Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Quando fazem o repasto sanguÃneo, fÃmeas do flebotomÃneo inoculam promastigotas de Leishmania junto com a saliva no lago sanguÃneo formado pelo traumatismo da probÃscida do inseto, na derme do hospedeiro mamÃfero. O sistema imunolÃgico do hospedeiro, na tentativa de controlar a infecÃÃo, recruta leucÃcitos para o sÃtio inflamatÃrio da inoculaÃÃo. Neste trabalho foi avaliada a cinÃtica e o recrutamento celular induzidos por Leishmania chagasi, principal agente etiolÃgico da leishmaniose visceral nas AmÃricas, e sua associaÃÃo com a saliva do vetor especÃfico, Lutzomyia longipalpis, alÃm do sangue do prÃprio hospedeiro, com o objetivo de entender melhor os eventos iniciais da infecÃÃo por Leishmania. Foi utilizado o modelo da bolsa de ar subcutÃnea em hamsters para analisar o recrutamento e o fenÃtipo das cÃlulas que migraram para o sÃtio da inflamaÃÃo induzida por L. chagasi, associada ou nÃo a sangue do hospedeiro e a saliva do vetor. Foram estudados tambÃm os tipos celulares e as alteraÃÃes histopatolÃgicas observados no tecido da bolsa de ar. Os dados mostraram que L. chagasi, quando inoculada sozinha, foi capaz de recrutar uma populaÃÃo mista de cÃlulas, entretanto, grande parte destas cÃlulas nÃo migrou para o exsudato inflamatÃrio, permanecendo no tecido da bolsa de ar. Por outro lado, a associaÃÃo de L. chagasi com o sangue do hospedeiro e a saliva do vetor resultou na exacerbaÃÃo da resposta inflamatÃria, influenciando tambÃm o perfil celular recrutado para o sÃtio de inoculaÃÃo, indicando que o sangue e a saliva apresentam um efeito sinÃrgico com a Leishmania na modulaÃÃo da resposta inflamatÃria inicial. Os dados sugerem ainda que Leishmania e os componentes sanguÃneos do hospedeiro por si sà tÃm potencial para induzir um processo inflamatÃrio que pode favorecer ou nÃo o estabelecimento do parasito, e que a saliva à um fator a mais que, quando acrescentado ao microambiente, pode exacerbar esta resposta inflamatÃria. Em suma, a associaÃÃo de L. chagasi com o sangue do hospedeiro e a saliva do vetor induz uma importante resposta inflamatÃria, caracterizada pela presenÃa de neutrÃfilos, eosinÃfilos, macrÃfagos e linfÃcitos, sendo os neutrÃfilos e macrÃfagos os tipos celulares predominantes. O efeito sinÃrgico do sangue e da saliva provavelmente facilita a entrada dos parasitos nas cÃlulas recrutadas e a consequente progressÃo da doenÃa.

Orientador: Ingrid Menz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T20:49:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cutolo_AndreAntonio_D.pdf: 3489196 bytes, checksum: ba6ee219dca9c92ee1ef9d6f194ee0b4 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A incidência das leishmanioses tegumentar (LTA) e visceral americanas (LVA) em hospedeiros caninos e humanos encontra-se em crescente expansão no Brasil. Para a vigilância epidemiológica dessas endemias, é fundamental o conhecimento da distribuição das diferentes espécies vetoras de flebotomíneos e, para a LVA, o conhecimento de parâmetros epidemiológicos como a prevalência, incidência, período de incubação e potencial de transmissibilidade de Leishmania infantum chagasi no cão, seu principal reservatório. Objetivou-se assim esclarecer alguns aspectos epidemiológicos das infecções caninas, incluindo-se levantamento entomológico no município de Monte Mor, situado na região centro-leste do estado de São Paulo, além da obtenção de parâmetros epidemiológicos da LVA por estudo longitudinal de 105 cães em área endêmica para a doença em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, por dois anos. Em Monte Mor, 319 amostras de soro canino foram avaliadas por ELISA e RIFI, sendo todas negativas para anticorpos anti-Leishmania, identificou-se sete espécies de flebotomíneos, com predomínio de Nyssomyia neivai (48,84%) considerada a principal transmissora do agente causador da LTA no interior paulista, além do diagnóstico de dois casos caninos de LTA, com sorologia reagente para ELISA FML e infecção por L. (Viannia) braziliensis. No estudo longitudinal dos 105 cães acompanhados por meio de avaliações clínicas, exames sorológicos (ELISA L. major-like, FML e S7) e parasitológicos diretos (esfregaços e PCR de aspirados de medula óssea e linfonodo e imunoistoquímica de pele) obteve-se prevalência sorológica inicial de 30,40% (145/477) no ELISA L. major-like e 26,28% (97/369) no ELISA FML. A prevalência da doença clínica (sintomáticos) foi de 7,13% (62/870), sendo que 24,53% (117/477) foram soropositivos no ELISA L. major-like, mas sem sintomas de leishmaniose visceral canina (LVC), demonstrando quantidade elevada de cães infectados assintomáticos na área. Ao final de 24 meses não se observou associação estatística significativa nas variáveis ambientais avaliadas no início do estudo e a ocorrência de casos de LVC, como a ocorrência prévia de LVA e/ou LVC no entorno ou na casa do proprietário, a existência de outras espécies animais na casa, o hábito intra ou peridomiciliar, o temperamento, a idade e o sexo do cão. A incidência de novas infecções variou de 11,76% (8/68), 11,76% (8/68) e 18,18% (12/66) respectivamente entre o Dia -30 e Zero, Dia Zero e Mês 12 por sorologia e Dia Zero e Mês 12 para os métodos diretos. A mortalidade natural e induzida via eutanásia de animais doentes e/ou infectados foi de 28,57% (30/105). O período de incubação médio foi de 6,46 meses. Alguns animais infectados com resultados positivos em prova diagnóstica de PCR e/ou prova de sorologia no início do estudo não apresentaram novos resultados positivos após 12 meses, indicando possível cura ou não estabelecimento da infecção. Observaram-se alguns animais com provas diretas positivas mostrando infecção assintomática por período de 24 meses. Obteve-se baixa prevalência de amastigotas em pele saudável, presente apenas em animais sintomáticos, enquanto que a ausência de amastigotas observada em cães portadores assintomáticos indica que os mesmos podem não ter papel importante na transmissão de parasitas ao flebotomíneo vetor / Abstract: Cutaneous (ACL) and visceral american leishmaniasis (AVL) incidences in human and canine hosts are increasing and expanding in Brazil. In order to perform an adequate vigilance of these diseases, the knowledge regarding distribution of different sandfly vector species is mandatory, besides of precising epidemiological parameters like prevalence, incidence, incubation period and potential of transmissibility in the dog, the main reservoir for the AVL etiologic agent. This way, the objectives of this study were to clarify some epidemiological aspects of canine leishmaniases, including entomological surveillance in the county of Monte Mor, central east region of São Paulo state and performance of a longitudinal study in an AVL endemic area located in Campo Grande, Mato Grosso do Sul state, including 105 dogs in order to evaluate epidemiological data during two years. In Monte Mor county, 319 sera samples were analysed through in house developed ELISA and IFA methods. No seropositive result was found, seven different sandfly species were identified, prevailing Nyssomyia neivai (48.84%) considered the main vector for the ACL etiologic agent in São Paulo state countryside, and two dogs were diagnosed with ACL symptoms, presenting seropositivity through ELISA FML and positive identification of L. (Viannia) braziliensis infection using PCR. The longitudinal study was performed using clinical examination, serology (ELISA L. major-like, FML and S7) and direct diagnostic techniques (bone marrow and lymph node smears and PCR and immunohistochemistry in skin tissues) on dogs. A seroprevalence of 30.40% (145/477) at ELISA L. major-like and 26.28% (97/369) at ELISA FML was obtained at the pre-initial phase. Clinical disease prevalence was 7.13% (62/870), and 24.53% (117/477) dogs were seropositive at ELISA L. major-like, but asymptomatic, showing the high amount of infected healthy carriers. At the end of the 24 months period no significant association was found between visceral leishmaniasis (VL) canine cases with environmental variables evaluated at Day Zero like previous registration of human or canine VL on the study house or neighborhood, other domestic animal species at the backyard, intra or peridomiciliar, aggressive behavior, age or sex of the study dog. Incidence of infections varied from 11.76% (8/68), 11.76% (8/68) e 18.18% (12/66) respectively between Day -30 and Zero, Day Zero and Month 12 using serology and Day Zero and Month 12 for direct diagnostic methods. Natural and induced mortality through euthanasia of sick/infected dogs was 28.57% (30/105). The mean disease incubation period was 6.46 months. Some of the infected animals with positive diagnosis at the beggining of the study had no other positive results after 12 months, indicating a possible cure or an absence of infection establishment, while others had positive diagnosis at the beginning and at month 12 with asymptomatic condition for more than 24 months. A low Leishmania amastigotes prevalence at healthy skin was obtained and positive results were observed only in symptomatic animals. Absence of parasites in skin of asymptomatic carriers may indicate they have no important role on the transmission of Leishmania to competent vectors / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Cláudio Casanova / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:03:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CollaJacques_FernandaElisa_D.pdf: 17373999 bytes, checksum: 18adb4b65dc2639da145a80ed8b6f4e2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) são insetos de importância médico-veterinária pois participam do ciclo de doenças tais como leishmanioses, que acometem milhares de pessoas ao redor do mundo. O conhecimento sobre a ecologia e biologia desses dípteros é de fundamental importância para determinar a capacidade e competência vetorial de suas populações, e portanto, relevantes do ponto de vista da saúde pública. Este trabalho buscou esclarecer alguns pontos com informações deficientes sobre a biologia e ecologia das espécies vetoras de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi e Leishmania (Viannia) braziliensis, respectivamente, Lutzomyia longipalpis e Nyssomyia neivai, no estado de São Paulo. Para a leishmaniose visceral americana (LVA), objetivou-se esclarecer questões a respeito de criadouros urbanos preferenciais de Lu. longipalpis e sobre sua expansão geográfica no estado de São Paulo. Em referências às lacunas no conhecimento da ecoepidemiologia da leishmaniose tegumentar americana, a competência vetorial de Nyssomyia neivai para L. (V.) braziliensis e o estudo da composição da comunidade flebotomínica em área endêmica no nordeste do estado, bem como sua variação mensal. Criadouros de Lu. longipalpis foram encontrados predominantemente em ambientes sombreados com grande quantidade de matéria orgânica, com maior concentração de larvas associadas a galinheiros. Quanto à sua dispersão, esta parece ter seguido uma rota a partir de Mato Grosso do Sul, seguindo em direção oeste-leste e também para norte e para sul a partir dessa linha central. A ocorrência de casos de LVA em humanos frequentemente é precedida pela detecção de Lu. longipalpis e casos caninos. Nyssomyia neivai, bastante frequente em áreas endêmicas para LTA no vale do Rio Mogi Guaçu, mostrou-se competente para adquirir, manter e transmitir o parasito em condições laboratoriais, cumprindo assim mais uma etapa necessária para a sua incriminação como espécie-vetora. Ainda no vale do rio Mogi Guaçu, a comunidade de flebotomíneos mostrou-se bastante diversa, com 17 espécies, das quais cinco são importantes para o ciclo da LTA. A fauna flebotomínica encontrada era composta majoritariamente por Nyssomyia whitmani, Migonemyia migonei e Expapillata firmatoi e, mais uma vez, abrigos para animais, tais como galinheiros, foi o local preferido para estes insetos, onde a sua maioria foi capturada. Desta forma, este trabalho apresenta dados relevantes para o conhecimento a respeito desses insetos vetores, que podem ser usados como base para futuros projetos ou no desenvolvimento de novas estratégias de controle dessas doenças / Abstract: Phlebotomine sandflies (Diptera: Psychodidae) are insects of medical and veterinary importance because they take part in the cicle of diseases, such as leishmaniasis which affect thousands of people around the world. Learning about these dipteras¿s ecology and biology is fundamentaly important to define the vectorial capacity and competence of their populations, and therefore, relevant for the public health perspective. This study aimed at adressing some issues with deficiente information on the biology and ecology of vector species of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi and Leishmania (Viannia) braziliensis, respectively, Lutzomyia longipalpis and Nyssomyia neivai, in São Paulo State. For the American visceral leishmaniasis (AVL), this paper tried to answer questions on the preferencial breeding site of Lu. longipalpis and its geographical expantion in São Paulo State. In relation to the knowledge of the ecoepidemiology of American cutaneous leishmaniasis (ACL), the vectorial competence of Nyssomyia neivai to L. (V.) braziliensis and the analysis of the sandfly community in and endemic area in the Northeast of the state were studied. Lutzomyia longipalpis breeding sites were found predominantly in shaded environments with great amount of organic matter, and the greatest concentration of larvae associated to chicken sheds. Considering its dispersion, Lu. longipalpis seemed to follow a route from Mato Grosso do Sul to São Paulo city, in a west to east direction and from that central line, an expansion to the north and south. The occurance of human AVL is generally preceded by the detection of Lu. longipalpis and canine cases. Nyssomyia neivai, frequently found in endemic áreas for ACL in the Mogi Gauçu River Valley, was shown to be competente to aquire, host and transmit the parasite under laboratory conditions, thus fulfilling another requirement to be recognized as a vector species. Still in Mogi Guaçu River Valley, the sandfly community was greatly diverse, comprised of 17 species, of which five are considered important for the ACL cicle. The sandfly fauna was mainly comprised of Nyssomyia whitmani, Migonemyia migonei and Expapillata firmatoi and, once again, animal shelters, such as chicken sheds, were the preferred site for these insects, where the greatest amount was collected. Therefore, this work presents relevant data for the knowledge on these vector insects, which can be used as basis for future projects or in the development of new control strategies against these diseases / Doutorado / Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia / Doutora em Biologia Animal

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-03T12:32:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação padronizada_Felipe Dutra Rêgo 2013 versao final.pdf: 3338152 bytes, checksum: 4b1ea54844c41caffe2e3dd7db69355e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-03T12:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação padronizada_Felipe Dutra Rêgo 2013 versao final.pdf: 3338152 bytes, checksum: 4b1ea54844c41caffe2e3dd7db69355e (MD5) Previous issue date: 2013 / As leishmanioses são protozooses de alta prevalência em regiões tropicais como o Brasil e são transmitidas por vetores flebotomíneos, cujos hospedeiros são compostos por diferentes espécies animais vertebrados. O objetivo deste trabalho foi estudar os aspectos entomológicos relacionados à epidemiologia das leishmanioses na aldeia Imbaúbas da Terra Indígena Xakriabá, Município de São João das Missões, Minas Gerais. Durante o período de julho de 2008 a julho de 2009 foram realizadas seis coletas de flebotomíneos sendo dispostas 40 armadilhas luminosas no peridomicílio de 20 casas sorteadas aleatoriamente. Entre outubro de 2011 a agosto de 2012 foram realizadas seis campanhas de captura de flebotomíneos e 20 armadilhas luminosas foram distribuídas em 4 trilhas (cinco armadilhas por trilha) previamente demarcadas para estudo de hospedeiros silvestres e sinantrópicos de Leishmania. Foram utilizados testes estatísticos para avaliar diferenças no padrão de distribuição de espécies, riqueza e abundância de flebotomíneos nos diferentes ecótopos. Um total de 8.046 flebotomíneos pertencentes a 28 espécies e 11 gêneros foram coletados e identificados. As spécies Lutzomyia longipalpise Nyssomyia intermediaforam as mais abundantes no peridomicílio enquanto Martinsmyia minasensise Lutzomyia cavernicolaas mais abundantes nas trilhas de coleta. As fêmeas foram dispostas em "pools" contendo no máximo dez espécimes da mesma localidade, espécie e data de coleta para pesquisa de DNA de Leishmania spp. por métodos moleculares. A identificação da espécie de Leishmaniafoi feita a partir da técnica de ITS1PCR-RFLP utilizando a enzima HaeIIIe o sequenciamento genético para um alvo do gene SSUrRNA. Foi possível detectar a presença de DNA de Leishmaniaem 11 amostras provenientes do peridomicílio: Lu. longipalpis (2), Ny. intermedia(4); Lu. renei(2); Lu. ischnacantha; Micropygomyia goiana e Evandromyia lenti. Com relação às trilhas, foi possível verificar a presença de DNA de Leishmania em 12 amostras: Mt. minasensis (5); Ny. intermedia(3); Mi. peresi(2); Mi. capixabae Ev. lenti. Os resultados obtidos reforçam a importância epidemiológica das espécies Lu. longipalpise Ny. intermediana transmissão da leishmaniose visceral e tegumentar respectivamente, além do encontro de outras espécies com DNA de Leishmania como Mt. minasensise Ev. lenti que podem participar de um ciclo silvestre e/ou sinantrópico de Leishmania na área de estudos / Leishmaniases are protozooses highly prevalent in tropical regions such as Brazil and are transmitted by sand flies vectors, whose hosts are different vertebrate species. The objective of this study was to survey the entomological aspects related to the epidemiology of this disease in Imbaúbas village of the Xacriabá Indian Reserve, São João das Missões municipality, Minas Gerais state. Between July 2008and July 2009, six sand fly collections were carried out using 40 light traps placed in theperidomicile of 20 randomly selected houses. Between October 2011 and August 2012, another six collections to capture sand flies were carried out with 20 light traps distributed in 4 tracks (five traps per track) selected for a previous study of wild and synanthropic hostsof Leishmania. Statistical tests were used to evaluate differences in the distribution patterns, richness and abundance of sand flies in different ecotopes. A total of 8.046 sand flies belonging to 28 species and 11 genera were collected and identified. The species Lutzomyia longipalpisand Nyssomyia intermediawere the most abundant in peridomicile, while Martinsmyia minasensisand Lutzomyia cavernicola were the most abundant on the tracks. Females were organized in poolswith a maximum of ten specimens from the same locality, species and date for detection of Leishmaniaspp. by molecular methods. Leishmaniaspecies identification was made with ITS1PCR-RFLP using the enzyme HaeIIIand genetic sequencing was used for SSUrRNA target. The presence of LeishmaniaDNA was detected in 11 samples from peridomicile: Lu. longipalpis (2), Ny. intermedia(4), Lu. renei(2), Lu. ischnacantha, Micropygomyia goiana and Evandromyia lenti. On the tracks, it was possible to verify the presence of LeishmaniaDNA in 12 samples: Mt. minasensis (5), Ny. intermedia(3), Mi. peresi(2), Mi. capixabaand Ev. lenti. The results support the epidemiological importance of Lu. longipalpisand Ny. intermedia in the transmission of visceral and cutaneous leishmaniases respectively, in addition to the finding of other species associated with Leishmania DNA, such as Mt. minasensisand Ev. lenti which may participate in a wild and/or synanthropiccycle of Leishmaniain the tudied area.

Made available in DSpace on 2015-10-21T12:23:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 paulo_amoretty_ioc_mest_2010.pdf: 2975859 bytes, checksum: 06f8ce008cd108bb1b64d2c7a0ec4c5d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O relógio circadiano, presente em diversos organismos, é um mecanismo que controla ritmos diários na fisiologia e comportamento, os quais são mantidos mesmo na ausência de estímulos externos. Estudos em Drosophila melanogaster revelaram genes envolvidos diretamente com este relógio biológico. Tais genes formam alças de autoregulação negativa que promovem a transcrição cíclica de alguns dos seus próprios componentes assim como de outros genes que controlam uma variedade de aspectos fisiológicos e comportamentais. A principal alça regulatória é composta por dois ativadores transcricionais, Clock (Clk) e Cycle (Cyc), que após formarem um heterodímero, promovem a transcrição de period (per) e timeless (tim). Por sua vez, as proteínas Period (Per) e Timeless (Tim) também formam dímeros, entram no núcleo e interagem com Clk e Cyc, causando a desestabilização destes ativadores transcricionais e, consequentemente, a repressão de suas próprias transcrições. Nosso grupo tem estudado genes do relógio circadiano em Lutzomyia longipalpis, principal vetor da Leishmania chagasi (= Le. infantum) nas Américas. Comparações entre nossos resultados e o que é conhecido em D. melanogaster revelaram diferenças interessantes. Em D. melanogaster, a proteína Clk possui uma cauda de ativação formada por um domínio poli-Q, que está ausente no mutante arrítmico Clk jrk . Em L. longipalpis, Clk parece não possuir esta cauda de ativação. Contudo, a proteína Cyc deste inseto possui uma região homóloga ao domínio de ativação encontrada em proteínas ortólogas de outros insetos e vertebrados, mas que está ausente na proteína Cyc de D. melanogaster Finalmente, o gene cyc é expresso de modo distinto em cada espécie: em L. longipalpis, o mRNA de cyc oscila quantitativamente ao longo do dia ao passo que, em D. melanogaster, apresenta expressão constitutiva. Uma construção contendo o gene cyc de L. longipalpis (llcyc) foi permanentemente introduzida em D. melanogaster utilizando a transformação mediada pelo elemento de transposição \201CP\201D. Utilizando o sistema UAS-GAL4, analisamos a atividade locomotora de moscas transformadas expressando esta construção em diferentes grupos neuronais e backgrounds genéticos de D. melanogaster. Embora L. longipalpis seja um inseto crepuscular/noturno e D. melanogaster diurno, a presença de llcyc não tornou as moscas transformadas mais noturnas. Contudo, o padrão de atividade em ciclos de claro-escuro sofreu mudanças e o período endógeno foi reduzido quando expostas à escuridão constante. Os resultados sugerem que a proteína Cyc de L. longipalpis, com sua cauda de ativação, interfere no funcionamento do relógio circadiano de D. Melanogaster / he circadian clock , present in several organisms , is a mechanism that control s daily physiological and behavioral rhythms which are maintained even in the absence of external stimuli. Studies on Drosophila melanogaster revealed genes directly involved with this biological clock. These genes form negative feedback loops responsible for the cyclic transcription of some of its own components as well as other genes that control a variety of physiological and behavioral aspect s. The main feedback loop is composed of two transcriptional activators, Clock (Clk) a nd Cycle (Cyc), which after heterodimerizing promote the transcription of period ( per ) and timeless ( tim ) genes. In turn, the Per and Tim proteins also form a heterodimer, enter into the nucleus and interact with Clk and Cyc, causing the destabilization of these transcription activators and, as a consequence, the repression of their own transcription. Our group h a s been studying circadian clock genes in Lutzomyia longipalpis , the main vector of Leis h mania chagasi (= Le. infantum ) in the Americas. Comparison s between our results and what is known in D. melanogaster revealed interesting differences. In D. melanogaster , the Clk protein has an activation tail formed by a poly - Q domain, which is absent in the arrhythmic mutant Clk Jrk . In L. longipalpis , Clk does not seem to have this activation tail. However, the Cyc protein in this insect has a region that is homologous to an activation domain found in orthologous proteins from other insects and vertebrates, but absent in the D. melanogaster Cyc. Finally, the cyc gene is distinctly expressed in each of the species: in L . longipalpis , cyc mRNA shows a daily oscillation in abundance, while in D. melanogaster it is constitutively expressed. A construct containing the L. longipalpis cyc gene ( llcyc ) was permanently i ntroduced into D. melanogaster using “P” element mediated transformation. Using the UAS - Gal4 system , we analyzed the locomotor activity of transgenic flies expressing this construct in different D. melanogaster neuronal groups and genetic background s. A lth ough L. longipalpis is a cr e puscular/nocturnal insect and D. melanogaster is diurnal, the presence of llcyc did not make the transformed flies more nocturnal. However, the activity pattern in light - dark cycles was altered and the endogenous period was redu ced in constant darkness. The results suggest that the presence of L. longipalpis Cyc protein , with its activation tail , interferes in the functioning of the D. melanogaster circadian clock.

Made available in DSpace on 2016-03-15T14:19:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 paulo_amoretty_ioc_dout_2014.pdf: 3200061 bytes, checksum: d380214473d12c7702ab720491d21caf (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os ritmos diários de atividade e repouso de insetos vetores são controlados pelo relógio circadiano. Este mecanismo endógeno que controla diferentes aspectos da fisiologia, metabolismo e comportamento, pode ser sincronizado pela luz (ciclos de claro e escuro) e outros ciclos ambientais como as oscilações diárias na temperatura, disponibilidade de alimentos, etc. Os genes diretamente envolvidos no controle molecular do relógio circadiano foram primeiramente descritos no modelo Drosophila melanogaster. Nosso grupo tem estudado genes do relógio circadiano em insetos vetores utilizando D. melanogaster como modelo, o que tem revelado uma série de diferenças marcantes entre os ortólogos do relógio de insetos. Em Lutzomyia longipalpis, principal vetor da Leishmania infantum nas Américas, e Aedes aegypti, vetor do vírus Dengue, a proteína codificada pelo gene cycle (cyc) possui uma cauda de ativação do tipo BCTR muito semelhante à de vertebrados. Esse sítio (BCTR) corresponde a região de interação de CYC com a proteína CRYPTOCHROME 2, um repressor transcricional encontrado em diversos insetos mas ausente em D. melanogaster. Outra diferença importante entre esses insetos é em relação ao tamanho da cauda poli-Q, implicada na ativação gênica, pois tanto em L. longiplapis quanto em Ae. aegypti esta cauda é reduzida em relação ao modelo Drosophila Isto sugere que durante a evolução o domínio BCTR foi substituído funcionalmente em algumas espécies pelo domínio poli-Q no heterodímero CLOCK/CYCLE (CLK/CYC). Neste trabalho, iniciamos uma investigação dos aspectos relacionados à conservação evolutiva e funcional da principal alça regulatória do relógio circadiano de insetos. Para isto, através de uma análise in vivo, dirigimos a expressão do gene cyc de L. longipalpis (llcyc) na tentativa de reconstruir, em parte, a primeira alça do relógio circadiano de L. longipalpis em mutantes de D. melanogaster. Além disso, utilizamos uma abordagem evolutiva comparando sequencias de diferentes grupos de insetos para investigar as transformações sofridas por CLK-CYC ao longo do processo evolutivo dos insetos. Nossos resultados sugerem que a proteína CYC de L. longipalpis foi capaz de resgatar, ainda que parcialmente, o funcionamento do relógio circadiano de D. melanogaster, embora esses insetos tenham se separado a mais de 250 milhões de anos / D aily rhythms of activity and rest in insect vectors are controlled by the circadian clock. This endogenous mechanism that controls various aspects of physiology, metabolism and behavior can be synchronized by the light (light and dar k cycles) and other environmental cycles as the daily fluctuations in temperature, food availability, etc. The genes directly involved in the molecular circadian clock control were first described in Drosophila melanogaster . Our group has been studying cir cadian clock genes in insect vectors using D. melanogaster as a model, revealing a series of marked differences among the orthologs of the insects clock. In Lutzomyia longipalpis , vector of Leishmania infantum in the Americas, and Aedes aegypti , the Dengue virus vector, the protein encoded by cycle (cyc) ge ne has a BCTR type tail activation, very similar to that of vertebrates. This BCTR tail is the site of interaction with the CRYPTOCHROME 2 protein, a transcriptional repressor found in many insects , but a bsent in D. melanogaster . Another important difference among these insects is relative to poly - Q tail size, implicated in gene activation, since both L. longipalpis and Ae. aegypti have a reduced tail compared to Drosophila . This suggests that during the e volution the BCTR domain was functionally replaced in some species by poly - Q domain in the heterodimer CLOCK/CYCLE (CLK/CYC). In the present work, we have started an investigat ion of aspects related to the evolutionary and functional conservation of the ma in regulatory circadian clock in insects. For this purpose , through an in vivo analysis we drove the L. longipalpis cyc (llcyc) gene expression in an attempt to rebuild, in part, the first circadian clock loop of L. longipalpis in mutants of D. melanogaste r . In addition, we used an evolutionary approach by comparing sequences of different insect groups to investigate the transformations suffered by CLK - CYC along the evolutionary process of insects. Our results suggest that the CYC L. longipalpis protein was able to rescue, at least partially, the functioning of the circadian clock of D. melanogaster , although these insects ha s been separated for more than 250 million years

Made available in DSpace on 2016-04-20T12:39:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 eudislaine_carvalho_ioc_mest_2013.pdf: 1777151 bytes, checksum: 5c17debede158ac9bc7692a3a408b4ba (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As doenças transmitidas por insetos vetores são de grande importância para saúde pública. No Brasil, as principais doenças compreendem a malária, doença de Chagas, leishmaniose, dengue e febre amarela. O inseto vetor flebotomíneo é o principal transmissor da leishmaniose. Porém, também são vetores de outros agentes patogênicos e hospedeiros de diversos outros microrganismos, tais como bactérias, fungos e arbovírus. Os arbovírus são biologicamente transmitidos entre hospedeiros vertebrados por insetos hematófagos. Sua distribuição ocorre de forma global, porém a maioria é encontrada em áreas tropicais, onde as condições climáticas permitem a transmissão durante todo o ano. Os arbovírus do gênero Vesiculovírus, Orbivírus e Phlebovírus são os mais comuns encontrados em flebotomíneos. Além destes gêneros isolados do próprio inseto, os vírus Mayaro e do Oeste do Nilo também são capazes de infectar uma linhagem celular (LL5) da espécie Lutzomyia longipalpis. A resposta imune é essencial para os artrópodes sobreviverem aos agentes patogênicos, as principais vias envolvidas na resposta imune de artrópodes incluem a via Imd, Toll e Jak/Stat. Os artrópodes possuem diversos mecanismos contra infecção viral, entre eles a apoptose, a via de RNA de interferência (RNAi) e a autofagia. O mecanismo utilizado pela maioria dos vetores é o silenciamento da expressão gênica dos vírus através da via do RNAi Esta via é amplamente conservada em diferentes espécies e se baseia na complementariedade do RNA dupla fita (dsRNA) para degradação de mRNA, sendo assim uma resposta sequência específica. A via Jak/Stat também tem sido associada à resposta antiviral. O gene responsivo a vírus, Vago, atua como um interferon like e é responsável pela ativação de Jak/Stat. A única descrição que existe sobre a resposta antiviral em flebotomíneos é uma resposta inespecífica, que é ativada por qualquer dsRNA. Como não se tem conhecimento preciso dos mecanismos de defesa antiviral neste inseto, nosso trabalho avalia o papel de diferentes componentes do sistema imune no mecanismo de defesa antiviral em células LL5. Realizamos dois modelos eficientes de infecção com vírus VSV e mimetização da infecção, através de transfecção de poly I:C (dsRNA), em células LL5 e em células Aag2 de A. aegypti para o estudo da resposta antiviral. Após a infecção ou transfecção de dsRNA avaliamos o perfil de expressão de alguns genes da resposta antiviral: Dicer 2, Vago, Stat, Defensina e Atg18. LL5 apresentou uma resposta a infecção com VSV diferente das células Aag2, sendo que nestas células a dsRNA é capaz de ativar uma resposta antiviral contra VSV, diferentemente das células LL5. Sugerimos também que a resposta antiviral de LL5 contra infecção com VSV ocorra através do mecanismo de autofagia, pois, outros genes clássicos da via de RNAi e Jak/Stat (Dicer, Vago e Stat) não foram modulados positivamente neste modelo / Insect-borne diseases have a great importance in public health. In Brazil, the main diseases transmitted by insects include malaria, Chagas disease, leishmaniasis, dengue and yellow fever. Sandflies are the main vectors of leishmania parasites, but may also harbors and even transmit other pathogens such as bacteria, fungi and arbovirus. The arboviruses are biologically transmitted between vertebrate hosts by hematophagous insects. Its distribution occurs globally, but mostly in tropical areas, where climatic conditions may allow transmission throughout the year. The arbovirus of the genus Vesiculovirus, Orbivirus and Phlebovirus are commonly found in sandflies. In addition, the Mayaro virus and West Nile virus are also able of infecting Lutzomyia longipalpis cell line (LL5). The immune response is essential for arthropods to survive the pathogens infection and the major pathways involved in this immune response are Imd, Toll and Jak/Stat pathways. The arthropods have diverse mechanisms against viral infection, including apoptosis, the RNA interference pathway (RNAi) and autophagy. The mechanism used by most of the vectors is the silencing of gene expression through the RNAi pathway. This pathway is conserved among different species and is based on degradation of mRNA complementary to double-strand RNA (dsRNA), thus being a sequence-specific response. The Jak/Stat pathway has also been associated with antiviral response The virus responsive gene, Vago, acts as an interferon-like and is responsible for activation of Jak/Stat. The only information regarding the antiviral response in sandflies is a non-specific response, which is activated by any dsRNA. Since there is no precise knowledge of the antiviral defense mechanism in this insect, our study evaluated the role of different components of the immune system in antiviral defense mechanism in LL5 cells. We used two efficient models of infection with VSV virus and mimicking the infection by transfection of poly I:C (dsRNA) in LL5 cells and Aag2 cells of Aedes aegypti to study the antiviral response. After infection or transfection of dsRNA we evaluated the expression profile of some genes related to antiviral response: Dicer 2, Vago, Stat and Atg18. LL5 and Aag2 showed different responses to VSV infection, and in Aag2 cells the dsRNA is able to activate and antiviral response against VSV, differently in LL5 cells. We also suggest that the antiviral response of LL5 against VSV infection occurs through the mechanism of autophagy, because other classical genes of the RNAi and Jak/Stat pathways were not positively modulated in this model

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2014-10-21T21:25:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao.texto.Priscila.pdf: 2073961 bytes, checksum: 34dcbeac0526db3a02cb379d8d4e211a (MD5) / Approved for entry into archive by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2014-11-26T21:11:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao.texto.Priscila.pdf: 2073961 bytes, checksum: 34dcbeac0526db3a02cb379d8d4e211a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-26T21:11:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao.texto.Priscila.pdf: 2073961 bytes, checksum: 34dcbeac0526db3a02cb379d8d4e211a (MD5) Previous issue date: 2014 / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença que acomete pele e mucosas causada por parasitos dermotrópicos do gênero Leishmania Ross, 1903. Os parasitos são transmitidos através da picada de pequenos dípteros da família Psychodidae, os flebotomíneos. O município de Cariacica, Espírito Santo, Brasil, esteve nos últimos cinco anos (2009 a 2013) entre os cinco que apresentaram maior número de casos notificados no estado, segundo a Secretaria de Estado de Saúde (SESA-ES, 2014). A localidade de Roda D’Água demonstra grande importância, por concentrar elevado número de casos, contribuindo com grande parte das notificações do município. Avaliando os casos da doença na região, registrados nos prontuários médicos do serviço de referência, na Unidade de Medicina Tropical da Universidade Federal do Espírito Santo, observou-se que estes ocorriam a até 550 m de altitude, numa área que vai de 20 a 718 m. A hipótese mais provável seria a de que o fenômeno fosse relacionado aos vetores, já que o homem e os animais estariam presentes em todas as altitudes. De fevereiro de 2002 a janeiro de 2004 foram realizadas coletas mensais de flebotomíneos em Roda D’Água, que aconteciam simultaneamente em três níveis de altitude, sendo: nível 1 - até 250 m; nível 2 - entre 250 e 500m e nível 3 - acima de 500m. Em cada nível as coletas aconteciam em dois ambientes: mata e peridomicílio. As capturas eram feitas em armadilhas de Shannon modificadas e por busca ativa em repouso, com capturador de Castro. Avaliou-se o comportamento das espécies quanto à pluviosidade (períodos seco e chuvoso) e às estações do ano. Analisaram-se estatisticamente as principais espécies antropofílicas de importância epidemiológica (Falqueto, 1995). Foram calculados os índices ecológicos abundância, riqueza, diversidade, equitabilidade e dominância. Coletou-se um total de 13233 flebotomíneos, com identificação de 23 espécies. A espécie predominante foi Nyssomyia intermedia (61,12%), seguida por Pintomyia fischeri (18,20%) e Migonemyia migonei (8,68%), todas antropofílicas. Somou-se a estas a espécie Pintomyia monticola, que representou 1,67% do total de espécimes coletados e também é altamente antropofílica. As demais espécies somaram 10,10% do total de flebotomineos. A altitude influenciou a distribuição das quatro espécies analisadas, tendo Ny. intermedia e Pi. fischeri sido mais abundantes no nível 2, Mg. migonei mais abundante no nível 1 e Pi. monticola no nível 3. Em relação ao ambiente, as espécies Ny. intermedia e Mg. migonei foram estatisticamente mais abundantes no peridomicílio e Pi. monticola na mata. A distribuição de Pi. fisheri não apresentou diferença significativa entre os dois ambientes, porém foi a única afetada pelas chuvas e estações do ano, sendo a espécie mais encontrada no período seco e no inverno. Nyssomyia intermedia parece ser a principal espécie vetora da LTA em Roda D’Água, com Mg. migonei provavelmente tendo papel secundário. Pi. fisheri não parece estar envolvido localmente na transmissão da doença para humanos, apesar de já ter sido incriminado em outras regiões. A distribuição de Pi. monticola em relação à altitude e ao ambiente indica ser improvável sua participação na transmissão da LTA naquela região. / American cutaneous leishmaniasis (ACL) affects the skin and mucous membranes caused by dermotropic parasites of the genus Leishmania Ross, 1903. The parasites are transmitted through the bite of small insects of the family Psychodidae, the sandflies. The municipality of Cariacica, Espírito Santo, Brazil, has been in the last five years (2009-2013) among the five municipalities which had the largest numbers of reported cases in the, according to the State Department of Health (SESA-ES, 2014). The locality of Roda DÁgua has shown high epidemiological importance, due to the large concentration of cases contributing to the municipality notifications. Evaluating the registered cases from the region, from the medical reference service, Unidade de Medicina Tropical da Universidade Federal do Espírito Santo, it was observed that they occurred up to 550 m of altitude, in an area between 20-718 m above sea level. The most likely hypothesis is that the phenomenon is related to the vector distribution, since humans and animals are be present in all altitudes. From February 2002 to January 2004 sand flies were simultaneously captured in monthly collections in Roda D’Água , at three altitude levels: level 1 - up to 250 m, level 2 - between 250 and 500 m and level 3 - above 500 m. In each level, collection of sand flies was carried out in two environments: sylvatic and peridomicile. Collections were made using modified Shannon traps and by active search with Castro pooter. We evaluated flight activity of the species as the rainfall (rainy and dry seasons) and the seasonality. Only species known to be anthropophilic and with epidemiological importance were statistically analyzed. Abundance, richness, diversity, equitability, and dminance ecological indices were estimated. A total of 13,233 sand flies from 23 species were collected. The most abundant species was Nyssomyia intermedia (61.12%), followed by Pintomyia fischeri (18.20%) and Migonemyia migonei (8.68%), all species are anthropophilic. Pintomyia monticola represented 1.67% of the total specimens collected and is also antropophilic. The other species comprised 10.10% of the total specimens collected. The altitude affected the distribution of four species, and Ny. intermedia and Pi. fischeri were more abundant at level 2, Mg. migonei most abundant at level 1 and Pi. monticola at level 3. Nyssomyia intermedia and Mg. migonei were statistically more abundant in peridomestic areas and Pi. monticola in sylvatic environment. Pintomyia fischeri occurrence was not statistically significant according to environment, but it was the only one affected by the rain and showed seasonality, most commonly found in dry periods and during the winter. Nyssomyia intermedia seems to be the most important vector of ACL in Roda D’Água and Mg. migonei presents probably acting as asecondary vector. Pintomyia fischeri does not seem to be involved in disease transmission to humans in the locallity, despite having already been incriminated in others regions. According to its distribuition, probably Pi. monticola does not play a role in ACL transmission in Roda D’Água.

Leishmaniasis is a zoonotic disease caused by protozoan parasites of the genus Leishmania spp.. The transmission of leishmaniasis occurs by the bites of infected female sandfly. Studies of clinical, biological and epidemiological characterization are fundamental for the development of individualized action and prevention strategies for leishmaniasis, since the transmission patterns, species of Leishmania vectors and species may present very differently in different regions. Thus, the constant monitoring of circulating sandfly species is extremely important since, if they perceive the increase of species or specimens over the years, one must consider the establishment of control methods for these vectors. This study had as a goal to identify the phlebotomine fauna, as for its abundance (in peri-domiciliary, woods, animal food source) monthly flow and the molecular identification of Leishmania species in three cities of southern Santa Catarina, Brazil. The collecting of the insects occurred in the cities of Criciuma, Imaruí and Tubarão, where three collecting points were set in each city: animal food source, woods and peri-domiciliary. In order to collect the insects, it was used CDC light traps. There were monthly collections from April 2015 to march 2016 passing through the four seasons of the year, giving a total of 108 collections, where 4.200 insects of the family Psychodidae were collected. There was the presence of two subfamilies: Sycoracinae and Phlebotominae. The subfamily Sycoracinae is the one with the highest number of specimens collected, 4.193, while the subfamily Phlebotominae 7 specimens of two species: Nyssomyia neivai and Pintomyia fischeri. The cities of Imaruí and Tubarão were where there was the presence of sand flies, being the habitat more frequently near the peri-domiciliary .The females sand flies went through molecular analysis in order to detect the presence of protozoa of the genus Leishmania spp., however, the samples were negative. / Submitted by Alexandre Pedron Martins (alexandre.martins8@unisul.br) on 2017-05-05T18:38:22Z No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Paula Fassicolo Variza.pdf: 1264063 bytes, checksum: d56f82f20238acf2313cb53257829d80 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Paula Fassicolo Variza.pdf: 758561 bytes, checksum: 705bcdd99cc55d6320d93a53c5a39a95 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Pedron Martins (alexandre.martins8@unisul.br) on 2017-05-05T18:38:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Paula Fassicolo Variza.pdf: 1264063 bytes, checksum: d56f82f20238acf2313cb53257829d80 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Paula Fassicolo Variza.pdf: 758561 bytes, checksum: 705bcdd99cc55d6320d93a53c5a39a95 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T18:38:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Paula Fassicolo Variza.pdf: 1264063 bytes, checksum: d56f82f20238acf2313cb53257829d80 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Paula Fassicolo Variza.pdf: 758561 bytes, checksum: 705bcdd99cc55d6320d93a53c5a39a95 (MD5) Previous issue date: 2016-12-15 / As leishmanioses são zoonoses provocadas pela infecção por protozoários do gênero Leishmania spp.. A transmissão das leishmanioses ocorre por meio da picada das fêmeas de insetos flebotomíneos infectados. Estudos de caracterização clínica, biológica e epidemiológica são fundamentais para que possam ser elaboradas estratégias de ação e prevenção individualizadas para as leishmanioses, visto que os padrões de transmissão, espécies dos vetores e espécies de Leishmania podem apresentar-se de forma muito distinta em diferentes regiões. Dessa forma o monitoramento constante das espécies de flebotomíneos circulantes é extremamente importante uma vez que, se perceber o aumento de espécies ou espécimes ao longo dos anos, deve-se atentar para o estabelecimento de métodos de controle para esses vetores. A presente pesquisa teve como objetivo caracterizar a fauna de flebotomíneos, ao que se refere à riqueza e abundância (em peridomicílio, mata urbana e fonte alimentar animal) e identificação molecular de Leishmania spp. das espécies de três municípios (Criciúma, Imaruí e Tubarão), da região Sul de Santa Catarina, Brasil. As coletas dos insetos foram realizadas nos três municípios em diferentes pontos de coleta: fonte alimentar animal, mata urbana e peridomicílio. Foram realizadas coletas mensais de abril de 2015 a março de 2016, totalizando 108 coletas, onde 4.200 insetos da família Psychodidae foram coletados. Foram identificadas a presença de duas subfamílias: Sycoracinae e Phlebotominae. A subfamília Sycoracinae apresentou um expressivo número de espécimes totalizando 4.193 indivíduos e a subfamília Phlebotominae 7 espécimes de duas espécies: Nyssomyia neivai e Pintomyia fisheri. Os municípios de Imaruí e Tubarão foi onde houve a presença de flebotomíneos, sendo o habitat com maior frequência próximo ao peridomicílio. As fêmeas dos flebotomíneos foram submetidas à análise molecular para detecção da presença de protozoários do gênero Leishmania spp., entretanto nenhuma amostra foi positiva para a presença do parasito.

Submitted by Stephany Silva (stephany.silva@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-19T12:39:49Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado_Vanessa Fitipaldi final. 15.07.16pdf.pdf: 4368605 bytes, checksum: 43e7621075f176708936269193abf2d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Adagilson Silva (adagilson@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-19T18:06:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado_Vanessa Fitipaldi final. 15.07.16pdf.pdf: 4368605 bytes, checksum: 43e7621075f176708936269193abf2d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T18:06:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado_Vanessa Fitipaldi final. 15.07.16pdf.pdf: 4368605 bytes, checksum: 43e7621075f176708936269193abf2d3 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A oferta e uso das Práticas Integrativas e Complementares (PICs) tem aumentado no Brasil e no mundo. Dentre as que mais cresceram no Brasil estão as chamadas Práticas Corporais (PCs). Esse artigo objetivou traçar um perfil dos usuários de PCs analisando sua qualidade de vida, os aspectos sociodemográficos e de saúde e os motivos que os levaram a procurar um serviço de PICs. Se tratou de um estudo exploratório e analítico, de abordagem quantitativa. Os dados foram coletados por meio dos prontuários e da avaliação qualidade de vida pelo WHOQOL-bref de 147 usuários de práticas corporais ofertadas por uma unidade de práticas intergrativas em Recife-PE. Os resultados apontaram associações significantes entre os aspectos sócio demográficos e de saúde, a qualidade de vida e os motivos de procura dos usuários de práticas corporais pelo serviço de PICs (AU)