[EN] The growing demand of consumers to reduce the environmental impact caused by the use of non-biodegradable materials had a great influence to the interest in the development of biodegradable films and coatings. This fact is added to the current trend of consuming safe, good quality and ready-to-eat products, being minimally processed (MP) fruits and vegetables that have undergone a fast increase because they provide health benefits. However, the MP products show a quick quality deterioration and shelf life reduction. In this context, the biopolymers are an alternative source for the development of materials due to their biodegradability. The chitosan (Ch) is a promising biopolymer for use as packaging. Quercetin (Q) is a known natural antioxidant that can be incorporated into the packaging material. The aim of this thesis was to obtain biodegradable films based in modified Ch with Q, and to study their physico-chemical, mechanical, microbiological, and barrier properties for use in the preservation of MP vegetables during storage. Native Ch characterization was performed at an initial stage. Ch derivatization was made by the chloroperoxidase enzyme (CPO) which reacts with the flavonoid modifying it into the related quinone. Chemical characterization of the derivatized molecule was made by determining the content of polyphenols and antioxidant capacity. Ch and Ch-Q based films were prepared according to the method proposed by Bourbon et al. 2011, with some modifications. Physicochemical properties, antioxidant capacity, mechanical properties such as stress (TS) and strain at maximum load (E), and oxygen (O2), carbon dioxide (CO2) and water vapor barrier properties. Furthermore, the antimicrobial ability against Escherichia coli and Staphylococcus aureus was investigated. Finally, the stability of coated MP carrots (Daucus carota L) was evaluated by studying the antimicrobial activity during refrigerated storage. In addition, the antioxidant capacity was evaluated by determining the ascorbic acid (AA) and beta-carotene content of samples coated with Ch and Ch-Q based film forming solution. Results indicate that the incorporation of Q in the polymeric matrix, through the Ch-Q adduct formation, modified the films properties. The use of Ch derivatized by Q, yielded coatings with better properties, especially with regard to thickness, density, optical, antimicrobial, and antioxidant properties, and capability barrier to O2 and CO2. The TS was increased due to the greatest degree of polymer crosslinking because Ch matrix-Q interactions. In addition, greater affinity with water than films had managed, increase the value of E; nevertheless, this effect was reduced because of the higher strength and stiffness of the polymeric film structure. Microbiological results of in vitro and coated carrots, indicate that biodegradable Ch-Q based films, with a concentration of 1% (w / v), are a feasible alternative in control of the microorganisms evaluated. The incorporation of Q resulted in a synergistic effect with Ch, controlling the microbiota present in the MP vegetable. The presence of Q had a positive influence on the antioxidant effect showed by functionalized molecule of Ch and film. Structural characteristics of Q had been decisive to increase the antioxidant activity. Regarding to the evaluation of the stability of MP carrots samples, a protective effect against loss of ¿-carotene was obtained; however, the content of AA was decreased at least 70%, could not be determined if any treatment had protective effect on this vitamin. According to these results, this type of coating is suitable for application to MP carrots improving quality and increasing their shelf life. However, it is possible to continue working to optimize certain properties, such as water vapor permeability. / [ES] El creciente interés por el desarrollo de películas y recubrimientos biodegradables para la conservación de los alimentos se debe, principalmente, a las exigencias cada vez mayores de los consumidores respecto de reducir el impacto ambiental ocasionado por el uso de envases no biodegradables. Este hecho se suma a la tendencia actual de consumir productos seguros, de buena calidad y listos para el consumo, siendo las frutas y verduras mínimamente procesadas (MP) las que han sufrido un rápido incremento debido a que proporcionan beneficios para la salud. Sin embargo, los productos MP presentan un rápido deterioro de la calidad y reducción de la vida útil. El quitosano (Ch) es un biopolímero muy prometedor para uso como envase. La quercetina (Q) es un reconocido antioxidante natural que puede ser incorporado en el material de envasado. El objetivo del presente trabajo fue la obtención de recubrimientos biodegradables utilizando como base el Ch modificado con Q, y el estudio de sus propiedades físico-químicas, mecánicas, de barrera y microbiológicas para su empleo en la preservación de vegetales mínimamente procesados durante su almacenamiento. En una primera etapa se realizó la caracterización del Ch nativo. La derivatización de Ch con Q se realizó a través de la reacción catalizada por la enzima cloroperoxidasa (CPO) la cual actúa sobre el flavonoide transformándolo en la correspondiente quinona altamente reactiva frente a Ch. Se realizó la caracterización química del derivatizado. Luego se prepararon las películas a base de Ch y Ch-Q según el método propuesto por Bourbon y col. 2011, con algunas modificaciones, y se evaluaron las propiedades fisicoquímicas, capacidad antioxidante, propiedades mecánicas y propiedades barrera. Se estudió la capacidad antimicrobiana frente a Escherichia coli y Staphylococcus aureus. Finalmente, se evaluó la estabilidad de zanahorias (Daucus carota L) mínimamente procesadas recubiertas, estudiándose la capacidad antimicrobiana durante el almacenamiento en refrigeración y la capacidad antioxidante, evaluando el contenido de ácido ascórbico (AA) y beta-caroteno. Los resultados obtenidos indican que la incorporación de la Q en la matriz polimérica, a través de la formación del aducto Ch-Q, modificó las propiedades de los films. El empleo de Ch derivatizado con Q, permitió obtener recubrimientos con mejores propiedades, principalmente en lo que respecta a espesor, densidad, propiedades ópticas, antimicrobianas, antioxidantes y de barrera frente a O2 y CO2. El mayor grado de reticulación del polímero debido a las interacciones entre la matriz de Ch y la Q, provocó un aumento en TS. Además, la mayor afinidad con el agua que presentaron los films logró incrementar el valor de E; sin embargo, este efecto se vio reducido por la mayor resistencia y rigidez de la estructura polimérica del film. Los resultados microbiológicos in vitro y sobre las zanahorias recubiertas, indican que los films biodegradables a base Ch-Q, con una concentración del 1% (p/v), son una alternativa viable en el control de los microorganismos evaluados. La incorporación de la Q resultó en un efecto sinérgico con el Ch, logrando controlar la microbiota presente en el vegetal MP. La presencia de Q influyó de manera positiva sobre el efecto antioxidante presentado por la molécula de Ch funcionalizada y por el film. Respecto de la evaluación sobre la estabilidad de las muestras de zanahorias MP, se obtuvo un efecto protector frente a la pérdida de b-caroteno; sin embargo, el contenido de AA sufrió una disminución de al menos 70%, no pudiéndose determinar si algún tratamiento tuvo efecto protector sobre esta vitamina. Conforme a estos resultados, este tipo de recubrimiento resulta adecuado para la aplicación sobre zanahorias MP procurando la mejora de la calidad y el aumento de la vida útil de las mismas. No obstante, es posible continuar trabajando a fin de optimizar a / [CAT] El creixent interès pel desenvolupament de pel·lícules i recobriments biodegradables per a la conservació dels aliments es deu, principalment, a les exigències cada vegada majors dels consumidors respecte de reduir l'impacte ambiental ocasionat per l'ús d'envasos no biodegradables. Aquest fet se suma a la tendència actual de consumir productes segurs, de bona qualitat i llestos per al consum, sent les fruites i verdures mínimament processades (MP) les que han patit un ràpid increment pel fet que proporcionen beneficis per a la salut. No obstant això, els productes MP presenten un ràpid deteriorament de la qualitat i reducció de la vida útil. El quitosan (Ch) és un biopolímer molt prometedor per a ús com a envàs. La quercetina (Q) és un reconegut antioxidant natural que pot ser incorporat en el material d'envasament. L'objectiu del present treball va ser l'obtenció de recobriments biodegradables utilitzant com a base el Ch modificat amb Q, i l'estudi de les seves propietats fisicoquímiques, mecàniques, de barrera i microbiològiques per a la seva ocupació en la preservació de vegetals mínimament processats durant l'emmagatzematge. En una primera etapa es realitza la caracterització del Ch natiu. La derivatització de Ch amb Q es va realitzar a través de la reacció catalitzada per l'enzim cloroperoxidasa (CPO) la qual actua sobre el flavonoide transformant-ho en la corresponent quinona altament reactiva enfront de Ch. Es va realitzar la caracterització química de l'derivatizado. Després es van preparar les pel·lícules a força de Ch i Ch-Q segons el mètode proposat per Bourbon i col. 2011, amb algunes modificacions, i es van avaluar les propietats fisicoquímiques, capacitat antioxidant, propietats mecàniques i barrera. A més, es va estudiar la capacitat antimicrobiana enfront de Escherichia coli i Staphylococcus aureus. Finalment, es va avaluar l'estabilitat de pastanagues (Daucus carota L) mínimament processades recobertes, estudiant-la capacitat antimicrobiana durant l'emmagatzematge en refrigeració. A més, es va determinar la capacitat antioxidant, avaluant el contingut d'àcid ascòrbic (AA) i beta-carotè. Els resultats obtinguts indiquen que la incorporació de Q en la matriu polimèrica, a través de la formació de l'adducte Ch-Q, va modificar les propietats dels films. L'ocupació de Ch derivatizado amb Q, va permetre obtenir recobriments amb millors propietats, principalment pel que fa a gruix, densitat, propietats òptiques, antimicrobianes, antioxidants i de barrera davant O2 i CO2. El major grau de reticulació del polímer causa de les interaccions entre la matriu de Ch i la Q, va provocar un augment en TS. A més, la major afinitat amb l'aigua que van presentar els films va aconseguir incrementar el valor d'E; però, aquest efecte es va veure reduït per la major resistència i rigidesa de l'estructura polimèrica del film. Els resultats microbiològics in vitro i sobre les pastanagues recobertes, indiquen que els films biodegradables a força Ch-Q, amb una concentració de l'1% (p / v), són una alternativa viable en el control dels microorganismes avaluats. La incorporació de la Q va resultar en un efecte sinèrgic amb el Ch, aconseguint controlar la microbiota present en el vegetal MP. La presència de Q influeix de manera positiva sobre l'efecte antioxidant presentat per la molècula de Ch funcionalitzada i pel film. Respecte de l'avaluació sobre l'estabilitat de les mostres de pastanagues MP, es va obtenir un efecte protector enfront de la pèrdua de b-carotè; però, el contingut d'AA va patir una disminució d'almenys 70%, no podent determinar si algun tractament va tenir efecte protector sobre aquesta vitamina. D'acord amb aquests resultats, aquest tipus de recobriment resulta adequat per l'aplicació sobre pastanagues MP procurant la millora de la qualitat i l'augment de la vida útil de les mateixes. Tanmateix, és possible continuar treballant per tal d'optimitza / Gallo, GA. (2015). Estudio de propiedades fisicoquímicas y biológicas de películas bioactivas a base de quitosano y su efecto sobre la extensión de la vida útil de vegetales mínimamente procesados [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/59419 / TESIS

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O gÃnero Bauhinia, famÃlia Leguminosae, compreende mais de 300 espÃcies distribuÃdas nas Ãreas tropicais do planeta, onde sÃo utilizadas na medicina popular no tratamento do diabetes. Estudos farmacolÃgicos preliminares [1] indicaram aÃÃo hipoglicemiante de Bauhinia ungulata L., conhecida popularmente como âPata-devacaâ, porÃm nenhum estudo fitoquÃmico havia sido realizado para a espÃcie[2]. Desta forma, o presente estudo se propÃs ao isolamento e determinaÃÃo estrutural dos constituintes volÃteis e nÃo-volÃteis das folhas de Bauhinia ungulata, e a posterior realizaÃÃo de testes farmacolÃgicos com os compostos isolados para a comprovaÃÃo da sua atividade farmacolÃgica. O estudo dos constituintes volÃteis das folhas de Bauhinia ungulata (Figura I) foi realizado atravÃs de um acompanhamento da composiÃÃo quÃmica do Ãleo essencial. Os principais constituintes encontrados no Ãleo de B. ungulata foram: (E)- -Cariofileno (1), -Humuleno (2), Germacreno D (3), Ãxido de Cariofileno (4), - Copaeno (5), Germacreno B (6), -Cadineno (7) e Biciclogermacreno (8). Foram observadas alteraÃÃes no teor do Ãleo das 9:00 para Ãs 12:00 hs com aumento dos constituintes 4 e 8 e reduÃÃo de 2, 3, 5, 6 e 7 alÃm do surgimento de sesquiterpenos oxigenados exclusivamente Ãs 12:00 hs. Para o estudo dos constituintes nÃo-volÃteis (Figura II) foram utilizados os extratos hexÃnico (EHBU) e etanÃlico (EEBU) das folhas de B. ungulata. ApÃs sucessivos tratamentos cromatogrÃficos, o extrato EEBU forneceu 4 metabÃlitos secundÃrios identificados como os flavonÃides 3,5,7-tri-hidroxi-2-(3â,4â-dihidroxifenil)- 4H-cromen-4-ona (Quercetina) (BU-1), Quercetina-3-OarabinofuranosÃdio (BU-2) e Quercetina-3-O--RhamnopiranosÃdio (Quercitrina) (BU-3) alÃm do inositol metoxilado 3-O-metil-quiroinositol (D-pinitol) (BU-4). A partir da fraÃÃo alcaloÃdica do EEBU foram obtidos os alcalÃides -carbolÃnicos harmano (BU-5) e eleagnina (tetrahidroharmano) (BU-6). A identificaÃÃo e quantificaÃÃo dos constituintes quÃmicos volÃteis foram realizadas atravÃs de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG/EM). XVII A caracterizaÃÃo estrutural dos compostos nÃo-volÃteis foi realizada atravÃs de tÃcnicas espectroscÃpicas, incluindo RMN-1D (ÂH, ÂÂC, DEPT), RMN-2D (COSY, HMQC, HMBC, NOESY) e espectroscopia de infravermelho (IR). / The Bauhinia genus possess 300 species distributed in tropical area of the planet. Species of this genus have been used in popular medicine on the diabetes treatment. Preliminary pharmacological studies showed hypoglicemic action of Bauhinia ungulata L. [1], popularly known on the northeast of Brazil as âpata-de-vacaâ, however, no phytochemical study has been reported yet [2]. This work reports the isolation and structural charactherization of the volatile and non-volatile constituents from the leaves of Bauhinia ungulata, for the accomplishment of pharmacological tests with the isolated compounds. A circadian study of the chemical composition of the leaves of B. ungulata was carry out with its essential oil. The main constituents were: (E)--caryophyllene (1), - humulene (2), germacrene D (3), cariilene (4), -copaene (5), germacrene B (6), - cadimene (7) e byciclogermacrene (8). Changes were observed at 9:00 to 12:00 a.m. with the increase of contents of the constituents 4 and 8, and reduction of contents of compounds 2, 3, 5, 6, 7, besides of appearance of oxygenated terpenes only at 12:00 a.m. The phytochemical study of the non-volatile constituents was accomplished by the investigation of the hexane (EHBU) and ethanol (EEBU) extracts. From the EHBU traicontanol was obtained in high contents. Sucessive chromatographies from the EEBU yielded 4 metabolites charactherized as the flavonoids quercetine, quercetine-3- O-arabinofuranoside and quercitrine, besides the methoxy inositol 3-O-metil- D-pinitol. The alkaloid fraction yielded the -carbolines harmane e eleagnine. XIX The identification of the volatile compounds was done by GLC/MS. Structure charactherization of the non-volatile was made by spectroscopic methods such as IR and two and one dimensional ÂH and ÂÂC NMR (COSY, HMQC, HMBC),

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El sobrepeso y obesidad son considerados uno de los mayores problemas en salud pública a nivel nacional y mundial, considerando que sus prevalencias han aumentado dramáticamente en las últimas tres décadas. Estudios recientes han demostrado el rol protector de los polifenoles en el desarrollo de obesidad y desórdenes metabólicos asociados, al modular rutas fisiológicas y moleculares involucradas en el metabolismo energético. Los polifenoles corresponden a los antioxidantes más abundantes en la dieta, destacándose entre ellos la quercetina, que ha sido extensamente estudiada debido a sus efectos anti-inflamatorios y antioxidantes. Su consumo está asociado a efectos benéficos para la salud, mejorando el perfil lipídico y la glicemia, atenuando la insulino-resistencia, adiposidad y obesidad. Como antioxidante podría proteger a los componentes celulares contra el daño oxidativo, y así, limitar el riesgo de desarrollo de patologías con un fuerte componente de estrés oxidativo como enfermedades cardiovasculares, diabetes y obesidad. Este estudio tuvo como objetivo determinar el efecto de quercetina en ratas alimentadas con una dieta alta en colesterol, en la expresión génica de factores de transcripción, co-activadores y genes involucrados en el metabolismo celular y homeostasis del colesterol en tejidos asociados al desarrollo de enfermedades crónicas relacionadas a estrés oxidativo. Los animales fueron distribuidos al azar en 4 grupos distintos y alimentados con dieta control (C), dieta control con suplementación de quercetina (CQ), dieta alta en colesterol (HC) o dieta alta en colesterol con suplementación de quercetina (HCQ) durante 4 semanas. Para esto se midió la expresión génica relativa (ARNm), mediante PCR en tiempo real, de PPARγ, PGC-1α, FOXO1, FOXO3, UCP-2 y HO-1 en páncreas, tejido adiposo epididimal (TAE) y subcutáneo (TAS) y en corazón, y se midieron los niveles de insulina en páncreas a través de inmunohistoquímica. En páncreas la modulación que ejerce quercetina sobre PPARγ, PGC-1α y FOXO1 no se relaciona con efectos protectores específicos ante la dieta HC. La cantidad de insulina en páncreas aumenta con la suplementación de quercetina, tanto en ratas alimentadas con la dieta C como con la dieta HC. En TAE, quercetina atenúa la alteración en la expresión de PPARγ, FOXO1, UCP-2 y HO-1 inducida por la dieta HC. En TAS, quercetina atenúa la alteración en la expresión de FOXO1 y HO-1 inducida por la dieta HC. En corazón, quercetina atenúa la alteración en la expresión de FOXO1, UCP-2 y HO-1 inducida por la dieta HC. En conclusión, quercetina tuvo un efecto protector en páncreas al aumentar la cantidad de insulina, a pesar de que no se observó un efecto protector específico ante una dieta HC. Por otra parte, la administración con quercetina en ratas alimentadas con una dieta alta en colesterol protege a tejido adiposo epididimal, subcutáneo y corazón a través de la regulación de distintos genes involucrados en el metabolismo energético. / Overweight and obesity are considered one of the most important problems in national as well as global public health, considering that their prevalence has increased dramatically over the past three decades. Recent studies have demonstrated the protective role of polyphenols in the development of obesity, and associated metabolic disorders, by modulating physiological and molecular pathways involved in energy metabolism. Polyphenols are the most abundant antioxidants in the diet, outstanding among them quercetin, which has been extensively studied because of its anti-inflammatory and antioxidant effects. Its consumption is associated with beneficial health effects, improving the lipid profile and glycemia, diminishing insulin resistance, adiposity and obesity. As an antioxidant, quercetin may protect cellular components against oxidative damage, and thus decreasing the risk of the development of diseases with a strong oxidative stress component, as cardiovascular disease, diabetes and obesity. This study aimed to determine the effect of quercetin on gene expression of transcription factors, co-activators and genes involved in cellular metabolism and homeostasis of cholesterol in rats fed a high cholesterol diet. These expression were studied, in tissues associated with the development of oxidative stress related chronic diseases. Animals were randomly distributed into 4 groups and fed control diet (C); control diet supplemented with quercetin (CQ); high-cholesterol diet (HC); or HC diet supplemented with quercetin (HCQ) for 4 weeks. Therefore, PPARγ, PGC-1α, FOXO1, FOXO3, UCP-2 and HO-1 relative gene expressions (mRNA) were measured by real-time PCR in pancreas, epididymal (TAE) and subcutaneous adipose tissue (TAS), and heart, and insulin levels were measured through immunohistochemistry in pancreas. The modulation exerted on PPARγ, PGC-1α and FOXO1 by quercetin was not related to its specific protective effects against a HC diet in pancreas. Quercetin increased the amount of insulin, both in rats fed a C or HC diet. Quercetin attenuated HC diet-induced alteration on PPARγ, FOXO1, UCP-2 and HO-1 expression in TAE. Quercetin attenuated HC diet-induced alteration on FOXO1 and HO-1 expression in TAS. Quercetin attenuated HC diet-induced alteration on FOXO1, UCP-2 and HO-1 expression in heart. In conclusion, quercetin had a protective effect on pancreas by increasing insulin levels, although a specific protective effect against a HC diet was not observed. Furthermore, quercetin administration to rats fed a high cholesterol diet protected epididymal and subcutaneous adipose tissue, and heart, through the regulation of several genes involved in energy metabolism. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11130232.

O aumento da incidência de câncer tem sido expressivo nas ultimas décadas na população mundial, sendo confirmada segundo previsões de entidades nacionais e internacionais da área da saúde. O surgimento do câncer é influenciado predominantemente por fatores genéticos e ambientais, sendo manifestado com mais intensidade na população adulta. As principais modalidades para tratamento do câncer (radioterapia, quimioterapia e cirurgia) podem ser usadas individualmente ou em combinação, dependendo do tipo de câncer. Entre as modalidades citadas, a radioterapia é aquela com maior abrangência no tratamento de pacientes, tendo associado um efeito colateral denominado radiodermite que possui graus de severidade que variam de um simples eritema até radionecrose. As manifestações da radiodermite poderão ocorrer durante o tratamento ou após as seções de radioterapia, ambas as situações terão grande relevância na qualidade de vida do paciente e no custo social. Uma das terapias alternativas estudadas para atenuar a radionecrose é a aplicação cutânea de quercetina. Para avaliar a efetividade desta atenuação foi elaborado um modelo animal de radionecrose a ser utilizado em ratos Wistar. Após estudos in vitro, foi possível determinar as concentrações e momento de aplicação da quercetina, redundo o número de animais a serem utilizados nos experimentos in vivo. Com a aplicação tópica de 250 mol/L de quercetina, uma hora antes da irradiação gama com dose de 85 Gy, foi possível minimizar os efeitos secundários da radiação, evitando a formação de radionecrose e uma tendência de atenuar a área da ferida nos animais estudados, em comparação aos animais irradiados sem a aplicação da mesma. / The increased incidence of cancer has been significant in recent decades in the world population, as confirmed by national and international institutions in the health area. The emergence of cancer is influenced, predominantly by genetic and environmental factors, being manifested more in the adult population. The main modalities for cancer treatment (radiotherapy, chemotherapy and surgery) may be used separately or in combination, depending on the type of cancer. Among the methods mentioned, radiation therapy is the one more broadly used for the treatment of patients, having an associated side effect called radiodermatitis, which has degrees of severity ranging from simple erythema to radionecrosis. The manifestation of radiodermatitis may occur during the treatment or after the radiotherapy sessions: both situations have great relevance in the patient\'s quality of life and social costs. One of the studied alternative therapies for attenuating the radionecrosis is the quercetin cutaneous application. One of the alternative therapies, studied to mitigate or eliminate the radionecrosis, is based on the topical application of quercetin. To evaluate the effectiveness of this mitigation, an animal model of radionecrosis was developed, to be used in Wistar rats. After in vitro studies, the quercetin concentrations and time of application were determined, reducing the number of animals, when in vivo experiments are carried out. With the topical application of 250 mol/L of quercetin, one hour prior to gamma irradiation, at a dose of 85 Gy, the side effects of radiation were minimized, avoiding the formation of radionecrosis. There was, also, a tendency to attenuate the wound area in the studied animals, compared to the irradiated animals without the quercetin application.

Submitted by Francine Silva (francine.silva@unipampa.edu.br) on 2019-03-26T18:42:20Z No. of bitstreams: 1 Caracterização da atividade entomotóxica induzida pelo extrato metanólico de araucaria angustifolia em baratas da espécie phoetalia pallida.pdf: 1288498 bytes, checksum: 743a39a2337c5be31393482af81a2fb6 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-03-26T18:42:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caracterização da atividade entomotóxica induzida pelo extrato metanólico de araucaria angustifolia em baratas da espécie phoetalia pallida.pdf: 1288498 bytes, checksum: 743a39a2337c5be31393482af81a2fb6 (MD5) Previous issue date: 2012-01-05 / Neste trabalho foi demostrado, pela primeira vez, a atividade inseticida do extrato metanólico de Arauacaria angustifolia (Bert.) O. Kuntze 1898 (AAME) e seu metabólito secundário, a quercetina, em baratas da espécie Phoetalia pallida. A investigação fitoquímica preliminar, realizada através da Cromatografia em Camada Delgada (CCD), demonstrou a presença do flavonóide quercetina no AAME. A confirmação da presença da quercetina no extrato foi obtida por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC), com tempo de retenção em 10.6min. A determinação de fenólicos totais indicou uma alta concentração destes compostos (1,03%) no AAME. Os ensaios para a determinação da dose letal mínima (DLM) em baratas da espécie P. pallida, confirmaram a atividade inseticida do extrato em doses a partir de (800g/g de animal). A mesma atividade foi demonstrada pela quercetina (80μg/g), porém, com maior potência comparada ao AAME. Ambos, AAME (200μg/g) e quercetina (40μg/g) foram eficazes em bloquear significativamente a atividade da enzima acetilcolinesterase no inseto. Os ensaios de atividade biológica demonstram uma atividade neurotóxica do AAME e da quercetina, tanto em nível central quanto periférico do inseto. Dessa forma, o AAME (200μg/g) e a quercetina (40μg/g) induziram um aumento no tempo total de grooming realizado pelo inseto, (138.11±5s /30min; p<0.05 e 2305s/30min; p<0.05), respectivamente. A administração de Atropina (40μg/g), previamente à adição de quercetina (40μg/g) induziu um aumento significativo na atividade de grooming quando comparado à quercetina isoladamente (3503s/30min; p<0.05). Quando o animal foi pré-tratado com Metoctramina (40μg/g), um inibidor seletivo de receptores colinérgicos M2-M3, observou-se o maior aumento no tempo de grooming induzido pela quercetina (40μg/g) (6008s/30min; p<0.01 teste t). Por outro lado, o pré-tratamento com o SCH23390 (40μg/g), um inibidor seletivo de receptores DA-D1, reduziu significativamente o grooming induzido pela quercetina (40μg/g) (906s/30min; p<0.05). A administração de Tiramina (40μg/g) e hidroxilamina (40μg/g), um inibidor da guanilato ciclase, aumentaram significativamente o tempo de grooming induzido pela quercetina (20415s/30min; p<0.05) e (32515s/30min; p<0.01), respectivamente. Quando ensaiados em preparação músculo coxal-adutor metatorácico de P. pallida, tanto o AAME (200μg/g de animal) quando a quercetina (40μg/g) induziram bloqueio neuromuscular irreversível em 120 min de registros (50±9%; p<0.05 e 100±7%; p<0.05), respectivamente. Este último resultado indica uma ação direta do extrato de A. angustifolia sobre o Sistema Nervoso Periférico da barata. Os resultados mostrados neste trabalho validam a atividade inseticida do AAME em P. pallida. Compostos fenólicos presentes no extrato provavelmente estão envolvidos na atividade inseticida, como demonstrado pela quercetina. O mecanismo de ação inseticida é complexo, e envolve tanto a neurotoxicidade sobre o Sistema Nervoso Central quanto sobre o Periférico. A ativação de uma cascata de eventos que se inicia com a ativação de autoreceptores muscarínicos no soma dopaminérgico e/ou em interneurônios colinérgicos, induziria um aumento da concentração do IP3 citosólico bem como do Ca2+ favorecendo a liberação da dopamina no sistema nervoso central do inseto. Quanto à atividade bloqueadora neuromuscular, estudos mais detalhados usando-se moduladores farmacológicos de receptores de glutamato e do ácido-gama-aminobutírico (GABA) poderão elucidar esse efeito. / We have demonstrated, for the first time, the insecticidal activity of Araucaria angustifolia methanolic extract (AAME) and one of its chemical secondary metabolites, quercetin against Phoetalia pallida. Preliminary investigation of AAME phytochemical compounds by thin layer chromatography showed the presence of quercetin. The total phenolic contents measured by spectrophotometry showed high content of phenolic acids (1,03%). High Performance Liquid Cromatography (HPLC) proved the presence of quercetin that was eluted at 10.6min. In doses ranging from 800-1200g/g (animal weight) AAME was effective to kill all cockroaches injected after 24 hours. Quercetin was more effective than AAME whole extract being lethal at 80g/g (animal weight). Both AAME (200μg/g of animal weight) and quercetin (40μg/g of animal weight) were able to induce a significative blockage at insect acetylcholinesterase activity. these compounds also induced increase in the time of grooming activity (138.11±5s /30min; p<0.05) and (2305s/30min; p<0.05), respectively. The injection of atropine (40μg/g) combined with quercetin (40μg/g of animal weight) significantly increased the grooming levels to over the control values of quercetin (3503s/30min; p<0.05). When methoctramine (40μg/g), a selective inhibitor of M2-M3 cholinergic receptor was combined with quercetin (40μg/g of animal weight) there was the highest increase on the grooming pattern (6008s/30min; p<0.01). When the SCH 23390 (40μg/g), a selective DA-D1 receptor blocker was administrated 15min earlier the treatment with quercetin (40μg/g) there was a significative inhibition of the grooming levels (906s/30min; p<0.05). Treatments with Tyramine (40μg/g) and Hydroxylamine (40μg/g), a Guanylate Cyclase (GC) induced a significative increase in the quercetin-induced grooming activity (20415s/30min; p<0.05) and (32515s/30min; p<0.01), respectively. Both AAME and quercetin were able to complete inhibit cockroach neuromuscular transmission in 120 min recordings (50±9% n=6; p<0.05) and (100±7% n=10; p<0.05), respectively . The later result, point out to a direct action of the extract on insect peripheral nervous system. The results presented here validate the insecticide activity of A. angustifolia methanolic extract in P. pallida. Phenolic compounds presents in this extract era likely to be involved in the insecticide activity of AAME. The mechanism of insecticide activity is complex and involve both Central and Peripheral Nervous System. The activation of events that initiate with the activation of Muscarinic Auto-receptors and/or cholinergic interneurons, could lead to an increase of cytosolic IP3 and Ca2+ concentration which could induce a dopamine release in the insect Nervous System. Concerning to the neuromuscular blockage, a further pharmacological investigation would be necessary to clarify this effect. However, one cannot disregard a direct action of quercetin on insect NMDA receptors.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Eula_Costa.pdf: 1234220 bytes, checksum: 9b0a765b29a3c24c4ab992c52d3cab65 (MD5) Previous issue date: 2009-03-25 / Considering the vast biotechnological applicability described for Beauveria bassiana, the versatility microbial biotransformation exhibits, the important biological activities attributed to the flavonoid quercetin, the therapeutic perspectives of its use, and the activity the enzyme quercetin 2,3-dioxygenase has on quercetin, we intended to evaluate quercetin biotransformation by B. bassiana ATCC 7159 and isolates of B. bassiana collected in the Midwestern Region of Brazil. The objectives of this study were: evaluate the potential of B. bassiana isolates and B. bassiana ATCC 7159 to produce metabolites of quercetin; investigate quercetin 2,3-dioxygenase production by the isolates and B. bassiana ATCC 7159; determine the genetic variability among the isolates of B. bassiana and establish possible correlations between molecular data and quercetin 2,3-dioxygenase production. All isolates and B. bassiana ATCC 7159 were capable of metabolizing quercetin and form compounds described in mammalian quercetin biotransformation studies and isolate IP 94 produced a higher number of metabolites compared with the others. B. bassiana ATCC 7159 and isolates IP 94, IP 98, IP 129, IP 147 produced methylated metabolites, while isolates IP 8, IP 11, and IP 94 produced glucuronidated metabolites. All the isolates produced sulphated metabolites and methylated and glucuronidated metabolites simultaneously and were capable to synthesize quercetin 2,3-dioxygenase. Quercetin 2,3-dioxygenase synthesis on PDSM, used in its biotransformation process was higher than on basic medium. B. bassiana ATCC 7159 and the isolates IP 11 and IP 132 presented the highest quercetin 2,3-dioxigenase activity, whereas the isolates IP 153 and IP 3a presented the lowest ones. Quercetin metabolites formation and quercetin 2,3-dioxygenase production were not correlated with the geographic origin of the isolates. Genetic variability analysis by RAPD allowed the separation of the isolates into three distinct groups and showed high genetic diversity among them; however, the RFLP-PCR of ITS region did not provide characteristic markers to differentiate the isolates. The ITS region sequencing confirmed the identity of the isolates as B. bassiana. The results obtained can lead to the following conclusions: B. bassiana constitutes an interesting alternative to the use of chemical methods and biological systems to produce quercetin metabolites, but is necessary to optimize the biotransformation process in order to obtain a more expressive amount of metabolites; B. bassiana is able to produce quercetin 2,3-dioxygenase, although more detailed studies are needed to explain its production pathway, regulation, and mechanism of action. / Considerando-se a vasta aplicabilidade biotecnológica descrita para Beauveria bassiana, a versatilidade que a biotransformação microbiana apresenta, as importantes atividades biológicas atribuídas ao flavonóide quercetina, as perspectivas quanto ao seu uso terapêutico e ainda a atividade da enzima quercetina 2,3-dioxigenase sobre a quercetina, pretendeu-se avaliar a metabolização da quercetina pela cepa B. bassiana ATCC 7159 e por isolados de B. bassiana obtidos na Região Centro-Oeste do Brasil. Os objetivos específicos do presente estudo foram: avaliar o potencial da cepa B. bassiana ATCC 7159 e dos isolados em produzir metabólitos da quercetina; investigar a produção de quercetina 2,3-dioxigenase pela cepa B. bassiana ATCC 7159 e pelos isolados; determinar a variabilidade genética entre os isolados de B. bassiana e estabelecer possíveis correlações entre dados moleculares e produção de quercetina 2,3-dioxigenase. Todos os isolados e a cepa B. bassiana ATCC 7159 foram capazes de metabolizar a quercetina formando compostos descritos nos estudos da metabolização deste flavonóide em mamíferos e o isolado IP 94 produziu um número maior de compostos quando comparado aos demais. B. bassiana ATCC 7159 e os isolados IP 94, IP 98, IP 129, IP 147 geraram metabólitos metilados, enquanto os isolados IP 8, IP 11 e IP 94 geraram metabólitos monoglicuronados. Todos os isolados estudados geraram metabólitos sulfatados e metabólitos metilados e glicuronados simultaneamente e foram capazes de sintetizar a enzima quercetina 2,3-dioxigenase. A síntese de quercetina 2,3-dioxigenase no meio de cultivo PDSM, utilizado para a biotransformação microbiana da quercetina, foi superior à obtida em meio mínimo. B. bassiana ATCC 7159 e os isolados IP 11 e IP 132 apresentaram maior atividade da quercetina 2,3-dioxigenase, enquanto os isolados IP 153 e IP 3a apresentaram as mais baixas. A formação dos metabólitos da quercetina e a produção de quercetina 2,3-dioxigenase não se relacionaram com a origem geográfica dos isolados. A análise da variabilidade genética por meio de RAPD permitiu dividir os isolados em três grupos distintos e mostrou elevada diversidade genética entre eles; porém, a análise por meio de RFLP-PCR da região ITS não permitiu diferenciar os isolados. A análise da sequência da região ITS confirmou a identidade dos fungos como B. bassiana. Os resultados obtidos permitiram concluir que: a biotransformação microbiana da quercetina por meio do fungo B. bassiana constitui alternativa ao uso de métodos químicos e sistemas biológicos para a produção de metabólitos da quercetina, sendo necessário otimizar o processo de biotransformação para a obtenção de quantidades expressivas dos metabólitos; B. bassiana é capaz de produzir a enzima extracelular quercetina 2,3-dioxigenase, sendo necessários estudos mais detalhados para elucidar sua via de produção, regulação e mecanismo de ação.

O aumento da incidência de câncer tem sido expressivo nas ultimas décadas na população mundial, sendo confirmada segundo previsões de entidades nacionais e internacionais da área da saúde. O surgimento do câncer é influenciado predominantemente por fatores genéticos e ambientais, sendo manifestado com mais intensidade na população adulta. As principais modalidades para tratamento do câncer (radioterapia, quimioterapia e cirurgia) podem ser usadas individualmente ou em combinação, dependendo do tipo de câncer. Entre as modalidades citadas, a radioterapia é aquela com maior abrangência no tratamento de pacientes, tendo associado um efeito colateral denominado radiodermite que possui graus de severidade que variam de um simples eritema até radionecrose. As manifestações da radiodermite poderão ocorrer durante o tratamento ou após as seções de radioterapia, ambas as situações terão grande relevância na qualidade de vida do paciente e no custo social. Uma das terapias alternativas estudadas para atenuar a radionecrose é a aplicação cutânea de quercetina. Para avaliar a efetividade desta atenuação foi elaborado um modelo animal de radionecrose a ser utilizado em ratos Wistar. Após estudos in vitro, foi possível determinar as concentrações e momento de aplicação da quercetina, redundo o número de animais a serem utilizados nos experimentos in vivo. Com a aplicação tópica de 250 mol/L de quercetina, uma hora antes da irradiação gama com dose de 85 Gy, foi possível minimizar os efeitos secundários da radiação, evitando a formação de radionecrose e uma tendência de atenuar a área da ferida nos animais estudados, em comparação aos animais irradiados sem a aplicação da mesma. / The increased incidence of cancer has been significant in recent decades in the world population, as confirmed by national and international institutions in the health area. The emergence of cancer is influenced, predominantly by genetic and environmental factors, being manifested more in the adult population. The main modalities for cancer treatment (radiotherapy, chemotherapy and surgery) may be used separately or in combination, depending on the type of cancer. Among the methods mentioned, radiation therapy is the one more broadly used for the treatment of patients, having an associated side effect called radiodermatitis, which has degrees of severity ranging from simple erythema to radionecrosis. The manifestation of radiodermatitis may occur during the treatment or after the radiotherapy sessions: both situations have great relevance in the patient\'s quality of life and social costs. One of the studied alternative therapies for attenuating the radionecrosis is the quercetin cutaneous application. One of the alternative therapies, studied to mitigate or eliminate the radionecrosis, is based on the topical application of quercetin. To evaluate the effectiveness of this mitigation, an animal model of radionecrosis was developed, to be used in Wistar rats. After in vitro studies, the quercetin concentrations and time of application were determined, reducing the number of animals, when in vivo experiments are carried out. With the topical application of 250 mol/L of quercetin, one hour prior to gamma irradiation, at a dose of 85 Gy, the side effects of radiation were minimized, avoiding the formation of radionecrosis. There was, also, a tendency to attenuate the wound area in the studied animals, compared to the irradiated animals without the quercetin application.

Submitted by BRUNO RAFAEL PEREIRA LOPES null (brunorpl@hotmail.com) on 2016-05-11T19:53:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação versão repositório.pdf: 7264895 bytes, checksum: 0ac82b804ba7471cb20cb92afa6c4d3f (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O arquivo submetido está sem a folha de aprovações providenciada pela Pós-graduação. Lembramos que a versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-05-13T16:24:02Z (GMT) / Submitted by BRUNO RAFAEL PEREIRA LOPES null (brunorpl@hotmail.com) on 2016-05-16T19:16:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação numerado FINAL Capa Dura versão folha de aprovação.pdf: 7936969 bytes, checksum: b93b6e0c25c357b92f65cec6ffb9e789 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-05-18T13:48:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lopes_brp_me_assis.pdf: 7936969 bytes, checksum: b93b6e0c25c357b92f65cec6ffb9e789 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-18T13:48:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lopes_brp_me_assis.pdf: 7936969 bytes, checksum: b93b6e0c25c357b92f65cec6ffb9e789 (MD5) Previous issue date: 2016-03-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No mundo, estima-se que exista cerca de 12 milhões de casos graves e 3 milhões de casos muito graves de infecção do trato respiratório inferior em crianças anualmente. Dentre os agentes etiológicos destas infecções, o vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a principal causa de internações infantis em países desenvolvidos, agravando os casos de bronquiolite, pneumonia e infecções pulmonares obstrutivas crônicas em pessoas de todas as idades, principalmente crianças e idosos. Estudos preliminares demonstraram que a Quercetina possui ação virucida sobre hRSV, além de inibir sua replicação. Entretanto, não se tem conhecimento do quão promissora é a atividade antiviral de Quercetina sobre o vírus hRSV ou mesmo se esta atividade poderia ser melhorada através de mudanças químicas em sua estrutura molecular. Assim, o objetivo deste trabalho foi estabelecer o índice de seletividade (IS) para Quercetina e seus derivados acetilados durante a infeção por hRSV através de ensaios in vitro. A análise de viabilidade celular através da adição do sal de MTT determinou os valores de CC50 para Quercetina na presença/ausência do vermelho de fenol (85 e 11,4 µM, respectivamente). Dentre as condições testadas, Quercetina apresentou atividade virucida (16-30% de proteção celular) sem apresentar efeitos no pré ou pós-tratamentos. Os valores de CC50 dos compostos derivados Q1 e Q2 foram 37,1 µM e 53,15 µM, respectivamente. O composto Q1 apresentou atividade anti-hRSV nos protocolos virucida e pós-tratamento (60-90%; 4-8 µM). O composto Q2 não apresentou atividade anti-hRSV relevante em nenhuma das condições testadas. A proteção celular apresentada pela Quercetina não possibilitou o cálculo de IS (CC50/CE50) o que nos sugere que este composto não seja um promissor agente anti-hRSV. Os índices de Seletividade calculados para o composto Q1 nos protocolos virucida e pós-tratamento foi de 9,27. O conjunto de resultados obtidos neste trabalho apresenta menor citotoxicidade e melhor performance anti-hRSV do composto Q1 em relação à Quercetina comercial. Estes dados nos estimulam a dar continuidade aos estudos do composto Q1 com o intuito de melhorarmos sua atividade antiviral e assim propormos um novo composto que seja efetivos na prevenção e/ou tratamento das infecções por hRSV. / Worldwide, is estimated that there are about 12 million serious cases and 3 million severe cases of lower respiratory tract infection in children every year. Among the etiological agents of these infections, respiratory syncytial virus (hRSV) is the leading cause of children's hospitalizations in developed countries, aggravating cases of bronchiolitis, pneumonia and chronic obstructive pulmonary infections in people of all ages, especially children and the elderly. Preliminary studies demonstrated that Quercetin has virucidal action on hRSV, and inhibits replication. However, we do not know how promising is the antiviral activity of Quercetin on the hRSV. The objectives of this work is to understand the action of Quercetin and some of its derivatives acetylated on the steps of the replicative cycle of hRSV, determining the selectivity index for each compound. The development of this project will assist in the search for effective compounds in the prevention and/or treatment of hRSV infections. In the cytotoxicity assays, Quercetin showed CC50 values variable depending on the presence/absence of phenol red (11.4 and 85 μM respectively). Among the concentrations tested Quercetin only showed a slight virucidal activity (16-30% concentration 5-10 μM). The CC50 values were derived compounds 37.1 μM for Q1 and Q2 to 53.15 μM. Compound Q1 showed anti-hRSV activity in virucidal and post-treatment protocol (60-90% at 4-8 μM). The Q2 compound showed no anti-hRSV relevant activity. The presence or absence of phenol red had great influence in determining the CC50 values of Quercetin (11.4 μM and 85 μM with phenol red). In addition, Quercetin showed little (virucidal protocol without phenol) or no anti-hRSV activity. Thus it has not been possible to establish the EC50 of Quercetin and determine its selectivity index (SI). The Q1 compound showed a greater CC50 value (37.1 μM) and relevant anti-hRSV activity in post-treatment and virucidal protocols (SI 9.27). Among the compounds tested, Q2 showed the highest value of CC50 (53.15 μM without phenol) however, had little or no anti-hRSV activity, making it impossible to determine their SI.

Orientador: Marcos Hikari Toyama / Resumo: A explosão respiratória está fortemente associada ao processo inflamatório, uma vez que diversos compostos antioxidantes estão envolvidos na potencialização ou neutralização deste processo. Diversos peróxidos inorgânicos e orgânicos são produzidos durante esse processo, como os hidroperóxidos de lipídio. Hidroperóxidos de lipídio são estáveis, extremamente reativos e podem induzir a apoptose celular. Tais lipídios modificados podem ser produzidos durante o processo inflamatório induzido pelas fosfolipases A2 (PLA2) que constituem o veneno de serpentes, que possui como consequência de sua atividade catalítica a produção de ácido araquidônico pela quebra de fosfolipídios de membrana, e estes então seriam oxidados por espécies reativas de oxigênio (ROS), formando os hidroperóxidos araquidônicos, que agravam o quadro inflamatório. Deste modo, nesse trabalho avaliamos o efeito protetor de compostos polifenólicos e extratos ricos em tais compostos de diferentes espécies vegetais no curso da inflamação e miotoxidade e no efeito inflamatório pró-oxidante induzido pela PLA2 purificada de veneno crotálico e botrópico. Nossos resultados mostraram que diversos compostos polifenólicos são capazes de diminuir os efeitos provocados pela PLA2, interagindo diretamente, inibindo a enzima e possivelmente atuando na captura de ROS. / Abstract: Respiratory burst is strongly associated with inflammatory process, since several antioxidant compounds are involved in potentiation or neutralization of this process. Various inorganic and organic peroxides are produced during this process such as lipid hydroperoxides. Lipid hydroperoxides are stable, highly reactive and can induce cellular apoptosis. Such modified lipids can be produced during the inflammatory process induced by phospholipases A2 (PLA2) which are present in snake venom, and produces, because of its catalytic activity, arachidonic acid by the breakdown of membrane phospholipids, and these would then be oxidized by reactive oxygen species (ROS), forming the arachidonic hydroperoxides, which aggravates inflammation. Thus, in this work we evaluated the protective effect of polyphenolic compounds and extracts rich in such compounds of different plant species throughout the inflammation and myotoxicity and in pro-oxidant effect induced by PLA2 purified from bothrops and crotalus venom. Our results showed that polyphenolic compounds can decrease effects caused by PLA2, by directly interaction, inhibiting the enzyme and possible acting to capture ROS. / Doutor

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T22:24:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 290634.pdf: 1887279 bytes, checksum: 38dbb1993715ad8a7209ea8375585349 (MD5) / A presente tese descreve o desenvolvimento de novos biossensores para aplicação na determinação de luteolina em amostras de chá de camomila e quercetina em formulação farmacêutica manipulada e suco de maçã, empregando a técnica de voltametria de onda quadrada. Inicialmente, dois biossensores contendo nanopartículas de prata ou ouro dispersas em líquido iônico hexafluorofosfato de 1-n-butil-3- metilimidazólio (Ag- ou Au-BMI.PF6) e lacase (Aspergillus oryzae) imobilizada em quitosana quimicamente modificada com cloreto cianúrico foram desenvolvidos. Esta enzima catalisa a oxidação da luteolina a sua correspondente o-quinona, a qual é reduzida eletroquimicamente na superfície do eletrodo a um potencial de 0,35 V versus Ag/AgCl. Sob condições previamente otimizadas, foram construídas as curvas analíticas para cada biossensor a partir da corrente resultante versus concentração de luteolina, apresentando linearidade em um intervalo de 9,9x10-8 a 5,8x10-6 mol L-1, com limites de detecção de 5,3x10-8 (Ag-biossensor) e 2,8x10-8 mol L-1 (Au-biossensor). A recuperação de luteolina nas amostras de chá variou de 90,0 a 105,1%. Esses biossensores demonstraram elevada sensibilidade de calibração, excelente seletividade, boa reprodutibilidade e estabilidade, e representam uma alternativa viável para determinação desta flavona. Na segunda parte desse estudo, um biossensor contendo nanopartículas de prata dispersas em líquido iônico bis(trifluorometanosulfonil)imidato de 1-n-butil-3-metilimidazólio (Ag-BMI.N(Tf)2) e lacase imobilizada em ß-ciclodextrina modificada com epicloridrina foi construído. A lacase catalisa a oxidação da quercetina a sua o-quinona, que é reduzida na superfície do biossensor a um potencial de 0,29 V. Este biossensor mostrou linearidade em um intervalo de 1,0x10-7 a 6,5x10-6 mol L-1 e um baixo limite de detecção (3,9x10-8 mol L-1). Além disso, forneceu excelentes resultados quanto à repetibilidade, reprodutibilidade, seletividade, estabilidade e recuperação, e também demonstrou ser apropriado para determinação de quercetina em amostra farmacêutica e suco de maçã (obtido da fruta fresca). / This present thesis describes the development of novel biosensors for application in the luteolin determination in chamomile tea samples and quercetin in manipulated pharmaceutical formulation and apple juice, using square-wave voltammetry. Initially, two biosensors containing silver or gold nanoparticles dispersed in ionic liquid 1-n-butyl-3-methylimidazolium hexafluoropho sphate and laccase (Aspergillus oryzae) immobilized in chitosan chemically modified with cyanuric chloride were developed. This enzyme catalyzes the oxidation of luteolin to its corresponding oquinone, which is electrochemically reduced on the surface electrode at a potential of 0.35 V versus Ag/AgCl. Under optimized conditions, the analytical curves for the biosensors were built from the resulting current versus luteolin concentration, presenting linearly in a range of 9.9x10.8 to 5.8x10.6 mol L.1, with detection limits of 5.3x10.8 (Ag-biosensor) and 2.8x10.8 mol L.1 (Au-biossensor). The recovery for luteolin in tea samples ranged of 90.0 to 105.1%. These biosensors demonstrated high calibration sensitivity, excellent selectivity, good reproducibility and stability, and represent a viable alternative for determination of this flavone. In the second part of this study, a biosensor containing silver nanoparticles in ionic liquid 1-butyl-3-methylimidazolium bis(trifluoromethylsulfonyl)imide (Ag-BMI.N(Tf)2) and laccase immobilized on â-cyclodextrin modified with epichlorohydrin was constructed. Laccase catalyzes the oxidation of quercetin to its oquinone, which is reduced on the biosensor surface at a potential of 0.29 V. This biossensor showed linearity in a range of 1.0x10.7 to 6.5x10.6 mol L.1 and a low detention limit of 3.9x10.8 mol L-1. Moreover, it supplied excellent results for repeatability, reproducibility, selectivity, stability and recovery, and also demonstrated to be suitable for quercetin determination in pharmaceutical formulation and apple juice (obtained of the fresh fruit).