Este estudo teve como objetivo avaliar a campanha de vacinação da Prefeitura de São Paulo na área da SUVIS Lapa/Pinheiros, em 2012. Obteve-se o perfil dos animais e proprietários atendidos e analisou-se a distribuição espacial e áreas de influência dos postos de vacinação, baseando-se na distância euclidiana percorrida pelos proprietários. Realizou-se amostragem não probabilística dos proprietários através da aplicação de um questionário. Os endereços dos animais e postos de vacinação foram plotados em mapas georreferenciados. As distâncias percorridas pelos proprietários foram significantemente maiores ao posto fixo (média de 2.911 metros [2.479-3.343]) do que aos postos volantes (média de 712 metros [657-767]). O meio de transporte mais utilizado até o posto fixo foi o automóvel (76% [69,9-82,1%]), enquanto que, nos postos volantes, a maioria dos proprietários levou seus animais a pé (76% [74,2-77,8%]). Em apenas 19% dos postos de vacinação todos os proprietários residiam no território da SUVIS Lapa/Pinheiros, sendo comum a vacinação de animais provenientes de outras regiões. A idade média dos cães foi de 5,8 anos [5,7-6,0] e 51% eram machos. Quanto à participação, 17% dos proprietários afirmaram ser a primeira vacinação de seus cães na campanha. A idade média dos gatos foi de 4,1 anos [3,9-4,4] e 57% eram fêmeas. Quanto à participação, 35% dos proprietários afirmaram ser a primeira vacinação de seus gatos na campanha. A idade média dos proprietários de cães foi de 40,38 anos, sendo 54% mulheres. Quanto ao transporte, 73% [71,6-74,9%] dos proprietários levaram os cães a pé, e 26% [24,7-28%] utilizaram automóvel. A idade média dos proprietários de gatos foi de 39,85 anos, sendo 62% mulheres. Quanto ao transporte, 63% [58,9-66,5%] dos proprietários levaram os gatos a pé, e 35% [31,4-38,9%] utilizaram automóvel. O número de animais vacinados na SUVIS Lapa/Pinheiros em 2012 foi o menor das últimas quatro campanhas, havendo decréscimo de 34,1% no número total de vacinados em relação a 2009, com diminuição de 35,8% para cães e 25,6% para gatos. Torna-se necessário aprimorar e adequar a estratégia de vacinação, principalmente em função das diferenças socioeconômicas desta área. / The purpose of this study was to evaluate the anti-rabies vaccination campaign in the region of SUVIS (Health Surveillance Supervision) Lapa/Pinheiros in 2012. The profile of the animals immunized and their respective owners was obtained and an analysis of the geographical distribution and the areas under the influence of the vaccination stations was made, based on the euclidean distance travelled by the animal owners. A non-probability sampling of the owners was carried out via questionnaire. The home addresses of the animals and of the vaccination stations were plotted on georeferenced maps. The distances travelled by the animal owners were significantly longer to the stationary station (average of 2.911 meters [2.479-3.343]) than to the mobile units (average of 712 meters [657-767]). The most frequently used mean of transportation to the stationary station was the car (76% [69,9-82,1%]), while most owners walked their animals to the mobile units (76% [74,2-77,8%]). In only 19% of the vaccination stations, all animal owners resided in the region under the supervision of SUVIS Lapa/Pinheiros, and the immunization of animals coming from other regions was a usual practice. The average age of the dogs was 5,8 years [5,7-6,0] and 51% of them were male. Regarding the participation in the vaccination campaign, 17% of the owners claimed to be the first vaccination of their dogs in the campaign. The average age of the cats was 4,1 years [3,9-4,4] and 57% of them were female. As for the participation, 35% of the owners claimed to be the first vaccination of their cats in the campaign. The average age of the dog owners was 40,38 years and 54% of them were women. Regarding the transportation, 73% [71,6-74,9%] of the owners walked their dogs to the vaccination station and 26% [24,7-28%] used cars. The average age of the cat owners was 39,85 years and 62% of them were women. As for their transportation, 63% [58,9-66,5%] of the owners walked and 35% [31,4-38,9%] used cars. The number of animals vaccinated in the region of SUVIS Lapa/Pinheiros in 2012 was the lowest of the last four campaigns, and there was a decrease of 34,1% in the total number of vaccinated animals in comparison with 2009, with a decrease of 35,8% for dogs and 25,6% for cats. Therefore, it is necessary to improve and adjust the vaccination strategy, mainly due to the socioeconomic differences in this area.

A raiva é uma zoonose viral que afeta o Sistema Nervoso Central (SNC) causando encefalite e meningoencefalite, de evolução aguda e fatal, que acomete mamíferos carnívoros e morcegos, e periodicamente se manifesta sob a forma de epizootias ou surtos epidêmicos em populações humanas. Neste estudo foram analisadas 16.190 amostras de bovinos, equídeos e morcegos, e menos frequentemente de outros mamíferos durante o período de 1981 a 2012, provenientes do Estado do Paraná. Desse total, 2.766 amostras foram positivas para raiva; 81,74% foram de bovinos, 10,34% de equídeos, 4,05% de morcegos, 2,31% em animais de produção não bovinos, 1,52% em caninos e 0,04%em outros animais. Ao longo da série histórica, há, para os bovinos, uma tendência de aumento das notificações e não foram observadas variação sazonal e cíclica. Na análise espaço-temporal foi detectado um aglomerado mais provável de notificações de raiva em bovinos, envolvendo 20 municípios da região litorânea e metropolitana de Curitiba entre 1981 e 1987. Além dele, foram detectados seis aglomerados secundários sugerindo uma migração da raiva ao longo do tempo no Estado do Paraná. Ao longo da série histórica dos equídeos há uma tendência de diminuição das notificações e não foram observadas variação sazonal e cíclica. Os clusters encontrados na análise espaço-temporal da raiva nos equídeos corroboram com aqueles encontrados na análise dos bovinos localizados nas mesmas regiões durante no mesmo período, sugerindo a migração do vírus da raiva no mesmo sentido da observada na análise dos bovinos. Durante o período de 1981 a 1997, os casos de raiva em morcegos acompanham o trajeto da migração dos aglomerados dos bovinos e dos equídeos, o que demonstra que a raiva ocorre endemicamente no território do Estado do Paraná em herbívoros e morcegos. / Rabies is a viral zoonosis that affects the central nervous system (CNS) causing encephalitis and meningoencephalitis, acute and fatal outcome, which affects mammalian carnivores and bats, and periodically manifests itself in the form of epidemics or outbreaks in human populations. In this study 16,190 samples of cattle, horses and bats, and less frequently other mammals were analyzed during the period 1981 to 2012, from the State of Paraná. Of this total, 2,766 samples were positive for rabies; 81.74 % were bovine, equine 10.34 %, 4.05 % of bats, 2.31 % in livestock no bovine, 1.52 % in canine, and 0.04% in other animals. Throughout the time series, there is, for cattle, a trend of increased reporting and no seasonal or cyclical variations were observed. In spatio-temporal analysis, more likely to notifications of rabies in cattle, a cluster involving 20 municipalities in coastal and metropolitan Curitiba between 1981 and 1987 was detected. Besides this, six sub clusters were detected suggesting a migration of anger over time in the state of Paraná. Throughout the historical series of equine there is a downward trend in notifications and no seasonal and cyclical variations were observed. Clusters found in the spatio-temporal analysis of rabies in horses corroborate those found in the analysis of cattle located in the same regions during the same period, suggesting the migration of rabies virus in the same direction as that observed in the cattle analysis. During the period from 1981 to 1997, cases of rabies in bats follow the migration path of clusters of bovine and equine. This shows that rabies is endemic in the state of Paraná in herbivores and bats.

No presente estudo foi avaliado os custos dos tratamentos anti-rábicos pósexposição e das atividades do controle da raiva canina realizada no Mogi Guaçu, no período de 2000 a 2004. Para as análises foram utilizadas as informações disponíveis no banco de dados do Sistema Nacional de Agravos de Notificação (SINAN) e dos dados pertinentes ao Programa de Controle da Raiva, fornecidos pelo Centro de Controle de Zoonoses. Com o auxilio das planilhas do programa Excel, os dados foram tabulados e os valores em reais, obtidos ano a ano (valores nominais), foram atualizados para valores do ano de 2006, tendo como deflator o Índice de Preço do Consumidor Ampliado (IPCA). No período estudado, ocorreram 4.279 notificações de pacientes agredidos por diferentes espécies de mamíferos. O tipo de lesão mais freqüente foi a mordedura, com 90,9% do total, tendo sido o cão a principal espécie agressora, com 84,1% do total dos agravos. Os pacientes do sexo masculino apresentaram o maior risco exposição (48,2%), o mesmo ocorrendo com os pacientes de faixa etária entre zero e 14 anos (35,2%). O esquema de tratamento pós-exposição, com três doses de vacina e a observação do cão agressor, foi preconizado para 18,3% das pessoas agredidas o que representou um gasto estimado de R$ 43.829,97. O esquema de vacinação (cinco doses) e soro-vacinação foi indicado para 6,2% dos pacientes, com um custo final estimado em R$ 34.731,83. Na composição do custo das ações de controle da raiva canina, o insumo de maior peso foi o combustível. Os custos médios por animal, relativos às ações direcionadas ao controle da raiva animal, foram 9,2 a 20,2 vezes inferiores aos valores estimados para o tratamento anti-rábico humano pós-exposição. As informações oficiais, disponíveis nos bancos de dados, foram suficientes para os cálculos dos custos x benefício propostos. A avaliação do custo x benefício das atividades de prevenção e /ou controle da raiva urbana é importante para a implantação de uma política de conscientização de proprietários e deve estar associada a programas educativos. / In this work, costs with post exposure anti-rabies treatments and activities for canine rabies control in Mogi-Guaçu were evaluated from 2000 to 2004. For the analyses, information available in the National System of Injury Notification database (SINAN) were used, as well as data from Rabies Control Program, supplied by the Center for Zoonoses Control. Data were compiled using Excel software spreadsheets and values in Reais (Brazilian currency), obtained annually (nominal values), were updated for values in 2006. The deflation index used was the Expanded Consumer Price Index (IPCA). In the period studied there were 4, 279 notifications of patients attacked by different kinds of mammals. Bites were the most frequent injury, with 90.9% of the total, having dogs as the main aggressor specie with 84.1% of total cases. Male patients presented the highest exposure risk (48.2%), as well as patients in the age range 0 ? 14 years old (35.2%). Post exposure rabies prophylaxis, including 3 vaccine doses and the observation of the aggressor dog, was adopted for 18.3% of attacked people, representing an estimated expense of R$43.829,97 (approximately US$ 20,198.14). Five-dose vaccination scheme and vaccine and equine rabies immunoglobulin were prescribed for 6.2% of patients, with an estimated final cost of R$34.731,83 (approximately US$16,005.45). In the cost composition for canine rabies control actions, fuel was the most representative item. Average cost per animal considering actions focused on animal rabies control, was 9.2 to 20.2 times lower than estimated values for post exposure human anti-rabies treatment. Official information available in database were enough to calculate the costs and benefits proposed. Cost benefit analysis of the activities for urban rabies prevention and/or control is important for the implementation of an awareness policy for dog owners and must be associated.

No Estado de São Paulo, a Coordenadoria de Defesa Agropecuária CDA, Unidade da Administração Direta, subordinada à Secretaria Estadual da Agricultura, foi criada em 1998. Subseqüentemente a elevada freqüência de surtos de raiva paralítica em herbívoros na parte leste do Estado, incluindo as regiões do Vale do Paraíba e Grande São Paulo, entre 1999 e 2001, obrigou mudanças nas estratégias de controle para a doença, que vinha sendo adotada anteriormente no Estado. Em 2001, a vacinação dos herbívoros domésticos foi declarada obrigatória nas regiões sobre a circunscrição dos Escritórios de Defesa Agropecuária EDAs, localizados nas áreas classificadas como áreas epidêmicas e endêmicas para a raiva e com o reforço das medidas de controle direto contra o Desmodus rotundus, morcegos vampiros, utilizando redes de neblina e vampiricidas (pasta nticoagulante), além do registro e do georreferenciamento para a localização dos abrigos, nas regiões estratégicas em ordem contrária a progressão da doença, causando a redução da população de morcegos vampiros e da circulação viral. Neste estudo, foi considerado o número de herbívoros com raiva com confirmação laboratorial e de acordo com o ano de ocorrência, espécie animal, distribuição por EDAs e por Municípios, providenciados pelo Instituto Pasteur de São Paulo. Com respeito à data de 2001, as porcentagens de vacinação, foram agrupadas sem as divisões por EDAs, devido à ausência de dados. A partir de 2002, os dados foram divididos por EDAs, onde a vacinação foi declarada obrigatória e os dados foram discriminados entre estabelecimentos que vacinaram e herbívoros vacinados contra raiva. O número de morcegos vampiros capturados agrupados por EDAs. Analisando as tendências, indicando os estabelecimentos que vacinaram, herbívoros vacinados contra raiva e a quantidade de morcegos vampiros capturados, foi observado um decréscimo nos casos de raiva em 90% ou mais e com estes resultados, concluiu-se que para o controle da raiva nos herbívoros, as medidas adotadas devem ser focadas, primeiramente na vacinação das espécies alvo e no bom planejamento e organização das medidas de controle diretamente nos principais reservatórios de Desmodus rotundus. / In the State of São Paulo, the Coordenadoria de Defesa Agropecuária-CDA, an administrative unit directly subordinated to the State Secretary of Agriculture was established in 1998. Subsequently, the frequent outbreaks of paralytic rabies in herbivores in Eastern part of the State, including the region of Vale do Paraiba and the Greater São Paulo, between 1999 and 2001, have led to change the strategies for controlling the disease being conducted up to that time in the State. In 2001, the vaccination of domestic herbivores was declared obligatory in regions under the jurisdiction of Escritórios de Defesa Agropecuária - EDAs located in areas classified as rabies epidemic and endemic, and by the reinforcement of the control measures directed against the Desmodus rotundus vampire bats by means of joint effort of EDAs to capture and control the bats using mist nets and the vampiricides (anticoagulant paste), besides the registration, revision and the use of geographical information systems to locate the bats roosts and shelters in strategic regions, in order to interrupt the progression of the disease through the reduction of the bat population density and the viral circulation. In this study, it was considered the number of rabies in herbivores with laboratorial confirmation and according to the year of occurrence, animal species, and distributed by EDAs and by municipalities, provided by the Pasteur Institute-São Paulo. Data regarding 2001, the percentages of vaccination were grouped without the division into EDAs, due to the absence of data. From 2002, the data were divided into EDAs where vaccination has been declared obligatory, and data discriminated into properties that vaccinated and herbivores vaccinated against rabies. The number of captured vampire bats was provided by the respective EDAs. By analyzing the trends indicated by the properties that vaccinated against rabies and the herbivores vaccinated and the amount of vampire bats captured, it was observed a decrease in rabies cases in 90% or more, and with these results we conclude that for the control of rabies in herbivores, the easures adopted must be focused primarily in vaccinating the target animal species and in a well planned and organized measures of control directed to the main reservoirs, i.e., the Desmodus rotundus bats.

No Brasil a raiva dissemina-se de maneira insidiosa nos herbívoros domésticos, produzindo perdas à indústria pecuária. No estado de São Paulo, a última epizootia registrada ocorreu entre os anos 1997-2002, acometendo bovinos e equinos. Este estudo examinou a possível relação de alguns casos detectados no sul de Minas Gerais no período 2000 a 2009 com o foco paulista citado, mediante análise filogenética de segmentos do gene da glicoproteína (540 nucleotídeos) e nucleoproteína (416 nt) viral, usando o algoritmo de Neighbor-joining, modelo evolutivo Kimura 2- parâmetros com 1000 replicações, considerando sequências de isolados procedentes de diferentes regiões do interior paulista e do Brasil, tomadas do GenBank. Foi proposta uma análise geográfica mediante o programa ArcGis, localizando as coordenadas geográficas dos municípios de origem dos casos sobre mapas de relevo, bacias hidrográficas e distribuição de biomas. A análise filogenética dos dois genes estudados sugeriu que os focos mineiros podem ter a mesma origem genética da última epizootia paulista de raiva em herbívoros ocorrida entre 1997 e 2002. A análise filogenética baseada na nucleoproteína mostrou um maior nível de detalhamento sugerindo a ocorrência de diferentes eventos e/ou centros de dispersão de raiva em herbívoros na área de estudo. A análise geográfica insinuou que os casos aconteceram nas porções menos elevadas da Serra da Mantiqueira, na área de Mata Atlântica e em proximidades das bacias dos rios Piracicaba/Jaguarí, Paranaíba do Sul, Grande, Pardo e Mogi-Guaçu. / Bovine rabies is still spreading insidiously in Brazil, producing economic losses to livestock industry. A remarkable epizootics took place in São Paulo state between 1997 and 2002, affecting bovine and equines. This research was intended to examine genetic relations among some rabies outbreaks in Minas Gerais (MG), during 2000 and 2009 with São Paulo epizootics by phylogenetic analysis based on glycoprotein (540 nucleotides) and nucleoprotein (416 nt) genes partial sequences using Neighbor- joining algorithm, Kimura 2-parameters model, with 1000 bootstrap replications, considering sequences from different regions of São Paulo State (SP) and Brazil from GenBank. A geographic analysis was proposed, plotting geographic coordinates of municipalities with rabies cases on topographic, hydrographic and biome maps using ArcGis software. Phylogenetic analysis for both genes suggested that cases from MG can have the same genetic origin of SP epizootics. Phylogenetic analysis based on nucleoprotein gene showed a richer level of detailing than glycoprotein gene, suggesting different events and/or dispersion centers of livestock rabies in the studied area. Geographic analysis proposed that MG cases occurred at less elevated portions of Serra da Mantiqueira mountains in the area of Atlantic forest, near Piracicaba/Jaguarí, Paranaíba do Sul, Grande, Pardo and Mogi-Guaçu rivers.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A raiva é uma enfermidade infectocontagiosa causada por um Lyssavirus, que acomete os mamíferos, inclusive o homem, está presente em todos os continentes com exceção da Antártida. Os cães ainda são considerados os principais responsáveis pela manutenção e transmissão da raiva para o homem. Porém, nos últimos anos os morcegos hematófagos e não hematófagos têm ganhado destaque como potenciais transmissores de raiva para animais e humanos nas Américas. Em 2010, o Brasil registrou três casos de raiva humana, sendo um causado por agressão de morcego. Recentemente, várias epidemias de raiva humana transmitida por morcegos hematófagos foram relatados na região Amazônica. No estado de Roraima até a presente data não há registro de casos de raiva humana. O presente estudo teve o objetivo de detectar a presença e circulação do vírus rábico em quirópteros no estado de Roraima, bem como identificar as espécies de morcegos envolvidas na pesquisa. A técnica Transcriptase Reversa seguida da reação em Cadeia pela Polimerase foi utilizada para a detecção do vírus rábico, utilizando tecido cerebral de morcegos que foram coletados pelas equipes de vigilância epidemiológica e ambiental, da Secretaria de Saúde e Agência de Defesa Sanitária de Roraima. Os morcegos foram identificados utilizando chaves dicotômicas disponíveis para morcegos do Brasil e de outros países sul americanos. No total foram analisadas 94 amostras de morcegos, as quais apresentaram resultados negativos para raiva pela técnica da RT-PCR, no entanto, não é possível afirmar que o vírus rábico não circule em Roraima. Por outro lado, o presente estudo identificou 19 espécies de morcegos distribuídas em seis famílias, sendo uma família (Vespertilionidae) e cinco espécies de quirópteros (Diaemus youngi, Noctilio albiventris, Myotis nigricans, Eptesicus diminutus e Cynomops planirostris) ainda sem relato de ocorrência para Roraima. Morcegos hematófagos foram identificados em cinco municípios. Ressaltando que este trabalho foi um passo inicial e que novos estudos precisam ser desenvolvidos, aprimorando as estratégias de coletas a fim de monitorar a presença do vírus da raiva no Estado. / Rabies is an infectious disease that affects mammals, including human beings. Present on all continents except Antarctica. It is caused by a Lyssavirus. Dogs are considered responsible for the maintenance and transmission of rabies to humans. But in recent years the bats have become a potential source of transmitting rabies to animals and human beings in the Americas. In 2010, Brazil recorded three cases of human rabies. One of them was caused by an attack of bat. Recently, several outbreaks of human rabies transmitted by vampire bats were reported in the Amazon region, so far, in the state of Roraima there is no record of cases of human rabies. This study is aimed to detect the presence and circulation of rabies virus in bats in the state of Roraima, as well as to identify the species involved, it includes, also, the necessity of strengthen the network of epidemiological and environmental surveillance of rabies. The technique followed by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used for virus research involving brain tissue of bats that were collected by teams of environmental and epidemiological surveillance, belonging to the Department of Health and the health protection agency of Roraima. Species of Bats were identified using dichotomous keys available for bats in Brazil and other Latin American countries. In total of 94 bat samples were analysed. The samples tested were negative for rabies. It can not be said, however, that the rabies virus does not circulate in Roraima. This research identified 19 species of bats distributed in six family. On the other hand, the research points to a richness and abundance of species of bats. This study identified one family (Vespertilionidae) and five species of bats (Diaemus youngi, Noctilio albiventris, Myotis nigricans, Eptesicus diminutus e Cynomops planirostris) not yet reported to the State. Vampire bats were identified in five municipalities. Considering the epidemiological and environmental importance of bats for ecosystems, this study is contributing to the increase of knowledge about both environmental surveillance of rabies and diversity of bats.

Anticorpos monoclonais (AcMo) contra proteínas do vírus da raiva (RABV) foram produzidos para adequar a caracterização antigênica dos isolados no Brasil. Foram selecionados dois isolados de morcegos insetívoros, sendo um de Nyctinomops laticaudatus e outro de Eptesicus furinalis que apresentaram perfis não compatíveis (NC) com os pré-estabelecidos. As suspensões virais foram adaptadas para crescimento em cultura de células N2A. Para o preparo de AcMo foram utilizadas como antígeno as ribonucleoproteínas dos isolados selecionados. Foram obtidos dois AcMo, o 3A7 e o 4E10. Analisando 57 isolados de RABV com esses AcMo, o 3A7 reagiu com 21 (36,84%) e o 4E10 com 25 (43,85%). Dos 13 isolados caracterizados como variante antigênica 3 (Desmodus rotundus) o 3A7 reagiu com 8 (61,53%) e o 4E10 com 11 (84,61%). Dos 9 isolados com perfil NC em morcegos o 3A7 reagiu com 5 (55,55%) e o 4E10 com 4 (44,44%). Os anticorpos produzidos poderão auxiliar na complementação do painel existente de caracterização antigênica o que poderá aprimorar a vigilância epidemiológica da doença. / Monoclonal antibodies (MAb) against the rabies virus (RABV) proteins were produced to improve the antigenic characterization of the isolates in Brazil. Two isolates from insectivorous bats were selected; one was from the species Nyctinomops laticaudatus and the other from Eptesicus furinalis, which showed non-compatible (NC) profiles from pre-established ones. The viral suspensions were adapted for growth in N2A cells. Ribonucleoproteins from selected isolates were used as antigen for the preparation of Mab. We obtained two Mab, the 3A7 and the 4E10. Of the 57 RABV isolates analyzed with these MAb, the 3A7 reacted with 21 (36.84%) and 4E10 with 25 (43.85%). Of the 13 isolates characterized as antigenic variant 3 (Desmodus rotundus), the 3A7 MAb reacted with 8 (61.53%) and 4E10 with 11 (84.61%). Of the nine isolates with the profile NC of bats the 3A7 reacted with 5 (55.55%) and the 4E10 with 4 (44.44%). The antibodies produced may help to complement the existing panel to antigenic characterization which could improve the disease epidemiological surveillance.

O isolamento do vírus da raiva (genótipo 1) a partir de morcegos não hematófagos está se tornando cada vez mais freqüente nas grandes cidades do Brasil. Este trabalho foi delineado para investigar a patogenicidade de um isolado do vírus da raiva, do morcego insetívoro Lassiurus ega, procedente do município de Presidente Prudente SP, em comparação ao vírus fixo da raiva, amostra CVS/32 (Challenge Vírus Standard). Os vírus foram reativados por meio de inoculação intracerebral em camundongos e os experimentos de patogenicidade foram realizados em camundongos e hamsters, desafiando-os pelas vias intramuscular (IM), intradérmica (ID), intranasal (IN) e abrasão superficial da pele (AP). A presença do vírus nos cérebros de animais que haviam manifestado sinais compatíveis à raiva, foi confirmada mediante a prova de imunofluorescência direta. Foram considerados para a avaliação da patogenicidade o quadro clínico, proporção de mortos, e a duração dos períodos de incubação (PI) e clínicos (PC) em dias. Em hamsters, o isolado de L. ega exibiu um quadro furioso, com proporção total de mortos de 2.60%; assim discriminada: 2.08% IM (PI: 11 dias; PC: 6 dias) e 8.33% IN (PI:10.66 ± 1.15 e PC: 7.33 ± 1.54). A presença do vírus no SNC foi detectada apenas em animais inoculados por essas vias. Por outro lado, o vírus CVS produziu um quadro paralítico com mortalidade total de 39.84%, com a seguinte distribuição: 62.50% IM (PI 7.50 ± 2.33; PC: 5.13 ± 1.89) 78.12% ID (PI 9.13 ± 2.23; PC 3.88 ± 2.23) 18.75% IN (PI 12.00 ± 2.77; PC 7.14 ± 2.54). Em camundongos, o isolado do L. ega manifestou sinais de agressividade e a raiva foi confirmada em animais inoculados IM e IN. A proporção de mortos observados em camundongos foi de 50.00% (PI 16.80 ± 2.20; PC 1.4 ± 0.54) e 30% (PI 14 ± 4.35; PC: 2.66 ± 0.57) respectivamente e o vírus CVS produziu mortalidade de 45.00% (PI: 6.30 ± 0.67; PC: 1.5 ± 0.70), 70% (PI: 7.14 ± 1.34; PC 2.28 ± 1.25) e 30% (PI:10.00; PC:1) pelas vias mencionadas acima, com quadro clínico de paralisia. O isolado de L. ega mostrou diferenças na proporção de mortos e quadro clínico furioso quando comparado com o CVS nos dois modelos animais. Os resultados sugerem que o contato com os morcegos insetívoros infectados pelo vírus da raiva representa um risco de transmissão da doença, por meio de ferimentos superficiais da pele provocadas pelas mordeduras ou ainda pela via respiratória, supostamente por meio de aerossóis. Pelo sequenciamento completo da proteína G viral do isolado do L. ega, foram observadas substituições na seqüência de aminoácidos nos sítios antigênicos AI, AII, assim como no domínio de fusão dependente de baixo pH. Os resultados obtidos, sugerem que as diferenças no comportamento biológico podem estar associadas às substituições encontradas na sequencia de aminoácidos da proteína G. / The isolation of rabies virus (genotype 1) from the non-hematophagous bats is becoming frequent in heavy urbanized areas in Brazil. This work intended to investigate the pathogenicity of a Brazilian rabies virus isolate from the insectivorous bat Lassiurus ega, from PresidentePrudente-SP, comparing with the CVS/32 (Challenge Virus Standard) fixed rabies virus strain. The viruses were reactivated through intracerebral inoculation into mice and the pathogenicity experiments were made in hamsters and mice, challenged by intramuscular (IM), intradermal (ID) and intranasal (IN) routes and by superficial abrasion of skin. The presence of virus in the brain of animals manifesting the signs compatible with rabies was confirmed by the direct immunofluorescence test. For the evaluation of the pathogenicity, the clinical manifestations, incubation (IP) and clinical (CP) periods in days and the mortality were considered. In hamsters, the isolate of L. ega exhibited a furious form of rabies with total mortality rate of 2.60%, with following distribution: 2.08% IM (IP: 11 days; CP: 6 days) and 8.33% IN (IP: 10.66 ± 1.15 and PC: 7.33 ± 1.54). The presence of rabies virus in the CNS was detected only in animals inoculated through IM and IN routes. The CVS strain has provoked paralytic disease with a total mortality rate of 39.84% as the follow: 62.50% IM (IP 7.50 ± 2.33; CP: 5.13 ± 1.89), 78.12% ID (IP 9.13 ± 2.23; CP 3.88 ± 2.23) and 18.75% IN (IP 12.00 ± 2.77; CP 7.14 ± 2.54). In mice, the isolate of L. ega manifested signs of aggressiveness and rabies was confirmed in animals that were inoculated intramuscularly and intranasally. The total mortality rate observed in mice was 20%, by the IM route was 50% (IP 16.80 ± 2.20; CP 1.4 ± 0.54) and 30% by the intranasal route (IP 14.00 ± 4.35; CP: 2.66 ± 0.57) respectively. The CVS strain showed a total mortality rate of 45.00% and by the IM route, 100% (PI: 6.30 ± 0.67; CP: 1.5 ± 0.70), by the ID route, 70% (IP: 7.14 ± 1.34; CP 2.28 ± 1.25) and by IN, 30% (IP: 10, 00; C: 1.00) showing signs of paralysis. Compared to the CVS strain, the isolate of L. ega showed difference in mortality rate and signs of aggressiveness were found both in hamster and mouse model. The results suggest that the contact with the insectivorous bats infected with rabies virus would represent a risk of disease transmission, by means of superficial wounds of the skin inflicted by bites or by inhalation of aerosols. By the complete sequencing of the viral G protein of the isolate of L. ega, sequencings of amino acids substitutions were observed at antigenic sites AI, AII, as well as the in domain of fusion dependent on low pH. According to the results, differences in the biological behavior may be associated to the substitutions found in the amino acids sequence of the G protein.

Infectious diseases remain a significant cause of human deaths, as approximately 15 million deaths were attributed to infectious diseases in 2010 (Dye, 2014). One such disease is rabies, which causes around 59,000 human deaths worldwide annually according to some estimates (Kessels et al., 2017). However, 95% of human deaths attributed to rabies occur in Asia and Africa (Singh et al., 2017). Rabies is preventable, yet it is still a major concern in developing, low-income countries that lack access to the medical care necessary to combat it (Hampson et al., 2015). Alternative techniques for low-cost vaccine production have the potential to resolve this issue. This research investigates the use of recombinant DNA techniques and plant biotechnology to produce a more cost-effective vaccine for rabies. Gene sequences from the rabies glycoprotein were inserted at the end of the coat protein portion of the Tobacco Mosaic Virus (TMV) genome. Plants were then infected with this recombinant virus, with hopes that TMV particles would assemble with proteins produced from the inserted glycoprotein sequence fused to the TMV coat protein. Results thus far suggest some of the sequences could be producing recombinant TMV particles, although issues involving successful extraction and reversion to wild type are still a challenge. Additionally, other research suggests that this is an effective method for vaccine development in general and for rabies.

Duvenhage virus (DUVV) belongs to genotype (gt) 4 of the lyssavirus genus, in the family Rhabdoviridae, order Mononegavirales. This virus causes fatal rabies encephalitis and has only been reported from the African continent. To date there have been only five isolations of DUVV, three of which were from human fatalities and all of which were associated with insectivorous bat species. Genotype 4 lyssaviruses have not been well studied and as such little is known about them. The aim of this study was to determine the full genome sequence and investigate the epidemiology of this uniquely African lyssavirus. Standard methods of PCR and sequencing were used to determine the coding and non coding regions of various DUVV isolates. In order to determine the full genome sequence, an RNA circularization technique was used to obtain the genomic terminal sequences. Using various molecular techniques we then analyzed the sequence data, at both phylogenetic and evolutionary levels. Our analysis showed the evolutionary forces acting against DUVV, to be similar to that which has been found for its closest relative, European bat lyssavirus type 1 (EBLV1) (gt 5). Both these viruses have strong constraints against amino acid change, with no evidence of positive selection. Phylogenetic studies showed that not all Lyssavirus genes are equal for phylogenetic or lyssavirus classification analysis. High intergenotypic values at the nucleoprotein amino acid level emphasize that there is a need to reinvestigate the criteria for lyssavirus genotype classification. The strong support observed in our full genome studies suggests that full genomes may in fact be best for Lyssavirus analysis, so as to avoid the potential bias of individual gene analyses. Analysis of DUVV indicates that it is an older virus within the lyssavirus genus and as shown by the discovery of the most recent isolate, the genetic diversity and incidence of this virus is greatly underestimated. Poor surveillance of rabies-related lyssaviruses as well as the poor diagnostic capabilities through most of Africa are large contributors to our lack of information. Improved surveillance of the African rabies-related lyssaviruses will extend our knowledge on the geographic distribution, host species associations and epidemiology of these viruses. / Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2011. / Microbiology and Plant Pathology / unrestricted