Orientador: Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T06:00:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Menezes_DulcineaBlum_D.pdf: 1620753 bytes, checksum: 0d62ea2ae59bfb2f69d0243a4b9e4be5 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A inserção de cateter venoso central (CVC) representa um importante risco para as infecções sistêmicas nosocomiais, e para estas infecções, Staphylococcus epidermidis é o patógeno mais importante. Com o objetivo de analisar os perfis de DNA genômico, detectar a presença e expressão de gene responsável pela produção de biofilme e estudar a dinâmica da colonização, cepas de S. epidermidis obtidas de episódios de isolamento deste microrganismo em culturas microbiológicas de ponta de CVC e/ou hemoculturas foram comparadas com cepas coletadas da microbiota do paciente hospitalizado no Hospital das Clínicas da UNICAMP. Este estudo também objetivou analisar os procedimentos médico-hospitalares intervencionais destes pacientes. Pacientes com culturas microbiológicas de ponta de CVC (>15 UFC) e/ou hemoculturas positivas para S. epidermidis foram selecionados para a coleta de microbiota presente na pele e mucosa nasal, através de coleta local com zaragatoas umedecidas. As cepas de S. epidermidis foram analisadas através do método de PFGE; teste de sensibilidade a antimicrobianos; detecção da presença do gene ica, através da técnica de PCR e detecção de biofilme, através do método CRA. Fizeram parte deste estudo 247 cepas obtidas de 12 pacientes selecionados em 18 episódios estudados. Foram encontrados 26 distintos perfis genotípicos e 4 perfis fortemente relacionados. Em 10 episódios o mesmo perfil genotípico de DNA foi detectado simultaneamente em cepas clínicas e de microbiota, onde 6 destes episódios ocorreram quando o período de implantação da CVC foi superior a 15 dias. Nos 7 episódios em que não houve concordância entre os perfis genotípico de DNA em cepas clínicas e de microbiota, 5 destes episódios ocorreram igualmente em período inferior a 15 dias, não havendo diferença estatística entre os grupos. Por PFGE foram identificados 6 perfis genotípicos predominantes nas cepas de microbiota. Estes perfis representaram 68% (132/193) das cepas de microbiota, e um destes perfis se mostrou prevalente (77/193) nas cepas de microbiota. Em 10 episódios (8 pacientes), o perfil genotípico prevalente foi identificado compondo a microbiota. Foi comprovado, por comparação da diversidade dos perfis genotípicos, que durante o período de hospitalização o perfil geral da microbiota sofre mudanças de um perfil de diversidade genotípica policlonal para um perfil de diversidade oligoclonal, com predominância de um perfil genotípico. A mudança de diversidade genotípica foi relacionando a administração prévia de ciprofloxacina. As cepas com perfis genotípicos predominantes não apresentaram maior prevalência da presença do gene ica, em relação às cepas não predominantes, o que não foi justificado que cepas potencialmente produtoras de biofilme se sobrepusessem em relação às cepas desprovidas deste gene. Oito dos 12 pacientes apresentaram concomitante ou posterior infecção por bacilos Gram negativos, destes 2 foram a óbito por septicemia. De acordo com os resultados, nós concluímos que pacientes submetidos a longos períodos de hospitalização são colonizados por microbiota de diversidade oligoclonal de S. epidermidis e a colonização ou infecção de CVC por destas cepas, potencialmente produtoras de biofilme em contato com a corrente sanguínea, pode ser uma oportunidade para infecções posteriores por outros microrganismos devido a potencial produção de biofilme inerente a S. epidermidis / Abstract: Central vascular catheters (CVC) represent an important risk for nosocomial bloodstream infections and Staphylococcus epidermidis is the most important pathogen of these systemic infections. To analyze the genomic DNA profiles, to detect the presence and expression of the responsible gene for biofilm production and to study the colonization dynamic, S. epidermidis strains isolated from tip CVC and blood positive cultures were compared with the strains isolated from skin and nasal swab in patients hospitalized in a tertiary care university hospital, the Hospital das Clínicas of UNICAMP. It was analyzed the previous medical care proceedings that the same patients underwent. Patients with microbiologic cultures for S. epidermidis from blood and/or catheter tip (>15 CFU) were selected to have swabs from skin and nasal. S. epidermidis were typed using PFGE, antibiotic susceptibility testing, presence of ica gene detection, by PCR, and biofilm detection, by Congo red method, were performed. Twelve patients with 18 episodes of colonization or catheter-related infection were included in this study and 247 strains were analyzed. It was found 26 distinct genotypic profiles and 4 strongly related genotypic profiles. In 10 episodes, the same DNA profile was detected in clinical and in microbiota strains, 6 of them occurred when the period of catheter implantation were higher than 15 days. In 7 episodes, there was not concordance among genotypic profiles from clinical and microbiota strain, and 5 of them occurred when the period of catheter implantation were lower than 15 days, too. It was not found statistic difference between the groups. PFGE identified six predominant genotypic profiles that were present in 68 % (132/193) of microbiota strain, and one of them was prevalently present (77/193). The prevalent genotypic profile was found compounding the microbiota in 10 episodes (8 patients). It was proofed, by comparison of the diversity of genotypic profiles, that during the hospitalization period the microbiota general profile changes from the diversified genotypic profile (polyclonal) to a poorly diversified genotypic profile (oligoclonal), with a predominant genotypic profile. It found was related with the previous ciprofloxacin administration. The predominant DNA profiles strains did not presented higher prevalence according to the presence of ica gene when comparing to non predominant strains, what it was not justified that potentially biofilm producers can superpose over non ica strains. Eight of 12 patients presented concomitant or posterior infection by negative Gram rots, whose 2 were to obit by sepsis. According to the results, we concluded that patients with long-term hospitalization were previously colonized by oligoclonal-diversified microbiota S. epidermidis and CVC colonization or infection by this agent, potentially biofilm producer present at bloodstream can be an opportunity to other microorganism posterior infections, due to potential biofilm production inherent to S. epidermidis / Doutorado / Ciencias Medicas / Doutor em Clínica Médica

A obesidade é uma doença nutricional crescente em humanos e de alta prevalência nos cães. Este distúrbio nutricional e decorrente, principalmente, de um balanço energético inadequado. O excesso de peso pode exacerbar uma doença preexistente e predispor ao desenvolvimento de outros problemas de saúde, como Diabetes mellitus, aumento dos níveis de colesterol e triglicérides, doenças hepáticas, lesões osteoarticulares, hipertensão, alterações cardíacas e respiratórias. Em medicina humana, a associação entre hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hiperleptinemia, hipertensão arterial, hipertrofia ventricular e disfunção cardíaca demonstra que a obesidade e um fator de risco para a doença cardiovascular. O aminoterminal peptídeo natriurético tipo B (Nt- proBNP) é um marcador útil de disfunção ventricular nas doenças cardíacas em humanos, bem como em cães e gatos. No entanto, ainda não está claro como interpretar os níveis de Nt- proBNP em pacientes obesos, visto que os níveis deste peptídeo parecem ter correlação negativa com o índice de massa corpórea. A disfunção diastólica é comumente observada em indivíduos obesos e pode ser detectada precocemente por meio de ecocardiograma Doppler tecidual pulsado. Assim, considerando que os diversos estudos corn Nt- proBNP em humanos obesos são controversos e a inexistência de estudos em animais obesos, o objetivo deste estudo foi avaliar o possível papel dos peptídeos natriuréticos como marcadores pré-clínicos de doença cardíaca na obesidade canina e sua relação com os parâmetros de função diastólica avaliados pelo Doppler tecidual pulsado. Para isto, selecionaram-se 49 cães com escore de condição corporal normal (ECC 5) e 48 obesos (ECC 8 e 9), pareados com relação ao gênero, raça e idade. Os cães obesos apresentaram concentração de Nt- proBNP major que os cães com ECC5/9, e alterações em algumas variáveis ecocardiográficas de função diastólica de VE, avaliadas pelo Doppler tecidual pulsado. Também foi observado aumento na relação Ef/Em associado a alta concentração de Nt-proBNP, sugerindo aumento na pressão de enchimento do ventrículo esquerdo em cães obesos. / Obesity is an increasing nutritional disease in humans, and highly prevalent in dogs. This nutritional disturbance is a consequence of an inadequate energetic balance. Weight excess may exacerbate a pre-existing disease and predisposes to the development of other health problems as diabetes mellitus, increased colesterol and triglyceride levels, hepatic diseases, osteoarticular diseases, hypertension, cardiac and respiratory problems. In human medicine, the association between hyperinsulinemia, hyperlipidemia, hyperleptinemia, arterial hypertension, ventricular hypertrophy and cardiac disfunction demonstrates that obesity is a risk factor for cardiovascular disease. Type B aminoterminal natriuretic peptide (Nt- proBNP) is a useful marker of ventricular dysfunction in heart disease in humans, as well as in dogs and cats. Nonetheless, it is still unclear how to interpret the levels of Nt-proBNP in obese patients, because it has been negatively correlated to body mass index. Diastolic dysfunction is frequently observed in obese patients and may be detected early by pulsed tissue Doppler imaging (TDI). Therefore, considering that controversial results in several studies on Nt-proBNP in obese humans, and the lack of studies in obese animals, the purpose of this study was to evaluate the possible role of Nt-proBNP as preclinical marker of cardiac disease in obese dogs, and the relationship with diastolic function parameters assessed by pulsed TDI. Foully-nine dogs with ideal body score condition (BCS5/9) and 48 obese dogs (BCS 8 and 9/9), were selected, paired for gender, breed/size and age. A higher Nt-proBNP concentration was found in obese dogs in relation to BCS 5/9 dogs, and some changes in echocardiographic variables of diastolic function, assessed by pulsed TDI. There was also increase Ef/Em ratio associated with a higher Nt-proBNP levels, suggesting an increased filling pressure of left ventricle in obese dogs.

Esta investigação tem a finalidade estudar experimentalmente os efeitos do ultra-som pulsado de baixa intensidade sobre a espermatogênese de ratos pré-púberes e adultos. Foram utilizados 40 ratos machos da raça Wistar, sendo 20 pré-púberes e 20 adultos, os quais tiveram os testículos estimulados por 15 minutos durante 10 dias consecutivos. Cada grupo experimental constou de 10 animais pré-púberes ou adultos, estimulados com o ultra-som pulsado de baixa intensidade ou não estimulados. Administrou-se Colchicina, 6 horas antes do sacrifício dos animais com a finalidade de bloquear a divisão das células em metáfase para facilitar a avaliação do ciclo espermatogenético. Mediante morfometria estimou-se as áreas dos túbulos seminíferos e fez-se a avaliação dos estadios do ciclo espermatogenético quando foi constatado um aumento significativo das áreas dos túbulos seminíferos dos animais estimulados. O ciclo espermatogenético de ratos pré-púberes e adultos foi avaliado mediante contagens de associações celulares do ciclo nos estadios VII e VIII e XIV, correspondentes ao fim e início de cada ciclo. Houve aumento temporal do ciclo espermatogenético por apresentar maior número de associações com características dos estadios VIII significando acentuada maturidade de espermatozóides nos ratos pré-púberes estimulados. Os testículos dos animais adultos estimulados apresentaram aumento de peso em relação aos dos controles, exibindo uma diferença significativa. Nossos resultados são compatíveis com a hipótese de que o ultra-som pulsado de baixa intensidade estimula o aumento do peso dos testículos dos ratos adultos e das áreas dos túbulos seminíferos, bem como acelerando o ciclo espermatogenético em ratos pré-púberes. / This is an experimental study of the effects of low intensity pulsed ultrasound on the spermatogenesis of prepubertal and adult male rats. Forty male Wistar rats - twenty prepubertal and twenty adults -, whose testicles were stimulated for fifteen minutes for ten consecutive days were studied. Each experimental group was composed of ten prepubertal or adult animals, stimulated with low intensity pulsed ultrasound or not. Six hours before killing, the rats were given Colchicine to block the division of metaphasic cells, in order to facilitate the assessment of the spermatogenetic cycle. The area of the seminiferous tubule was done estimated by morphometry and the stages of spermatogenetic cycle were assessed, showing a significant increase of the areas of the seminiferous tubules of the stimulated animals. The spermiogenesis of prepubertal and adult rats was assessed through counts of cell associations in the stages VII and VIII and XIV, corresponding to the end and beginning of each cycle. There was a temporal increase in the spermatogenetic cycle due to a higher number of the associations with stage VIII characteristics, which means accentuated sperm cell maturity of the stimulated prepubertal rats. The testicles of the stimulated animals were weight increase regarding the of the control animals, showing a significant difference. Our results are compatible with the hypothesis that the low intensity pulsed ultrasound stimulates the increase of the testicle weight, the rats adults, and the area of the seminiferous tubules as well as accelerating the spermatogenetic cycle in rats prepubertal.

Introdução: Enterococcus resistente à vancomicina (VRE do inglês Vancomycin Resistant Enterococcus) é uma importante causa de infecção relacionada a assistência à saúde com alta morbidade e mortalidade principalmente nos pacientes imunocomprometidos sendo a segunda causa mais comum de infecções hospitalares nessa população de pacientes em alguns centros. O uso prolongado da terapia antimicrobiana com vancomicina e outras drogas, são fatores de risco associados com a disseminação desse patógeno. Além disso, espécies de enterococos podem apresentar fatores de virulência tais como: substância de agregação (asa1), gelatinase (gelE), citolisina (cylA), proteína de superfície enterococo (esp) e hidrolase glicosil (hylefm). Entretanto, o papel da virulência na colonização e infecção por VRE é controverso. Objetivos: Avaliar o perfil clonal, virulência e resistência de 86 isolados de VRE (80 E. faecium e 06 E. faecalis) de infecção e colonização de 76 pacientes com doenças hematológicas e/ou submetidos a transplante de Medula Óssea (TMO) internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP) no período de 10 anos (2005-2014). Material e Métodos: Foram realizadas concentração inibitória mínima para: vancomicina, teicoplanina, linezolida, gentamicina e estreptomicina em alta concentração (HLAR); Avaliação da clonalidade por eletroforese em campo pulsado (PFGE); Detecção dos mecanismos de resistência (vanA e vanB) e de virulência (esp, asa1, gelE, cylA e hylefm) pela técnica de PCR e sequenciamento total do genoma de dezoito isolados selecionados de acordo com a clonalidade. Foi criado um banco de dados no programa Epiinfo (CDC) com variáveis clinicas e demográficas dos pacientes. A proporção de isolados de colonização portadores de genes de virulência foi comparada com os isolados de infecção assim como a proporção de isolados de infecção portadores de genes de virulência que evoluíram para óbito. O valor de p < 0,005 foi considerado significativo. Resultados: Trinta e quatro pacientes eram colonizados e 42 infectados por VRE (28 eram infecção de corrente sanguínea), 48 pacientes eram transplantados dos quais 32 eram alogênicos. A mortalidade em 14 dias foi de 21.0% e durante a hospitalização de 53.9%. Todos os isolados foram resistentes à vancomicina e 87,3% à teicoplanina. Resistência a gentamicina e estreptomicina em alta concentração (HLAR) foi observada em 08 e 59 isolados respectivamente. Um isolado apresentou resistência a linezolida identificado pela primeira vez na unidade. O gene vanA foi detectado em todos os isolados. Quanto aos genes de virulência, 96,5% de isolados foram positivos para o gene esp e 69,8% para os genes gelE e asa1. Isolados de infecção de E. faecium carrearam mais genes de virulência: esp (100%), gelE (80,0%) e asa1 (75,5%) e o gene gelE foi significativamente mais frequente entre isolados de infecção que de colonização (p=0,008). Infecções causadas por isolados de E. faecium positivos para o gene asa1 foram significantemente associadas com maior mortalidade (p < 0,05). Quinze diferentes Pulsed field type (PFT) foram observados entre os isolados de E. faecium e 06 entre os isolados de E. faecalis. Dezessete E. faecium foram sequenciados e diferentes sequencias tipo (ST) foram observadas (ST412, ST478, ST78 e ST896) já descritas em outros estudos no Brasil. O isolado resistente a linezolida apresentou mutação no domínio V do gene 23S rRNA com um perfil alélico diferente, caracterizando um novo ST (ST987) descrito pela primeira vez no Brasil. Todos os ST observados nos isolados de E. faecium pertencem ao complexo clonal 17, dos quais dois STs (ST963, ST792) foram descritos pela primeira vez no país. O isolado de E. faecalis sequenciado pertencia ao ST9 e ao complexo clonal 9 já descrito por outros autores. Conclusão: Nosso estudo observou que E. faecium foi predominante em nosso hospital e os ST circulantes pertenciam ao CC17. Os isolados de infecção foram mais virulentos que os isolados de colonização e o gene gelE foi significativamente mais frequente nos isolados de infecção. Infecções causadas por isolados de E. faecium positivos para o gene asa1 foram associadas com a alta mortalidade. Este achado pode ser útil para controlar a disseminação de E. faecium no ambiente hospitalar e em pacientes hematológicos / Introduction: Vancomycin Resistant Enterococcus (VRE) is a important cause of health care-associated infection with high morbidity and mortality, mainly in immunocompromised patients, being the second most common cause of hospital infections in this population of patients in some centers. Prolonged use of antimicrobial therapy with vancomycin and other drugs are risk factors associated with the spread of this pathogen. In addition, enterococcal species may present virulence factors such as: aggregation substance (asa1), gelatinase (gelE), cytolysin (cylA), enterococcal surface protein (esp) and glycosyl hydrolase (hylefm). However, the role of virulence on VRE colonization and infection is controversial. Objectives: To evaluate the clonal profile, virulence and resistance of 86 isolates of VRE (80 E. faecium and 06 E. faecalis) from infection and colonization of 76 patients with hematological diseases and / or submitted to bone marrow transplantation (BMT) at Hospital das Clinics of the Medical School of the University of São Paulo (HC-FMUSP) in the period of 10 years (2005-2014). Material and Methods: Minimum inhibitory concentration to vancomycin, teicoplanin, linezolid, gentamicin and streptomycin in high concentration (HLAR) was performed; Clonality of isolates by pulsed field electrophoresis (PFGE) was evaluated; Detection of resistance (vanA and vanB) and virulence (esp, asa1, gelE, cylA and hylefm) genes by PCR technique and whole genome sequencing of eighteen isolates selected based on clonality. Results: All isolates were resistant to vancomycin and 87.3% to teicoplanin. Resistance to gentamicin and streptomycin in high concentration (HLAR) was observed in 08 and 59 isolates respectively. One isolate presented resistance to linezolid observed for the first time in the unit. The vanA gene was detected in all isolates. Regarding virulence genes, 96.5% of isolates were positive for the esp gene and 69.8% for the gelE and asa1 genes. Isolates of E. faecium infection carried more virulence genes: esp (100%), gelE (80.0%) and asa1 (75.5%) and gelE gene was significantly more frequent among infection isolates than colonization (p = 0.008). Infections caused by E. faecium isolates carrying the asa1 gene were significantly associated with higher mortality (p < 0.05). Fifteen different Pulsed field type (PFT) were observed among the isolates of E. faecium and 06 among E. faecalis isolates. Seventeen E. faecium were sequenced and the following sequences type (ST) were observed (ST412, ST478, ST78 and ST896) all of them already described in Brazil. The linezolid-resistant isolate showed the 23S gene Vdomain mutation with a different allelic profile, characterizing a new ST (ST987) described for the first time in our study. All STs observed in E. faecium isolates belong to clonal complex 17. Two other STs (ST963, ST792) were identified for the first time in the country. The E. faecalis isolate belong to ST9 and clonal complex 9 already described by other authors in Brazil. Conclusion: Our study observed that E. faecium was predominant in our hospital and the circulating STs belonged to CC17 a virulent lineage. E. faecium infection isolates were more virulent than colonization isolates and harbored significantly more gelE gene. It appears that infections caused by E. faecium isolates carrying asa1 gene evolved more frequently to death. This finding may be useful to control the spread of E. faecium in the hospital environment and in haematological patients

Esta investigação experimental teve como finalidade de avaliar os efeitos do ultra-som pulsado de baixa intensidade sobre a regeneração do miométrio e do endométrio de ratas submetidas à uterotomia. Foram utilizadas neste experimento 20 ratas adultas da raça Wistar, submetidas a uma uterotomia mediante incisão longitudinal de 1,5 cm total de uma das paredes do corno uterino. As ratas foram divididas em 2 grupos de 10 animais cada, sendo que um grupo foi submetido à estimulação ultra-sônica por 10 dias durante 15 minutos diários e outro grupo, chamado controle, foi submetido à estimulação fictícia pelo mesmo tempo e período. Seis horas antes do sacrifício, os animais receberam via intramuscular 0,10 mg de colchicina para cada 100 g de peso corporal com a finalidade de bloquear as mitoses em metáfase. A avaliação dos tecidos baseou-se na análise comparativa entre a contagem de células em mitose do endométrio e do miométrio de animais estimulados com o de animais controle. Os achados morfológicos foram analisados estatisticamente e são sugestivos de que o U.S.P. estimula a regeneração do miométrio bem como do endométrio de ratas. / This experimental investigation had the purpose to evaluate the low-intensity pulsed ultrasound effects under the regeneration of the myometrium and the endometrium of the rats that were submitted to uterotomia. It was used, in this experiment, twenty adult rats of the Wistar race, submitted to uterotomia beyond the longitudinal incision of total 1, 5 cm of one of the uterine horn walls. The rats were divided in two groups of ten animals each, the first group went trough fifteen daily minutes ultra-sound stimulation during ten days, and the second group, called control, went through fictional stimulation by the same time and period of the first group. Six hours before the sacrifice, the animals received, by intra muscular, 0, 10 mg of colchicine for each 100 g of body weight, with the intention to block the mitosis in metaphase. The evaluation of the tissue was based on the comparative analysis between the mitosis cell count of the stimulated animals\' endometric tissue and the control animals\' one. The morphologic findings were statistically analyzed.

Esta investigação tem a finalidade estudar experimentalmente os efeitos do ultra-som pulsado de baixa intensidade sobre a espermatogênese de ratos pré-púberes e adultos. Foram utilizados 40 ratos machos da raça Wistar, sendo 20 pré-púberes e 20 adultos, os quais tiveram os testículos estimulados por 15 minutos durante 10 dias consecutivos. Cada grupo experimental constou de 10 animais pré-púberes ou adultos, estimulados com o ultra-som pulsado de baixa intensidade ou não estimulados. Administrou-se Colchicina, 6 horas antes do sacrifício dos animais com a finalidade de bloquear a divisão das células em metáfase para facilitar a avaliação do ciclo espermatogenético. Mediante morfometria estimou-se as áreas dos túbulos seminíferos e fez-se a avaliação dos estadios do ciclo espermatogenético quando foi constatado um aumento significativo das áreas dos túbulos seminíferos dos animais estimulados. O ciclo espermatogenético de ratos pré-púberes e adultos foi avaliado mediante contagens de associações celulares do ciclo nos estadios VII e VIII e XIV, correspondentes ao fim e início de cada ciclo. Houve aumento temporal do ciclo espermatogenético por apresentar maior número de associações com características dos estadios VIII significando acentuada maturidade de espermatozóides nos ratos pré-púberes estimulados. Os testículos dos animais adultos estimulados apresentaram aumento de peso em relação aos dos controles, exibindo uma diferença significativa. Nossos resultados são compatíveis com a hipótese de que o ultra-som pulsado de baixa intensidade estimula o aumento do peso dos testículos dos ratos adultos e das áreas dos túbulos seminíferos, bem como acelerando o ciclo espermatogenético em ratos pré-púberes. / This is an experimental study of the effects of low intensity pulsed ultrasound on the spermatogenesis of prepubertal and adult male rats. Forty male Wistar rats - twenty prepubertal and twenty adults -, whose testicles were stimulated for fifteen minutes for ten consecutive days were studied. Each experimental group was composed of ten prepubertal or adult animals, stimulated with low intensity pulsed ultrasound or not. Six hours before killing, the rats were given Colchicine to block the division of metaphasic cells, in order to facilitate the assessment of the spermatogenetic cycle. The area of the seminiferous tubule was done estimated by morphometry and the stages of spermatogenetic cycle were assessed, showing a significant increase of the areas of the seminiferous tubules of the stimulated animals. The spermiogenesis of prepubertal and adult rats was assessed through counts of cell associations in the stages VII and VIII and XIV, corresponding to the end and beginning of each cycle. There was a temporal increase in the spermatogenetic cycle due to a higher number of the associations with stage VIII characteristics, which means accentuated sperm cell maturity of the stimulated prepubertal rats. The testicles of the stimulated animals were weight increase regarding the of the control animals, showing a significant difference. Our results are compatible with the hypothesis that the low intensity pulsed ultrasound stimulates the increase of the testicle weight, the rats adults, and the area of the seminiferous tubules as well as accelerating the spermatogenetic cycle in rats prepubertal.

Clostridium perfringens é um importante patógeno envolvido em doenças entéricas dos animais domésticos e quadros de toxinfecção alimentar em humanos. Embora as infecções causadas por C. perfringens biotipo C e A em suínos sejam amplamente estudadas, existem poucos relatos que descrevem as reais correlações genéticas existentes na cadeia epidemiologia das clostridioses para esta espécie animal, assim como a transmissão do agente através da fêmea lactante, e a eliminação e perpetuação do agente no momento do abate. O presente estudo teve como objetivo o isolamento e a caracterização genotípica através da eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) de cepas de C. perfringens isoladas a partir de fezes e de carcaças de suínos no momento do abate, fezes de fêmeas suínas e seus leitões e de amostras de farinha de carne e ossos. Foi ainda realizada a comparação dessas cepas com cepas isoladas a partir de leitões com enterite. A freqüência de isolamento do agente em carcaças, em fezes de leitões terminados e a partir de farinha de carne e osso foram, 44,2%, 52,5%, e 32,2% respectivamente. De acordo com a reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram detectadas somente as toxinas alfa e beta 2, sendo esta ultima detectada somente nos casos de enterite. Por meio da PFGE as amostras foram caracterizadas em 97 perfis genéticos com um alto índice discriminatório. As amostras isoladas de carcaça apresentaram alta similaridade em relação às de origem fecal, os isolados de farinha de carne apresentaram perfis similares aos obtidos em isolados de fezes de fêmeas, leitões sadios e leitões com enterite. E os isolados de leitões com e sem enterite apresentaram baixa similaridade em relação aos isolados de fêmeas. / Clostridium perfringens is an important enteric disease pathogen of domestic animals and foodborne diseases of human beings. Although infections caused by C. Perfringens type C and A in swine are well studied, just few reports describe genetic relationship among strains in the epidemiological chain of Swine Clostridioses, as well as the transmission of the microorganism by the nursing female its elimination and maintenance at slaughterhouses. The aim of the present study was the isolation and genotypic characterization by Pulsed-Field gel eletrophoresis (PFGE), of C. Perfringens strains from feces and carcasses from at slaughterhouse pigs, feces from sows and their piglets, and samples of meat and bone meal. The microorganism isolation frequencies in carcasses, finishing pig feces, and meat and bone meal were 44.2%, 52.5%, 32.2%, respectively. According to Polymerase Chain Reaction (PCR) assay, only the alfa and beta 2 toxins were detected; whereas beta 2 toxin was detected barely in cases of enteritis. By means of the PFGE assay techinique the samples were characterized in 97 genetic profiles with a high discriminatory level. Strains from carcasses samples presented high similarity to strains from fecal origin. strains from meat and bone meal samples showed similar profiles to strains from sow feces samples; of sows, assimptomatic piglets and piglets with enteritis. And strains isolated from piglets (assimptomatic and with enteritis) presented low similarity to strains from sow feces samples.

Diferentes métodos de caracterização e inferências filogenéticas baseadas na seqüência de alguns genes nucleares indicam que Typanosoma cruzi pode ser dividido em dois grupos principais, denominados T. cruzi I e T. cruzi II. Outros subgrupos de isolados foram descritos, tais como grupo de rDNA 1/2 e zimodema 3 (Z3) cuja relação filogenética com os grupos T.cruzi I e T.cruzi II ainda não está clara. O cariótipo molecular é uma ferramenta que permite abordar diferentes aspectos do genoma de organismos. Neste trabalho, caracterizamos o cariótipo molecular de 22 isolados de T. cruzi a partir da separação de seus cromossomos por eletroforese de campo pulsado e hibridação com sondas que representam genes codificadores de proteína e de RNA. Verificamos extenso polimorfismo cromossômico entre os isolados e que isolados pertencentes aos grupos T. cruzi II, rDNA 1/2 e Z3 têm cromossomos de tamanho molecular maior (até 3,5 Mb) em relação a isolados de T. cruzi I (até 2,8 Mb). Os dados do cariótipo molecular também foram utilizados para averiguar o significado evolutivo do polimorfismo cromossômico. As análises fenéticas foram baseadas no índice de diferença absoluta de tamanho cromossômico (aCSDI) obtido a partir da hibridação dos cromossomos com um número variável de marcadores genéticos. Inicialmente analisamos nove isolados, classificados por diferentes abordagens moleculares nos gruposT. cruzi I, T. cruzi II e grupo de rDNA 1/2, este último considerado um grupo de isolados híbridos e incluído por alguns autores no grupo T. cruzi II. Dendrogramas de aCSDI obtidos a partir de 3 a 21 sondas definiram em todos os casos três grupos: dois correspondentes a T. cruzi I e T. cruzi II e um terceiro, ao grupo de rDNA 1/2. O isolado CL Brener - organismo de referência do Projeto Genoma deT. cruzi - ora agrupou com T. cruzi II ora com o grupo de rDNA 1/2, ilustrando seu caráter híbrido. Três grupos também foram observados no dendrograma construído com dados de polimorfismo de tamanho de fragmentos de restrição (RFLP) hibridados com dezoito sondas. A topologia dos dendrogramas de dados de cariótipo molecular e de RFLP é similar, com um coeficiente de correlação significante (r = 0.86062; P < 0.0001), corroborando uma forte estruturação dos grupos. Subseqüentemente, avaliamos a posição de isolados de Z3 em relação aos três grupos acima mencionados, uma vez que alguns autores situam Z3 no grupo T. cruzi II. Analisamos o padrão de hibridação de 9 sondas com os cromossomos de 19 isolados (oito de Z3, três de T. cruzi I, três de T. cruzi II e cinco de rDNA 1/2). A topologia dos dendrogramas mostrou quatro grupos correspondentes, respectivamente, a T. cruzi I, T. cruzi II, grupo de rDNA 1/2 + CL Brener e Z3 (oito dos nove isolados). Este estudo também revelou que isolados híbridos têm uma maior proporção de cromossomos homólogos de tamanhos diferentes em comparação com isolados não híbridos. De um modo geral, nossos resultados mostram que cromossomos são caracteres valiosos para a identificação de táxons em T. cruzi. Uma vez que isolados do grupo de rDNA 1/2 apresentam cistrons ribossômicos de tipo 1 e de tipo 2, caracterizamos a distribuição dos cistrons nas bandas cromossômicas destes isolados. Verificamos que a fração majoritária dos genes de rDNA do tipo 2 está localizada na banda de 1,5 Mb e que os cistrons do tipo 1 estão localizados principalmente na banda de 1,1 Mb. Também estimamos o número de cromossomos e tamanho do genoma de quatro isolados de T. cruzi , com base na análise densitométrica da intensidade de fluorescência dos cromossomos corados com SYBR Green I. Para esta finalidade idealizamos um modelo matemático que permitiu estimar 52, 65, 72 e 44 cromossomos (na célula 2N), respectivamente, para CL Brener, Esmeraldo cl3, SO3 cl5 e Silvio X10 cl1. O tamanho do genoma dos isolados foi calculado, respectivamente em, 70 Mb, 78 Mb, 94,7 Mb e 47 Mb. Os novos aspectos do cariótipo molecular de T. cruzi aqui apresentados contribuirão para a compreensão da organização do genoma deste parasita e auxiliarão na atribuição de arcabouços de genes (scaffolds) aos cromossomos de CL Brener. / Different typing methods and phylogenetic inference based on the nucleotide sequence of few nuclear genes indicate that Trypanosoma cruzi can be divided into two major groups named as T. cruzi I and T. cruzi II. Additional subgroups of isolates have been described, such as group of rDNA 1/2 and zymodeme 3 (Z3), whose phylogenetic relationships with the T. cruzi I and T. cruzi II groups is not clear. The molecular karyotype is a tool that allows investigation of particular aspects of the genome of organisms. In this study, we have characterized the molecular karyotype of 22 isolates following the separation of chromosomes by pulsed-field gel electrophoresis and hybridization with probes that represent genes coding for proteins or RNA species. We observed an extensive chromosome polymorphism between the isolates and that isolates typed as T. cruzi II, rDNA 1/2 and Z3 have chromosome of larger molecular size (up to 3.5 Mb) in relation to T. cruzi I isolates (up to 2.8 Mb). Data from molecular karyotype have been also used to verify the evolutionary meaning of chromosome polymorphism. The phenetic analyses were based on the absolute chromosomal size difference index (aCSDI), calculated from the hybridization of a variable number of genetic markers. Initially, we analyzed nine isolates, classified by different molecular approaches into T. cruzi I,T. cruzi II and rDNA 1/2 groups. This latter group has been considered of hybrid genotypes and has been included by some authors in the T. cruzi II group. aCSDI-based dendrograms obtained from 3 to 21 probes defined in all the cases three clusters: two corresponding, respectively, to T. cruzi I and T. cruzi II groups; and a third one, to rDNA group 1/2. CL Brener - the reference organism of the T. cruzi Genome Project - was alternatively positioned in T. cruzi II or rDNA 1/2 group clusters, illustrating the hybrid nature of this isolate. Three clusters were also observed in the dendrogram constructed with restriction fragment length polymorphism (RFLP) data from 18 probes. The topology of the chromosome and RFLP dendrograms is similar, with a significant correlation coefficient (r = 0.86062; P < 0.0001), supporting a strong structuring of the clusters. Subsequently we evaluated the position of Z3 isolates in relation to the above-mentioned groups, because some authors clustered Z3 with T. cruzi II group. For this purpose we determined the hybridization pattern of 9 probes with the chromosomes of 19 isolates (eight of Z3; three of T. cruzi I; three of T. cruzi II and five of rDNA 1/2). The topology of the aCSDI-based dendrograms showed four clusters corresponding, respectively, to T. cruzi I, T. cruzi II, rDNA 1/2 + CL Brener and Zymodeme 3 (eight out of nine isolates). This study also revealed that hybrid stocks have a larger proportion of two different-sized homologous chromosomes, as compared with non-hybrid. Overall, our results show that chromosomes are valuable characters for identification of evolutionary groups in T. cruzi. Because rDNA 1/2 isolates have ribosomal cistrons of type 1 and type 2, we have characterized the distribution of both cistrons in the chromosomal bands of these isolates. We verified that the majority of type-2 rDNA genes are localized in a 1.5 Mb band, whereas type-1 cistrons are mostly concentrated in a 1.1 Mb band. We have also estimated the number of chromosomes and genome size of four T. cruzi isolates, based on the densitometric analysis of the fluorescence intensity of chromosomes stained with SYBR Green I. For this purpose, we devised a mathematical model that allowed estimating 52, 65, 72 and 44 chromosomes (2N cell), respectively, in CL Brener, Esmeraldo cl3, SO3 cl5 and Silvio X10 cl1. The genome size in these isolates has been calculated, respectively, as 70 Mb, 78 Mb, 94,7 Mb and 47 Mb. The novel aspects of T. cruzi karyotype here presented contribute to the comprehension of the genome organization of this parasite and will assist the assignment of scaffold to the CL Brener chromosomes.

O ultra-som é uma das formas de tratamento terapêutico, não-invasivo, que pode auxiliar na regeneração nervosa periférica. Dentre todas estas técnicas não-invasivas de regeneração nervosa periférica, pouco se sabe sobre a influência do ultra-som na regeneração desse tecido. Para tanto foi realizado um trabalho experimental com o objetivo de avaliar o efeito da terapia do ultra-som pulsado de baixa intensidade após lesão por esmagamento do nervo ciático de rato. Foram utilizados 26 ratos Wistar machos, com massa corporal média de 289,61g divididos em 3 grupos: normal (N), lesado (L) e lesado+ultra-som (L+US). A aplicação do ultra-som pulsado (1 MHz, 40 mW/\'CM POT.2\', 8 minutos de duração) iniciou-se 1 dia pós-lesão e repetido por 4 semanas em dias alternados. A análise funcional do nervo ciático (análise de marcha em pista) foi avaliada semanalmente durante todo o período experimental. Para verificar a eficácia do ultra-som sobre a regeneração nervosa foram analisados índice funcional do ciático, morfologia do nervo ciático e morfologia e morfometria muscular dos músculos tibial anterior (TA) e sóleo (SOL). Concluiu-se que o tratamento com o ultra-som pulsado de baixa intensidade na regeneração nervosa periférica não obteve resultados significativos quando se comparou os grupos lesado e lesado+ultra-som, apenas foi observada uma manutenção da área de secção transversa do grupo lesado+ultra-som do músculo TA quando comparado ao grupo normal, levando a indícios de que o ultra-som estimulou o nervo para tal manutenção. / The ultrasound is one of the forms therapeutic treatment, no-invasive, that it assists in regeneration peripheral nerve. For in such a way an experimental work was carried through with the objective to verify the effect of the therapy of low intensity pulsed ultrasound after crush of sciatic nerve. Amongst all these no-invasive techniques of regeneration peripheral nerve, little known on the influence of the ultrasound in the regeneration of this tissue. Twenty six male Wistar rats weighing 289,61 g on average were used and divided into three groups: normal (N), injury (L) and injury+ultrasound (L+US). The application of the pulsed ultrasound (1 Mhz, 40 mW/\'CM POT.2\' and 8 minutes duration) was started one day after lesion and repeated for 4 week in alternate day. The functional analysis of the sciatic nerve (analysis of the march in track) was evaluated at weekly during all the experimental period. To verify the effectiveness of the ultrasound on nerve regeneration they had been analyzed sciatic functional index, morphology of the sciatic nerve and muscle morphology and morfometry of the muscles tibial anterior (TA) and sóleo (SOL). It was concluded that the treatment with the device of ultrasound of low intensity in regeneration peripheral nerve did not get resulted significant when compared the groups injured and injury+ultrasound, was only observed a maintenance of the cross-sectional area of the group injury+ultrasound of the muscle TA when compared with the normal group, taking the indications of that the ultrasound stimulated the nerve for such maintenance.

Neste trabalho, foi desenvolvido um laser pulsado utilizando um chaveador-Q passivo em uma cavidade com a tecnologia de controle de modo por duplo-passo. Utilizando um cristal de Nd:LiYF4 com 0,8 mol% de dopagem, foi possível gerar um pulso com duração de 5,5 ns (FWHM), com 1,2 mJ de energia e potência pico de 220 kW para utilização na técnica Cavity Ring-Down Spectroscopy (CRDS). A técnica (CRDS), que pode ser traduzida por espectroscopia de cavidade ressonante, é utilizada para medida de espectros de absorção de gases, líquidos e sólidos. Com a técnica CRDS é possível medir perdas com altíssimo grau de precisão, ressaltando sua sensibilidade que é confirmada pela utilização de espelhos com alta refletividade. Foram avaliadas, com essa técnica, as perdas por reflexão e espalhamento de materiais transparentes. Após a calibração da cavidade ressonante, foi possível medir as perdas nas amostras com resolução de até 0,045%, sendo o valor máximo alcançado de 1,73%. Essa calibração foi possível, pois obteve se um tempo de decaimento de aproximadamente 20 &mu;s com a cavidade desobstruída. Também foi conseguido um método de determinação do índice de refração dos materiais transparentes com precisão de cinco casas decimais. / In this work, a pulsed and Q-switched laser resonator was developed using the double-beam mode-controlling technique. A Nd:LiYF4 crystal with 0,8mol% of doping concentration was used to generate a giant pulse with duration of 5,5 ns (FWHM), 1,2 mJ of energy and 220 kW peak power for the Cavity Ring-Down Spectroscopy (CRDS) technique. The CRDS technique is used to measure absorption spectra for gases, liquids and solids. With the CRDS technique it is possible to measure losses with high degree of accuracy, underscoring the sensitivity that is confirmed by the use of mirrors with high reflectivity. With this technique, the losses by reflection and scattering of transparent materials were evaluated. By calibrating the resonant cavity, it was possible to measure the losses in the samples with resolution of 0,045%, the maximum being reached by 1,73%. The calibration was possible because there was obtained to measure a decay time of approximately 20 &mu;s with the empty cavity. Besides was obtained a method for determining the refractive index of transparent materials with accuracy of five decimals.