Submitted by Eliete Santos (profliete@hotmail.com) on 2018-03-14T18:58:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImunopatologiaHepaticaInfeccao.pdf: 4042036 bytes, checksum: fdd989701e3ca93ed1baeec85a2d8ec1 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliete Santos (profliete@hotmail.com) on 2018-03-14T18:59:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImunopatologiaHepaticaInfeccao.pdf: 4042036 bytes, checksum: fdd989701e3ca93ed1baeec85a2d8ec1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-14T18:59:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImunopatologiaHepaticaInfeccao.pdf: 4042036 bytes, checksum: fdd989701e3ca93ed1baeec85a2d8ec1 (MD5) Previous issue date: 2015-09-25 / A Dengue constitui um dos principais problemas de Saúde Pública no mundo, e um dos fatores que colaboram com esta situação é a falta de uma vacina eficaz contra a doença, sendo que em parte, essa dificuldade para obtenção, se deve à inexistência de um modelo experimental que represente o quadro de infecção e manifestação da doença similar aos observados em humanos. Dessa forma, o Instituto Evandro Chagas demonstrou a presença de antígenos virais de dengue, através do teste de Imuno-histoquímica, em primata não humano (PNH) da espécie Callithrix jacchus, o qual evoluiu a óbito com quadro de dengue hemorrágica. Diante do exposto, aliados ao fato de que o fígado é o órgão onde se observa as principais alterações provocadas pelo Virus Dengue (VDEN) em humanos, torna-se importante analisar o fígado de primatas do gênero Callithrix a fim de estudar a patogênese e a imunopatologia da infecção sequencial pelo VDEN. No total, 26 PNH da espécie Callithrix penicillata foram submetidos a infecção primária (IP) por via subcutânea com VDEN-3 (3,23 x 103 PFU/mL), sendo 13 destes animais anestesiados e sacrificados diariamente por sete dias pós-infecção (dpi) (fase aguda) e em intervalos aleatórios até 60 dpi (fase convalescente); a infecção secundária (IS) com VDEN-2 (4,47 x 104 PFU/mL) foi realizada dois meses após a IP nos demais 13 animais. Animais sentinelas não infectados foram reservados até o final do experimento. O fígado dos animais foram processados para histopatologia e imunohistoquímica usando anticorpos policlonais para VDEN e anticorpos para análises da resposta imune inata, celular e citocínica. Os PNH estudados foram suscetíveis à replicação sequencial do VDEN-3 e VDEN-2 no fígado, havendo expressão de antígenos virais em hepatócitos, células de Kupffer e nos corpúsculos de Councilman; o comprometimento histopatológico do fígado foi caracterizado por: presença de apoptose; focos de necrose lítica; esteatose; tumefação cellular; inflamação acinar, no espaço porta (EP) e na veia hepática central (VHC); hiperplasia/hipertrofia em células de Kupffer, bem como, hemossiderina em células de Kupffer; e dilatação dos sinusóides. A intensidade da lesão hepática foi proeminente na fase aguda da IP e IS, apresentando discreta hepatite aguda. A apoptose foi a forma predominante de morte em hepatócitos; bem como, necrose lítica e o infiltrado inflamatório apresentaram padrão de distribuição predominante em Z2. Observou-se aumento na expressão acinar de macrófagos ativados, células NK, proteína S-100 e linfócitos B durante as fases da IP e IS; houve ainda, aumento da expressão acinar de linfócitos TCD4+ durante a fase aguda da IP; observou-se aumento na expressão acinar de IFN- durante as fases da IP e IS, TNF-α e IL-8 com maior prevalência na IS, TGF-β e IL-10 mais expressas na fase aguda da IP, proteína Fas durante a fase aguda da IP e IS e VCAM na fase aguda da IS e aumento na expressão nos EP. Esses achados foram semelhantes aos observados em fígados de casos fatais de dengue em humanos, porém com intensidade e amplitude menor, sugerindo que PNH da espécie Callithrix penicillata é um bom modelo experimental para o estudo da infecção pelo VDEN, especialmente os aspectos imunopatológicos. / Dengue is one of most important public health problem in the world, and one of the factors that contribute with this situation is the lack of an effective vaccine against the disease, and in part, this difficulty to obtain is due clinical the lack of an experimental model that mimic the infection and manifestation of the disease as those observed in humans. Then, the Evandro Chagas Institute showed the presence of dengue antigens using the Immunohistochemistry assay, in the liver of a non-human primate (NHP) of the species Callithrix jacchus, with a fatal outcome following dengue hemorrhagic fever. Based in the above considerations and in addition to the fact that the liver is the targetb organ for Dengue Virus (DENV) in humans, it is important to analyze the liver of primates of the genus Callithrix in order to study the pathogenesis and the immunopathology of sequential infection by DENV. A total of 26 NHP Callithrix penicillata were submitted to primary infection (PI) subcutaneously with DENV-3 (3.23 x 103 PFU/mL), and 13 of these animals anesthetized and sacrificed daily for seven days post-infection (dpi) (acute phase) and in random intervals until 60 dpi (convalescent phase); the secondary infection (SI) with DENV-2 (4.47 x 104 PFU/mL) was performed two months after the PI in the remaining 13 animals. Uninfected sentinels animals were reserved up ending of the experiment. The liver of the animals were processed for histopathology and Immunohistochemical assay using polyclonal antibodies to DENV and antibodies for analyses of the innate and cellular immune response as well as the cytokine expression . The NHP were susceptible to sequential infection by DENV-3 and DENV-2; in the liver viral antigens were expressed in hepatocytes, Kupffer cells and Councilman bodies; the histopathological changes in liver was characterized by the presence of apoptosis, focal lytic necrosis, steatosis, swelling cellular, inflammation (acinar, EP and HCV), hyperplasia/hypertrophy in Kupffer cells, hemosiderin in Kupffer cells and sinusoidal dilatation; the intensity of the liver damage was prominent in the acute phase of PI and SI resulting in acute hepatitis. In addition the apoptosis was the most frequent mechanism of death of hepatocytes; lytic necrosis and inflammatory infiltrate showed predominant distribution pattern in Z2. An increase of the acinar expression of activated macrophages, NK cells, S-100 protein and B-lymphocytes during the stages of PI and SI; as well as, increased acinar expression of TCD4 + lymphocytes during the acute phase of PI; as to the quantification of cytokines and molecules, was observed an increase in acinar expression of: IFN- during the stages of PI and SI, TNF-α and IL-8 with higher prevalence in SI, TGF-β and IL-10 with prevalence in acute phase of PI, Fas protein during the acute phase of PI and SI and VCAM in acute phase of SI, as well as increase in expression in the EP. These findings were similar to those observed in livers from fatal cases of dengue fever in humans, but with lower intensity and amplitude, thus indicating that NHP Callithrix penicillata species is a good experimental model for infection by DENV, involving immunopathologic studies.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-05-20T22:23:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_FrequenciaDiversidadeEnteroparasitos.pdf: 3267006 bytes, checksum: e213cf0fbc13466144d44ca18df1d57b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-05-22T14:50:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_FrequenciaDiversidadeEnteroparasitos.pdf: 3267006 bytes, checksum: e213cf0fbc13466144d44ca18df1d57b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-22T14:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_FrequenciaDiversidadeEnteroparasitos.pdf: 3267006 bytes, checksum: e213cf0fbc13466144d44ca18df1d57b (MD5) Previous issue date: 2010 / Os enteroparasitas constituem-se em importante problema de saúde para a população humana no mundo inteiro. O consumo de hortaliças é uma das grandes vias de transmissão desses patógenos. Este trabalho buscou determinar a frequência e a diversidade de enteroparasitos veiculados por hortaliças comercializadas, na região metropolitana de Belém-PA, e sua relação com a sazonalidade climática da região. Foram usadas 252 amostras de três espécies de hortaliças, sendo 84 de alface (Lactuca sativa- variedade crespa), 84 de agrião (Nasturtium officinale) e 84 de coentro (Coriandrum sativum) adquiridas em feiras, hortas e em um supermercado, no período de dezembro de 2008 a novembro de 2009. Cada amostra foi lavada com 500 ml de PBS, permitindo a sedimentação espontânea e posterior centrifugação dos 30 ml finais do sedimento. O sedimento final foi analisado à microscopia óptica comum. Os níveis de contaminação das três espécies de hortaliças foram obtidos pelas médias mensais de estruturas enteroparasitárias identificadas em cada uma delas, e pelo número total de parasitos identificados, nas amostras de cada feira, horta e supermercado. Aos resultados obtidos, na análise microscópica das amostras, foi aplicado o Teste do Quiquadrado e o Teste Exato de Fisher, para determinar a existência ou não de diferenças estatisticamente significativas entre esses resultados. Foi usado o nível de significância ≤ 0,05. A análise microscópica revelou uma contaminação de 100% das amostras obtidas nas feiras, nas hortas e no supermercado incluídos na pesquisa, não havendo diferença estatística na frequência total de parasitos entre elas. O Strongyloides stercoralis foi o parasito mais prevalente, seguido pelo complexo Entamoeba histolytica/dispar e pelos ancilostomídeos, tanto nas amostras das hortas, quanto nas amostras das feiras e do supermercado. O agrião e a alface apresentaram maior índice de contaminação parasitária que o coentro. Foi caracterizada a influência sazonal sobre a intensidade de parasitos nas hortaliças pesquisadas, pois houve diferença estatística entre os resultados obtidos com uma prevalência maior de parasitos nas amostras de verão, em relação as amostras de inverno. Não houve diferença estatisticamente significativa entre as médias mensais de contaminação das hortaliças comercializadas nas feiras, nas hortas e no supermercado, indicando que, as condições de higiene sob as quais são comercializadas as hortaliças, apesar de importantes para manter suas características organolépticas, tem menor influência sobre os níveis de contaminação parasitária, que parece estar mais associada ao local e condições de cultivo desses vegetais. Esses dados permitem um bom grau de comparação para futuros trabalhos. / The intestinal parasites are an important healthy problem to human population worldwide. The consumption of vegetables is one of the major routes of transmission of this pathogens. This study aimed to determine the frequency and diversity of intestinal parasites transmitted by vegetables sold in the metropolitan region of Belém-PA and its relation to the seasonal climate of the region. It was used 252 samples of three species of vegetables, of which 84 were of lettuce (Lactuca sativacurly variety), 84 were watercress (Nasturtium officinale) and 84 were coriander (Coriandrum sativum) purchased in open markets, gardens and in a supermarket, from November of 2008 to December of 2009. Each samples was washed with 500ml of PBS, permitting the spontaneous sedimentation and centrifuging 30 ml of the final sediment. The final sediment was analyzed in an optical microscope. The levels of contamination of the three species of vegetables were obtained by the monthly average of intestinal parasite structures identified in each vegetable and by the total number of parasites identified in the samples of each open market, garden and supermarket. In the results obtained in the microscopic analysis of samples were applied the Chi-square and Fisher's Exact Test to determine the existence or not of significant differences between these results. It was used the significance level α ≤ 0.05. This microscopic analysis showed a contamination of 100% of the samples at open markets, gardens and supermarket included in the study, there isn’t statistical difference in overall frequency of parasites among them. Strongyloides stercoralis was the most prevalent parasite, followed by complex Entamoeba histolytic / dispar and the hookworms, both in samples from the gardens, as in samples of the open markets and the supermarket. The cress and lettuce had higher rates of parasitic contamination that coriander. It had been characterized seasonal influence on the intensity of parasites in vegetables investigated because there was statistical difference between the results obtained with a higher prevalence of parasites in samples of summer, for the samples of winter. There wasn’t also statistically significant difference between the monthly averages of contamination of vegetables sold in open markets, gardens and supermarket, indicating that the hygienic conditions under which the vegetables are sold, although important to keep their flavors, have less influence on levels of parasitic contamination, which seems to be associated with the place and growing conditions these plants. These datas permit a good level of comparison to future studies.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T15:07:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AspectosMicrobiologicosEpidemiologicos.PDF: 851018 bytes, checksum: f713aeec800e37b90f99491580013653 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-07T15:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AspectosMicrobiologicosEpidemiologicos.PDF: 851018 bytes, checksum: f713aeec800e37b90f99491580013653 (MD5) Previous issue date: 2010 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo descreveu os aspectos epidemiológicos e etiológicos da diarréia aguda no município de Juruti, Pará, Brasil. Foram avaliadas 261 amostras de fezes (170 diarréicas e 91 controles) de pacientes atendidos em Unidades de Saúde Pública, no período de fevereiro a julho de 2009. Para o isolamento de bactérias enteropatogênicas, utilizou-se meios seletivos indicadores e de enriquecimento. A caracterização bioquímica foi realizada utilizando os Sistemas API-20E e a sorologia, através de antisoros polivalentes e monovalentes. Para a detecção das categorias de E. coli diarreiogênicas foram executados dois ensaios de PCR multiplex. A pesquisa de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli e Rotavírus foi executada através da técnica de ELISA, nas amostras de fezes. No exame parasitológico foram utilizados os métodos diretos (salina/Lugol) e sedimentação espontânea. Das 154 amostras positivas (118 diarréicas e 36 controles), 75,4% eram de infecções únicas e 24,6% de infecções mistas. A maioria dos casos incluiu crianças menores de 10 anos de idade (55,9%), sem diferença significante entre os sexos feminino e masculino. Os enteropatógenos mais frequentes no grupo diarréico foram E. histolytica/E. dispar (26%), Shigella spp (15,7%), G. lamblia (13,3%) e E. coli diarreiogênicas (12,8%), com Shigella spp associada à diarréia aguda (p = 0,0028). Quanto às categorias patogênicas de E. coli, a ETEC (7,2%) foi o tipo mais frequente nos casos de diarréia aguda, seguido de EAEC (5,9%). Os agentes menos frequentes nos casos diarréicos foram representados por C. jejuni/C. coli (4,7%), Rotavírus (2,8%), Salmonella Panama, A. hydrophila e A. sóbria (0,5%). Os resultados encontrados fornecem subsídios importantes para a vigilância epidemiológica e ambiental da doença diarréica aguda, no município de Juruti. / The presente study described the epidemiological and etiological aspects of acute diarrhea in Juruti, Pará, Brazil. A total of 261 fecal samples were investigated (diarrheagenic, n = 170 and control, n = 91), from patients attended in Public Health Units in the period from February to July 2009. Samples were investigated for bacterial, Rotavírus and parasitic enteropathogens using microscopic examination, immunological tests (ELISA) and bacterial culture techniques. Two multiplex PCR were designed for the detection of all categories of diarrheagenic Escherichia coli. A total of 154 samples were positive (diarrheagenic, n = 118 and control, n = 36), in which 75,4% were represented for mono infections and 24,6% for mixed infections. Most of cases included children less than 10 years of age (55,9%), which no significant difference were found between female and male. The most common enteropathogens in diarrhoeal samples were E. histolytica/E. dispar (26%), Shigella spp (15,7%), Giardia lamblia (13,3%) and diarrheagenic E. coli (12,8%), from which Shigella spp (p = 0,0028) were shown to be associated to the cases of acute diarrhea. The most frequent categories of E. coli in diarrhoeal cases were ETEC (7,2%) and EAEC (5,9%). The less frequent enteropathogens, in diarrhoeal samples were Campylobacter jejuni/coli (4,7%), Rotavírus (2,8%), Salmonella Panama, A. hydrophila and A. sóbria (0,5%). These results are useful for environmental and epidemiological surveillance of acute diarrhea disease in Juruti.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-07-17T12:28:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_CaracterizacaoAspectosMorfologicos.pdf: 21488596 bytes, checksum: 9f6a3300fdeb56ba3884dda441838581 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-30T14:41:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_CaracterizacaoAspectosMorfologicos.pdf: 21488596 bytes, checksum: 9f6a3300fdeb56ba3884dda441838581 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-30T14:41:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_CaracterizacaoAspectosMorfologicos.pdf: 21488596 bytes, checksum: 9f6a3300fdeb56ba3884dda441838581 (MD5) Previous issue date: 2007 / Este trabalho apresenta resultados obtidos em microscopia de luz (ML), microscopia eletrônica de transmissão (TEM) e microscopia eletrônica de varredura (SEM) do ciclo de vida de algumas espécies de microsporídios (phylum Microsporidia Balbiani, 1882), parasitas da fauna ictiológica da região amazônica. Especial destaque é dado aos aspectos ultra-estruturais das diferentes fases do ciclo de vida, com atenção especial para as células esporais, que são as que caracterizam os diferentes gêneros e as diferentes espécies. O tecido hospedeiro é relacionado aos aspectos de lise, que ocorrem freqüentemente, bem como aspectos ultra-estruturais de xenomas que ocorrem em certas espécies destes parasitas. / This work describes the results in the light (LM), transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM) obtained of the life cycle of some microsporidian species (phylum Microsporidia Balbiani, 1882) parasites of the ichthyofauna of the Amazon region. Emphasis special to the ultrastructural aspects of the different life cycle phases with evidence of the spores was given. The spores and life cycle stages characterized the different genus and species. The ultrastructural organization of the host tissues with the lysed aspects, that frequently occurred, and the ultrastructural aspects of the xenoma, was discussed.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-11T18:28:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_MarcadoresEstresseOxidativo.pdf: 2218109 bytes, checksum: dd36ff4a6226fa6fec76ea7d205bde2e (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-22T14:29:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_MarcadoresEstresseOxidativo.pdf: 2218109 bytes, checksum: dd36ff4a6226fa6fec76ea7d205bde2e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-22T14:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_MarcadoresEstresseOxidativo.pdf: 2218109 bytes, checksum: dd36ff4a6226fa6fec76ea7d205bde2e (MD5) Previous issue date: 2014-11-06 / As alterações no ciclo redox eritrocitário tem sido associadas a fisiopatogenia da malária grave em modelos experimentais e em humanos. Entretanto, poucos estudos avaliaram mudanças no equilibrio redox em pacientes com malária por Plasmodium vivax sem gravidade, que representam a maioria dos casos da doença. Não foram caracterizadas as variações do dano oxidativo e a respectiva resposta antioxidante do hospedeiro humano durante a evolução da doença, quer seja, antes, durante e após a quimioterapia, assim como, não foram identificadas em cada fase, os responsáveis pela geração de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, quer sejam, a degradação do heme, o uso de antimaláricos ou a explosão respiratória de macrófagos. Este estudo objetivou estimar marcadores de dano oxidativo e as defesas antioxidantes assim como, os níveis de primaquina e carboxiprimaquina na malária por P. vivax. Para tanto, foram incluidos 38 pacientes de ambos os sexos, com diagnóstico positivo para malária por P. vivax acompanhados durante 28 dias, nos quais foram realizadas coletas seriais de amostras de sangue antes do tratamento (D0) e após 2(D2), sete (D7) e quatorze dias (D14). O dano oxidativo e a defesa antioxidante foram avaliados pela medida espectrofotométrica da metemoglobina e dos compostos reativos ao ácido tiobarbitúrico e da capacidade antioxidante total e glutationa reduzida, respectivamente. O grupo controle foi composto de 19 voluntários saudáveis pareados em proporção por sexo e idade. A primaquina e seu metabólito foram determinados por cromatografia líquida de alta eficiência. Os resultados indicaram maior incidência da doença em indivíduos do sexo masculino em idade produtiva. Os parâmetros hematológicos mantiveram-se constantes no decorrer do estudo, apesar de monocitose e discreta plaquetopenia. A avaliação bioquímica mostrou redução significativa da fração HDL do colesterol. Os níveis de metemoglobina foram associados ao uso de antimaláricos, pois foram semelhantes ao grupo controle, e aumentaram no decorrer do tratamento. Os compostos reativos ao ácido tiobarbitúrico foram associados a presença de parasitas, pois foram maiores em comparação ao grupo controle, e não variaram de forma significativa após administração dos fármacos. A capacidade antioxidante total e o índice de estresse oxidativo foram semelhantes durante o estudo, assim como, com o grupo controle. Os teores de glutationa reduzida diminuiram signifcativamente no decorrer do experimento em relação ao grupo controle e não houve correlação com a parasitemia. A primaquina não se acumulou significativamente no organismo humano no decorrer do estudo e suas concentrações e da carboxiprimaquina não se associaram a metemoglobinemia e aos níveis de compostos reativos ao ácido tiobarbitúrico. / The changes in redox cycle has been associated with the physiopathology of severity of malaria in experimental models and in humans. However, a few studies evaluated the changes in redox equilibrium of patients with no severe malaria by P.vivax, which comprise the majority of the cases of disease. The variations of oxidative damage and the respective antioxidant response of human host were not compared before, during and after chemotherapy. Also, the mechanisms responsible by the generation of free radical in each phase that is, the heme degradation, respiratory burst of macrophages or antimalarials uses, were not determined. The objective of this study was to estimate the levels of biomarkers of oxidative damage and the respective antioxidant response, as well as primaquine and carboxyprimaquine whole blood levels in malaria by P. vivax. Therefore, were enrolled 38 patients with slide confirmed infection by P. vivax followed by 28 days. Serial blood samples were collected on pre-doses samples (D0) and on D2, D7 and D14. The oxidative damage and the antioxidant defense were estimated by the spectrophotometric measures of thiobarbituric acid reatives substances and methemoglobinemia, and by total antioxidant capacity and reduced glutathione, respectively. The control group consisted of 19 healthy volunteers matched for age and gender ratio. Primaquine and its major metabolite were determined by high performance liquid chromatography. The results revealed that the disease occurred in male patients of working age. Haematological parameters remained constant during the study. Biochemical evaluation showed a significant decrease in HDL-cholesterol levels during the study. Methemoglobinemia was associated with antimalarials uses, because the levels were similar to control group and increased significantly during the treatment. The levels of thiobarbituric acid reatives substances were associated with plasmodium and probably respiratory burst of macrophages, because they were higher than control group on D0, and no significant changes were observed after antimalarials usage. Total antioxidant capacity and oxidative stress levels were similar during the study as well as in the control group. The levels of reduced glutathione decreased significantly during the study and doesn’t be associated with both parasitaemia. Primaquine does not show a significant accumulation, and the concentrations of parent drug and its carboxyl metabolite were not associated with methemoglobinemia and thiobarbituric acid reatives substances levels.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A urbanização determina fortes pressões sobre as populações naturais. A riqueza e a abundância de espécies mais sensíveis à urbanização diminuem, enquanto espécies generalistas e/ou oportunistas tendem a se tornar mais comuns, gerando um processo de homogeneização biótica. Outra mudança importante é representada pelo aumento de níveis de transmissão de parasitos, aspecto que vem sendo investigado, principalmente entre aves. Nesse sentido, o objetivo deste estudo foi avaliar se os indivíduos de Columbina talpacoti respondem de formas diferentes em relação aos ambientes naturais e ambientes urbanizados através da análise de índices hematológicos (razão heterófilos/linfócitos e leucócitos globais), parasitológicos (prevalência e parasitemia de hemoparasitos causadores da malária aviária) e índice de condição corporal. O estudo foi realizado no município de Uberlândia (MG). Foram estabelecidos 4 pontos de coleta dentro da cidade e 7 pontos de coleta na Reserva particular do Clube Caça e Pesca Itororó de Uberlândia. As capturas foram realizadas de março/2016 à outubro/2016, com redes de neblina. As aves foram capturadas e submetidas a procedimentos de coleta de sangue e medições biológicas. A coleta do sangue foi realizada através de venopunção braquial, com uma gota de sangue não heparinizado foi confeccionado o esfregaço sanguíneo, duas gotas de sangue foram acondicionadas em álcool absoluto em microtubos para posterior extração do DNA e investigação de haemosporídeos por PCR. A análise dos dados foi realizada através do teste-t e U-Mann-Whitney para verificar a existência de diferenças significativas entre os parâmetros analisados entre áreas urbanas e naturais. Para avaliar se há correlação nos parâmetros avaliados, os dados foram submetidos a correlação de Pearson e de Spearmann. Apenas a razão de heterófilos/linfócitos, que indica estresse, foi maior para área urbana do que na natural (t=3,673; p<0,05), os demais índices avaliados não apresentaram diferenças significativas. Também não foram observadas diferenças significativas entre os parâmetros avaliados com o sexo. O teste de correlação mostrou que apenas o índice de H/L relacionou-se positivamente com os leucócitos totais (rs=0.394; p<0,05), os demais itens não apresentaram correlação entre si. Estes resultados indicam que os animais estão mais estressados no ambiente urbano, mas que com a disponibilidade alta de recursos alimentares em conjunto com a plasticidade fenotípica dos indivíduos, a condição corporal não se altera em nenhuma das áreas. Além disso, como as infecções avaliadas estão em estágio crônico, os sintomas da doença são brandos e quase inexistentes. / Urbanization creates strong pressures on natural populations. Both richness and abundance of more susceptible species diminish due to urbanization, while generalized and / or opportunistic species tend to become more common, leading to a process known as biotic homogenization. Another important contribution of Urbanization is represented by the increasing rates in parasite transmission, mainly among birds. In this sense, the main purpose of this study was to evaluate how individuals of Columbina talpacoti respond in different special gradients: natural and urbanized environments. Three indices were analyzed: hematological, parasitological (avian malaria prevalence and parasitemia) and body condition. The study was carried out in the city of Uberlândia (MG). There were 4 collection points within the city and 7 collection points in the Clube de Caça e Pesca Itororó de Uberlândia. Captures were carried out from March 2016 to October 2016, by using mist nets, and collecting a blood sample and morphometric measurements from each individual. Blood collection was done through a venipuncture, getting a drop of non-heparinized blood to make three blood smears. Two blood drops were conditioned in absolute alcohol in microtubes for later DNA extraction and PCR procedures. Data analysis was performed using Mann-Whitney test to verify the existence of significant differences between the patterns analyzed between urban and natural areas. The data was submitted to both Pearson and Spearmann correlation test to check for possible correlation among the variables. Only one hematological index (heterophilic / lymphocyte ratio), which indicates stress, was higher for the urban than natural area (t = 3.673, p <0.05). The other indices were not statistically significant. There were also no significant differences between sex identities as well. Only the H/L index was positively related to the total leukocytes (rs = 0.394, p <0.05), shown by the correlation tests. These results indicate that animals are more stressed in the urban environment. Having high food availability coupled with a phenotypic plasticity of individuals, body condition did not change in any of the areas. In addition, since the infections evaluated are in the chronic stage, the symptoms of the disease are mild and almost non-existent. / Dissertação (Mestrado)

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No. of bitstreams: 2 Dissertação - Karolina Martins Ferreira Menezes - 2017.pdf: 2464113 bytes, checksum: 32b27416285d148a8688f05ca977eafa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Amblyomma sculptum belongs to Amblyomma cajennense complex and parasites human beings as well domestic and wild animals. This tick species has a world recognized importance in public and animal health due blood expoliation and transmission of some pathogens such as Rickettsia rickettsia, causal agent of Rocky Mountain Spotted Fever in Brazil. Ticks oriented themselves using chemical stimuli perceived by their sensorial organs. The Haller organ, which is localized in the first leg, has olfactory sensilla which perceive volatile molecules, as the odors. Inside of the sensilla there are neurones that project themselves to olfactory lobes in the synganglion, the central nervous system. In ticks, there is a gap in how the perception of the olfactory information is integrated in the synganglion and this comprehension would allow obtain details that could be used to the development of new control strategies. This work aims to verify the integration between the Haller organ and the synganglion by determining its neuronal projection patterns until the olfactory lobes as well accomplish its three-dimensional reconstruction. Males and females of A. sculptum were immobilized and the Haller organ was excised. The olfactory nerves were filled with one drop of dextran tetramethylrhodamine 1%. The synganglions were dissected in saline, fixed in 4% paraformaldehyde, washed in saline and triton X-100, dehydrated in alcohol series and mounted in glicerol. The synganlions were examined in a fluorescence microscope (Axio Scope.A1) to confirm filling from the peripheral neurons to the synganglion. The olfactory lobes stained were digitalized in a confocal microscope TCS SP8 (Leica) and the series were examined in the Reconstruct software. The olfactory lobes of one male and three females were selected to tracing the edges of each glomerulus in successive optical sessions in order to obtain the 3D reconstruction. The volume was calculated using the same software and their correlation was analyzed by Pearson correlation. The neuronal projections from the Haller organ were confined in the olfactory lobes, which were organized in glomeruli. The number of glomeruli in the males was 26 and 30 in each olfactory lobe examined and in the females varied between 24 and 29. Male and females showed similar glomeruli in both olfactory lobes, meaning they are homologues, when compared intra and intersexually, with a positive correlation between 72% and 95%. Considering the volume, the glomeruli were also similar and no macroglomerulus was identified, as any glomerulus in the male and female were two times bigger than the average volume. The number of specimens evaluated does not allow inferring if the lower number of glomeruli in the females was statistically significant. This work shows, for the first time, the 3D reconstruction of the olfactory lobe in a tick species. The results obtained contribute to understand how ticks process their olfactory information. / Amblyomma sculptum, pertencente ao complexo A. cajennense, parasita humanos, animais domésticos e silvestres. Apresenta importância mundialmente reconhecida na saúde pública e animal por espoliar seus hospedeiros e transmitir patógenos causadores de doenças, como Rickettsia rickettsii agente de Febre Maculosa no Brasil. Os carrapatos orientam-se por estímulos químicos detectados por seus órgãos sensoriais, como o órgão de Haller, localizado no primeiro par de patas, que possui sensilas olfativas capazes de detectarem moléculas voláteis, como os odores. No interior destas sensilas há neurônios que se projetam para os lobos olfativos, organizados em glomérulos, no interior do singânglio, o sistema nervoso central. Em carrapatos, pouco se sabe sobre como a percepção da informação olfativa é integrada no singânglio e esta compreensão permitiria obter mais detalhes sobre a biologia, contribuindo para o desenvolvimento de novas tecnologias de controle. Objetivou-se verificar a integração entre o órgão de Haller e o singânglio por meio da determinação dos padrões de projeção neuronal das sensilas olfativas aos lobos olfativos e da reconstrução tridimensional dos glomérulos. Machos e fêmeas adultos de A. sculptum foram imobilizados, o órgão de Haller seccionado e o nervos olfativos corados com dextran tetrametilrodamina 1%. Os singânglios foram dissecados em PBS, fixados em paraformaldeído 4%, lavados em PBST e PBS, desidratados em séries ascendente de etanol e montados em lâminas com glicerol. Os singânglios foram observados em microscópio de fluorescência Axio Scope.A1 para determinar aqueles onde houve projeção. Os lobos olfativos corados foram digitalizados em microscópio confocal a laser TCS SP8 e as séries de imagens confocais foram avaliadas no programa Reconstruct. Selecionaram-se os lobos olfativos de um macho e três fêmeas para identificação dos glomérulos, marcação manual e numeração, com posterior reconstrução 3D. O programa permitiu o cálculo dos volumes glomerulares que foram analisados por correlação de Pearson. As projeções neuronais originadas nas sensilas olfativas do órgão de Haller estiveram confinadas estritamente aos lobos olfativos, organizados em glomérulos. Os glomérulos no macho variaram entre 26 e 30 e nas fêmeas, entre 24 e 29. Macho e fêmeas apresentaram glomérulos similares, denominados homólogos, nos dois lobos olfativos quando comparados intra- e intersexualmente, com correlação positiva entre 72% e 95%. Com relação aos tamanhos e formas, os glomérulos foram similares e não foram identificados macroglomérulos, uma vez que os glomérulos com maiores volumes no macho e nas fêmeas não apresentaram valores superiores a duas vezes o valor da média. O número de indivíduos avaliados não permitiu inferir se a menor quantidade de glomérulo nas fêmeas foi estatisticamente significativa e, portanto, não se pode afirmar se há dimorfismo sexual. Em carrapatos este foi o primeiro trabalho em que se realizou a reconstrução tridimensional dos lobos olfativos. Os resultados obtidos contribuem para o conhecimento do processamento central da informação olfativa em carrapatos.

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer / Coorientador: Karina dos Santos Paduan / Banca: Reinaldo José da Silva / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Rui Seabra Ferreira Junior / Banca: Lúcio André Viana Dias / Resumo: Hepatozoon spp. são os protozoários intracelulares mais frequentemente encontrados em serpentes. Tendo em vista a variedade de formas parasitando tais animais e as divergências dos dados encontrados em literatura, o objetivo deste estudo foi tentar separar espécies de Hepatozoon de serpentes, testando oligonucleotídeos que amplifiquem regiões genômicas menos conservadas, detectando diferenças entre as espécies, bem como realizar as caracterizações morfológicas, morfométricas e moleculares de Hepatozoon spp. de serpentes naturalmente infectadas. Para tal, foram utilizadas serpentes doadas ao Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) da Universidade Estadual Paulista de Botucatu que, em exames de rotina, mostraram-se positivos para tais parasitas. O sangue foi coletado por punção da veia caudal, foram confeccionados esfregaços sanguíneos e uma alíquota foi congelada a -20°C, para posterior extração do DNA. As caracterizações morfológicas e morfométricas foram realizadas utilizando um software especializado para análise de imagens. Dos 215 espécimes investigados, foram eleitos cinco exemplares de Crotalus durissus terrificus, nos quais foi visualizado um tipo de gamonte em cada espécime. Pela análise morfológica e morfométrica, estes gamontes foram agrupados em três populações. As alterações provocadas por tais parasitas, nas hemácias, também foram analisadas. Para a caracterização molecular das espécies de Hepatozoon através de sequenciamento genético, foram testados sete pares de oligonucleotídeos que amplificam regiões distintas do gene rDNA utilizando-se a técnica da PCR. Os testes realizados apontaram os pares de oligonucleotídeos HepF300/Hep900 e HEMO1/HEMO2 como eficientes em amplificar e caracterizar regiões genômicas Hepatozoon spp. de serpentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatozoon spp. are the most frequent intracellular protozoa found in snakes. Given the variety of forms parasitizing these animals and differences of the data found in literature, the aim of this study was to attempt to separate Hepatozoon species of snakes, testing oligonucleotides that amplify less reliable genomic regions, detecting differences among species, as well as perform the morphological, morphometric and molecular characterization of Hepatozoon spp. of naturally infected snakes. For this purpose, were used snakes donated to Center for the Study of Venoms and Venomous Animals of the São Paulo State University/Botucatu (CEVAP) that, in routine were detected positive for such parasites. Blood was collected by the tail vein puncturing, blood smears were prepared and an aliquot was frozen at -20° C for subsequent DNA extraction. The morphological and morphometric characterization were performed by using a specialized image analysis software. Of the 215 investigated animals, five specimens of Crotalus durissus terrificus were elected, in which were found five parasitic forms that, by morphometric analysis, were grouped into three populations. The changes caused by these parasites in red blood cells were also analyzed. For the molecular characterization of Hepatozoon species through genetic sequencing, were tested seven pairs of primers that amplify different regions of the rDNA gene using the PCR technique. Only the primers HepF300/Hep900 and HEMO1/HEMO2 were efficient in amplifying and characterizing genomic regions of snakes Hepatozoon spp.. The best results were achieved when the sequences amplified from the both primers were analyzed together and the results were associated with the morphology and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A leishmaniose visceral, na sua forma clinica ativa, caracteriza-se por febre de longa duração, hepatoesplenomegalia e caquexia. No Brasil, a letalidade é, em média, de 7% e as principais causas de morte são: hemorragia, comorbidade com doenças imunossupressoras e infecção bacteriana. O mecanismo de aumento de infecção bacteriana na LV não está claro e uma das hipóteses, é que pode haver translocação bacteriana da mucosa intestinal para o lúmen dos vasos sanguíneos e ocasionar uma maior severidade da resposta imuno-inflamatória e com consequente piora clínica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de translocação microbiana em hamsteres infectados experimentalmente com Leishmania (L.) infantum e correlacionar com as alterações histopatológicas encontradas no intestino dos animais infectados. Hamsteres (Mesocricetus auratus) foram infectados intraperitonealmente com 2x107 amastigotas de L. (L.) infantum e eutanasiados após 48, 72 horas e 15, 45 e 90 dias de infecção. Como grupo controle foram utilizados hamsteres inoculados intraperitonealmente com meio de cultura RPMI. Foram coletados: sangue, fezes, baço, intestinos grosso e delgado. Para detecção de amastigotas na mucosa intestinal, foi utilizada a técnica de PCR em tempo real (qPCR), imunohistoquímica e análise histopatológica, sendo que nesta técnica também foram avaliadas alterações histológicas no tecido intestinal. O baço foi utilizado para determinar a carga parasitária através da técnica de Stauber. Para detecção da translocação microbiana ou produtos desde, foi realizada a quantificação de lipopolissacarídeo (LPS) em plasma. Para avaliar a possível mudança da flora bacteriana intestinal, foi realizado sequenciamento bacteriano de amostra de fezes de hamsteres controles e infectados nos vários tempos de infecção. Observamos aumento da carga parasitária em baço e em intestino com o decorrer da infecção, sendo a diferença significativa aos 90 dias de infecção. Paralelamente, observamos aumento de LPS circulante nos animais infectados em diferentes tempos, 48 horas, 72 horas, 45 dias e 90 dias, com diminuição no período intermediário de 15 dias, porém com diferença significante somente aos 90 dias após a infecção em relação ao grupo controle. Alterações histopatológicas foram observadas no intestino grosso e delgado, variando de infiltrado inflamatório leve a grave, enterite, histiocitose e ainda presença de amastigotas. As alterações observadas ocorreram a partir de 48 horas de infecção, diferenciando a população do infiltrado inflamatório entre neutrófilos, linfócitos, e ainda eosinófilos em intestino grosso de animais com 90 dias de infecção. O sequenciamento de DNA bacteriano das fezes mostra que houve alteração no microbioma dos animais, porém não há identidade significante, ou seja, acima de 95% na maioria das bactérias. Concluímos que as alterações de histologia da mucosa, a invasão de amastigotas neste tecido e o aumento do LPS, sugerem que a translocação microbiana é um evento ocorrente durante a infecção por L. (L.) infantum neste modelo experimental. / Visceral leishmaniasis, in its active clinical form, is characterized by long-lasting fever, hepatosplenomegaly and cachexia. In Brazil, the lethality is, on average, 7% and the main causes of death are hemorrhage, comorbidity with immunosuppressive diseases and bacterial infection. The mechanism of increased bacterial infection in LV is unclear and one of the hypotheses is that there may be bacterial translocation of the intestinal mucosa to the lumen of the blood vessels and cause a greater severity of the immune-inflammatory response and consequent clinical worsening. The objective of this work was evaluate the occurrence of microbial translocation in Leishmania (L.) infantum infected-hamsters and correlate with the histopathological changes found in the gut of infected animals. Hamsters (Mesocricetus auratus) were infected intraperitoneally with 2x107 amastigotes of L. (L.) infantum and euthanized after 48, 72 hours and 15, 45 and 90 days of infection. As a control group, hamsters were inoculated intraperitoneally with RPMI culture medium. Were collected: blood, feces, spleen, large and small intestines. To detection amastigotes in intestinal mucosa, real-time PCR (qPCR), immunohistochemistry and histopathological analysis were used, and histological alterations in intestinal tissue were also evaluated. Spleen was used to determine the parasitic load through the Stauber technique. To detection of microbial translocation or products related, was performed quantification of lipopolysaccharide (LPS) in plasma. In order to evaluate the possible change in intestinal bacterial flora, bacterial sequencing of sample faeces from control and infected hamsters was carried. We observed increased parasite load on spleen and intestine as the infection progressed, the difference being significant at 90 days of infection. At the same time, we observed increased circulating LPS in infected animals at different times, 48 hours, 72 hours, 45 days and 90 days, with decrease in the intermediate period of 15 days, howeversignificant difference was observed only at 90 days post-infection in relation to control group. Histopathological changes were observed in the large and small intestine, ranging from mild to severe inflammatory infiltrate, enteritis, histiocytosis, and amastigotes. The changes occurred from 48 hours of infection, differentiating the population of the inflammatory infiltrate between neutrophils, lymphocytes, and even eosinophils in the large intestine of animals with 90 days of infection. |Bacterial sequencing shows that there was a change in the microbiome of the animals, but there is no significant identity, ie, above 95% in most bacteria. We conclude that changes in mucosal histology, invasion of amastigotes in this tissue and increase in LPS, suggest that microbial translocation is an event occurring during L. (L.) infantum infection in this experimental model.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-02Bitstream added on 2014-06-13T20:40:56Z : No. of bitstreams: 1 moco_tc_dr_botib.pdf: 3113609 bytes, checksum: bb55dca1b241f126ee1a2e4127e578fd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Hepatozoon spp. são os protozoários intracelulares mais frequentemente encontrados em serpentes. Tendo em vista a variedade de formas parasitando tais animais e as divergências dos dados encontrados em literatura, o objetivo deste estudo foi tentar separar espécies de Hepatozoon de serpentes, testando oligonucleotídeos que amplifiquem regiões genômicas menos conservadas, detectando diferenças entre as espécies, bem como realizar as caracterizações morfológicas, morfométricas e moleculares de Hepatozoon spp. de serpentes naturalmente infectadas. Para tal, foram utilizadas serpentes doadas ao Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) da Universidade Estadual Paulista de Botucatu que, em exames de rotina, mostraram-se positivos para tais parasitas. O sangue foi coletado por punção da veia caudal, foram confeccionados esfregaços sanguíneos e uma alíquota foi congelada a -20°C, para posterior extração do DNA. As caracterizações morfológicas e morfométricas foram realizadas utilizando um software especializado para análise de imagens. Dos 215 espécimes investigados, foram eleitos cinco exemplares de Crotalus durissus terrificus, nos quais foi visualizado um tipo de gamonte em cada espécime. Pela análise morfológica e morfométrica, estes gamontes foram agrupados em três populações. As alterações provocadas por tais parasitas, nas hemácias, também foram analisadas. Para a caracterização molecular das espécies de Hepatozoon através de sequenciamento genético, foram testados sete pares de oligonucleotídeos que amplificam regiões distintas do gene rDNA utilizando-se a técnica da PCR. Os testes realizados apontaram os pares de oligonucleotídeos HepF300/Hep900 e HEMO1/HEMO2 como eficientes em amplificar e caracterizar regiões genômicas Hepatozoon spp. de serpentes... / Hepatozoon spp. are the most frequent intracellular protozoa found in snakes. Given the variety of forms parasitizing these animals and differences of the data found in literature, the aim of this study was to attempt to separate Hepatozoon species of snakes, testing oligonucleotides that amplify less reliable genomic regions, detecting differences among species, as well as perform the morphological, morphometric and molecular characterization of Hepatozoon spp. of naturally infected snakes. For this purpose, were used snakes donated to Center for the Study of Venoms and Venomous Animals of the São Paulo State University/Botucatu (CEVAP) that, in routine were detected positive for such parasites. Blood was collected by the tail vein puncturing, blood smears were prepared and an aliquot was frozen at -20° C for subsequent DNA extraction. The morphological and morphometric characterization were performed by using a specialized image analysis software. Of the 215 investigated animals, five specimens of Crotalus durissus terrificus were elected, in which were found five parasitic forms that, by morphometric analysis, were grouped into three populations. The changes caused by these parasites in red blood cells were also analyzed. For the molecular characterization of Hepatozoon species through genetic sequencing, were tested seven pairs of primers that amplify different regions of the rDNA gene using the PCR technique. Only the primers HepF300/Hep900 and HEMO1/HEMO2 were efficient in amplifying and characterizing genomic regions of snakes Hepatozoon spp.. The best results were achieved when the sequences amplified from the both primers were analyzed together and the results were associated with the morphology and... (Complete abstract click electronic access below)