos a ensaios de alimentaÃÃo para animais. Nas forrageiras nativas e nas adaptadas ao clima da regiÃo Nordeste foram observados valores de fraÃÃo A + B1 de 35,26 a 73,37%, para fraÃÃo B2, de 3,87% a 28,45% e para fraÃÃo C de 17,34 e 40,63%. As fraÃÃes A, B1, B2, B3 e C dos compostos nitrogenados apresentaram variaÃÃo de 9,84 a 42,33 %; 1,58 a 11,47%; 48,63 a 80,10%; 0,70 a 6,13% e 0,43 a 2,86%, respectivamente. As fraÃÃes de carboidratos dos subprodutos analisados variaram de 19,35 a 58,52%; 9,95 a 61,44% e 15,35 a 70,06 para A+B1, B2 e C, respectivamente; enquanto para os compostos nitrogenados variaram de 5,01 a 33,02%; 1,69 a 15,23%; 2,26 a 75,60%; 1,53 a 40,26% e 0,08 a 43,84% para fraÃÃes A, B1 B2, B3 e C, respectivamente. O NDT estimado das forrageiras variou de 48,30 a 65,42%, enquanto o dos subprodutos variou de 31,41 a 128,90%. A estimativa da PNDR das forragens variou de 13,37 a 83,6%, e dos subprodutos variou de 39,14 a 89,06%. A digestibilidade intestinal da PNDR das forragens variou de 26,09 a 80,68%, enquanto para os subprodutos variou de 22,26 a 76,82%. O sabià foi a forrageira que apresentou a maior DI e o maior teor de PNDRd, e a flor-de-seda os menores valores; enquanto para os subprodutos, o melÃo apresentou o maior valor para DI, entretanto o caju forneceu maior teor de PNDRd, enquanto o coco apresentou os mais baixos valores para DI e PNDRd / The objective of this research was to characterize the protein and carbohydrate fractions,estimate energy values and evaluate the intestinal digestibility protein of algaroba (Prosopis juliflora), canafÃstula (Pithecellobium multiflorum), flor-de-seda (Calotropis procera), jitirana (Ipomea sp.), juazeiro (Ziziphus joazeiro), mata-pasto (Senna obtusifolia) and sabià (Mimosa caesalpiniaefolia Benth), palma gigante (Opuntia ficus indica) and xique-xique (Cereus gounellei) and the agroindustry byproducts from pineapple (Ananas comosus L.), barbados cherry (Malpighia emarginata), cashew (Anacardium occidentale), coconut (Cocos nucifera L.), melon (Cucumis melo), passion fruit (Passiflora eduli), grape (Vitis labrusca) and anatto seeds (Bixa orellana L.). To obtain the carbohydrates fractions, according with Cornell Net Carbohydrate and Protein System (CNCPS) system, were calculated the total carbohydrates, their fractions B2, C and the soluble components in neutral detergent. It was determinated the potentially degradable (B2) and undegradable (C)fractions of the neutral detergent fiber, corrected for ashes and protein. The non-protein nitrogenous compounds, soluble and insoluble nitrogen in borate-phosphate buffer, nitrogenous protein insoluble in neutral and acid detergent were analyzed for the determination of the nitrogen fractions. To estimate Total Digestible Nutrients (TDN) had been used the equations proposals by National Research Council - NRC (2001). The feeds were incubated in rumen during 16 hours to determine the rumen-undegradable protein (RUDP), then the residue was incubated with pepsin solution during 1 hour, and pancreatic solution during 24 hours at 38ÂC, whose residues were analyzed for total nitrogen. The Malpighia emarginata and Cucumis melo showed substantial nitrogen content in fraction C which would reduce the disponibility of nitrogen for the rumen microorganisms and its host. The evaluated forages showed higher proportions of nitrogen in fractions A and B2, providing nitrogen for the rumen microorganisms. The percentage of fraction C in Malpighia emarginata and Cucumis melo at the expense of the B2 fraction would entail greater effect of ruminal fill and decreased availability of energy, for its characteristic of indigestibility along the gastrointestinal tract, when being tested for feeding animals. In the evaluated forages had been observed values of A+B1 fraction from 35.26 to 73.37%, for B2 fraction, from 3.87% to 28.45% and for C fraction from 17.34 to 40.63%. The fractions, A, B1, B2, B3 and C of nitrogenous compounds had presented variation from 9.84 to 42.33%; 1.58 to 11.47%; 48.63 to 80.10%; 0.70 to 6.13% and 0.43 to 2.86%, respectively. The byproducts carbohydrate fractions analyzed varied from 19.35 to 58.52%; 9.95 to 61.44% and 15.35 to 70.06, for A+B1, B2 and C, respectively. In turn, the nitrogenous compounds varied from 5.01 to 33.02%; from 1.69 to 15.23%; from 2.26 to 75.60%; from 1.53 to 40.26% and from 0.08 to 43.84% for fractions, A, B1 B2, B3 and C, respectively. The forages TDN values varied from 48.30 to 65.42%, while of by-products it varied from 31.41 to 128.9%. The estimate of RUDP in the forages ranged from 13.37% to 83.6%, and the byproducts RUDP ranged from 39,14 to 89.06%. The intestinal digestion of RUDP ranged from 26.09 to 80.68%, %, while for byproducts varied of 22,26 76.82%. The Mimosa caesalpiniaefolia Benth was the forage that presented better ID and better RUDPd, and the Calotropis procera, presented lowest values for these variables. For byproducts, the Cucumis melo presented the biggest value for DI, while the Cocos nucifera L. presented the lowest values for DI and RUDPd

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As lectinas constituem ferramentas biotecnolÃgicas de fundamental importÃncia em estudos histoquÃmicos e citoquÃmicos para a detecÃÃo de glicoconjugados nos tecidos. Entre estas aplicaÃÃes, destacam-se a identificaÃÃo de receptores de membrana e a detecÃÃo de estruturas caracterÃsticas de neoplasias. A Frutalina, uma lectina -D-galactose-ligante encontrada em sementes de Artocarpus incisa, jà foi utilizada na detecÃÃo histoquÃmica de lesÃes malignas de mama e tireÃide. No presente trabalho foi realizada a clonagem e expressÃo do gene da frutalina em cÃlulas de Escherichia coli Origami (DE3) e foi determinada a estrutura tridimensional dessa proteÃna atravÃs da modelagem por homologia. A clonagem do gene da frutalina foi realizada a partir do produto amplificado da RT-PCR de sementes em diferentes estÃgios de maturaÃÃo dos frutos de A. incisa. Foram obtidos 12 clones, dos quais 5 foram seqÃenciados. A lectina recombinante foi expressa como cadeia Ãnica, formada pela cadeia beta com 20 resÃduos, ligada a um peptÃdeo de ligaÃÃo com quatro resÃduos, e a cadeia alfa com 133 resÃduos. A expressÃo da lectina foi indicada pelo aparecimento de uma banda protÃica com massa molecular aparente de 19,2 kDa, superior a da lectina nativa (15 kDa), apÃs a induÃÃo com IPTG 1mM. A lectina recombinante foi mantida exclusivamente em corpos de inclusÃo e foi reconhecida imunologicamente por anticorpos policlonais anti-Frutalina. Os modelos gerados para os clones obtidos indicam que as mutaÃÃes ocorridas nÃo alteram os sÃtios de ligaÃÃo a carboidratos das molÃculas. As mutaÃÃes nos clones obtidos sugerem a ocorrÃncia de isoformas dessa proteÃna. / The lectins constitute biotechnological tools of fundamental importance in hystochemical and cytochemical studies for the detection of tissue glycoconjugates. Among their applications are the identification of membrane receptors and the detection of neoplastic characteristic structures. Frutalin, an -D-galactose-binding lectin from Artocarpus incise seeds, has already been used in the hystochemical detection of thyreoid and breast neoplasia. In this work was made a study of the cloning and expression of the frutalin gene in Escherichia coli Origami (DE3) cells and was determined the three-dimensional structure of this protein through homology modeling. The frutalin gene cloning was accomplished from the product on RT-PCR with seeds in distinct stages of development of the Artocarpus incisa fruits. Twelve clones were obtained, from which five were sequenced. The frutalin gene was expressed in E. coli using the pET15b expression vector. A recombinant lectin (rFrutalin) was expressed by growing the bacteria in the presence of isopropyl -D-thiogalactopyranoside 1mM. All the recombinant lectin was found in an insoluble aggregated form as inclusion bodies. The recombinant lectin had a higher molecular mass (19,2 kDa) than the native lectin (15 kDa) as estimated by SDS-PAGE and Western blot analyses, showing that the recombinant single chain Frutalin is not processed in E. coli cells. The models generated for the clones obtained indicate that the mutations do not change the molecules active sites. Mutations in the clones obtained suggest the occurrence of isoforms of this protein.

O gastrÃpode marinho Aplysia dactylomela à conhecido por liberar uma tinta pÃrpura sempre que à importunado. Como nÃo possui nenhuma estrutura externa de proteÃÃo, acredita-se que essa secreÃÃo, rica em substÃncias biologicamente ativas, participe da defesa quÃmica do animal. A tinta à composta de pigmentos, proteÃnas e substÃncias de baixa massa molecular. Os pigmentos da tinta sÃo originados de algas vermelhas, mas quanto Ãs proteÃnas, pouco à conhecido sobre a sua origem, processamento, local de armazenamento e funÃÃo no animal. Este trabalho descreve pela primeira vez a composiÃÃo protÃica da tinta e apresenta algumas caracterÃsticas fÃsico-quÃmicas e biolÃgicas da dactylomelina-P, uma proteÃna antibacteriana presente na tinta dessa lesma, alÃm de trazer informaÃÃes acerca da localizaÃÃo desta proteÃna na glÃndula de tinta. A tinta foi obtida a partir de espÃcimes encontrados na praia de Fleixeiras, Ce. A composiÃÃo de proteÃnas da tinta foi determinada por eletroforese bidimensional e a purificaÃÃo da dactylomelina-P foi feita atravÃs de cromatografias de troca iÃnica e interaÃÃo hidrofÃbica. Dactylomelina-P foi analisada quanto à massa molecular, ponto isoelÃtrico, composiÃÃo de aminoÃcidos, presenÃa de carboidratos, estabilidade tÃrmica, resistÃncia ao pH e a proteases. VÃrias atividades biolÃgicas foram testadas com a tinta e com a dactylomelina-P, incluindo atividades antimicrobianas, enzimÃticas, hemaglutinante, anticoagulante, hemolÃtica, citotÃxica e tÃxica. Os ensaios de localizaÃÃo da proteÃna foram realizados em diferentes tecidos da lesma por western blot na glÃndula de tinta por imunohistoquÃmica e a interaÃÃo com a bactÃria Staphylococcus foi feita por imunocitoquÃmica. A tinta de A. dactylomela contÃm mais de 40 proteÃnas/ peptÃdeos, com massas abaixo de 70 kDa e pIs na faixa Ãcida. A proteÃna mais abundante na tinta à a dactylomelina-P, que à uma molÃcula monomÃrica, de 59,8 kDa, pI 5,0, que possui alto teor de metionina e menos de 1% de carboidratos, à desnaturada a 60 ÂC por 10 minutos e resiste a pHs entre 3-12. Dactylomelina-P mostra um amplo espectro de aÃÃo antibacteriano, mas nÃo antifÃngico, ao contrÃrio da tinta que possui um fator com esta atividade. à particularmente eficiente contra bactÃrias marinhas, podendo ser bactericida (4,0μg/ml) ou bacteriostÃtica (0,2μg/ml), dependendo da concentraÃÃo. Dactylomelina-P aglutinou eritrÃcitos de coelho, ratos e camundongos, nÃo apresentou atividade anticoagulante, hemolÃtica e nem citotÃxica. A DL50 para camundongos ficou entre 60-100 mg/Kg, sendo considerada moderadamente tÃxica. Dactylomelina-P sà foi encontrada na glÃndula de tinta, localizando-se preferencialmente nas cÃlulas das vesÃculas produtoras. Ensaios de microscopia eletrÃnica de transmissÃo revelaram que a dactylomelina atravessa a parede celular da bactÃria S. aureus e, interage principalmente com a membrana citoplasmÃtica, provavelmente interferindo no metabolismo, ao invÃs de causar danos à cÃlula. / The marine gastropod Aplysia dactylomela is known to release a purple ink when it is plagued. How has no external structure of protection, it is believed that secretion, rich in biologically active substances, participate in the chemical defense of the animal. The ink is composed of pigments, proteins and low molecular weight substances. The pigments of ink are originated from red algae, but as the protein, little is known about its origin, processing, storage location and function in animals. This paper describes for the first time the protein composition of the ink and presents some physico-chemical and dactylomelina of organic-P, an antibacterial protein present in the ink that slug, and get information about the location of this protein in the ink gland. The paint was obtained from specimens found on the beach in Fleixeiras, Ce. The protein composition of the ink was determined by two-dimensional electrophoresis and purification of dactylomelina-P was done by ion exchange chromatography and hydrophobic interaction. Dactylomelina-P was analyzed on the molecular mass, isoelectric point, composition of amino acids, the presence of carbohydrates, thermal stability, resistance to proteases and pH. Several biological activities were tested with the ink and the dactylomelina-P, including antimicrobial activity, enzyme, haemagglutinating, anticoagulant, hemolytic, cytotoxic and toxic. Tests for localization of the protein were performed in different tissues of the slug by western blot in the ink gland by immunohistochemistry and the interaction with the bacterium Staphylococcus was performed by immunocytochemistry. The ink of A. dactylomela contains more than 40 proteins / peptides, with masses below 70 kDa and PIs in the acidic range. The most abundant protein in the ink is dactylomelina-P, which is a monomeric molecule of 59.8 kDa, pI 5.0, which has high content of methionine and less than 1% of carbohydrates, is denatured at 60  C for 10 minutes and resist the pH between 3-12. Dactylomelina-P shows a broad spectrum of antibacterial action, but not antifungal, unlike paint that has a factor with this activity. It is particularly effective against marine bacteria and may be bactericidal (4.0 g / ml) or bacteriostatic (0.2 g / ml), depending on the concentration. P-Dactylomelina agglutinate rabbit erythrocytes, rats and mice, showed no anticoagulant activity, and cytotoxic and hemolytic. The LD50 for mice was between 60-100 mg / kg, is considered moderately toxic. Dactylomelina-P was found in the ink gland, is located preferentially in cells producing the vesicles. Tests for transmission electron microscopy revealed that the dactylomelina through the cell wall of the bacterium S. aureus and mainly interacts with the cytoplasmic membrane, probably interfering with metabolism, rather than damage the cell.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O carcinoma gÃstrico à a segunda causa de morte por cÃncer no mundo. No Cearà à o segundo mais freqÃente entre os homens e o terceiro entre as mulheres. Dos cÃnceres gÃstricos os adenocarcinomas representam em torno de 95%. A doenÃa tem sido associada a fatores genÃticos e ambientais sendo demonstrada Ãntima relaÃÃo com a infecÃÃo por Helicobacter pylori, principalmente associada à presenÃa do gene cagA e genÃtipos vacAs1m1. Entretanto, apesar dos mecanismos pelos quais a bactÃria promove a carcinogÃnese gÃstrica ainda nÃo estarem esclarecidos, uma das hipÃteses seria atravÃs da inativaÃÃo de supressores tumorais. O objetivo do presente trabalho foi verificar, em adenocarcinomas gÃstricos, se a presenÃa de H. pylori, e de seus genes cagA e vacA, està relacionada com a mutaÃÃo e/ou alteraÃÃo na expressÃo protÃica dos supressores tumorais p53 e p27. Neste estudo, 74 amostras de pacientes foram analisadas quanto à presenÃa de H. pylori, cagA+ e os genÃtipos de vacA, pela reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR). A anÃlise mutacional do gene p53 foi realizada por PCR-SSCP e a detecÃÃo da mutaÃÃo/superexpressÃo do p53 e expressÃo da proteÃna p27 pelo mÃtodo imunohistoquÃmico. A bactÃria foi detectada em 95% das amostras, das quais 63% eram cagA(+). Dentre os alelos de vacA, observou-se predomÃnio de s1 (74%) e m1 (82%), associados em 69% dos casos. Na anÃlise mutacional do p53 verificou-se que 72% dos casos exibiram alteraÃÃo no padrÃo de mobilidade eletroforÃtica, sendo esta associada significativamente à presenÃa do gene cagA. Por outro lado, apenas 29% dos casos apresentaram detecÃÃo pelo mÃtodo imunohistoquÃmico, nÃo sendo encontrada associaÃÃo com a H. pylori. A proteÃna p27 demonstrou acentuada reduÃÃo em sua expressÃo (detectada em apenas 19% dos casos), nÃo demonstrando atividade compensatÃria em relaÃÃo à proteÃna p53 mutada e sem associaÃÃo estatÃstica dos casos negativos com a presenÃa da H. pylori. Finalmente, os resultados sugerem que estes supressores simultaneamente inativados podem ser o ponto chave da desregulaÃÃo do ciclo celular que, associados a outros fatores, favoreÃam o desenvolvimento e progressÃo dos adenocarcinomas gÃstricos. Hà indÃcios de que a presenÃa bacteriana, e dos seus genes cagA(+) e vacA/s1m1, possam influenciar, de forma nÃo esclarecida, as alteraÃÃes moleculares ocorridas nos supressores tumorais p53 e p27. / Gastric carcinoma is the second cause of death by cancer in the world. On State of Ceara-Brazil is the second most frequent type of cancer in men and third in women. Adenocarcinomas account for approximately 95% of all malignant gastric neoplasms. It has been associated to genetic and environmental factors and a intimate relationship between the infection by the bacteria Helicobacter pylori and the gastric carcinoma have been related. The presence of the cagA gene and specific genotypes (s1m1) of the gene vacA have been detected in more pathogenic strains. Although the precise molecular mechanisms by which H. pylori could promote the process of gastric carcinogenesis are under investigation, one hypothesized mechanism involves the tumor supressor genes inactivation. The aim of the present study was to verify if the presence of Helicobacter pylori, cagA and vacA genes is related to mutations in the tumor supressor gene p53 and altered expression of p53 and p27 proteins in gastric adenocarcinomas. Seventy-four (74) samples were analyzed to detect the presence of H. pylori, cagA and genotypes of vacA by Polymerization Chain Reaction (PCR). The mutational analysis of p53 gene was performed by PCR-SSCP (Polymerization Chain Reaction for analysis of the Single-strand Conformation Polymorphism). Analysis of mutation or overexpression of p53 protein and p27 expression was detected by the immunohistochemical method. The bacteria was detected in 95% of the samples, 63% was cagA(+). Among the vacA allele it was observed prevalence of s1 (74%) and m1 (82%), associated in 69% of the cases. Mutation analysis of p53 demonstrated 72% of the cases with altered electrophoretic mobility; The alterations were significatively more frequent in the presence of the cagA gene. Immunohistochemical analysis detected only 29% of cases with the expression of p53 protein. The protein p27 showed accentuated reduction in its expression (detected in only 19% of the cases), it has not demonstrated compensatory activity in relation to the p53 altered protein, neither association to H. pylori presence. Finally, these data suggest that simultaneous inactivation of these tumor suppressors genes may be the key point of deregulation of the cellular cycle that, associated to the other factors, favor the development and progression of the gastric cancer. There is some evidence that the bacterial presence, cagA and vacA/s1m1 genes, may influence, in a not understood way, the alterations observed in the tumor suppressors p53 and p27.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Avaliou-se a expressÃo das proteÃnas bax, bcl-2 e P27 no carcinoma espinocelular invasivo da cavidade bucal atravÃs da tÃcnica da imunohistoquÃmica para conhecer-se o perfil apoptÃtico destes tumores. Buscou-se detectar os fatores epidemiolÃgicos e o comportamento clÃnico dos pacientes acometidos por esta neoplasia. Procurou-se empregar parÃmetros estatÃsticos diferentes do odds ratio para comparaÃÃes posteriores. Analisando-se quarenta e oito pacientes da Santa Casa da MisericÃrdia de Fortaleza, Cearà foi possÃvel conhecer os fatores sexo, escolaridade, renda familiar, tabagismo (forma e tempo de consumo,tempo de abandono, quantidade consumida), etilismo(tipo de bebida, tempo de consumo, quantidade consumida, freqÃÃncia). Com a anÃlise do laudo histopatolÃgico da peÃa cirÃrgica soube-se das informaÃÃes referentes ao tumor em si (localizaÃÃo, gradaÃÃo histolÃgica, tamanho, linfonodos envolvidos). Obteve-se fragmentos da peÃas cirÃrgicas e foram confeccionadas lÃminas para a verificaÃÃo da invasividade atravÃs da coloraÃÃo em hematoxilina e eosina. Em seguida foi realizada a reaÃÃo de imunohistoquÃmica foi pelo mÃtodo da estrepto-avidina-biotina-peroxidase objetivando-se avaliar a expressÃo das proteÃnas supracitadas. As lÃminas com marcaÃÃo positiva foram submetidas a contagem de no mÃnimo mil cÃlulas e este resultado foi empregado nos mÃtodos LI (Labelling Index) e HS(HScore). A avaliaÃÃo dos resultados foi atravÃs de mÃtodos descritivos, sendo os testes realizados o qui-quadrado e o teste exato de Fisher com nÃvel de significÃncia a dez por cento.Os resultados apontaram uma mÃdia de idade de cinqÃenta e sete anos e o maior nÃmero de indivÃduos do sexo masculino, analfabetos, com renda familiar de um salÃrio-mÃnimo na sua maioria. A forma de consumo de tabaco, em maior nÃmero encontrada, foi o cigarro industrializado com vinte anos de consumo. A ingestÃo de bebidas destiladas superou a de fermentadas com mÃdia de vinte anos. O soalho bucal foi a localizaÃÃo com maior nÃmero de casos, com uma mÃdia de tamanho de trÃs e meio centÃmetros, o estadiamento patolÃgico predominante foi o pT2, com gradaÃÃo histolÃgica moderadamente diferenciada em maior quantidade. Dentre os cruzamentos realizados, houve correlaÃÃo estatÃstica entre o tamanho de tumores com as faixas etÃrias(P=0,084 para α=10%); tamanho dos tumores com envolvimento de linfonodos(P=0,085 para α=10%); sexo dos pacientes com envolvimento dos linfonodos (P=0,03 para α=10%). Os resultados das reaÃÃes de imunohistoquÃmica mostraram um maior percentual de casos positivos para bax (77,1%) seguido de P27(45,9%) e bcl-2 (16,6%). As mÃdias dos LI encontradas apontaram bax com 67, 766; seguida de bcl-2 com 10,804; e P27 com 7,989. Cruzando-se os H-scores dos marcadores entre si encontrou-se correlaÃÃo positiva entre bax e P27 (0,245 na correlaÃÃo de Pearson). Os parÃmetros estatÃsticos avaliados foram: mÃdia e seu erro padrÃo; mediana; moda; desvio padrÃo; curtose e seu erro padrÃo; mÃnimo; mÃximo e quartis. Os resultados mostram uma tendÃncia a apoptose nos carcinomas espinocelulares bucais / The evaluation of the expression of bax, bcl-2 and p27 proteins at invasive squamous cell carcinoma of oral cavity was done using the immunohistochemistry technique to know about apoptotic profile of these neoplasms. The epidemiological factors and the clinical behavior of the patients were detected, too. Statistical parameters different from odds ratio was employed for future comparisons. Forty-eight patients from Santa Casa da MisericÃrdia de Fortaleza, CearÃ, Brazil was analyzed and with this analysis was possible to know the prognostic factors: sex of patients, instruction grade, familiar gains, tobacco consumption (form of consumption, duration of consumption, period of forsaking and quantity consumed), alcohol consumption (nature of drinking, duration of consumption, period of forsaking, quantity consumed, periodicity). In a posterior moment, with the histopathological report from the surgical specimen was possible to know about localization of neoplasm, size of neoplasm, histological grade, nodes involvement and invasiveness. Pieces of the neoplasm were achieved from surgical specimen and glass slides were done to analyze the invasiveness by hematoxilin-eosin coloration. After the immunohistochemistry reaction by streptoavidin biotin technique was done to evaluate the expression of proteins above. The glass slides with positive reaction were submitted under a counting and, at least, one thousand cells were counted. The results from counting were submitted under the LI(Labelling Index) and HS(H Score) methods. The evaluation of the results was made using descriptive methods and the statistical tests were qui-square and Fisherâs exact test with 10% significance. The results showed the mean age was 57 years old, more males than females, analphabets and one minimum wage the mean familiar gain. The main form of tobacco consumption was industrialized cigarette with 20 years of consumption. The swallow of distillers drinking was bigger than fermentation ones with 20 years of drinking at mean. The floor of the mouth was the anatomic site with more number of cases and the mean size of neoplasm was 1.4 inches. The preponderant pathological staging detected was pT2 and the preponderant histological grade was moderately differentiated. Among the cross tabs realized, there were statistical correlation between size of tumors and age (P=0.084; α=10%), between size of tumors and nodes involvement (P=0,085; α=10%), between sex of patients and nodes involvement (P=0.03; α=10%). The results from immunohistochemical reactions were more positive to bax (77.1% of positive cases), P27(45.9% of positive cases) and bcl-2 (16.6% of positive cases). The mean of LI showed bax at first position (67.766); second bcl-2 (10.804) and P27(7.989). The cross tabs among HS showed statistical positive correlation between bax and P27 (0.245 at Pearsonâs correlation). The statistical parameters were: mean and its standard error, median, mode, standard deviation, kurtosis and its standard error, minimum, maximum and percentiles. The conclusions showed apoptosis propensity at oral squamous cell carcinoma

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A soja à uma das leguminosas mais utilizadas no mundo, sendo o uso justificado pelo elevado teor nutricional de seus grÃos, constituÃdos, principalmente, por proteÃnas e lipÃdios. A estimativa atual da produÃÃo mundial de soja à de 250.000 toneladas/ano, porÃm hà fatores limitantes dessa produÃÃo, como o ataque de pragas. As doenÃas causadas por fungos, por exemplo, causam na soja perdas em torno de 4%, sendo 20% destas causadas por Septoria glycines e Cercospora kikuchii. Assim, a busca por medidas alternativas de controle à crescente, particularmente em diminuiÃÃo ao uso de agrotÃxicos, mas, para isso, à importante o entendimento dos mecanismos de defesa vegetal. Das sementes de soja foi purificada uma proteÃna, denominada toxina da soja (SBTX), que à ativa contra diversos fungos de plantas e do homem e, tambÃm, à neurotÃxica para ratos e camundongos, razÃo pela qual recebeu o nome de toxina. A SBTX apresenta massa molecular de 44 kDa, constituÃda por duas subunidades (17 e 27 kDa) codificadas por genes distintos e jà foi identificada nas sementes, raÃzes, caules e folhas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de expressÃo gÃnica da SBTX em plantas cujas folhas primÃrias foram tratadas com elicitores (biÃtico e abiÃtico), usando a tÃcnica de PCR em tempo real, na tentativa de reforÃar o papel fisiolÃgico de defesa proposto para proteÃna. Assim sendo, Ãcido salicÃlico, injÃria mecÃnica e esporos do fungo Cercospora kikuchii foram utilizados como elicitores e os nÃveis de transcritos para as duas subunidades proteicas de SBTX avaliados. Respostas de induÃÃo foram verificadas para ambas as subunidades da SBTX, porÃm os perfis de expressÃo gÃnica foram diferenciados. Para o gene SBTX 27 kDa, o maior nÃvel de transcritos foi detectado quando o tratamento envolveu injÃria mecÃnica associada ao Ãcido salicÃlico, correspondendo a um aumento de cerca de 100 vezes apÃs 12 horas de aplicaÃÃo do tratamento. Jà para o gene SBTX 17 kDa este aumento nÃo foi verificado na mesma intensidade, tendo sido apenas em torno de 10 vezes. Os dados em conjunto mostram que SBTX à uma proteÃna passÃvel de induÃÃo por elicitores biÃticos e abiÃticos, reforÃando o seu papel fisiolÃgico de defesa, podendo vir a ser utilizada como ferramenta biotecnolÃgica no sentido de amenizar as perdas causadas por fungos. / Soybean is a legume most commonly utilized in the world, whose use is justified by the high nutritional content of its grain, consisting mainly of proteins and lipids. The current estimate of global soybean production is 250,000 tons/year, but there are limiting factors of this production, such as the pest attack. The fungal diseases, for example, cause losses in soybeans around 4%, where 20% of these are derived from infection by Septoria glycines and Cercospora kikuchii. Thus, the search for alternative measures is increasing, particularly in reducing the use of pesticides, but for this it is important to understand the plant defense mechanisms. Soybean toxin (SBTX) is a protein purified from soybean seeds with activity against plant and human pathogenic fungi and neurotoxic action to rats and mice, hence the reason it received the name of toxin. SBTX shows a molecular mass of 44 kDa, composed of two subunits (17 and 27 kDa) encoded by distinct genes and it has been detected seeds, roots, stems and leaves. This study aimed to evaluate the gene expression profile of SBTX in soybean plants whose primary leaves were treated with elicitors (biotic and abiotic), using the real-time PCR technique, in an attempt to strength the physiological role of defense proposed for this protein. Therefore, salicylic acid, mechanic injury and Cercospora kikuchii spores were used as elicitors and it was measured the transcript levels of SBTX subunits. Induction responses were observed for both subunits of SBTX, but the gene expression profiles were different. For SBTX 27 kDa gene, the highest transcript level was detected when the treatment involved mechanic injury associated to salicylic acid, an increase of about 100 fold after 12 hours of treatment application. Nevertheless, for SBTX 17 kDa gene the induction response was much smaller, it was only around 10 times. The data together show that SBTX is an inducible protein by biotic and abiotic elicitors, reinforcing its physiological role of defense, which could eventually be used as biotechnological tool in order to mitigate losses caused by fungi.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / MoÂ-CBP3 à uma proteÃna ligante à quitina, purificada de sementes de Moringa oleifera, com massa molecular aparente de 18,0 kDa, consistindo de mÃltiplas isoformas heterodimÃricas. Mo-CBP3 à uma proteÃna altamente estÃvel, que possui amplo espectro de aÃÃo contra fungos fitopatogÃnicos e mantÃm sua estrutura secundÃria e atividade antifÃngica em extremos de temperaturas e diferentes valores de pH. Dessa forma, a proteÃna Mo-CBP3 se apresenta como uma ferramenta promissora para o desenvolvimento de plantas transgÃnicas resistentes ao ataque de fungos. Para tanto, Mo-CBP3 foi submetida a testes de biosseguranÃa alimentar, visando garantir sua utilizaÃÃo atravÃs da expressÃo em plantas, minimizando, assim, os riscos para animais nÃo alvo, incluindo o homem. A avaliaÃÃo de biosseguranÃa alimentar da proteÃna seguiu o teste de duas etapas, baseado em pesos de evidÃncia, proposto pelo Instituto Internacional de CiÃncias da Vida (ILSI). A pesquisa evidenciou o longo histÃrico de uso seguro, fundamentado em dados cientÃficos, da espÃcie M. oleifera, fonte da proteÃna Mo-CBP3. AnÃlises in silico mostraram que Mo-CBP3 nÃo possui qualquer identidade com proteÃnas alergÃnicas, tÃxicas e/ou antinutricionais. Adicionalmente, nÃo foram encontrados na proteÃna epÃtopos potencialmente capazes de promover reaÃÃo cruzada e desencadear uma resposta alergÃnica. Identidade com proteÃnas alergÃnicas (> 35%) foi encontrada apenas quando uma janela de 80 aminoÃcidos foi utilizada. SÃtios potenciais de N-glicosilaÃÃo nÃo foram encontrados na proteÃna madura. A proteÃna mostrou resistÃncia ao tratamento tÃrmico e à digestibilidade por fluido gÃstrico simulado, mas foi completamente susceptÃvel à digestÃo em fluido intestinal simulado. Em adiÃÃo, Mo-CBP3 nÃo causou efeitos adversos relevantes em camundongos submetidos a doses elevadas de 5 a 2000 mg/kg, via oral, evidenciando seu carÃter inÃcuo. A partir da avaliaÃÃo de biosseguranÃa alimentar proposta pelo ILSI nÃo à esperado qualquer risco associado ao consumo da proteÃna Mo-CBP3 pelo homem e demais animais monogÃstricos. / Mo-CBP3 is a chitin binding protein purified from Moringa oleifera seeds which has an apparent molecular mass of 18.0 kDa and consists of multiple heterodimeric isoforms. Mo-CBP3 is a highly stable protein that has a broad spectrum of activity against phytopathogenic fungi and maintains its secondary structure and antifungal activity at extreme temperatures and different pH values. Thus, the Mo-CBP3 protein presents itself as a promising tool for the development of transgenic plants resistant to fungi attack. For such purpose, the Mo-CBP3 protein was subjected to food safety tests to ensure the safety of its expression in plants, minimizing the risk to non-target animals, which include human beings. The food safety assessment of the protein followed the two-tiered approach, based on weight of evidences, proposed by International Life Sciences Institute (ILSI). The research evidenced the long history of safe use, supported by scientific literature, of the M. oleifera species, source of Mo-CBP3 protein. In silico analysis did not reveal any identity of Mo-CBP3 with allergenic, toxic and/or antinutritional proteins. Additionally, were not found in the protein potential epitopes able to lead to cross reaction and unleash an allergic response. Identity with allergenic proteins was found only when a window of 80 amino acids was used. Potential sites of N-glycosylation were not found in the mature protein. The protein showed resistance to thermal treatment and digestibility by simulated gastric fluid, but was completely susceptible to digestion in simulated intestinal fluid. In addition, Mo-CBP3 caused no relevant adverse effects to mice subjected to high oral doses from 5 to 2000 mg/kg, showing its innocuous nature. Based on the food safety approach proposed by ILSI is not expected any risk associated to use of Mo-CBP3 protein for humans and other monogastric animals.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar os efeitos de diferentes nÃveis de suplementaÃÃo concentrada sobre o peso corporal, parÃmetros seminais, medidas de biometria testicular, perfil proteico do plasma seminal e perfil proteico do mÃsculo Longissimus dorsi de carneiros da raÃa Morada Nova. Foram utilizados 22 carneiros com sete meses de idade. Os tratamentos consistiam em diferentes nÃveis de concentrado (0%, 0,6%, 1,2% e 1,8% do peso corporal do animal com base na matÃria seca). Os animais foram mantidos em sistema de pastejo rotacionado em pasto de capim Aruana (Panicum maximum). As amostras de sÃmen foram coletadas por eletroejaculaÃÃo ao final do experimento, quando os animais obtiveram 10 meses de idade. ApÃs o abate, os testÃculos e o mÃsculo Longissimus dorsi foram coletados. Os testÃculos foram mensurados e as proteÃnas seminais e musculares foram analisadas por meio de eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Os mapas proteicos foram analisados por meio do aplicativo PDQuest, version 8.0; Bio Rad, USA. Houve diferenÃa significativa no peso corporal e na expressÃo dos spots proteicos do mÃsculo Longissimus dorsi (P < 0,05), porÃm nÃo houve diferenÃa significativa para os parÃmetros seminais, biometria testicular e para a expressÃo de proteÃnas do plasma seminal. Os spots diferencialmente expressos (P < 0,05) foram digeridos com tripsina e submetidos à identificaÃÃo por espectrometria de massa (ESI-Q-TOF). Conclui-se, portanto, que os nÃveis de concentrado fornecido aos animais alteram o peso corporal e a expressÃo de proteÃnas do mÃsculo Longissimus dorsi, porÃm nÃo influenciam as medidas de biometria testicular, os parÃmetros seminais e a expressÃo de proteÃnas do plasma seminal. / The study was conducted in order to evaluate the effects of different levels of concentrated supplementation on body weight, seminal parameters, testicular biometry measurements, protein profile of seminal plasma and protein profile of the Longissimus dorsi muscle of the breed of sheep Morada Nova. 22 seven months old sheep were used. The treatments consisted in different levels of concentrated (0%, 0.6%, 1.2% and 1.8% of the animalsâ body weight based on dry matter). The animals were kept under a rotational grazing system, on Aruana grass (Panicum maximum). The semen samples were collected through electroejaculation at the end of the experiment, when the animals reached the age of 10 months. After slaughtering, the testicles and the muscle Longissimus dorsi were collected. The testicles were measured and the seminal and muscle proteins were analyzed through two-dimensional electrophoresis in polyacrylamide gel. The proteic maps were analyzed using the PDQuest application, version 8.0; Bio Rad, USA. There were significant differences over body weight and over the expression of the proteic spots of the muscle (P <0.05), but there was no significant difference for the seminal parameters, testicular biometry and the expression of seminal plasma proteins. The spots differentially expressed (P <0.05) were digested with trypsin and subjected to identification through mass spectrometry (ESI-Q-TOF). It is concluded, therefore, that the levels of concentrated provided to the animals change the body weight and influence the expression of the Longissimus dorsi muscle proteins, but do not modify the testicular biometry, the seminal parameters and the expression of seminal plasma proteins.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Objetivou-se avaliar os efeitos de diferentes lÃminas de irrigaÃÃo e doses de nitrogÃnio sobre as caracterÃsticas morfogÃnicas e estruturais, produÃÃo e composiÃÃo quÃmico-bromatolÃgica do capim-MombaÃa. O estudo foi conduzido de agosto a dezembro de 2007, na Unidade de ExecuÃÃo de Pesquisa da EMBRAPA MEIO-NORTE, em ParnaÃba, PiauÃ. Os tratamentos consistiram em quatro doses de nitrogÃnio (200, 400, 600 e 800 kg de N/ha x ano) e duas lÃminas de irrigaÃÃo (equivalentes à reposiÃÃo de 50% e 80% da EvaporaÃÃo do Tanque Classe A â ECA), em um delineamento em blocos casualizados, em esquema fatorial 4 x 2, com trÃs repetiÃÃes. As parcelas experimentais mediam 3 x 8 m, com 2 x 7 m de Ãrea Ãtil, sendo realizados um corte de uniformizaÃÃo (agosto) e quatro cortes para coleta de dados a cada 30 dias (setembro, outubro, novembro, dezembro) 20 cm acima do solo. A lÃmina de irrigaÃÃo de 80% de evaporaÃÃo do tanque Classe A aumentou os valores de Taxa de Aparecimento de Folhas (TApF), Taxa de Alongamento de Folhas (TAlF), Taxa de Alongamento das Hastes (TAlH) e Comprimento Final da LÃmina Foliar (CFF) em relaÃÃo à lÃmina de 50%. A adubaÃÃo nitrogenada nÃo influenciou a Taxa de Aparecimento de Folhas (TApF), Taxa de Alongamento de Folhas (TAlF), Taxa de SenescÃncia de Folhas (TSEN), DuraÃÃo de Vida das Folhas (DVF) e no Comprimento Final da LÃmina Foliar (CFF). PorÃm, com o aumento das doses de N maiores foram os valores de TAlH e a menor dose de N implicou em maior valor para o NFV. Com o aumento das doses de nitrogÃnio ocorreu aumento da produtividade de matÃria seca total (PMST), produtividade de matÃria seca de lÃmina verde (PMSLV), produtividade de matÃria seca de colmo+bainha verde (PMSCV) e da altura da gramÃnea bem como uma diminuiÃÃo da eficiÃncia de uso do nitrogÃnio (EUN). A lÃmina de irrigaÃÃo influencia apenas na altura das plantas em que a lÃmina de 80% proporciona maiores valores. O aumento das doses de nitrogÃnio diminuiu os teores de matÃria seca (MS) ao mesmo tempo em que a lÃmina de 80% causou diminuiÃÃo nesses valores, tanto para lÃmina foliar como para colmo+bainha. Com aumento das doses de nitrogÃnio houve um aumento nos teores de fibra insolÃvel em detergente neutro (FDN) e fibra insolÃvel em detergente Ãcido (FDA) apenas da lÃmina foliar e de proteÃna bruta (PB), tanto para a lÃmina foliar como para o colmo+bainha. A lÃmina de 80% diminuiu os teores de PB tanto para a lÃmina foliar como para colmo+bainha ao mesmo tempo em que aumentou os teores de FDA tanto da lÃmina foliar como do colmo+bainha. Nas condiÃÃes em que este trabalho foi realizado recomenda-se a utilizaÃÃo da lÃmina de 50% de irrigaÃÃo com adubaÃÃes nitrogenadas entre 600 e 800 kg de N/ha x ano / This work was carried out to evaluate the effects of different irrigation levels and rates of nitrogen on the morphogenetic and structural characteristics, yield production and the composition chemical-bromatologic of mombaÃagrass (Panicum maximum cv. MombaÃa). The study was conducted in the period from August to December 2007 on Unit Research of EMBRAPA MEIO NORTE, located in city of ParnaÃba, PiauÃ. The treatments consisted of four doses of nitrogen (200, 400, 600 and 800 kg N/ha x year) and two irrigation levels (with a equivalent level to replacement of 50% and 80% of evaporation of the Class A pan - ECA), in a completely randomized block design in a 4 x 2 factorial design with three replications. The plots measuring 3 x 8 m, with 2 x 7 m as floor area for data collection, and made a cut of uniformity (in August) and four cuts to collect data every 30 days (September, October, November, December) 20 cm above the soil. The irrigation level of 80% increases the values of leaf appearance rate (LAR), leaf elongation rate (LER), culm elongation rate (CER) and final leaf length (FLL) when compared with the blade of 50%. Nitrogen fertilization did not influence the LAR, LER, leaf senescence rate (LSR), duration of life of the leaf (DLF) and the FLL. However, with increasing doses of N are the highest values of CER and the lowest dose of N implies a higher value for number of live leaves per tillers (NLT). With the increase of nitrogen rates were increased total dry matter yield (PMST), dry matter yield of green blade (PMSLV), dry matter yield of green culm (PMSCV) and the height of plants and a reduction in nitrogen use efficiency (NUE). The irrigation levels affected only height of grass when the layer of 80% has higher values. Increasing doses of nitrogen reduces the dry matter at the same time as the irrigation level of 80% decreasing these values, both for the leaf and to stem+sheath fraction. With increasing doses of nitrogen there is an increase in levels of neutral detergent insoluble fiber (NDF) and acid detergent insoluble fiber (ADF) only in the leaf and crude protein (CP), both for the leaf and to stem+sheath fraction. The irrigation level of 80% decreases the CP levels, both for the leaf and to stem+sheath fraction at the same time it increases the levels of ADF both for the leaf and to stem+sheath fraction. In the conditions which this work has been done it is recommended to use the blade of 50% of irrigation with nitrogen fertilization between 600 and 800 kg N/ha x year