A purificação de subunidades do vírus da raiva pode ser realizada por diferentes metodologias, uma vez purificadas estas subunidades podem ter diversas aplicações em métodos altamente específicos para o diagnóstico laboratorial e pesquisa da raiva. A obtenção de ribonucleoproteínas (RNP) do vírus da raiva pode ser realizada por meio de ultracentrifugação em gradiente de Cloreto de Césio (CsCl), porém este método possibilita a obtenção de RNP semi purificadas. Neste estudo foi utilizado o método de cromatografia de imunoafinidade para obtenção das RNP, os resultados obtidos foram satisfatórios quanto a um maior grau de pureza dessas proteínas, além de propiciar a otimização do processo e redução do tempo operacional, quando comparado a ultracentrifugação em gradiente de CsCl. / Purification of subunits of the rabies virus can be accomplished by different methodologies, once purified these subunits can have several applications in highly specific methods for diagnostic and research laboratory for rabies. Obtaining ribonucleoprotein (RNP) of rabies virus can be performed by ultracentrifugation in a Cesium Chloride (CsCl) gradient, but this method allows to obtain semi purified RNP. This study used the method of immunoaffnity chromatography to obtain the RNP; the results were satisfactory for a higher degree of purity of these proteins in addition to providing process optimization and reduced operating time compared to ultracentrifugation in a cesium chloride gradient.

A crescente importância do ciclo silvestre da raiva envolvendo morcegos e mamíferos terrestres demonstra a importância do estudo da epidemiologia do vírus da raiva nessas espécies. Foram estudadas amostras provenientes de diversas espécies de animais silvestres terrestres procedentes de uma área de Mata Atlântica nativa no litoral Norte do Estado de São Paulo. Este estudo pesquisou a presença de anticorpos contra o vírus da raiva por meio dos Testes de RFFIT, SFIMT e ELISA em amostras de soro de animais capturados em uma área desmatada, transpostos e monitorados em uma área de soltura. E ainda a pesquisa do vírus da raiva por meio das técnicas de IFD, IC e RT-PCR em amostras de sistema nervoso central dos animais encontrados mortos na região. A positividade observada foi de 10,8% na RFFIT, 34,0% no SFIMT e 1,13% no ELISA. Todos as amostras submetidas as técnicas de IFD, IC e RT-PCR apresentaram resultados negativos. Os resultados observados demonstram circulação do vírus entre as espécies silvestres da área. / The emergent importance of rabies in terrestrial wild animals demonstrates the importance of epidemiological studies regarding rabies virus in those animal species. Samples from several wild species from a native Rainforest area in the North coast of São Paulo State Brazil were studied. The aim of the present study was the research of anti-rabies antibodies in those animals using the RFFIT, SFIMT and ELISA techniques in animals captured and monitorated in a release área. And also by rabies virus detection using FAT, MIT and RT-PCR techniques in central nervous system samples from animals found dead in the same area. The observed positivity was 10,8% on RFFIT, 34,0% on SFIMT e 1,13% on ELISA. All samples tested by the FAT, MIT and RT-PCR techniques presented negative results. The observed results are an evidence of rabies virus circulation between wild animal species in the studied area.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf: 173131 bytes, checksum: c38d35e557c3f495609e7bf19c245e1f (MD5) Previous issue date: 2010-03-10 / This study evaluated the humoral immune response of a new rabies vaccine developed by the Instituto Butantan (potency of 3.27 UI/ml) in primovaccinated cattle and the effect of probiotic on this response. Thirty-four 15-month old Nelore cattle were randomly divided into 2 groups (17 animals/group). All the animals were vaccinated on day 0 (zero) and then animals in one group received probiotic added to a mineral mixture (GP) while the others were given only the mineral mixture (GC). Blood samples were collected on days 0, 75 and 150 for rabies neutralizing antibodies titers by seroneutralization assay on BHK21 cells (RFFIT). Protective antibody titers (&#8805;0.5 UI/mL) were found in 82.4% of the animals from GP and in 76.5% of the animals from GC and no statistical difference (p>0.05) between antibody titers in GP and GC was detected on days 75 and 150. It was also observed that in both groups antibody titers was decreased on day 150 (p<0.01). In conclusion, the tested rabies vaccine promotes eficient soroconversion and keeps antibody levels in primovaccinated cattle, but probiotic does not affect the humoral anti-rabies immune response. / Objetivou-se avaliar a resposta imune humoral a uma nova vacina antirrábica, desenvolvida no Instituto Butantan em bovinos primovacinados e o efeito do probiótico nesta resposta. Trinta e quatro bovinos da raça Nelore com idade de 15 meses foram divididos aleatoriamente em 2 grupos (17 bovinos/grupo): os animais foram vacinados no dia zero e um dos grupos recebeu uma mistura mineral com probiótico (GP), enquanto o outro apenas a mistura (GC). Colheu-se sangue dos animais nos dias 0, 75 e 150 após a vacinação para determinação dos títulos de anticorpos anti-rábicos neutralizantes pela técnica de soroneutralização em células BHK21 (RFFIT). Foram encontrados títulos de anticorpos protetores (&#8805;0,5 UI/mL) em 82,4% dos animais do grupo GP e 76,5% do grupo GC. Não houve diferença significativa (p>0,05) nos títulos de anticorpos entre os soros coletados dos dois grupos de animais nos dias 75 e 150. Verificou-se também que para ambos os grupos no dia 150 houve uma redução significativa (p<0,01) nos títulos de anticorpos. Conclui-se que a vacina antirrábica é eficiente em produzir soroconversão e em manter os títulos de anticorpos em bovinos primovacinados. A ingestão do probiótico não interferiu na resposta imune humoral antirrábica.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra Genaro[1].pdf: 442067 bytes, checksum: 0fb723780900ccacd365c11bf7c5f2c9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-09 / This study evaluated the effect of probiotics supplementation with or without Zinc (Zn), added to the mineral mixture, in humoral immune response in sheep vaccinated with a single dose of rabies vaccines. Forty-five malecrossbred rams Santa Inês, aged 6 months were randomly divided into 3 groups (15 animals / group): Control group (CG) received 10 grams of mineral / animal / day, the probiotics group (GP) received 10 grams of mineral added 4 grams of probiotics / animal / day and Probiotics and Zinc group (GPZn) received 10 grams of mineral added 4 grams of probiótics and 14.4 mg of zinc sulfate per animal per day added to the probiotics. The individual titles of neutralizing antibodies were determined using the technique of neutralization-based Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) and Fluorescent Inhibition Microtest (FIMT). There were no statistically significant differences between the mean serum concentrations between groups. It was concluded that the probiotics administration with or without zinc did not improve the immune humoral response of antibody rabies. / Esse estudo avaliou o efeito da suplementação do probiótico com ou sem zinco (Zn), adicionado à mistura mineral, na produção de anticorpos séricos contra o vírus rábico em ovinos vacinados com uma única dose de vacina. Quarenta e cinco ovinos machos, mestiços Santa Inês, com idade de 6 meses foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (15 ovinos/grupo): Grupo controle (GC) recebeu 10 gramas de suplemento mineral/animal/dia, grupo probiótico (GP) recebeu 10 gramas de suplemento mineral adicionado 4 gramas de probiótico/animal/dia e grupo Probiótico e Zinco (GPZn) recebeu 10 gramas de suplemento mineral adicionado 4 gramas de probiótico e 14,4 mg de sulfato de zinco/animal/dia adicionado ao probiótico. Os títulos individuais de anticorpos foram determinados por meio da técnica de soroneutralização baseado no RapidFluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) e no FluorescentInhibitionMicrotest (FIMT). Não houve diferenças estatísticas significativas entre as médias de concentrações séricas entre os grupos. Conclui-se que a administração de probióticos com ou sem zinco não melhora a resposta imune humoral antirrábica.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcia.pdf: 199702 bytes, checksum: a039cd4582a69d4e1c07fb9f2c9a4796 (MD5) Previous issue date: 2013-03-21 / This study aims to evaluate the effect of the probiotic supplementation in response to the humoral immune response in vaccinated cattle with one dose of anti-rabies vaccine. Thirty Nelore male cattle, aged 12 months, all of them vaccinated with one dose of anti-rabies vaccine, randomly divided in 2 groups (15 cattle/group): The control group (CG) received 70 grams of mineral/animal/day supplement, the probiotic group received 70 grams of the mineral supplement plus 4 grams of the probiotic/animal/day. The individual titres of neutralizing antybodies were determined by serum-neutralisation technique based on the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) and the Fluorescent inhibition Microtest (FIMT). The obtained results were compared by the unpaired t test and the serological titres in each group at 30 and 60 days post-vaccination, by the t paired test for related samples. The results did not demonstrate meaningful statistical differences between the averages concentrations between the group, however, there was statistical differences in the proportion protected animals (> 0,5 UI/ml in 60 days). Concluding that the administration of the probiotic did not interferes in the humoral immune response in cattle. / Esse estudo avaliou o efeito da suplementação do probiótico sobre a resposta imune humoral em bovinos vacinados com uma única dose de vacina antirrábica. Trinta bovinos machos, hígidos da raça Nelore, com idade de 12 meses, todos vacinados com dose única de vacina antirrábica, divididos aleatoriamente em 2 grupos (15 bovinos/grupo): grupo controle (GC) recebeu 70 gramas de suplemento mineral/animal/dia, o grupo probiótico (GP) recebeu 70 gramas de suplemento mineral adicionado 4 gramas de probiótico/animal/dia. Os títulos individuais de anticorpos neutralizantes foram determinados por meio da técnica de soroneutralização baseado no Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) e no Fluorescent Inhibitio Microtest (FIMT). Os resultados obtidos foram comparados pelo teste t não pareado, e os títulos sorológicos dentro de cada grupo, aos 30 e 60 dias pós-vacinação, pelo teste t-pareado para amostras relacionadas. Os resultados não demonstraram diferenças estatísticas significativas entre as médias de concentrações séricas entre os grupos, entretanto, houve diferenças estatísticas significativas nas proporções de animais protegidos (> 0,5 UI/ml aos 60 dias), concluindo que a administração do probiótico não interfere na resposta imune humoral em bovinos.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Suelen.pdf: 249147 bytes, checksum: c5002ca2db1a6890b6d5dc5691fd3874 (MD5) Previous issue date: 2014-05-20 / Aimed to evaluate the effects of supplementation of probiotics on the humoral immune response in cattle. Forty-two male animals, whole, Pure Origin (PO) Nellore, aged 12 months, all vaccinated with a single dose of rabies vaccines were randomly divided into 3 groups (14 bovine animals/group): Control group (GC) received 70 grams of mineral/animal durig 60 days supplement; the probiotic group GP3 received 3 grams of probiotic added 70 grams of mineral/animal durig 60 days supplement; the probiotic group GP8 received 8 grams of probiotic added 70 grams of mineral/animal durig 60 days supplement. Statistical analyzes were compared between groups control, 3, and 8 grams. Blood samples of animals were collected days 0, 30 and 60 days. Individual neutralizing antibody titers were determined by a neutralization technique based on the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) and Fluorescent Inhibitio Microtest (FIMT). There were statistically significant differences between the mean serum concentrations between groups control, GP3 and GP8. Concluding that the administration of probiotics interfered in the humoral immune response. / Objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação com diferentes doses do probiótico sobre a resposta imune humoral em bovinos. Quarenta e dois bovinos machos, Puro de Origem (P.O) da raça Nelore, com idade de 12 meses, todos vacinados com dose única de vacina antirrábica, divididos aleatoriamente em 3 grupos (14 bovinos/grupo): O grupo controle (GC), recebeu 70 gramas de suplemento mineral/animal por 60 dias; o grupo GP3 recebeu 3 gramas de probiótico adicionados em 70 gramas de suplemento mineral/animal por 60 dias e o grupo GP8 recebeu 8 gramas de probiótico adicionado em 70 gramas de suplemento mineral/animal por 60 dias. Análises estatísticas foram comparadas entre os Grupos controle, 3 e 8 gramas. As amostras de sangue dos bovinos foram colhidas nos dias 0,30 e 60. Os resultados demonstraram diferenças estatísticas significativas entre as médias de concentrações séricas entre os grupos. Conclui-se que a administração de probiótico aumentou a resposta imune em bovinos vacinados com uma única dose de vacina antirrábica

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renata Maria Bottino Vizzotto Martino.pdf: 401581 bytes, checksum: 64d1aad99d4826f7cb866dbff66909b4 (MD5) Previous issue date: 2014-12-19 / This study assessed the effect of concentration of association a combination of probiotic micro-organisms added to the mineral mixture at different concentrations / day, immunomodulation production of serum antibodies against rabies virus in cattle vaccinated with a single dose of rabies vaccine. Forty-two male Nellore cattle, with 12 months aged, were randomly divided into three groups (n = 14): control group (CG) received 70 grams of mineral mixture / animal / day; 2 grams probiotics groups (G2P) and 8 grams (G8P) received 70 grams of mineral mix / animal / day added to grams of a combination of probiotic microorganisms, respectively 2 and 8 (Lactobacillus acidophilus, Streptococcus faecium, Bifidobacterium longum and Bifidobacterium thermophilum). Individual antibody titers were determined by the technique of neutralization in cell-based Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). We resorted to the analysis of variance on a route (one-way ANOVA) with contrasts using the Tukey method to determine if the experimental groups differed within each moment, and the paired t-test to determine whether differences occurred between times within each group and a 5% level of significance. There were statistically significant differences between the mean serum concentrations between the GC and G8P groups after 30 and 60 days after the first vaccination and 60 days, only the G8P kept 100% with titers of protective antibodies minimum. There was also improvement in the production of antibodies in the G2P group compared to GC after 30 and 60 days, but this difference was not statistically significant. The peak titers of antibodies in cattle for rabies in all groups were after the 30 days. The results obtained allow to attribute beneficial effect immunomodulation with the combination of probiotics in rabies humoral immune response and the concentration of the association of probiotic microorganisms in mineral mixture interfered beneficially in the humoral immune cattle primary response. There is evidence to assign the concentration of probiotic association to the effect on the maintenance of high levels of serum antibodies in cattle with a single dose of rabies vaccine. / Esse estudo avaliou o efeito da concentração da associação de microrganismos probióticos, adicionados à mistura mineral em diferentes concentrações/dia, imunomodulação da produção de anticorpos séricos contra o vírus rábico em bovinos vacinados com uma única dose de vacina antirrábica. Quarenta e dois bovinos machos, da raça Nelore, com idade de 12 meses, foram divididos aleatoriamente em três grupos (n=14): grupo controle (GC) que recebeu 70 gramas de mistura mineral/animal/dia; grupos probióticos 2 gramas (G2P) e 8 gramas (G8P) que receberam 70 gramas de mistura mineral/animal/dia adicionados respectivamente de 2 e 8 gramas de uma associação de microrganismos probióticos (Lactobacilus acidophilus, Estreptococus faecium; Bifidobacterium thermophilum e Bifidobacterium longum). Os títulos individuais de anticorpos foram determinados por meio da técnica de soroneutralização em células baseado no Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). Recorreu-se à análise de variância em uma via (ANOVA one-way) com contrastes pelo método de Tukey para determinar se os grupos experimentais diferiram entre si, dentro de cada momento, e ao teste t-pareado para determinar se ocorreram diferenças entre momentos dentro de cada grupo e com 5% de nível de significância. Houve diferenças estatísticas significativas entre as médias de concentrações séricas entre os grupos GC e G8P, após 30 e 60 dias da primovacinação e após 60 dias, somente o G8P manteve 100% com títulos de anticorpos protetores mínimos. Houve também melhora na produção de anticorpos no grupo G2P em relação ao GC, após 30 e 60 dias, porém esta diferença não teve significância estatística. O pico de títulos de anticorpos antirrábicos nos bovinos em todos os grupos foi após os 30 dias. Os resultados obtidos permitem atribuir efeito benéfico à imunomodulação com a associação de probióticos na resposta imune humoral antirrábica e o aumento da concentração da associação de microrganismos probióticos na mistura mineral interferiu beneficamente na resposta imune humoral de bovinos primovacinados. Há evidências para se atribuir a concentração da associação probiótica ao efeito sobre a manutenção da concentração sérica de anticorpos em bovinos primovacinados contra a raiva.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristina Cecilia.pdf: 245966 bytes, checksum: 7e28e7fd7df013e4d0bfb113581dba6e (MD5) Previous issue date: 2014-12-05 / This study evaluated the effect of supplementation with a combination of probiotic microorganisms, added to a mineral mixture in different doses/day, in the production of serum antibodies against the rabies virus in primo vaccinated cattle. Forty-two male Nelore cattle, divided into three groups (n = 14): control group (CG) received 70 grams of mineral mixture/animal/day; probiotic groups 4 grams (G4P) and 8 grams (G8P) received 70 grams of mineral mixture/animal/day with 4 and 8 grams of added probiotics respectively. The individual anti-rabies antibody titers were determined using the technique of seroneutralization in cells based on the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). The results obtained were compared using the unpaired t test with a 5% significance level. There were statistical differences in the mean serum concentrations between the CG, G4P and G8P groups, 30 and 60 days after the primo vaccination and after 60 days only the G8P group demonstrated minimum protective antibody titers in 100% of the animals. There is evidence of beneficial effects attributed to the association between probiotic microorganisms and the anti-rabies humoral immune response; in addition, an increase in the dose incorporated into the mineral mixture maintains high levels of serum antibodies in primo vaccinated cattle. / Esse estudo avaliou o efeito da suplementação de uma associação de microrganismos probióticos, adicionados à mistura mineral em diferentes doses/dia, na produção de anticorpos séricos contra o vírus rábico em bovinos primovacinados. Quarenta e dois bovinos Nelore machos, divididos em três grupos (n=14): grupo controle (GC) recebeu 70 gramas de mistura mineral/animal/dia; grupos probióticos 4 gramas (G4P) e 8 gramas (G8P) receberam 70 gramas de mistura mineral/animal/dia adicionados respectivamente de 4 e 8 gramas de probióticos. Os títulos individuais de anticorpos antirrábicos foram determinados por meio da técnica de soroneutralização em células baseado no Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). Os resultados obtidos foram comparados pelo teste t não pareado, com 5% de nível de significância. Houve diferenças estatísticas significativas entre as médias de concentrações séricas entre os grupos GC e os G4P e G8P, após 30 e 60 dias da primovacinação e após 60 dias somente o G8P manteve 100% dos animais com títulos de anticorpos protetores mínimos. Existem evidências para se atribuir efeito benéfico à associação de microrganismos probióticos na resposta imune humoral antirrábica e ao aumento da sua dose incorporada na mistura mineral e sobre a manutenção de elevados níveis de concentração sérica de anticorpos nos bovinos primovacinados.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf: 173131 bytes, checksum: c38d35e557c3f495609e7bf19c245e1f (MD5) Previous issue date: 2010-03-10 / This study evaluated the humoral immune response of a new rabies vaccine developed by the Instituto Butantan (potency of 3.27 UI/ml) in primovaccinated cattle and the effect of probiotic on this response. Thirty-four 15-month old Nelore cattle were randomly divided into 2 groups (17 animals/group). All the animals were vaccinated on day 0 (zero) and then animals in one group received probiotic added to a mineral mixture (GP) while the others were given only the mineral mixture (GC). Blood samples were collected on days 0, 75 and 150 for rabies neutralizing antibodies titers by seroneutralization assay on BHK21 cells (RFFIT). Protective antibody titers (&#8805;0.5 UI/mL) were found in 82.4% of the animals from GP and in 76.5% of the animals from GC and no statistical difference (p>0.05) between antibody titers in GP and GC was detected on days 75 and 150. It was also observed that in both groups antibody titers was decreased on day 150 (p<0.01). In conclusion, the tested rabies vaccine promotes eficient soroconversion and keeps antibody levels in primovaccinated cattle, but probiotic does not affect the humoral anti-rabies immune response. / Objetivou-se avaliar a resposta imune humoral a uma nova vacina antirrábica, desenvolvida no Instituto Butantan em bovinos primovacinados e o efeito do probiótico nesta resposta. Trinta e quatro bovinos da raça Nelore com idade de 15 meses foram divididos aleatoriamente em 2 grupos (17 bovinos/grupo): os animais foram vacinados no dia zero e um dos grupos recebeu uma mistura mineral com probiótico (GP), enquanto o outro apenas a mistura (GC). Colheu-se sangue dos animais nos dias 0, 75 e 150 após a vacinação para determinação dos títulos de anticorpos anti-rábicos neutralizantes pela técnica de soroneutralização em células BHK21 (RFFIT). Foram encontrados títulos de anticorpos protetores (&#8805;0,5 UI/mL) em 82,4% dos animais do grupo GP e 76,5% do grupo GC. Não houve diferença significativa (p>0,05) nos títulos de anticorpos entre os soros coletados dos dois grupos de animais nos dias 75 e 150. Verificou-se também que para ambos os grupos no dia 150 houve uma redução significativa (p<0,01) nos títulos de anticorpos. Conclui-se que a vacina antirrábica é eficiente em produzir soroconversão e em manter os títulos de anticorpos em bovinos primovacinados. A ingestão do probiótico não interferiu na resposta imune humoral antirrábica.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra Genaro[1].pdf: 442067 bytes, checksum: 0fb723780900ccacd365c11bf7c5f2c9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-09 / This study evaluated the effect of probiotics supplementation with or without Zinc (Zn), added to the mineral mixture, in humoral immune response in sheep vaccinated with a single dose of rabies vaccines. Forty-five malecrossbred rams Santa Inês, aged 6 months were randomly divided into 3 groups (15 animals / group): Control group (CG) received 10 grams of mineral / animal / day, the probiotics group (GP) received 10 grams of mineral added 4 grams of probiotics / animal / day and Probiotics and Zinc group (GPZn) received 10 grams of mineral added 4 grams of probiótics and 14.4 mg of zinc sulfate per animal per day added to the probiotics. The individual titles of neutralizing antibodies were determined using the technique of neutralization-based Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) and Fluorescent Inhibition Microtest (FIMT). There were no statistically significant differences between the mean serum concentrations between groups. It was concluded that the probiotics administration with or without zinc did not improve the immune humoral response of antibody rabies. / Esse estudo avaliou o efeito da suplementação do probiótico com ou sem zinco (Zn), adicionado à mistura mineral, na produção de anticorpos séricos contra o vírus rábico em ovinos vacinados com uma única dose de vacina. Quarenta e cinco ovinos machos, mestiços Santa Inês, com idade de 6 meses foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (15 ovinos/grupo): Grupo controle (GC) recebeu 10 gramas de suplemento mineral/animal/dia, grupo probiótico (GP) recebeu 10 gramas de suplemento mineral adicionado 4 gramas de probiótico/animal/dia e grupo Probiótico e Zinco (GPZn) recebeu 10 gramas de suplemento mineral adicionado 4 gramas de probiótico e 14,4 mg de sulfato de zinco/animal/dia adicionado ao probiótico. Os títulos individuais de anticorpos foram determinados por meio da técnica de soroneutralização baseado no RapidFluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) e no FluorescentInhibitionMicrotest (FIMT). Não houve diferenças estatísticas significativas entre as médias de concentrações séricas entre os grupos. Conclui-se que a administração de probióticos com ou sem zinco não melhora a resposta imune humoral antirrábica.