Nós investigamos os efeitos da saliva de Lutzomyia longipalpis capturados no campo e colonizados em laboratório, na evolução da lesão e imunomodulação da infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis, uma espécie que é endêmica na América do Sul, onde causa Leishmaniose Cutânea, Leishmaniose Cutânea Disseminada Bordeline e Leishmaniose Cutânea Difusa Anérgica, com conseqüências graves aos pacientes. Com o intuito de comparar o efeito dos dois tipos de extrato de glândula salivar, camundongos C57BL/6 foram inoculados subcutaneamente no coxim plantar das patas traseiras e nas orelhas com 106 formas promastigotas de Leishmania (L.) amazonensis na presença de extrato de glândula salivar de vetores de captura e de colônia. O tamanho da lesão foi significantemente menor nos camundongos infectados com extrato de glândula salivar de vetores capturados, o que também determinou uma infiltração menos proeminente de macrófagos nas lesões e uma resposta Th2 mais branda quando comparada com aqueles inoculados com extrato de glândula salivar de vetores colonizados. Recentemente, foi mostradas diferenças nos compostos protéicos das glândulas salivares que poderiam parcialmente justificar a expressão da lesão. Portanto, nossos achados ressaltam que a extrato de glândula salivar de flebótomos provavelmente não desempenha um papel importante na exacerbação da infecção por Leishmania já que a transmissão natural do parasito ocorre através de vetores selvagens e não através de vetores colonizados em laboratório / We investigated the effects of Lutzomyia longipalpis saliva of vectors captured in the field and colonized in laboratory on the lesion evolution and immunomodulation of the infection by Leishmania (Leishmania) amazonensis, a species that is endemic in South America where it causes cutaneous leishmaniasis, borderline disseminated cutaneous leishmaniasis and anergic diffuse cutaneous leishmaniasis, with devastating consequences to the patients. In order to compare the effect of both salivas, C57BL/6 mice were inoculated subcutaneously into the hind footpads or into the ear dermis with 106 promastigotes in the presence of salivary gland homogenate from wildcaught and lab-colonized vectors. Lesion size was significantly lower in the mice infected with saliva from wild-caught sandflies that also determined a less prominent infiltration of macrophages in the lesions and a weaker Th2 response in comparison with those co-inoculated with colonized saliva. Recently, differences were shown in the protein compounds in the salivary glands that could partially account for the lesion size outcome. In conclusion, our findings highlight that phlebotomine saliva probably does not play an important role in the exacerbation of Leishmania infection as the natural parasite transmission occurs through wild and not laboratory colonized vectors.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:08:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 210.pdf: 3507929 bytes, checksum: deaa5756293487398d542d5652ad455a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Os flebotomíneos são insetos hematófagos de grande importância médica e veterinária atuando como vetores de parasitas como Leishmania. O estudo do padrão alimentar desses vetores pode ajudar a compreender a sua interação com potenciais reservatórios de Leishmania. Neste estudo, desenvolvemos ensaios de PCR em tempo real para identificação de sangue em flebotomíneos. Seis pares de primers foram desenhados com base no gene citocromo b de sequencias disponíveis no GenBank dos seguintes hospedeiros potenciais: cão, gato, cavalo, galinha, rato e humano. Primeiramente, os ensaios de PCR em tempo real utilizando SYBR Green foram conduzidos usando uma curva padrão com oito concentrações diferentes (i.e., 10 ng, 1 ng, 100 pg, 10 pg, 1 pg, 100 fg, 10 fg e 1 fg por 2 µl) de amostras do DNA extraído do sangue com EDTA a partir de cada espécie de animal. Em seguida, o DNA foi extraído de 100 fêmeas de flebotomíneos ingurgitadas de campo pertencentes a três espécies (i.e., Lutzomyia longipalpis, L. migonei e L. lenti) foram testadas pelos protocolos aqui padronizados. Fêmeas de flebotomíneos foram experimentalmente alimentadas em um rato (Rattus rattus) e utilizadas para avaliar a detecção do ensaio. Os protocolos funcionaram de forma eficiente com limites de detecção de 10 pg a 100 fg. Fêmeas de flebotomíneos ingurgitadas coletadas no campo estavam alimentadas de humanos (73 por cento), galinhas (23 por cento), cães (22 por cento), cavalos (15 por cento), ratos (11 por cento) e gatos (2 por cento). Curiosamente, 76,1 por cento das fêmeas de L. longipalpis foram positivas para o sangue humano. No total, 48 por cento das fêmeas testadas estavam alimentadas em uma única fonte, 31 por cento em duas e 12 por cento em três. A análise do curso de tempo mostrou que a técnica de PCR em tempo real visando o DNA de roedor foi capaz de detectar pequenas quantidades de DNA do hospedeiro até 5 dias após o repasto sanguíneo. Esses protocolos representam ferramentas promissoras para a identificação da fonte alimentar de flebotomíneos de campo

Nós investigamos os efeitos da saliva de Lutzomyia longipalpis capturados no campo e colonizados em laboratório, na evolução da lesão e imunomodulação da infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis, uma espécie que é endêmica na América do Sul, onde causa Leishmaniose Cutânea, Leishmaniose Cutânea Disseminada Bordeline e Leishmaniose Cutânea Difusa Anérgica, com conseqüências graves aos pacientes. Com o intuito de comparar o efeito dos dois tipos de extrato de glândula salivar, camundongos C57BL/6 foram inoculados subcutaneamente no coxim plantar das patas traseiras e nas orelhas com 106 formas promastigotas de Leishmania (L.) amazonensis na presença de extrato de glândula salivar de vetores de captura e de colônia. O tamanho da lesão foi significantemente menor nos camundongos infectados com extrato de glândula salivar de vetores capturados, o que também determinou uma infiltração menos proeminente de macrófagos nas lesões e uma resposta Th2 mais branda quando comparada com aqueles inoculados com extrato de glândula salivar de vetores colonizados. Recentemente, foi mostradas diferenças nos compostos protéicos das glândulas salivares que poderiam parcialmente justificar a expressão da lesão. Portanto, nossos achados ressaltam que a extrato de glândula salivar de flebótomos provavelmente não desempenha um papel importante na exacerbação da infecção por Leishmania já que a transmissão natural do parasito ocorre através de vetores selvagens e não através de vetores colonizados em laboratório / We investigated the effects of Lutzomyia longipalpis saliva of vectors captured in the field and colonized in laboratory on the lesion evolution and immunomodulation of the infection by Leishmania (Leishmania) amazonensis, a species that is endemic in South America where it causes cutaneous leishmaniasis, borderline disseminated cutaneous leishmaniasis and anergic diffuse cutaneous leishmaniasis, with devastating consequences to the patients. In order to compare the effect of both salivas, C57BL/6 mice were inoculated subcutaneously into the hind footpads or into the ear dermis with 106 promastigotes in the presence of salivary gland homogenate from wildcaught and lab-colonized vectors. Lesion size was significantly lower in the mice infected with saliva from wild-caught sandflies that also determined a less prominent infiltration of macrophages in the lesions and a weaker Th2 response in comparison with those co-inoculated with colonized saliva. Recently, differences were shown in the protein compounds in the salivary glands that could partially account for the lesion size outcome. In conclusion, our findings highlight that phlebotomine saliva probably does not play an important role in the exacerbation of Leishmania infection as the natural parasite transmission occurs through wild and not laboratory colonized vectors.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:06:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tullio.pdf: 2981239 bytes, checksum: d6f78923df4523264147690fa8713589 (MD5) Previous issue date: 2013-08-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Insects from the subfamily Phlebotominae (Diptera: Psychodidae) are of medical interest because they are vectors of protozoa of the genus Leishmania transmitted when the insect feeds. Approximately 500 species are known in the Americas and 133 registered in the state of Amazonas. Caused by different species of Leishmania, cutaneous leishmaniasis (ACL) affects humans and other animals, affecting skin and mucosa. This work is part of the project " Condições de vida e saúde de populações indígenas na Amazônia", PRONEX, which has an interdisciplinary approach to study eco-epidemiological and anthropological aspects of leishmaniasis in the Middle Purus, funded FAPEAM / CNPq, and is in progress in the municipality of Lábrea, where there are records of cases and suspected underreporting. Therefore, it was thought appropriate to the study sand flies of the municipality as a contribution to the knowledge of the epidemiology of ACL. The aim of this study was to investigate the entomological aspects related to the epidemiology of ACL in an indigenous area of the municipality of Lábrea. The collection of sand flies was carried out in February 2012 in the Aldeia Castanheira, Indian Reserve Caititú, municipality of Lábrea using light traps. After identification of insects, we performed detection and identification of Leishmania present in the collected sand flies using a molecular approach. A total of 1,267 sandflies was collected, 819 (64.6%) females and 448 (35.4%) males, distributed in 10 genera and 32 species. The most abundant genera were Psychodopygus, Nyssomyia and Trichophoromyia, the species Trichophoromyia ubiquitalis was the most abundant with 235 (18.5%) specimens, followed by Psychodopygus davisi with 228 (18%) and Nyssomyia antunesi with 135 (10.7%) individuals. The presence of Leishmania was detected in six species: Sciopemyia servulolimai, Trichophoromyia ubiquitalis, Evandromyia apurinan, Nyssomyia umbratilis, Nyssomyia yuilli yuilli, Psychodopygus davisi, the estimated minimum infection rate was 0.84%.The Leishmania species were: Leishmania (L.) amazonensis, Leishmania (V.) braziliensis and a sample identified only to the level of subgenus Leishmania (Viannia) sp. The Leishmania infection detected in vector species / suspected vectors found in this work, suggests the involvement of these species in the transmission cycle of leishmaniasis in the municipality. Future investigations should be made to help elucidate the epidemiology of cutaneous leishmaniasis in the municipality of Lábrea as well as the state of Amazonas. / Os insetos da subfamília Phlebotominae (Diptera: Psychodidae) são de interesse médico por serem vetores de protozoários do gênero Leishmania transmitidos no momento da alimentação do inseto. Cerca de 500 espécies são conhecidas paras as Américas e 133 registradas no estado do Amazonas. Causada por diferentes espécies de Leishmania, a leishmaniose tegumentar americana (LTA) acomete o homem e outros animais, afetando pele e mucosa. Este trabalho está inserido no projeto Condições de vida e saúde de populações indígenas na Amazônia , PRONEX, que possui abordagem interdisciplinar para estudar aspectos eco-epidemiológicos e antropológicos da LTA no Médio Purús, financiado pela FAPEAM/CNPq, e em andamento no município de Lábrea, estado do Amazonas onde há registros de casos e suspeita de subnotificações. Por isso, achou-se oportuno o estudo de flebotomíneos do município como contribuição para o conhecimento da epidemiologia da LTA. O objetivo deste trabalho foi estudar os aspectos entomológicos relacionados a epidemiologia da LTA em uma área indígena do município de Lábrea. A coleta de flebotomíneos foi realizada em fevereiro de 2012, na Aldeia Castanheira, Terra Iindígena Caititú, município de Lábrea, utilizando armadilhas com atrativo luminoso. Após a identificação dos insetos, foi realizada a detecção e identificação de leishmânias presentes nos flebotomíneos coletados utilizando uma abordagem molecular. Um total de 1.267 flebotomíneos foi coletado, 819 (64,6%) fêmeas e 448 (35,4%) machos, distribuídos em 10 gêneros e 32 espécies. Os gêneros mais abundantes encontrados foram Psychodopygus, Nyssomyia e Trichophoromyia, já a espécie Trichophoromyia ubiquitalis foi a mais abundante com 235 (18,5%) espécimes coletados, seguida de Psychodopygus davisi com 228 (18%) e Nyssomyia antunesi com 135 (10,7%) indivíduos. Foi detectada a presença de DNA de Leishmania em seis espécies: Sciopemyia servulolimai, Trichophoromyia ubiquitalis, Evandromyia apurinan, Nyssomyia umbratilis, Nyssomyia yuilli yuilli, Psychodopygus davisi, sendo a taxa de infecção mínima estimada foi de 0,84%. As espécies de leishmânias detectadas foram: Leishmania (L.) amazonensis, Leishmania (V.) braziliensis e uma amostra identificada somente ao nível de subgênero Leishmania (Viannia) sp. A infecção por Leishmania detectada em espécies vetoras encontradas neste trabalho, é um indício da participação das mesmas no ciclo de transmissão de LTA no município. Futuras investigações devem ser realizadas para ajudar a elucidar a epidemiologia da LTA não só no município de Lábrea mas para o estado do Amazonas.

Thesis (Dr.P.H.)--Uniformed Services University of the Health Sciences, 2006 / Typescript (photocopy)

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T12:22:27Z No. of bitstreams: 1 tese_08jan07.pdf: 1988366 bytes, checksum: 584c0ca6f9da69b72d85326e595be0af (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T12:22:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_08jan07.pdf: 1988366 bytes, checksum: 584c0ca6f9da69b72d85326e595be0af (MD5) Previous issue date: 2011-08-08 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Sinais acústicos são importantes na corte de diversos insetos. Esse som é geralmente espécie-especifico sendo importante para o isolamento reprodutivo de espécies próximas. Machos de Lutzomyia longipalpis produzem sinais acústicos durante a cópula. Existem fortes evidências de que este taxa constitui um complexo de espécies. Lutzomyia cruzi é uma espécie próxima a L. longipalpis que possivelmente também faz parte deste complexo. Em nosso trabalho, foram analisados detalhadamente os sons de cópula de machos de 14 populações brasileiras de L. longipalpis, sendo seis destas provenientes de três localidades (Sobral, Estrela de Alagoas e Jaíba) onde análises prévias indicavam a ocorrência de espécies simpátricas cujos machos diferem no número de pintas abdominais (uma ou duas pintas, chamados respectivamente de 1P e 2P). Foi analisado também o som de machos de L. cruzi. A análise mostrou que o som produzido durante a cópula, tanto por machos de diferentes populações de L. longipalpis quanto de L. cruzi, é composto por um som primário mais rápido e um secundário mais lento. O som secundário é semelhante em todas as populações estudadas, enquanto que, o primário apresenta variação significativa tendo sido encontrados três tipos diferentes: o som pulsado, o de “burst” e o misto. O tipo pulsado é diversificado e foi encontrado nas populações de Jacobina, Lapinha, Sobral 1P, Teresina, Jaíba 1P e Estrela 1P. Cinco padrões diferentes foram observados entre estas populações. Estes padrões diferem significativamente em todos os parâmetros analisados (intervalo entre pulsos, número de pulsos, tamanho do trem, freqüência e ciclos por pulso). As populações de Sobral 2P, Jaíba 2P, Estrela 2P, Natal, Marajó, Pancas e Nova Porterinha produzem som do tipo “burst”. A comparação destas populações mostrou diferenças significativas apenas no intervalo entre “bursts”. Além disso, o padrão em si não é diferente entre elas. Esse tipo de som foi observado também em L. cruzi. O padrão misto foi observado apenas em machos de Mesquita. Este padrão apresenta características dos outros dois padrões apesar de mostrar diferenças significativas em todos os parâmetros quando comparados com os outros dois. Neste trabalho foi analisado também o som de machos de duas colônias de L. longipalpis (Jacobina e Marajó) mantidas há muitos anos no laboratório. Constatou-se que apesar de serem observadas diferenças significativas em alguns parâmetros, o padrão se mantém inalterado. Os resultados encontrados confirmam a hipótese da existência de um complexo longipalpis no Brasil e evidência o som de cópula como uma boa ferramenta para identificar as espécies crípticas deste complexo. / Acoustic signals are important in the courtship of many insects. This song is usually species-specific and is important in the reproductive isolation of closely related species. Lutzomyia longipalpis males produce acoustic signals during copulation. There are strong evidences that this taxon represents a species complex. Lutzomyia cruzi is closely related to L. longipalpis and is probably part of this complex. We analyzed de copulation songs of 14 Brazilian populations of L. longipalpis, six of them from three localities (Sobral, Estrela de Alagoas e Jaíba) where previous analyzes indicated the occurrence of sympatric species, which the males differ in the number of abdominal tergal spots (one and two spots, called respectively 1P and 2P). We also analyzed the copulation song of L. cruzi. This analysis showed that the song produced during copulation by males of both L. longipalpis and L. cruzi has two different components: a faster primary song and a slower secondary song. The latter is similar in all studied population, whereas the primary song has significant variation with three different types been found: pulse type, burst type and intermediary type songs. The pulse type is diversified and was found in the populations of Jacobina, Lapinha, Sobral 1P, Teresina, Jaíba 1P e Estrela 1P. Five different patterns were observed among these populations. These patterns are significantly different in all parameters analyzed (inter pulse interval, pulse number, train size, frequency and cycles per pulse). The populations of Sobral 2P, Jaíba 2P, Estrela 2P, Natal, Marajó, Pancas e Nova Porterinha produce the burst type song. The comparison of these populations showed significant differences only in the inter burst interval. In addition, the pattern itself is similar between them. This type of song was also found in L. cruzi. The intermediary type song was observed only in males from Mesquita. This type presents characteristics of both pulse and burst type songs even though it shows significant differences in all parameters when compared to the other two types. We also analyzed the songs of males from two colonies of L. longipalpis (Jacobina and Marajó) kept in laboratory for many years. We observed that although significant differences are found in some parameters, the pattern itself does not change. Our results confirm the hypothesis of the existence of a longipalpis complex in Brazil and show the copulation song as a good tool to identify cryptic species in this complex.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T16:14:55Z No. of bitstreams: 1 TESE ROSIMERY merged (2).pdf: 13670043 bytes, checksum: 3d066fc62d2695e641494985db2b5801 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T16:14:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE ROSIMERY merged (2).pdf: 13670043 bytes, checksum: 3d066fc62d2695e641494985db2b5801 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A história natural da leishmaniose visceral americana apresenta poucos estudos relacionados ao conhecimento dos reservatórios associados à Leishmania. Para os estudos de infectividade, foram realizados experimentos com os seguintes roedores silvestres: Nectomys squamipes, Rattus rattus e Galea spixii para incriminação de hospedeiros reservatórios de Leishmania (Leishmania) infantum , foram realizados duas repetições, com 10 roedores de cada espécie perfazendo um total de 60 animais, todos colonizados em laboratório. Como grupo controle foi utilizado seis hamsters (Mesocricetus auratus) para cada grupo de dez animais. Nas duas repetições, os animais foram inoculados com 2,8x105 /ml de promastigotas de fase log de Leishmania (leishmania) infantum. Amostras de pele, baço e fígado dos animais foram processadas para a detecção de DNA por meio de PCR específica para o subgênero Leishmania. Como resultado obtivemos dos 60 animais inoculados, 36 roedores positivos em amostras de pele, baço e fígado bem como 3 hamsters de controle (50%). Foram capturados entre 2009/2010 95 roedores silvestres para detecção de infecção natural. Destes, 9 animais das espécies: Nectomys squamipes, Necromys lasiurus e Rattus rattus foram positivos por PCR em amostras de pele, baço e fígado para Leishmania. As capturas de flebotomíneos utilizando armadilhas do tipo CDC para detecção de infecção natural dos espécimes coletados 420 flebotomíneos (fêmeas) de mais de 3.000 capturados foram processadas, 110 fêmeas em amostras individuais e 31 pools de 10 fêmeas cada um, destes, 6 foram positivos para Leishmania pela técnica de PCR e pela técnica de Dot-Blot hibridização, foram positivos 2 (33,3%) flebotomíneos para Leishmania (L.) infantum e 4 (66,6%) flebotomíneos para Leishmania (V.) braziliensis. Com a utilização da armadilha de Disney modificada em região de mata, utilizando como isca o roedor silvestre Galea spixii, foram capturados 131 flebotomíneos fêmeas e todas identificadas como da espécie Lutzomyia complexa. / The natural history of American visceral leishmaniasis presents few studies related to knowledge of reservoirs associated with Leishmania. In order to characterize the experimental infectivity in wild rodents of the following species: Nectomys squamipes, Rattus rattus and Galea spixii for trials of reservoir hosts of Leishmania (Leishmania) infantum , two experiments were conducted with 10 rodents of each species for a total 60 animals, all colonized in the laboratory. For the control was used six hamsters (Mesocricetus auratus) for each group of ten animals. In both experiments, the animals were inoculated with 2.8 x105 / ml log phase promastigotes of Leishmania infantum. Samples of skin, liver and spleen of animals were processed for DNA detection by PCR specific for the subgenus Leishmania. As a result we obtained the 60 injected animals, 36 (%) positive for samples of rodent skin, spleen and liver and 3 (50%) control hamsters. During 2009/2010 were collected 95 wild rodents for the detection of natural infection. Of these, nine animals: Nectomys squamipes, Bolomys lasiurus and Rattus rattus were positive by PCR in samples of skin, liver and spleen for Leishmania. The catch of sandflies using CDC traps for detecting natural infection, 420 female sand flies out of 3.000 were processed in 110 individual samples and 31 pools of 10 females sandflies each of these, 6 were positive by PCR and Dot-Blot hybridization technique, 2 (33.3%) were positive for L. (L.) infantum and, four (66.6%) for Leishmania (V.) braziliensis. During two years several attempts were made to obtain a colony of the Lutzomyia migonei for xenodiagnosis, however after several attempt no sufficient number of sandflies was able to perform this procedure, because of early mortality of the adults. Modified Disney trap baited with Galea spixii were used during a period of four months to capture sandflies in a forest area São Vincente Férrer. 131 sand flies captured were identified as Lutzomyia complexa.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:51:23Z No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:51:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T18:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Este estudo foi realizado em Belo Horizonte (Minas Gerais, Brasil), área endêmica para Leishmaniose visceral (LV), onde a doença vem se expandindo rapidamente, com 1.612 casos registrados nos últimos 10 anos. Nossa pesquisa avaliou o perfil epidemiológico em duas Áreas de abrangência (AA) dos Centros de Saúde (CS) Miramar e Salgado Filho do município de Belo Horizonte, com transmissão recente de LV, buscando compreender a tríade envolvida na transmissão: parasito-vetor-reservatório. Cada AA foi dividida em três trechos, controle, borrifação e manejo, a fim de avaliar o impacto das medidas de controle no número mensal de Lutzomyia longipalpis, através da curva flebotomínica. Em todos os trechos a captura de flebotomíneos e o inquérito canino censitário foram realizados. Durante 24 meses (setembro/2010 a agosto/2012) foram capturados 5194 flebotomíneos, distribuídos em 6 espécies, sendo Lu. longipalpis, vetora da LV, a espécie predominante (96,54%). Houve uma correlação entre a precipitação pluviométrica e o número de Lu. longipalpis capturados, mostrando que o número de espécimes de flebotomíneos capturados aumentou após o período chuvoso. Através do uso da Leishmania Nested PCR e sequenciamento, foram analisados 93 “pools” espécie-específicos. Leishmania infantum e Le. braziliensis foram encontradas em 23 e em 2 dos 26 “pools” de Lu. longipalpis, respectivamente. O DNA de Le. infantum foi encontrado em um “pool” de cada uma das espécies Lu. lloydi e complexo cortelezzii. A taxa mínima de infecção natural de flebotomíneos na área foi alta, 18,8% para Lu. Longipalpis, 20% para complexo cortelezzii e 100% para Lu. lloydi. Em relação às medidas de controle, observamos uma redução estatisticamente significativa no número de flebotomíneos no trecho manejo ambiental, enquanto houve apenas uma tendência de queda no número de flebotomíneos no trecho borrifação. Em relação ao reservatório doméstico, um total de 1408 cães foram examinados em 2011 através de testes sorológicos; 3,6% apresentaram-se soropositivos para LV canina (LVC). Biópsias de linfonodo, pele, baço e aspirado de medula óssea destes animais foram obtidos e analisados através do diagnóstico parasitológico e molecular. A positividade tanto para mielocultura como para o técnica de aposição em lâmina foi de 72.5%. Todas as amostras de baço mostraram-se positivas para LnPCR, indicando a presença de Le. infantum nas 51 amostras. O linfonodo foi o tecido menos sensível na PCR (57%) em relação aos demais. Cães sintomáticos demonstraram uma tendência a ter mais testes positivos. Nossos resultados mostram que as interfaces parasito-vetor e parasitoreservatório são ativas em áreas de médio risco para transmissão de LV, e que ações eficazes e rápidas devem ser implementadas para controlar a expansão da doença. / This study was conducted in Belo Horizonte (Minas Gerais, Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis (VL), where the disease has been expanding rapidly, with 1,612 cases recorded in the last 10 years. Our research assessed the epidemiological profile in two coverage areas (AA) of the Miramar and Salgado Filho Health Centers (HC) in the city of Belo Horizonte, with recent transmission of VL, willing to understand the triad involved in the transmission: parasite-vector-reservoir. Each AA was divided into three sections, control, spraying and management in order to assess the impact of control measures in the monthly number of Lutzomyia longipalpis through the sand fly curve. In all the sections, the capture of sand flies and canine census survey was conducted. For 24 months (from September / 2010 to August / 2012), 5194 sandflies were captured and distributed into 6 species. Lu. longipalpis, vector of LV, was the predominant species (96.54%). There was a correlation between the precipitation and the number of Lu. longipalpis captured, showing that the number of captured sandflies of specimens increased after the rainy season. With the use of Leishmania nested PCR and sequencing, 93 species-specific "pools" were analyzed. Out of the 26 Lu. longipalpis positive “pools”, Leishmania infantum was found in 23 while Le. braziliensis was found in 2. Le. infantum DNA was found in a "pool" of each species Lu. lloydi and cortelezzii complex. The sand flies natural infection minimum rate in the area was high, 18.8% for Lu. Longipalpis, 20% for cortelezzii complex and 100% for Lu. lloydi. Regarding control measures, we observed a statistically significant reduction in the number of sand flies in the environmental management section, while there was only a decreasing trend in the sand flies number in the spraying section. Concerning the domestic reservoir, 1408 dogs were examined in 2011 by serological tests; 3.6% were positive for canine visceral leishmaniasis (CVL). Lymph node biopsies, skin, spleen and bone marrow aspirate were obtained from these animals and analyzed using parasitological and molecular diagnosis. Positivity for both mielocultura as "imprint" was 72.5%. All spleen samples were positive for LnPCR, indicating the presence of Le. infantum in 51 samples. The lymph node was the least sensitive tissue in the PCR (57%), in relation to the others. Symptomatic dogs showed a tendency to have results that are more positive on the tests. Our results show that the vector-parasite and parasite reservoir interfaces are active in areas of medium risk of VL transmission, and rapid and effective actions must be implemented to control the spread of the disease.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-09-08T13:19:05Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-09-08T18:05:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T18:05:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / As leishmanioses são um complexo de doenças e sua epidemiologia somente pode ser compreendida pelo conhecimento de todos os elos que compõem seu ciclo de transmissão, como reservatórios, vetores e espécies de parasitos envolvidos e suas relações ecológicas. O objetivo deste trabalho foi estudar a epidemiologia das leishmanioses no distrito de Barra do Guaicui, município de Várzea da Palma, Minas Gerais. Foram realizadas no ano de 2012 cinco coletas de flebotomíneos em 24 casas da área urbana e doze coletas durante os anos de 2013 e 2014 em três ambientes distintos (urbano, transição e mata), utilizando armadilhas luminosas HP. As fêmeas coletadas foram identificadas e submetidas à verificação de infecção natural pela dissecção do tubo digestório e a detecção de DNA do parasito (LnPCR) em amostras individuais. Para o segundo período de estudo foram verificados e comparados os padrões de distribuição, a riqueza, uniformidade, e abundância dos flebotomíneos nas diferentes áreas. Para o estudo dos hospedeiros silvestres e sinantrópicos de Leishmania foram instaladas duas armadilhas, uma do tipo Sherman e outra do tipo gaiola, em cada uma das casas amostradas para o ano de 2012 e, além destes pontos foram definidas três trilhas, com 15 armadilhas tipo Sherman e 15 tipo gaiola por trilha, em área limítrofe ao perímetro urbano. No ano de 2013 as coletas de pequenos mamíferos foram conduzidasnos mesmos pontos de coleta dos flebotomíneos e utilizando a mesma metodologia. O estudo da infecção dos pequenos mamíferos foi realizado utilizando técnicas moleculares. Um total de 5.831 flebotomíneos pertencentes a quinze espécies e oito gêneros foi coletado e identificado. A espécie mais prevalente foi Nyssomyia intermedia, seguida de Lutzomyia longipalpis, importantes vetoras dos agentes etiológicos da forma tegumentar e visceral em humanos, respectivamente. A área urbana teve a maior abundância enquanto a área de transição teve a maior diversidade e uniformidade de espécies. Nyssomyia intermedia foi a espécie mais abundante na área urbana, enquanto Evandromyia evandroi foi a mais abundante na área de transição e Ev. lenti na área silvestre. Nenhuma forma flagelada foi encontrada pela técnica da dissecção. Foi detectada a presença de DNA de Leishmania nas seguintes espécies: Ny. intermedia (0,9%), Lu. longipalpis (2,9%), Ev. termitophila (3,0%), Ev. sallesi (1,8%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. neivai (1,1%), Ev lenti (0,9%) e Ev. walkeri (9,0%) todas com DNA de parasitos do complexo Le. braziliensis. Nyssomyia intermedia (0,3%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. lenti (1,8%), Ev. sallesi (1,2%), Lu. longipalpis (0,58%), Ny. neivai (1,1%) e Psathyromyia lutziana (33,3%) apresentaram positividade para parasitos do complexo Le. donovani. Das 47 amostras positivas para a presença de DNA de Leishmania, 34 (72,3%) eram provenientes da área urbana, três (6,4%) da área de transição e dez (21,3%) da área de mata. A fauna de pequenos mamíferos foi composta pelas espécies Rattus rattus (19,4%), Didelphis albiventris (44,4%) e Thricomys apereoides (36,1%). Rattus rattus foi capturado apenas na área urbana, T. apereoides apenas na área silvestre e D. albiventris nos três ambientes amostrados. As duas últimas espécies foram encontradas infectadas por Le. braziliensis na área de mata e na de transição, respectivamente. Nossos resultados contribuem para a compreensão do processo gradual de sinantropização das espécies de flebotomíneos encontradas no estado de Minas Gerais, demostrando que o município de Várzea da Palma apresenta todas as características necessárias para a expansão das leishmanioses, visceral e tegumentar. / Leishmaniasis are a complex of diseases and their epidemiology is understood only if all the links that compound its transmission cycle are known, such as reservoirs, vectors and parasites species and their ecological relationships. The aim of this research was to study the epidemiology of leishmaniasis in the District of Barra do Guaicui, municipality of Varzea da Palma, Minas Gerais State, Brazil. Five collections of phlebotomines were performed in 2012 in 24 houses in the urban area and another twelve collections from 2013 to 2014 in three distinct environments (urban, transition and wild forest), utilizing HP light traps. The collected females were identified and submitted to natural infection assessment through dissection of the digestive tract and parasite DNA detection (LnPCR) in individual samples. For the second period of study it was verified and compared the distribution richness, uniformity and abundance of sand flies in the different areas. For the study of wild and synanthropic hosts of Leishmania two traps were installed in each house sampled during 2012 and three tracks in a boundary area of urban perimeter were set, with 15 Sherman traps and 15 “cage” traps per track. Collections of small mammals were performed in 2013, in the same collections points of sand flies and with the same methodology used in 2012. The detection of Leishmania infection in small mammals was carried out through molecular techniques. A total of 5.831 phlebotomines belonging to fifteen species and eight genera were collected and identified. The most frequent species was Nyssomyia intermedia followed by Lutzomyia longipalpis, which are important vectors of the etiologic agents of cutaneous and visceral leishmaniasis in humans, respectively. The urban area had the highest abundance while the transition area has the highest diversity and uniformity of species. Nyssomyia intermedia was the most abundant species of the urban area, while Evandromyia evandroi was the most abundant in the transition area and Ev. lenti in the wild area. No flagellate forms were found by the dissection technique. Leishmania DNA was detected in the following species: Ny. intermedia (0,9%), Lu. longipalpis (2,9%), Ev. termitophila (3,0%), Ev. sallesi (1,8%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. neivai (1,1%), Ev lenti (0,9%) and Ev. walkeri (9,0%), all of them with DNA of Le. braziliensis complex. Nyssomyia intermedia (0,3%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. lenti (1,8%), Ev. sallesi (1,2%), Lu. longipalpis (0,58%), Ny. neivai (1,1%) and Psathyromyia lutziana (33,3%) presented positivity for the Le. donovani complex. Out of 47 Leishmania positive samples, 34 (72,3%) were from the urban area, three (6,4%) from the transition area and ten (21,3%) from the wild area. The small mammals fauna was composed by the species Rattus rattus (19,4%), Thricomys apereoides (36,1%) and Didelphis albiventris (44,4%) . Rattus rattus was captured exclusively in urban area, T. apereoides only in the forest area and D. albiventris in the three environments. The last two animals were found infected by Le. braziliensis in the wild and transitional areas, respectively. Our results contributes to understand the gradual process of synanthropism of the sand flies species found in the state of Minas Gerais, demonstrating that the municipality of Varzea da Palma has all the necessary characteristics for the expansion of leishmaniasis, visceral and cutaneous.

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2015-01-26T13:30:37Z : No. of bitstreams: 1 000793453.pdf: 889544 bytes, checksum: 1dd59112f868dbc83bf5f0a8bd2ef3d9 (MD5) / As doenças transmitidas por vetores são um dos principais problemas de saúde pública atualmente. Nas últimas duas décadas, muitas dessas doenças reapareceram ou se espalharam para novas partes do planeta, como é o caso das leishmanioses, que são transmitidas por várias espécies de flebotomíneos. O acompanhamento sistemático da superfície do solo com a utilização de armadilhas de emersão tem identificação dos locais de desenvolvimento natural dos flebotomíneos e os estudos da biologia larval, auxiliam o desenvolvimento de possíveis medidas para o controle do vetor nesta fase, uma vez que existe dificuldade em se controlar o adulto. Nestas condições, o presente trabalho teve como objetivo identificar áreas de maior risco para criação e manutenção dos flebotomíneos baseado nas características ambientais, captura dos flebotomíneos por um modelo adaptado de armadilha de emersão e associadas aos resultados das análises de solo, em ambiente urbano. Foram instaladas 333 armadilhas em 2 municípios, no período de novembro de 2012 a janeiro de 2014, sendo possível observar 11.857 insetos, dos quais 9.239 pertenciam à Ordem Diptera. Entretanto, nenhum flebotomíneo de importância médico-veterinária foi capturado. As análises de solo revelaram que o solo da região amostrada caracteriza-se como arenoso, com baixo índice de acidez e alto teor de matéria orgânica. Notou-se a presença de animais como cão, gato, galinha, bovinos e equinos nos quintais, bem como vegetação tanto frutífera quanto ornamental. Não foi possível realizar a correlação entre características ambientais, do solo e presença de criadouros naturais de flebotomíneos pelo fato de não ter capturado nenhum exemplar em ambos os municípios. Entretanto, outras pesquisas devem ser realizadas, pois esse tipo de informação obtida é de extrema importância para o planejamento e desenvolvimento de medidas de controle para o vetor, já que as ... / Currently, vector-borne diseases are a major public health problems. In last 20 years, many of these diseases have reappeared or spread to new parts of the planet, as leishmaniasis, which is transmitted by several species of sandflies. Systematic monitoring of the soil surface combined with emergence traps must identify sandflies natural breedings sites and studies of their larval biology, help to develop possible measures for vector control at this stage, since there is difficulty in to control adult sandfly. Accordingly , this study aimed to identify areas of greatest risk for the development and maintenance of sandflies based on environmental characteristics, to catch sandflies by an adapted emergence trap and analytical results of soil in urban environment . A total of 333 traps were placed in 2 municipalities from November 2012 to January 2014. Was possible to observe 11,857 insects, of which 9,239 belonged to the Order Diptera. However, no sandfly medical and veterinary importance was captured. Soil analysis revealed that the soil from the study area is characterized as sandy, with low acidity and high content of organic matter. The presence of animals like dog, cat, chicken, cattle and horses, as well as fruitful as both ornamental vegetation, were noted in backyards. Unable to perform the correlation between environmental characteristics , soil and presence of natural breeding sites of sandflies by not having captured no copy in both municipalities . However, other studies should be conducted, because this type of information is important for the planning and development of control measures for the vector, since the measures directed to reservoir (dog) , are not well accepted by population