A prevalência de patógenos intestinais foi estudada entre os índios da etnia Tapirapé, da Amazônia mato-grossense, por meio de técnicas coproparasitológicas, imunológicas e moleculares. Do total de 1526 amostras, 83,35% apresentaram ao menos um parasito intestinal e 65% tinham mais de um parasito (poliparasitismo). Entamoeba coli foi o mais prevalente (827/1526 - 54,19%). Entamoeba histolytica/dispar (581/1526 - 38,07%), Giardia intestinalis (287/1526 - 18,81%), Blastocystis spp. (257/1526 - 16,84%) e Ancylostoma spp. (293/1526 - 19,20%) também foram freqüentes. Cistos de Giardia intestinalis foram seqüenciados utilizando os genes <font face=\"Symbol\">b-Giardina e gdh. Apenas os assemblages A e B foram encontrados, sendo que o assemblage A foi o mais prevalente. Análise molecular de Blastocystis spp. demonstrou que, por meio do gene SSU-rNA, o subtipo 1 foi o mais dominante entre os Tapirapé, seguido pelos subtipos 2 e 3. Com base nisso, G. intestinalis e Blastocystis spp. são potencialmente zoonóticos. Os resultados corroboram com outros estudos realizados na Amazônia brasileira. / The prevalence of intestinal pathogens was studied in indigenous of the Tapirapé ethnic from Amazon region of Mato Grosso State, using the coproparasitological, immunological and molecular. Of the total 1,526 fecal samples 83.35% had at least one intestinal parasite and 65% had more than one parasite (poliparasitism). The most prevalent parasite was Entamoeba coli (827/1526 - 54.19%). Entamoeba histolytica/dispar (581/1526 - 38, 07%), Giardia intestinalis (287/1526 - 18.81%), Blastocystis spp. (257/1526 - 16.84%) and Ancylostoma spp. (293/1526 -19.20%) were found too. Cysts of G. intestinalis were sequence by <font face=\"Symbol\">b-Giardina and GDH gene. Only assemblages A and B were found and assemblage A was the most prevalent. The molecular characterization of Blastocystis spp. by SSU-rRNA demonstrated that subtype 1 was dominant followed by subtypes 2 and 3. So, G. intestinalis and Blastocystis spp. are potentially zoonotic. The results are in agreement with previous studies conducted in the Brazilian Amazon.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T14:12:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImportanciaAnophelesDarlingi.pdf: 5215794 bytes, checksum: bdef0d9d3cb37a1d41a7c1f3d53e5d79 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-10T15:12:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImportanciaAnophelesDarlingi.pdf: 5215794 bytes, checksum: bdef0d9d3cb37a1d41a7c1f3d53e5d79 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-10T15:12:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImportanciaAnophelesDarlingi.pdf: 5215794 bytes, checksum: bdef0d9d3cb37a1d41a7c1f3d53e5d79 (MD5) Previous issue date: 2010 / Projeto PIATAM Mar / A malária no município de Macapá é principalmente peri urbana, áreas estas caracterizadas por ressaca, pela presença de fragmentos de floresta e assentamentos desordenados (invasões). O objetivo deste estudo foi verificar a importância dos Anopheles darlingi e Anopheles marajoara na transmissão de malária em Macapá. O estudo foi realizado de outubro de 2007 a setembro de 2008, na comunidade de Lagoa dos Índios, Macapá. Foram coletados 4.601 mosquitos, dos quais 3.029 foram Anopheles marajoara (65,8%), 917 Anopheles darlingi (19,9%), 429 Anopheles braziliensis (9,3%), 208 Anopheles triannulatus (4,5%), 18 Anopheles peryassui (0,4%) e cinco Anopheles nuneztovari (0,1%). Apenas 32,8% dos espécimes foram coletadas no intradomicilio (1.511) e 67,2% no peridomicilio (3.090). O Indice de Picada Homem Hora do An. darlingi no intradomicilio variou entre 0 a 6,5 e no peridomicilio de 0 a 22 picadas homem hora. Já para o An. marajoara a variaçao foi de 0 a 22 no intradomicilio e de 0 a 175,5 no peridomicilio. A analise das exúvias e da dissecção de genitália resultaram na confirmaçao das duas espécies estudadas, An. darlingi e An. marajoara, e que o An. marajoara é a única espécie do complexo albitarsis circulante na área. A abundância dos vetores flutuou associada com o padrão sazonal das chuvas. An. darlingi é mais abundante no final e inicio das chuvas, enquanto o An. marajoara esteve presente em alta densidade durante todo o período de chuvas. Dos 4.601 mosquitos testados, 100 foram positivos para plasmódios humanos pelo método de ELISA, resultando em uma taxa de infecção de 2,17%. Dos 3.029 An. marajoara testados 71 (2,34%) foram positivos e dos 917 An. darlingi, 28 (3,05%). Este estudo demonstrou que as duas espécies estudadas mantêm a transmissão de malária durante todo o ano, ratificando assim a importância das mesmas. / Malaria in the municipality of Macapá is mainly peri urban, which are characterized by flooding area, presence of forest fragments and disorganized settlements. The aim of this study was to determine the importance of Anopheles darlingi e Anopheles marajoara in the malaria transmission in Macapá. The study was carried out from October 2007 to September 2008, in the Lagoa dos Índios community, Macapá. It was collected 4,601 mosquitoes, from which 3,029 were Anopheles marajoara (65,8%), 917 Anopheles darlingi (19,9%), 429 Anopheles braziliensis (9,3%), 208 Anopheles triannulatus (4,5%), 18 Anopheles peryassui (0,4%) and 5 Anopheles nuneztovari (0,1%). Only 32.8% (1.511) of the adult mosquitoes were collected indoors and 67.2% (3.090) outdoors. The index of the bites by man and by hour for An. darlingi in the intradomicile had ranged from 0 to 6.5 and in the peridomicile from 0 a 22. As for the An. marajoara the range was from 0 to 22 in the intradomicile and from 0 to 175.5 in the peridomicile. The analysis of the exuvia and the genitalia dissecation had resulted in the confirmation of the two species, An. darlingi and An. marajoara, and that the An. marajoara is the only albitarsis complex specie that is circulating in the study area. The vectors abundance had flutuated associated with the sazonal pattern of the rain. An. darlingi is the most frequent at the beginning and end of the rain, while An. marajoara was present, in high density, during the rainy season. From the 4,601 tested mosquitoes, 100 were positive for human malaria parasites by the ELISA method with a infection index of 2.17%. The infection index for An. marajoara was 2,34% (71/3,029) and for An. darlingi 3.05% (28/917). This study had demonstrated that the two studied species are responsible for the malaria transmission maintenance during the whole year, thus confirming the importance of both.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-10T15:51:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DiagnosticoEpidemiologiaEntamoeba.pdf: 995446 bytes, checksum: ea0b513fd6b22a2126668e5b3c199b15 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-03T15:50:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DiagnosticoEpidemiologiaEntamoeba.pdf: 995446 bytes, checksum: ea0b513fd6b22a2126668e5b3c199b15 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-03T15:50:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DiagnosticoEpidemiologiaEntamoeba.pdf: 995446 bytes, checksum: ea0b513fd6b22a2126668e5b3c199b15 (MD5) Previous issue date: 2008 / Amebíase é a infecção no homem causada pelo protozoário Entamoeba histolytica, apresentam quadros sem manifestações clínicas até graves de elevada morbimortalidade e sendo responsável por milhões de casos de disenteria e abscessos hepáticos a cada ano. Os dados epidemiológicos da amebíase no Brasil estão sendo reavaliados desde que a Entamoeba histolytica (patogênica) foi considerada espécie distinta da Entamoeba dispar (não patogênica). Neste estudo, realizou- se o diagnóstico da amebíase por meio de métodos parasitológicos, pesquisa de antígenos e método molecular em amostras fecais de pacientes residentes no município de Juruti, Pará, Brasil. Foram analisadas 188 amostras, com positividade em 28 (14,89 %) no método imunológico, que foi considerado como padrão ouro. A infecção por E. histolytica foi maior no grupo etário acima de 14 anos (8,51%) que no grupo de 0-14 anos (6,38%), porém sem significância estatística (p > 0,05). Houve discordância nos resultados dos métodos ELISA e coproscópico em 41 amostras (21,81%), com maior número de positivos no teste imunoenzimático. O diagnóstico pelo método de PCR apresentou positividade de 5,88% (3/51), resultado inferior ao observado na microscopia (7,84% - 4/51) e teste de ELISA (11,76% - 6/51). Assim, nossos resultados sugerem que a amebíase intestinal é um problema de saúde pública no município de Juruti. / The amebiasis is a human infection caused by the protozoa Entamoeba histolytica, which can be without any clinical manifestations till severe ones with high morbidity and mortality, and is responsible for millions of dysenteric cases an hepatic abscesses, annually. The epidemiological data of amebiasis in Brazil are under revision and reevaluation since the Entamoeba histolytica (pathogenic) was considered a distinct specie from Entamoeba dispar (non pathogenic). In this study, it was carried out the diagnosis of amebiasis by parasitological and molecular methods and antigen search (ELISA) in stool samples from residents in the municipality of Juruti, Pará state, Brazil. We had analyzed 188 stool samples, with positivity in28 (14,89 %) on the immunological test, which was considered as gold standard. The infection by E. histolytica was higher in the age group over 14 years old (8,51%) than in the one of 0-14 years (6,38%), but it was not showed statistical significance (p >0,05). There was discordance between the results of ELISA and microscopical methods in 41 samples (21,81%), and the immuno enzymatic had detected more positive samples than the other one. The diagnosis by PCR method was positive in 3/51(5,88%), result inferior to the one observed by microscopy (7,84% - 4/51) and by ELISA (11,76% - 6/51). Thus, our results suggest that the intestinal amebiasis is an problem of public health in the municipality of Juruti.

A prevalência de patógenos intestinais foi estudada entre os índios da etnia Tapirapé, da Amazônia mato-grossense, por meio de técnicas coproparasitológicas, imunológicas e moleculares. Do total de 1526 amostras, 83,35% apresentaram ao menos um parasito intestinal e 65% tinham mais de um parasito (poliparasitismo). Entamoeba coli foi o mais prevalente (827/1526 - 54,19%). Entamoeba histolytica/dispar (581/1526 - 38,07%), Giardia intestinalis (287/1526 - 18,81%), Blastocystis spp. (257/1526 - 16,84%) e Ancylostoma spp. (293/1526 - 19,20%) também foram freqüentes. Cistos de Giardia intestinalis foram seqüenciados utilizando os genes <font face=\"Symbol\">b-Giardina e gdh. Apenas os assemblages A e B foram encontrados, sendo que o assemblage A foi o mais prevalente. Análise molecular de Blastocystis spp. demonstrou que, por meio do gene SSU-rNA, o subtipo 1 foi o mais dominante entre os Tapirapé, seguido pelos subtipos 2 e 3. Com base nisso, G. intestinalis e Blastocystis spp. são potencialmente zoonóticos. Os resultados corroboram com outros estudos realizados na Amazônia brasileira. / The prevalence of intestinal pathogens was studied in indigenous of the Tapirapé ethnic from Amazon region of Mato Grosso State, using the coproparasitological, immunological and molecular. Of the total 1,526 fecal samples 83.35% had at least one intestinal parasite and 65% had more than one parasite (poliparasitism). The most prevalent parasite was Entamoeba coli (827/1526 - 54.19%). Entamoeba histolytica/dispar (581/1526 - 38, 07%), Giardia intestinalis (287/1526 - 18.81%), Blastocystis spp. (257/1526 - 16.84%) and Ancylostoma spp. (293/1526 -19.20%) were found too. Cysts of G. intestinalis were sequence by <font face=\"Symbol\">b-Giardina and GDH gene. Only assemblages A and B were found and assemblage A was the most prevalent. The molecular characterization of Blastocystis spp. by SSU-rRNA demonstrated that subtype 1 was dominant followed by subtypes 2 and 3. So, G. intestinalis and Blastocystis spp. are potentially zoonotic. The results are in agreement with previous studies conducted in the Brazilian Amazon.

Poucos estudos quantificam o risco relativo da saúde humana na transmissão spillover de doenças zoonóticas de populações de animais silvestres, estudos cruciais na compreensão da história natural das zoonoses. Coccídios, em particular os da família Sarcocystidae, são importantes agentes transmissíveis na interface homens - animais domésticos e silvestres. O diagnóstico da coccidiose é prejudicado pela limitada disponibilidade de amostras resultantes de populações animais de espécies em risco de extinção. O objetivo deste estudo foi detectar através da amplificação do locus ITS-1, protozoários das subfamílias Sarcocystinae e Toxoplasmatinae em amostras teciduais de Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo e L. pardalis, depositados em coleções biológicas do Rio Grande do Sul, Brasil. Um objetivo adicional foi a obtenção de informações que permitissem avaliar o papel epidemiológico dos protozoários no ciclo silvestre dos parasitas e seu possível impacto sobre as populações de animais silvestres e na saúde pública. Noventa pequenos felídeos neotropicais de vida livre, representando seis espécies, foram amostrados. Destes, 31 felídeos (34,4%), de todas as seis espécies, foram positivos para Toxoplasma gondii e DNA foi detectado em 63 das 433 (14,6%) amostras de tecidos primários coletados a partir de língua (28,6%), cérebro (18,6%), músculo esquelético (17,1%), musculatura ocular (13,6%), globo ocular (13,6%), coração (11,1%), diafragma (5,4%) e humor vítreo (4,5%). Doze amostras primárias positivas ao T. gondii foram genotipadas com os marcadores moleculares SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22- 8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3 e a técnica multilocus PCR-RFLP, a amostra Py#36m foi totalmente caracterizada como do tipo I com alelo II no BTUB e um novo genótipo atípico Py#21M, ambos isolados de Puma yagouaroundi e nunca descrito no Brasil. Nove outras amostras tiveram caracterização parcial. Treze dos 90 felídeos foram positivos para Sarcocystis spp. (14,4%) e outros 18 felídeos, representando cinco espécies albergaram S. felis-like [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) e Lc (#82m, #76m)]. Um único felino de L. pardalis foi negativo. DNA do parasita foi detectado em 11,8% dos tecidos examinados (51/433): musculatura esquelética (26,5%), língua (23,2%), musculatura ocular (13,6%), diafragma (10,7%), cérebro (2,3%), coração (1,6%) e globo ocular (4,5%), nenhuma das 44 amostras de humor vítreo foi positiva. Esta é a primeira detecção e caracterização genética de T. gondii e de S. felislike em felídeos silvestres brasileiros de vida livre, demonstrando a presença destes agentes no ciclo silvestre e, a potencial transmissibilidade ao homem e a outros animais domésticos e silvestres. O uso de amostras de tecidos de animais silvestres depositados em coleções biológicas para estudos epidemiológicos de doenças monstraram serem de grande utilidade. / Few studies have quantified the relative risk of human health from spillover of zoonotic diseases from populations of wild animals; these studies are crucial for understanding the natural history of zoonoses. Coccidia, particularly from the family Sarcocystidae, are important transmissible agents at the interface of man and domestic and wild animals. The diagnosis of Coccidiosis is hampered by the limited availability of samples resulting from protection of natural populations of the species at risk of extinction. The aim of this study was to detected, by amplification of ITS-1 locus, protozoa from the subfamilies Sarcocystinae and Toxoplasmatinae in tissue samples from Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo and L. pardalis, deposited in biological collections of the State of Rio Grande do Sul, Brazil. An additional aim was to obtain information that would enable assessment of the epidemiological role of the protozoa in the sylvatic cycle of the parasite, and its possible impact on wildlife populations and public health. Ninety free-living small wild felines, representing 6 species, were sampled. Of these, 31 felids (34.4%) of all six species were positive for T. gondii and DNA was detected in 63 of 433 (14.6%) primary tissue samples collected from the tongue (28.6%), brain (18.6%), skeletal muscle (17.1%), ocular muscles (13.6%), eye (13.6%), heart (11.1%), diaphragm (5.4%) and vitreous humor (4.5%). Twelve primary samples positive for T. gondii were genotyped with molecular markers SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, and apical CS3. Using the multilocus PCR-RFLP technique, sample Py#36m was fully genotyped as Type I with allele II in locus BTUB, and a new atypical Py#21M, both isolates from Puma yagouaroundi and never described in Brazil. Nine other samples had a partial characterization. Thirteen of the 90 felids were positive for Sarcocystis spp. (14.4%) and another 18 felids, representing 5 species, harbored S. felis-like organisms [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) and Lc (#82m, #76m)]. A single felid of L. pardalis was negative. Parasite DNA was detected in 11.8% (51/433) of the tissues examined: muscle skeletal (26.5%), tongue (23.2%), ocular muscles (13.6%), diaphragm (10.7 %), brain (2.3%), heart (1.6%) and eye (4.5%); none of the 44 samples of vitreous humor was positive. This is the first description of the detection and genetic characterization of T. gondii and S. felis-like in free-living Brazilians wild felids, demonstrating the presence of these agents in the sylvatic cycle, and the potential transmition to humans and other domestic and wild animals. The use of tissue samples from wild animals deposited in biological collections for epidemiological studies of diseases demonstrated to be of great utility.

Poucos estudos quantificam o risco relativo da saúde humana na transmissão spillover de doenças zoonóticas de populações de animais silvestres, estudos cruciais na compreensão da história natural das zoonoses. Coccídios, em particular os da família Sarcocystidae, são importantes agentes transmissíveis na interface homens - animais domésticos e silvestres. O diagnóstico da coccidiose é prejudicado pela limitada disponibilidade de amostras resultantes de populações animais de espécies em risco de extinção. O objetivo deste estudo foi detectar através da amplificação do locus ITS-1, protozoários das subfamílias Sarcocystinae e Toxoplasmatinae em amostras teciduais de Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo e L. pardalis, depositados em coleções biológicas do Rio Grande do Sul, Brasil. Um objetivo adicional foi a obtenção de informações que permitissem avaliar o papel epidemiológico dos protozoários no ciclo silvestre dos parasitas e seu possível impacto sobre as populações de animais silvestres e na saúde pública. Noventa pequenos felídeos neotropicais de vida livre, representando seis espécies, foram amostrados. Destes, 31 felídeos (34,4%), de todas as seis espécies, foram positivos para Toxoplasma gondii e DNA foi detectado em 63 das 433 (14,6%) amostras de tecidos primários coletados a partir de língua (28,6%), cérebro (18,6%), músculo esquelético (17,1%), musculatura ocular (13,6%), globo ocular (13,6%), coração (11,1%), diafragma (5,4%) e humor vítreo (4,5%). Doze amostras primárias positivas ao T. gondii foram genotipadas com os marcadores moleculares SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22- 8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3 e a técnica multilocus PCR-RFLP, a amostra Py#36m foi totalmente caracterizada como do tipo I com alelo II no BTUB e um novo genótipo atípico Py#21M, ambos isolados de Puma yagouaroundi e nunca descrito no Brasil. Nove outras amostras tiveram caracterização parcial. Treze dos 90 felídeos foram positivos para Sarcocystis spp. (14,4%) e outros 18 felídeos, representando cinco espécies albergaram S. felis-like [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) e Lc (#82m, #76m)]. Um único felino de L. pardalis foi negativo. DNA do parasita foi detectado em 11,8% dos tecidos examinados (51/433): musculatura esquelética (26,5%), língua (23,2%), musculatura ocular (13,6%), diafragma (10,7%), cérebro (2,3%), coração (1,6%) e globo ocular (4,5%), nenhuma das 44 amostras de humor vítreo foi positiva. Esta é a primeira detecção e caracterização genética de T. gondii e de S. felislike em felídeos silvestres brasileiros de vida livre, demonstrando a presença destes agentes no ciclo silvestre e, a potencial transmissibilidade ao homem e a outros animais domésticos e silvestres. O uso de amostras de tecidos de animais silvestres depositados em coleções biológicas para estudos epidemiológicos de doenças monstraram serem de grande utilidade. / Few studies have quantified the relative risk of human health from spillover of zoonotic diseases from populations of wild animals; these studies are crucial for understanding the natural history of zoonoses. Coccidia, particularly from the family Sarcocystidae, are important transmissible agents at the interface of man and domestic and wild animals. The diagnosis of Coccidiosis is hampered by the limited availability of samples resulting from protection of natural populations of the species at risk of extinction. The aim of this study was to detected, by amplification of ITS-1 locus, protozoa from the subfamilies Sarcocystinae and Toxoplasmatinae in tissue samples from Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo and L. pardalis, deposited in biological collections of the State of Rio Grande do Sul, Brazil. An additional aim was to obtain information that would enable assessment of the epidemiological role of the protozoa in the sylvatic cycle of the parasite, and its possible impact on wildlife populations and public health. Ninety free-living small wild felines, representing 6 species, were sampled. Of these, 31 felids (34.4%) of all six species were positive for T. gondii and DNA was detected in 63 of 433 (14.6%) primary tissue samples collected from the tongue (28.6%), brain (18.6%), skeletal muscle (17.1%), ocular muscles (13.6%), eye (13.6%), heart (11.1%), diaphragm (5.4%) and vitreous humor (4.5%). Twelve primary samples positive for T. gondii were genotyped with molecular markers SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, and apical CS3. Using the multilocus PCR-RFLP technique, sample Py#36m was fully genotyped as Type I with allele II in locus BTUB, and a new atypical Py#21M, both isolates from Puma yagouaroundi and never described in Brazil. Nine other samples had a partial characterization. Thirteen of the 90 felids were positive for Sarcocystis spp. (14.4%) and another 18 felids, representing 5 species, harbored S. felis-like organisms [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) and Lc (#82m, #76m)]. A single felid of L. pardalis was negative. Parasite DNA was detected in 11.8% (51/433) of the tissues examined: muscle skeletal (26.5%), tongue (23.2%), ocular muscles (13.6%), diaphragm (10.7 %), brain (2.3%), heart (1.6%) and eye (4.5%); none of the 44 samples of vitreous humor was positive. This is the first description of the detection and genetic characterization of T. gondii and S. felis-like in free-living Brazilians wild felids, demonstrating the presence of these agents in the sylvatic cycle, and the potential transmition to humans and other domestic and wild animals. The use of tissue samples from wild animals deposited in biological collections for epidemiological studies of diseases demonstrated to be of great utility.

Poucos estudos quantificam o risco relativo da saúde humana na transmissão spillover de doenças zoonóticas de populações de animais silvestres, estudos cruciais na compreensão da história natural das zoonoses. Coccídios, em particular os da família Sarcocystidae, são importantes agentes transmissíveis na interface homens - animais domésticos e silvestres. O diagnóstico da coccidiose é prejudicado pela limitada disponibilidade de amostras resultantes de populações animais de espécies em risco de extinção. O objetivo deste estudo foi detectar através da amplificação do locus ITS-1, protozoários das subfamílias Sarcocystinae e Toxoplasmatinae em amostras teciduais de Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo e L. pardalis, depositados em coleções biológicas do Rio Grande do Sul, Brasil. Um objetivo adicional foi a obtenção de informações que permitissem avaliar o papel epidemiológico dos protozoários no ciclo silvestre dos parasitas e seu possível impacto sobre as populações de animais silvestres e na saúde pública. Noventa pequenos felídeos neotropicais de vida livre, representando seis espécies, foram amostrados. Destes, 31 felídeos (34,4%), de todas as seis espécies, foram positivos para Toxoplasma gondii e DNA foi detectado em 63 das 433 (14,6%) amostras de tecidos primários coletados a partir de língua (28,6%), cérebro (18,6%), músculo esquelético (17,1%), musculatura ocular (13,6%), globo ocular (13,6%), coração (11,1%), diafragma (5,4%) e humor vítreo (4,5%). Doze amostras primárias positivas ao T. gondii foram genotipadas com os marcadores moleculares SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22- 8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3 e a técnica multilocus PCR-RFLP, a amostra Py#36m foi totalmente caracterizada como do tipo I com alelo II no BTUB e um novo genótipo atípico Py#21M, ambos isolados de Puma yagouaroundi e nunca descrito no Brasil. Nove outras amostras tiveram caracterização parcial. Treze dos 90 felídeos foram positivos para Sarcocystis spp. (14,4%) e outros 18 felídeos, representando cinco espécies albergaram S. felis-like [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) e Lc (#82m, #76m)]. Um único felino de L. pardalis foi negativo. DNA do parasita foi detectado em 11,8% dos tecidos examinados (51/433): musculatura esquelética (26,5%), língua (23,2%), musculatura ocular (13,6%), diafragma (10,7%), cérebro (2,3%), coração (1,6%) e globo ocular (4,5%), nenhuma das 44 amostras de humor vítreo foi positiva. Esta é a primeira detecção e caracterização genética de T. gondii e de S. felislike em felídeos silvestres brasileiros de vida livre, demonstrando a presença destes agentes no ciclo silvestre e, a potencial transmissibilidade ao homem e a outros animais domésticos e silvestres. O uso de amostras de tecidos de animais silvestres depositados em coleções biológicas para estudos epidemiológicos de doenças monstraram serem de grande utilidade. / Few studies have quantified the relative risk of human health from spillover of zoonotic diseases from populations of wild animals; these studies are crucial for understanding the natural history of zoonoses. Coccidia, particularly from the family Sarcocystidae, are important transmissible agents at the interface of man and domestic and wild animals. The diagnosis of Coccidiosis is hampered by the limited availability of samples resulting from protection of natural populations of the species at risk of extinction. The aim of this study was to detected, by amplification of ITS-1 locus, protozoa from the subfamilies Sarcocystinae and Toxoplasmatinae in tissue samples from Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo and L. pardalis, deposited in biological collections of the State of Rio Grande do Sul, Brazil. An additional aim was to obtain information that would enable assessment of the epidemiological role of the protozoa in the sylvatic cycle of the parasite, and its possible impact on wildlife populations and public health. Ninety free-living small wild felines, representing 6 species, were sampled. Of these, 31 felids (34.4%) of all six species were positive for T. gondii and DNA was detected in 63 of 433 (14.6%) primary tissue samples collected from the tongue (28.6%), brain (18.6%), skeletal muscle (17.1%), ocular muscles (13.6%), eye (13.6%), heart (11.1%), diaphragm (5.4%) and vitreous humor (4.5%). Twelve primary samples positive for T. gondii were genotyped with molecular markers SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, and apical CS3. Using the multilocus PCR-RFLP technique, sample Py#36m was fully genotyped as Type I with allele II in locus BTUB, and a new atypical Py#21M, both isolates from Puma yagouaroundi and never described in Brazil. Nine other samples had a partial characterization. Thirteen of the 90 felids were positive for Sarcocystis spp. (14.4%) and another 18 felids, representing 5 species, harbored S. felis-like organisms [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) and Lc (#82m, #76m)]. A single felid of L. pardalis was negative. Parasite DNA was detected in 11.8% (51/433) of the tissues examined: muscle skeletal (26.5%), tongue (23.2%), ocular muscles (13.6%), diaphragm (10.7 %), brain (2.3%), heart (1.6%) and eye (4.5%); none of the 44 samples of vitreous humor was positive. This is the first description of the detection and genetic characterization of T. gondii and S. felis-like in free-living Brazilians wild felids, demonstrating the presence of these agents in the sylvatic cycle, and the potential transmition to humans and other domestic and wild animals. The use of tissue samples from wild animals deposited in biological collections for epidemiological studies of diseases demonstrated to be of great utility.

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Destas, pelo menos as três últimas são incriminadas como vetores de malária na Amazônia brasileira. O objetivo deste estudo foi realizar identificação molecular de espécies do complexo An. albitarsis, por análise da seqüências do ITS2 do rDNA, com vistas a analisar sua importância na transmissão de malária nos municípios de Macapá, Amapá e Peixe-Boi, Pará, inclusive investigando pela primeira vez a ocorrência do An. albitarsis F nestas duas áreas epidemiologicamente distintas: a primeira com histórico de alto risco de transmissão de malária e a segunda não. O estudo foi realizado entre janeiro de 2009 e abril de 2010, e consistiu de capturas de anofelinos de 12 horas de duração (ecostofase) no peridomicílio. Todas as fêmeas coletadas foram morfologicamente identificadas e apenas os An. albitarsis s.l. tiveram cabeça e tórax separadas para análise da infecção natural por ELISA; ovários para análise de paridade e patas, asas e carcaça para identificação molecular. Em Macapá foram realizadas seis coletas, obtendo-se um total de 584 anofelinos, sendo 366 An. albitarsis s.l. (62,7%), 167 An. darlingi (28,6%), 33 An. triannulatus s.l (5,6%), 15 An. braziliensis (2,6%) e 3 An. nuneztovari (0,5%). Pela PCR foi possível visualizar a banda específica de An. marajoara em 320 espécimes dos An. albitarsis s.l testados. Do restante, 33 foram negativos e 13 amplificaram um fragmento de ~490 pb nos iniciadores empregados, não permitindo chegar ao diagnóstico específico. O An. marajoara apresentou características biológicas e comportamentais que ratificam sua importância epidemiológica na transmissão de malária em Macapá, tais como: ser a espécie mais prevalente, com maior proporção de fêmeas paridas (73,0%), e portanto com maiores chances de se infectarem com o plasmódio, ocorrer tanto na estação menos quanto na mais chuvosa, e apresentar atividade hematofágica durante toda a ecostofase, alem disso, foi encontrado naturalmente infectado por P. vivax e P. falciparum (taxa de infecção natural de 3,1%). Em Peixe-Boi, foram capturados 43 anofelinos: An. triannulatus s.l (20 espécimes, 46,5 %), An. albitarsis s.l. (13: 30,2 %), An. darlingi (8: 18,6%), e An. nuneztovari (2: 4,7%). Todos os An. albitarsis s.l. coletados foram identificados pela ITS2 como An. oryzalimnetes. Nenhum deles foi encontrado infectado pelos plasmódios testados, e a maioria das fêmeas era parida (84,6%). São necessários levantamentos entomológicos sistemáticos que analisem a importância deste anofelino na transmissão de malária na cidade. O An. albitarsis F não foi encontrado nas duas áreas estudadas. Nossos resultados contribuem para o entendimento da epidemiologia da malária na região Amazônica brasileira. / Members of Anopheles cryptic species complexes may exhibit behavioral differences among them, the susceptibility to malaria infection, and resistance to insecticides, thus, the specific identification has epidemiological relevance, which is not always possible by morphological criteria. Alternative methods have been employed such as those that analyze highly conserved regions of ribosomal DNA, which varies among species, known as internal transcribed spacer (ITS). Anopheles albitarsis complex is currently composed of six species: An. albitarsis s.s., An. oryzalimnetes, An. albitarsis F, An. marajoara, An. deaneorum and An. janconnae. At least the last three are incriminated as malaria parasite vectors in the Brazilian Amazon. The aim of this study was to perform molecular identification of An. albitarsis complex species, for analysis of ITS2 rDNA sequences, in order to assess their importance in malaria transmission in the cities of Macapá, Amapa and Peixe-Boi, Para, including investigating the first time the occurrence of An. Albitarsis F in two epidemiologically distinct areas: the first with a history of high risk of malaria transmission and the second not (Peixe-Boi). All-night human landing catches of mosquitoes were carried out in the peridomestic environment, from January 2009 and April 2010. The females collected were morphologically identified and only An. albitarsis s.l. was dissected: head and thorax were separated for analysis of natural infection by ELISA; ovaries for parity analysis and the carcass, legs and wings for molecular identification. In Macapá were collected 584 mosquitoes: 366 An. albitarsis s.l. (62.7%), 167 An. darlingi (28.6%), 33 An. triannulatus s.l. (5.6%), 15 An. braziliensis (2.6%) and 3 An. nuneztovari (0.5%). It was possible to visualize the specific band An. marajoara in 320 specimens of An. albitarsis s.l. tested. Of the remainder, 33 were negative and 13 amplified a fragment of ~ 490pb, not allowing to reach the specific diagnosis. The An. marajoara specimens showed biological and behavioral characteristics that confirm their epidemiological importance in malaria transmission in Macapa, such as being the most prevalent species, with a higher proportion of parous females (73.0%), and therefore with the greatest chances of infected with Plasmodium, occur in both seasons (dry and wet), presenting biting activity in all hours worked, moreover, was found infected by P.vivax and P. falciparum (natural infection rate of 3.1%). In Peixe-Boi, were captured 43 anophelines: An. triannulatus s.l. (20 specimens, 46.5%), An. albitarsis s.l. (13, 30.2%) An. darlingi (8, 18.6%), and An. nuneztovari (2, 4.7%). All An. albitarsis s.l. collected were identified by ITS2 as An. oryzalimnetes. None was found infected by Plasmodium, and the vast majority was parous females (84.6%). Systematic entomological surveys are needed to analyse the importance of An. oryzalimnetes in malaria transmission in the city. The An. albitarsis F was not found in the two areas studied. Our results contribute to our understanding of the epidemiology of malaria in the Brazilian Amazon region.

O gênero Leishmania apresenta espécies capazes de desenvolver doenças de grande importância para a saúde pública, as leishmanioses, que apresentam prevalência mundial de 12 milhões de pessoas. Quando os parasitos entram em contato com o hospedeiro humano passam por um processo de metaciclogênese adquirindo capacidade de interagir com os macrófagos. Inúmeras atividades biológicas são desencadeadas pela ativação de sistemas de transdução de sinais, onde as proteínas cinases e fosfatases desempenham papel fundamental. A proteína cinase CK2 parece estar presente em todas as células eucarióticas (núcleo, citoplasma e superfície). É caracterizada como enzima serina/treonina cinase, embora também seja capaz de fosforilar resíduos de tirosina em suas proteínas-alvo. No presente trabalho, demonstramos que o principal inibidor da CK2, TBB, foi capaz de inibir o crescimento de formas promastigotas de L. donovani e mostrou um mecanismo de ação irreversível, entretanto não foi capaz de induzir apoptose nas formas promastigotas de L. donovani. O pré-tratamento dos parasitos e macrófagos, assim como a adição do TBB durante o processo de infecção induziram uma redução significativa no número de amastigotas por macrófagos possivelmente pelo mecanismo de morte celular programada demosntrada pela técnica do TUNEL. O tratamento de macrófagos com TBB não induziram o aumento de óxido nítrico. Ensaios de imunofluorescência demonstraram a presença de CK2&#945; em promastigotas. Macrófagos não infectados demonstraram pouca marcação para CK2&#945;. Após a interação, a enzima mostrou-se distribuída preferencialmente na periferia dos macrófagos. Os dados do trabalho sugerem que a CK2 é uma importante enzima para a atividade biológica da Leishmania donovani, tendo seu estudo importante relevância para a descoberta de novos alvos terapêuticos. / The genus Leishmania contains multiple species that are responsible for a group of diseases, leishmaniasis. Current estimates suggest that 12 million people are infected. When parasites enter a human host, they undergo metacyclogenesis and acquire the ability to interact with macrophages. This interaction activites signal transduction pathways inducing numerous biological activities, including protein kinase CK2. CK2 has been observed in all eukaryotic cells residing in the nucleus, the cytoplasm and on the cell surface. It appears to have an essential function and recognizes serine/threonine or tyrosine residues in target proteins for phosphorylation. In the present study, we demonstrate that the treatment of L. donovani promastigotes with TBB resulted in inhibition of cell growth and showed an irreversible mechanism of action, however was not able to induce apoptosis in L. donovani promastigotes. The pre-treatment of promastigotes and macrophages, as well as the addition of TBB during infection induced a significant reduction in the number of amastigotes per macrophages, possibly via the mechanism of programmed cell death showed by TUNEL technique. Treatment of macrophages with TBB did not induce the increase of nitric oxide. Immunofluorescence assays demonstrated the presence of CK2&#945; distributed throughout the surface the promastigotes. Uninfected macrophages showed little to no CK2&#945;. After initiating the interaction of parasites with macrophages, CK2&#945; was observed distributed preferentially in the nucleus of macrophages. Job data suggest that CK2 is an important enzyme for the biological activity of Leishmania donovani, and its study important relevance to the discovery of new therapeutic targets.

Hemoparasitos do filo Apicomplexa merecem destaque devido ao impacto que podem ter na conservação da biodiversidade dos mamíferos. O presente estudo objetivou avaliar a ocorrência de agentes Piroplasmida (Cytauxzoon, Theileria e Babesia) e Hepatozoon spp., utilizando o Exame Microscópico Convencional (EMC) e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), e identificar os carrapatos presentes em mamíferos silvestres destinados ao LAPAS-UFU, CETAS-GO/IBAMA e CETAS-BH/IBAMA. Obteve-se 152 amostras de sangue total e realizou-se a PCR para Hepatozoon spp., com a utilização dos primers HepF300/Hep900, Hep2F/Hep2R e HAM-1/HPFR2, e para a ordem Piroplasmida, realizou-se a PCR com auxílio dos primers BAB- 33-47/ BAB432-439, PIRO 1F/PIRO 5R. Com punção de sangue periférico, confeccionou-se 352 extensões de 123 animais. Pelo EMC, não foram observados gamontes de Hepatozoon spp., mas pela PCR obteve-se 5,2% de positividade (oito positivos). Foram obtidos quatro novos haplótipos de Hepatozoon canis e Hepatozoon felis nos mamíferos de espécies lobo-guará (Chrysocyon brachyurus), raposa-do-campo (Lycalopex vetulus), irara (Eira barbara) e onça-parda (Puma concolor). Para os piroplasmas, pelo EMC e PCR, obteve-se 34,9% (43 animais positivos) e 26,3% (40 animais positivos), respectivamente. Foram obtidos três novos haplótipos de espécies de piroplasmas, sendo sequências similares à Theileria cervi em veado-catingueiro, Theileria equi em anta e Cytauxzoon felis em jaguatirica. Foram identificadas 432 espécimes, de 30 animais. Os carrapatos identificados foram: Amblyomma nodosum, A. parvum, A. ovale, A. sculptum, A. longirostre, A. dubidatum, Rhipicephalus microplus e R. sanguineus. Além disso, outros hemoparasitos foram observados em microscopia óptica, como Ehrlichia spp. em 23 animais (18,6%) e microfilárias em dois indivíduos de espécie Coendou prehensilis (ouriço-cacheiro). O conjunto de informações trazidas por este trabalho comprova a abundância de hemoparasitos que mamíferos brasileiros podem albergar. Além disso, algumas espécies de carrapatos identificados foram determinantes para inferir possíveis modos de transmissão de hemoparasitos observados nos animais. Sobre o resultado obtido pelo uso das técnicas de diagnóstico, a PCR, aliada ao sequenciamento, mostrou-se mais precisa que o EMC para identificação de espécies de hemoparasitos-alvo deste trabalho. / Haemoparasites belonging to filum Apicomplexa deserve attention because can affect the conservation of mammals’s biodiversity. This work aimed to avalue the occurencce of Piroplasmida agents (Cytauxzoon, Theileria e Babesia) e Hepatozoon spp. using Convencional Microscopic Exam (CME) and Polymerase Chain Reaction (PCR) and indetify ticks on wild mammals belonging to LAPAS-UFU, CETAS-GO/IBAMA e CETAS-BH/IBAMA. On total, this work obtained 152 total blood samples that were submited to PCR for Hepatozoon spp. with primers HepF300/Hep900, Hep2F/Hep2R e HAM-1/HPFR2, and for Piroplasmida agents, PCR was done using primers BAB- 33-47/ BAB432-439, PIRO 1F/PIRO 5R. To exam slides on optic microscope, was used peripheral samples of 123 mammals. There wasn’t observed gamonts of Hepatozoon spp. on blood slides, but on PCR was observed prevalence of 5,2% (eight positive mammals). From these, was obtained four new haplotypes of Hepatozoon spp. like similar sequence of Hepatozoon canis in maned-wolf (Chrysocyon brachyurus) and hoary fox (Lycalopex vetulus) and similar sequence of Hepatozoon felis in tayra (Eira barbara) and puma (Puma concolor). For Piroplasmida agents, the CME and PCR results were 34,9% (43 positive mammlas) and 26,3% (40 positive mammals), respectively. There was obtained three new haplotypes of Piroplasmida agents, being similar sequences of Theileria cervi in brown brocket deer (Mazama gouazoubira), similar sequence of Theileria equi in brazilian tapir (Tapirus terrestris) and similar sequence of Cytauxzoon felis in ocelot (Leopardus pardalis). There was identified 432 specimnes of ticks on 30 mammals. The species were Amblyomma nodosum, A. parvum, A. ovale, A. sculptum, A. longirostre, A. dubidatum, Rhipicephalus microplus e R. sanguineus. Besides this results, other haemoparasites were observed on optic microscope, like Ehrlichia spp. in 23 mammals (18,6%) and microfilaria in two mammals of the species Coendou prehensilis (brazilian porcupine). The information gathered by this work confirms the abundance of haemoparasites that the Brazilian mammals can harbor. In addition, some species of ticks identified were determinant to infer possible ways of transmitting hemoparasites identified in mammals. The result obtained by the use of molecular diagnostic techniques (PCR and sequencement) was more accurate than the CME for identification of hemoparasites on wild mammals of this work. / Dissertação (Mestrado)